Автореферат и диссертация по медицине (14.01.30) на тему:Пролиферативная активность эпителия кишечника при естественном и радиационном старении
- Ученая степень
- кандидата биологических наук
- ВАК РФ
- 14.01.30
Автореферат диссертации по медицине на тему Пролиферативная активность эпителия кишечника при естественном и радиационном старении
На правах рукописи
ГУСЕЛЬНИКОВА Екатерина Александровна
ПРОЛИФЕРАТИВНАЯ АКТИВНОСТЬ ЭПИТЕЛИЯ КИШЕЧНИКА ПРИ ЕСТЕСТВЕННОМ И РАДИАЦИОННОМ СТАРЕНИИ
14.01.30 - геронтология и гериатрия
Автореферат
диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук
о 3 ФЕВ 2011
Санкт-Петербург - 2011
4843628
Работа выполнена в лаборатории нейроэндокринологии Санкт-Петербургского института биорегуляции и геронтологии СЗО РАМН
Научный руководитель: доктор медицинских наук
Коновалов Сергей Сергеевич
Официальные оппоненты: заслуженный деятель науки РФ,
член-корреспондент РАМН, доктор медицинских наук, профессор Аничков Николай Мильевич
доктор биологических наук Чернышева Марина Павловна
Ведущая организация:
Учреждение Российской академии наук «Институт физиологии им. И.П. Павлова» РАН
Защита диссертации состоится «31» января 2011 г. в |рч часов на заседании диссертационного совета Д 601.001.01 при Санкт-Петербургском институте биорегуляции и геронтологии СЗО РАМН по адресу: 197110, Россия, Санкт-Петербург, пр. Динамо, д. 3.
С диссертацией можно ознакомиться в фундаментальной библиотеке Санкт-Петербургского института биорегуляции и геронтологии СЗО РАМН (197110, Россия, Санкт-Петербург, пр. Динамо, д. 3).
Автореферат разослан «29» декабря 2010 г.
Ученый секретарь
диссертационного совета
доктор биологических наук, профессор
Козина Л.С.
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
Актуальность темы
Желудочно-кишечный тракт (ЖКТ) является основным органом, посредством которого организм осуществляет контакт с окружающей средой. Способность к клеточному обновлению двух основных типов клеток кишечного эпителия - эпителиоцитов и нейроэндокринных клеток является важным механизмом в обеспечении и поддержании физиологической функции кишечника при старении организма и при действии экологически неблагоприятных факторов [Анисимов В.Н., Хавинсон В.Х., 1991; Анисимов В.Н., СоловьевМ.В., 1999; King М.А. et al., 1980].
Многочисленные данные свидетельствуют о том, что после аварии на Чернобыльской АЭС нарушения деятельности желудочно-кишечного тракта у лиц, проживающих на зараженных территориях, занимают одно из ведущих мест в патогенезе различных заболеваний [Ярилин A.A., 1996, 1997]. Многие из этих нарушений подобны тем, которые развиваются в организме человека в процессе старения. Поэтому поиск средств защиты от длительного действия облучения в относительно малых дозах [Зайнуллин В.Т. и др. 1999; Москалёв A.A., Зайнуллин В.Т., 2004; Beetz А., et al., 1997] имеет значение и для решения проблем геронтологии.
В настоящее время общепризнано, что ЖКТ является мощным эндокринным органом. В нем локализуется более 20 типов эндокринных клеток, в которых синтезируется более 30 гормонов локального и общего значения. Кишечный эпителий является одним из ключевых компартментов как иммунной, так и нейроэндокринной системы, и относится к числу наиболее радиочувствительных тканей с высоким пролиферативным потенциалом. Изучение сходства результатов при облучении организма человека малыми дозами ионизирующего излучения с последствиями естественного старения - активно развивающееся в настоящее время направление теоретических и клинических исследований [Анисимов В.Н. и др., 1992; Зайнуллин В.Т., Москалев A.A., 2000, 2001].
В этой связи, изучение процессов клеточного обновления эпителиоцитов и нейроэндокринных клеток кишечника при естественном старении и при действии ионизирующего излучения представляет большой интерес, поскольку известно, что облучение в сублетальных дозах является моделью радиационного старения, что позволяет оценить лучевые воздействия как экологический фактор, способствующий ускорению старения организма [Москалёв A.A., Зайнуллин В.Т., 2001; Москалев A.A., 2008].
Принимая во внимание указанные обстоятельства, изучение пролиферативной активности клеток обоих популяций желудочно-кишечного тракта (ЖКТ) как основного признака интенсивности процессов клеточного обновления при естественном и артифициальном (радиационном) старении, является актуальным и необходимым для разработки гормонотропных подходов профилактики возраст-ассоциированной патологии.
Цель и задачи исследования
Целью диссертационного исследования является изучение возрастных особенностей пролиферации эпителиоцитов и динамики популяции нейроэндокринных клеток кишечника при естественном и радиационном старении.
Для достижения указанной цели были поставлены и последовательно решены следующие задачи:
1. Провести иммуногистохимическую верификацию популяции нейроэндокринных клеток в кишечнике человека и экспериментальных животных (крыс).
2. Изучить динамику популяции нейроэндокринных клеток кишечника человека при естественном старении.
3. Изучить динамику популяции нейроэндокринных клеток кишечника крыс в модели радиационного старения.
4. Сравнить показатели возрастной динамики пролиферативной активности клеток кишечного эпителия у человека при старении и у крыс в модели радиационного старения.
5. Выявить корреляции между динамикой популяции нейроэндокринных клеток и пролиферативной активностью эпителиоцитов в кишечнике млекопитающих при естественном и радиационном старении.
Научная новизна
В работе впервые "'изучена возрастная динамика изменения популяций клеток кишечного эпителия человека при старении. Установлено, что экспрессия фактора пролиферации К1-67 в стенках сосудов, в эпителиальных клетках и в соединительно-тканных клетках кишечника достоверно изменяется с возрастом. Полученные результаты указывают на то, что протеин Кь67 вовлечен в поддержание функций желудочно-кишечного тракта при старении.
Впервые зарегистрированы корреляции между усилением экспрессии хромогранина А в нейроэндокринных клетках кишечника и усилением их пролиферативной активности. Установлено снижение числа апудоцитов, экспрессирующих хромогранин А, у пожилых людей, людей старческого возраста и долгожителей, что свидетельствует о том, что роль кишечника как нейроэндокринного органа с возрастом снижается. Уменьшение локальной секреции гормонов в свою очередь играет важную роль в патогенезе заболеваний желудочно-кишечного тракта, ассоциированных с возрастом.
Получены достоверные данные и выявлены корреляции между пролиферативной и нрроэндокринной активностью в эпителии кишечника крыс при воздействии ионизирующей радиации (модель старения) в сублетальных дозах с последующей экстраполяцией полученных данных на эпителий кишечника человека. Выявлено, что уровень экспрессии маркера Кд-
67 у молодых и старых крыс различен. Экспрессия К1-67 с возрастом снижается, особенно по показателю площади экспрессии, что отражает тотальное подавление процессов клеточного обновления в кишечном эпителии при радиационно смоделированном старении.
Практическая значимость
Впервые зарегистрирована возрастная динамика изменения популяций клеток кишечного эпителия при естественном и радиационном старении. Результаты исследования свидетельствуют о важной роли кишечника не только как пищеварительного, но и как эндокринного органа, обеспечивающего локальную секрецию гормонов, влияющих на процессы клеточного обновления в эпителии желудочно-кишечного тракта, что в свою очередь играет важную роль в патогенезе заболеваний желудочно-кишечного тракта, ассоциированных с возрастом. Полученные данные открывают перспективы для разработки гормонотропных подходов профилактики возраст-ассоциированной патологии желудочно-кишечного тракта.
Положения, выносимые на защиту
1. Экспрессия универсального маркера гормональной секреции хромогранина А в эпителии кишечника человека и крыс повышается при естественном старении.
2. В кишечном эпителии человека и экспериментальных животных выявлен ключевой фактор пролиферации протеин Кл-67, экспрессия которого повышается при естественном старении.
3. Повышение экспрессии хромогранина А и протеина Кл-67 при естественном старении отражает компенсаторно-приспособительные процессы, развивающиеся в кишечнике при его инволюции.
4. Радиационное старение способствует снижению экспрессии хромогранина А в кишечнике крыс, что отражает повреждающее действие на эпителий ионизирующего излучения и нарушает локальную независимую регуляцию пищеварительных функций.
5. При радиационном старении зарегистрировано усилеиие пролиферативных процессов в кишечнике крыс, при этом общая популяция клеток, прошедших митоз увеличивается в 2 раза.
6. Зарегистрировано отсутствие корреляций между пролиферативной активностью эпителиоцитов и нейроэндокринных клеток кишечника при естественном и радиационном старении, что свидетельствует об автономности функционирования этих клеточных популяций при развитии возрастных инволютивных изменений пищеварительного тракта.
Связь с научно-исследовательской работой Института
Диссертационная работа является темой, выполняемой по основному плану НИР Санкт-Петербургского института биорегуляции и геронтологии СЗО РАМН.
Структура и объем диссертации
Диссертация сострит из введения, 3 глав, выводов и указателя литературы. Текст диссертации изложен на 105 страницах, содержит 8 таблиц, иллюстрирован 30 рисунками. Список литературы содержит 175 источников, из которых отечественных - 46.
Публикации
По материалам диссертации опубликовано 11 научных работ, в том числе 3 статьи в журналах, включенных в Перечень ВАК Минобрнауки РФ для публикации материалов диссертационных исследований, 8 тезисов докладов.
Апробация и реализация диссертации
Материалы диссертации доложены на Весенней геронтологической конференции (Белгород, 2009); Геронтологических чтениях (Белгород -Новополоцк, 2009); Конференции «Человек, спорт, здоровье» (Санкт-Петербург, 2009); Конференции «Фундаментальная и клиническая медицина» (Санкт-Петербург, 2009).
ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Характеристика исследуемого материала
Исследования проведены на кишечном эпителии как при естественном, так и при радиационном старении. Для исследования естественного старения эпителия кишечника был получен аутопсийный материал (п=45) от людей разного возраста, который был разделен на 3 группы с учетом международной возрастной классификации Всемирной Организации Здравоохранения (ВОЗ):
• люди пожилого возраста (60-74 лет), п=15;
• люди старческого возраста (75-89 лет)), п=15;
• долгожители (90 лет и старше) ), п=15.
