Автореферат и диссертация по медицине (14.01.01) на тему:Прогнозирование овариального ответа в программах вспомогательных репродуктивных технологий с использованием молекулярно-генетических маркеров

На правах рукописи

ВЛАДИМИРОВА Инна Владимировна

ПРОГНОЗИРОВАНИЕ ОВАРИАЛЬНОГО ОТВЕТА В ПРОГРАММАХ ВСПОМОГАТЕЛЬНЫХ РЕПРОДУКТИВНЫХ ТЕХНОЛОГИЙ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКИХ МАРКЕРОВ

14.01.01 - акушерство и гинекология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

; .. •■: '.и /; :э

005558778

Москва - 2015

005558778

Работа выполнена в федеральном государственном бюджетном учреждении «Научный центр акушерства, гинекологии и перинатологии имени академика В.И. Кулакова» Министерства здравоохранения Российской Федерации

Научные руководители:

доктор медицинских наук Калинина Елена Анатольевна

кандидат медицинских наук Донников Андрей Евгеньевич

Официальные оппоненты:

Назаренко Татьяна Алексеевна - доктор медицинских наук, профессор, ГБУЗ МО "Московский областной научно-исследовательский институт акушерства и гинекологии", отделение репродуктологии, главный научный сотрудник

Серебренникова Клара Георгиевна - доктор медицинских наук, профессор, ГБОУ ВПО «Первый Московский государственный медицинский университет имени И.М. Сеченова» Минздрава России, кафедра семейной медицины, профессор

Ведущая организация: ГБОУ ВПО «Российский национальный исследовательский медицинский университет имени Н.И. Пирогова» Минздрава России

Защита состоится «17» марта 2015 года в 13 часов на заседании диссертационного совета Д 208.125.01 на базе федерального государственного бюджетного учреждения «Научный центр акушерства, гинекологии и перинатологии имени академика В.И. Кулакова» по адресу: 117997, г. Москва, ул. Академика Опарина, д.4

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке и на сайте федерального государственного бюджетного учреждения «Научный центр акушерства, гинекологии и перинатологии имени академика В.И. Кулакова» Министерства здравоохранения Российской Федерации http://sciense.ncagp.ru/upfiles/pdf/Avtoref VladimirovaIV.pdf

Автореферат разослан «_»_2015 г.

Ученый секретарь диссертационного совета доктор медицинских наук

Калинина Елена Анатольевна

ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность проблемы

Распространенность бесплодия среди супружеских пар репродуктивного возраста неуклонно растет, достигая 15% (К.Г. Серебренникова, 2010; О. ОюассЫш, 2014). В связи с этим потребность во вспомогательных репродуктивных технологиях (ВРТ) возрастает, и существует постоянная необходимость в разработке новых наиболее эффективных и безопасных подходов (Г.Т. Сухих, 2010; Б. Актае, 2011). Ожидаемый результат лечения методом ЭКО в значительной степени зависит от эффективности проводимой стимуляции функции яичников. При этом овариальный ответ широко варьирует среди пациенток. Так, примерно от 9 до 24% случаев овариальный ответ гораздо ниже ожидаемого. У пациенток с «бедным» ответом получают мало ооцитов, мало эмбрионов, что снижает шансы наступления беременности и эффективность программ ВРТ (Т.А. Назаренко, К.В. Краснопольская, 2012). В то же время непредвиденное развитие «гипер» овариального ответа, встречающегося до 33%, может привести к такому серьезному осложнению, как синдром гиперстимуляции яичников (Е.А. Калинина, 2010).

Существуют различные предикторы овариального ответа в программах ВРТ (возраст, овариальный резерв, гормональный статус, неблагоприятные экзогенные факторы и другие). Однако эти маркеры не обладают абсолютной предиктивной способностью (Б. Пева^ 2013; В. Ь1ес1о, 2014). Современные подходы к диагностике и лечению бесплодных супружеских пар основаны на достижениях фундаментальных наук в области изучения молекулярно-генетических механизмов. Генетический скрининг может предоставить конкретную информацию о состоянии репродуктивной системы женщины еще до начала проведения программы экстракорпорального оплодотворения (ЭКО) (С. Alviggi, 2012). Полученные в результате генотипирования данные не меняются с возрастом, не зависят от веса, от дня менструального цикла и

так далее, и могут определяться однократно, в отличие от гормональных маркеров (В. С. Баранов, 2010).

