Автореферат и диссертация по медицине (14.00.36) на тему:Популяционная характеристика антиэндотоксинового гуморального иммунитета

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ И МЕДИЦИНСКОЙ ПРОМЫШЛЕННОСТИ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ ЧЕЛЯБИНСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ ИНСТИТУТ

Г Ой

Ч П Яа правах рукописи

УДК 576.8.097.29

Кршгацшш Марина Владимировна

ПОПУЛЯЦИОННАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ^НТИЭНДОТОКСИ НОВОГО ГУМОРАЛЬНОГО ИММУНИТЕТА 14.00.36 - иммунология и аллергология

Автореферат диссертации на соискание ученой стсиени кандидата медицинских наук

Челябинск 1995

/ Л

Научные руководители:

доктор медицинских наук» профессор

З.Н.Кюндраш

Официальные опионепты:

доктор медицинских наук, профессор Э.С.Горовиц доктор медицинских наук, академик РАЕН С.Н.Тенлова

Ведущее учреждение

Санкт-Петербургская государственная медицинская акада

Защита состоится й^Ц^еМ^^ 1995 г.

в на заседании снецишшзированного Сов-

К.084.04.03 Челябинского государственного медицинского института М нистсрсгва здравоохранения и медицинской промышленности 1 (России) (454092, Челябинск, ул.Воровскогод.64)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Челябинского I сударственного медицинского института.

Автореферат разослан "40" 1995 г.

Ученый секретарь специализированного Совета,

доктор медицинских наук, профессор А.В.Зурочко

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность Изучение эндотоксина (ЭТ) 1рамотринательных (Гр(-)) бактсриП было начато с 20-х годов нашего столетия, но дашь в 50-х были описаны синдромы проявления системной эндотоксинемии (Hoffman W.D. cí. AL, 1993; Cross AS. ct Al., 1994.) Последние 40 лет ознаменовались многократными открытиями в изучении этого загадочного бактериального продукта, хотя большинство вопросов данной проблемы грсбуюг решения до настоящего времени (Яровая Л.М., Адсшкии В.А, 1991; Morrison D.S., 1994).

Набор данных об эндотоксинах происходил достаточно быстро практически в каждой области медицины. Тот факт, что его действие напоминает реакции, сходные с состояниями, вызываемыми другими агентами, позволял провести множество сравнительных исследований (Шкроб О.С. с соавт., 1976; Appelmclk B.J. et. al., 1988; Cross A.S., Opal S., 1994), в результате которых было показано, что системная эндотоксин смия (ЭТЕ) развивается значительно чаще, чем это представлялось ранее (Пермяков Н.К. с соавт.,1989; Шенкман Б.З.,Грачева Н.В.,1989; Bennett Jr.I.L., 1994).

Eme несколько дет назад такие исследования были невозможны из-за отсутствия методов обнаружения ЭТ в биологическом материале. В настоящее время разрабатывается ряд методов прямого или косвенного обнаружения эндотоксина в организме человека, но, по-прежнему, нет надежной, унифицированной методики, которая позволила бы определить наличие ЭТ у различных ipynn людей. Существующие лабораторные тесты не полностью удовлетворяют потребность врачей-клиницистов в экспресс-диагностике состояния системной эндотоксин см ин либо из-за отсутствия оборудования и реактивов, либо из-за сложности постановки реакции (Пермяков Н.К., Яковлев М.Ю., 1989; Figari I.S. ct. al., 1993).

Лштополисахарид грамотрииатсльпьгх бактерий является тимус-независимым антигеном и может индуцировать образование антиэндоток-синовых антител в сравнительно короткие сроки. Некоторые авторы (Яковлев М.Ю. с соавт.,1987; Белкин З.П. с соавг.,1991; Casale Т.В. el.

al.,1990) считают возможным оценивать степень системной эндотоксин е-мии но состоянию гуморального антиэндотоксинового иммунитета.

Индикация ЭТ в организме человека важна не только с клинических позиций (оценка тяжести состояния нри эидотоксикозс, своевременная диагностика эндотоксинового шока (ЭТШ)), но и как возможность изучения распространенности эндогоксинсмии среди различных групп людей. Последнее позволяет выявить круг носителей с высоким уровнем антител к ЭТ с целью дальнейшего использования их в качестве потенциальных доноров, что в свою очередь позволит создать банк данных и облегчит разработку препаратов для специфической детоксикации и терапии системной эндогоксинсмии и Э11ДОТОКС1ШОВОГО шока. Это подтверждается публикациями последних лет, где такой подход расценивается как перспективное будущее в лечении зндотоксикозов (Яровая Л.М.Дшнкин В.А., 1991; Bennett Jr.I.L,,1994). В настоящее время такие сведения весьма oi-раничес-ны и нередко противоречивы. Назрела необходимость иметь точные данные о распространенности эндотоксинемии (ЭТЕ) и об уровне гуморального иммунитета к ЭТ Гр (-) бактерий у различных групп людей.

Антитела к эндотоксину достаточно широко определяются, о чем свидетельствуют исследования Яковлева М.Ю., Ааоллонина А.В., Лиходе-да В.Г., Гремяковой Т.А., Рудика АА, Харлановой Н.Г., Collctli R.C. Выпускаются стандартные тест-системы для РНГА и ИФА (МНПК "Гематолог" (г.Москва)), в связи с этим, мы считали не бесполезным провести исследование (скрининг) на конкретной территории, не смотря на то, что понимали всю сложность интерпретации полученных данных.