Аутопсийный материал получен в Санкт-Петербургском городском патологическом бюро и больнице св. Георгия № 3. Причинами смерти людей пожилого, старческого возраста и долгожителей явились: острый инфаркт
миокарда (20 случаев), ишемическая болезнь сердца (7 случаев), повторный острый инфаркт миокарда (4 случая), ишемическая болезнь сердца: постинфарктный кардиосклероз (6 случаев), церебросклероз (3 случая), инфаркт головного мозга (5 случаев).
Для изучения преждевременного (радиационного) старения были исследованы образцы кишечного эпителия 40 самцов крыс линии Вистар. Животные содержались в обычных условиях вивария при дневном освещении и сбалансированном рационе питания. Все животные были разделены на 4 группы: 1 группа - 3 месячные (молодые), облученные; 2 группа -
3 месячные, необлученные; 3 группа - 24 месячные (старые), облученные;
4 группа- 24 месячные, необлученные животные.
Гамма-облучение выполнено на аппарате ЛУЧ-1 (источник бОСо; мощность дозы 17,166 х 10-4 Гр/с). Животные получили однократную дозу 6 Гр, через 7 суток был произведен забой животных и забор материала. Забой животных и выделение органов проводили утром с 10 до 12 ч при естественном освещении под нембуталовым наркозом (50 мг/кг). Данная схема эксперимента является общепринятой моделью преждевременного старения [Акоев И.Г., 1970; Москалев A.A., Зайнуллин В.Г., 2001 ;Vitarelli Е. et al., 1995].
Иммуногистохимическое исследование
Полученные фрагменты кишечного эпителия фиксировали в нейтральном растворе формалина (рН=7), проводили через спирты, ксилолы и заливали в парафин по стандартной методике. Из парафиновых блоков на микротоме Leica 540М готовили срезы толщиной 3-5 мкм и наносили их на чистые стекла, обработанные адгезивом (поли-лизином).
Для обеспечения фиксации гистологического среза к стеклу чистые обезжиренные стекла предварительно были обработаны адгезивом.
Для верификации в тканях кишечного эпителия экспрессии белка Ki-67 и хромогранина А был использован иммуногистохимический метод с применением авидин-биотиновой системы визуализации [Автандилов Г.Г., 1990; Kvetnoy I.M, Yuzhakov V.V, 1993].
Для иммуногистохимического исследования использовали первичные моноклональные мышиные анти-человеческие антитела к Ki-67 (1:50, Dako), хромогранину А (1:50, Dako). В качестве вторых антител использовали биотинилированные анти-мышиные иммуноглобулины из универсального набора (Dako). Визуализацию окрасок проводили с применением комплекса авидина с биотинилированной пероксидазой (ABC-kit), с последующим проявлением пероксидазы хрена диаминобензидином (все реагенты от Dako).
Компьютерный анализ микроскопических изображений и статистическая
обработка результатов
Для оценки интенсивности иммуногистохимической реакции были проведены морфометрические исследования с использованием системы компьютерного анализа микроскопических изображений Nikon Eclipsy 400 и лицензионной программы Videotest Morphology 5.0. Для каждого препарата фотографировали 10 полей зрения (увеличение х400).
В качестве морфометрических показателей подсчитывали суммарную площадь экспрессии (в % от общей площади среза) и оптическую плотность (в условных единицах - у.е.). Указанные показатели являются общепринятыми параметрами для оценки экспрессии сигнальных молекул в клетках и тканях.
Статистическую обработку результатов проводили с помощью программы Statistica 6.0. Для анализа вида распределения использовали критерий Шапиро-Уилка (Shapiro-Wilk's W-test).
Проверка гипотез о различиях между группами проводилась с помощью дисперсионного анализа (ANOVA) с использованием непараметрического метода Краскела-Уоллиса, для сравнения отдельных групп использовали непараметрический критерий Манна-Уитни.
Для определения корелляционных зависимостей был использован непараметрический метод корреляционного анализа Спирмена.
Критический уровень достоверности нулевой статистической гипотезы (об отсутствии различий и влияний) принимали равным 0,05.
Результаты исследования представлены в виде среднего арифметического значения (Mean) и стандартной ошибки среднего (standard error of mean, SEM) - Mean ± SEM.
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
Иммуногистохимическое исследование кишечного эпителия человека
Известны изменения с возрастом митотических циклов на различных уровнях крипт кишечника, вероятно, что эти различия увеличиваются с возрастом и в первую очередь за счет изменений продолжительности Gi-периода.
Имеющиеся в настоящее время данные позволяют говорить о невысокой пролиферативной способности клеток кишечника крыс в ранней стадии постнатального развития и о том, что этот показатель не превышает пролиферативную активность эпителиальных клеток взрослых животных. Интенсивный же прирост клеток, связанный с увеличением поверхности слизистой оболочки, углублением крипт и ростом ворсинок, а также восполнение в результате физиологической дегенерации гибнущих клеток происходят главным образом за счет длительного существования клеток в стадии дифференцировки.
При иммуногистохимическом исследовании препаратов человека экспрессия хромогранина А была обнаружена в клетках эпителия, мышечных волокнах и пейеровых бляшках, во всех возрастных группах.
Атрофические и гипопластические состояния, нарушение процессов пролиферации и дифференцировки клеток, а следовательно и нарушения репаративной регенерации, нарастающий иммунодефицит, снижение защитно-адаптационных реакций и устойчивости организма являются теми процессами, реализация которых во многом определяется состоянием иммунной системы [Лушников Е.Ф., Абросимов А.Ю., 2001; Ноздрачев А.Д. и др., 2001; Проскуряков С.Я. и др., 2008; Zhao Е. et al., 2009].
При иммуногистохимическом исследовании препаратов человека экспрессия Ki-67 была также обнаружена в клетках эпителия, мышечных волокнах и пейеровых бляшках у людей всех возрастных групп.
С помощью компьютерной программы Videotest Morphology 5.0 нами были оценены два параметра: оптическая плотность и суммарная площадь экспрессии изученных маркеров.
Морфометрический анализ микроскопических изображений позволил сравнить уровень экспрессии хромогранина А и Ki-67 у людей разных возрастных групп.
Максимальная площадь экспрессии хромогранина А была обнаружена в клетках эпителия людей старческого возраста (23,08±2,3% от общей площади срезов) при этом площадь экспрессии хромогранина А в группах 1 и 3 составила 10,83±2,7% и 15,36±2,07% соответственно, что в 2,3 и 1,5 раза меньше (рис. 1 А).
Максимальная площадь экспрессии Ki-67 была обнаружена у долгожителей (группа 3) и составила 19,01 ±1,11%. У людей пожилого (группа 1) и старческого (группа 2) возраста этот показатель составил 10,44±2,06% и 8,16±2,06% соответственно. Достоверные различия между этими группами не отмечены (рис. 1 В).
г
° 15
□ люди
ПОЖИЛОГО возраста
люди
старческого возраста
■ долгожители
Возрастные группы, лет
20
£ 15 3
*
□люди пожилого возраста
люди
старческого возраста
■ долгожители
Возрастные группы, лет
В
Рис. 1. Показатели суммарной площади экспрессии хромогранина А (А) и протеина К1 - 67 (В) в эпителии кишечника людей разного возраста *- достоверное различие от групп 1, 3 (р<0,05).
Известно, что хромогранин А является секреторным белком, содержащимся в гранулах нейроэндокринных клеток, потенциально способных продуцировать гормоны, в частности нейропептиды и трансмиттерные факторы, необходимые для роста и регенерации клеток и тканей [Kidd M. et al., 2006; Kasprzak A. et al., 2007; Gulubova M., Vlaykova T., 2008].
Протеин Ki-67 является биологическим маркером пролиферативных процессов [Horn L.S. et al., 2009; Kimura F. et al., 2009; Wang L. et al., 2009].
. 0,3 t----'- *--------------0,45 -v—-----------*—™.............—
ШШ люди v o,4 .........—--— ** 1,юди
.0,25 ^^H пожилого >■ | пожилого
5 ^^Н-1 возраста g 0,35 ^^^В возраста
I 0,2 .люди I 0,3
¡0,15 ^Я старческого ? °-25 старческого
возраста « 0,2 ^Ж в03Раста
5 0,1 ^Н g 0 15 П долгожители
ш пдолгожители а>
¡0,05 ¡0,1 ^^
О о IH I § 0,05
0 :.................................
Возрастные группы, лет
Возрастные группы, лет
Л в
Рис. 2. Показатели оптической плотности содержания хромогранина А (А) и протеина Ki-67(S) в эпителии кишечника людей разного возраста *- достоверное различие от групп 1, 3 (р<0,05). **- достоверное различие от группы 1 (р<0,05).
Подсчет суммарной площади окрашенных структур выявил тенденцию к снижению площади экспрессии хромогранина А и увеличению площади экспрессии Ki-67 с возрастом, что может свидетельствовать о снижении синтеза гормонов, обладающих антипролиферативными свойствами в кишечнике человека при старении организма.
Анализ значений оптической плотности клеток кишечного эпителия человека, экспрессирующих хромогранин А и Ki-67 показал отсутствие достоверных различий по показателю оптической плотности для хромогранина А и протеина Ki-67 между тремя исследованными группами (рис. 2).
Поскольку хромогранин А является секреторным белком, содержащимся в гранулах нейроэндокринных клеток, экспрессия его в эпителии кишечника, людей пожилого возраста, людей старческого возраста и долгожителей, указывает на наличие нейроэндокринных клеток в кишечном эпителии у лиц старших возрастных групп.
Иммуногистохимическое исследование кишечного эпителия крыс разных возрастных групп при радиационном старении
Исследования кинетики клеточной популяции крипт кишечника облученных животных показали, что облучение резко угнетает
пролиферативную способность, меньше влияет на ассимиляцию веществ клетками, а растущим клеткам становится тесно в крипте, даже если их число невелико [Grad В. et al, 1952].
Следует отметить, что нейрональные и эндокринно-паракринные элементы в стенке кишки составляют единую интегральную медиаторно-модуляторную систему, воздействующую биологически активными соединениями на мембраны клеток - мишеней.
Помимо так называемых прямых функций тонкая кишка оказывает влияние на соседние органы, имеющие важное значение для гомеостаза в целом. Тонкая кишка посредством функциональных связей обеспечивает координированное взаимодействие различных отделов системы пищеварения. Выделяют энтерогастральную, энтерогепатическую, энтерохолекинетическую и энтеропанкреатическую оси.