Таким образом, представляется актуальным, современным и перспективным изучение молекулярно-генетических предикторов ответа яичников на стимуляцию суперовуляции, особенностей фолликулогенеза, оогенеза и эмбриогенеза в программах ВРТ, чему и посвящено данное научное исследование.

Цель_исследования: оптимизация программ вспомогательных

репродуктивных технологий с использованием молекулярно-генетических маркеров как прогностических факторов овариального ответа на стимуляцию суперовуляции.

Задачи исследования:

1. Оценить данные анамнеза, параметры клинического и гормонального статуса пациенток с различным овариальным ответом в программах ВРТ.

2. Определить значимые молекулярно-генетические предикторы ответа яичников на стимуляцию суперовуляции.

3. Проанализировать особенности фолликулогенеза, оогенеза и раннего эмбриогенеза у обследуемых пациенток в зависимости от полиморфизма генов.

4. Провести анализ эффективности программ ВРТ в зависимости от полиморфизма исследуемых генов.

5. Разработать алгоритм персонализированного проведения программ ВРТ с учетом молекулярно-генетических предикторов овариального ответа.

Научная новизна

На основании проведенного исследования представлены и научно обоснованы новые данные об особенностях ответа яичников на стимуляцию суперовуляции с учетом молекулярно-генетических предикторов. На

современном методическом уровне исследована ассоциация генотипа пациентки с процессами фолликулогенеза, оогенеза и эмбриогенеза.

Впервые проведен многофакторный прогностический анализ предиктивной значимости полиморфизма генов и созданы бинарные логистические регрессионные модели с проведением ЫОС-анализа, согласно которым выявлены независимые наиболее значимые генотипы полиморфизма генов, позволяющие достоверно прогнозировать степень зрелости ооцитов и качество получаемых эмбрионов.

На основании полученных данных проведена комплексная научная оценка исходов программ ВРТ с учетом прогностической значимости изученных молекулярно-генетических маркеров.

Практическая значимость

В ходе проведенного исследования определена и обоснована целесообразность генотипирования пациенток перед началом проведения программы ВРТ наряду с клинико-лабораторным обследованием.

Выявлены независимые генетические маркеры, детерминирующие процессы фолликулогенеза, оогенеза, эмбриогенеза, позволяющие прогнозировать овариальный ответ, степень зрелости получаемых ооцитов и качество эмбрионов. На основании этого разработан алгоритм персонализированного проведения программ ВРТ с учетом молекулярно-генетических маркеров, позволяющий проводить персонифицированный подбор протоколов стимуляции суперовуляции у пациенток в зависимости от генотипа с целью снижения риска развития осложнений (синдрома гиперстимуляции яичников) и получения незрелых ооцитов и эмбрионов низкого качества.

Представлены практические рекомендации по реализации программы ЭКО у пациенток в зависимости от генотипа, позволяющие оптимизировать и индивидуализировать программы ВРТ с точки зрения предиктивной медицины.

Положения, выносимые на защиту

1. Предикция, основанная исключительно на клинико-гормональных параметрах обследуемых пациенток, не позволяет точно определить овариальный ответ на стимуляцию суперовуляции. Наибольший процент ошибок наблюдается при прогнозировании нормального овариального ответа. Вероятность «гипер» ответа яичников при этом составляет 14,6%, «бедного» овариального ответа - 9,7%.

2. Значимым независимым молекулярно-генетическим предиктором «гипер» ответа яичников на стимуляцию суперовуляции является генотип G/G полиморфизма гена FSHR 2039 G>A (Ser680Asn). У 76% носительниц генотипа G/G с «гипер» ответом яичников на стимуляцию суперовуляции по исходным гормональным параметрам неточно прогнозируется нормальный овариальный ответ.

3. Вклад генетической предрасположенности в детерминацию оогенеза и эмбриогенеза составляет от 16 до 31% (на основании разработанных комплексных математических моделей). Ключевыми генами являются: для предикции получения незрелых ооцитов - LHCGR 935 A>G (Asn312Ser), VEGFA -634 G>C, AMHR2 -482 A>G; для предикции эмбрионов низкого качества - ESR1 -351 A>G [XBal],

4. Исследованные молекулярно-генетические маркеры ассоциированы с эффективностью программ ВРТ путем детерминации овариального ответа, качества ооцитов и эмбрионов.

