Автореферат и диссертация по медицине (14.00.14) на тему:Пролиферативная активность и плоидность ДНК рака молочной железы

На правах рукописи

2 9 М1Р Ьй

Гуляк I {аталья Степановна

Пролнфератнвная активность и плондность ДНК рака молочной железы

П4.00.14 - онкология. 14.0Щ5 - патологическая анатомия)

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

г. Москва - 1996 г.

Работа выполнена в Московском научно-исследовательском онкологическом институте имени ПАГерценаМЗ и МП РФ (директор - академик РЛМН, профессор В.И.Чиссов)

Научные руководители:

доктор Пножи ических наук 11.С.Сергеева

аокгор медицинских наук, профессор ГАФранк

Официальные оппоненты:

доктор биолог ических наук, профессор Л.С.Саенко доктор медицинских наук В.Н.Богатырев

Ведущая организация:

Научно-исследовательский институт физико-химической медицины ГуП и МП РФ

Чапшта состоится в 14 часов 21 мая 1996 года на заседании диссертационного совета при М11ИОИ им. ПА Герцена МЗ и МП 1М> .по адресу: 125284, г. Москва, 2-й Боткинский проезд, домЗ.

С диссертацией можно ознакомится в библиотеке МНИОИ им. II Л Герцена МЧ и МП РФ.

Автореферат разослан апреля 1996 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, доктор мешшинских наук, профессор И.Л.Максимов

Актуяльпость проблемы

Рак молочной железы (РМЖ) занимает ведущее место в структуре заболеваемости злокачественными новообразованиями женщин во многих высокоразвитых странах И, несмотря па определенные успехи в лечении, смертность в следствие генерализации этого заболевания остается высокой{Двойрин В.В. с соавг., 1995; Berg J.W., 1995] .Это привело к заключению о том, что отдаленные микрометастазы, не выявляемые клинически, ухе существуют у пациенток в момент установления диагнозаЩемидов В.П. с соавт., 1995; Galimberti V. et al ,1992 J. Следовательно, актуальной стала проблема выявления больных, у которых , несмотря на отсутствие клинических проявлений отдаленных метастазов, возможна быстрая генерализация процесса.

Разнообразие клинических форм рака молочной железы , многовариантность течения и результатов лечения свидетельствуют о значительной межопухолевой гетерогенности биологических характеристик РМЖ. В последние годы сложилось мотивированное мнение о том, что некоторые из этих характеристик , в частности, способность опухолевых клеток к пролиферации , содержание в них ДНК,экспрессия некоторых онкогенов и антионкогенов и кодируемых ими регуляторных белков, несут в себе, наравне с классическими клиническими и морфологическими признаками, важную дополнительную прогностическую информацию об агрессивности опухолевого процесса [Ikeda N. et al., 1993; Gilchrist K.W. et al., 1993; Lanzafame S. et al., 1994].Эго заключение является закономерным, так как растройство регуляции пролиферации, которое приводит, во-первых, к нарушению прохождения фаз клеточного цикла и, во-вторых, неравномерному распределению материала хромосом между дочерними клетками. имеет своим следствием

неконтролируемый рост и деление клеток.

Пролнферативная активность (ПА) и шюидность ДНК клеток РМЖ активно исследуется в последние два десятилетия [Smith F.B. et al., 1993; Luisi A., 1993]. Появление моноклоналышх антител к белкам пролиферации и внедрение

в лабораторную практику проточных цитофотометров и анализаторов изображения [Kennedy Jan С. et al., 1992; Tctu В., 1993] позволили разработать ряд новых подходов к их определению. Результаты работ, посвященных исследованию ПА и плоидносги ДНК в РМЖ, свидетельствуют о том, что с помощью этих параметров можно идентифицировать биологические различия клинически и морфологически сходных опухолей путем исследования цитологических препаратов до начала лечения больного.В ряде ретроспективных исследований была продемонстрирована прогностическая значимость этих характеристик , по крайней мере, для группового прогноза агрессивности клинического течепия РМЖ [O'Reilly S.M. el al., 1990; Reith A., 1994 ].

Цель работы

Изучение пролифератишюй активности и плоидности ДНК РМЖ как возможных прогностических факторов биологической агрессивпости опухолевого процесса

Задачи работы

1. Оценить ПА опухолевых клеток в карциномах молочной железы человека

2. Исследовать распределите клеток РМЖ по пло'-идности ДНК

3. Сопоставить изученные биологические характеристики РМЖ с особенностями гистологической структуры и другими клинико-морфологическими факторами прогпоза течения РМЖ.