Нами было предпринято настоящее исследование целью которого являлось:

♦ усовершенствование существующих методов лабораторной диагностики системной эндогоксинсмии.

♦ исследование распространенности состояния эндотоксинемии в популяции.

♦ определение состояния гуморального антнэндотоксинового иммунитета у взрослых и детей с различной соматической натологией.

В рамках поставленной цели решались следующие задачи:

• Огработка оптимальной методики выявления эидотоксин-связывающих факторов в биологическом материале.

• Распространенность эндотоксинемнн в популяции.

• Определение частоты встречаемости и количественных пара

• метров антител к эндотокашу грамотринательных бактерий у здоровых и у лиц с различной ортаноиатолошей.

Научная постна.

•Впервые па аопулянионном уровне приведена характеристика распространенности эндотоксинемии у здоровых и лип с различной органопа-тологией.

•Впервые оценен уровень гуморального антиэндогокешювого иммунитета у жителей Среднего Урала.

•Отработаны параметры доступной методики обнаружения эндоток-синсвязываюншх факторов в организме.

•Заложепы основы для создания банка данных об уровне носителей антител к эндотоксину, что открывает возможности получения высокотит-ражных препаратов для специфической профилактики и лечения эндотоксинемии и эндотоксинового шока.

Практическая ценность.

Разработанный метод определения антиэндотоксиновых антител в сыворотке крови может быть использован для оценки тяжести состояния при системной эндотоксинемии в детских и взрослых клиниках.

Определен уровень титров антител к эндотоксину грамотринательных бактерий у взрослого и детского населения с патологией различных органов и систем.

Полученные результаты о высоком содержании анти-ЛПС-антител у здоровых лип и создание банка данных открывают перспективы получения специфических препаратов для профилактики и лечения системной эндотоксинемии и эндотоксинового шока.

Проведенные исследования иредставляют практический интерес дам отделений детских больниц, хирургических стационаров, отделений реанимации и интенсивной тсрашш, станций нереливания крови.

Внедрение результатов в практику. Метод определения антиандоток-синовых антител в сыворотке крови внедрен в практику работы отделения патологии новорожденных исследовательского института Охрани Материнства и Младенчества г. Екатеринбурга.

Материалы диссертационной работы используются в учебной программе по курсу микробиологии в Уральском Государственном медицинском институте г. Екатеринбурга.

Апробация работав публикации. Материалы дисссргатш доложены па 48 научной конференции студентов и молодых ученых (27-28 апреля 1993 года) Уральскою государственного медицинского института "Актуальные вопросы патогенеза, диагностики и лечения заболеваний".

По теме диссертаини опубликовано 4 научные работы.

Объем и структура диссертации. Диссертация наложена на 151 ^границе машинописного текста, иллюстрирована 1 рисунком и 17 таблицами. Работа состонг из введения н двух частей. Первая часть - обзор литературы (3 главы), заключение по обзору литературы. Часть вторая, включающая главу с описанием материалов и методов исследования и 4 главы собственных исследований, заключения, выводов и сннска литературы, содержащего 279 источников, в том числе 126 российских и стран СНГ, 153 - зарубежных авторов.

Положения, выносимые на защвгту.

1. С помощью усовершенствованной методики возможно определение уровня системной эндшоксинсмии у различных категории больных Этот метод может быть использован в клинической практике.

2. Распространенность эндоюксинемии в популяции достаточно вы сока и составляет среди здоровых - 4, 6ff, лип с различной органонаголо nicii от 30% до Ь4, 5%.

3. Уровень антиэндотоксиновых антител в иопуляиии зависит от состояния физиологических барьеров для поступления эндотоксина в системный кровоток и может изменяться при различных патологических состояниях, повышающих проницаемость этого барьера.

4. Определение тигра антител к эндотоксину у здоровых доноров поможет отданию банка данных и получению препаратов для лечения ЭТЕ и ЭТШ.

Отдельные раздели работы выполнены совместно с Захаровой С.Ю.,к.м.н„ руководителем детской клиники НИИ ОММ, с сотрудниками кас}>сдры микробиолоши донентом, к.м.н. Козловым А.П. и ка()>сдры патологической физиологии Соколовой М.А. Уральского Государственного медицинского ииституга, с сотрудниками экспресс-лаборатории ОДКБ (областная детская ювтичсская больница) N 1 г. Екатеринбурга, за что автор выражает им искреннюю благодарность.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материалы н методы исследования.

Для решения поставленных задач, в первую очередь, было необходимо предпринять исследование по усовершенствованию метода определения антител к эндотоксину трамотринатсльных бактерий в биологическом материале с помощью давно известного и хорошо себя зарекомендовавшего метода непрямой (пассивной) гемагглкл инанин, который ранее применялся для исследований системы "эндотоксины и антитела к нему" в весьма ограниченном числе работ.

Потребовалось усовершенствовать режим получения эритронитарно-го диашостикума для определения антител к эндотоксину 1рамогрина-тсльных бактерий. Нами подбиралась оптимальная температура, время и концентрация антигена, применяемого при сенсибилизации эритроцитов.

Для приготовления диашостикума использовали эрнгрониш человека 1(0). Rh+.