Личный вклад автора Автор непосредственно участвовал в выборе научного направления исследования, разработке цели и задач исследования, обобщении, анализе, статистической обработке полученных данных. Автор лично принимал участие в ведении пациенток на всех этапах лечения бесплодия методом экстракорпорального оплодотворения (ЭКО) и переноса эмбрионов (ПЭ), в анализе и научной интерпретации результатов генотипирования пациенток.

Соответствие диссертации паспорту полученной специальности Научные положения диссертации соответствуют формуле специальности 14.01.01 - «акушерство и гинекология». Результаты проведенного исследования соответствуют области исследования специальности, конкретно пунктам 4 и 5 паспорта акушерства и гинекологии.

Апробация материалов диссертации Основные положения диссертации и результаты работы представлены и доложены на XV Всероссийском научном форуме «Мать и Дитя» (Москва, 2014), VII региональном научном форуме «Мать и Дитя» (Геленджик, 2014), XVIII Форуме «Национальные дни лабораторной медицины России - 2014» (Москва, 2014). Работа обсуждена на межклинической конференции отделения вспомогательных технологий в лечении бесплодия (06.11.2014г) и заседании апробационной комиссии ФГБУ «НЦАГиП им. В.И. Кулакова» Минздрава России (24.11.2014г, протокол № 15).

Внедрение результатов исследования в практику Разработанный на основании полученных результатов алгоритм персонализированного проведения программ ВРТ с учетом молекулярно-генетических маркеров внедрен в практическую деятельность отделения вспомогательных технологий в лечении бесплодия ФГБУ «НЦАГиП им. В.И. Кулакова» Минздрава России.

По теме диссертации опубликовано б печатных работ, из которых 5 входят в перечень рецензируемых научных журналов и изданий, рекомендованных ВАК.

Структура и объем диссертации Работа изложена на 132 страницах машинописного текста и состоит из введения, трех глав, заключения, выводов и практических рекомендаций. Работа иллюстрирована 18 таблицами и 25 рисунками. Библиографический указатель включает 102 литературных источника, из них 14 работ отечественных авторов, 88 - зарубежных авторов.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Материал и методы исследования

В соответствии с целью исследования и поставленными для ее решения задачами в рамках отделения вспомогательных технологий в лечении бесплодия (заведующий — д.м.н. Калинина Е.А.) и лаборатории молекулярно-генетических методов (заведующий - д.б.н. Трофимов Д.Ю.) ФГБУ «НЦАГи П им. В.И. Кулакова» Минздрава России проведено проспективное исследование, включавшее 160 пациенток, обратившихся для проведения программы экстракорпорального оплодотворения (ЭКО) в связи с бесплодием, обусловленным трубно-перитонеапьным фактором и/или мужским фактором (при отсутствии выраженной патозооспермии) в период с 2012 по 2014 гг. Все пациентки были ознакомлены с целью и поставленными задачами исследования, подписали информированное согласие.

Принадлежность пациенток к группе определялась в день введения триггера овуляции. Основную группу составили 80 пациенток с нормальным овариальным ответом на стимуляцию суперовуляции. Нормальный овариальный ответ предполагал рост от 4 до 10 фолликулов. Группа сравнения 1 сформирована из 40 пациенток с «бедным» ответом яичников на стимуляцию (согласно Bologna criteria, ESHRE 2011) (Ferraretti A.P., 2011). Группу сравнения 2 составили 40 пациенток с «гипер» ответом яичников на стимуляцию (согласно Educational Bulletin American Society of Reproductive Medicine, 2008).

Стимуляция суперовуляции проводилась по стандартному протоколу с антГнРг со 2-3 дня менструального цикла в комбинации с препаратами рФСГ. Оценка эмбрионов осуществлялась согласно классификации Istanbul consensus workshop on embryo assessment, ESHRE 2011.

Всем пациенткам проводилось генотипирование по представленным локусам: АМН 146 G>T (Ile49Ser) [rsl0407022]; AMHR2 -482 A>G [rs2002555]; ESR1 -397 T>C [PvuII] [rs2234693]; ESR1 -351 A>G [XBal] [rs9340799]; FSHR 2039 G>A (Ser680Asn) [rs6166]; LHCGR 935 A>G

(Asn312Ser) [rs2293275]; VEGFA -634 G>C [rs2010963]; ESR2 G>A [Rsal] [rs4986938]; LHCGR 872 A>G (Asn291Ser) [rsl2470652]; SERPINE1 (PAI-1) -675(5G>4G) [rsl799889] методом ПЦР с анализом кривых плавления модифицированным методом «примыкающих проб».