4. На основании полученных данных разработать алгоритм прогноза клинической агрессивности РМЖ.

Научная новизна

fia основании мультипараметрического анализа данных касающихся I1A, плоидносги ДНК, гистологической степени злокачественности и градации ядер опухолевых клеток РМЖ сделан вывод о взаимодополняемости этих параметров как критериев биологической агрессивности РМЖ.

Установлено, что опухоли с двумя анеуплоидными пиками имеют наиболее высокий уровень ПА , что отражает их высокую биологическую агрессивность. Разработан математический подход для оценки "вероятности обнаружения", "вероятности ложных тревог" и вероятности отдаленного метастазирования в сроки от 10 до 32 месяцев от старта лечения по уровню пролиферативной активности первичного опухолевого узла больных РМЖ. Практическая значимость работы

Разработали методические приемы проведения реакции Фельгена , позволяющие оцепить содержание ДНК в РМЖ с использованием автоматизированной видеосистемы '' Cires". Для уточнения биологической агрессивности опухолевого процесса больных РМЖ предложены два количественных критерия - лоля пролиферирующих клеток в опухоли (ПА) и плоидность ДНК опухолевых клеток

R результате математической обработки полученных данных и с применением подхода Байеса разработан алгоритм (формула и ее графическое выражение), позволяющий по уровню ПА клеток первичного опухолевого узла оценить вероятность отдаленного метастазирования п сроки наблюдения от 10 до 32 месяцев от старта лечения.

Апробация работы

Основные положения диссертации доложены п обсуждены

па :

-Конференции "Новые направления и разработки в огасоморфологип", BOIILI, япварь,1995 г.,

- XXX Гу'оскспской конференции молодых ученых и специалистов МНИОИ им.П.А.Герцейа (1994);

- Научной конференции отделения общей онкологии МНИОИ им. П.А.Герцена, март 1994г.

Публикации

По теме диссертации опубликовано 5 научных работ. Объем и структура диссертации

Диссертационная работа изложена на /I/ страницах печатного текста и состоит из введения, обзора литературы, главы посвященной материалам и методам, 3-х глав . в которых представлены собственные результаты и их обсуждение, заключения, выводов и списка литературы, содержащего 22 отечественных и 119 иностранных источников. Диссертация содержит ^таблиц и /5" рисунков.

Материалы и методы исследования

ПКЬККТ ЧССЛЕДОВ.ШИЯ

В работе исследованы образцы опухолевой ткани от 131 первичной больной РМЖ ( иункционный и операционный материал). В соответствии с окончательным гистологическим диагнозом 69 случаев были отнесены к шшазивному протоковоыу раку(ИПР), 41 случай - к комбинациям инвазивного протокового рака с другими формами рака(КИПР), остальные опухоли были представлены редко встречающимися формами РМЖ (21 случай.). Средний возраст больных составлял 48,5 лет. Размер первичного опухолевого узла у больных колебался от 0,5 см до 5,0 см; домннаштгую группу составляли опухоли размером болеее 2,но менее 3 см (94 случая);22 опухоли имели размеры менее 2 см; и 15 опухолей - более 3 см. У 88 больных метастатического поражения регионарных лимфатических узлов не обнаружено (22 случая - 1А стадия . 63 случая - НА стадия, 3 случая - IIIA стадия). У 43 больных в регионарных лимфатических узлах обнаружены метастазы (31 случай -lib стадия, 12 случаев - ШЬ стадия).

ОЦЕНКА ЩПХХЛОГИЧВСКИХ ПАРАМЕТРОВ ОПУХОЛЕВЫХ КЛЕТОК РМЖ.

Цитологические мазки.приготовленные из опухолевой ткани сразу после ее получения фиксировали .в ледяном метаноле( 10 мин.,-20° С) и окрашивали по Паппенгейму по стандартной методике. Цитологические исследования осуществляли с помощью MiiKpocKona'Opton Axioplan",npn суммарном увеличении х500. При оценке цитологических

параметров опухолевых клеток использовали классификацию ядер по I I.Bloora and W.Richardson .учитывая состояние хроматина, количество ядрышек, форму и размер ядер, его соотношение с цитоплазмой. Согласно этой классификации опухоли распределяли па три типа - три градации. Консультативную помощь в работе оказывала ст.н.с. отделения онкоцитологии МНИОИ им. 11.А.Герцена - Е.Н.С'лакиова.

