Автореферат и диссертация по медицине (14.00.36) на тему:Полиморфизмы С-3ЗТ, С-59ОТ, G-1098Т в промоторе гена ИЛ-4 при атопической бронхиальной астме
- Ученая степень
- кандидата биологических наук
- ВАК РФ
- 14.00.36
Автореферат диссертации по медицине на тему Полиморфизмы С-3ЗТ, С-59ОТ, G-1098Т в промоторе гена ИЛ-4 при атопической бронхиальной астме
КАЗНАЧЕЕВ ВАЛЕРИЙ АЛЕКСАНДРОВИЧ
ПОЛИМОРФИЗМЫ С-ЗЗТ, С-590Т, 0-1098Т В ПРОМОТОРЕ ГЕНА ИЛ-4 ПРИ АТОПИЧЕСКОЙ БРОНХИАЛЬНОЙ АСТМЕ.
14.00.36 - аллергология и иммунология
АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук
МОСКВА 2005
Работа выполнена в ГУ НИИ вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова РАМН.
НАУЧНЫЕ РУКОВОДИТЕЛИ - заслуженный деятель науки РФ,
доктор медицинских наук, профессор В.Б. Гервазиева, кандидат биологических наук Ю. В. Гервазиев ОФИЦИАЛЬНЫЕ ОППОНЕНТЫ - член корреспондент РАМН,
доктор медицинских наук, профессор И. С. Гущин, кандидат биологических наук А. А. Жгун
ВЕДУЩЕЕ УЧРЕЖДЕНИЕ - ГУ Научный центр здоровья детей РАМН.
Защита состоится «' ?» декабря 2005 года в '_7 часов на заседании диссертационного совета Д 001.035.01 при ГУ НИИ вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова РАМН по адресу: 105064, г. Москва, Малый Казенный переулок, 5а.
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГУ НИИ вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова РАМН.
Автореферат разослан « 15 »ноября 2005 г.
Ученый секретарь диссертационного ученого со) канд. биол. наук
И.В. Яковлева
Z006- 4
Il5t\l7
Общая характеристика работы
Бронхиальная астма (БА) - одно из наиболее распространенных во всём мире тяжёлых мультифакторных заболеваний. В некоторых странах эта болезнь является главной причиной инвалидизации населения, опережая даже сердечно-сосудистые и онкологические патологии [Jarvis D et al, 2002]. В разных странах БА болеют от 4 до 35 % населения, и имеются неопровержимые доказательства роста частоты БА во всем мире [Чучалин А.Г., 2002]. Эти обстоятельства характеризуют БА как глобальную медико-социальную проблему и диктуют необходимость ее всестороннего изучения.
Современные представления о генетической предрасположенности свидетельствуют, что для развития клинической формы БА требуется наличие в генотипе индивида определенных аллельных вариантов генов, формирующих неблагоприятный наследственный фон, реализующийся при взаимодействии с факторами внешней среды атопическим фенотипом [Колчанов Н. А., 2001].
Сегодня, благодаря успехам молекулярной генетики, наблюдается определенный сдвиг в раскрытии генетической составляющей патогенеза астмы и, в частности, в понимании важной роли группы родственных молекул интерлейкинов, которые ответственны за индукцию и поддержание аллергического воспаления при данном заболевании. ИЛ-4 является важнейшим цитокином воспаления, обусловленного развитием аллергического IgE ответа. Прежде всего, ИЛ-4 регулирует пролиферативный ответ B-лимфоцитов и переключение изотипов иммуноглобулинов в них, индуцируя экспрессию IgG4 и IgE [Schindler U., 1995].
Вследствие центральной роли ИЛ-4 в развитии воспаления и реализации атопического фенотипа, анализ генетической регуляции
активности этого цитокина имеет очень большое значение для понимания механизмов развития аллергического воспаления при БА. На сегодняшний день выявлены и описаны несколько ключевых мутаций в промоторе гена ИЛ-4, играющих важнейшую роль в развитии атопии и БА.
Впервые в 1995 году была обнаружена замена С-590Т в гене ИЛ-4 в популяции американцев [Rosenwasser LJ., 1995]. В 1999 году в ходе скрининга гена ИЛ-4 были выявлены мутации, частота которых в популяции превышала 1%. Прежде всего это полиморфизм С-ЗЗТ, который был описан японскими учеными у больных БА. В ряде работ была подтверждена ассоциация полиморфизмов С-590Т и С-ЗЗТ с БА [Noguchi Е., 1997], однако, есть и негативные результаты [Walley, A.J. & Cookson, W.O., 1996]. Возможно, отсутствие однозначного ответа на вопрос о влиянии этих полиморфизмов на развитие БА обусловлено популяционными различиями.
Среди внешнесредовых факторов, влияющих на формирование БА, особое внимание уделяется вирусным инфекциям, среди которых представляет интерес респираторно-синцитиальный вирус (PCB), вызывающий у маленьких детей бронхиолиты. В этой связи исследование полиморфизма G-1098T, идентифицированного у больных, перенесших PCB инфекцию, может прояснить роль вирусной компоненты в патогенезе заболевания БА.
Молекулярно-генетические работы, посвященные БА, в России немногочисленны и затрагивают в основном спектр генов ферментов метаболизма ксенобиотиков [Фрейдин М.Б., 2000, 2002]. Поскольку ИЛ-4 контролирует основные этапы развития атопии, определенный интерес представляет изучение гена этого цитокина и механизмов регуляции его транскрипции в русской популяции у больных атопической БА.
Учитывая вышеизложенное, целью данной работы было исследовать промоторную область гена ИЛ-4 и выявить взаимосвязь
между полиморфизмами С-ЗЗТ, С-590Т, 0-Ю98Т этого гена и основными маркерами атопии у больных бронхиальной астмой.
Для достижения цели исследования были поставлены следующие задачи.
1. Сформировать группы больных атопической бронхиальной астмой с различным течением (легкая, средняя, тяжёлая) и определить в сыворотках крови больных БА и лиц из группы сравнения содержание общего ИЛ-4 и ^Е.
2. Провести анализ ДНК больных БА и группы сравнения на наличие замены С на Т в положениях (-33 и -590) и б на Т в положении (-1098) в промоторной области гена ИЛ-4.
3 Выявить ассоциации исследуемых полиморфизмов с основными маркерами атопии у больных БА и со степенью тяжести этого заболевания.
Научная новизна:
Впервые на русской популяции проведено комплексное исследование частот полиморфных вариантов гена ИЛ-4 и их патогенетической значимости в отношении атопической БА. Оценена степень вклада аллелей гена ИЛ-4 в фенотипическую дисперсию количественных показателей. Установлена взаимосвязь полиморфных вариантов гена ИЛ-4 с БА и фенотипическими маркерами атопии - ИЛ-4 и ^Е.
Научно-практическая значимость работы:
Полученные сведения о промоторном полиморфизме гена ИЛ-4 в популяции дают информацию о роли отдельных генов в развитии таких сложных мультифахторных заболеваний как БА. С другой стороны, эти данные важны для планирования стратегии формирования групп риска и терапии БА с учетом генотипа индивидов по гену ИЛ-4. Результаты
исследования могут быть учтены в организации мероприятий по профилактике аллергических и других распространенных заболеваний.
Положения, выносимые на защиту:
1. Частота аллеля Т полиморфизма С-ЗЗТ в промоторной области гена ИЛ-4 составила 63% у больных БА и 23% у здоровых людей. Этот полиморфизм ассоциирован с интегральным показателем БА и такими фенотипическими проявлениями как повышение уровня общего IgE и сывороточного ИЛ-4. Существует корреляционная взаимосвязь между увеличением сывороточного ИЛ-4 и IgE при наличии полиморфизма С-ЗЗТ как в опытной, так и в контрольной группе. Между выявленным полиморфизмом С-ЗЗТ и тяжестью заболевания нет четкой ассоциации.
2. Полиморфизм С-590Т в промоторной области гена ИЛ-4 с частотой мутантного аллеля Т - 51% в опытной группе не ассоциирован с заболеванием БА, но ассоциирован с такими иммунологическими показателями как уровни сывороточного ИЛ-4 и общего IgE. Выявлена корреляционная взаимосвязь между увеличением сывороточного ИЛ-4 и IgE при наличии полиморфизма С-590Т в опытной группе, однако в контрольной группе связи этого полиморфизма с концентрацией IgE не было обнаружено. Между выявленным полиморфизмом С-590Т у больных БА и тяжестью заболевания нет четкой ассоциации.
3. Частота мутантного аллеля Т полиморфизма G-1098T составила 4% в группе больных БА и 13% в контрольной группе. Полиморфизм G-1098T не связан с интегральным показателем БА, тяжестью заболевания, а также с количественным содержанием сывороточного ИЛ-4 и общего IgE.
Публикации и апробация работы.