Исследование было одобрено комиссией по этике биомедицинских исследований Центра.

Статистическая обработка данных выполнена с помощью пакета прикладных программ «SPSS Statistics 17.0». Для сравнительного анализа данных в исследуемых группах применялись непараметрические методы (тест Крускала-Уоллиса) и метод у2.

Результаты собственных исследований и их обсуждение

Перед проведением основного статистического анализа проверили исследуемые группы пациенток на предмет конфаундинга.

При проведении анализа анамнестических данных, росто-весовых показателей пациенток с различным типом овариального ответа различий выявлено не было. По типу и этиологии бесплодия, по структуре перенесенных гинекологических заболеваний и оперативных вмешательств группы пациенток были сравнимы между собой (р>0,05).

При наличии мужского фактора бесплодия без выраженной патозооспермии оплодотворение ооцитов производилось методом ИКСИ. Статистически значимых различий между тремя исследуемыми группами по данному показателю не выявлено (х2, р=0,128).

В ходе проведения анализа предиктивной способности клинико-гормональных маркеров при прогнозировании овариального ответа для данной выборки пациенток обнаружено, что наибольшее количество расхождений наблюдалось у пациенток с исходно ожидаемым нормальным ответом. Этот прогноз не оправдался в 9,7% случаев, когда развился «бедный» ответ, а в 14,6% случаев непредвиденно развился «гипер» овариальный ответ. Таким образом, предикция, основанная исключительно

на клинико-гормональных параметрах, не позволяет точно прогнозировать овариальный ответ на стимуляцию суперовуляции.

Резюмируя полученные данные, представляется перспективным и актуальным поиск новых маркеров, позволяющих повысить точность прогнозирования овариального ответа, особенностей фолликулогенеза, оогенеза и эмбриогенеза.

При проведении анализа ассоциации полиморфизма исследуемых генов с типом овариального ответа выявлена ассоциация полиморфизма FSHR 2039 G>A (Ser680Asn) с типом овариального ответа. Носительство генотипа G/G предрасполагает к «гипер» ответу (%2 с поправкой Бонферрони, р=0,02; ОШ=3,49 (95% ДИ 1,3-11,6)) (рис.1).

100%-

FSHR 2039

G>A (Ser680Asn)

Ша/А □a/g Mg/g

Нормальный "Бедный" "Гипер" овариапьныйовариапьныйовариапьный ответ ответ ответ

Исследуемые группы

Рисунок 1

. Ассоциация полиморфизма гена FSHR 2039 G>A (Ser680Asn) с типом овариального ответа

Проведен анализ зависимости базального уровня ФСГ и АМГ в крови от генотипа РБНЛ 2039 в>А (8ег680А5п), статистически значимых данных получено не было.

Далее был проведен поиск ассоциации генотипа пациенток со степенью зрелости полученных ооцитов и качеством эмбрионов. Анализировалось распределение частоты генотипов исследуемых генов. По итогам проведенного исследования определен наиболее значимый полиморфизм исследованных генов, прогнозирующий получение незрелых ооцитов и эмбрионов низкого качества в программах ВРТ (табл. 1).

Таблица 1

Наиболее значимые генетические маркеры, прогнозирующие степень

зрелости полученных ооцитов и качество эмбрионов в программах ВРТ

Ген Замена белка или кодирующей последователь ности Роль полиморфизма генов в программах ВРТ

LHCGR 935 A>G (Asn312Ser) Генотип G/G более чем в 3 раза повышает риск получения только незрелых ооцитов (р=0,039; ОШ= 3,41( 95% ДИ 1,05-11,1))

VEGFA -634 G>C Генотип С/С более чем в 4 раза повышает риск получения только незрелых ооцитов (р=0,040; ОШ= 4,09 ( 95% ДИ 1,3-11,71))

AMHR2 -482A>G Генотип А/А более чем в 2 раза повышает риск получения незрелых ооцитов (р=0,025; ОШ=2,23(95% ДИ 1,1-4,3))

ESR1 -351A>G [XBal] Аллель G более чем в 2 раза повышает риск получения эмбрионов низкого качества (класса С) (р=0,022; 0111=2,3 (95% ДИ 1,1-4,6))

При сочетании двух неблагоприятных генотипов 935 G/G гена LHCGR и -634 С/С гена VEGFA риск получения незрелых ооцитов повышается более чем в 3 раза по сравнению с носительством других генотипов (р=0,019; ОШ= 3,2 (95% ДИ 1,2-11,3» (рис.2).

