Автореферат и диссертация по медицине (14.00.25) на тему:Производные глицирретовой кислоты - новая группа гиполипидемических и противоатеросклеротических средств

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РЕСПУБЛИКИ УЗБЕКИСТАН ПЕРВЫЙ ТАШКЕНТСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ

ИНСТИТУТ

- о ¡.¿А,| К-!;!/

На правах рукописи

АБДУЛЛАЕВ Акбар Хатамович

УДК 615.2:616.153.915:Р16.13-004.6

ПРОИЗВОДНЫЕ ГЛИЦИРРЕТОВОИ КИСЛОТЫ — НОВАЯ ГРУППА ГИПОЛИПИДЕМИ ЕСКИХ И ПРОТИВОАТЕРОСКЛЕРОТИЧЕСКИХ СРЕДСТВ

14.00.25 — фармакология

АВ ТОР ЕФ ЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук

Ташкент— 1997 г.

Работа выполнена в Первом Ташкентском медицинском институте.

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор НАСЫРОВ С. X.

доктор медицинских наук АЙЗИК.ОВ М. И.

доктор медицинских наук АХМЕДХОДЖАЕВА X. С.

Ведущее учреждение: Ташкентский фармацевтический

институт.

Защита состоится «. » . __ 1997 г.

в / час. на заседании специализированного совета

Д 087.01.01 в Первом Ташкентском государственном медицинском институте (700047, Ташкент, ул. Хамзы, 103).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке института.

Автореферат разослан _» Я 1997 г.

Ученый секретарь специализированного совета, доктор медицинских наук

АШИРМЕТОВ А. X.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность гены. Атеросклероз занимает ведущее место в развитии многих заболеваний сердечно-сосудистой системы и является одной из-главных-причин смертности и инвалидности населения (Williams В.,1995; Cerstein Н.С.. YusUÍ S., 1996). Примерно такая же картина наблюдается и в Узбекистане (Утепов Я.Ю.,1990). Увеличение числа осложнемий заболеваний, в. Ьснове которых лежит атеросклероз, в молодом наиболее трудоспособном возрасте говорит о чрезвычайной важности этой проблемы (Константинов В.В. и др., 1996).

По современным представлениям (Климов А. 11., 1S95; Дунаев В.В. и др., 1996; Hopkins К.D ,1995: LaRosa J. С.. 1996), ведущая роль в развитии атеросклероза отводится нарушениям липндного обмена, интенсификации перекнского окисления липидов(ПОЛ) и состоянию сосудистой стенки( Mano Т. et al., 1996). Вместе с тем нормальное функционирование клеток и тканей во многом определяется состоянием мембранных компонентов клеток, изменением фосфоли-пндного ■ состава, спектра жирных кислот и рядом других факторов, имеющих решающее значение в адаптационных реакциях организма (Перова Н. В.. 1996; Roberts T.L. et al.. 1995).

В настоящее время для лечения и профилактики атеросклероза применяются лекарственные средства, относящиеся к различным классам химических соединений. Однако, большинство из противоатероск-леротических средств не оказывает желаемого эффекта и очень часто вызывает, тяжелые побочные явления и грозные осложнения (Метелица В.И. и др., 1996; Sméilie W.S.A. et al.. 1995; Fey R, Pearson N., 1996).' - - . .

Поэтому дальнейший поиск и изучение новых высокоактивых и иалотаксичных при длительном применении противсатеросклеротичес-ких препаратов является крайне важной задачей.

В этом отношении одним из перспективных направлений является изучение антиатеросклеротических свойств лекарственных растений и выделенных из них физиологически активных веществ. .

По имеющимся в литературе сведениям (Камилов И.К. и др., 1977; Shibata П., 1962), и, как показали результаты наших предварительных исследований, некоторые препараты широко'распространенного в регионе Средней Азии растения солодка голая (Glycyrrhiza glabra L.) обладают выраженным гнполипидемическим свойством.

Большой интерес представляет исследования сотрудников кафедр фармакологии 1-й 2- ТашГосМИ п лаборатории химии растений Института химических наук АН Казахстана по изучению и внедрении в практику новых производных глицирретовой кислоты(ГК), содержащей-

ся и достаточно)! количестве в солодке и обладающей ценными в практическом отношении свойствами. Одно из производных ГК -18-дегидроглицирретовая кислота(18-ДГЮ под названием глидеринин разрешена для широкого применения в качестве нового высокоэффективного противовоспалительного препарата. В связи с эт.м изыскание и исследование новых высокоэффективных препаратов среди производных ГК, обладающих 'выраженными гиполипидемическим и антиате-росклеротическим свойствами имеют большое практическое значение.

Цель и задачи исследования. Целью настоящей работы явилось сравнительное изучение гиполипидемнчсских и противоатеросклероти-ческих свойств производных ГК, выявление среди них наиболее. эффективных веществ для дальнейшего подробного и углубленного исследования в сравнении с растительным противоатеросклеротическим препаратом полиспошшом и выяснение возможности нх использования в клинике в качестве противоатеросклеротических средств. •

Для выполнения намеченной цели бЫли поставлены следующие задачи:

- изучить в сравнительном аспекте влияние производных ГК на показатели липидного обмена и ПОЛ в сыворотке крови крыс при эта-ноловой и вызванной голоданием гипер.пнпидемня;::

- выявить среди ряда производных ГК наиболее активные гипо-лкпчдемичоские и антисжсидантные средства;

- изучить влияние наиболее актнышх соединений на. показатели липидного обмена с динамике развития экспериментального атеросклероза;

- изучить влияние этик препаратов на состав фосфолипидов и зхпрных кислот липидов сыворотки крови и органов при развитии экспериментального атеросклероза;

- изучить влияние этих препаратов на процессы пол и Состояние ферментной йнтиохислитавьЛой системы при развитии экспериментального атеросклероза;

- изучить влияние наиболее активных производных ГК на показателя лишщноГо обмена при обратном развитии экспериментального атеросклероза;

- изучить влияние наяболе? активных препаратов на атвроскле-ротйческие изменения аорти при развитии и сбратиом развитии экспериментального атеросклероза.

Научная новизна риботы состоят в том, что впервые в сравнительном аспекте изучены гиполипидемические, антиоксидантные и протнвоатеросклеротичвские свойства 11-ти новых производных ГК.

Результаты проведенных исследований позволили охарактеризовать производные ГН как новую группу гиполипидемическнх, антиок-скданткых и иротивоатеросклеротическнх средств. Наиболее активными среди них оказались 18-ДГК и аммонийная соль глицирретовой кислоты(АСГК).

Впервые подробно исследовано влияние этих препаратов на показатели липялного обмена, состав фосфолипидов и жирных кислот, интенсивность ПОЛ и состояние ферментной антиокислителыюй защиты и атеросгаеротическиа изменения аорты при экспериментальном атеросклерозе в сравнении с растительным протизоатеросклеротическим препаратом полиспонинон.

€ точки зрения практики весьма ва;гаьа-; является то, что под действием 18-ДГК и АСГК значительно уменьшается площадь атероск-леротических поражений аорты как при развитии атеросклероза, так и уже сформировавшихся атеросклеротических изменений.

Научно-теоретическая и практическая ценность работы. 18-ДГК и АСГК обладают выраженной способностью эффективно снижать уровни общего холестерина, триглицеридов, свободных жирных кислот, суммарного количества пребета- а бета-липопротеидов, общих липидов и повышать содержание общих фосфолипидов. Они уменьшают атерогенные и увеличивают антиэтерогенные фракции липопротеидов, а также задерживают развитие гиперлипидемии и накопление липидов в органах. Препараты восстанавливают фосфолипидный и жирнокислотный составы липидов сиворотки и эритроцитов крови и органов. 18-ДГК и АСГК значительно уменьшают содержание продуктов ПОЛ(гидроперекисей лили,дез и малонового диальдегида) н повышают активность ферментов анг!юхиел!;тельной защнты(супероксиддисмутазы и кагалазы ). Оба вещества эффективно уменьшают площади атеросклеротических поражений аорта.

По этим показателям 18-ДГК и АСГК значительно превосходят полнепонни. При этом 18-ДГК несколько активнее АСГК.

13-ДГК представлена в Фармакологический комитет МЗ РУз в качестве нового гигголипйдемического и противоатеросклеротического препарата. АСГК будет направлена в Фармакологический комитет МЗ РУз в качестве нового гиполипидеиического и противоатеросклеротического препарата. -

Основные положения, выносимые• на защиту:

1. Производные ГК характеризуются выраженнши гиполипидеми-ческими свойствами.