Эритроциты с помощью центрифугирования при 1(Ю0 об./мин., 20 минут, пятикратно отмывали в 50-кратном объеме охлажденного до +4 С" физиолошчеекои растворе и однократно я 500 мл. 0,15 М <}юсфатного бу-

фсрного раствора (рН 7, 2).Послс отмывания надосадочпая жидкость ис содержала видимых следов гемолиза.

Формалишшцию эритроцитов производили по следующей методике: 50 мл отмытых эритроцитов суспензировали в 200 мл 0, 15 М буферного раствора ( рН 7,2 ), охлажденного до +4 С\ 39 мл нейтрального формалина растворяли в 211 мл этого же буферного раствора и постепенно добавляли к суспензии эритроцитов при постоянном перемешивании. Смесь помещали на магнитную мешалку и выдерживали при умеренном перемешивании в течение 20 часов при температуре 37 С°, затем эритроциты пятикратно отмывали ог избытка формалнна в 50 - кратном объеме физиологического раствора и однократно в 500 мл. 0, 15 М буферного раствора, охлажденных до +4 С" с помощью центрифушроваиня со скоростью 1500 об/мин, в течение 20 минут. После отмывания эригроииты доводили до 50% взвеси путем добавления 1 : 1 но объему стандартного солевого раствора с бычьим сывороточным альбумином ( ССР с БСА).

Ставили реакцию на исключение спонтанной агглютинации форма-лшшзироваиных эритроцитов человека (ФЭЧ).

Готовили 1 % взвесь эритроцитов,затем проводили танизашпо ФЭЧ. Наиболее пригодным для ташгзапищпри подборе оказалось разведение танина в рабочей концентрации 1: 20 000.

Сенсибилизацию эритроцитов проводили при различных температурных режимах, разной экспозиции и при различной концентрации антигена с измерением температуры внутри раствора при помощи ртутного термометра.

В результате была признана наиболее приемлемой следующая методика получения препарата: ({юрмалшшзировашще эритроциты человека без посредника сенсибилизировали Ис-глнколшшдом в исходной концентрации 400 мкг/мл в ультратсрмостате при 55 С° в течение 120 минут, встряхивая пробирки с раствором каждые 15 минут, рН среды 7, 2. После отмывания эритроцитов от избытков антигена, диагностический препарат 1% концентрации, приготовленный сх 1сшроге, применяли для определения антиэидотоксшюЕых антител в РПГА с сыворотками крови.

Определяли чувствительность и специфичность полученного диагностического препарата. Специфичность оценивали в РТПГА (вариант РНАТ - реакция нейтрализации антител) с различными антигенами (нирогсиал (10 мкг/мл), Ке-гликолиилд (400 мкг/мл), бычий сывороточный альбумин (500 мкг/мл), ЛПС Е.соН,но.1ученный по Wcstphal (1000 мкг/мл)) и с набором антигенов в РПГА (нормальная человеческая сыво-ршка, кро.1шчья рсфсренс-сыворотка, нормальная сыворотка крупного рогагого скота, нормальная лошадиная сыворотка, иммунная шигеллезная ослиная сыворотка). Для оценки чувствительности полученного эритропи-тарного диагносгикума проводюш РПГА с пшериммунной кроличьей сывороткой.

Проводили сравнительную оценку чувствительности собственного эритроцитарного диагносгикума для определения антиэндотоксиновых антител и коммерческого препарата МНПК. "Гематолог" (г.Москва). По своей чувствительности и специфичности препарат собственного изготовления не уступает коммерческому. Достоверных различий между титрами антител, определяемыми обоими препаратами, не выявлено (1= 0, 9; Р > 0,05).

Разработала более экономичная методика постановки РПГА с коммерческой тесг-системой и диагностикумом собственного изготовления. Так, вместо физиологического раствора, предлагаемого фирмой - изготовителем, мы использовали забуференный физиологический раствор со стабилизатором (желатин для иньекпий в разведении 1: 100), что позволило получать стабильно воспроизводимые результаты в контрольных опытах. Уменьшение объема используемых нами ингридиентов повысило экономичность реакции. Все компоненты, входящие в реакцию, мы уменьшили в 2 раза, что позволило более экономично использовать диагностический препарат.

Методика постановки реакции: реакцию проводили в 96-луночном полистпроловом планшете для иммунологических реакций. В каждую лупку вносили но 0, 025 мл забуферешшго физиологического раствора со ста-бшшзатором. Готовили разведения исследуемых сывороток от 1:2 до 1: 1024, последнюю лунку оставляли для контроля сенсибилизированных эритроцитов. В качестве контроля работы эритроцитарного диагносгикума

использовали кроличью референс-сыворотку (1:256). Далее вносили i каждую лунку полученный антигенный диагностику« в объеме 0,0125 ш 1% концентрации. Панель помещали на 20 минут в термостат при t 37 С* Результат учитывали через 1 час.

Этод метод мы иримсняли для определения напряженности гуморального иммунитета к эндотоксину грамщрииатслыюй микрофлоры ; здоровых доноров,взрослых с различной оргаионатологиси, детей с раз личными заболеваниями.