В модели радиационного старения проведено исследование экспрессии хромогранина А и протеина Ki-67 в кишечнике крыс. Были изучены 4 группы животных в возрасте 3 и 24 месяцев. Группа 1- облученные крысы (возраст 3 месяца). Группа 2- необлученные крысы (возраст 3 месяца). Группа 3- облученные крысы (возраст 24 месяца). Группа 4- необлученные крысы (возраст 24 месяца).
Экспрессия Ki-67
Проведенные исследования позволили зарегистрировать увеличение экспрессии протеина Ki-67 по оптической плотности у 3 месячных облученных крыс по сравнению с необлученными в 1,2 раза. В то же время по площади экспрессии данный показатель увеличивается в группе 3 месячных необлученных крыс по сравнению с облученными в 2,3 раза, что свидетельствует об усилении пролиферативного потенциала как отдельных клеток, так и популяции в целом при радиационном старении (табл. 1).
Таблица 1
Показатели экспрессии протеина Ю-67 в эпителии кишечника молодых крыс
Среднее± ошибка среднего Необлученные Облученные
Оптическая плотность, у.е. Площадь экспрессии,% Оптическая плотность, у.е. Площадь экспрессии,%
М±ш 1,600±0,013 6,806±0,017 1,905±0,008* 2,901±0,011**
Примечание: *- достоверное отличие от необлученных животных по показателю оптической плотности (р< 0,05), ** - достоверное отличие от необлученных животных по показателю площадь экспрессии (р< 0,05).
Результаты исследований последних лет позволили установить, что ионизирующая радиация инициирует высвобождение из эндокринных и неэндокринных клеток биогенных аминов, которые, в свою очередь запускают механизм ранних морфофункциональных сосудистых реакций [Южаков В.В. и др., 1996; Куейюу 1.М. ее а1., 1997]. Эти реакции становятся одним из ведущих патогенетических факторов, усиливающих первоначальные повреждения клеток и тканей, поскольку одновременное высвобождение разных по механизмам действия вазоактивных аминов и их локальное накопление в ткани способствуют развитию микроциркуляторного шока и гипоксии [Конопляников А.Г., 1997].
По показателям оптической плотности и суммарной площади экспрессии протеина Кь67 у 3 месячных животных контрольной группы и облученных животных представленных на рисунке 3, было зарегистрировано достоверное увеличение экспрессии протеина Кь67 в группе 3 месячных облученных крыс по показателю площади экспрессии, что может свидетельствовать об активной экспрессии во всех клетках, вышедших из вО-фазы. Увеличение протеина Ю-67 в группе 3 месячных облученных крыс позволяет говорить о том, что задействован "скрытый" пролиферативный потенциал.
8.........- * ---------------------
* 7 I—.....--------------
пЬШ~..................
§ 4 ___________................... ■ необлученные
~ облученные
1..................^н ..................
Е^ 0 --------
группы
Рис 3. Показатель суммарной площади экспрессии протеина Кл-67 в кишечном эпителии 3 месячных крыс * - достоверное отличие от облученных крыс (р<0,05)
Таблица 2
Показатели экспрессии протеина Кл-67 в эпителии кишечника старых
крыс
Среднее± ошибка среднего Необлученные Облученные
Оптическая плотность Площадь экспрессии Оптическая плотность Площадь экспрессии
М±ш 1,401±0,011 3,704±0,008 1,706±0,011 1,901±0,011*
Примечание: *- достоверное отличие от необлученных животных по показателю оптической плотиости (р< 0,05).
У 24 месячных облученных крыс также зарегистрировано усиление экспрессии протеина Кл-67 (табл. 2) по оптической плотности по сравнению с необлученными в 1,2 раза, в то же время по площади экспрессии данный показатель увеличивается в группе 24 месячных необлученных крыс по сравнению с облученными в 2 раза. Эти данные также свидетельствуют о повышении изолированной активности всего пула кишечного эпителия при радиационном старении.
На рис. 4 показано достоверное увеличение площадь экспрессии протеина Кл-67 у необлученных крыс по сравнению с облученными крысами 24 месячного возраста, что позволяет говорить о снижении пролиферативного потенциала у животных в модели радиационного старения.
Изучение влияния радиации, как модели преждевременного старения, на экспрессию протеина Кл-67, предполагает сравнение разновозрастных групп крыс между собой.
Рис 4. Показатель суммарной площади экспрессии протеина Ki-67 в кишечном эпителии 24 месячных крыс * - достоверное отличие от облученных крыс (р<0,05).
Используемый непараметрический критерий сравнения двух независимых признаков Mann-Whitney подтвердил достоверность статистически значимых данных (р<0,05) оптической плотности (группа 1, 2 р=0,002; группа 1, 3 р=0,001; группа 1, 4 р=0,002; группа 2, 3 р=0,001; группа 2, 4 р=0,003; группа 3, 4 р=0,002) и площади экспрессии (группа 1, 2 р=0,002; группа 1, 3 р=0,001; группа 1, 4 р=0,001; группа 2, 3 р=0,001; группа 2, 4 р=0,002; группа 3, 4 р=0,002) по каждой сравниваемой группе.
Таким образом, установлено, что уровень экспрессии маркера пролиферации Ki-67 с возрастом снижается, причем под действием радиационного облучения как индуктора старения площадь экспрессии значительно уменьшается, что отражает подавление пролиферативных процессов в кишечном эпителии. В то же время, интенсивность окрашивания иммуннопозитивных к Ki-67 структур под действием радиации увеличивается, что свидетельствует о сохранении пролиферативного потенциала отдельных клеток, тогда как клеточное обновление популяции в целом снижается при радиационном старении.
Экспрессия хромогранина А
Результаты исследования экспрессии маркера хромогранина А в клетках кишечного эпителия представлены в таблицах 3 и 4.
Проведенные исследования позволили зарегистрировать уменьшение экспрессии маркера Хромогранина А по оптической плотности у 3 месячных облученных крыс по сравнению с необлученными в 1,2 раза. В то же время по площади экспрессии данный показатель увеличивается в группе 3 месячных необлученных крыс по сравнению с облученными в 2,1 раза, что свидетельствует об усилении гормон - секретирующей активности нейроэндокринных клеток кишечного эпителия при индукции старения действием ионизирующей радиации (рис. 5).
Таблица 3
Показатели экспрессии хромогранина А в эпителии кишечника молодых крыс
Среднее± ошибка среднего Необлученные Облученные
Оптическая плотность Площадь экспрессии Оптическая плотность Площадь экспрессии
М±т 2,111±0,015** Т,301±0,006 1,699±0,016* 0,607±0,014
Примечание: *- достоверное отличие от необлученных животных по показателю оптической плотности (р< 0,05), ** - достоверное отличие от необлученных животных по показателю площадь экспрессии (р< 0,05).
2,5 2 1,5 1 0,5
о
Онеоблучеиные „ облученные
Рис 5. Показатель оптической плотности хромогранина А в кишечном эпителии 3 месячных крыс * - достоверное отличие от облученных крыс (р<0,05)
Активность некоторых биологически активных белков, закодированных в молекуле хромогранина А, таких как вазостатин, бета-гранин, хромостатин, панкреастатин и парастатин преимущественно направлена на аутокринное или паракринное ингибирование высвобождения гормонов и нейротрансмиттеров. Биосинтез хромогранина А регулируется многими различными факторами, включая стероидные гормоны и агенты, которые действуют через разнообразные сигнальные пути [Hendy G.N. et al., 2006; Helle K.B. et al, 2007; Mosley C.A. et al, 2007].
У 24 месячных облученных крыс также зарегистрировано ослабление экспрессии маркера хромогранина А по оптической плотности по сравнению с необлученными в 1,3 раза, в то же время по площади экспрессии данный показатель увеличивается в группе 24 месячных необлученных крыс по сравнению с облученными в 1,4 раза. Эти данные также свидетельствуют об уменьшении активности нейроэндокринных клеток кишечного эпителия при действии ионизирующей радиации.
Таблица 4
Показатели экспрессии хромогранина А в эпителии кишечника
старых крыс
Среднее± ошибка среднего Необлученные Облученные
Оптическая плотность Площадь экспрессии Оптическая плотность Площадь экспрессии
М±ш 1,904±0,009 0,706±0,012 1,399±0,011* 0,506±0,01
Примечание: *- достоверное отличие от необлученных животных по показателю оптической плотности (р< 0,05).
Исследования G.V. Jones и соавторов [Jones G.V., Botham С.А., Clarke A.G. et al., 1998] продемонстрировали, что хромогранин А-позитивные клетки в эпителии кишечника крыс происходят из нервного валика и принадлежат нейроэпителиальной линии развития. Авторы высказали предположение, что кишечный эпителий взрослых животных всегда содержит резерв клеток, потенциально способных продуцировать нейропептиды и трансмиттерные факторы, требующиеся для роста и регенерации кишечного эпителия.
Было установлено достоверное увеличение экспрессии протеина Ki-67 у крыс контрольной группы по сравнению с облученными животными как по показателю оптической плотности, так и по показателю суммарной площади (рис. 6).
Изучение влияния радиации, как модели преждевременного старения, на экспрессию хромогранина А, предполагает сравнение разновозрастных групп крыс между собой.
Рис 6 . Показатель суммарной площади экспрессии хромогранина А в кишечном эпителии 24 месячных крыс * - достоверное отличие от облученных крыс (р<0,05).
На фоне снижения количества иммунопозитивных клеток наблюдалось усиление экспрессии, выраженное в достоверном увеличении показателя оптической плотности хромогранин А-положительных клеток в эпителии кишечника 24 месячных крыс. Эти результаты позволяют предположить, что с возрастом на фоне общей атрофии органа усиливается роль нейроэндокринной регуляции его функций за счет более активной экспрессии нейроэндокринных факторов.
Используемый непараметрический критерий сравнения двух независимых признаков Mann-Whitney подтвердил достоверность статистически значимых данных (р<0,05) оптической плотности (группа 1, 2 р=0,002; группа 1, 3 р=0,001; группа 1, 4 р=0,002; группа 2, 3 р=0,001; группа 2, 4 р=0,003; группа 3, 4 р=0,002) и площади экспрессии (группа 1, 2 р=0,002; группа 1, 3 р=0,001; группа 1, 4 р=0,001; группа 2, 3 р=0,001; группа 2, 4 р=0,002; группа 3, 4 р=0,002) по каждой сравниваемой группе.
Проведенные исследования показали, что уровень экспрессии маркера нейроэндокринной дифференцировки хромогранина А с возрастом снижается, причем под действием радиации, как индуктора старения площадь экспрессии значительно уменьшается, что свидетельствует о подавлении процессов синтеза и секреции гормонов в кишечном эпителии.