2. Обоснование гиполипндемического действия 18-ДГК и АСГК

при развитии и регрессии экспериментального атеросклероза,

. 3. Обоснование антиоксмдантного свойства 18-ДГК и АСГК при экспериментальном атеросклерозе.

4. Обоснование • антиатеросклеротического эффекта 18-ДГК и

АСГК.

5. 18-ДГК и АСГК по гиполипидемическим. антиоксидантным и протнвоатеросклеротическим свойствам значительно превосходят по-, лиспонин.

Апробация работы. Материалы диссертации доложены на Итоговых научных конференциях 1 ТашГосМК (1992. 1993); I Конгрессе по внутренней медицине стран Центральной Азии (Ташкент, 1994); Ш съезде кардиологов Узбекистана (Ташкент, 1994); IV съезде терапевтов Узбекистана (Ташкент, 1995); Республиканской научно-практической конференции паталоганатомов.(Ташкент, 1995); на заседании общества фармакологов Республики Узбекистан(1996).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 40 раоот. из которых 13 в различных журналах.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 323 страницах машинописи, состоит из введения, обзора литературы, материала и методики исследования, собственных исследований, заключения, выводов, содержит 28 таблиц и 51 рисунка. Указатель литературы вклочает 413 наименования, в том числе 236 отечественных и 177 зарубежных авторов.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Для решения поставленной задачи в начале эксперимента были изучены некоторые гиполипидемические и антиоксидантные свойства производных ГК, синтезированных в лаборатории химии растений Института химических.наук АН Казахстана л-Х.н. H.H.ИрНсметовым и др. Испытанию подверглись следующие соединения:

1. АСГК; 2. 18-ДГК;.3. 3-кето метиловый эфир ГК; 4. Натриевая сонь ГК; 5.Натриевая соль 18-ДГК: 6. Охсим метиловый эфир ГК; 7. Окс.им метиловый, эфир 18-ДГК; 8. 3-кето 13-ДГК: 9: •й-оксиметн-лен-3-кетометиловый эфир ГК; 10.' 2.3-нндоло-нетиловый эфир ГК; И. 2-гепто-фтор бутионил-З-кетометиловый эфир .ГК.

Опыты проводились на моделях гиперлнпидемии. выззанной эта-., нолои(Леонтьева Т.П. и др., 1979) и голоданием (Нещорская К.А... Сонина Г.П., 1972) у.белых крыс Массой 180-200 г. Гиполнпндеми-ческое действие препаратов оценивалось по их влиянию на содержа-

нне общих лнпидов(ОЛ). общего холестерина(ОХ). триглицеридов (ТГ) и суммарной фракции пре--р-липопротеидов{пре-[5-ЛП) и ß-липопротеи-дов (ß-ЛП). а аьтиоксйдантное - на гидроперекиси липидов(ГП) в сыворотке крови крыс. Наиболее 'активными в этом отношении оказались 18-ДГК и АСГК. Следует отметить, что 18-ДГК получают путем полусинтеза из ГК. АСГК представляет собой соль.ГК ' и ее выход сравнительно большой, что. является более выгодным в экономическом отношении. Важна подчеркнуть, что все изученные производные ГК имеют весьма низкую токсичность. Их ЛД50 при даче внутрь бельм мышам более .1000 иг/кг(Азимов Н. М.. 1989)..

•. В следующих сериях эксперимента было проведено более углубленное изучение 18-ДГК, и АСГК на процесс развития и регрессии атеросклероза в сравнений с лолиспонином.

Атеросклероз вызывали у кроликов обоего пола породы шиншилла, ■ массой 2,5-3,2 кг путем ежедневного .перорального введе-Ння(через зонд) ЭОЖ-го масляного (хлопковое масло) раствора холестерина в дозе' 300 мг/кг в Течение трех месяцев (Н.Н.Аничков, 1915). 18-ДГК и АСГК вводили ежедневно внутрь в виде суспензии на 3%-ном крахмальном клейстере. Полиспонин применялся через рот в дозе 10 мг/кг,. так как, согласно литературным данным (Азйзова С.С., Исмаилов Й.И.. 1984; Васильченко Ю.Ф. н др., 1993), эта дога является наиболее эффективной. / .

Q серии опытов, когда изучалось влияние препаратов на развитие атеросклероза, кролики были.разбиты на шесть групп : I гр.-гавотНые получали только холестерин(контрольная); И гр. - холестерин + 18-ДГК в дозе 25*мг/кг; Ш гр. - холестерин + 18-ДГК в дозе 35 мг/кг: IV гр. - холестерин"+ АСГК в дозе 25 мг/кг; V гр. - холестерин ♦ АСГК в дозе 35 мг/кг и VI гр. - холестерин + по-лиспсннн в дозе 10 мг/кг. .Перед началом опытов, а затем на 30-й, GO-й и 90-Я дни проводился забор крови из краевой вены уха. В конце серии животные забивались путем декапитации■для определения лппидоз- (0Х и ТГ, спектр жирных кислот и фосфолипидов), продуктов ПОЛ, активности супероксидднсмутазы и- каталазы в органах (аерта, миокард и печень), а .также для■проведения морфологических исследований аорт кроликов.

Далее изучалось влияние препаратов ГК на регрессию(обратное развитие) атеросклероза. В течение первых трех месяцев кролики получали холестерин длл воспроизведения атеросклероза. Проводися забор крови и забой части животных для проведения Исследований., Затем животные были разбиты на семь групп и в течение последующих

трех месяцев получали препараты: I-гр,- кролики получали адекватный объем крахмального клейстера(контрольная); И, III H IV гр. -18-ДГК соответственно в дозах 10, 25 и 35 мг/кг; V и VI гр. -АСГК соответственно в дозах 25 и 35 Мг/кг; VII гр. - полиспошш. В процессе лечения на 30-й, 60-й и 90"й дни прозодился набор крови и в конце эксперимента - забой жизотннх.

Забор крови проводился натощак не менее чем через 12 часоз после последнего кормления.; Кровь отстаивали .в течение 60 мчнут и отделяли сыворотку центрифугнров'аниея. Для .определена); липидов о органах забои проводили в холодной комнате при температуре 0 -*4"С. Экстракцию липидов проводили по методу Folch J. et al. (1957).

В сыворотке крови определяли содержание ОХ по цветной реак- • цни Лнбермана-Бурхардта; ОЛ - с помочь» Биотеста СияЬеш". ЧССР);, обцих фосфолнлядсв(ОФ) ш 'содержанию неорганического ф-осфора после минерализации элюата (Туракухов Я.Х. и др., 1967); ТГ и свободных жирных кислот (СКЮ -.по методу Amen ta I.S. (196.1) и Duncomlis N. С. (1933); суммарное количество npc-0-ЛП и р-ЛН - по методу Bursteln M.. . Saaaille 1.(1957); спектр .ЛЯ методом диск-электрофорсза п полиакрилгушднеч геле в модификации Иаграчо-пой Е.Я.(1973).

Интенсивность спонтанной хемилюминесценции(на 90-fl дань) сыворотки «роек регистрировала па хешлачинометре "ХЛМ Ц1-01" (Сер-гнемо В.П., EopcruiB M.П., 1977). Содержание ГП (коньюгированние дмеш и диеиоиис . кетачы) определяли по методу ГаЬрндоза В. В. и Нишкору^пой С. И. (1СЗЗ) ; содержание ¡шюно^ого • днальдегндаШДЛ) при иа-шгноп. аскорбат- и НАДФ• Н2-зависимом ПОЯ •' - ».о методу СталыюЗ И.Д а Гар.чаеилп Т.Г. (1977). Ашнаюсть суппроксшц&спу.~ тазы(СОД) о крови н тканях определил;; по методу îlirsa P. ILFri-tlovlch 1. (1972) в модификации Брусова u.c. и др. (1976). актив-'кость катшши - по методу Королях. М. А. и др.(Î988). ОбцмЯ белок сыворотки крови оиредзляли по методу loviry О.Н. et al. (1951).

IJîit ciicnîinocTL ПОЛ с гомогенатах тканей определяли по ипкоп-лешш ГП и ЦДЛ (Владимиров ю. А.. Лрчашз А. И., 1972; Takeshige К., Hineîîàr.ïi S., 1Э75).

Го^огенаты готовились в гоаогенезаторс Лоттера с теФЛоновыч постикоп при отношении массы тканп-к объему раствора 1:5.

Экстракции липидов сыворотки, зритро.цитов крови ii гокогена-тов тканей органов (стенка аорты,' ииохард и печень) для определения С'осфояигшдного и яшрнбкислотного составов проводили по мето-

дам Ксйтс'М, (1S75); .Bligh E.G.,. Dyer W.J, (1559).

