Автореферат и диссертация по медицине (14.00.36) на тему:Пролиферация и популяционный состав иммуно-компетентных клеток в динамике вакционального и инфекционного процессов при чуме

Министерство здравоохранения СССР

ВСЕСОЮЗНЫЙ орданл ТРУДОВОГО КРАСНОГО ЗНАМЕНИ ншш-ИССЩОВАШЬСЮИЙ НЮТИБОЧУМШЙ ИНСТИТУТ "МИКРОБ"

На правах рукописи

САЯПВДА Лидия Васильевна

ПРОЛИФЕРАЦИЯ И' ПОПУЛЯЦИОННЫЙ СОСТАВ ИШУНО-■ КОМПЕТЕНТНЫХ ШТОК В ДИНАМИКЕ ВАКЦИНАЛЬНОГО И ШЕКЦИОННОГО П#}ЦЕССОВ ПРИ ЧУМЕ

14,00.36 - аллергология и ¡иммунология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Саратов - 1991'

Работа выполнена во Всесоюзной ордена Трудового Красного Знамени научно- исследовательском противочумном институте "Микроб",

Научные руководители: д&ктор медицинских наук, профессор Анисимова Т.И.; доктор медицинских наук Ледв^.нов Ы.Ю.

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, старший научный с'трудник Панина Л.Н.; доктор медицинских наук, старший научный сотрудник Тихонов Н.Г.

Ведущая организация - Ростовский-на-Дону научно-исследовательский противочумный институт.

• М тебсЯ-

Автореферат разослан "й, //" шг/еи^ 1991 г.

^йшШтх г. в

Защита диссертации состоится "К/ " УМуСУгхЮ.991 г. в А-7 часов

у

на заседании специализированного совета К 074.32.01 по присуждению ученой степени кандидата наук при Всесоюзном ордена Трудового Красного знамени научно-исследовательском протиьочумном институте "Микроб" (410071, г.Саратов, Университетская, 46)

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке института "Микроб". , ' ' ' .

Ученый секретарь ' . спмдиалиэироьанного совета . ■

кандидат медицинских наук,

старший научный сотрудник Девдариани З.Л.

1,4 "

- 3 -

| ' ОЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИ'СА РАБОТЫ

л .^АКТУАЛЬНОСТЬ ПГОБЛЕШ, Важнее значение в системе противоэпиде—' мических мероприятий имеет вакцинолрефилактика (Коробкова Е.И., 1956; Самойлова Л.В., 1984; Филиппов A.S., Анискмова Т.К., 1984; Анисимова Т.И., Филиппов A.S., 1905; Медуницэн Н.В., 1990). Для усовершенствования существующих и создания высокоэффективных и безвредных вакцин необходика чугсгяительные и информативные методы выявления иммунологических сдвигов, обусловленных вакцинацией (Сумароков А.к., 1985; Анисимова Т.Н., 1931; Петров Р.В. с соавт., 1983; Мохин K.M. с соавт., 1987; Уеруницы;: Н.В. с соавт., 1989).

В последние годы, о^ ювременно с.нашими исследованиями, появились публикации об изучении иммунологической реактивности при 'чуме; выполненные на современном уровне в основном на модели белых мышей (Ермакова Г.В. с. соавт., 1982; Адамов А.К. с соавт., 1983; Задумина С.Ю., Исупов И.В., 1984; Тихомирова Л.А. с соавт., 1985; Горькова A.B. с соавт , 1987; Исупо» Й.В. с сэавт., 1987; Тихомирова Е.И., 1990 и др.). Однако пока нё будет установлено, какая модель является более близкой к организму человека, рекомендуется оценивать безьредность и иммуногенность чумных вакцин на морских свинках и на белых мгЗах. Поэтому исследования, направленные на разработку методов оценки иммунного статуса фи чуме у морских свинок и людей по функциональной активности клеток, количественным изменениям популяционного состава (Т,В,Д,0) и регуляторных субпопуляций (Т-келлеры, Т-супрессоры) лимфоцитов, являются актуальными.

цель Настоящего ИССЛЕДОВАНИЯ заключается в изучении иммуногенеза при вакцинальном и инфекционном процессах при чуме путем оценен функциональной активности и численности лимфоцитов.