Было обследовано 5 грунн взрослого населения:

• здоровые доноры -1911 человек (городская станция переливанш крови т .Екатеринбурга);

• липа с заболеваниями печени и желчевыводяишх цутей - 62 чело века, находящиеся на амбулаторном лечении в медсанчасти Егорипшскоп радиозавода (г.Артемовский) и завода твердых сплавов (г.Кировофад) > клиническими диагнозами: "хронический холецистит", "хронический холе цистоианкреатит", "холеиистохоланшт", "гепатит";

• липа с патологией пищеварительной системы - 31 человек, нахо дяпщеся на амбулаторном лечении в МСЧ заводов г.Кировограда : г.Артсмовского с клиническими диагнозами: "гастрит", "хронический ко лит", "энтероколит"^ большинства обследованных имелась сочсганная па тологня тсиатобилиарной и пищеварительной систем.

• больные с бронхо-легачной патологией - 90 человек, находившие« на стационарном лечении в городском пульмонологическом центр г.Екатсринбурга с клиническими диагнозами: "бронхит", "пневмония".

• беременные женщины с патолошчсски протекающей бсрсмег ностью (нрсимушсствснно-гестозы в разные сроки) - 84 человека, соски щие на учете в женской кольсунтации НИИ ОММ (г.Екатеринбург).

Общее количество обследованных взрослых составило, таким обр; зом, 2178 человек ( возраст от 18 до 60 лет).

Обследовали следующие ipynnu детей в возрасте от нескольких н< дсль до 15 лет:

• здоровые дети, родившиеся в клинике Охраны Материнства Младенчества ([.Екатеринбург) и дети, проходившие клановое обследов

пне в Областном Цапрс Санэииднадзора, посещающие детский комбинат и школу - 39 человек;

• деги с клинически выраженной патологией желудка и кишечника, находившиеся на стационарном излечении в клинике реабилитации новорожденных и детей раннего возраста НИИ ОММ и в гастроэнтерологическом отделении областной детской клинической больницы N 1 (г.Екатсринбург) с клиническими диагнозами: "гасгродуодешп", "хронический эпгероко.шт", "дисбактсрноз кишечника", "хронический колит", "гастрит"- хссю 156 человек.

• деш с поражением печени и желчепыводящих нугей с клиническими ;ша1Нозами:"холсгшстиг","гсиатит","пирроз печени", "портальная шнертензия", "дискинезия желчевыводящих путей", находившиеся на стационарном лечении в специализированном отделении ОДКБ N 1 (г.Екатсринбург) - 31 ребенок.

• дет с заболеваниями бронхов и легких с клиническими диагнозами: "бронхит"," пневмония", "хроничсскоепсшснифичсскос заболевание лс1ких",иолучавшие лечение п пульмонологическом отделении ОДКБ N 1. Всего - 44 человека;

• дети с заболеваниями почек, находящиеся на стационарном лечении в нефролог ичсском отделении ОДКБ N 1 (г.Екатсринбург) с клиническими диагнозами: "пюмерулонсфрит", "пиелонефрит", "тубуло-итерстиниальный нефрит", "шлроиефроз", "хроническая почечная недостаточность" - 68 человек. Таким образом,всего обследовано 338 детей.

Состояние гуморального иммунитета к эндотоксину у новорожденных детей (80 человек) и их матерей , некоторые показатели иммунного счагуса , отдельные факторы нсснснифичсской рсзисшгшосш организма (иммуноглобу;ашы классов М, А, О, уровень Т- и В-;яш<|хжитов, фагоцитарная акшвность лейконигов), исследование кишечного микробиоценоза проводили совместно е клиникой рсаби;шта1ши новорожденных и детей раннею возраста института Охраны Материнства н Младенчества (г.Екатсринбург).

При исследовании уровня антиэндоюкси новою иммунитета во всех случаях использовали пробы сиворшок, оставшиеся ноете плановых об-

следований в клинических лабораториях и лаборатории станшш псрслнва-лия крови.

Обработку статистического материала производили на персональном компьютере IBM PC 286 с использованием программы "Quatro Pro 4.0", с внесением в нес формул для расчета относительных, средних геометрических величин, их ошибок, достоверности полученных результатов, коэффициента корреляции.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Данные литературы снидеши.сшуют, что услошю-цатогсиныс гра-мотрицагслыше бактерии являются в насгояшсе время наиболее часто встречающимися возбудителями шойио-воспалитслышх н септических осложнений в хирургии, гинсколо] mi, акушерстве, нсонатолотии, урологии, нефрологии.

Универсальным фактором иатогснносш грамотрицатсльньгх бактерий является бслково-лгшонолисахаридньй комплекс - эндотоксин.

Решающим исследованием в диагностике системной эндотоксине-мни является определение эндотоксина в кровн нацистов. Существующий в настоящее время единственный метод количественною определения эндотоксина в биологических жидкостях - лимушос - лизат-тест - имеет существенные недостатки. Остальные методы направлены, в основном, на определение эндотоксин -связывающих факторов г организме (Анодлотшн А.В. с соавт.,1989; Рудик А.А.,19X8; Уразасв Р.А. с соавт., 1992; Яковлев М.Ю. с соавг., 1989). Учитывая особенности формирования иммунитета к эндотоксину ( Лицоношсахарид грамотрицатсльных бактерий является тимус - независимым антигеном ц может индуцировать образование аити-эпдотокенновых антител в сравнительно короткие сроки), некоторые авторы, как это говорилось ранее, считают возможным оценивать степень системной эпдотоксинемии по косвенному показателю - уровню антител к эндотоксину.

Вышеописанным методом определяли титры ашиэндотоксиновых антител в сыворотках крови обследованных нами групп людей.