Из данных, полученных в ходе исследования выявить зависимость экспрессии одного маркера от другого не удалось. Это, возможно, свидетельствует о независимости изучаемых физиологических процессов (секреции гормонов и пролиферации клеток) друг от друга как при естественном, так и при индуцированном старении.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
Проведенные исследования показали, что эпителий кишечника является достаточно стабильной тканевой структурой, сохраняя необходимый пул клеток для обеспечения пищеварительных и общегомеостатических функций при старении.
Оба типа клеток - эпителиоциты и нейроэндокринные клетки проявляют возрастное усиление пролиферативной способности, увеличивая показатели экспрессии ключевых маркеров клеточного обновления в 1,5-2 раза.
Отсутствие корреляций между показателями пролиферативной активности эпителиоцитов и нейроэндокринных клеток свидетельствует о независимых механизмах функционирования обоих типов клеток слизистой оболочки кишечника при старении организма.
Полученные данные позволяют рассматривать эпителий кишечника млекопитающих, как тканевую структуру с высокой степенью репарационных способностей, обеспечивающих физиологические функции на адекватном физиологическом уровне, как при старении организма, так и при воздействии экологически неблагоприятных факторов.
ВЫВОДЫ
1. В кишечнике человека и экспериментальных животных (крыс) верифицирована популяция нейроэндокринных клеток, способных экспрессировать универсальный маркер гормональной секреции -хромогранин А.
2. Экспрессия хромогранина А достоверно повышается при естественном старении у человека, что отражает усиление роли нейроэндокринных клеток кишечника в обеспечении компенсаторно-приспособительных процессов, развивающихся в кишечнике при его возрастной инволюции.
3. Снижение экспрессии хромогранина А в кишечнике крыс при радиационном старении отражает повреждающее действие на эпителий ионизирующего излучения и нарушает локальную независимую регуляцию пищеварительных функций.
4. Повышение экспрессии ключевого фактора пролиферации протеина Ю-67 в кишечнике людей при естественном старении, по-видимому, связано с компенсаторными процессами, направленными на сохранение популяции клеток кишечника при развивающихся возраст-обусловленных инволютивных процессах.
5. При радиационном старении зарегистрировано снижение пролиферативных процессов в кишечнике крыс, при этом общая популяция
клеток, прошедших митоз увеличивается в 2 раза. Это свидетельствует о сохранении пролиферативного потенциала отдельных клеток, тогда как клеточное обновление популяции в целом снижается.
6. Увеличение популяции двух типов клеток слизистой оболочки кишечника (как эпителиоцитов, так и нейроэндокринных клеток), наблюдаемое при естественном и радиационном старении у млекопитающих свидетельствует об активном участии механизмов клеточного обновления, обеспечивающих относительную возрастную сохранность пищеварительных и общегомеостатических функций.
7. Отсутствие корреляций между пролиферативной активностью эпителиоцитов и нейроэндокринных клеток кишечника при естественном и радиационном старении свидетельствует об автономности функционирования этих клеточных популяций при развитии возрастных инволютивных изменений пищеварительного тракта.
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ
1. При патогистологическом исследовании гастро-, дуодено- и колонобиопсий у пациентов пожилого и старческого возраста рекомендуется проводить иммуногистохимические изучения с маркерами - хромогранином А и Ki-67 для анализа репарационных способностей эпителия.
2. При исследовании различной желудочно-кишечной патологии, связанной с возрастом, для оптимизации синтеза и секреции гормонов, продуцируемых желудочно-кишечным трактом, могут быть включены пептидные биорегуляторы в качестве гормонотропного подхода профилактики возраст-ассоциированной патологии желудочно-кишечного тракта.
СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ Статьи в журналах, включенных в Перечень ВАК Минобрнауки РФ
1. Гусельникова Е.А. Клеточное обновление в эпителии кишечника при старении/ Е.А. Гусельникова, С.С. Коновалов, В.О. Полякова // Успехи геронтологии. -2010.-Т.23,№ 1.-С. 71-75.
2. Гусельникова Е.А. Показатели клеточного обновления как маркеры старения кишечного эпителия/Е.А. Гусельникова, С.С. Коновалов//Научн. ведом. Белгородского государственного университета. Серия «Медицина. Фармация», Геронтология и гериатрия - 2011. -Т. 23(94) , №1/1. - С. 24-26.
3. Репаративное действие пептида Везугена на структуру двенадцатиперстной кишки в модели ускоренного старения/ Г.А. Рыжак, H.H. Севостьянова, Т.В. Кветная, A.B. Трофимов, Н.С. Линькова, Е.А. Гусельникова, JI.A. Грабежев, С.С. Коновалов//Научн. ведом. Белгородского государственного университета. Серия
«Медицина. Фармация», Геронтология и гериатрия - 2010. - Т. 22, № 12. - С. 5356.
Тезисы докладов
4. Гуселышкова Е.А. Иммуногистохимическая верификация хромограшша А в эпителии кишечника человека у людей разного возраста/Е.А. Гусельникова,
B.О. Полякова, С.С. Коновалов//Матер. Весенней геронтологичесой конференции. - Белгород. - 2009. - С. 26.
5. Гуселышкова Е.А. Оценка экспрессии протеина К67 как фактора, обеспечивающего сохранность клеточного пула у людей разного возраста / Е.А. Гусельникова, С.С. Коновалов, В.О. Полякова// Матер. Весенней геронтологичесой конф. - Белгород. - 2009. - С. 26-27.
6. Гуселышкова Е.А. Экспрессия протеина К67 в кишечнике человека в процессе старения / Е.А. Гусельникова, С.С. Коновалов, В.О. Полякова // Геронтологические чтения 2009.- Белгород- Новополодк. - 2009.-С. 7-8.
7. Гуселышкова Е.А. Экспрессия хромогранина А в эпителии кишечника человека в процессе старения / Е.А. Гусельникова, С.С. Коновалов, В.О. Полякова // Геронтологические чтения 2009. - Белгород-Новополоцк. - 2009. - С. 8-9.
8. Гуселышкова Е.А. Эспрессия протеина Ю-67 в кишечнике человека как фактора физиологической адаптации в процессе старения/Е.А. Гусельникова,
C.С. Коновалов, В.О. Полякова//Человек, спорт, здоровье. - Санкт-Петербург. -2009.-С. 126.
9. Гусельникова Е.А. Значение экспрессии хромогранина А в эпителии кишечника человека при изменении, физической активности в процессе старения/Е.А. Гусельникова, С.С. Коновалов, В.О. Полякова // Человек, спорт, здоровье. - Санкт-Петербург. - 2009. - С. 125.
10. Гусельникова Е.А. Возрастные изменения нейроэндокринной популяции клеток кишечника человека/Е.А. Гусельникова, В.О. Полякова// Фундаментальная и клиническая медицина. - Санкт-Петребург. - 2009. -С. 101-102.
11. Гусельникова Е.А Протеин Ю-67 как маркер сохранности клеточного пула при старении/Е.А. Гусельникова, В.О. Полякова// Фундаментальная и клиническая медицина. - Санкт-Петербург. - 2009. - С. 101-102.
Гусельником Екатерина Александровна ПРОЛИФЕРАТИВНАЯ АКТИВНОСТЬ ЭПИТЕЛИЯ КИШЕЧНИКА ПРИ ЕСТЕСТВЕННОМ И РАДИАЦИОННОМ СТАРЕНИГО/Автореф. дис. ... канд. биол. наук: 14.01.30.-СПб.,2010. - 19 с.
Подписано в печать 21.12.2010 г. Формат 60x84 1/16. Бумага офсетная. Печать офсетная. Усл. печ. л. 1,1. Тираж 100 экз. Заказ № 1860.
Отпечатано в ООО «Издательство "JIEMA"» 199004, Россия, Санкт-Петербург, В.О., Средний пр., д. 24 тел.: 323-30-50, тел./факс: 323-67-74 e-mail: izd_lema@mail.ru http://www.lemaprint.ru
Оглавление диссертации Гусельникова, Екатерина Александровна :: 2011 :: Санкт-Петербург
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.
ВВЕДЕНИЕ.
ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.
ГЛАВА 1. СОВРЕМЕННЫЕ ПРЕДСТАВЛЕНИЯ О КИШЕЧНИКЕ, КАК НЕЙРОИММУНОЭНДОКРИННОМ ОРГАНЕ.
1.1. Анатомия, особенности онтогенеза и гистофизиологии тонкого кишечника.
1.1.1. Анатомия тонкого кишечника.
1.1.2. Особенности онтогенетического развития кишечника.
1.1.3. Гистофизиология кишечника.
1.2. Функциональная роль нейроиммуноэндокринных взаимодействий в эпителии кишечника.
1.3. Возрастные изменения в кишечном эпителии.
1.4. Радиационное воздействие (как модель преждевременного старения) на кишечный эпителий.
1.5.0собенности экспрессии хромогранина А и протеина Ю-67 в эпителии кишечника.
1.5.1. Особенности экспрессии хромогранина А.
1.5.2. Особенности экспрессии протеина К1-67.
РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ.
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.
2.1. Характеристика исследуемого материала.
2.2. Иммуногистохимическое исследование.
2.3. Компьютерный анализ микроскопических изображений и статистическая обработка результатов.
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
3.1. Иммуногистохимическое исследование кишечного эпителия человека.
3.2. Иммуногистохимическое исследование кишечного эпителия облученных и необлученных крыс разных возрастных групп.
3.2.1 .Экспрессия Ш-67.
3.2.2. Экспрессия хромограиина А.
Введение диссертации по теме "Геронтология и гериатрия", Гусельникова, Екатерина Александровна, автореферат
Актуальность темы
Желудочно-кишечный тракт (ЖКТ) является основным органом, посредством которого организм осуществляет контакт с окружающей средой. Способность к клеточному обновлению двух основных типов клеток кишечного эпителия — эпителиоцитов и нейроэндокринных клеток является важным механизмом в обеспечении и поддержании физиологической функции кишечника при старении организма и при действии экологически неблагоприятных факторов [Анисимов В.Н., Хавинсон В.Х., 1991; Анисимов В.Н., Соловьев М.В., 1999; King М.А. et al., 1980].