ОСНОВНЫЕ ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ:

I. Изучить распределение лимфоцитов по фазам митотического цик-

ла ( 3+02+Ы зы) в крови и органах иммунной системы вакцинированных и зараженных морских свкнок путем цитофлуориметрического определения содержания ДНК.

2. Определить мит о г ениндуцир о в анную пр о лифер ат игную активность иммунокомпетентных клеток и .актигензависимую бласттраясформацию у людей, вакцинированных против чумы, методом щеточной цитофлуоримет-рии.

3. Определить абсолютное и относительное содержание основных популяций (Т,В,Д,0) и регуляторных Т-субпопуляций (хелперы - Тх, супрес-соры - Тс) у морских свинок в процессе формирования противочумного вакцинального иммунитета. '

4. Установить взаимосвязь между уровнем приобретенного противочумного иммунитета и инт. лсивностыо неспецифических реакций.

5. Изучить ишуномодулирующее действ: з специфг -еского фактора переноса при чуме.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА. Впервыь были изучены иммуногенез и патогенез при чумной инфекции у морских свинок методом дифференциации лролифери-рующих и непролиферируюцих лимфоцитов по изменению в них к яичества ДНК, выявляемой с помощ.л "роточной цитофлуориметрии. Впервые установлены изменения в распределении лимфоцитов го фазам клеточного цикла ( Э+Од+Ы ) в крови и органах иммунной системы »; Юрских свинок, иммунизированных различными дозами чумной вакцины. Показано, что в ранние сроки иммуногенеза происходило увеличение числа ДНК-синтезирущих и делящихся лимфоцитов, интенсивность изменений пряго зависила от вс.шины иммунизирующей дозы.

Установлено, что имауногенше и безвреднее дозы чумной живой вакцины должны- Еызывать умеренное увеличение ДИК-синтезирующих и делящихся лимфоцитов е крови и лимфоидных. органах иммунной системы..

Показано, что иммунизация, кмлой чумной вакциной усиливала процессы пролиферации и деления, вызывал^ сложный комплекс .изменений

<

численности лимфоцитов с припаданием количества Т- к В-клеток в крови и селезенке в ранние сроки иммуногенеза. с

Получены данные, свидетельствующие о повреждающем действии вирулентного штамма чумного микроба на систему иммунокомпетентных клеток, что выражалось в кратковременном снижении, а затем значительном увеличении количества ДНК-синтезирующих лимфоцитов в крови, лимфатических узлах и селезенке морских свинок в основном за счет 0-клеток и Т-супрессоров.

Установлено, что заражение вирулентна станком возбудителя чумы морских свинок, предварительно иммунизированных оптимальной дозой живой чумной вакцины, сопровождалось кратковременным увеличением содержания даК-синтезирукщих клеток в основном за счет Т-.:имфоцитов,

•Выявлена прямая корреляционная связь между нарастанием количества ДНК-сиятез1.^ующих и делящихся клеток з крови и иммунокомпетентгшх органах морских свинок в динамике юялуноп,неза и патогенеза при чума.

Впервые показано, '"го иммунизацияяивой чумной вакциной людей сопровождается увеличением количества лимфоцитоз, синтезирующих ДНК, повышением уровня митогениндуцйрованнгй пролиферативной активности иммунокомпетеыных клеток, а ■зак.ле антигенззвисимой бласттрансформа-ции лимфоцитов.

Впервые изучено и установлено иммуномодулируюцее действие специфического фактора переноса, что выражалось в увеличении числа ДНК-син-тезирухнцих клеток в лимфатических узлах, усилении ГЧЭТ в ковсной пробе и повышении антиинфекционной резистентности ранее иммунизированных против чумы морских свинок.

ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ. Установлена возможность практического использования комплекса методов, включающих количественную характеристику основных популяций (Т,В,Д,0) и регуляторных,Т-субпопуляций лим-измекение

[.. цитон, числа ДНК-синтезируюгих и делящихся клеток, изучение митоген-

издуцируемой, а также антигензагисимой реакции бласттрансформации лиы-О

фоцитов для характеристики иммунного ответа при вакцинации против чумы. Полученные данн'' имеют значение при изучении иммунологической безопасности новых вакцинных препаратов, предназначенных для профилактики инфекционных заболеваний, а также динамики инфекционного процесса. Определенна количества ДНК-синтезирующих лимфоцитов крови может быть использовано при оценке иммунологической перестройки организма привитых на этапе доклинических испытаний новых или усовершенствованных вакцга. мх препаратов.