В первую очередь было исследовано распространение и уровень антител к эндотоксину. Учитывали, что популяция в каждый конкретный момент времени состоит не только из здоровых, но и из лиц с различными заболеваниями, число кошрых не снижастсядто позволило нам дать количественную и качественную характеристику раздельно для групп здоровых и больных, а также оценить соответствующие показатели для популяции в целом.

В результате проведенных исследований установлено, что средний геометрический титр антител к эндотоксину в группе здоровых взрослых составил 1 : 7, 36 , в трунне здоровых детей он несколько ниже - 1 : 6, 7. Наибольшее число здоровых людей имели титр антител 1 : 8 - 1 : 16 (58, 1% взрослых и 61, 4% детей). У здоровых детей в 2 раза реже, чем у взрослых доноров встречались высокие (1 : 32 и более) ттпры антител к эндотоксину, и достоверно чаще (Р<0,01) определялись низкие титры (до 1: 4).

. 4,6 % здоровых доноров содержат антиэидотоксиповые антитела а высоких титрах (1 : 32 и выше). Вероятно, кровь этих лиц может стать сырьем для ириюговления высокоактивных специфических антиэндотокси-новых препаратов, например, плазмы для специфической терапии, необходимой для лечения системной эндотоксинемии и эндотоксинового шока.

Таким образом, у здорового взрослого населения Среднего Урала титр антител к эндотоксину составляет 1: 7, 36, у здоровых детей - 1 :6, 7, что следует принять за своеобразную "физиологическую константу", свойственную жителям обследуемой территории. У детей и взрослых с различными соматическими заболеваниями уровень антител к эндотоксину значительно превышает физиолошчсский, свойственный жителям Среднего Урала, так, у взрослых людей, находившихся па амбулаторном лечении по поводу заболеваний желудка и кишечника средний титр антител к эндотоксину составлял 1 : 31, 27 п был достоверно выше, чем титр у здоровых взрослых и = 9,91; Р<0,01). В титре 1: 16 антиэпдотоксиновые антитела достоверно чаще определялись у здоровых (Р<0,01), антитела же в высоком титре достоверно чаще выявлялись у лиц с патологией желудка и кишечника (58, 06%). У детей с подобной патологией тптр антител к эндотоксину был несколько ниже, чем у взрослых (1 : 22, 95), и достоверно выше, чем

средний геометрический титр у здоровых детей (Р<0,01). Известно, что при заболеваниях желудка и кишечника увеличивается возможность поступления эндотоксина в кровь в силу повышенной проницаемости кишечного барьера, что может приводить к более высокому уровню эндотоксинсмии I организме и образованию большего количества антител, что и показали полученные нами данные.

Следующая (руина обследованных - больные с поражением печени и желчевывцщпцих иутей. Общеизвестно, что печень выполняет роль филь тра на нуги поступающего в кроль эндотоксина и, следовательно, люОш патология, приводящая к снижению дстоксикапиошюй функции нечени может приводить к возникновению системной эндотоксинсмии. Обслс дуемые нами больные находились на амбулаторном или стационарном из лечении в лечебных учреждениях т.ЕкачерниСурта и области. Высокие тнт ры антител к эндотоксину (1 : 32 н выше) обнаруживались значнтельн чаще у лиц с данной патологией, чем у здоровых. Так, например, у взрос лых, антитела в высоких тиграх определяли в 64, 52% при среднем пирс н 1 : 43, 27, что достоверно выше, чем у здоровых доноров (Р<(),01). У детей иатологией нечени и билиарной системы средний геометрический титр аг читсл к эндотоксину также был достаточно высоким - 1 : 30, 6.Таким обр; зом, больные с этой патологией, по-видимому, в большей степени нодвс{ жены риску развития системной эндотоксинсмии и, возможно, возникш вснию эндотоксипопо! о шока.

При циркуляции эндотоксина, миновавшею печеночный барье первым органом на его нуги в системном кровотоке являются легкие. Ни представилось целесообразным рассмотреть труппу больных с клинич скими диашозами "бронхит" и "пневмония". Из полученных данных след ст, что у взрослых и дс1сй этой 1руипы обследованных титр ашиэндого силовых антител значительно превышал установленный на> "фишодоишескин" уровень. У детей он был равен 1: 31,47, у взрослых -15,64.

Нами также била обследована группа дстей с заболеваниями иоч< Средний комегричсский тигр и угон группе равнялся 1 : 24,3.

Нами дан анализ состояния гуморального иммунитета к эндотоксину в систем с "мать - новорожденный", у женщин с патологически протекающей беременностью, у новорожденных детей с тягощенным анамнезом и у здоровых новорожденных детей.

Исследования проводили совместно с клиникой Екатеринбургского Научно-исследовательского института Охраны Материнства и Младенчества.

Определяли уровень антител к эндотоксину у 80 детей в раннем ностнатальном периоде, находящихся под наблюдением в клинике НИИ ОММ с диагнозами: "энтсроколиГ, "дисбакт ериоз кишечника". В качестве контрольной группы обследованы здоровые новорожденные.