Разделение фосфолннндов(ФЛ) проводилось методом проточной горизонтальной хроматографии rio Каргапопову A.B. (1981). Идентифицированы следующие Фракции ФЛг лизофосфатидилхолиньКЛФХ), Фос-фатидилсгрикы(^С), лизофосфатиДилзтаноламлнм(ЛФЗ), сфингомиели-нм (СМ), фосфатидилийозитоли'(фй), фосфатидилхолины(ФХ).. фосфатиди-лэтанолаткы(ФЗ), карйиолипины(КР), • лизофосфагидные кислоты (iffiO. фосфатндике числотн(ФК)';

Eiipmfe кислота CT) определяли на газо-жидкостном хроматографе "Chrcüi - 5" 'ЧССР). Идентифицировали ЙК по времени удерживания стандартов (Кейтс М., 1975). Определялись следующие КК: миристи-нозая . (С, 4. ¡j), миристоленовая (С14:1), пальмитпьовая {С16;0). пальмлтоолеииовая (С, 6,>, стеариновая (С13;0). олеиновая (С 5 „.!). линодевая. (С, 8. г), грахндоновая (Сг 0.4).

Оптические плотности - проб измеряли на спектрофотометре "СС-16", злектрсфореграим^ и хрокатогрлм-'й денситометрировали на дзнеятомзтре "Karl zeta" (ГДР) .•

"Для подтверждения' результатов биохимических исследований "оптирования атеросклеротического' процесса использованы также хорологические методы. • Окраска аорт и оценка степени атеросклероза производилась согласно рекомендациям ВОЗ (Протокол ВОЗ, 5334 г.). Для гистологических исследований из аорты готовили целлоидиновые п парафиновые срезы; которые окрашивались гематоксилн-HO-í ;; зозиной .по Попори, Вангизону и Вейгерту. Эти патогистологи-i'rc!'m8 исследования проводились .при консультации и непосредственном участии зав. каф. патанатоиии 1-ТавГосМЙ проф. Я.Ю.Утепова, зэ '¡то приносим ему глубокую признательность.

Полученный цифровой материал _ подвергнут вариациойно-статис.-тичееко.1 обработке по методу Стырдента-Фшиера.

Результаты изуче ия влияния 18-ДГН на содержание липидов, спектр ЛЯ сыворотки крови й на некоторые показатели ПОЛ в данной р£бот?. использованы из кандидатской диссертации.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Было установлено, что все изученный соединения проявляют в тон или иной степени гиполипйдемический и антиоксидантный эффекты. Наиболее активными в этом отношении оказались 18-ДГК и АСГК. Поэтому в дальнейшем проводилось подробное изучение влияния этих,, веществ сравнительно с полиспонйном на Показатели липидного обме-

на, ПОЛ и степень поражения аорт при атеросклерозе у кроликов.

Результаты первой- серии опытов показали, что на 30-й день введения кроликам холестерина его концентрация в крови контрольных животных увэличилась в 6,15 раз, на 60-й день - о С. 12 раз к на 90-й день - в 10,10 раз (табл.1).

У кроликов, принимавших 18-ДГК. в дозе 25 мг/кг. уровень ОХ был в 2,7 раз и в дозе 35 .мг/кг - в 3,35 раз ниже,, чем в контроле, а у животных, получавших АСГК - соответственно в 2,55 .и 3,13 раз. в то время как при введении полиспонииа этот показатель уменьшился в 1,44 раза. 18-ДГК в дозе 25 мг/кг по гипохолестери-немической активности превосходит полисшнин в 1,87 раз. и в дозе 35 мг/кг - в 2,33 раз. a ACIK - соответственно в 1,78 и 2,18 раз.

Известно, что ФЛ удерживают холестерин в состоянии гмульсок--да и препятствуют его отложению в сосудистой стенке, а.в составе ЛП высокой плотности способствуют удалению его из атеросклзротн-чески измененных артерий (Лопухин Ю.М. н др., 1983; Havel R.I., RapaportE., 1995). В связи с этим были изучены уровни ОФ в сыворотке крови животных. Содержание ОФ в крови контрольных кроликов возрастает в 1,94 раза в первом, в 2.31 раз - во втором и в 2,65 раз - в. третьем месяцах. При применении 18-ДГК и АСГК наблюдалась, тенденция к повышению содержания ОФ.

, В прогностическом отношении большое значение, имеет соотноае-ние холестерин/фосйолйппды (ОХ/ОФ) (Velican D., 1978). Значительное повышение уровня ОХ в крови контрольных живитных привело. а увеличению значения этого соотношения через 1 месяц в 3,14, через 2--в 3.48 и через 3 месяца - в 3.5 раз. Полиспонин снижает этот . показатель,, особенно к концу опыта, но осе же его значение при этом било визе исходного в. 3 раза. Наблюдаемая тенденция увеличения ОФ при применении 18-ДГК приводит.к снижению значения этого показателя в i,83; 2,12 it 2,41 раз (в дозе 25 мг/кг) н в 2,1: 2,52 и 2,49 раз {в дозе 35 иг/кг), по сравнении с контролем, соответственно срокам исследования и приближает его к исходному -уролвмю. АСГК в дозе 25 мг/кг уменьшает это соотношение в первый месяц в 1,67 раз, по втор&й - в 1,86 раз « в третий - в 2,18 раз, . а в доза 35. мг/кг - в Z, 03; 2,3 н Й, 74 раза!

Гипертриглицерняемия является вйаным ¿актором риска атеросклероза и имеет прогностическое значение (Лякишев Л.А,, 1998; Williams В.", 1995). Уровень ТГ в сыворотке крови контрольных животных на 30-й. 60-й и 90-й дни исследования оказался воте исходного соответственно в 4,41; -5,15 й 6 раз. Через три месяца введения

. . Таблица 1

Влияние 18-дегидроглицирретсжой кислоты(1&-ДШ. аммонийной соли глицирретовой кислоты(АСГК) и полиспонина на показатели липидкого обмена в сыворотке крови кроликов при развитой атеросклероза : (м ♦ в.- а -.7) •

Условия. . опыта Срок исйле-дования (дни) Общий холестерин. толь/я Общие фос-фолкпиды, . даоль/л Отношение • общий холестерин/общие фосфолипиды Триглицери-ды, ммоль/л Свободные жирные кислоты, ммог./л Сумма npe-ß- и ß-лппопротеи.-дои. г/л

Контроль (холестерин) . Исхода, уровень 90 . Рг 1,45+ 0,004 14,64 + 0 199 .< О.ООх 3.47 + 0,05 9,90 ? 0.12 ; < 0.001 0.42 + Ö.OOu 1.48 * 0,060 < 07001 0.68 +>'-0,01 4,11 * 0.12 < 0,001 0,42 + 0,^1 1,10 + 0.06 < 07001 . 1,63 + 0,02 12.00 + 0.1S < 0,001

18-ДГК (25 мг/кг) + , холестерин Исхода, уровень 90 р2 1,52 + 0.006 5.43 + 0.087 < 07001 3,60 + 0.07 8.85 + 0,15 < 0.001 0.'42 + 0,009 0,61 + 0,005 < 0.001 0.72 + 0,01 1.51 + 0.05 . < 0,001 0,43 + 0,01 0,67 + 0,16 < 07001 1,66 + 0,03 5.26 + 0,12 < 07001.

18-ДГК {35 мг/кг) холестерин Исхода, уровень 90 . ра 1.53 + 0,00£ 4.37 ± 0. 073 < 0,001 3.57 + 0.08 8.71 + 0.12 < 0.001 0,43 ± 0,008 0,50 + 0,004 < 0,001 0,76 + 0,01 1,37 + 0,04 .< 0.001 0,43 + 0,01 0,63 + 0,01 < 0.001 1,68 + 0,05 5,01 + 0.10 < 0.001

АСГК (25 мг/кг) + холестерин Исхода, уровень 90 ь 1. 48 ± 0,028 5,73 + 0,088 < 0,001 . 3.47 + 0.06 8,38 + 0.10 < 0.001 0.43 + 0.007 0.68 + 0.003 . < 07001 0,66 + 0.02 1,73 + 0,09 <0,001 0,42 + 0.01 0,69 + 0,03 < 0,001 1,65 + 0.06 5.53 + 0,09 < 0,001

АСГК (35 мг/кг) холестерин Исхода, уровень 90 рг 1,51 ± 0.039 4.67 + 0,076 < 0.001 3.38 + 0,06 8.57 + 0.09 < 0,001 0,44 + 0,008 0,54 + 0,003 < 0,001 0.67 + 0,02 1,47 + 0.05 < 0.001 0.42 + 0,01 0.63 + 0.02 < 0,001 1,71 + 0,05 5.29 + 0.07 < 07001

Полиспонин + холестерин Исхода, уровень 90 р2 1,50 + 0,007 10.18 + 0.196 < 0.001 3,50 + 0,06 7,71 + 0,07 < 0.001 0,43 + 0,005 1,31 + 0,006 < 0,001 0,70 + 0,01 3.26 + 0.08 < 0,001 0.41 + 0,01 0.87 + 0.01 < 0.001 1.63 + oí 03 9,20 + 0.15 < 0,001

Pt - достоверно по отношению к исходным показателям, Р2 - по отношению к контрольным показателям.