БШЩЕНИЕ. По материалам проведенных исследований составлены методические рекомендации "Определение синтезирующих ДНК и делящихся ликфоедных клеток методом проточной цигофл; зриыетрии", которые утверждены начальником Главного управления карантинных инфекций Минздрава СССР Ы.И.Н-ркевичем 28 июня 1968 г. Составлено одно рационализаторское предложение "Определи .ке проце' "а синтезирующих ДНК и делящихся лигфоидных клзток методом проточной цитофлуориметрии которое было утверждено Советом БРИЗ ВНШЧИ "Микроб" (протокол № 3 от 01.04.88 г.) и принято к использованию (удостоверение ff> 601).

АПРОБАЦИЯ РАЮТ11. Материалы диссертации доложены и обсуждены на научных конференциях 1.ШГЧИ "Микроб", ISB4 и1$33 гг., Саратов; на ■ Всесоюзном совещании молодых ученых протчвоч^ных учреждений СССР, 1986 , Саратов; на Всесоюзной'научной конференции "Ыеэ.шизш проти-воинфенционного иммунитета", 1937 г., Саратов; на III республиканской конференции "Автоматизация цитологических исследований", 1988 г. Ниев; на X научной конференции "Факторы клеточного и гуморального иммунитета щ. л различных физиологических и патологических состояния: 1990 г., Челябинск. •

Диссертация обсуждена и одобрена на расширенной научной конференции лаборатории стандартизации к контроля препаратов против чумы и других ООй ГИСК им. Л.А.Тарас„вича на базе'ВНИПЧИ "Микроб", лаборатории клеточной иммунологии ВНИПЧИ "Микроб", и на Ученом Совете Г'/СК

' им. Л.А.Тарасевича.

ПУБЛИКАЦИИ. По материалам диссертации опубликовано 7 раост.

01ЕМ И СТРУКТУРА РАБОТЫ. Диссертация изложена на 193 стр. машинописного текста и соде^.шг: введение, пять глав, заключение, выводы и- список литературы, включающий 271 отечественна и 149 иностранных источников. Работа иллюстрирована 23 рисунками и 16 таблицами.

ОСНОВНЫЕ ПОЛОЖЕНИЯ, БЬЛОСЙШЕ НА ЗАЩГУ:

1. Иммуногенез у морских сзгнок характеризуется сложным комплексом изменений процессов функциональной активности и содержания популяций (Т,В,Д,0) и регуляторных Т-субпопуляций лимфоцитов.

2. Вакцинальный про1зсс привитых против чумы людей сопровождается увеличением количества лимфоцитов, синтезирующих ДНК, повышением уровня митогениндуцируемой продиферативной активности и антигензави-сиыой бласттр нсформации ишунококпэтентных клеток.

3. Специфический фактор ь~реноса повисает антиинфекционную резистентность ранее иммунизированных против чумы морских свинок.

• ■ СЩЕРВАНИЕ РАБОТЫ.

I. Материалы и методы'.

Для решения поставленных эадЛ в работе были использованы иммунологические, микробиологические, физико-химические методы исследования. «

Материалом для исследования служили лимфоциты, выделенные из кро-зи и органов иммунной .системы (тимус, лимфатические узлы, селезен-са, костный мозг) от 1240 морских свинок и периферической крови 18 шдей, в градиенте плотности верографина (Фрик Г., Прейснер 3., !979). В качестве иммунизирующих препаратов применяли чумную живую ;ухую вакцину. Пролиферативную активность лимфоцитов, находящихся ■ различных фазах митотического цикла ( 3+02+М ), изучали методом поточной цигофлуориметрии. Поинцип метода основан на цитофлуори-етрическсм определении содержг'ия ДНК в клетках после окрашивания

специфическими 'луорохромами ( Barlogie В. et &i. > 1976). Процентное соотношение лимфсш'-тов в разных фазах митогического цикла регистрировали с помощью проточного цитофлуориметра ХСР 22 фирмы "РЯГКЕ", Подсчет клеток в фазах.клеточного цикла проводили с поыоцьа математической модели ( Ве^сИи, J975).