Проведенными исследованиями установлено, что титр антител к эндотоксину у здоровых новорожденных детей составляет 1 :4,42. Он достоверно ниже, чем в jpynue новорожденных детей с патологией перинатального периода и находится в прямой зависимости ог уровня ^'морального иммунитета к эндокжешту у их Maiepcii. Установлена корреляционная связь между этими двумя показателями (г = 0,7347 + 0,06; Р<0,()1), то есть, чем он выше у матерен, тем он больше у новорожденных детей. Патология системы пищеварения ведет к увеличению количества циркулирующею эндоюксина, о чем свидетельствует формирование высокого титра антител к эндотоксину.

При обследовании группы беременных женщин с патологически протекающей беременностью (преимущественно гсстозы в разные сроки) средний геометрический титр антител к эндотоксину в этой группе был равен 1 : 41,32, что в 1,5 раза превышает подобный показатель у родивших женщин (t= 2, 48; Р<(),01) и в 5,6 раз средний тигр антител в контрольной ipymic доноров (t= 19,52; Р<0,01). Тиф ангиэндогоксиновых антител у беременных женщин с геентами, был таким же, как и средний титр, характерный ;цш лип с поражением генаго-бнлнарной системы. Известно, чю при эюм осложнении беременности прежде всего нарушена функция печени, основного opiana, ответственною за детоксикацию эндотоксина. В отличие oí этой сшуаннн, внятшюю! существенные раиичн.ч (Р<0,01) между исслетусмой ipyinmft Переменных и лип, например, с заболевания-

мц бронхов и легких. Высокий титр антител к эндотоксину у этой категории больных позволяет предположить наличие высокого уровня системной эндогоксинсмии. Это обстоятельство нсоихо;ишо учитывать при наблюдении случаев патологической беременности, и, по-возможности, определи и, уровень туморада>ного антиэндотоксинового иммунитета, цснол!.зуя этот показатель наряду с другими для возможного прогнозирования отягощенного течения беременности и родов.

Нами были обследованы новорожденные дети в возрасте от нескольких суток до 1 месяца. Все обследуемые дети находились в клинике но поводу инфскционно-носиашпсльных заболеваний (сепсис, локализованные с] юр мы гнойно-воспалительных заболеваний, внутриутробные инфекции), у всех новорожденных наблюдались дисфункции кишечника в виде расстройств моторной, всасывательной, ферменговыделшелыюй функцией и дискинсзии желчевылодящих путей. Эти дети наблюдались нами в течение 2-х лет, что позволило оценить состояние ^морального иммунитета к эндотоксину в динамике: в конце периода новорожден пост (возраст детей 1 месяц), в возраст е 6 месяцев, при повторном обследовании, проведенном в период ремиссии и дети 12 месяцев, у которых, как правило, наблюдалось обострение заболевания и реинфекция. Средний геометрический титр антител был нссколко ниже у детей в возрасте 6 месяцев (1 : 15,78) что, по-видимому, связано с грудным вскармливанием, отсутствием дополнительных заболеваний (ОРВИ, в частности) и эффективностью пролонгированной терапии, начатой в периоде новорожденное™, что приводило к ремиссии заболевания. Однако, почти у половины детей, несмотря на это, титр антител к эндотоксину оставался значительно превышающим норму. К концу 1-то года жизни дети, как правило, не получали грудного молока, были подвержены различным заболеваниям, в связи с чем им проводилось лечение, в том числе и антибактериальное, и, как следствие, у многих из них возобновлялись дисфункции кишечника, вновь нарастали симптомы интоксикации и повышался уровень антиэндотоксиновых антител.

При клиническом наблюдении за этими детьми выявлена крайняя отягощенность антенатального и раннею носшаталыюго периодов развития. У всех детей наблюдалось внутриутробное инфицирование, инфшш-

юианис в родах иди в раннем постнатальном периоде. В 89, 2% случаев у лагерей диашоспгровали кольпит, вызванный преимущественно грибом юда Candida, у 85% -хронические заболевания органов пищеварения, нередко в сочетании с хроническим пиелонефритом, течение беременности во всех случаях было осложненным.

В связи с нарушением здоровья в апте- и посгнаталыюм периодах, зта группа дегей была основательно обследована в клинике НИИ ОММ. Были нсследотинь! некоторые показатели иммунного статуса и отдельные факторы нсснспнфичсской защиты организма.

У большинства детей наблюдалось глубокое поражение иммунной системы, в частости, се гуморажиото звена, о чем свидетельствуют уровни иммуноглобулинов различных классов. В пределах нормальных физио-ло! ичсских значений, свойственных для детей этого возрасга, уровень igM был у 16, 25%, IgA - 27, 5%, IgG - 37, 5%. Сниженная концентрация IgG в крови плода к моменту рождения может свидетельствовать о нарушении трапенлацентарной передачи антител or матери и может стать одной из причин высокой чувствительности этих новорожденных к инфекции. Уровни IgA и igM у обследованных детей были повышены, что также может говорить о возможности внутриутробного инфицирования и патологическом иммунном ответе к моменту рождения. Наблюдались изменения п в уровнях Т- и В-л1шфоннтов. Во всей обследованной группе регистрировали отклонение этих показателей от физиологических в сторону уменьшения, так, у здорового новорожденного ребенка уровень В - лимфоцитов составляет 29, 2%; Т-лнмфонитов - 53, 90% (Сводные нормативные показатели функциональною состояния детского организма, сто систем и органон, 1981), у обследованных нами новорожденных - 5, 24% и 43, 65% соответственно, что также указывает на патологию иммунной системы у этих новорожденных. Являясь супсраитигсном, эндотоксин, казалось бы, должен вызывать иммунологическую толерантность, прежде всего, у матерей. Этою, по нашему мнению, не происходит у них но причине иммунодифи-цитного состояния, о котором свидетельствуют: колышт, вызванный грибом Candida, частые ОРВИ, патология шгщсварптсльцой системы. Это все

может вести к патологическому иммунному ответу как у матерей, так к у новорожденных детей.