холестерина и 18*ДГК в дозе 25 мг/кг концентрация ТГ была ниже, чем в-контроле в 2.72 раза и в 2,16 раза - чем у кроликов, полу-чярших полкспоннн, а в дозе 35 мг/кг - в 3 и 2,38 раз соответственно, АСГК в дозе 25 мг/кг уменьшает содержание ТГ соответственно в 2.38 и 1,88 раз, а в дозе 35 мг/кг в - 2,8 и 2,22'раза..

Наиболее вариабельным показателем из липидных фракций крови является уровень С&К. Колебания. СЖК положительно коррёлируют. с уровнями других классов ллпидов и имеют прогностическое значение (Кухаренко С.С. и др„, 1991). Испытуемые препараты оказывают менее выраженное влияние на СМ, чем на ОХ и ТГ(табл. 1).

Учитывая, что основная масса холестерина находится- в составе атерогенных ЛПШерова Н.Г.и .др/, 1996: Anderson Y.W. et al.,1995), которые проникаит в сосудистую стенку, мы определяли сумму npe-ß-и ß-ЛП. Холестериновая диета привел?- к значительному увеличению этих фракций ЛЛ сыворотки крови кроликов контрольной группы в -5; 5,93 и 7.36 раз соответственно срокам исследования. 18-ДГК и АСГК значительно тормозят возрастание'содержания суммы npe-ß- и ß-ЛП, Так, 18-ДГК в дозе 25 мг/кг снижает этот показатель через 1, 2 и 3 месяца эксперимента в 2,24: 1,95 и 2,23 раза, а в дозе 35 мг/кг - соответственно в 2,42; 2 и 2.4 раза. АСГК в дозе 25 мг/кг уменьшает сумму npe-ß- и ß-ЛП соответственно срокам'наблюдения в 2,17; 1.83 и 2,17 раз и в дозе 35 мг/кг - в 2,28; 1,97 и 2.27 раз. Полиспонин снижает этот показатель во все сроки, но наиболее выраженный эффект был отмечен на 90-й день(на 23,3%)(табл. 1).

Развитие и тяжесть атеросклероза и ишемической болезни сердца зависит не только от уровня атерогенных и актиатерогенных ЛП, но и от их соотношения (Климов А.Н., 1995; Stevenson !.С. ,1995). Трехмесячное введение холестерина кроликам контрольной группы приводит к развитию значительных изменений спектра ЛП. Содержание npe-ß-ЛП к концу исследования увеличилось в 2,65 раз, а ß-ЛП - в 1,31 раз, по сравнению с исходным. К этому же сроку а-ЛП уменьшились почти в 2 раза. Эти изменения привели к существенному снижению значения. й-ЛП/р-ЛП на 30-й, 60-й и 90-й дни опыта соответственно на 31,9; 45,.7 и 59,5%. Полиспонин оказывает незначительное влияние на гти показатели. Наблюдалась лишь тенденция к снижению атерогенных фракций ЛП (в основном npe-ß-ЛП). С увеличением срока исследования дислипопротеидемия усиливалась. У этих кроликов в 2 раза снизилось значение отношения a-iW/ß-ЛП. по сравнению с исходным, и было лишь «а 19,1% выше этого показатели в контроле. Следует отметить, что уже на 30-й день исследования 18-ДГК И АСГК

приводят к нормализации дислипопротеидемии и это их действие стойко проявляется и в последующие сроки эксперимента. Они значительно снижают фрахцив npe-g-ЛП, состоящую а основном из ТГ, что коррелирует с их сильным птотркглщеридемическим действием. Существенное снижение-р-ЛП, .состоящих большгй частью из холестерина, коррелирует с мощны-! гипохолестеринеиическим свойством этих соединений. Значение отношения а-ЛП/£-ЛП у кроликов, получавших 18-ДГК в дозах 25 к 35 мг/кг, было выше, чем в контроле в 2,11 и 2,32 раза, а у леченных АСГК - соответственно з 1,79 и 2 раза (рис. 1).

ФЛ, входя в состав клеточных мембран, могут изменять нх функциональные свойства и обуславливать развитие патологического процесса Шазур Е.С. и др., 1S9S;'Witztum I.L., l99d).

У животных, получавших только холестерин, наблюдаются значительные изменения''в- составе 4Л сыворотки крови в течение всего срока наблюдения. .Так, отмечено выраженное увеличение содержания ЛФХ, ФИ, ЛФК и ФК, при уменьшении ФХ И СМ. К концу опыта значение отношения кислых ФЛ'к нейтральным равнялось 0.44, что почти в 2 раза выше интактного. 13-ДГК и АСГК приводили к нормализации ФЛ состава сыворотки крови кроликов. Под влиянием 'этих препаратов уровни ЛФХ уменьшились, по сравнений с контрольным, соответственно в 3.1 и 2,4 раза, а ФХ - увеличились на 47,2 и 40,8%. Значение отношения кислых ФЛ к нейтральным оба препарата уменьшают на 34%. Полиспонин же к концу опыта уменьшает содержание ЛФХ на 42,1% и увеличивает уровень ФХ на 36,38. Препарат сравнения уменьшил значение отношения кислых ФЛ к нейтральным только на 11,435.

Экспериментальный атеросклероз"сопровождается серьезными изменениями, и со . стороны ФЛ состава липидов эритроцитов. 18-ДГК уменьшает ЛФЗ и ФК, обладающие выраженным мембранолитическик свойством, на 45,8 и 45,4%, а значение отношения кислых ФЛ к нейтральным - на Ш. АСГК снижает уровни ЛФЗ и ФК на 44,4 и 35,92, а значение отношения кислых ФЛ к нейтральным - на 37,6%. Полиспонин менее эффективно влияет на уровни ЛФЗ и ФК, а значение отношения кислых ФЛ к нейтральным уменьшает лишь на 22,3%. .

18-ДГК и АСГК оказывают нормализующее действие не только на содержание ОФ сыворотки крови, но и на ФЛ состав липидов сыворотки и эритроцитов крови и по этому свойству превосходят полиспонин.

При атеросклерозе нарушается соотношение меаду насыщенными и ненасыщенными ЖК. Снижение уровня ненасыщенных IK способствует, угнетению выведения холестерина из тханей н нарастанию его содер-

Влияние препаратов на отношение альфа-ЛП/ .бета-ЛП в сыворотке крови кроликов При •

развитии атеросклероза ' ':

/

-а

II

нонтр5лГполйс'п6н1Ш лс'гн 1в-дгк Рис. 1. 1, 2 и 3 - месяцы.

Влияние препаратор на общий холестернн{ОХ) и триглицериды(ТГ) в органах кроликов при % развитии етеросклероза

. 200

к О Р Т к

Ё 'Ч Е И ь

Рис. 2. 1-КОНТРОЛЬ. 2-ПОЛИСПОНИН. 3-АСГК. 4-18-ДПС.

хакия в сыворотке крови С Алмазов в. А. и др., 1996).