ОЦЕНИЛ ГИСТОЛОГИЧЕСКИХ ХАРАКТЕРИСТИК РМЖ

Гистологические параметры РМЖ оцени ими на гистологических срезах( окрашенных гематоксилин-зозином по стандартной методике),учитывая гистологический тип опухоли, степень злокачественности , стадию заболевания в соответствии с критериями ВОЗ (1982 г). Данные исследования проводились совместно со сг.н.сотр отделения патоморфологии МНИОИ им. П.А.Герцена Н.Н.Волченко.

ИССЛЕДОВАНИЕ ПА РМЖ С ПОМОЩЬЮ ИММУНОЦИТОХИМИЧЕСКОГО ОКРАШИВАНИЯ.

Оценку ПА опухолевых клеток РМЖ осуществляли с помощью непрямого иммунофлуоресцентного метода, по стандартной схеме, используя в качестве перпмх антител мышннпне моноклоналыше антитела (МАТ) к ядерному белку пролиферирующих клеток Kj-67 ("Dako",Дания) в разведении 1:20. В качестве вторых антител, применяли козьи МЛ Г против IgG мыши, меченные РПС (Sigma,США),в разведении 1:50.

Учет доли пролиферирующих клеток осуществляли с помощью флуоресцентного микроскопа "Opton Axioplan" при увеличении х400. Реакцию в опухолевых клетках считали положительной при интенсивном специфическом свечении в ядрах. Долю пролиферирующих клеток определяли как отношение положительно окрашенных клеток к общему числу просчитаппых и выражали в процентах. Для каждой выборки опухолей подсчитывали среднее значение Г1А и среднеквадратичное отклонение (М±т).

МЕТОДИКА ПРИГОТОВЛЕНИЯ ПРЕПАРАТОВ И ПРОВЕДЕНИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ ПРИ ОЦЕНКЕ КОЛИЧЕСТВА ДНК В ЯДР.4Х ОПУХОЛЕВЫХ КЛЕТОК РМЖ. Исследование содержания ДНК в клетках РМЖ проводили па автоматизированной видеосистеме "С'гез"(Гсрмания), анализируя мазки опухолей окрашенные по Фельгену и оценивая количество красителя специфически

связывающегося с ДНК. Условия проведения реакции Фельгена были разработаны нами специально для РМЖ. Для этого препараты подвергали кислотному гидролизу в 4N НСЦпри t+28,5°C ,45 мин); Далее препараты промывали дистиллированной Н20 и помещали в реактив Шиффа(50 минут ). Затем препараты промывали в трех сменах сернистой воды (Ir NaHS03,10мл IN HCL и 200 мл проточной воды) и затем- в дистиллированной Н20. На заключительном этапе препарат обезвоживали в батарее спиртов (50° ,70 96 100 ") п заключали в канадский бальзам.

МЕТОДИКА ПРИГОТОВЛЕНИЯ ДИПЛОИДНОЮ СТАНДАРТА ИСПОЛЬЗУЕМОГО В /Д1А GE ANALISIS КАК " ВНЕШНИЙ СТАНДАРТ'

В качесгве диплоидного эталона использовали лимфоциты периферической крови человека,90% которых находятся в Go/Gl фазах клеточного цикла, и образуют диплоидную популяцию клеток. Диплоидные стандарты приготавливались нами но следующей схеме: 10 мл гепаринизированной крови разводили в два раза 0.9% NaCL, наслаивали на 3 мл фикола-урографина( р -1,077) и центрифугировали при 1000 об/мин в течении 15 мин. Образовавшуюся фракцию лимфоцитов, собирали пипеткой и промывали в забуференном NaCL и, далее, наслаивали на предметные стекла при помощи цитоцетрифуги "Sacura" (5 мин,500 об/мин). Высушенные на воздухе препараты в процессе работы фиксировали одномометио с мазками РМЖ.

Результаты и обсуждения

ПА была оценена в 131 карциноме молочной железы. Уровень ПА разных опухолей варьировал от 0 до 40%, в среднем составляя 8,9±0.8% (Рис. 1).