Материалы, изложенные в диссертации, опубликованы в 6 печатных работах, а также доложены на VIII и IX Всероссийских научных форумах с международным участием имени академика Иоффе В.И. «Дни иммунологии
в Санкт - Петербурге», (2004 и 2005 г.), на международной конференции молодых ученых DAAD Summer School on CURRENT TRENDS IN COMPARATIVE IMMUNOLOGY, Санкт - Петербург, (2005) и на конференции молодых ученых НИИ вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова РАМН, (2004).
Апробация диссертации состоялась на научной конференции отдела аллергологии ГУ НИИВС им. И.И. Мечникова РАМН 29 сентября 2005 года.
Структура и объем диссертации.
Диссертация состоит из введения, 3 глав литературного обзора, 3 глав собственных исследований, обсуждения результатов, заключения и списка литературы. Материалы диссертации изложены на страницах машинописного текста. Работа иллюстрирована 15 таблицами и 16 рисунками. Список цитируемой литературы включает работы
отечественных и зарубежных авторов.
СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Нами были исследованы сыворотки 109 больных бронхиальной астмой атопической формы в возрасте от 18 до 58 лет. Образцы сывороток больных бронхиальной астмой были любезно предоставлены клиникой ГНЦ РФ -Института иммунологии Федерального управления «Медбиоэкстрем» МЗСР, отделением пульмонологии городской клинической больнице №57 и клинико-диагностическим центром НИИ вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова РАМН. Диагноз бронхиальная астма и степень тяжести были поставлены в соответствии со стандартами национальной программы GINA 2002.
Сформированы группы больных БА по возрастной категории, принятой в медицинской практике, и по степени тяжести заболевания, а также
соответствующие группы контроля. Большая часть больных БА имела легкую или среднюю степень тяжести (34 и 53 больных соответственно), и лишь у 22 больных отмечалось тяжелое течение заболевания. Клинико-иммунологическое обследование выявило наличие сенсибилизации к неинфекционным аллергенам в 57% случаев, у больных БА было также отмечено снижение показателей функции внешнего дыхания. Группа сравнения составила 74 здоровых взрослых в возрасте от 22 до 59 лет Сыворотки здоровых доноров были получены в клинико-диагностическом центре НИИ вакцин и сывороток им. И. И. Мечникова РАМН.
Кровь для исследования забирали из вены в процедурном кабинете с соблюдением всех правил асептики и антисептики. Сыворотку отделяли путем центрифугирования и хранили до использования при температуре -20°С. Для выделения ДНК кровь из локтевой вены собирали по 5 мл в пробирку, содержащую Na-цитратный буфер (фирмы Terumo, Бельгия).
Для выделения ДНК из крови использовали набор «МИНИПРЕП», выпускаемый фирмой «Силекс М», и образцы хранили при температуре -20*С.
Типирование образцов по гену IL-4 проводили методом ПЦР. Гидролиз ДНК проводили рестриктазами BsoMA I, BsmFI, Bst4CI производства "Fermentas" (Литва) и "Promega" (США) в буферных растворах и оптимальных условиях инкубационной среды, рекомендуемых фирмами-производителями. Продукты ПЦР анализировали методом электрофореза в 3% агарозном геле с бромистым этидием.
Определение уровня общего 1рЕ в сыворотках проводили в твердофазном методе иммуноферментного анализа с помощью коммерческих наборов (ООО «Иммунотекс» г. Ставрополь, Россия) согласно инструкции по применению.
Определение уровня сывороточного ИЛ-4 проводили методом иммуноферментного анализа при помощи коммерческого набора «РгоСоп ИЛ-4» (ООО «Протеиновый контур», Санкт - Петербург) в соответствии с
инструкцией по применению. Количественный учет данного цитокина в сыворотке осуществляли по калибровочной кривой зависимости ОП от концентрации ИЛ-4 в калибровочных образцах. Среднее значение уровня сывороточного ИЛ-4 у здоровых людей было принято нами в качестве нормативных значений (10 пкг/мл).
Статистическая обработка результатов проводилась при помощи пакета прикладных программ "Statistica 6,0" (StatSoft, USA) и включала определение медианы «Ме», интерквартильного размаха (25%; 75%). Достоверную статистическую значимость различий частот генотипов по группам обследованных определяли по критерию Хи-квадрат. Достоверность значений иммунологических показателей, а также внутригрупповые сравнения анализировали с помощью критерия Манна-Уитни. Ассоциацию полиморфизмов с уровнем сывороточного ИЛ-4 и общего IgE определяли отдельно в опытной и контрольной группе с помощью теста Крускала-Уоллиса. Ассоциацию полиморфизмов с заболеваемостью и со степенью тяжести БА определяли с помощью коэффициента ранговой корреляции Спирмена.
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
При исследовании 109 сывороток больных бронхиальной астмой, был выявлен« повышенный
уровень общего IgE и сывороточного ИЛ-4 в 71% и 66% случаев, соответственно.
В контрольной группе отмечалось нормальное содержание в сыворотке общего IgE (до 100 кЕ/л) и сывороточного ИЛ-4.
Результаты исследования содержания общего IgE и сывороточного ИЛ-4 в сыворотках больных бронхиальной астмой и группах сравнения представлены в таблице 1.
Таблица 1.
Содержание общего ^Е и сывороточного ИЛ-4 в сыворотках больных бронхиальной астмой и группах сравнения.
Группа обследованных Число Уровень общего 1{>Е, кЕ/л и сывороточного ИЛ-4, пкг/мл Частота встречаемости высокого 1вБ (>500 кЕ/л), ИЛ-4 (>100 пкг/мл). %; макс, значение
Больные БА взрослые 109 390(88: 800) 63%; 3800
Здоровые 74 45(23: 89) 0%; 256
1Ь4 Больные БА 109 40(1: 74) 42%; 980
Здоровые 74 2(1; 5) 0%; 71
Из таблицы видно, что в сыворотках больных БА количественное содержание общего было выше такового в группе здоровых в 3.9 раз. Уровень общего 1{>Е у здоровых практически не превышал нормальные значения. Уровень ИЛ-4 в крови больных БА колебался в широких пределах. Нижняя его граница соответствовала показателям, полученным при исследовании сывороток здоровых доноров, и составила 1 пкг/мл. Однако у большей части пациентов выявили повышенное по сравнению с контрольной группой содержание ИЛ-4. Максимальное его значение составило 980 пкг/мл. Никакой зависимости уровня этого цитокина в крови от возраста у больных и лиц контрольной группы выявлено не было. Среднее содержание ИЛ-4 в группе больных БА составило МЕ=40(1; 74) пкг/мл и было значительно выше, чем в контрольной группе, где эта цифра равнялась МЕ=2(1; 5) пкг/мл, а максимальное зарегистрированное значение ИЛ-4 было 25 пкг/мл (р<0,001). Полученные нами результаты подтверждают данные других авторов, обнаруживших гиперпродукцшо ИЛ-4 у атопических больных [8ег^1ег С. е1 а!., 2002].
Поскольку известно, что полиморфизмы в промоторной области гена ИЛ-4 влияют на синтез ИЛ-4, мы исследовали первичную структуру ДНК с целью выявления возможных полиморфизмов и оценки их влияния на содержание в крови сывороточного ИЛ-4 и общего 1цЕ у больных БА и в группе контроля.
Прежде всего, нами был исследован полиморфизм в промоторной зоне гена [Ь-4 (С-ЗЗТ) и получены следующие данные о его частоте среди пациентов и в контрольной группе в русской популяции г. Москвы (рис 1). Частота аллеля Т составила 63% у больных БА и 23% у здоровых людей соответственно (р<0.01).
¡0 40
Ь 30 (0
Т 20
П
сс ст Больные
И
сс ст тт Здоровые
Частоты генотипов и аллелей С-ЗЗТ.
П Й сс т/с т
БА 68 26 15 152/56 63%
Контр 5 24 45 34/114 23%
Рисунок 1. Распределение частот генотипов по группам обследованных при исследовании полиморфизма С-ЗЗТ.
Для исследования связи изучаемого полиморфизма С-ЗЗТ с заболеваемостью БА и фенотипическими маркерами атопии нами были оценены уровни общего и содержание сывороточного ИЛ-4 в зависимости от наблюдаемого генотипа в сыворотках больных БА и в контрольной группе (рис. 2).
Определение содержания общего 1§Е в группах обследованных показало, что уровень этого иммуноглобулина был повышен у пациентов БА с генотипами ТТ и СТ, в то время как в контрольной группе у лиц всех исследуемых генотипов и в опытной группе у больных с генотипом СС уровень общего 1{»Е практически был нормальным (рис. 2).
1000
|дЕ 800 «Е/ " 600
400
200
СС СТ ТТ Больные
СС СТ ТТ Здоровые
120 100
|80
1 60
^ 40
р—1 1-м
20
сс ст тт
Больные
СС СТ ТТ Здоровые
Рисунок 2. Зависимость уровня общего ^Е и сывороточного ИЛ-4 от генотипа пациента Данные по группам представлены в виде интерквартильного размаха.