Развитие атеросклероза протекало на Фоне резкого изменения соотношения Ж во все сроки наблюдения. К концу опыта в липидах сыворотки крови контрольных 'кроликов содержание насыщенных ЖК С,4;q, С]6;С( н С)8:0 увеличилось соответственно на 40,6; 25,8 и 27,2%, ' а. их.сумма ■¿'т £1Л%. При этом содержание ненасыщенных ¿id- ci6:i' Pié;!« с1в:г и сг;суменьшилось соответственно в 3,6; 2.5 раз; на 35,2; 19,3% и в 5,5 раз. Сумма ненасыщенных ЖК снизилась на 32й. В липидах сыворотки животных, получавших 18-ДГК и ACFK, отмелется менее заметное увеличение содержания насыщенных и уменьшение ненасыщенных Ж во все сроки наблюдения. К концу опыта 18-ДПС уменьшает содержание C14:0i .'C,g:0 и С!8:0 на 39,2; 21,3 и 22,7% и повышает уровни С14:,, С,6:1, С,9:1, С,3;2 и С20:1 соответственно в 3,1; 2,3 раз; на 33,1;' 15,5% и в 4.7 раза, препарат увеличивает cytiny ненасыщенных ЖК на 23,5% и уменьшает сумму насыщенных на 2S. 5%. Трехмесячное введение АСГК вызывает снижение содержания С,4,0.' С16:0 к C18:ó соответственно на 36,1; 19,7 и 21.IX, а их суммы - на 21,8%. АСГК повышает уровни С14:1, C16;1. "cj9:j. ci8-.z и сгь-л в 2,2 раза; на 31.2; 14,8% и в 4.2 раза, а их сумму - на 27%. Полислоник на эти показатели оказал . менее выраженное влияние. Он увеличивает сумму ненасыщенных ЖК только на 15,3% и уменьшает сумму насьщенкых на 11,1%. ,

Через три месяца введения холестерина в липидах эритроцитов кроликоа контрольной 'группы / сумма насыщенных Ш увеличилась на 21,5%. а суша ненасыщенных кислот, уменьшилась на 34,3%. Под влиянием 13-дгк сумма ненасыщенных кислот увеличивается на 30,5!?, а суша насыщенных - уменьшается на 23,1%. ' АСГК увеличивает сумму ненасыщенных ЖК и уменьшает сумму насыщенных соответственно на 29,7 и 22,2%. полиспонин снижает, сумму насыщенных Щ только на 12,7^ и увеличивает с,мму ненасыщенных - на 19,6%.

Для получения, более полной информации о патологий липидНого обмена в процессе развития атеросклероза и оценки гнполипидеми-ческой активности препаратов, мы определяли содержание ОХ, ТГ, фосфолипидный и жирнокислотннй'составы в органах кроликов (стенке аорты, мшжлрде й печени).

Трехмесячное кормление животных контрольной Группы холесте-. рином привело к увеличении его содержаний в стенке аорты, миокарде и печени соответственно в 8,2; i,8 и 6,5 раза, а ТГ - в 3,2; 2,2 и 3,3 раза. Полиспонин снижает содержание этих липидов в пса-" нях. по сравнению с таковыми у контрольных животных. Под действи-

ем 18-ДГК и АСГК уровни ОХ и ТГ значительно уменьшаются и приближаются к исходным значениям. По своей активности оба препарата значительно превосходят полиспонин. Они & одинаковой степени сникают содержание ОХ и ТГ в исследованных органах(рис. 2).

Холестериновая диета приводит к увеличению в стенке аорты тавотных контрольной группы содержания ЛФХ, ДОЗ и ФК и уменьшению уровней ФХ и Ф3(табл. г). Эти изменения вызывают повышение значения отношения кислых ФЛ к нейтральным в 2,2 раза. Оба препарата значительно снижают уровни ЛФХ, ЛФЭ и ФК при увеличении. ФХ и ФЗ. 18-ДГК и АСГК уменьшают значение отношения кислых ФЛ к-нейтраль-, нын в 2 раза и на 45,4%, а полиспонин - на 25,4Я.

Развитие атеросклероза сопровождается аналогичными изменениями в составе ФЛ миокарда контрольных кроликов. Испытуемые вещества. нормализуя спектр ФЛ. уменьшают значение отношения кислых ФЛ к нейтральным. 18-ДГК снижает его на 44.42, а АСГК - на" ¿3,2?. Полиспонин уменьшил этот, показатель на. 23,455. •- '

В липидах печени контрольных . кроликов значение отношения кислых ФЛ к нейтральным возросло,на 45,2%. 18-ДГК и АСГК уменьшают этот показатель на 39,6 .и 33 , 955, а полиспонин - лишь на 18,8%.

Эти данное говорят о том. . что при атеросклерозе в стенке аорты, миокарде и печени резко возрастает содержание ЛФХ, ЛФЭ й ЛФК, обладающих детергентньши свойствами, которые могут самым серьезным образом Влиять на'функционирование мембран. 18-ДГК и . АСГК оказали нормализующее влияние на Фракции.ФЛ в этих органах.

Атеросклероз протекал на фоне.выраженных Изменений и жирно* кислотного состава липидов органов контрольных кроликов. У этих животных суша насыщенных ЖК липидоз стенки аорты увеличилась на 19,95?, в основном за счет увеличения содержания.С16:0 и С1£|:0 и уменьшения уровней 'непредельных ЯК. Яри этом сумма непредельных ЖК снизилась на 16.9Х. 18-ДГК снижает сумму предельных Ж на 16.1% и увеличивает сумму непредельных на 1?, 1%. АСГК уменьшает первый показатель на 10,5% и увеличивает второй - на 12.8%.

Сумма насыщенных ВК липидов миокарда контрольных кроликов возросла на 14.1%, • а ненасыщенных М снизилась на 15,5%. 18-ДГК к АСПС уменьшают сумму насыщенных.Щ на 10,2 и 7,1% и увеличивают сумму ненасыщенных соответственно нэ 11.7 и 9.2%. ....

В липидах печени у кроликов с атеросклерозом сумма насыщенных ЖК повысилась на 34. IX» а ненасыщенных - понизилась на 45.АТ,. 18-ДГК и АСГК уменьшают сумму предельных ЖК на 30.6 И 33% и увеличивают сумму непредельных соответственно на 42.7 и 43.8%.

Таблица 2

Влияние 18-дегидроглицирретовой кьслоты(18-ДГЮ. аммонийной соли глицирретовой кислоты (АСШ и ..пслиснонина на фосфолилидный состав(в мкг/г) стенки аорты кроликов при. атеросклсрозе(мЧ и.п = 7),

фосфолипиды - Интактные Контроль 18-ДШ25 мг/кг) АСШ25 мг/кг) Полиспонин

" кролики ; (холестерин) + холестерин + холестерин + холестерин

Лкзофосфатидилхолин 15,5 + 0.54 40.3 + 0.94 18,1 «• 0,52 ".' 20.3 0.68 30.2 + 0.78

Р < 0.001 < 0.001 < 0.001

Фосфатидилеерин 38.4 + 0.85 71,1 + 1,15 35,4 + 1.01- 37.4 + 1,02 55.2 + 0.85

Р . <0,001 < 0,001 < 0.001

Лизофосфатидилэта- 26.2 + 0,58

ноламин 21.3 + 0.49 54.5' + 0,94 25.fi + 0.83 35,4 + 0,98

Р : .< 0,001 < 0,001 < 0,001

Сфингомиелин 87,4.± 1,68 120.1 + 5,59 96.1 + 4.17 91.4 + 3,56 103,5 + 4.84

Р <0,002 < 0.001 < 0,05

Фосфатидилинозитол 24,6 + а, 62 34.2 + 0,77 27.1 + 0,64 30.1 + 0,58' 33.3 + 0,75

Р < 0.001 < 0,001 >0,5

Фосфатидилхолин 209.1 + 8,78 ' 86.4 + 1,88 192.4 + 5.57 181.2 + 5,36 144.1 + 5.10

Р ■ <0,001 <0.001 < 0.001

Фосфатидалэтаноламин 139,1 + 5,83 50.3 + 1.13 124.0 + 4.68 109,6 + 5,15 84.3. + 4,84

р . < 0.001 <0.001 < 0.001

Кардиолипин 31.5 + 0.91 42. 3 ±' 0.80 33.9 + 0,77 37.3 + 1.04 40,8 + 0.97

.Р ' < 0.001 < 0.002 - < 0.001

Лизофосфатидная

кислота 10.1 ± 0,52 21.7 £ 0,58 '12,6 + 0.60 11.5 + 0.51 16.3 + 0.61

Р < 0.001 < 0,001 < 0,001

Фосфатидная кислота 12.1 ± 0, 57 22.4 ±0,77 13.8 + 0,61 12.6 + 0,66 15.7 + 0.63

Р < 0.001 < 0,001 < 0.001

Р - достоверно по отношению к контрольным показателям.

Препараты ГК оказывают, нормализующее влияние на спектры ФЛ и ЖК липидов стенки аорты, миокарда и печени'при атеросклерозе н в этом отношении также значительно превосходят полиспонин. •

. Таким образом. 18-ДГК и АСГК обладают выраженным гиполнпиде-. мчческим действием, нормализуют спектр ЛП. снижают содержание "ли-пидов в органах кроликов при развитии атеросклероза. Кроме этого, снн нормализуют спектры ФЛ и Щ{ лигоздов .сыворотки, эритроцитов и исследованных органов животных. 18-ДГК и.АСГК по своей, гиполипи-демической активности значительно превосходят полиспонин.

Известно, что активация ПОЛ имеет■непосредственное отношение я'развитию-атеросклероза и ишемической болезни (Regnstrom J. et al., 1992; Leonard M.В. et al... 1935).