Для оценки иммунореактивногаи организма на клеточном уровне изучали in vitro интенсивность процессов пролиферации с помощью реакции бласттрансфориацли ликфоци-, ib в крови вакцинированных против чумы под действием неспецифического ыитогена (фитогемыагглютинин -А) и специфических антигенов (убитые клетки чумного микроба),

Иммуномодулирующее действие специфического фактора переноса, полученного по видоизменекому нами методу И. Шредер (1979) из лимфоцитов крови и еелезе';;<и морских свинок через 21 день и из крови людей через 6 мес. после иыц/низацки кивсЧ чумной вакциной> изучали путем определения в коаной пробе гиперчувствительности зшледленного типа (ГЧЗГ), процессов пролиферации цитофлуориметрическим методом, в тесте активной эациты морских свинок.

В кроьи и селезенке морских свинок в процессе иммуногенеза и патогенеза чумы изучали количество клеток, относящихся к основным популяциям (Т,В,Д,0) и рёгуляторнии Т-субпопуякциям лимфоцитов.

¿-,В-,Д~,0- лимфоциты морских свинок изучали методог, основанном на принципе одновременного выявления количества Т-лиыфоцктов, образующих спонтанные розетки с эритроцитами кролика (E-F0K), и В-лкм-фоцитов, имеющих рецептор к С^-компоненту' комплемента и образующих розетки с эри-роцитами барана, нагруженными комплексами антитело-комплемент (ЕАС-РОК)* Одновременно учитывались Д-лимфоцигы, имеющие маркерк Т- к В-клеток, и нулевые лимфоциты, не имеющие маркеров ни Т-, ни В-клеток..

Определение количества регу;;яторных субпьпуляций основано на том, что'Тс характеризуются, наличием рецепторов к Гс-фрагыентам

Ig■G , а Tx - к ■ Fe -фрагментам , ig ц. Субпопуляции клеток подсчитывали среди общего числа Т-димфоцитоэ путем постановки двойного розегко-образования с эритроцитами кролика и барана, нагруженными специфическими антителами классов ige и ..

Все полученные результаты обрабатывали статистически общепринятым методом (Алзмарин 'Л.П., Воробьев A.A., 1962) на ЭВМ PC 286-120, фирмы "Сорат", Тайвань.

2. Результаты работы и их обсуждение

В результате выполненных исследований были получены следующие данные.

Введение в организм • юрским свинкам живой чумной вакцины сопровождалось закономерными изменениями процессов пролиферации и дифферен-цировки лимфоцитов. Характер, выраженность и динамика сдвигов были различны и эагчеили от дозы вводимой вакцины.

Иммунизация большой дозой ,1, яягых м.к.) чумной вакцины вы-

зывала значитьльное увеличение числа лимфоцитов, находящихся в 3+G2+U-фазах митотического цикла (рис. I) в крови и костном мозге на протяжении всех сроков исследования. В тимусе и лимфатических узлах этот показатель увеличивался к концу первой недели, а в селезенке - в течение первой недели и на 21-е сут;ки.

При исследовании лимфоцитов, выделенных иэ крови и лк.лфоцдных органов морских свинок, вакцинированьых средней дозой чумной вакцины

к

41*10 живых м.к.), обнаружено увеличение уровня ДНК-синтезирующих. и делящихся лимфоидных клеток в крови в ранние сроки иммуногенеза, в селезенке - уменьшение таких клеток к концу второй недели.

Вреденйе минимальной иммунизирующей дозы чумной вакцины (1*10 жи-

еых м.к.) вызывало умеренное увеличение числа клеток, синтезирующих

ДНК (рис. 2) в крови, тимусе и лимфатических узлах в течение первых

тпех суток. В селезенке, ьапротив, наблюдали снижение количества ДНК-

синтезирующих лимфоцитов по сравнению с исходными данными, начиная с О

г

л/у Т О КО ЫА Шк Ш) Ог Шк ЕШи сутки

Рис, Д. Процент якм^рцитов в лимфатических узлах (л/у\ тимусе (т), селезенке (с), крови (кр) и костном мозге (к.м.) морских свинок, иммуни- , зипованных 3,5*30*® к..вых м.к. чумной вакцина.

до«.»

40

л/у т

СЗ» Ш) ЕЗ» сутки

Рис. 2. Процент лимфоцитов в лимфатических узлах

(я/у), тимусе (т), селезенке (с), крови (кр) -. • и костном мозге (к.м.) морских свинок, имму-низироьанных живых м.к. чумной вакцины.