Определение содержания сывороточного 1Ь-4 в группах обследованных показало, что уровень этого цитокина был повышен у пациентов с БА и в контрольной группе у лиц с генотипом ТТ, в опытной группе у лиц с генотипами СС и СТ уровень сывороточного 1Ь-4 практически у всех обследуемых был нормальным. У более 75% здоровых носителей генотипа СС и СТ уровень ИЛ-4 в крови не превышал нормы (10 пкг/мл).
Ассоциацию полиморфизма с уровнем сывороточного ИЛ-4 и общего 1дЕ определяли отдельно в опытной и контрольной группе с помощью теста Крускала-Уоллиса. Было показано, что уровень как общего ^Е, так и сывороточного ИЛ-4 зависит от мутации в искомой точке как в опытной (Р<0,001), так и в контрольной (Р<0,04) группах.
В нашем исследовании оказалось, что полиморфизм С-ЗЗТ значимо влиял на уровень ^Е в опытной (Р<0,01), но не в контрольной группе (Р>0,08). Для выяснения влияния полиморфизма С-ЗЗТ на уровень общего 1§Е у лиц с различным генотипом нами было проведено внутригрупповое сравнение между генотипами ТТ, СТ - мутантные генотипы и СС - дикий тип. Эти вну-фигрупповые сравнения показали, что уровень общего в опытной группе значимо различается у носителей генотипов - (СС-ТТ) и
(СС-СС) с уровнем достоверности Р=0,001 и РЮ,0004, соответственно, но не у носителей генотипов (ТТ-СТ), где достоверного различия не оказалось (Р<0,166). Это исследование позволяет заключить, что, скорее всего, у больных БА эффект компенсации действия мутантного аллеля за счет второго - здорового не имеет места. В группе здоровых не было различий между носителями генотипов СС-СТ (Р~1). Между двумя другими генотипами СС-ТТ и СТ-ТТ отличия были формально недостоверны (Р<0,06).
При этом внутригрупповые сравнения уровня ИЛ-4 среди носителей трех генотипов в искомом полиморфизме С-ЗЗТ с использованием теста Манна-Уитни с поправкой Бонферони показали, что в группе больных уровень ИЛ-4 у носителей генотипа СТ не отличался от такового у носителей ТТ (Р=0,5). Различия между генотипами СС-СТ и СС-ТТ были статистически значимыми (Р=0,004 и Р=0,00, соответственно). В группе здоровых не было различий между носителями генотипов СС-СТ (РХ).5). Между двумя другими генотипами СС-ТТ и СТ-ТТ отличия были достоверны (Р=0,017 и Р=0,012, соответственно).
Далее, мы проанализировали возможное влияние исследуемого промоторного полиморфизма С-ЗЗТ на увеличение уровня общего ^Е под влиянием ИЛ-4, существенного в переключении синтеза иммуноглобулинов в активированных В-клетках. Зависимость уровня общего ^Е от концентрации сывороточного ИЛ-4, определяемая с помощью коэффициента ранговой корреляции Спирмена, оказалась достоверной как в опытной, так и в контрольной группе (Р<0,05).
Таким образом, мы обнаружили высокую частоту мутантного аллеля Т в группе больных БА. Кроме того, результаты нашего исследования показали, что наличие полиморфизма С-ЗЗТ в промоторной области гена ИЛ-4 способствует повышению продукции этого цитокина и увеличению в крови больных БА количественного содержания общего 1цЕ В свою очередь
повышенный синтез ^Е может обуславливать более тяжелое течение заболевания.
В связи с этим нами был проведен анализ взаимосвязи наблюдаемых генотипов полиморфизма С-ЗЗТ со степенью тяжеста заболевания (рис 3). В группе больных влияние генотипа на тяжесть заболевания определяли с помощью критерия Хи-квадрат. Оказалось, что наличие выявленного нами полиморфизма С-ЗЗТ не влияло на клинический статус больных БА (Р > 0.05).
Рисунок 3. Распределение полиморфизма С-ЗЗТ у больных БА с разной степенью тяжести заболевания.
Поскольку при исследовании промоторных полиморфизмов в так называемом ИЛ-4-цитокиновом кластере, локализованном в хромосоме 5я31,1 у больных БА была обнаружена замена С/Т в позиции -590 по отношению к стартовому кодону, мы также попытались выявить полиморфизм С-590Т в промоторной зоне гена ИЛ-4.
В нашем исследовании частота мутантного аллеля Т оказалась 51% в опытной группе и 43% - в контрольной. Генотипы в опытной и контрольной группах распределились неравномерно (рис. 4). В группе больных БА
отмечалось высокое число лиц с гетерозиготным фенотипом по полиморфизму С-590Т, составившее 68,8% от общего числа обследуемых.
Для выявления ассоциации полиморфизма С-590Т с количественным содержанием сывороточного ИЛ-4 и общего использовали тест Крускала-Уоллиса, отдельно в опытной и контрольной группе. Оказалось, что уровень общего 1§Е зависит от мутации в искомой точке как в опытной (Р^0,00091), так и в контрольной (Р-0,03) группах.
¡£ 40 —
Р
С *> —
ю 4— о
Я5_
СС СТ
Больные
И
СС СТ тт
Здоровые
Частоты генотипов и аллелей С-590Т.
й ей СС Т/С Т
БА 18 75 16 111/107 51%
Контр 8 48 18 64/84 43%
Рисунок 4. Распределение частот генотипов по группам обследованных при исследовании полиморфизма С-590Т.
Определение содержания общего ^Е в сыворотках обследованных показало, что уровень этого иммуноглобулина был повышен у пациентов БА с генотипами ТТ и СТ, в то время как в контрольной группе у лиц всех исследуемых генотипов и в опытной группе у лиц с генотипом СС уровень общего ^Е практически у всех обследуемых был нормальным (рис 5)
Внутригрупповые сравнения показали, что уровень общего IgE в опытной группе значимо различался у носителей только двух пар генотипов, а именно при сравнении генотипов гомозигот мутантного и дикого типа (СС-ТТ) с уровнем значимости (Р=0,003) и при сравнении генотипов гомозигот и гетерозигот мутантного типа (СТ-ТТ) - (Р=0,000). При сравнении
генотипов (СС-СТ) не было выявлено достоверного различия (Р=0.285) В группе здоровых не было различий между носителями ни одного из исследуемых генотипов (Р-0.3). Таким образом, полученные данные позволяют говорить об ассоциации мутантного аллеля Т с увеличенным уровнем общего ¡¿Б у больных БА.
4000 3000
г 2000
¿е
иГ
о>
& 1000 о
тт ст сс
а ос Соп1го1
ОвлЛурю
ст ос тт ст сс М)пв сом
Оога!^
Рисунок 5. Зависимость уровня общего ^Е и сывороточного ИЛ-4 от генотипа пациента.
Определение содержания сывороточного ИЛ-4 в обследованных группах лиц показало, что уровень этого цитокина был повышен только у пациентов с БА, имеющих генотип ТТ, в то время как в контрольной группе и в опытной группе у лиц с генотипами СС и СТ уровень сывороточного ИЛ-4 практически у всех обследуемых был нормальным.
С помощью теста Крускала-Уоллиса было показано, что уровень сывороточного ИЛ-4 зависит от мутации в исследуемом промоторном полиморфизме С-590Т как в опытной (Р<0,001), так и в контрольной (Р<0,04) группах. Сравнение попарно генотипов СТ-ТТ и СС-ТТ выявило высокую связь с заболеваемостью (Р = 0.015 и Р = 0.000) в группе больных БА, в то время как в контрольной группе такой ассоциации не обнаружено (Р=Ю.864 и Р=0.590 - соответственно). Таким образом, полученные данные позволяют говорить об ассоциации мутантного аллеля Т и увеличении уровня
сывороточного ИЛ-4 в процессе развития БА. В частности, определенную роль, по-видимому, играет образование дополнительного сайта узнавания для ядерного фактора NFAT при наличии мутантного аллеля Т в этом полиморфизме.
Кроме поиска связи изученного полиморфизма с интегральным клиническим фенотипом атопической БА, нами проведен анализ взаимосвязи генотипов по гену ИЛ-4 со степенью тяжести заболевания и показано, что наличие искомого промоторного полиморфизма С-590Т на клиническое состояние больных и тяжесть заболевания не влияло (Р > 0,05).
Определенный интерес представляло обнаружение полиморфизма G-1098T в группе больных БА Выявление этого полиморфизма, изначально идентифицированного у больных, перенесших PCB инфекцию, могло бы указать на причинно-следственные отношения между респираторными вирусами и развитием БА. По данным литературы, у детей, переболевших PCB инфекцией, выявляется четкая связь между наличием этой промоторной замены G-1098T и более тяжелым течением этого заболевания [Uboldi de Capei М., 2003]. Однако, обнаруженная высокая частота мутантного аллеля Т у больных, перенесших PCB инфекцию, не была связана с заболеваемостью Б А и атопией. Поскольку в литературе также имеются суждения о возможной роли PCB инфекции в формировании бронхиальной гиперреактивности и развитии БА, наличие подобного полиморфизма у больных БА могло бы подтвердить или опровергнуть эту гипотезу [Choi, E.H., 2002].