Трехмесячная атерогашая диета приводит к возрастанию интенсивности хемилюминесцёнцш! сыворотки крови контрол;>иых животных в ' 2,9 раза. Применение пслнспокнна снижает интенсивность сверхслабого свечения на '¿1,8%. 1В-ДГК уменьшает этот показатель на 60,6%, а АСГК - На 53,4л.

Как известно, в процессе ПОЛ образуются вещества с цитоток-снческин действием,- как, например. ГП и МДА, оказасаздцие 'повреждающее действие на биомембраны,-, их компоненты и 'эндотелиалы'ше 'Клетки (Joy R.H." efc al., 1990).' Кроме того, активация ПОЛ ведет к усиленна модификаций атерогенчых Л.Ч (Yla-fierttuala S., 1991). Некоторые исследователи даже считают повышенный уровень лнпопереки-сен в плазме более Информативным показателем, чем гиперхолестери-немию (Stringer Hi D. et al. 1989). ■

Результаты показали, что максимальное уаэличнне ГП в сыворотке крови контрольных животных наблюдается через три месяца с начала кормления- холестерином. Содержание конъюгированных дие-юв (ЯД) й твнкегонозШО у них к этому сроку увеличивается на 32.6 и 38, IS (табл. 3). При этом уровень ОЛ возрастает в 4,2 раза. Полиспонин уменьшает содержание 0Л на 32,22, а КД ¡1 ДК - на 6,1 и 9,5%. 13-ДГК сникает.содержание ОЛ в 2,2 раза, КД- на 24,4% и ДК - на 28,5%, а АСГК соответственно в 2,2 раза, на 16.3 н 23,81.

Атеросклероз сопровождается и резким возрастанием МДА в сыворотке крош: контрольных животных(таол. 3). Уровень МДА при на-тнвнрй ПОЛ увеличивается на ЗГИ!. 60-й и йОгй. дни опыта соответе-/ тйенно в 3.8: В.и 9 раз. Аналогичная динамика роста содержания МДА. выявлена и при изучении аскорбйТ- и НАДФ-!1,-зазиси!гых ПО". Эти изменения наблюдаются на фоне гипёрхолестермн- и■гипертригли-церндемии, высокого уровня в сыворотке крови атерогенных ЛП И Гй.

Таблица 3

Вдденка Хвтдег .чроглнцирретовой кислатыШ-ДПО аммонийной соли глицирретозой кислоты (АСШ и полиспснииа на содержание гидроперекисей ли пи доз и налогового диальдегида- (МДА) в сыворотке крови кроликов прл атеросклерозе Ш + т. п = 7)

1 У С Л О 3 1! Я о п ы га -. Срок исследования (дни) Общие липиды, Г/Л Копъкпфован-| Диекозие ные диеиы 1 кетсны КДД, ш<оль/мг белка

на 1 нг липядов Нативное НЩ'Кг-

Иитактииа кролики 3.69 ± 0.080 1 0.33 + 0.004 0.13 £ 0.001 0.15 +. 0,005 0.53 £ 0,011

Контроль (холасгеспн) • 90 . 15. 71 ± 0,274 0.49 ± 0.005. 0.21 ± 0.001 1,*35 + 0.020 5. 79 ± 0.063

18-ДШ25 мг/кгУ холестерин . 20' Р 7.00 ± 0.268 < 0,001 0,37 £ 0.004 .< 0,001 0,15 ± 0.002 < 0.001 0,50 ± 0.012. < 0, 001 3.74 £ 0.045 . .< 0.001 .

АСПЦ25 ИГ/КГ) .+ холестерин ■ 30 •р- ,7.01 £ 0,135 . < 0, 001 0.41 ± 0,013 < 0.С01 0.10 + 0.000 < 0,001 0.70. + 0,019 < 0,001 ' 3,88 ± 0.057 < 0.001

Полислошш + холзстерк» • .20 'Р 10,65 ± 0.255 < 0.00.1 [О. ¿6 •£ 0.009 -| < 0.01 0,19 ± 0.001 < 0.001. • , 1,08 £ 0.023 <0.001 5.19 + 0,070" , < 0,001

Р - достоверно по отшзешп» к шпролышм показателям.

Введение препаратов для коррекции выявленных изменений Приводит к значительному сиижеиш образования МДА во всех трех системах в течение всего срока наблюдения как по сравнению с контролем, так. и с получавшими полиспонин. ' Трехмесячное введение 18-ДГК снижает содержание МДА при нативном, аскорбат- и НАД?Нг-зависимом 1Ш на 62,9: 29.3 и 35,4%. АСГК ;/ме'кьшает зги показатели соответственно на 48,1; 25,7 и 32,9%/ При этом полиспонин уменьшает образование МДА в этих системах только на 20; 4 и 10,3%. /

Свободнораднкальные реакции контролируются антноксидантнсй системой организма. Торможение процессов аутоокисдения осущест-. ьляется этой системой, вклячающей антиоксйданти и ферменты, дне- ■ мутирующие активные формы кислорода и элиминирующие перекиси (Меус1ап1 М., 19Э5). Нами установлено снижение активности СОД в крови животных контрольной группы в течение первого месяца исследования, а в дальнейшем отмечено повышение активности фермента, что можно связать с подключением механизмов адаптации, направленных на уменьшение повреждающего действия продуктов ПОЛ ( Бельчен-ко Д.П., Лазарев В,Н., 1989; Тогпада Н. е1 аХ., 1936), Однако; ее- . ли в . сыворотке крови контрольных кроликов ОЛ возрастают к концу опыта в 4,2 раза, та. активность фермента увеличивается лишь в 1,5 раза. Полиспонин приводит к возрастанию активности СОД только к концу опыта. В то же время 18-ДГК и АСГК значительно повышают активность СОД в течение всого срока исследования, что согласуется с Показателями хемиляминесценции, содержанием ГП.и МДА. Особенно высокая активность фермента под влиянием препаратов наблюдалась В третий месяц эксперимента. Первый препарат гавыиает активность СОД 8 2.6 раза, а второй - в 2,4 раза;

Атеросклероз сопровождался активацией ПОЛ и в тканях органов кроликов. Это послужило основанием для изучения влияния препаратов на процессы ПОЛ в стенке аорта, миокарде и печени животных. .

Трехмесячная холестериновая диета приводит к резкому возрастанию содержания ГП в органах. контрольных кроликов. Испытуемые вещества уменьшают содержание .ГП в стенке аорты в 2,7-3,1 раза, в миокарде в 2,3-2,8 раза, а в печени в 1,6-1,9 раза!. Влияние по-лиспонина на ГП было намного слабее.

В органах контрольных кроликов наблюдается, значительное увеличение уровня и МДА.' Использование 18-ДГК и АСГК уменьшает образование этого продукта в стенке аорты «а 29 и 30,255, в миокарде -на 28,2 й 23,2% и в печени - на 33.3 и 25.1%. Полиспонин снижает эти показатели соответственно яа 13,9; 17.1 и 13.8%. Обнаруженные

изменения интенсивности ПОЛ в тканях коррегировали с таховши а сыворотке крови кроликов.

Активность фермента защиты - СОД в органах контрольных животных была намного ниже, чём у интактнйх. Все три препарата увеличивают активность СОД относительно контроля,' Однако этот показатель у жвотных. получавших полиспонин. был ниже на 46,7 и 42.3% в стенке аорты, на 33,8 и 29.6% в миокарде и на. 23.9 и 26.1% в печени, чем у леченных 18-ДГК л ЛСГК. Показателя активности СОД в органах согласуются с таковыми в крови этих животных^

Увеличение продуктов ПОЛ в органах животных контрольной группы наблюдается на фоне пониженной активности и другого фермента -антиокяслительной' защиты - каталазы'. . Так. активность ката-лазы у животных этой группы была ниже, чем у интактных, в стенке аорты на 16.5%. в миокарде на 13,8%-и з печени на 16,9%. АСГК и, особенно. 18-ДГК значительно увеличивают значение этого показателя как ло отношению к контролю, так по. отношению к таковому у ицтактных и у получавших полиспонин животных..

На основании этих исследований можно сказать, что испытуемые вещества значительно снижает содержание.КД, ДК. МДА и. повышают активность ферментов СОД и каталазы. то есть проявляют выраженное антиоксидантное свойство.