3-х сугок. В костном мозге );;■ обнаружено достоверных сдвигов в изменении соотношения лимфоцитов в S+^+l -фазах митотического цикла. 4>

Полученные данные свидетельствуют о тем, что преобладающим направлением пыявленк IX изменений при иммунизации морских свинок разными до зами чумной вакцины было увеличение числа ДНК-синтезируюцих лимфоии-тов крови и лимфоидных органов в течение первой недели после иммунизации.

Для более полной характеристики иммунного статуса изучали изменение абсолютного и относительного содержания лимфоцитов в популяциях

(Т,В,Д,0) и регуляторных субпопуляциях (Тх, Тс) у морских, свинок в

3

динамике противочумного иммунитета. Показано, что введение 1*10 живых м.к. чумной вакцины морским свинкам, вызывало увеличение относительного и абсолютного уровня Т- и В-лиЦюцитов в крови в начале первой и к кончу второй недели и нормализацию этих показателей в последующие сроки наблюдений.' Относительно«; количество Д-лимфонитов не изменялось или снижалось в более поздние сроки после иммунизации, абсолютное - оставалось на исходном уровне. Относительное содержание 0-лимфоиитов не отличалось от контрольного уровня, за исключением 3-х суток, когда их tsícno в крови значительно снижалось, абсолютное количество увеличивалось к моменту формирования активного иммунитета (рис. 2). Изменение процентного,и абсолютного соотношения основных популяций Т- и B-л..мфоцитов ь сторону увеличения сви-детельстпуег об иммунологической перестройки организма, направленной на усиление миграции прояиферирующих лимфоцитов под влиянием антигенной стимуляции.

Изучение накопления регуляторных субпопуляций в крови Доказало,

3

что через сутки после вакшнаши морских свинок I'IO живых м.к. чумной вакцины наблюдалось снижение Тх, а количество Тс уменьшалось по сравнению с контролем на 1-е и 7-е'сутки. Уменьшение абсолютного количества Тх и Тс в крори также наблюдалось в течение пРррой недели. Достоверных различий иммунорегуляторного индекса

(соотношение количества Тх и Тс) по сравнению с контрольными,животными выявить не удалось Определение популяционного и субпопуля-цисиного состава лимфоцитов крови может служить в определенной степени показателем дифференцировки лимфоцитсРворганах иммунной системы и развития иммунологических-реакций в организме. Под влиянием иммунизации, очевидно, происходит усиленная мь^рация лимфоцитов из лимфовдных органов в кровоток, что обеспечивает развитие иммунного процесса в организме, .

Основные процессы иммуногенеза происходят в органах иммунной системы», в том числе в селезенке. При изучении влияния чумной вакцины на количественное соотношение лимфоцитов сёл зенки (рис. 4), как и в крови, наблюдали значительное преобладание Т-лимфоцитов лишь на 3-й сутки. Относительное количество В-клеток увеличивалось по сравнению с контролем на 1-е и значительно с.пшалось Va.„У-е, сутки. Уровень Д-лимфоцитов был снижен на протяжении всех сроков ,исследования. Содержание О-лимфоцито-j увеличивалось в селезенке на 7-& сутки после введения препарата.

Иммунологическая перестройка организма морских свинок, (Суслов-ленная вакцинацией, затрагивает Т- и В- популяции лимфоцитов селезенки, что выражается в увеличении их относительного количества в ранние сроки иммуногенеза и возвращение к исходны,! цифр м к 21-м суткам. Очевидно, это связано с усилением процессов пролиферации лимфоцитов в ответ на антигенную стимуляцию. Снижение В-лимфоцитов к концу первой недели, по-видимому, можно объяснить стиханием митс-тической акгиь .ости этих клеток. Изменение относительного содержания субпопуляций Т-лимфоцитов в селезенке выражались в снижении количества Тс по сравнению с контролем на 1-е сутки и увеличением на 21-е сутки. При этом.не обнаружено статистически достоверных изменений иммунорегуляторного индекса (Т'х/Тс) па сравнению с невакцини-рованными животными.

Вэк Ш1 □! ЕЗт ШЗи [Пи сутки

Рис. 3. Динамика изменений относительного количества популяций (Т,В,Д,0) и субпопуляций (Т-хеллеры, •1-супрессоры) лимфоцитов крови морских свинок, иммунизированных МО3 живых м.к. чумной вакцины.