Мы попытались выявить наличие и возможную связь этого полиморфизма с течением заболевания БА и такими иммунологическими показателями, как общий IgE и сывороточный ИЛ-4, которые ранее не были исследованы у больных с данной нозологией.
При определении частоты мутантного аллеля Т в группе больных БА и в контрольной группе оказалось, что она составила 4% в группе больных БА и 13% в контрольной группе (рис. 6). Нам не удалось выявить связи полиморфизма G-1098T с заболеваемостью БА (Р>0,05).
1<г
о
п ,п
£1
Частоты генотипов и аллелей С-1098Т.
« 8* ёё Т/О Т
БА 1 7 100 9/214 4%
Контр 2 6 59 16/124 13%
СС СТ ТТ СС СТ ТТ
Больные Здоровые
Рисунок 6. Распределение частот генотипов по группам обследованных при анализе полиморфизма 0-1098Т.
Анализ содержания в сыворотках общего 1цЕ и сывороточного ИЛ-4 в 109 сыворотках больных показал, что выявленный полиморфизм Сг-1098Т не влиял на уровень общего 1§Е ни в опытной (Р=0.3), ни в контрольной группе (Р>0,07). Было также показано, что уровень сывороточного ИЛ-4 не зависит от мутации в исследуемом промоторном полиморфизме 0-Ю98Т как в опытной (Р=0,9), так и в контрольной (Р=0,6) группах (табл. 2).
Таблица 2
Содержание общего 1(»Е и сывороточного ИЛ-4 у больных БА и здоровых лиц в зависимости от генотипа.
Содержание сывороточного ИЛ-4
Полиморфизм Генотип Кол-во пациенто в БА Кол-во обследованных Контроль
СЮ 100 20,5(1; 74) 59 1(1; 4)
ОТ 7 17,5(1;57) 6 2(2; 12)
н ТТ 1 1 2 1,2
<Э\ о Содержание общего ^Е
6 СИЗ 100 400(89; 800) 59 45(23; 89)
ОТ 7 118(19; 560) 6 65(40,5; 165)
ТТ 1 256 2 54, 120
Кроме того, не удалось выявить связи полиморфизма 0-Ю98Т в промоторе гена ИЛ-4 с тяжестью заболевания.
Анализ литературных данных и собственных результатов показал, что частота мутантного аллеля Т полиморфизмов С-ЗЗТ и С-590Т достаточно сильно различается среди различных популяций (табл. 3).
Таблица 3.
Частоты мутантного аллеля Т полиморфизмов С-ЗЗТ и С-590Т в разных популяциях.
Исследователи Год ПопуляцияГ Частота Т аллеля Фенотип
Takabayashi 1999 Японцы 63% БА, tlgE, ST* (+)
Suzuki 2000 Японцы 41% tlgE
С-331 Beghe 2003 Англичане 14% БА(-)
Kabesch 2003 Немцы 42% ST(+)
Nagarkatti 2004 Индусы 0 БА(-)
Наши данные 2005 Русские 74% БА, tlgE, «Ш-4 (+)
Rosenwasser 1995 Американцы 40% БА, tlgE, ST* (+)
Walley&Coockson 1996 Англичане/ 31% БА, tlgE(-)
Австралийцы 15%
С-590Т Noguchi 1998 Японцы 70% БА, tlgE (+)
Hijazi& Haider 2000 Кувейтские арабы 75,50% БА, tlgE, ST* (-)
Scarel-Caminaga 2001 Бразильцы Белые 37.3% БА, tlgE, ST (-)
Черные 9.2% БА, TlgE, ST (+)
Наши данные 2005 Русские 51% HgE, 1ИЛ-4 (+)
ST* - Skin test - кожное тестирование (+) - удалось показать взаимосвязь,
(-) не удалось показать взаимосвязь с исследуемыми признаками.
Частота полиморфизма С-ЗЗТ в Европе составляет 15% в Англии, в то время как в Германии она составляет 42%. В Японии она достигает 41% по сведениям одних авторов, и 63% - других. У жителей северной Индии полиморфизма в промоторной зоне гена ИЛ-4 не обнаружено вовсе. Таким
образом, частота мутантного аллеля полиморфизма С-ЗЗТ среди жителей Москвы, русских, все-таки ближе к японской популяции. Исследуя полиморфизм С-590Т можно сказать, что частота этого полиморфизма также сильно различается среди различных популяций. Данные об ассоциации мутаций С-ЗЗТ и С-590Т с БА и некоторыми другими иммунологическими показателями достаточно противоречивы (табл. 3).
В то же время мы получили интересные закономерности при сравнении зависимости уровня IgE от полиморфизма С-ЗЗТ в группе больных БА. Оказалось, что этот маркер атопии четко зависит от наличия данного полиморфизм, но от него также зависит и синтез ИЛ-4, который влияет на уровень IgE (г=+0.43).
Учитывая важнейшую роль ИЛ-4 в развитии атопии, исследование гена этого цитокина и, в частности, его промотора становится ключевым при изучении предрасположенности к атопии и связанной с ней БА. По-видимому, полиморфизм в регуляторной области гена ИЛ-4 может приводить к гиперпродукции цитокина, смещая, таким образом, равновесие Thl/Th2 в сторону последних. Возможный механизм действия полиморфизма С-ЗЗТ следующий: С-ЗЗТ-содержащий локус является частью сайта связывания ядерного фактора CREB. Будучи активированным, CREB рекрутирует коакгиватор СВР, который, в свою очередь, стимулирует транскрипцию гена. Можно предположить, что С-ЗЗТ регулирует экспрессию ИЛ-4, изменяя сайт связывания CREB. Этот сайт представляет собой последовательность GTGAGCAAT, тогда как последовательность вокруг С-ЗЗТ следующая GTGAG(G-» А)СААТ. При полиморфизме происходит замена С нуклеотида (G в комплиментарной цепи) на Т, и эта замена существенно влияет на эффективность связывания CREB и на транскрипцию ИЛ-4.
При исследовании последовательности в промоторе ИЛ-4 от позиции +55 до -685 были обнаружены ряд сайтов, ответственных за связывание с ядерным фактором - активатором транскрипции (NFAT) и названных Р0-Р4 последовательностями [Todd et al., 1998]. NFAT, узнавая соответствующие
последовательности в геномной ДНК, запускает синтез ИЛ-4. Замены, приводящие к увеличению аффинности активатора транскрипции №АТ или снижающие аффинность репрессорных протеинов, могут опосредовать гиперпродукцию ИЛ-4 и в дальнейшем привести к развитию астматического фенотипа [СаБо1аго й а]., 1995].
При исследовании в культуре 1игка1 клеток было выявлено трехкратное увеличение промоторной активности Т аплеля полиморфизма С-590Т [Иовепушвег и., 1995]. Есть данные, что при этой замене хоть и не образуется сайт узнавания для ОТАТ (ТТТСС), однако образуется сайт (ТТССС), который также находится в тесном контакте с №АТ рМсгеп§а е1 а!., 2000]. В дальнейшем были проведены исследования с последовательным удалением Р0-Р4 сайтов I. ап<1 СаШгеН Б., 1997]. В результате была отмечена сохранившаяся транскрипционная активность искусственно сконструированных промоторов. Это показывает, что, возможно, имеет место образование дополнительного сайта узнавания ОТАТ в промоторе гена ИЛ-4 и, как следствие, активация транскрипции этого цитокина.
Имеются данные о влиянии полиморфизмов С-ЗЗТ и С-590Т на тяжесть течения БА. В то же время нам не удалось выявить этой взаимосвязи у наших больных в популяции русских жителей Москвы.
Таким образом, полученные нами данные о полиморфизмах С-ЗЗТ и С-590Т гена ИЛ-4 и их влиянии на ряд иммунологических параметров и формирование БА не однозначны и еще раз подтверждают сложный мультифакторный характер заболевания БА, являющегося комплексом взаимодействий наследственных и средовых факторов.
Яснее выглядит ситуация с полиморфизмом С-1098Т. Полученные данные об отсутствии связи этого полиморфизма с заболеванием БА * согласуются с результатами других авторов, несмотря на то, что одни
выявили высокую частоту мутантного аллеля Т, а другие - низкую частоту. В нашем исследовании частота мутантного аллеля оказалась мала, что не позволяет учитывать «вирусную» составляющую при атопической БА. Мы
получили данные об ассоциации промоторного полиморфизма С-ЗЗТ с заболеваемостью БА в русской популяции, чего нельзя сказать о полиморфизмах С-590Т 0-1098Т. В то же время при доказанном влиянии полиморфизмов С-ЗЗТ, С-590Т на увеличение уровня сывороточного ИЛ-4 и, как следствие, увеличенное содержание общего у больных БА, мы можем говорить только о связи с атопией, но не с тяжестью заболевания, которая обусловлена, по-видимому, другими генетическими и средовыми факторами . По-ввдимому, географическое положение популяций не всегда коррелирует с распределением частот аллелей важнейших генов и этим объясняется разнообразие (и часто противоречивое) данных, полученных исследователями в разных странах. Дальнейшие работы по изучению полиморфных вариантов ключевых цитокинов расширят наше представление о роли генетической составляющей в развитии БА.