Многочисленные данные свидетельствуют о том, что после аварии на Чернобыльской АЭС нарушения деятельности желудочно-кишечного тракта у лиц, проживающих на зараженных территориях, занимают одно из ведущих мест в патогенезе различных заболеваний [Ярилин A.A., 1996, 1997]. Многие из этих нарушений подобны тем, которые развиваются в организме человека в процессе старения. Поэтому поиск средств защиты от длительного действия облучения в относительно малых дозах [Зайнуллин В.Т. и др. 1999; Москалёв A.A., Зайнуллин В.Т., 2004; Beetz А., et al., 1997] имеет значение и для решения проблем геронтологии.
В настоящее время общепризнано, что ЖКТ является мощным эндокринным органом. В нем локализуется более 20 типов эндокринных клеток, в которых синтезируется более 30 гормонов локального и общего значения. Кишечный эпителий является одним из ключевых компартментов как иммунной, так и нейроэндокринной системы, и относится к числу наиболее радиочувствительных тканей с высоким пролиферативным потенциалом. Изучение сходства результатов при облучении организма человека малыми дозами ионизирующего излучения с последствиями естественного старения - активно развивающееся в настоящее время направление теоретических и клинических исследований [Анисимов В.Н. и др., 1992; Зайнуллин В.Т., Москалев A.A., 2000, 2001].
В этой связи, изучение процессов клеточного обновления эпителиоцитов и нейроэндокринных клеток кишечника при естественном старении и при действии ионизирующего излучения представляет большой интерес, поскольку известно, что облучение в сублетальных дозах является моделью радиационного старения, что позволяет оценить лучевые воздействия как экологический фактор, способствующий ускорению старения организма [Москалёв A.A., Зайнуллин В.Т., 2001; Москалев A.A., 2008].
Принимая во внимание указанные обстоятельства, изучение пролиферативной активности клеток обоих популяций желудочно-кишечного тракта (ЖКТ) как основного признака интенсивности процессов клеточного обновления при естественном и артифициальном (радиационном) старении, является актуальным и необходимым для разработки гормонотропных подходов профилактики возраст-ассоциированной патологии.
Цель и задачи исследования
Целью диссертационного исследования является изучение возрастных особенностей пролиферации эпителиоцитов и динамики популяции нейроэндокринных клеток кишечника при естественном и радиационном старении.
Для достижения указанной цели были поставлены и последовательно решены следующие задачи:
1. Провести иммуногистохимическую верификацию популяции нейроэндокринных клеток в кишечнике человека и экспериментальных животных (крыс).
2. Изучить динамику популяции нейроэндокринных клеток кишечника человека при естественном старении.
3. Изучить динамику популяции нейроэндокринных клеток кишечника крыс в модели радиационного старения.
4. Сравнить показатели возрастной динамики пролиферативной активности клеток кишечного эпителия у человека при старении и у крыс в модели радиационного старения.
5. Выявить корреляции между динамикой популяции нейроэндокринных клеток и пролиферативной активностью эпителиоцитов в кишечнике млекопитающих при естественном и радиационном старении.
Научная новизна
В работе впервые изучена возрастная динамика изменения популяций клеток кишечного эпителия человека при старении. Установлено, что экспрессия фактора пролиферации Кл-67 в стенках сосудов, в эпителиальных клетках и в соединительно-тканных клетках кишечника достоверно изменяется с возрастом. Полученные результаты указывают на то, что протеин Кл-67 вовлечен в поддержание функций желудочно-кишечного тракта при старении.
Впервые зарегистрированы корреляции между усилением экспрессии хромогранина А в нейроэндокринных клетках кишечника и усилением их пролиферативной активности. Установлено снижение числа апудоцитов, экспрессирующих хромогранин А, у пожилых людей, людей старческого возраста и долгожителей, что свидетельствует о том, что роль кишечника как нейроэндокринного органа с возрастом снижается. Уменьшение локальной секреции гормонов в свою очередь 7 играет важную роль в патогенезе заболеваний желудочно-кишечного тракта, ассоциированных с возрастом.
Получены достоверные данные и выявлены корреляции между пролиферативной и нейроэндокринной активностью в эпителии кишечника крыс при воздействии ионизирующей радиации (модель старения) в сублетальных дозах с последующей экстраполяцией полученных данных на эпителий кишечника человека. Выявлено, что уровень экспрессии маркера Кл-67 у молодых и старых крыс различен. Экспрессия Кь67 с возрастом снижается, особенно по показателю площади экспрессии, что отражает тотальное подавление процессов клеточного обновления в кишечном эпителии при радиационно смоделированном старении.
Практическая значимость
Впервые зарегистрирована возрастная динамика изменения популяций клеток кишечного эпителия при естественном и радиационном старении. Результаты исследования свидетельствуют о важной роли кишечника не только как пищеварительного, но и как эндокринного органа, обеспечивающего локальную секрецию гормонов, влияющих на процессы клеточного обновления в эпителии желудочно-кишечного тракта, что в свою очередь играет важную роль в патогенезе заболеваний желудочно-кишечного тракта, ассоциированных с возрастом. Полученные данные открывают перспективы для разработки гормонотропных подходов профилактики возраст-ассоциированной патологии желудочно-кишечного тракта.
Положения, выносимые на защиту
1. Экспрессия универсального маркера гормональной секреции хромогранина А в эпителии кишечника человека и крыс повышается при естественном старении.
2. В кишечном эпителии человека и экспериментальных животных выявлен ключевой фактор пролиферации протеин Кл-67, экспрессия которого повышается при естественном старении.
3. Повышение экспрессии хромогранина А и протеина Кл-67 при естественном старении отражает компенсаторно-приспособительные процессы, развивающиеся в кишечнике при его инволюции.
4. Радиационное старение способствует снижению экспрессии хромогранина А в кишечнике крыс, что отражает повреждающее действие на эпителий ионизирующего излучения и нарушает локальную независимую регуляцию пищеварительных функций.
5. При радиационном старении зарегистрировано усиление пролиферативных процессов в кишечнике крыс, при этом общая популяция клеток, прошедших митоз увеличивается в 2 раза.
6. Зарегистрировано отсутствие корреляций между пролиферативной активностью эпителиоцитов и нейроэндокринных клеток кишечника при естественном и радиационном старении, что свидетельствует об автономности функционирования этих клеточных популяций при развитии возрастных инволютивных изменений пищеварительного тракта.
Связь с научно-исследовательской работой Института
Диссертационная работа является темой, выполняемой по основному плану НИР Санкт-Петербургского института биорегуляции и геронтологии СЗО РАМН.
Структура и объем диссертации
Диссертация состоит из введения, 3 глав, выводов и указателя литературы. Текст диссертации изложен на 105 страницах, содержит 8 таблиц, иллюстрирован 30 рисунками. Список литературы содержит 175 источников, из которых отечественных — 46.
Заключение диссертационного исследования на тему "Пролиферативная активность эпителия кишечника при естественном и радиационном старении"
выводы
1. В кишечнике человека и экспериментальных животных (крыс) верифицирована популяция нейроэндокринных клеток, способных экспрессировать универсальный маркер гормональной секреции — хромогранин А.
2. Экспрессия хромогранина А достоверно повышается при естественном старении у человека, что отражает усиление роли нейроэндокринных клеток кишечника в обеспечении компенсаторно-приспособительных процессов, развивающихся в кишечнике при его возрастной инволюции.
3. Снижение экспрессии хромогранина А в кишечнике крыс при радиационном старении отражает повреждающее действие на эпителий ионизирующего излучения и нарушает локальную независимую регуляцию пищеварительных функций.
4. Повышение экспрессии ключевого фактора пролиферации протеина Кл-67 в кишечнике людей при естественном старении, по-видимому, связано с компенсаторными процессами, направленными на сохранение популяции клеток кишечника при развивающихся возраст-обусловленных инволютивных процессах.
5. При радиационном старении зарегистрировано снижение пролиферативных процессов в кишечнике крыс, при этом общая популяция клеток, прошедших митоз увеличивается в 2 раза. Это свидетельствует о сохранении пролиферативного потенциала отдельных клеток, тогда как клеточное обновление популяции в целом снижается.
6. Увеличение популяции двух типов клеток слизистой оболочки кишечника (как эпителиоцитов, так и нейроэндокринных клеток), наблюдаемое при естественном и радиационном старении у млекопитающих свидетельствует об активном участии механизмов клеточного обновления, обеспечивающих относительную возрастную сохранность пищеварительных и общегомеостатических функций.
7. Отсутствие корреляций между пролиферативной активностью эпителиоцитов и нейроэндокринных клеток кишечника при естественном и радиационном старении свидетельствует об автономности функционирования этих клеточных популяций при развитии возрастных инволютивных изменений пищеварительного тракта.
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ
1. При патогистологическом исследовании гастро-, дуодено- и колонобиопсий у пациентов пожилого и старческого возраста рекомендуется проводить иммуногистохимические изучения с маркерами - хромогранином А и Кь67 для анализа репарационных способностей эпителия.
2. При исследовании различной желудочно-кишечной патологии, связанной с возрастом, для оптимизации синтеза и секреции гормонов, продуцируемых желудочно-кишечным трактом, могут быть включены пептидные биорегуляторы в качестве гормонотропного подхода профилактики возраст-ассоциированной патологии желудочно-кишечного тракта.
Список использованной литературы по медицине, диссертация 2011 года, Гусельникова, Екатерина Александровна
1. Автандилов Г.Г. Медицинская морфометрия. Руководство. М.: Медицина, 1990. 384 с.
2. Акоев И.Г. Проблемы постлучевого восстановления. М.: Атомиздат. -1970.- 156 с.
3. Анисимов В.Н., Морозов В.Г., Хавинсон В.Х. Увеличение продолжительности жизни и снижение частоты опухолей у мышей СЗН/Sn под влиянием полипептидных факторов тимуса и эпифиза // Докл.АН СССР. 1982. - Т. 263, № 3. - С. 742-745.
4. Анисимов В.Н., Хавинсон В.Х. Влияние полипептидного препарата эпифиза на продолжительность жизни и частоту спонтанных опухолей у старых самок крыс // Докл.АН СССР. 1991. - Т. 319, № 1. - С. 250-253.
5. Анисимов В.Н., Мирецкий Г.И., Морозов В.Г. Павельева И.А., Хавинсон В.Х. Влияние синтетического иммуномодулятора тимогена на радиационный канцерогенез у крыс // Вопр.онкологии. 1992. - Т. 38, №4. - С. 451-458.
6. Анисимов В.Н., Прокопенко В.М., Хавинсон В.Х. Мелатонин и эпиталамин угнетают процесс свободнорадикального окисления у крыс // Докл.АН. 1995. - Т. 343, № 4. - С. 557-559.