Значительная межопухолевая гетерогенность по величине ПА оказалась не связанной ни с возрастными различиями больных, пи с размером первичного опухолевого узла. Средняя IIA для И11Р и КИПР Пила близкой , что позволило в ряде случаев анализировать опухоли этих гистологических типов как единую выборку.

На следующем этапе работы для выяснения вопроса о том, можно ли использовать величину ПА в качестве прогностического фактора аг рессивности течения опухолевого

Рис.1. Распределение РМЖ по ПА

n ВОтТ • ч

~ 4в|

S «m

и т

У'

и

о а

т »tt S

г;

О

£ ~ 4 • 13 18 ЯО 84

проли^ератив няя

за зз эв 40

активность ('-О

процееса при РМЖ, мы сопоставили ПА опухолей с известными морфологическими критериями агрессивности РМЖ - гистологической степенью злокачественности и градацией ядер опухолевых клеток.Устаповлепо, что доля опухолей со II степенью злокачественности монотонно уменьшается с повышением ПА, а с III ст. злокачественности. - увеличивается с повышением ПА. (Рис.2)

Рис.2. Распределение РМЖ разной степени злокачественности по ПА

ПА <*>

и Пст._'.

ЩЪ Шст.злок.

В целом, средняя ПА РМЖ с Ш-ей степенью злокачественности била достоверно более чем в два раза выше , чем в опухолях со II степенью злокачественности .То есть высокая ПА РМЖ находит отражение в высокой степени гистологической злокачественности РМЖ Аналогичные достоверные корреляции были найдены между ПА и м«готической активностью (МА), а так же между уровнем ПА и градацией ядер опухолевых клеток. Так ПА опухолей с 1 градацией ядер составляла 3,6+0,6%; со 2 градацией ядер-6,4+0,9%; и с 3 градацией ядер-15,0+1,4%. Поскольку ПА коррелирует с градацией ядер, а так же со степенью злокачественности РМЖ, нами был проведен

трехпараметрический анализ этих критериев. В результате было установлено,что градация ядер опухолевых клеток позволяет разделить попообразования, сходные по степени злокачественности, на подгруппы с высокой и низкой ПА Так средняя ПА РМЖ II степени злокачественности и с 1,2 градацией ядер составляла 4,9±0,6% , при 3 градации 7,3±1,6%, а средняя ПА РМЖ III степени злокачественности с 1,2 градацией ядер составляла 6,7+1,5% , а с 3 градацией ядер 15,6+2,5% .

В связи с тем , что одпим из клинических параметров прогноза РМЖ является стадия процесса, было проведено сравнение уровня ПА рака больных с разной степенью распространенности процесса у больных. Различий в ПА больных с метастазами и без них выявлено не было .Мы считаем эти данные вполне закономерными, так как если считать, что ПА отражает биологическую агрессивность опухолевого процесса,то ее уровень должен коррелировать со временем от момента возникновения опухоли до момента метастазирования, а не со стадией, на которой выявлен процесс.

Таким образом,на первом этапе работы было установлено, что существуют прямые корреляции между такими прогностическими характеристиками агрессивности опухолевого процесса , как митотическая активность, гистологическая степень злокачсствености, градация ядер опухолевых клеток с одной стороны и ПА - с другой. Полученные данные являются свидетельством того, что уровень ПА опухоли - это один из критериев агрессивности РМЖ

Целью следующего этапа работы было выяснение прогностической значимости различий в содержании ДНК, то есть плоидности ДНК в РМЖ. Плоидность ДНК была исследована в 95 карциномах молочной железы. В целом содержание ДНК в клетках разных опухолей варьировало от 1,5 С до 10,5 С, что свидетельствовало , во-первых,о выраженой гетерогенности РМЖ по содержанию ДНК, и ,во-вторых, что во многих исследуемых нами опухолях содержание ДНК в клетках отличалось от нормального(диплоидного). В зависимости от содержания ДНК все новообразования были разделены на 6 типов (Табл.1).