выводы.
1. Иммунологическое исследование 109 сывороток крови больных атопической БА легкой, средней и тяжелой степени тяжести выявило повышенный уровень общего ^Е и сывороточного ИЛ-4 в 71% и 66% случаев, соответственно.
2. Частота аллеля Т составила 63% у больных атопической БА и 23% у здоровых людей. Выявленный полиморфизм С-ЗЗТ в промоторной области гена ИЛ-4 ассоциирован с заболеванием БА и такими фенотипическими проявлениями как уровни сывороточного ИЛ-4 и общего 1§Е. Не обнаружено ассоциации между выявленным полиморфизмом С-ЗЗТ и тяжестью заболевания.
3. Частота мутантного аллеля Т оказалась 51% в группе больных атопической БА и 43% в группе здоровых лиц. Полиморфизм С-590Т в промоторной области гена ИЛ-4 не связан с заболеванием БА, но достоверно ассоциирован с такими иммунологическими показателями как уровни сывороточного ИЛ-4 и общего ^Е. Не выявлено ассоциации между выявленным полиморфизмом С-590Т и тяжестью заболевания.
4. Частота полиморфизма 0-1098Т составила 4% в группе больных БА и 13% в контрольной группе. Не обнаружено ассоциации исследованного полиморфизма 0-Ю98Т с количественным содержанием сывороточного ИЛ-4, общего ^Е, заболеваемостью БА и тяжестью ее течения.
СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ
1. Казначеев В. А. Гервазиев Ю. В. Роль полиморфизма генов цитокинов и их рецепторов в развитии атопической бронхиальной астмы. / Астма. 2004; т. 5, №1, с. 73-84.
2. Казначеев В. А., Гервазиев Ю. В. Выявление полиморфизма (С-ЗЗТ) в гене интерлейкина-4 при атопической бронхиальной астме. Материалы VIII Всероссийского научного форума с международным участием имени академика Иоффе В.И. «Дни иммунологии в Санкт - Петербурге». / Мед. иммунология 2004; с. 268.
3. Казначеев В. А., Гервазиев Ю. В. Выявление полиморфизма (С-ЗЗТ) в гене интерлейкина-4 при атопической бронхиальной астме. Материалы II Европейского конгресса по астме, 2-5 октября 2004, Тбилиси. / Астма 2004, том 5, № 1, стр. 107.
4. Казначеев В.А. Влияние полиморфизмов (С-590Т, G-1098T) в промоторе гена интерлейкина-4 на уровень общего IgE и сывороточного IL-4 у больных атопической бронхиальной астмой. Материалы IX Всероссийского научного форума с международным участием имени академика Иоффе В.И. «Дни иммунологии в Санкт - Петербурге». / Мед. иммунология, 2005, том 7, №2-3, стр. 302.
5. Kaznacheev V. A. Gervaziev Yu. V. Polymorphisms in the promoter of the IL-4 gene and bronchial asthma. DAAD Summer School on CURRENT TRENDS IN COMPARATIVE IMMUNOLOGY, Saint-Petersburg, 2005, p. 23
6. Kaznacheev V. A., Gervaziev Yu. V., Gervazieva V. B. Frequency of (C-33T) Interleukin-4 gene polymorphism in a Russian population and its association with bronchial asthma and immunoglobuline-E Allergy Clin. Immunol. Int.: J. World Allergy Org., 2005., Suppl 1., - p. 89-90.
Отпечатано в ООО «Компания Спутник+» ПД № 1 -00007 от 25.09.2000 г. Подписано в печать 10.11.05 Тираж 100 экз. Усл. п.л. 1,38 Печать авторефератов (095) 730-47-74,778-45-60
«¡ 22 83 6
РНБ Русский фонд
2006-4 27802
Оглавление диссертации Казначеев, Валерий Александрович :: 2005 :: Москва
Список сокращений.
Оглавление.
Глава 1. Введение.
Глава 2. Обзор литературы.
2.1 Молекулярные основы этиологии и патогенеза атопии и бронхиальной астмы.
2.2 SNP и известные методы их детекции.
2.3 Гены при астме и атопии.
2.3.1 Генетический контроль базального уровня общего IgE.
2.3.2 Интерлейкин-13.
2.3.3 Интерлейкин-5.
2.3.4. Рецептор ИЛ-4.
2.4 Интерлейкин 4.
2.4.1. Синтез.
2.4.2 Функции.
2.4.3. Роль в развитии астмы.
2.4.4. Полиморфизм ИЛ-4.
Глава 3. Материалы и методы.
3.1 Материалы и оборудование.
3.1.1. Исследуемый материал.
3.1.2. Реагенты.
3.1.3. Оборудование.
3.2. Методы исследования.
3.2.1. Выделение ДНК.
3.2.2. Полимеразная цепная реакция (ПЦР).
3.2.3. Электрофорез фрагментов ДНК.
3.2.4. Гидролиз ДНК рестриктазами.
3.2.5. Твёрдофазый иммуноферментный анализ (ELISA).
3.2.6. Методы статистической обработки результатов.
Глава 4. Собственные исследования.
4.1. Характеристика групп больных бронхиальной астмой на основании клинико-иммунологического исследования.
4.2. Исследование полиморфизма С-ЗЗТ у больных бронхиальной астмой.
4.2.1. Частота выявления мутантного аллеля.
4.2.2. Определение IgE и ИЛ-4.
4.2.2.1. Влияние полиморфизма С-ЗЗТ на уровень общего IgE.
4.2.2.2. Влияние полиморфизма С-ЗЗТ на уровень сывороточного ИЛ-4.
4.2.2.3. Влияние полиморфизма С-ЗЗТ на тяжесть течения заболевания.
4.3. Исследование полиморфизма С-590Т у больных бронхиальной астмой.
4.3.1. Частота выявления мутантного аллеля.
4.3.2. Определение IgE и ИЛ-4.
4.3.2.1. Влияние полиморфизма С-590Т на уровень общего IgE.
4.3.2.2. Влияние полиморфизма С-590Т на уровень сывороточного ИЛ-4.
4.3.2.3. Полиморфизм С-590Т и тяжесть течения заболевания.
4.4. Исследование полиморфизма G-1098T у больных бронхиальной астмой. .62 4.4.1.Частота выявления мутантного аллеля.
4.4.2.0пределение ^Е и ИЛ-4.
Глава 5. Обсуждение результатов
Выводы.
Заключение диссертационного исследования на тему "Полиморфизмы С-3ЗТ, С-59ОТ, G-1098Т в промоторе гена ИЛ-4 при атопической бронхиальной астме"
Выводы
1. Клинико-иммунологическое обследование 109 больных бронхиальной астмой легкой, средней и тяжелой степени тяжести выявило наличие сенсибилизации к неинфекционным аллергенам в 57% случаев, у больных БА было отмечено снижение показателей функции внешнего дыхания, повышенный уровень общего ^Е и сывороточного ИЛ-4 в 71% и 66% случаев, соответственно.
2. Частота аллеля Т составила 74% у астматиков и 21% у здоровых людей. Обнаружено, что полиморфизм С-ЗЗТ в промоторной области гена ИЛ-4 ассоциирован с заболеванием БА и такими фенотипическими проявлениями как уровни сывороточного ИЛ-4 и общего 1§Е. Не выявлено ассоциации между искомым полиморфизмом С-ЗЗТ и тяжестью заболевания.
3. Частота мутантного аллеля Т оказалась 51% в опытной группе и 43% - в контрольной. Обнаружено, что полиморфизм С-590Т в промоторной области гена ИЛ-4 не ассоциирован с заболеванием БА, но достоверно ассоциирован с такими иммунологическими показателями как уровни сывороточного ИЛ-4 и общего 1§Е. Не выявлено ассоциации между искомым полиморфизмом С-590Т и тяжестью заболевания.
4. Частота полиморфизма 0-Ю98Т составила 16% в группе больных БА и 9% в контрольной группе. Полиморфизм не связан с интегральным показателем БА и с тяжестью заболевания. Не обнаружено ассоциации исследованного полиморфизма С-1098Т с количественным содержанием сывороточного ИЛ-4 и общего №
Список использованной литературы по медицине, диссертация 2005 года, Казначеев, Валерий Александрович
1. Баранов В.С., Баранова Е.В., Иващенко Т.Э., с соавт. Геном человека и гены "предрасположенности" (Введение в предиктивную медицину).// СПб.-Интермедика. — 2000. - С. 272.
2. Гриппи М. А. Патофизиология легких. М. - Восточная книжная компания. - 1997. - С. 344.
3. Гущин И.С. Физиология иммуноглобулина Е. // Аллергология и Иммунология 2000. - Т. 1. - № 1. - С. 76-88
4. Иващенко Т.Э., Сиделева О.Г., Петрова М.А. с соавт. Генетические факторы предрасположенности к бронхиальной астме.//Генетика. 2001. - Т. 37. - С. 107-111.