в* Ш1 СЗз Шт Е3и Ои сутки

Рис. 4. Динамика изменений относительного количества популяций (Т,В,Д,0) и субпопуляций (Т-хеллерк, х-еупрессоры) лимфоцитов селез.лки морских свинок, иммунизированных Т"Ю3 живых м.к. чумной вакцины.

Учитывая, что характер и исход инфекционного процесса зависит от количественного состава иммунокомпетентных клеток и их функциональной активности, нами было изучено изменение числа ДЖ-синтезирующих и делящихся клеток, а также популяционного и субпопуляционного состава лимфоцитов у морских свинок после их заражения вирулентным штаммом чумного микроба.

Заражение интактных морских ^винок сопровождалось в первые -третьи сутки значительным увеличением количества ДНК-еинт°зирующих лимфоцитов в крови, лимфатических узлах и селезенке в основном за счет 0-клеток и Тс, что свидетельствует о повреждающем действии вирулентного штамма чумного микроба. Увеличение относительного коли-' честЕа О-лимфоиитов ыожет быть связано с поликлональной активсшей в ответ на стрессорнсе действие чум! тго микроба и выбросом незрелых форм. .

Увеличение количества ДНК-синтези]; ующих и делящихся лимфоцг-ов

3

было более существенным при заражении животных, привитых 1*10 живыд

к' .

м.к., чем I•20 живых м.к. чумной вакцины. Уровень синтезирующих ДНК-лимфошгов в первой руппе животных был почти таким же, как и у зараженных иитактных морских свинок. В отличии от контрольных жиеот

ных, погибших в течение 7 сут, у выживших иммунных первой группы, увеличение числа пролиферируюнр.л клеток было менее выражено по сравнению с зараженными интактными и к 14-м - 21-м суткам снизилось до

к

исходных значений. У морских свинок, привитых 1"Ю живых и.к. чумной вакцины, зарегистрированы незначительные изменения в соотношении ДНК-синтезирующих лимфоцитах после заражения.

Заражение морских свинок, иммунизированных I"10^, живых м.к. чумной викнины, вирулентным штаммом- чумного микроба приводило к увеличению относительного количества Т-лимфоцитов крови (рис. в течение пергых трех суток по сравнению г иммунизированными не-зарч.кеиныки ж ?отньми. Достоверных изменений еодериачия й- и 0-ли\$оп:тсч> не выяглечо, а содержание Д-лимфоцитов достоверно

о

снижалось на 7-е сутки после заражения. Относительное количество Тс увеличивало*^ на 1-е сутки, а Тх снижалось з* 3-й сутки после-заражения.

<

В селезенке (рис. 6) происходило уменьшение относительного количества основных популяций (преимущественно Т-лимфоцитов) и регуля-торных субпопуляций Тс в течение первоГ нвдэли после заражения.

На основании вышеизг-нпенкого можно сделать заключение, что умеренное увеличение у иммунизированных морских свинок в течение первых трех недель числа синтезг дующих ДОК и делящихся лимфоцитов следует считать благоприятным прогностическим признаком, при заражении -незначительное увеличение данного показателя (в 1,5-2 раза) также

благоприятным, значительное (в 4-6 раз) у засаженных животных - нео

благоприятным диагностическим признаком, свидетельствующем об иммунопатологии, отягощающей иифекционгчй процесс.

Функциональная активность лимфоцитов крови иммунизированных против Чумы людей была Изучена in vitro в реакции бласттрансфориации под действием неспецифического митогена С ЗГА) ^специфического антигена (убитые клетки чумного микроба). При культивировании ,;имфоци-TOBin vitro- обнаруживалось увеличение числа клеток, находящихся в S+G2*m -фазах митотического цикла под действием $ГА или убитых клеток чумного микроба по сравнгшю с контрольными пробами, т.е. усиливалась функциональная актгвносъь иммунокомпетенгных клеток. \ Изучение распредельни.. по фазам митотического цикла лимфоцитов \ крови людей показало, что через сутки после вакцинации количесзо клеток, синтезирующих ДНК в'среднем (20,5±1,5) % превышало■контрольный уровень (7,§¿-2,2) % в 2,7 раза./то-свидетельствует о специ-. фической иммунологической перестройки привитого организма, активации процессов пролиферации лимфоидных элементов, принимающих

тие в развитии специфического иммунного'ответа. : '. • - • . i - ■ • Специфический факЕор nep-oócaj полненный из .лимфоцитов иимунк-

т а о о л те

Он Ш1 а» га» сутки

Рис. 5. Динамика изменений относительнрго количества популяций (Т,В,Д,0) и субпопудяшй (Тх, Тс) лимфоцитов крови морских свинок, иммунизированных 1*10^ жи.ых м.к. чумной вакцины и зараженных вирулентным штаммом чумного микробе.