Антиоксидантное свойство 18-ДГК И АСГК может рыть обусловлено тем. что они обладает ситиа противовоспалительным действием. Большинство противовоспалительных препаратов обладает антнокси-дантным свойством и. наоборот, многим антиокепдантам прйсуць противовоспалительный эффект(Лукьянова Л.Р., 1991), Противовоспалительное действие лекарств связано с их способностью ингибнровать ферменты циклооксигеназу и' липоокейгеназу," что резко угнетает синтез простагланд)нов и лейкотрненоа. • Эти фермента участвуют в генераций свободных радикалов и их ингаСкроедние приводит к подавлений ЛОЛ. Субстратом Для синтеза простагланданЬв и леЯкотрие-нов является арахидойовая кислота, а испытуемые препараты не только, благоприятно влияют иа спектр ФЛ, но. и увеличивают содержание этой непредельной Ж как в крови, так.и в тканях. Вероятно, 13.-ЛГК й АСГИ, мнгябируя циклооксигеназуй липооксигеназу. блокирую- образование простагландинов и лейкотриеноп.

Морфологическое исследование аорт контрольных кроликов пока- ; зало, что основными проявлениями атеросклероза были липоидоз и фиброзные бляшки (рис. 3). Локализация жировых пятен и полосок не имели определенной закономерности й носили больае диффузный ха-

Влин ннс-'препаратов нь площади атероскле-ротических изменении аорты кроликов при ^ разшгпш атеросклероза

30

25 Ч

10

Все изменения Липоидов Фпброзньк- бляшки Рис. 3. Обозначения те же..что'и »а рис. 2.

Влияние преИоратоц на общий холестерИн(ОХ) и триглицериды(ТГ) в органах кроликов при , % регрессии атеросклероза . 1во -л-

Во-

80-

о р т а М и о к а р д П е. ч е н ь Рис. 4. Обозначения те же, что и на рис. 2.

' рак-гер. Средняя площадь атеросхлероткческих изменений (липокдоз + фиброзные бляшда) у этих животных составила 86.5 2 7,17% поверхности инткмьг аорты (38,9 ± 3.26 и 47.7 ± 3.32Х). . Следует отметить, что атеросклеротичесхие поражения аорты обнаружены у всех кроликов-контрольной группу. Гистологическая картина характеризуется отеком и тканевой перестройкой интимы и субкнтимальной зоны средней оболочки, скоплением огромного количества пенистых клеток. четко отделяющихся от подлежащих участков средней сборочки. Эластические мембраны разволокнены, наблюдаются фиброзные б, /¡шки, кальциноз и некроз. "

В группе животных, лолучавиих наряду с холестерином 18-ДГК в дозе 25 мг/кг, атеросклеротические изменения аорты обнаружен« только у половины кроликов. Средняя площадь поражений аорты разнялась 36,7 ±'1,50% поверхности интимы, осисвну» часть которой зайикал липокдоз. составной«« 10.0 ±.0.78». Увеличение дозИ . 18-ДГК до 35 мг/кг усиливает антнатегогенное -действие препарата. Средняя площадь атеросклеротичсских поражений аорты у ж'шотних этой, группа составила 14,8 * 1,22% поверхности ее иктшм. С группе кр'олишз. подучаввпх АСГК. средняя площадь атсросклсротическнх поражений аорты равнялась 17,3 ± 1,64Я'поверхности. интнмц. Толщина стенки и интима аерт кроликов, леченных 18-ДГК-и АСГК. бала близкой к тгдовмм у штактных. ¡В большинстве участках по количеству клеточный элементов и расположении воЛжнкстнх структур стенка аорты этих животных пе отличалась от порг-ты. Применение 18-ДГК и АСГК в .дозах 25 мг/кг уменыгаст сродная.площадь атсроск-• леротичесхих поражений аорты в 5.13 и 5 раз, а площадь £иСрозлих бляшек - в 7. И и 5.03 раз. 18-ДГК в дозе 35 иг/кг уггеимгает эти Показатели в 7,57 и 5,05 ра;. ..

Средняя: плоэддь атерссклеротичвеп*. изменений порть: кроликов, получавших полйспошш, - оказалась большей,, чем -у получавших 18-ДГК н АСГК в дозах 25 мг/кг, в 1.32 и 1.78 раз, а фиброзных бляшек -соответственно в 2;16 и 1,79 раз. 18-ДГК в дозе 35 йг/кг уменьшает эти показатели, по сравнения с таковким у леченных полиспоня-ксм, в 2 я 2.3 раза. Стенка аорта животных, принимавших поянспо-Ш1, была неравномерно утолщена' за счзт бляйжовндных вабухашШ них" 1ш н прилежащих' участков. В местах утолщения стешсн аорты интима отечна с мелкими очагшм кальцннозз.

В последней серна эхепершентой йзучеио влияние испытуемых - препаратов я полиспонина нк показателя лилэдного обмена в сыворотке крови и органах ' кроликов в процессе обратного развитая

(регрессии) гиперлйпидемии'и атеросклероза. В течение первых трех месяцев животным вводили холестерин для воспроизведения гипеоли-пидемии и атеросклероза. ' За этот период- у ннх развивается есраженная гиперхолестерин- и гшшртриглицери'демия, 'увеличивается содержание сумми пре-&- и (5-ЛП. Оф и СЙЖ, а также повышается значение молярного соотношения ЭХ/ОФ. Трехмесячное введение холестерина айвовым вызывает дислипопротеидемию, за счет увеличения ате-рогашах а уменьшения антиатерогенных .ЛП. и снижение отношения а-ЛИ/^ЛП. У этих кроликов резко возрастает содержание ОХ и ТГ в стенке аорты, миокарде и печени. Эти данные был::-приняты как исходные (результаты, полученные сразу после отмены холестерина).•

После прекращения введения холестерина наблюдается обратное разьитие сформировавшегося атеросклероза, которое протекает на Фоне снижения уровней изучаемых показателей липидного обмена.

Через три месяца после отмени .атерогенной диёты в сьшортке крови контрольных (нелечениых) кроликов содержание ОХ снижается, по сравнению с исходным, иа 65,3%. ОФ на 62.3%, ТГ на 37,52, ОЖ на 29,4%, суммы пре-{5- и р-ЛП на 49,4%. Значение молярного соотношения ОХ/ОФ почти не изменилось. За три месяца изучаемые показатели в крови контрольных животных не достигли нормальных значений.. Так, содержание ОХ, ТГ, ШС и судаы пре-р- и &-ЛП превышает уровень таковых у ийтактных кроликов соответственно в 3,2; 3,5; 1.9 и 4,3 раза.

Изучение спектра ЛП-показало, Что на 30-Я день после отмены холестерина содержание пре-£-.и'0-ЛП сыворотки кровй контрольных животных было выше, чем у интактных в 2,1 раза и иа 21,4%, а а-ЛП ниже иа 33,4%. При этом значение' отношения а-ЛП/р-ЛП было меньше ингактного на 42,515.

Через три месяца после Прекращения введения холестерина животным нелеченной группы его содержание в стенке аорты превышает нитак'гный уровень в 5,3 раза, в миокарде в 1,6 раза и в печени в 4,1 раза, а ТГ соответственно в 2,6; 1,8 и почти 2 раза.

Снижение изучаемых показателей липидного обмена у животных контрольной группы происходит очень медленно и даже через три месяца, после прекращения введения холестерина, полученные данные намного превышают интактные уровни. Это указывав* на стойкие нарушения метаболизма липидов при экспериментальном атеросклерозе.

Полиспонин прибодит к большему снижении ' содержания липидов как в сывортке крови, так и в органах животных и уменьшению изменений спектра ЛП, по сравнению с этими показателями у контрольных

гавоткых. Но под действием препарата сравнения уровни липидов и спектр ЛП не достигают уровней интакткых .тавотных. •

Испытуемые средства значительно- ускоряют процесс регрессии гиперлйпидёмии и атеросклероза, нормализуют липиДчый- обмен, спектр ЛП в сывортке крови, содержание ОХ и.ТГ в органах кроликов. 13~ДГКв дозе 10 мг/кг за три месяца уменьшает концентрацию ОХ в сывортке крови, по сравнению с таковым у кроликов, леченных полиспонйком, на ЗОЙ, а ТГ, ШС, сумму пре-р- и ¡¡-ЛИ и зна>, лже молярного соотношения ОХ/О'5 соответственно на 69,1: 15.7; 36,9 и 34,52. Лечение 18-ДГК к АСГК ¡з дозах 25 и 35 мг/кг оказывает еще более сильный эффект. Следует отметить, что оба препарата уже в первый месяц лечения нормализуют спектр ЛП. а к концу исследования - яипиды сыворотки крови. 18-ДГК и АСГК не столь интенсивно снижали ОФ. концентрация которых во все сроки исследования была выше, чем в контрольной и леченной полнспонином группах. ■

Трехмесячное лечение полиспоиинсм не приводит к нормализации лнпмдного обмена и в органах животных. Содержание ОХ и.ТГ у этих кроликов превышает интактиый уровень в стенке аортм в 3,8 и 1.3 раза, в миокарде - в 1.3 и 1,6 раза и в печени - в.2.6 и 1,4 разг. Препараты ГК интенсивно снижают уровни этих липидов в органах животных, значения которых становятся близким к таковым у интакт-ных(рис. 4). А содержание ОХ в миокарде кроликов, леченных 13-ДГ1С в дозах 25 и 35 мг/кг, оказалось даже ниже, чем у интактних животных.