5. Колчанов Н. А., Ананько Е. А., Колпаков Ф. А. с соавт. Генные сети.// Молек. биол. 2000. - Т. 34. - № 4. - С. 533-544.
6. Ляхович В. В., Вавилин В. А., Макарова С. И. с соавт. Роль ферментов биотрансформации ксенобиотиков в предрасположенности к бронхиальной астме и формировании особенностей ее клинического фенотипа.// Вестн. РАМН 2000. -№ 12.-С. 36-41.
7. Пузырев В. П., Степанов В. А. Патологическая анатомия генома человека.//Новосибирск: Наука 1997. - С.224.
8. Резник И.Б. Генетические механизмы развития бронхиальной астмы.// Аллергология 1998. - Т1. - С. 5-12.
9. Украинцева С. В., Сергеев А. С. Популяционный риск возникновения бронхиальной астмы в Москве // Генетика 1995. -Т. 31.-№2.-С. 264-267.
10. Ю.Флепс Дж. Статистические методы для изучения таблиц долей и пропорций. // М.: Финансы и статистика 1989. - С. 319.
11. П.Фрейдин М.Б., Брагина Е.Ю., Огородова JI.M., с соавт. Полиморфизм генов глутатионтрансфераз тета! и мю1 (GSTT1 и GSTM1 у больных атопической бронхиальной астмой в Западносибирском регионе// Молекулярная биология 2002. - Т. 36. - № 4. - С. 630-634
12. Фрейдин М. Б., Кобякова О. С., Огородова JI. М. с соавт. Наследуемость уровня общего интерлейкина-5 и полиморфизм С-703Т гена HJI5 у больных бронхиальной астмой.// Бюлл. эксп. биол. 2000. - Т. 129. - Прил. 1. - С. 50-52.
13. П.Фрейдин М.Б. Генетические основы подверженности к бронхиальной астме.//Генетика-2002. -Т.5 С.25-37.
14. Фрейдин М.Б., Пузырев В.П., Огородова JLM., с соавт. Полиморфизм генов интерлейкинов и их рецепторов: популяционная распространенность и связь с атопической бронхиальной астмой.// Генетика. 2002. - Т. 38.- № 12. С. 89-96.
15. Хаитов Р. М., Богова А. В., Ильина Н. И. Эпидемиология аллергических заболеваний в России.// Иммунология. 1998. -№ 3. - С. 4-9.
16. Чучалин А.Г. Бронхиальная астма. «Русский врач» 2001. -С. 144
17. A genome-wide search for asthma susceptibility loci in ethnically diverse populations. The Collaborative Study on Genetics of Asthma.//Nat Genet 1997. - V. 15 - P. 389-392.
18. Abe E., De Waal Malefyt R., Matruda L. et al. An 11-base-pair DNA sequence motif apparently unique to the interleukin 4 gene confers responsiveness to T-cell activation signals.// Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1992. - V. 89. - P. 2864.
19. Alberts B., Johnson A., Lewis S. Molecular biology of the Cell // J. Mol biol. 2002. - P. 858
20. Anderson L.C., Beaty J.S., Nettles J.W., Seyfried C. E. et al. Allelic polymorphism in transcriptional regulatory regions of HLA-DQB genes.//J. Exp. Med. 1991. - V. 173. P. 181-183.
21. Anderson G.G., Cookson W.O. Recent advances in the genetics of allergy and asthma.// Mol. Med. Today 1999. - V. 5. - P. 264-273.
22. Arai N., Nomura D., Villaret D. et al. Complete nucleotide sequence of the chromosomal gene for human IL-4 and its expression. // J.Immunol. 1989. - V. 142(1). - P. 274-82.
23. Barnes K.C., Marsh D.G. The genetics and complexity of allergy and asthma.// Immunol. Today 1998. - V. 19. - P. 325-332.
24. Beaty J.S., West K.A., Nepom G.T. Functional effects of a natural polymorphism in the transcriptional regulatory sequence of HLA-DQB 1.// Mol. Cell. Biol. 1995 - V. 15. - P. 4771.
25. Beghe B., Barton S., Rorke S. et al. Polymorphisms in the interleukin-4 and interleukin-4 receptor alpha chain genes confer susceptibility to asthma and atopy in a Caucasian population.// Clin Exp Allergy. -2003.-V. 33 (8)-P. 1111-1117.
26. Bleecker E.R., Meyers D.A. Genetics of allergy and asthma.// Allergy and allergic diseases Ed. A. B. Kay. Blackwell Science, Oxford. -1997.-P. 1196-1207.
27. Borish L., Chipps B., Deniz Y. Total serum IgE levels in a large cohort of patients with severe or difficult-to-treat asthma.// Ann. Allergy Asthma Immunol. 2005. - V. 95 (3) - P. 247-253
28. Broide D., Paine M.M., Firestein G.S. Eosinophils express interleukin 5 and granulocyte-macrophage colony-stimulating factor mRNA at sites of allergic inflammation in asthmatics.// J. Clin Invest. 1992. -V. 90.-P. 1414-1424.
29. Brookes A. The essence of SNPs.// Gene -1999.-V.234(2) P. 177-186
30. Bruhn K.W., Nelms K., Boulay J.L. et al. Molecular dissection of the mouse interleukin-4 promoter.// Proc Nat Acad Sci USA. 1993. - V. 90.-P. 9707-9711.
31. Burchard E.G., SILverman E.K., Rosenwasser U., et al. Association between a sequence variant in the IL-4 gene promoter and FEV(l) in asthma.// Am J Respir Crit Care Med. 1999. - V. 160. P. 919-922.
32. Cantrel D. T cell antigen receptor signal transduction pathways.// Annu. Rev. Immunol. 1996. - V. 14. - P. 259-274.
33. Casolaro V., Georas S.N., Song D. et al. Inhibition of NF-AT-dependent transcription by NF-kB: Implications for differential cytokine expression.// Proc. AcadSci USA 1995. - V. 92. - P. 11623.
34. Ceresa B.P., Horvath C.M., Pessin J.E. Signal transducer and activator of transcription-3 serine phosphorylation by insulin is mediated by a Ras/Raf/MEK-dependent pathway. //Endocrinology. 1997. V. 138. -P. 4131-4137.
35. Chand N., Harrison J.E., Rooney S. et al. Anti IL-5 monoclonal antibody inhibits allergic late phase bronchial eosinophilia in guinea pigs.//Eur J Pharmacol.- 1992.-V. 211.- P. 121-123.
36. Choi E.H., Lee H.J., Yoo T. et al. A common haplotype of interleukin-4 gene is associated with severe respiratory syncytial virus disease in Korean children.// J.Infect. 2002. -V. 186. - P. 1207-1211.
37. Chung K.F., Barnes P.J. Cytokines in asthma.// Thorax. 1999. -V. 54. - P. 825-857.
38. Chung J., Uchida E., Grammer T.C. et al. STAT3 serine phosphorylation by ERK-dependent and -independent pathways negatively modulates its tyrosine phosphorylation. // Mol.Cell Biol. -1997.-V. 17. P. 6508-6516.
39. Claudia Sengler et al. Interactions between genes and environmental factors in asthma and atopy: new developments.// Respir. Res. 2002. -V. 3(1).-P. 7-10.
40. Clutterbuck E.J., Hirst E.M., Sanderson C.J. Human interleukin-5 (IL-5) regulates the production of eosinophils in human bone marrow cultures: comparison and interaction with IL-1, IL-3, IL-6 and GM-CSF.// Blood. 1989. - V. 73. - P. 1504-1512.
41. Cookson W.O. The alliance of genes and environment in asthma and allergy.// Nature. 1999. - V. 402., Suppl. - B. 5-11.
42. Cookson W.O., Sharp P.A., Faux J.A. et al. Linkage between immunoglobulin E responses underlying asthma and rhinitis and chromosome 1 lq. // Lancet. 1989. - V. 112. - P. 1292-1295.
43. Corry D.B., H.G., Folkesson M.L. et al. Interleukin 4, but not interleukin 5 or eosinophils, is required in a murine model of acute airway hyperreactivity.// J. Exp. Med. 1996. - V. 193. - P. 109.
44. Crow S. Quarreling geneticists and a diplomat Genetics.// 1995. V. 140 (2).-P. 421-426.
45. Daniels S.E., Bhattacharrya S., James A. et al. A genome-wide search for quantitative trait loci underlying asthma.// Nature. 1996. - V. 383.-P. 247-250.
46. De Santis G.T. et al. A loose cage for transition metals.// Inorg. Chem. 1997. - V. 36 (10). - P. 1996-2001.
47. Dubucquoi S., Desreumaux P., Janin A. et al. Interleukin 5 synthesis by eosinophils: association with granules and immunoglobulin-dependent secretion.// J Exp Med. 1994. - V. 179. P. 703-708.
48. Duetsch G. et al. STAT6 as an asthma candidate gene: polymorphism-screening, association and haplotype analysis in a Caucasian sib-pair study.// Hum. Mol. Genet. 2002. - V. 11(6). - P. 613-621.