Шк □» От сутки

Рис. 6. Динамика изменений относительного количества популяций (Т,В,Д,0) и субпопуляций (Тх, Тс) лимфоцитов селезенки морских свиьок, иммунизированных 1*10" живых м.к. чумной вакцины и зараженных сируяентньа; штаммом Чумного микроба.

зированных против чумы морских свинок и людей, оказывает иммуномоду-лирующее действие и' индуцирует повышение ан~чинфекционной резистентности предварительно иммунизированных морских свинок. Под влиянием специфического фактора переноса отмечено увеличение ДНК-синтззирую-щих и делящихся клеток в регионарных лимфатических узлах, повышение уровня ГЧЗГ, оцениваемую по кожной проб', по сравнению с реакцией сенсибилизированных животных, которым факте,, переноса не вводили. Иммуногенная активность фактора переноса была зарегистрирована в тес-,те активной защиты морских свшок. Введение I усл. ед. фактора переноса через 6 мес. после иммунизации чумной вакциной обеспечивало защиту подавляющего большинства (85,3 %).животных. Даже при введении одного специфического фактора переноса интактным морским свинкам от l8 Del вирулентного штамма чумного микроба выжило 40 % животных, тогда как от I и 10 Sel погибли все контрольные морение сзйкяи.

Резюмируя представленный материал, можно сделать заключение, что разностороннее и многоэтапное изучение пролифератиьной активности, популяционного и субпопуляциснного состава лим?скитов крови и раз- ■ личных органов иммунной системы морских свинок в процессе ; -дауноге-неза и патогенеза при чуме позволило получить новые данные о неспецифической перестройке э системе игмунокомпетентных клеток. Проведенные исследования позволили выявить определенную взаимосвяьь между неспецифическими изменениями и показателями специфических иммунологических сдвигов. Ра с апе доклинических испытаний новых или усовершенствованных чумных вакцинных препаратов и для оценки иммунного статуса организма можно рекомендовать использова1" ъ разработанные нами и утвержденные Минздравом СССР ( 1989.^ методические рекомендации "Определение синтезирующих ДНК и делящихся лимфоидных клеток методом проточной цитофлуоркметрии", а предложвнньге методические под, оды - для опенки уровня иммунологической перестройки организма при-

ь

г.итых против чумы ЖИВОТНЫХ. Q

- 18 -

вывода

1. Установлены законсерные изменения в распределении лшфоцитог по фазам клеточного цикла ( з+й2+М ) в крови и органах иммунной системы морских свинок, иммунизированных различными дозами чумной вакци-

' ны: в ранние сроки иммуногенеза наблюдали увеличений числа ДНК-синтезирующих и делящихся лимфоцитов. Выраженность изменений зависила от величины иммунизирующей доз.., а динамика была различной в разных органах иммунной системы. Умеренное усиление процессов пролиферации является аагоцриятным показателем иммуногенеза.

2. Показано, что иммунизация Ж1вай чумной вакциной вызывала комплекс изменений в содержании основных популяций лимфоцитов с преобла-даг-ем увеличения числа Т- и В-клеток в крови и селезенке в ранние ' сроки иммуногенеза; количественное соотношение Т-хелперов и Т-супрес-соров существенно не изменялось.

3. При чумной инфекция у морских свинок отмечено кратковременное, а затем значительное увеличен з количества ДНК-синтеэирующих лимфоцитов в крови, лимфатических узлах и селезенке в основном за с ет 0-клоток и Т- супрессоров, что свидетельствует о повреждающем действии вирулентного' штамма чумного микроба на систему иммунокомпетентных клеюк.