Таблица 1. Содержание ДНК н ПА клеток РМЖ

Тип опухоли Количество случаев, п (%) ПА (%±ш)

Диплоидные 6 (6.3%) 1.1+0.4

Тетрашюид-ные 19 (20.0%) 6.7 ±1.7

Тетра/дипло-идные 2(2.1%) 3.6 ±0.8

Анеуплоидные 68 (71.6%) 9.2 ±1.1

-гипоанеупл. -гиперанеупл. -с 2-мя анеупл. пиками 17 (25.0%) 37 (54.4%) 14 (20.6%) 6.8±1.7 9.7 ±1.5 10.9 ±2.9

Доминантную 1руппу (71,6%) в исследованной выборке

представляли анеуплоидные опухоли и лишь 6,3% РМЖ

оказались диплоидными ,20,0% опухолей были признали тетраплоидными и 2,1% -тетра/диплоидными . В свою очередь анеуплоидные РМЖ были разделены на гипоанеуплоидные , гиперанеуплоидные и опухоли с двумя анеуплоидными пиками ( четко различающимися по содержанию ДНК). Среди всех подгрупп опухолей наименьшее значение ПА оказалось в группе диплоидных опухолей. При этом средняя ПА диплоидных РМЖ была примерно в 9 раз ниже, чем в анеуплоидных и в 6 раз ниже, чем в тетраллоидных опухолях( Габл.1). Среди анеуплоидных опухолей максимальное значение ПА наблюдалось в группе опухолей с двумя анеуплоидными пиками, а минимальное - в группе гипоанеуплоидных опухолей .Таким образом, было показано, что чем выше индекс ДНК в клетках РМЖ, тем более высокий уровень 1IA они имеют.

При сопоставление плоидносги ДНК в клетках РМЖ со степенью их злокачественности показано, что все диплоидные опухоли, тетра/диплоидные и большинство тетраплоидных и гипоанеуплоидных опухолей имели II степень злокачественности. И только группы гиперанеуплоидных опухолей и опухолей с двумя анеуплоидными пиками встречались в равной мере как при II , так и при III степени злокачественности. То есть, в целом опухоли с высокой степенью гистологической злокачественности имеют более высокое содержание ДНК в опухолевых клетках. При сопоставлении содержания ДНК в клетках РМЖ с разной градацией ядер были получены аналогичные данные. Принимал во внимание установленные корреляции, мы провели мультипараметрический анализ полученных данных, а именно: содержания ДНК, ПА опухолевых клеток, степени злокачественности, градации ядер опухолевых клеток. Учет всех перечисленных критериев позволил разделить опухоли на подгруппы, более однородные по ПА.(Табл.2). Причем ПА опухолей II степени злокачественности и 1,2 градации ядер значительно выше,чем ПА опухолей III степени злокачественности и 3 градации ядер .Наиболыпими( в 6 раз) эти различия выявлены для гипоанеуплоидных опухолей ; гиперанеуплоидных опухолей (в 2,5 раза) и опухолей с 2-мя анеуплоидными пиками (в 2,5 раза). Более того, все диплоидные ,тетра/диплоидные и тетраплоидные (за

исключением одного случая) оказались II степени злокачественности и 1,2 градации ядер.

Таблица 2. Сравпепие распределения РМЖ с разной степенью злокачественности и градацией ядер по содержанию ДНК в опухолевых клетках

Тип опухоли : Пст.злокачест-бснности; 1,2 грлдер Шст.элокачестве- йНости; Згр.ядер

Диплоидные 0.75 ±0.4% -

Тетрашюидные 6.78 ±2.1% 18.2%

Тетра/дигоюид-ные 3.63 ±1.67%

Гипоанеуплоид-ные 2.98 ±0.9% 18.7± 0.9%

Гиперанеушоид ные 6.46 ±1.1% 16.47± 3.7%

Опухоли с 2-мя анеугиюидными пиками 6.1 ±3.6% 16.7± 9.7%

Нами не было выявлено корреляции между содержанием ДНК в клетках РМЖ и стадией опухолевого процесса: во всех группах( различных по содержанию ДНК) примерно в равной

мере встречались опухоли как с локальным (N0), так и с распространенным процессом Исключение составляли

диплоидные опухоли - все они принадлежали больным с локальным процессом.

Таким образом, выяснено, что шюидностьДНК коррелирует с такими морфологическими параметрами прогноза , как степень злокачественности и градация ядер опухолевых клеток. В экспериментальном разделе работы были получены доказательства того, что каждый из этих параметров несет дополнительную (к традиционно используемым

морфологическим критериям) информацию о биологической агрессивности опухолевого процесса , то есть, эти параметры являются не взаимозаменяемыми , а взаимодополняемыми.