49. Elliott K., Fitzpatrick E., Hill D. et al. The -590C/T and -34C/T interleukin-4 promoter polymorphisms are not associated with atopic eczema in childhood.// J AllergyClinImmunol.-200L-V. 108,- P. 285.
50. Emery P.B., Mach, Reith W. The different level of expression of HLA-DRB1 and -DRB3 genes is controlled by conserved isotypic differences in promoter sequence.// Hum. Immunol. 1993. - V. 38. -P. 137.
51. Endo T.A., Masuhara M., Yokouchi M. et al. A new protein containing an SH2 domain that inhibits JAK kinases. // Nature. -1997.-V. 387.-P. 921-924.
52. Falconer D.S. The inheritance of liability to certain diseases, estimated from the incidence among relatives.// Ann. Hum. Genet. -1965.-V. 29.-P. 51-76.
53. Finlay G.A. et al. Matrix metalloproteinase expression and production by alveolar macrophages in emphysema.// Am. J. Respir. Crit. Care Med. 1997. - V. 156. - P. 240-247.
54. Foster P.S., Hogan S.P., Ramsay A.J. et al. IL-5 deficiency abolishes eosinophilia, airways hyperreactivity and lung damage in a mouse asthma model.// J. Exp. Med. 1996. - V. 193. - P. 195.
55. Gelfand E.W. et al. T lymphocytes: setting the tone of the airways.// Nat.Med. 1997. - V. 3 (4). - P. 382-383.
56. Gonzalez F.A., Raden D.L. Davis R.J. Identification of substrate recognition determinants for human ERK1 and ERK2 protein kinases. // J.Biol.Chem. 1991. - V. 266. - P. 22159-22163.
57. Gotoh A., Takahira H., Mantel C. et al Steel factor induces serine phosphorylation of Stat3 in human growth factor-dependent myeloid cell lines. // Blood. 1996. - V. 88. - P. 138-145.
58. Graves P.E., Kabesch M., Halonen M. et al. A cluster of seven tightly linked polymorphisms in the IL-13 gene is associated with total serum IgE levels in three populations of white children.// J Allergy Clin Immun. 2000. - V. 105. - P. 506-513.
59. Grunig G., Warnock M., Wakil A.E. et al. Requirement for IL-13 independently of IL-4 in experimental asthma.// Science. 1998. -V. 282.-P. 2261-2262.
60. Hall I.P. Genetics and pulmonary medicine: asthma.// Thorax. 1999. - V. 54. - P. 65-69.87
61. Hautamaki R.D., Kobayashi D.K., Senior R.M. et al. Requirement for macrophage elastase for cigarette smoke-induced emphysema in mice.// Science. 1997. - V. 277. - P. 2002-2004.
62. Heinrich P.C., Behrmann I., Muller N.G. et al. // BiochemJ. 1998. -V. 334.-P. 297-314.
63. Heinzmann A., Mao X.Q., Akaiwa M. Genetic variants of IL-13 signaling and human asthma and atopy.// Hum Mol Genet. 2000. -V. 9. - P. 549-559.
64. Hershey G.K., Friedrich M.F., Esswein L.A. et al. The association of atopy with a gain-of-fimction mutation in the alpha subunit of the interleukin-4 receptor.// N Engl J Med. 1997. - V. 337. - P. 17201725.
65. Hershey G.K.K. IL-13 receptors and signaling pathways: an evolving web // J.Allergy Clin.Immunol. 2003. - V. 111 (4). - P. 677-90.
66. Hijazi Z., Haider. M.Z. Interleukin-4 gene promoter polymorphism C590T. and asthma in Kuwaiti Arabs.// Int Arch All Immun. 2000. -V. 122.-P. 190.
67. Jarvis D., Burney P. Epidemiology of atopy and atopic diseases // Oxford Press 1997. - P. 1208-1224.
68. Jin Y., Chen C., Xu Y. et al. Genetic epidemiological study of asthma in general. // Wei Sheng Yan.Jiu. 1998. - V. 27(1). - P. 29-31.
69. Kabesch M., Baldini M., Graves PE., et al. Complete screening of the IL-4 gene and its flanking region for novel polymorphisms. // Am.Jour.Resp.Crit.Care Medicine. 2000. - V. 161(3). - P. A929.
70. Kawashima T., Noguchi E., Arinami T. et al. Linkage and association of an interleukin 4 gene polymorphism with atopic dermatitis in Japanese families. // J Med Gene 1998. - V. 35. P. 502-504.
71. Keatings VM., O'Connor BJ., Wright LG. et al. Late response to allergen is associated with increased concentrations of tumor necrosis factor-alpha and IL-5 in induced sputum. // J Allergy Clin Immunol -1997.-V. 99.-P. 693-698.
72. Kita H., Gleich G.J. Chemokines active on eosinophils. Potential roles in allergic inflammation. // J. Exp. Med. 1996. - V. 193. - P. 24212426.
73. Kruse S., Japha T., Tedner M. et al. The polymorphisms S503P and Q576R in the interleukin-4 receptor a gene are associated with atopy and influence the signal transduction. // Immunology 1999. - V. 96. -P. 365-371.
74. Kumar G., Gupta S., Wang S. et al. Involvement of Janus kinases, p52shc, Raf-1, and MEK-1 in the IL-6-induced mitogen-activated protein kinase cascade of a growth-responsive B cell line // J.Immunol. 1994. - V. 153. - P. 4436-4447.
75. Lacour F. cAMP up-regulates IL-4 and IL-5 production from activated CD4+ T cells while decreasing IL-2 release and NF-AT induction. // Int.Immunol. 1994. - V. 6(9) - P. 1333-1342.
76. Lamb P., Seidel HM., Haslam J. et al STAT protein complexes activated by interferon-gamma and gpl30 signaling molecules differ in their sequence preferences and transcriptional induction properties. // Nucleic.Acids.Res. 1995. - V. 23. - P. 3283-3289.
77. Laitinen T., Kauppi P., Ingatius J. et al. Genetic control of serum IgE 1 levels and asthma: Linkage and linkage disequilibrium studies in an isolated population. // Hum. Mol. Gen. 1997. - V. 6. - P.2069-2076
78. Lander E.S., Schork N.J. Genetic dissection of complex traits. // Science.- 1994.-V. 265. P. 2037-2047.
79. Li-Weber, M., Eder A., Krafft-Czepa H. et al. T cell-specific negative regulation of transcription of the human cytokine IL-4. // J. Immunol. 1992.-V.148.-P. 1913.
80. Li-Weber M., Laur O.I., Davydov V.C. et al. What controls tissue- i specific expression of the IL-4 gene? // Immunobiology 1997. - V.198.-P. 170-178.
81. Li-Weber M., Kramer P. H. Regulation of IL-4 gene expression by T cells and therapeutic perspectives. // Nat.Rev.Immunol. 2003. - V. 3(7). - P. 534-43.
82. Li-Weber M., Davydov I.V., Krafft, H. et al. The role of NF-Y and IRF-2 in the regulation of human IL-4 gene expression // J.Immunol. 1994.-V. 153(9)-P. 4122-33
83. Li-Weber M., Salgame P., Hu C. et al. Th2-specific protein/DNA interactions at the proximal nuclear factor-AT site contribute to the functional activity of the human IL-4 promoter // J.Immunol. 1998. -V. 161(3)-P. 1380-9
84. Lim CP., Cao X Regulation of Statt activation by MEK kinase 1 -J.Biol.Chem. 2001 276(24) 21004-11
85. Lim CP., Cao X. Serine phosphorylation and negative regulation of Statt by JNK// J.Biol.Chem.- 1999. V. 274. -P. 31055-31061.
86. Liu X., Nickel R., Beyer K. et al. An IL 13 coding region variant is associated with a high total serum IgE level and atopic dermatitis in the German multicenter atopy study (MAS-90). // J. Allergy Clin Immunol 2000. - V. 106. - P. 167-170.
87. Lopez AF., Begley CG., WILliamson DJ. et al. Murine eosinophil differentiation factor. An eosinophil-specific colony-stimulating factor with activity for human cells. // J Exp Med- 1986. V. 163. - P. 1085-1099.
88. Lopez AF., Sanderson CJ., Gamble JR., et al. Recombinant human interleukin 5 is a selective activator of human eosinophil function. // J Exp Med 1988. - V. 167. - P. 219-224.
89. Mauser PJ., Pitman A., Witt A. et al. Inhibitory effect of the TRFK-5 anti-IL-5 antibody in a guinea pig model of asthma. // Am Rev Respir Dis 1993. - V. 148. - P. 1623-1627.
90. Mauser PJ., Pitman AM., Fernandez X. et al. Effects of an antibody to interleukin-5 in a monkey model of asthma. // Am J Respir Crit Care Med 1995. - V. 152. - P. 467-472.
91. Marsh DG., Neely JD., Breazeale DR. et al: Linkage analysis of IL4 and other chromosome 5q31.1 markers and total serum immunoglobulin E concentrations. // Science 1994. - V. 264. - P. 1152-1156.