Под влиянием атерогенной диеты наибольшее отложение холестерина происходит в стенке аорты и в ткани печени.

3 аортах кроликов контрольной группы на 90-день наблюдения атеросклеротаческие изменен-я занимали все еще-значительную площадь- поверхности интшш. Средняя площадь атеро'склеротическнх изменений аорты достигала 34,5 ± 1,90% поверхности интимы (липоидоэ - 19,1 ± 1,56% и фиброзные бляшки - 15.4 ± 0,71%). Это указывает на то, что у этих животных сформировавшиеся атвроскяеротическйе поражения аорты полностью не рассасываются. Наин данные согласуются и с результатами других авторов (Б1агу Н.С., 1984).

Полнспонин уменьшает площадь сформировавшихся зтеросклероти-чес их поражений аорты п 2,12 раза, лнпо.чдоза в 2 раза, а фиброзных бляшек в 2.2 раза. Он.не повлиял на строение бляшек, только немного уменьшил их размеры,

1В-ДГК и АСГК значительно ускорили процесс рассасывания лй-пидных отложений в аортах кроликов. Интима аорт животных, лечен-

ных этими препаратами, практически не отличалась от- интактной. Под действием 18-ДГК в дозе 25 мг/кг средняя площадь сформировавшихся атеросклерогических поражений уменьшается в 5.4 раза, липо-идоза в 5 раз и фиброзных бляшек в 5,9 раза. 18-ДГК уменьшает зТн показатели, по сравнению с таковыми у леченных полиспонином, со-, ответственно в 2,5: 2,4 и ¡2,6 раза, а 18-ДГК в.'дозе 35 мг/кг соответственно в 2,8; 2,7 и 3 раза. Применение АСГК в дозе ?5 мг/кг уменьшает среднюю площадь сформировавшихся атеросклеротичесхнх поражений аорты в 5 раз, а липоидоза и-фиброзных бляшек - в 4,7 и 5,5 раз. • У этих'животных средняя площадь атеросклерогических поражений аорть: была меньше, чем у леченных полиспошшом. в 2,3 раза, а пипоидоза и фиброзных бляшек в 2.3 и' 2,5 раза. В этом отношений 18-ДГК и АСГК значительно превосходят пошепонин.

Следовательно,■18-ДГК и АСГК обладают выраженным гиполипиде-шческйм и антисксидацтным действиями и .' значительно у-шиьшаит площади развиващихся и уже сформировавшихся- атеросклеротических изменений аорты при атеросклерозе у кроликов.

По данным ряда авторов (Даценко Я.М.Н др;, . 1984: Василенко-Ю.Т. и др., 1993), некоторые тритериеноиды и растительные,стерои-ды, в том числе выделенные из солодки голой, кнгибируют всасывание холестерина и усиливают его окисляемость в желчные кислоты ц выделение с желчью. Отсюда можно предположить, что 18-ДГК и АСГК. относящиеся к тритерпеноидам, могут Обладать этим свойством. 18-ДГК и АСГК снижают содержание йре-р-ЛП, состоящих в основном нЭ ТГ. , что коррелирует со значительным снижением их в крови, а выраженное уменьшение фракции р-ЛП коррелирует с их гипохолесте-ринемичесхим действием. Имеются сведения о влиянии тритерпеновых соединений на структуру ЛП крови, проницаемость и реактивность стенки артерий и микрососудов (Лопина Н.П. и др.,1992). Не исключено. Что протйвоатеросклэротическое действиеизучаемых препаратов обусловлена и их влиянием на строение ЛП крови. Это действие препаратов связано с возрастанием й-ЛИ и замедлением выхода из ЛП и сложения холестерина в интиме аорты и, возможно, вследствие ингибировайия активности в Ней липопротеидлипазы, так. как некоторые исследователи указывают .на снижение активности этого фермента под влиянием тритерпеновых соединений (Василенко Ю.К. и др., 1981). 18-ДГК и АСГК не оказывают особого влияния на содержание ОФ. которые являясь Гидрофильными коллоидами, способствуют удержанию холестерина в.стабильном состоянии и препятствуют его выпадению в сосудистую стенку^ а в составе ЛП Высокой плотности -

- 3J -

ва ёг кислсталарн тпркибларини тиклайдилар. Уларнинг липидлар перекнели оксидлани'щида ^оснл буладнган иоддаларии (липидлар гадро-перохеидлари. . малой диалдегид)' камайтприши ва окейдяммшга царш ферментларшшг(супероксиддисмутаза ва каталаза) Фаоллигинн ошй-рицлари аницландн. 18-ДГК ва ГКАТ атерссклерознинг ривожланишида б^ладиган аортадаги атеросклеротик «згаришларни ,ва риво.челапиб булган атеросклеротик жаро^атлзрни кескин камайтиришар ' экан. 18-ДГК ГНДТдан озгина фаолроц. Иккала модда урганилган хуг-хиат-лари буйнча полиспоштга нисбатан aнча хучлн б?либ Ч1цдк.

Шундай цнлиб. ГК унумлари кучли гиполипиденик. антиатероск-леротик ва антиоксидантлик таъсирига эга. Улардаги б у хусусмят-ларнииг борлиги ва маълум булган яллиглашшга царши хоссаси худа мое келгаплигшш хисобга олиб, 18-ДГК ва ГКАТ липидлар алмашннуви бузнлишида са атеросклерозда профилактика ва даволаш воситаси си-Оагида цУлланилиши тавсия цилинади. '

Summary

A.Kh. Abdullaev. Derivatives of Glycyrrhstic Acid are the

flew Group of Hypolipid and antiatliercsclerotic Agents.

It is Kp.own. the atherosclerosis is relates to the number wide spread diseases and is one of main reasons for mortality and disability in population. Majority of morden antiatherosclerotic agents have not desired effect and often have serio«3 side effects and complications. Thai is way search and studing пев higo-active and hypotoxic drugs for long terra using is the importance task.

In this connection, we had studed hypolipid.' antiatherosclerotlc and antioxidant characteristics of derivatives of Glycyr-rfietic Acid(GA) from plant Clycyrrbiza glabra L., wlch is widespread in Central Asia.

Comparative sluding 11 derivatives of GA for rats had showed that all of then had hypolipid end ¿ntlatheronclcrotlc characteristics, and ÍB-Íjehydroglj'cyrrhátic AciddO-DGA) and Gly-cyr-fietic Acids amraonatiAGA) is nain active. Follow detailed stu-dinc of 10-DGA find AGA in rabbit's control atherosclerosis showed that doses 10, 25, 35 rr.gAg of 1D-DGA and AGA reduc-ed esvel of lipids, co«non cholesterol, triglycerides, free fatty acids, san quantity'of pre-beta-lipoprotein and beta-lipoprsteln and Incrsa-

se the contain phosphollpldes. They reduce atherogenic and Increase antiatherogenic fraction of lipoproteins and delay the development of hyperlipidemia .and accumulation of lipid in the organ. The medicines restore phospholipid arid fatty acid structures of lipids in serura. erytrocytes and in organs;

18-DGA and AGA-significantly reduces the contain of interfile- . di.ate and last products of liyperoxydation of lipides and raises the activity of antioxydate system's .enzyme(superoxyddisaiutaza and catalase). They have influence for reducing the area of atherosclerotic affects in aorta bothe in development of atherosclerosis. and in already formed atherosclerotic changes. In this cage 18-DGA is store active AGA. 18-DGA and AGA are niore active po-lysponinunl for these Indices.

Thus, derivatives of GA have hypolipid; antiatheroscleroti'o and antioxidants charactet istics. This successful combination of characteristics and its wellkhown antiinflanttiotory effect can re-coraendate 18-DGA and AGA for prevention and treatment, of disorders of fat metsbolisni and atherosclerosis.

P. -- iloAHiicai'o' k nc'inTH u .<■'■' <_.'■/, 3ok.— in- tV- K'-TiipMK. \t .199 -.r.V A .. -.m Ofrtg>iHTuito b Alt T1IK i

i . <

TauiKciif, Ilacoit, 30.