Степень зрелости полученных ооцитов

.....Только ¡/незрелые ооциты Зрелые и ■незрелы® ооциты

Только ^зрелые ооциты

Рисунок 2. Степень зрелости полученных ооцитов в зависимости от сочетания генотипов ЬНССЯ 935 А>в (АяпЗПБег) и УЕОК -634 ОС

(* р=0,019)

Проведенный анализ продемонстрировал связь генотипа пациенток с качеством полученных ооцитов и эмбрионов. Путем математического моделирования проведен комплексный многофакторный анализ, созданы бинарные логистические регрессионные модели, позволяющие прогнозировать степень зрелости ооцитов и качество эмбрионов на основании генотипа пациентки. Для валидации полученных моделей был проведен ЯОС-анализ (чувствительность составила от 73,6% до 99,3%, специфичность от 40% до 62,5%, значение А11С (площадь под кривой) от 69,9% до 77,4%).

Вклад генетической предрасположенности в детерминацию процессов оогенеза и эмбриогенеза составляет от 16% до 31% (вычислено по методу Наделькеркеса).

При проведении анализа связи генотипа пациенток с частотой наступления беременности выявлено, что ассоциация генетических факторов с эффективностью программ ВРТ опосредована через детерминацию овариального ответа, качества ооцитов и эмбрионов.

На основании полученных результатов разработан алгоритм персонализированного проведения программ ВРТ с учетом молекулярно-генетических маркеров (рис. 3).

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ПОЛИМОРФИЗМА ГЕНОВ

РЭНР 2039 ОА (БегбвОАзп) 1_НССР{ 935 А>С (АвпЗЧгвег) \ZEGFA -634 ОС АМН1Ч2 -482 А>в -351 А>в [ХВа1]

Генотип Генотип

\

Генотип Генотип

С/С А/А

Генотип АЮ или вЯЗ

Более чем в 3 раза повышен риск «гипер» ответа яичников на стимуляцию суперовуляции, развития СГЯ

- «Мягкие» протоколы стимуляции суперовуляции;

- ЭКО в естественном цикле

Более чем в 2 раза повышен риск получения только незрелых ооцитов

I

-Дозревание ооцитов

в специальной культуральной среде;

- не рекомендуется ИКСИ

Более чем в 2 раза повышен риск получения эмбрионов низкого качества

- Стимуляция суперовуляции для получения большего числа фолликулов, зрелых ооцитов, эмбрионов, пригодных для переноса;

- ИКСИ;

- Преимплантационный генетический скрининг (ПГС)

Рисунок 3. Алгоритм персонализированного проведения программ ВРТ

с учетом молекулярно-генетических маркеров

ВЫВОДЫ

1. Прогноз овариального ответа на стимуляцию суперовуляции, основанный исключительно на клинико-гормональных параметрах обследованных пациенток, не оправдывается в 9,7% случаев, когда развивается «бедный» ответ, а в 14,6% случаев - «гипер» ответ яичников.

2. Критическим пороговым значением овариального ответа является развитие 4 фолликулов, так как при меньшем количестве в 7,3% случаев получены незрелые ооциты, в 22% случаев отсутствовали ооциты, пригодные для оплодотворения.

3. Полиморфизм гена FSHR 2039 G>A (Ser680Asn) является значимым независимым маркером, ассоциированным с типом овариального ответа. Наличие генотипа G/G предрасполагает к «гипер» ответу (р=0,021; ОШ=3,49 (95% ДИ 1,3-11,6)). Полиморфизм FSHR 2039 G>A (Ser680Asn) не связан с базапьным уровнем ФСГ и АМГ.