7. Анисимов В.Н., Соловьев М.В. Эволюция концепций в геронтологии. СПб., 1999.- 130 с.
8. Ашмарин И.П., Обухова М.Ф. Регуляторные пептиды. Функционально-непрерывная совокупность // Биохимия. 1986. - Т. 51,№4.-С. 531-545.
9. Ашмарин И.П., Каменская М.А. Нейропептиды в синаптической передаче // Итоги науки и техники. ВИНИТИ. Серия «Физиология человека и животных». М., 1988. Т. 34. - С. 184.
10. Бабаева А.Г. Кроветворные и лимфоидные органы. В кн.: Структурные основы адаптации нарушенных функций: Руководство / Под ред. Д.С.Саркисова. М.: Медицина, 1987. С. 328-342.
11. П.Берлин Л.Б., Лисочкин Б.Г., Сафонов Г.И., Успенский В.М. Атлас патологической гистологии слизистой оболочки желудка и двенадцатиперстной кишки. М.: Медицина, 1975. 167 с.
12. Гилберт С. Биология развития, Том I. М: Мир, 1993. 228 с.
13. Гинкул Л.Б., Александрова С.А., Швембергер И.Н. Белки, принимающие участие в FAS-опосредованном апоптозе между опухолевыми клетками и лимфоцитами при их сокультивировании // Вопросы онкологии. 2007. - Т. 53, № 2. - С. 185-193
14. Гусейнова С.Т., Гусейнов Т.С. Анатомия структур слизистой оболочки тонкой кишки белых крыс // Современные наукоемкие технологии. Серия "Медико-биологические науки". 2010. - №8. -С.140.
15. Зайнуллин В.Г., Москалев A.A., Шапошников М.В. Радиационная биология //Радиоэкология. 1999. - Т. 39, № 1. - С. 49.
16. Зайнуллин В.Г., Москалев A.A. Изменчивость продолжительности жизни имаго дрозофилы в условиях хронического облучения в малых дозах радиации. Радиационная биология // Радиоэкология. 2000. - Т. 40, №5.-С. 281.
17. Зайнуллин В.Г., Москалев A.A. Изменчивость продолжительности жизни имаго дрозофилы в условиях хронического облучения в малых дозах радиации. Радиационная биология // Радиоэкология. 2000. - Т. 40, №5.-С. 281.
18. Зайнуллин В.Т., Москалев A.A. Радиационное изменение продолжительности жизни лабораторных линий Drosophila melanogaster // Генетика. 2001. - Т. 37, № 9. с. 1304.
19. ЗмушкоЕ.И., Белозеров Е.С., Митин Ю.А. Клиническаяиммунология.-СПб.: Питер, 2001.-574 с.
20. Зуссман М. Биология развития. М: Мир, 1977. 238 с.
21. Кветной И.М., Южаков В.В. Апудоциты и тучные клетки желудочно-кишечного тракта: иммуногистохимическая и ультраструктурная идентификация // Архив патологии. 1987. - Т. 49, № 7. - С. 77.
22. Кветной И.М., Комаров Ф.И., Осадчук A.M., Осадчук М.А. Неспецифический язвенный колит. Издательство: МИА, 2008. — 256 с.
23. Коноплянников А.Г. Медицинская радиология и радиационная безопасность. 1987. - Т. 12, № 1. - С. 53.
24. Коноплянников А.Г. Молекулярные и клеточные механизмы поздних лучевых поражений // Радиационная биология. Радиоэкология. 1997. -Т. 37, №4.-С. 621.
25. Кудряшов Ю.Б. О химической защите от ионизирующей радиации низкой интенсивности // Радиационная биология. Радиоэкология. -1997.-Т. 37, №4.-С. 673.
26. Кудряшов Ю.Б., Гончаренко E.H., Антонова C.B., Ахалая М.Я., Байжуманов A.A. Исследование действия сублетальных доз ионизирующих излучений на эндогенный фон радиорезистентности // Радиационная биология. Радиоэкология. 1997. - Т. 37, № 3. - С. 372376.
27. Кудряшов Ю.Б. Основные принципы в радиобиологии //
28. Радиационная биология. Радиоэкология. — 2001. Т. 41, №5. - С. 531548.
29. Кудряшов Ю.Б. Радиационная биофизика (ионизирующие излучения) // Издательство : Физматлит, 2004. 446 с.
30. Лушников Е.Ф., Абросимов А.Ю. Гибель клетки (апоптоз).-М.: Медицина, 2001.-190 с.
31. Москалёв A.A., Зайнуллин В.Г. Изучение роли апоптической гибели клетки в радиоиндуцированном старении у Drosophila melanogaster // Радиационная биология. Радиоэкология. 2001. - Т. 41, № 6. - С. 650.
32. Москалёв A.A., Зайнуллин В.Г. Возрастная динамика активности имаго после хронического облучения личинок у линий дрозофилы с нарушениями регуляции апоптоза // Генетика. 2004. - Т. 40, № 2. - С. 277.
33. Москалев A.A. Генетические исследования влияния ионизирующей радиации в малых дозах на продолжительность жизни // Радиационная биология. Радиоэкология. 2008. - Т. 48, № 2. - С. 139145.
34. Ноздрачев А. Д., Баженов Ю. И., Баранникова И. А., Батуев А. С. и др. Начала физиологии. СПб, 2001. 1088 с.
35. Ноздрачев А.Д., Филиппова Л.В., Шерман Н.О., Панасюк Н.В. Интерлейкин-lß оказывает стимулирующее действие на интероцепторы тонкой кишки // Доклады Академии наук. 2001. - Т. 376, № 1.-С. 124.
36. Осадчук М.А., Козлова И.В. Болезни тонкой и толстой кишки. Саратов: СГМУ, 1998. 192 С.
37. Осадчук М.А., Горемыкин В.И., Козлова И.В. Гастроэнтерология. Саратов: СГМУ, 1998. 406 С.
38. Пестерова В.В., Моисеева В.П. Применение тималина у больного с иммунодефицитным состоянием после тимэктомии // Клинич. медицина. 1983. - Т. 61, № 6. - С.36-38.
39. Проскуряков С .Я., Коноплянников А.Г., Верховский Ю.Г., Ульянова Л.П. Модификаторы выживаемости гибели стволовых клеток эпителия кишечника и танатогенные механизмы // Радиационная биология. Радиоэкология. 2008. - Т. 48, № 6. - С. 721-729.
40. Чернышёва М.П. Гормоны животных: введение в физиологическую эндокринологию.-СПб.: Глаголъ, 1995. 293 с.
41. Эллидини В.Н., Аникеева Н.В., Максимова H.A. Практическая иммуноцитохимия. СПб. — 2002. - 35 с.
42. Южаков В.В., Райхлин Н.Т., Кветной И.М. Современные методы изучения функциональной морфологии эндокринных клеток // Архив патологии. 1996. - Т. 58, № 2. - С. 21.
43. Ярилин A.A. Апоптоз как адаптивная реакция на стресс-воздействие // Иммунология. 1996. - Т 2, № 6. - С. 10.
44. Ярилин A.A., Беляков И.М. Тимус как орган эндокринной системы // Иммунология. 1996. - Т. 3, № 1. - С. 4.
45. Ярилин A.A. Апоптоз и его место в иммунных процессах // Иммунология. 1996. - Т. 4, № 5. - С. 7.
46. Ярилин A.A. Цитокиновая сеть нейтрофилов при воспалении // Иммунология. 1997. - Т. 5, № 54. - С. 7.
47. Al-Rubeai M., Singh R.P. Apoptosis in cell culture // Curr. Opin. Biotech. 1998.-Vol. 9.-P. 152-156.
48. Baudin E., Bidart J.M., Bachelot A., Ducreux M., Elias D., Ruffié P., Schlumberger M. Impact of chromogranin A measurement in the work-up of neuroendocrine tumors // Ann. Oncol. 2001. - Vol. 12 Suppl 2. - P. 7982.
49. Baum B, Meneses F, Kleinschmidt S, Nolte I, Hewicker-Trautwein M.
50. Age-related histomorphologic changes in the canine gastrointestinal tract: a histologic and immunohistologic study // World J Gastroenterol. -2007. Vol. 13, N 1. -P. 152-157.
51. Beetz A., Messer G., Oppel T., van Beuningen D., Peter R.U., Kind P. Induction of interleukin 6 by ionizing radiation in a human epithelial cell line: control by corticosteroids // Int. J. Radiat. Biol. 1997. - Vol. 72, N 1. -P. 33-43.
52. Borisov A.V. Resent data on morphology of the lymph vessels of the mesentery of the small intestine in man // Arkh. Anat. Gistol. Embriol. -1958.-Vol. 35, N1.-P. 75-81.
53. Buatti J.M., Harari P.M., Leigh B.R., Cassady J.R. Radiation-induced angiosarcoma of the breast. Case report and review of the literature // Am. J. Clin. Oncol. 1994. - Vol. 17, N 5. - P. 444-447.
54. Cairnie A.B., Lamerton L.F., Steel G.G. Cell proliferation studies in the intestinal epithelium of the rat. II. Theoretical aspects // Exp. Cell Res. -1965. Vol. 39, N 2. - P. 539-553.
55. Cairnie A.B., Lamerton L.F., Steel G.G. Cell proliferation studies in the intestinal epithelium of the rat. I. Determination of the kinetic parameters // Exp. Cell Res. 1965. - Vol. 39, N 2. - P. 528-538.
56. Cardell S., Sander B., Möller G. Helper interleukins are produced by both CD4 and CD8 splenic T cells after mitogen stimulation // Eur. J. Immunol. 1991. - Vol. 21, N 10. - P. 2495-2500.
57. Cretich M., Longhi R., Corti A., Damin F., Di Carlo G., Sedini V., Chiari M. Epitope mapping of human chromogranin A by peptide microarrays // Methods Mol. Biol. 2009. - Vol. 570. - P. 221-232.
58. Darlington D., Rogers A.W. Epithelial lymphocytes in the small intestine of the mouse // J. Anat. 1966. - Vol. 100, N 4. - P. 813-830.
59. Deschenes C, Alvarez L, Lizotte ME, Vezina A, Rivard N. The nucleocytoplasmic shuttling of E2F4 is involved in the regulation of human intestinal epithelial cell proliferation and differentiation. // J Cell Physiol. 2004. Vol. 199, N 2. - P. 262-273.