По нашему мнению, невозможно однозначно объяснить причину патологии иммунной системы, это может быть связано как с отягощенным анамнезом у детей (происходит изменение показателей как ^морального, так и клеточного иммунитета), так и с тем, что эндогоксин, как сунсраиш-ген, может опосредованно или прямо влиягь на клетки и внутриклеточные структуры, как усиливая, так и подавляя иммунный ответ, который зависит от количества эндотоксина, циркулирующего в системном кровотоке и or стадии иммунного ответа. Таким образом, состояние здоровья новорожденного ребенка и способность его к иммунологической адаптации в раннем иосшатальном периоде находится в прямой зависимости or состояния здоровья и иммунитета матери. Осложненное течение беременности, патология в родах, различные заболевания могут оказать влияние на состояние иммунной системы новорожденного, что выражается в сниженной концентрации IgG и повышенных уровнях IgM и IgA.

В качестве показателя исснсннфичсской резистентности был рассмотрен НСТ-тсст. Показатель функциональной активности нейтрофилол у всех дстей был повышен, что косвенно подтверждает наличие бактериальной инфскии. Усталовлеипая нами обратная зависимость между титром антител к эндотоксину и НСТ-тссгом (т=-0,331 + 0,1)1), но нашему мнению, можсткосвснно указывать на функциональную активность нентро-филов и уровень эидотоксинемии в организме.

В группе новорожденных - 1 месяц была проведена оценка кишечного микробиоисноза. У всех детей наблюдалось ipy6oc нарушение микробиоценоза кишечника на ({мне ночти полного отсутствия Bifidobacterium и Lactobactcrium (менее 10 в 1 г фекшпш). У 91, 25% новорожденных выявляли бактерии рода Klebsiella, Serratia, Proteus, Citrobacter, Pseudomonas.

Заселению кишечника иатошшой микрофлорой могло способствовать наличие перинатальной патологии, возможно, позднее прикладывание к груди, искусственное вскармливание, наличие инфекционно-юсиадшельшлх заболеваний, перенесенных в раннем периоде новорож

дснности, применение антибактериальных препаратов и снижение уровня иммунитета.

В нормальных физиологических условиях кишечник является естественным резервуаром 1рамотрннате;1Ьггон микрофлоры и потенциальным источником развития системной эндотоксинемни, в связи с чем, косвенные показатели эндогоксинсмии (уровень антител к эндотоксину) позволяют оценить степень поражения кишечника у новорожденных.

Таких! образом, у большинства новорожденных наблюдалось состояние системной эндотоксиномии, сочетающееся с несостоятельностью кишечника и глубокими нарушениями иммунной системы.

По-видимому, разные соматические заболевания и патологические состояния шрам/ не одинаковую роль в возникновении системной эндо-токсинсмии в организме. Возможно, на уровень эндотоксиисмии влияет и тяжесть заболевания. Так, при хронизатши и обострении патологического нронесса, когда проводится усиленная атнбиотикотсрання, приводящая к массивной гибели фамогрииательной микрофлоры (как в кишечнике, гак и в патологическом очаге), .может произойти интенсивное попадание эндотоксина в кровь, которое ведет к образованию большою ко.пгчссгва антител, чю и определяется используемым методом.

По нашему мнению, данные об уровне гуморального иммунитета к эндотоксину у лиц с различной соматической патологией должны приниматься во внимание врачами клинических специальностей из-за возможности развития системной эндотоксиисмии и риска развития эндотокеггно-вого шока. Мы попытались выделить группы риска но стснснн возможности возникновения осложиениигна 1-ом мсстс - взрослые дина с поражением печени и желчевыводящнх путей (пир 1:43), беременные женщины с патологически протекающей беременностью (1:41) и деш с заболеваниями бронхов и легких (1: 31 ), на 2-ом - дети с поражением неченн и билиарной системы (1 : 30) н взрослые с заболеваниями желудка и кишечника, на третьем месте m» возможности развития осложнений - группа детей с заболеваниями желудка и кишечника (1 : 23) и поражениями ночек (1 : 24), и взрослые с заболеваниями легких и бронхов (I : 15). Проведенное нами исследование дало возможность сформировать усредненный уро-

вень антиэндотоксниовых антител у категорий больных с различной соматической патологией и здоровых лиц (детей и взрослых), жителей Среднего Урала. Данные представлены в таблице 1.

Таблица 1. Средние значения ттгтров аштггел к эадотоксану у различных категорий людей.

N п/п Обследуемые группы Значения тигров аитител

1. Здоровые люди 1:6,7 - 1:8

2. Лица с поражением печени и билиарной системы 1 : 30 -1 : 43

3. Лица с заболеваниями желудка и кишечника 1 :22 -1 : 32

4. Люди с заболеваниями легких и бронхов 1 : 15 - 1: 30

5. Дети с поражением ночек 1:24

6. Беременные женщины с патологически протекающей беременностью 1:41

Как видно из данных, представленных в таблице различные соматические заболевания и патологические состояния могут играть неоднозначную роль в развитии системной эндотокшнемии и уровне гуморального антиэндотоксинового иммунитета. Учет таких данных врачами-клиницистами, но нашему мнению, может позволить своевременно применять соответствующие терапевтические мероприятия, направленные на снижение вероятности возникновения и тяжести осложнении, вызванных биологическим действием эндотоксина грамотрицателыюй микрофлоры на организм.