На заключительном этапе настоящей работы мы провели первую клиническую апробацию полученных результатов, в частности, попытались получить клинические доказательства предположения о прогностической значимости уровня Г1А первичного РМЖ для выявления пациентов , у которых при относительно благоприятных характеристиках процесса, вероятна его быстрая генерализация уже на старте лечения. Мы попытались создать алгоритм или математическую модель, которая позволяла бы выявлять больных хруппы "высокого" и "низкого" риска быстрого отдаленного метастазирования.

В соответствии с задачей исследования, мы проанализировали уровень ПА первичной опухоли у 120 больных РМЖ ,у которых в сроки наблюдений отЮ до 32 месяцев( средние сроки наблюдения -21,2±0.8 месяцев) были зарегистрированы и не зарегистрированы отдаленные метастазы.Анализ клинической документации был осуществлен совместно с сотрудниками отделения общей онкологии. Следует отметить, что отдаленные метастазы возникли как в группе больных исходно расцененных как N0, так и в группе больных исходно расцененных как N К Установлено, что средняя ПА первичных опухолей больных РМЖ. у которых возникли отдаленные метастазы оказалось в 2.5 раза выше , чем у больных , у которых отдаленные метастазы в эти же сроки не были зарегистрированы (18.2+2,8% и 7,2+0,1% соответственно). Глубина различий в ПА опухолей больных с "хорошим " и "плохим" прогнозом демонстрируется на Рис.3, па котором представлено распределение ПА в опухолях больпых, с отдаленными метастазами и без них. Большая часть больных с

Рис,3а

Нет отдаленных метастазов

РиаЗб

В в Щ »

ао Ю'

Есть отщшеняые мегас газы

III

1в Э4 а 40 4в

ПА

отдаленными метастазами имела высокую исходную ПА опухоли, в то время как большинство больных ,у которых не обнаружили отдаленных метастазов , имели низкую ПА опухоли(Рис.За,Зб).

На следующем этапе работы в плане разработки алгоритма ¿гл пспсл«лпяния ПА для выявления опухолей с быстрым развитием отдаленных метастазов , мы провели анализ "стстч отдаленных метастазов у больных с разным уровнем ПА первичной опухоли (Табл.3).

Таблица 3. Вероятность отдалепных метастазов и уровень ИЛ РМЖ

Пролнферап'ивная активность Частота отдаленных ;

метастазов

>1% 15.8%

>4% 18.4%

>6% 22.6%

>8% 27.0%

>10% 28.9%

>12% 34.3%

>14% 44.0%

>16% 43.5%

>18% 53,0%

>20% 50,0%

>22% 67,0%

>24% 75.0%

Частоту отдаленных метастазов при каждом уровне ПА оценивали как отношение доли больных с метастазами и с уровнем ПА превышающей заданную величину ко всем больным с уровнем Г1А превышающей заданную величину. В качестве заданных величин ПА использовали следующие

уровни ПЛ:>1%, >4%, >8%, >10%.....>24%. Очевидно, что

частота отдаленных метастазов монотонно растет с увеличением ПЛ.(Табл.3)

Данные таблицы в графическом выражении представлены на . графике, который позволяет при любом экспериментально установленном уровне ПА опухоли оценить вероятность отдаленных метастазов.(Рис.4) Очевидно, что представленный график и заключения справедливы для сроков наблюдения в среднем составляющих 21,2+0,8 месяцев. Естественно, описанные функции будут несколько отличаться для больших сроков наблюдения.

Рис.4.

^ Вероятность отдаленного метастази-Ь рования и уровень ПА РМЖ

л

У

о

о

5 10 15 20 25 30

Уровень ПА, (%)

В заключении, для полной характеристики популяции исследованных РМЖ мы воспользовались математическим аппаратом, традиционно применяемым для решения такого рода задач. Для этого мы высчитали "вероятность обнаружения",как отношение количества выявленных больных с отдаленными метастазами при заданном уровне ПА ко всем выявленным в нопулящш больным с отдаленными метастазами и " вероятность ложных тревог", как отношение количества больных со случаями без отдаленных метастазов при заданном уровне ПА. ко всем случаям без выявленных метастазов.