60. Dondua A.K., Efremov V.l., Krichinskaya E.B., Nikolaeva LP. Mitotic index, duration of mitosis and proliferation activity in the early phases of the development of the chick embryo. Acta Biol. Acad. Sei. Hung. 1966. -Vol. 17, N2.-P. 127-143.
61. Dubois A., Walker R.I. Prospects for management of gastrointestinal injury associated with the acute radiation syndrome // Gastroenterology. -1988. Vol. 95, N 2. - P. 500-507.
62. Deftos L.J. Chromogranin A: its role in endocrine function and as an endocrine and neuroendocrine tumor marker // Endocr. Rev. 1991. - Vol. 12, N2. - P. 181-187.
63. El-Salhy M, Sandstrom O, Násstrom E, Mustajbasic M, Zachrisson S. Application of computer image analysis in endocrine cell quantification // Histochem J. 1997. Vol. 29, N 3. - P. 249-256.
64. Endl E., Gerdes J. The Ki-67 protein: fascinating forms and an unknown function // Exp. Cell Res. 2000. - Vol. 257, N 2. - P. 231-237.
65. Endl E., Kausch I., Baack M., Knippers R., Gerdes J., Scholzen T. The expression of Ki-67, MCM3, and p27 defines distinct subsets of proliferating, resting, and differentiated cells // J. Pathol. 2001. - Vol. 195, N4. - P. 457-462.
66. Feldman S.A., Eiden L.E. The chromogranins: their roles in secretion from neuroendocrine cells and as markers for neuroendocrine neoplasia // Endocr. Pathol. 2003. - Vol. 14, N 1. - P. 23.
67. Ferrari L., Seregni E., Martinetti A., Van Graafeiland B., Nerini-Molteni S., Botti C., Artale S., Cresta S., Bombardieri E. Chromogranin A measurement in neuroendocrine tumors // Int. J. Biol. Markers. 1998. -Vol. 13, N 1. - P. 3-9.
68. Ferrari L., Seregni E., Bajetta E., Martinetti A., Bombardieri E. The biological characteristics of chromogranin A and its role as a circulatingmarker in neuroendocrine tumours // Anticancer Res. 1999. - Vol. 19, N 4.-P. 3415-3427.
69. Fujiyama Y, Ishizuka I, Koyama S. Histochemical diagnosis of short segment Barrett's esophagus // Nippon Rinsho. 2005. Vol. 63, N 8. - P. 1420-1426.
70. Galli M.C., Smyth M.J., Young H.A., Reynolds C.W., Ortaldo J.R. Differential regulation of interleukin-1 gene expression in human CD3-large granular lymphocytes // Cell Immunol. 1990. - Vol. 131, N 1. - P. 184-190.
71. Gartner L.P, Hiatt J.M. Color Textbook of Histology, 3th ed., The McGraw-Hill Companies, 2006. 592 p.
72. Gerdes J. Ki-67 and other proliferation markers useful for immunohistological diagnostic and prognostic evaluations in human malignancies // Semin. Cancer Biol. 1990. - Vol. 1, N 3. - P. 199-206.
73. Glinicki P., Jeske W. Chromogranin A (CgA) characteristic of the currently available laboratory methods and conditions which can influence the results //Endokrynol. Pol. - 2009. - Vol. 60, N 5. - P. 415-419.
74. Gordon J.R., Burd P.R., Galli S.J. Mast cells as a source of multifunctional cytokines // Immunol. Today. 1990. - Vol. 11, N 12. - P. 458-464.
75. Gorard D.A., Farthing M.J. Intestinal motor function in irritable bowel syndrome // Dig. Dis. 1994. - Vol. 12, N 2. - P. 72-84.
76. Grad B., Stevens C.E., Leblond C.P. The localization of radio-phosphorus in soft tissues with resulting destruction // Acta Unio. Int. Contra. Cancrum. 1952. - Vol. 7, N 5. - P. 834-838.
77. Grad B., Stevens C.E. Histological changes produced by a single large injection of radioactive phosphorus (P32) in albino rats and in C3H mice // Cancer Res. 1950. - Vol. 10, N 5. - P. 289-296.
78. Guy-Grand D., Dy M., Luffau G., Vassalli P. Gut mucosal mast cells. Origin, traffic, and differentiation // J. Exp. Med. 1984. - Vol. 160, N 1. -P. 12-28.
79. Hausken T. The role of chromogranin A in irritable bowel syndrome // J. Gastrointestin. Liver Dis. 2009. - Vol. 18, N 2. - P. 259.
80. Hendy G.N., Bevan S., Mattei M.G., Mouland A.J. Chromogranin A // Clin. Invest. Med. 1995. - Vol. 18, N 1. - P. 47-65.
81. Helle K.B. The granin family of uniquely acidic proteins of the diffuse neuroendocrine system: comparative and functional aspects // Biol. Rev. Camb. Philos. Soc. 2004. - Vol. 79, N 4. - P. 769-794.
82. Helle K.B., Corti A., Metz-Boutigue M.H., Tota B. The endocrine role for chromogranin A: a prohormone for peptides with regulatory properties // Cell Mol. Life Sci. 2007. - Vol. 64, N 22. - P. 2863-2886.
83. Hofer D, Drenckhahn D. Cytoskeletal markers allowing discrimination between brush cells and other epithelial cells of the gut including enteroendocrine cells.// Histochem Cell Biol. 1996. Vol. 105, N 5. - P. 405-412.
84. Horsch D, Fink T, Goke B, Arnold R, Buchler M, Weihe E. Distribution and chemical phenotypes of neuroendocrine cells in the human anal canal // Regul Pept. 1994. Vol. 54, N 2-3. - P. 527-542.
85. Horn L.C., Hentschel B., Meinel A., Alexander H., Leo C. Cyclooxygenase-2 expression, Ki-67 labeling index, and perifocal neovascularization in endometriotic lesions // Ann. Diagn. Pathol. 2009. -Vol. 13, N6.-P. 373-377.
86. Ivanov E.V., Nemiro E.A., Kal'nitskii S.A., Gubatova D.I., Balode G.I. Patient radiation safety in performing electroroentgenography // Gig. Sanit. 1981.-Vol. 11.-P. 66-68.
87. Johannessen A.L., Torp S.H. The clinical value of Ki-67/MIB-l labeling index in human astrocytomas // Pathol. Oncol. Res. 2006. - Vol. 12, N 3. -P. 143-147.
88. Kasprzak A., Zabel M., Biczysko W. Selected markers (chromogranin A, neuron-specific enolase, synaptophysin, protein gene product 9.5) in diagnosis and prognosis of neuroendocrine pulmonary tumours // Pol. J. Pathol. 2007. - Vol. 58, N 1. - P. 23-33.
89. Kidd M., Modlin I.M., Mane S.M., Camp R.L., Shapiro M.D. Q RT-PCR detection of chromogranin A: a new standard in the identification of neuroendocrine tumor disease // Ann. Surg. 2006. - Vol. 243, N 2. - P. 273-280.
90. Kim SJ, Cheung S, Hellerstein MK. Isolation of nuclei from label-retaining cells and measurement of their turnover rates in rat colon. // Am J Physiol Cell Physiol. 2004. Vol. 286, N 6. - P. 1464-1473.
91. King M.A., Casarett G.W., Weber D.A., Burgener F.A., O'Mara R.E., Wilson G.A. A study of irradiated bone. III. Scintigraphic and radiographic detection of radiation-induced osteosarcomas // J. Nucl. Med. 1980. - Vol. 21, N5. - P. 426-431.
92. King M.A., Weber D.A., Casarett G.W., Burgener F.A., Corriveau O. A study of irradiated bone. Part II. changes in Tc-99m pyrophosphate bone imaging//J. Nucl. Med. 1980. - Vol. 21, N 1. - P. 22-30.
93. Khavinson V.K., Popuchiev V.V., Kvetnoii I.M., Yuzhakov V.V., Kotlova L.N. Regulating Effect of Epithalone on Gastric Endocrine Cells in Pinealectomized Rats // Bulletin of Experimental Biology and Medicine. 2000. - Vol. 130, N 12. - P. 1169-1171.
94. Kozina L.S., Arutiunian A.V., Stvolinskil S.L., Khavinson V.K. Biological activity of regulatory peptides in model experiments in vitro // Adv. Gerontol. 2008. - Vol. 21, N 1. - P. 68-73.
95. Kreitz S., Fackelmayer F.O., Gerdes J., Knippers R. The proliferation-specific human Ki-67 protein is a constituent of compact chromatin // Exp. Cell Res. 2000. - Vol. 261, N 1. - P. 284-292.
96. Kudryashov I.E., Ivanova E.M. Investigation of the influence of a vasopressin analog on the efficiency of glutamatergic transmission in the hippocampus // Neurosci. Behav. Physiol. 1996. - Vol. 26, N 5. - P. 441444.
97. Kvetnoy I.M., Yuzhakov V.V. Extrapineal melatonin: advances in microscopical identification of hormones in endocrine and nonendocrine cells // Journal of Micronutrient Analysis. 1993. - Vol. 5, N 21. - P. 19.
98. Kvetnoy I.M., Yuzhakov V.V., Raikhlin N.T. APUD-cells: modern strategy of morphofunctional analysis // Journal of Micronutrient Analysis. 1997.-Vol. 46, N 1. - P. 25.
99. Landberg G., Tan E.M., Roos G. Flow cytometric multiparameter analysis of proliferating cell nuclear antigen/cyclin and Ki-67 antigen: a new view of the cell cycle // Exp. Cell Res. 1990. - Vol. 187, N 1. - P. 111-118.
100. Leblond J., Mignet N., Leseurre L., Largeau C., Bessodes M., Scherman D., Herscovici J. Design, synthesis, and evaluation of enhanced
101. DNA binding new lipopolythioureas // Bioconjug. Chem. 2006. - Vol. 17, N5. - P. 1200-1208.
102. Lloyd K.O., Yin B.W., Kudryashov V. Isolation and characterization of ovarian cancer antigen CA 125 using a new monoclonal antibody (VK-8): identification as a mucin-type molecule // Int. J. Cancer. 1997. - Vol. 71, N5. - P. 842-850.
103. Loh Y.P., Kim T., Rodriguez Y.M., Cawley N.X. Secretory granule biogenesis and neuropeptide sorting to the regulated secretory pathway in neuroendocrine cells // J. Mol. Neurosci. 2004. - Vol. 22, N 1-2. - P. 6371.
104. Loran M.R., Crocker T.T. Population dynamics of intestinal epithelia in the rat two months after partial resection of the ileum // J. Cell Biol. -1963. Vol. 19. - P. 285-291.