В целом, уровень эпдогоксинсмип в популяции достаточно высокий, что может быть связано течением беременности у матери, инфицирован-носги плода в антенатальном и интранатальном периодах, наличием патологии у детей в раннем постнатальпом периоде, характером патологического процесса, тяжестью течения заболевания, возрастом больных людей.

Результаты исследований рекомендованы для использования в учебном процессе на кафедре микробиологии, вирусологии и иммунологии

ТМИ, а также внедрены в практику работы клиники реабилитации иово-ожденных и детей раннего возраста института Охраны Материнства и Младенчества (г.Екатеринбург).

ВЫВОДЫ

1. Усовершенствованная методика определения антител к эндоток-ину грамотрииательной микрофлоры более экономична, легко восяронз-олима и доступна, может быть использована для определения уровня гу-юрального антиэндотоксниового иммунитета и тяжести состояния при истемной эндотоксин емии в детских и взрослых клиниках.

2. Уровень зндотошшемни в ионулянии достаточно высокий. На [его оказывает в.'шянис течение беременности у матери (наличие натоло-нп, соматические заболевания, нсрснесеиные воспалительные заболева-шя), инфицирован ности плода в антенатальном и ннтранаталыхом нерио-[е, наличия инфекции в раннем носшатальном периоде, а, также, харак-ср патологического процесса, тяжесть течения заболевания, возраст боль-шх людей.

3. Установлен титр антител к эндотоксиггу грамотрнцательных бакте-)ип у здоровых лип на территории Среднего Урала. Дтя взрослых он со-лавляст 1:7,34; для детей - 1:6,7.

4. Здоровых доноров, содержащих антиэндогокешювые антитела в высоких титрах (1:32 и более) насчитывается 4,6 %.

5. Установлена средний титр антизндотоксиновых антител у лиц с ^аз.шчиой органопатологией (как у взрослых, так и у детей), при которой наблюдается нарушение (физиологического барьера для поступления эндогенного эндотоксина из кишечника в системный кровоток и элиминации* ЭТ из крови.

6. Состояние здоровья новорожденного ребенка, способность его к иммунологической адаптации в первое время после рождения находится в [трямой зависимости от состояния здоровья и иммунцтега матери. Титр антител к эндотоксину у здоровых нсяорождипшхсоставляст 1:4,42. Ослож-

пенное течение беременности, патология в родах, различные заболевании могут оказагь влияние на состояние иммунной системы новорожденного что выражается в сниженной концентрации 1бО и повышенных уровня: 1бА И ^М.

7. Системная эидогоксинсмия, наблюдаемая у новорожденных с шт фекиионно- воспалительными заболеваниями сочеталась с несостоятсль ностыо кишечника, указывала на тяжесть его повреждения и хронкзацик воспалительного процесса с местными и системными иммунными сдвига ии.

8. Различные соматические заболевания играют неоднозначную рол в формировании напряженности гуморального антиэндотоксииового им мунитста и уровня эндотоксинсмии в популяции.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. На крупных станциях переливания крови целесообразно создават банки данных но плазме крови с высоким титром естественных антител 1 Не - гликолиикду, как цогенциалышй источник высокоактивных сисци фнческих антиэндотоксиновых гренаратов.

2. Учитывая высокий уровень системной эндотоксинсмии в фупн женщин с патологическим течением беременности, показатель уровня ан тител к эндотоксину необходимо, но-возможности, учитывать наряду другими для возможного прогнозирования отягощенного течения бсрс менности и родов.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМ! ДИССЕРТАЦИИ

1. Крнншшна М.В., Кондратом З.Н., Козлов АП. Эндотоксин! грамотрипатслыюи микрофлоры в норме и патологии // Дснонированна рукопись .- Государственная ненфальная научно-мсдишшская библиотс ка. - Москва, 1993. - 61 с.

2. Кришшина М.В., К(ШовА.П. Показатели гуморального иммуни тета к эндотоксинам фамшрицатсльнон микрофлоры // Актуальные вс

проси патогенеза, диагностики и лечения заболеваний: тезисы докладов 48 научной конференции студентов и молодых ученых УГМИ. - Екатеринбург, 1993. - с. 52.

3. Криницина М.В., Козлов А.П., Кондрашова З.Н. Уровень эндо-токсипсши у детей первых двух лет жизни с функциональными нарушс-ниями желудочно-кишечного тракта // Ахтуалыше вопреки пписны и лшдемнолошн: Сборник научных трудов Уральского медицинского института. - Екатеринбург, 1993. - с. 110 - 115.

4. Захарова С.Ю., Козлов А.П., Криницина М.В. Нарушения функциональною состояния кишечника и показатеш! эндотоксинсмии у новорожденных с инфскниопно-восиалигсльными заболеваниями // Достижения отечественной гастроэнтерологии в диагностике и терапии заболеваний орттшов пищеварения у детей: Сборник научных работ. - Нижний Новгород, 1994. - т.2. - ~