Эти параметры мы посчитали для разных уровней ПА:>1%,>4%,>6%,....>24% (Табл.4)

Таблица 4. "Вероятность обнаружения" и "вероятность ложных тревог" для больных РМЖ с разным уровнем ПА первичной опухоли

Уровень 11А " Вероятность "Вероятность

обнаружения" ложных тревог"

>1% 94,0% 82,5%

>4% 82,0% 75,7%

>6% 82,0% 46,6%

>8% 82,0% 37,8%

>10% 82,0% 30,1%

>12% 70.5% 22,3%

>14% 64,7% 13,6%

>16% 58,8% 12,6%

>18% 53,0% 7,7%

>20% 35,0% 5,8%

>22% 35.0% 2,9%

>24% 29,0% 2,9%

Графическим отображением этих данных явилась операционная характеристика изображенная на Рис.5, где каждому выбранному нами уровню ПА соответствуй "вероятноегь обнаружения" и вероятность'ложных тревог".

Рис.5.

Данная операционная характеристика позволяет составить представление о прогностической значимости параметра ПА для больных РМЖ в целом, то есть для каждого уровня ПА (больше какой-либо заданной величины) оценить "вероятность выявления" и "вероятность ложных тревог". Эта функция может быть использована для выбора границы ПА удовлетворяющей клиническим задачам.

Таким образом, в настоящей работе исследованы Г1А и плоидность ДНК, как возможные количественные факторы прогноза клинической агрессивности РМЖ на старте лечения и был предложен алгоритм для клинического использования одной из биологических характеристик опухоли поолиферативпой активности, с целью оценки вероятности отдаленного метястазирования.

Выводы

1 . На основании анализа уровня пролиферативной активности и плоидности ДНК карцином молочной железы 131 первичной больной, показана значительная межопухолевая гетерогенность по этим параметрам, не связанная с возрастными различиями больных , размером первичного опухолепого узла и стадией опухолевого процесса.

2. Уровень пролиферативной активности опухолей прямо и достоверно коррелирует с морфологическими критериями злокачественности: степенью злокачественности, митотической активностью и I радацией ядер опухолевых клеток.

3. Выявлена статистически достоверная взаимосвязь между содержанием ДНК в опухолевых клетках с одной стороны и уровнем пролиферативной активности и морфологическими критериями злокачественности с другой стороны. Показано, что среди карцином молочной железы преобладают анеуплоидные опухоли, среди которых опухоли с двумя анеуплоидными пиками имеют наиболее высокий уровень пролиферативной активности.

4. Результаты мультипараметрического анализа всей совокупности полученных данных свидетельствует о том, что пролиферативная активность и плоидность ДНК являются дополнительными ( к морфологическим ) биологическими критериями агрсссипности рака молочной железы.

5 В результате математической обработки совокупности полученных данных разработан алгоритм ( формула и ее графическое выражение), связывающий уровень пролиферативной активности клеток первичного опухолевого узла рака молочной железы и вероятность отдаленного метастазнрования н сроки наблюдения 21,1+0,8 месяцев от начала лечения, требующий дальнейшей клинической апробации.

Список публикаций

1. Guljak N.S., Slavnova E N., Chissov V.J. et al.. Nuclear grading and cellular proliferation as prognostic indicator in breast carcinomas. XVI Int.Cancer Congress, New Delhi, India, p.164, 1994.

2. H.C.Гуляк Градация ядра и пролифератнвная активность как факторы прогпоза при раке молочной железы.. В сб. тезисов II национального конгресса молодых ученых-медиков Украины., Киев, 1994, стр.38.

3.Н.С.Гуляк, Н.С.Сергсева, Е.Н.Славнова и др. Пролифератнвная активность карцином молочной железы как возможный фактор прогноза. БЭБМ, N8, стр.215-217, 1995.

4.Н.С.Гуляк, Н.С.Сергеева, Е.Н.Славнова и др. Пролиферативная активность и плоидность ДНК опухолевых клеток карцином молочной железы как возможные факторы прогноза. Лаб.дело., N5, стр. , 1995

5.Н.С.Гуляк, Н.Н.Волченко, Н.С.Сергеева и др. Пролиферативная активность и степень злокачественности рака молочной железы. В сб. тезисов V Всесоюзного Российского съезда специалистов по лаб.диагностике. Москва, 24-26 мая, 1995, часть I, стр.78.