105. Malaguarnera M., Vacante M., Fichera R., Cappellani A., Cristaldi E., Motta M. Chromogranin A (CgA) serum level as a marker of progression in hepatocellular carcinoma (HCC) of elderly patients // Arch. Gerontol. Geriatr. 2009. - Vol. 45. - P. 18.
106. Modlin I.M., Kidd M., Pfragner R., Eick G.N., Champaneria M.C. The functional characterization of normal and neoplastic humanenterochromaffm cells // J. Clin. Endocrinol. Metab. 2006. - Vol. 91, N 6.- P. 2340-2348.
107. Monteleone G., Holloway J., Salvati V.M., Pender S.L., Fairclough P.D., Croft N., MacDonald T.T. Activated STAT4 and a functional role for IL-12 in human Peyer's patches // J. Immunol. 2003. - Vol. 170, N 1.- P. 300-307.
108. Montero-Hadjadje M., Vaingankar S., Elias S., Tostivint H., Mahata S.K., Anouar Y. Chromogranins A and B and secretogranin II: evolutionary and functional aspects // Acta. Physiol. 2008. - Vol. 192, N 2. - P. 309-324.
109. Nishimura R., Osako T., Okumura Y., Hayashi M., Arima N. Clinical significance of Ki-67 in neoadjuvant chemotherapy for primary breastcancer as a predictor for chemosensitivity and for prognosis // Breast Cancer. 2009. - Vol. 65, N 21. - P. 124-129.
110. Nobels F.R., Kwekkeboom D.J., Bouillon R., Lamberts S.W. Chromogranin A: its clinical value as marker of neuroendocrine tumours // Eur. J. Clin. Invest. // 1998. Vol. 28, N 6. - P. 431-440.
111. Ozawa H., Takata K. The granin family—its role in sorting and secretory granule formation // Cell Struct. Funct. 1995. - Vol. 20, N 6. -P. 415-420.
112. Parwaresch M.R., Horny H.P., Lennert K. Tissue mast cells in health and disease // Pathol. Res. Pract. 1985. - Vol. 179, N 4-5. - P. 439-461.
113. Perlstein R.S., Mehta N.R., Mougey E.H., Whitnall M.H., Neta R. Whole-body irradiation transiently diminishes the adrenocorticotropin response to recombinant human interleukin-1 alpha // Radiat. Res. 1995. -Vol. 141, N3. - P. 336-341.
114. Quinlan JM, Yu WY, Hornsey MA, Tosh D, Slack JM. In vitro culture of embryonic mouse intestinal epithelium: cell differentiation and introduction of reporter genes. // BMC Dev Biol. 2006. - Vol. 25, P. 6 -24.
115. Roa E.I., Elorza D.X., Lantadilla H.S., Ibacache S.G., de Aretxabala U.X. Immunohistochemical expression of Ki-67 as a marker of proliferation in gallbladder mucosa samples with or without cancer // Rev. Med. Chil. 2009. - Vol. 137, N 7. - P. 881-887.
116. Rorstad O. Prognostic indicators for carcinoid neuroendocrine tumors of the gastrointestinal tract // J. Surg. Oncol. 2005. - Vol. 89, N 3. - P. 151-160.
117. Sandstrôm O, El-Salhy M. Ageing and endocrine cells of human duodenum. // Mech Ageing Dev. 1999. Vol. 108, N 1. - P. 39-48.
118. Satoh S., Toda S., Narikawa K., Watanabe K., Tsuda K., Kuratomi Y., Sugihara H., Inokuchi A. Spindle epithelial tumor with thymus-like differentiation (SETTLE): youngest reported patient // Pathol. Int. 2006. -Vol. 56, N9.-P. 563-567.
119. Scholzen T., Gerdes J. The Ki-67 protein: from the known and the unknown // J. Cell Physiol. 2000. - Vol. 182, N 3. - P. 311-322.
120. Sedgwick D.M., Howard G.C., Ferguson A. Pathogenesis of acute radiation injury to the rectum. A prospective study in patients // Int. J. Colorectal. Dis. 1994. - Vol. 9, N 1. - P. 23-30.
121. Sedgwick D.M., Ferguson A. Dose-response studies of depletion and repopulation of rat intestinal mucosal mast cells after irradiation // Int. J. Radiat. Biol. 1994. - Vol. 65, N 4. - P. 483-495.
122. Seigneurin D., Guillaud P. Ki-67 antigen, a cell cycle and tumor growth marker//Pathol. Biol. 1991. - Vol. 39, N 10. - P. 1020-1028.
123. Seregni E., Ferrari L., Bajetta E., Martinetti A., Bombardieri E. Clinical significance of blood chromogranin A measurement in neuroendocrine tumours // Ann. Oncol. 2001. Vol. 12 Suppl 2. - P. 69-72.
124. Shiraishi J., Nomori H., Orikasa H., Mori T., Yamazaki K. Atypical thymoma (WHO B3) with neuroendocrine differentiation: report of a case // Virchows Arch. 2006. - Vol. 449, N 2. - P. 234-237.
125. Soffer E.E. Small bowel motility: ready for prime time? // Curr. Gastroenterol. Rep. 2000. - Vol. 2, N 5. - P. 364-369.
126. Talghini S., Halimi M., Baybordi H. Expression of P27, Ki67 and P53 in squamous cell carcinoma, actinic keratosis and Bowen disease // Pak. J. Biol. Sci. 2009. - Vol. 12, N 12. - P. 929-933.
127. Taupenot L., Harper K.L., O'Connor D.T. The chromogranin-secretogranin family // N. Engl. J. Med. 2003. - Vol. 348, N 12. - P. 1134-1149.
128. Terry N.H., Travis E.L. The influence of bone marrow depletion on intestinal radiation damage // Int. J. Radiat. Oncol. Biol. Phys. 1989. -Vol. 7, N 3. - P. 569-573.
129. Terry N.H., Tucker S.L., Travis E.L. Time course of loss of residual radiation damage in murine skin assessed by retreatment // Int. J. Radiat. Biol. 1989. - Vol. 55, N 2. - P. 271-283.
130. Thomson A.B., Wild G. Small bowel review: Part II // Can. J. Gastroenterol. 1997. - Vol. 11, N 7. - P. 607-618.
131. Thrasher J.D., Greulich R.C. The duodenal progenitor population. I. Age related increase in the duration of the cryptal progenitor cycle // J. Exp. Zool. 1965. - Vol. 59, N 1. - P. 39-46.
132. Thrasher J.D., Greulich R.C. The duodenal progenitor population. II. Age related changes in size and distribution // J. Exp. Zool. 1965. - Vol. 159, N3. - P. 385-396.
133. Thrasher J.D., Greulich R.C. The duodenal progenitor population. 3. The progenitor cell cycle of principal, goblet and paneth cells // J. Exp. Zool. 1966. - Vol. 161, N 1. - P. 9-19.
134. Trier J.S. Enterochromaffin cells of the small intestine // Gastroenterology. 1968. - Vol. 54, N 4. - P. 667.
135. Trier J.S. Cell migration in the intestine // Gastroenterology. 1968. -Vol. 54, N 5. - P. 989-990.
136. Troughton W.D., Trier J.S. Paneth and goblet cell renewal in mouse duodenal crypts // J. Cell Biol. 1969. - Vol. 41, N 1. - P. 251-268.
137. Tyazhelova V.G. Oscillations in blood cells as a consequence of suppressed bone marrow cell production // Cell Tissue Kinet. 1987. -Vol. 20, N 6. - P. 539-549.
138. Wang W., Klein W.H. A G/C-rich DNA-regulatory element controls positive expression of the sea urchin Lytechinus pictus aboral ectoderm-specific LpSl gene // DNA Cell Biol. 1996. - Vol. 15, N 2. - P. 133-145.
139. Vieten D, Corfield A, Ramani P, Spicer R. Proliferative response in necrotising enterocolitis is insufficient to prevent disease progression // Pediatr Surg Int. 2006. Vol. 22, N 1. - P. 50-56.
140. Vitarelli E., Sippelli G., Tuccari G., Barresi G. The use of microwave irradiation for immunohistochemistry: a new methodological proposal // Histol. Histopathol. 1995. - Vol. 10, N 1. - P. 35-38.
141. Wang L., Zheng L., Wang S.Y., Zhu T.F., Zhu H.G. Clonal analysis of gastric carcinoma and precancerous lesions and its relation to Ki-67 protein expression // Neoplasma. 2009. - Vol. 56, N 1. - P. 48-55.
142. Wang S, Liu J, Li L, Wice BM. Individual subtypes of enteroendocrine cells in the mouse small intestine exhibit unique patterns of inositol 1,4,5-trisphosphate receptor expression. // J Histochem Cytochem. 2004. Vol. 52, N l.-P. 53-63.
143. Werneck-Silva AL, Alvares EP, Gama P, Damiao AO, Osaki LH, Ogias D, Sipahi AM. Intestinal damage in strongyloidiasis: the imbalance between cell death and proliferation // Dig Dis Sci. 2006. Vol. 51, N 6. -P. 1063-1069.
144. Wong WM, Stamp GW, Elia G, Poulsom R, Wright NA. Proliferative populations in intestinal metaplasia: evidence of deregulation in Paneth and goblet cells, but not endocrine cells // J Pathol. 2000. Vol. 190, N 1. -P. 107-113.
145. Yamada S, Kojima H, Fujimiya M, Nakamura T, Kashiwagi A, Kikkawa R. Differentiation of immature enterocytes into enteroendocrine cells by Pdxl overexpression. // Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. -2001. Vol. 281, N 1. P. 229-236.
146. Yoshida C., Ishikawa T., Michiue T., Zhao D., Komatsu A., Quan L., Maeda IT. Immunohistochemical distribution of chromogranin A in medicolegal autopsy materials // Leg. Med. 2009. - Vol. 11 Suppl 1. - P. 231-233.
147. Zainullin V.G., Moskalev A.A. Role of Apoptosis in Age-Related Pathologies // Russian Journal of Developmental Biology. 2001. - Vol. 32, N4. - P. 199-204.
148. Zhao E., Zhang D., Basak A., Trudeau V.L. New insights into granin-derived peptides: evolution and endocrine roles // Gen. Comp. Endocrinol. 2009. - Vol. 164, N 2-3. - P. 161-174.
149. Zook B.C., Bradley E.W., Casarett G.W., Rogers C.C. Pathologic findings in canine brain irradiated with fractionated fast neutrons or photons // Radiat. Res. 1980. - Vol. 84, N 3. - P. 562-578.i