4. Показано, что заражение вирулентным штаммом возбудителя чумы морских свинок, предварительно иммунизированных минимальной дозой живой чумкой вакциной, сопровождалось краткогременным увеличением содержания клеток в з+Со+А! -фа. ис митогичесяого цикла в основном за ¿чет т-лиьфопитов, что ассоциировалось с выраженной приобретенной резистентностью к чуме.

Установлена прямая корреляционная связь между нарастанием количества ДНК-синтезирующих V делящихся клеток в крови'и иммунокомпетентных органах (лкмфатйчсских узлах, тимусе, селезенке) в динамике .иммуногенеза I! патогенеза при чуме, что позволяет рекомендовать ис-:;ольэогать исследование кроЕк для характеристики иммунного ответа

организма.

6. Вакцинальный процесс у людей, привить-, подкожно чумной живой вакциной, характеризовался увеличением количества лимфоцитов, синтезирующих ДНК, повышением уровня митеггниндуцированной пролифера-тивной активности иммунокомпетентных клеток, а также антигенэавкси-мой бласттрансформации лимфоцитов. Узел..чекиа числа ДгК-синтезирующих лимфоцитов в 1,5-3 '■аза свидетельствует об иммуногенности препарата.

7. Установлено, что специф чсский фактор переноса вызывал увеличение ДНК-синтезирующкх лимфоцитов в регионарных лимфатических узлах, усиление специфической реакции -1*431 в кожной пробе и повышение

антиинфекционной резистентности ранее иммунизированных против чумы О

горских свинок.

8. Определение количества ДНК-сгтезирующих лимфоцитов крови мокр т быть использовано .в качестве дополнительного теста оценки иммунологической перестройки организма привитых на этапе доклинических испытаний или усовершенствованных противочумных^вакцинных препаратов.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Анисимова Т.И., Ледсанов М.В., Саяпина Л.В., Адамов А.К. Роль фактора переноса в модулировг .т иммунитета к чуме// Современ. аспекты профилакт. зоонозн. т 1оз. докл. Всеюзн. конф,- Иркутск, 1984.- Ч. I.- С. 135-137.

2. Саяпина Л.В., Ледванов M.D., Кравцов А.Л., Анисимова Г.И. "ji-тофлуориметрический метод оценки бласгтрансформац.ди лимфоцитов крови людей под действием фактора переноса.. антигенов чумного микроба// йкмуноморфол., аллерголог, и иммунол. особо опасных инф.-.Саратов, 1985.- С.52-55. ■

3. Саяпина Л.В., Ледванов M.S., Анисимова Т.К., Нравиов А.Л., Мз-торкна H.A. Влияние вакцины о мной и фактора переноса, полученного от вакцинированных поотив чумы людей, на синтез ДКл в лимфоцитах

морских свинок// Тр. раб. совец. молодых ученых и специалистов "Эпи-демиол., молекул., биол. генет. и иммунол. возбудителя чума (Саратов, 1588.- Ч.2.- С 59-63.

4. Олялина Л.В., Ледванов li.II. Изучение популяций и субпопуляций ' лимфоцитов крови и селезенки морских свинок в процессе развития вакцинального и инфекционного иммунитета при чуме// Актуал. вопр. эпи-демиол., профилакт, и диагност, особо опасных инф.: Тез. докл. итоговой науч. кочф.- Ставрополь, 1989,- С.51-53,- (ДСП).

5. Саг.ина Л.В., Кравцов Л.Л,, Ледванов М.Ю, Изучение иммунологической реактивности при чуме вакцинированных и зараженных морских свинок методами проточной цитофяуориметрии и розеткообразования// Акгал. вопр. зпвдемиол., профилакт. и диагност, особо опасньи инф.1: Тез. докл. итоговой кауч, конф.- Ставрополь, 1389,- С.53-54.- (ДСП).

6. Саяпина Л.В., Кравцов А,Д., Анисимова Т.Н. Изучение методим прохочной цитофлуориметрии иммунолог*гческой реактивности морских свинок, вакцинированных проти- чумы// Факторы клеточного и гуморального иммунитета при различных физиологических и патологических состояниях: Тез. докл. X науч. конф,- Челябинск, 1990,- С.128-129.

7.-Саяпина Л.В., Кравцов А.Л. Цитофлуооиметрический метод иэуче-ния механизма иммунитета и инфекции при чуме// Молекул, механизмы развития инф. заболеваний: Тез. докл. Всесоюзн. конф.- Звенигород, 1990.- С.103.