4. Ключевыми молекулярно-генетическими предикторами качества ооцитов являются: генотип G/G полиморфизма гена LHCGR 935 A>G (Asn312Ser) (р=0,039; 0111=3,41 (95% ДИ 1,05-11,1)), генотип С/С полиморфизма гена VEGFA -634 G>C (р=0,040; ОШ= 4,09 ( 95% ДИ 1,311,71)), генотип А/А полиморфизма гена AMHR2 -482 A>G (р=0,025; 0111=2,23 (95%ДИ 1,1-4,3)), носительство которых ассоциировано с получением незрелых ооцитов. Аллель G полиморфизма гена ESR1 —351 A>G [XBal] ассоциирован с получением эмбрионов низкого качества класса С (р=0,022; 0111=2,3 (95% ДИ 1,1-4,6)).

5. Вклад генетической изменчивости в детерминацию оогенеза и эмбриогенеза составляет от 16 до 31% (согласно комплексным математическим моделям).

6. Ассоциация эффективности программ ВРТ с молекулярно-генетическими предикторами опосредована через детерминацию овариального ответа, качества ооцитов и эмбрионов.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Пациенткам, впервые обратившимся по поводу лечения бесплодия методом ЭКО, на этапе подготовки целесообразно проводить генотипирование наряду с клинико-лабораторным обследованием для возможности индивидуализированного проведения программы ВРТ.

2. При носительстве генотипа G/G полиморфизма гена FSHR 2039 G>A (Ser680Asn) у пациенток с предрасположенностью к «гипер» ответу яичников для профилактики развития синдрома гиперстимуляции яичников следует персонифицировано подбирать протоколы стимуляции суперовуляции и дозы препаратов: «мягкие» протоколы, программа ЭКО в естественном цикле.

3. При носительстве генотипа А/А полиморфизма гена AMHR2 -482 A>G, генотипа G/G полиморфизма гена LHCGR 935 A>G (Asn312Ser), генотипа С/С полиморфизма гена VEGFA-634 G>C в связи с повышенной частотой получения незрелых ооцитов рекомендуется дозревание их в специальной культуральной среде. Процедура ИКСИ при оплодотворении незрелых ооцитов не рекомендуется. Супругу при этом показана предварительная консультация у андролога с целью улучшения показателей спермограммы.

4. При носительстве аллеля G полиморфизма гена ESR1 -351 A>G [XBal], учитывая прогноз получения эмбрионов низкого качества, пациенткам показан выбор протоколов стимуляции суперовуляции для получения большего количества фолликулов, зрелых ооцитов и эмбрионов, пригодных для переноса в полость матки. Целесообразно проведение процедуры ИКСИ с целью повышения вероятности оплодотворения. Таким пациенткам также можно рекомендовать проведение преимплантационного генетического скрининга (ПГС).

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. «Бедный» овариальный ответ в программах ЭКО / И.В. Тетерина (Владимирова), Р.Э. Ванян, Е.А. Калинина, Н.В. Долгушина // Акушерство и гинекология. - 2013. - № 9. - С. 4-12.

2. Молекулярно-генетические маркеры как прогностические факторы овариального ответа в программах вспомогательных репродуктивных технологий / И.В. Владимирова, Е.А. Калинина, А.Е. Донников // Акушерство и гинекология. - 2014. - № 3. - С. 16-20.

3. Ассоциация полиморфизма гена рецептора фолликулостимулирующего гормона с исходами программ вспомогательных репродуктивных технологий / И.В. Владимирова, Е.А. Калинина, А.Е. Донников // Акушерство и гинекология. - 2014. - № 8. - С. 53-57.

4. Прогнозирование исходов программ вспомогательных репродуктивных технологий с использованием молекулярно-генетических маркеров / И.В. Владимирова, Е.А. Калинина, А.Е. Донников // Гинекология. - 2014. - № 6. - С. 33-36.

5. Анализ полиморфизма гена рецептора фолликулостимулирующего гормона для прогноза исхода программы экстракорпорального оплодотворения / И.В. Владимирова, А.Е. Донников, Е.Е. Баранова, Е.А. Калинина // Клиническая лабораторная диагностика. - 2014. - №9. - С.135.

6. Полиморфизм гена рецептора фолликулостимулирующего гормона как предиктор исхода программ вспомогательных репродуктивных технологий / Е.А. Калинина, А.Е. Донников, И.В. Владимирова // Мать и дитя: материалы VII регионального научного форума. - Геленджик, 2014. — С. 138.

Подписано в печать: 16.01.2015 Объем: 0,9 п.л. Тираж: 100 экз. Заказ № 146 Отпечатано в типографии «Реглет» 119526, г. Москва, пр-т Вернадского, д. 39 (495) 363-78-90; www.reglet.ru