92. Meyers D. A., Postma D. S., Panhuysen C. I. M. et al. Evidence for a locus regulating total serum IgE levels mapping to chromosome 5 // Genomics 1994. - V. 23. - P. 464-470. *
93. Meyers D. A. New approaches to understanding the genetics of asthma // Immunol.Allergy Clin.North Am. 2005. - V.25(4). - P. 743-55.
94. Mitsuyasu H., Izuhara K., Mao X.Q. et al. ILe50Val variants or IL4Ra upregulates IgE synthesis and associates with atopic asthma // Nature Genet. 1998. - V. 19. - P. 119-120.
95. Mitsuyasu H., Yanagihara Y., Mao X.Q. et al. Dominant effect of ILe50Val variant of the human IL-4 receptor a-chain in IgE synthesis //J. Immunol. 1999.-V. 162.-P. 1227-1231.
96. Miyajima A., Kitamura T., Harada N. et al. Cytokine receptors and signal transduction // Annu.Rev.Immunol. 1992. - V. 10. - P. 295331.
97. Moffatt MF., Schou C., Faux JA. Et al. Germline TCR-A restriction of immunoglobulin E responses to allergen. // Immunogenetics -1997.-V. 46.-P. 226-230.
98. Naka T., Narazaki M., Hirata M. et al. Structure and function of a new STAT-induced STAT inhibitor // Nature-1997.-V.387.-P.924-29.
99. Ng J., Cantrell D. STAT3 Is a Serine Kinase Target in T Lymphocytes. IL-2 and T cell antigen receptor signals converge upon BiyKiiny 727 // J.Biol.Chem. 1997. - V. 272. - P. 24542-24549.
100. Noguchi E., Shibasaki M., Arinami T. et al: Association of asthma and the interleukin-4 promoter gene in Japanese. // Clin Exp Allergy -1998.-V. 28.-P. 449-453.
101. Noguchi E., Shibasaki M., Arinami T. et al. Lack of association of atopy/asthma and the interleukin-4 receptor a gene in Japanese // Clin. Exp. Allergy- 1999. V. 29. - P. 228-233.
102. Noguchi E., Shibasaki M., Arinami T et al. No association between atopy/asthma and the Ile50Val polymorphism of IL-4 receptor. // Am J Respir Crit Care Med 1999. - V. 160. - P. 342-345.
103. Paul W.E., Seder R.A. Lymphocyte response and cytokines. // Cell. 1994.-V. 76.-P. 241-251.
104. Patuzzo C., Trabetti E., Malerba G. et al. No linkage or association of the IL-4Ralpha gene Q576R mutation with atopic asthma in Italian famlLies. // J Med Genet. 2000. - V. 37. - P. 382-384.
105. Pellegrini S., Dusanter-Fourt I. The structure, regulation and function of the Janus kinases (JAKs) and the signal transducers and activators of transcription (STATs) // Eur.J.Biochem. 1997. - V. 248.-P. 615-633.
106. Polvi A., West A., Kinos R. et al. Development of Asthma-Immuno Chip for gene expression studies of asthma and other immune mediated diseases. // Am. J. Hum. Genet. 2000. - V. 67- P. 382.
107. Postma D.S., Bleecker E.R., Amelung PJ. et al. Genetic susceptibility to asthma bronchial hyperresponsiveness coinherited with a major gene for atopy.// N.Eng.J.Med.-1995.-V.333-P.894-900.
108. Renauld J-C. New insights into the role of cytokines in asthma. // J Clin Pathol. 2001. - V. 54. - P. 577-589.
109. Ricci M., Matucci A., Rossi O. Pathogenetic mechanisms and genetic aspects of bronchial asthma. // ACI International. 1997. -V. 9.-P. 141-148.
110. Rooney J.W., Hoey T., Glimcher L.H. The Proximal promoter of the IL-4 gene is composed of multiple essential regulatory sites that bind at least two distinct factors. // Immunity. 1995. - V. 2. - P. 473.
111. Rooney J.W., Hodge M.R., McCaffrey P.G. et al. A common factor regulates both Thl- and Th2-specific cytokine gene expression. // EMBO J. 1994. - V. 13. - P. 625.
112. Rosa-Rosa L., Zimmermann N., Bernstein J.A. et al. The R576 IL-4 receptor alpha allele correlates with asthma severity. // J Allergy Clin Immunol. 1999. - V. 104. - P. 1008-1014.
113. Rosenwasser L.J. The genetics of atopy. // Allergy. 1998. - V. 53 (46).-P. 8-11.
114. Rosenwasser L.J., Klemm D.J., Dresback J.K. et al. Promoter polymorphisms in the chromosome 5 gene cluster in asthma and atopy. // Clin Exp Allergy. 1995. - V.25 (2). - P. 74-78.
115. Scarel-Caminaga R.M., TrevILatto P.C., Souza A.P. et al. Frequencies of the -330 (T G) IL-2 and -590 (T -> C) IL-4 gene polymorphisms in a population from south-eastern Brazil. // European Journal of Immunogenetics. 2001. - V. 29. - P. 293-296.
116. Schindler C., Darnell-JE J. Transcriptional responses to polypeptide ligands: the JAK-STAT pathway. // Annu.Rev.Biochem. 1995. - V. 64.-P. 621-651.
117. Schindler U., Wu P., Rothe M. Components of a Stat recognition code: evidence for two layers of molecular selectivity.// Immunity -1995. V. 2. - P. 689-697.
118. Schreiber S.L., Crabtree G.R. The mechanisms of action of cyclosporin A and FK506. // Immunol Today. 1992. - V. 13. -P. 136-142.
119. Sibbald B. Genetic bases of asthma. // Semin. Resp. Med. 1986. -V. 7. - P. 307-315.
120. Shapiro S.D. Animal models for chronic obstructive pulmonary disease. Age of klotho and marlboro mice. Am. // J. Respir. Cell Mol. Biol. 2000. - V. 22. - P. 4-7.
121. Song Z., Casolaro V., Chen R. et al. Polymorphic nucleotides within the human IL-4 promoter that mediate overexpression of the gene. // J Immunol. 1996. - V. 156. - P. 424-429.
122. Starr R., WILlson T.A., Viney E.M. et al. A family of cytokine-inducible inhibitors of signaling. //Nature 1997.-V. 387.- P. 917-21.
123. Stavnezer J. Antibody class switching. // Adv. Immunol. 1996. -V.61.-P. 79-146.
124. Stranick K.S., Zambas D.N., Uss A.S. et al. Identification of transcription factor binding sites important in the regulation of the human interleukin-5 gene. // J Biol Chem. 1997. V. 272. P. 1645316465.
125. Suzuki I., Hizawa N., Yamaguchi E., et al. Association between a C+33T p olymorphism in the IL-4 promoter region and total s erum IgE levels. // Clin Exp Allergy 2000. - V. 30 - P. 1746-1749.
126. Suzuki I., Yamaguchi E., Hizawa N. et al. A new polymorphism in the 5' flanking region of the human interleukin (IL)-4 gene. // Immunogenetics. 1999. - V. - 49. - P. 738-739.
127. Symula D.J., Frazer K.A., Ueda Y. et al. Functional screening of an asthma QTL in YAK transgenic mice. // Nature Genet. 1999. - V. 23. - P. 241-244.
128. Szabo S.J., Gold J. S., Murphy T. L., et al. Identification of cisacting regulator elements controlling interleukin-4 gene expression in T cells: roles for NF-Y and NFATc. // Mol. Cell. Biol. 1993. -V. 13. -P. 4793-4805.
129. Takabayashi. A., Ihara. K., SasakiY. et. al. Novel polymorphism in the 5'-untranslated region of the interleukin-4 gene. // J. Hum.Genet. 1999. - V. 44.-P. 352-353.
130. Takeda K., Akira S. STAT family of transcription factors in cytokine-mediated biological responses // Cytokine Growth Factor Rev. 2000. - V. 11. - P. 199-207.
131. Trejaut J.A., Tsai Z.U., Lee H.L. Cytokine gene polymorphisms in Taiwan. // Tissue Antigens. 2004. - V. 64(4). - P. 492-499.
132. Todd M.D., Grusby M.J., Lederer J.A. et al. Transcription of the Interleukin 4 Gene Is Regulated by Multiple Promoter Elements. // J. Exp. Med. 1993. - V. 177. - P. 1663-1674.
133. Tokoyoda K., Tsujikawa K., Matsushita H. Up-regulation of IL-4 production by the activated cAMP/cAMP-dependent protein kinase (protein kinase A) pathway in CD3/CD28-stimulated naive T cells. // Int.Immunol. 2004. - V. 16 (5). - P. 643-655.
134. The Collaborative Study on the Genetics of Asthma. A genome-wide search for asthma susceptibility loci in ethnically diverse populations // Nature Genet. 1997. - V. 15. - P. 389-392.
135. Walley A.J., Cookson W.O. Investigation of an interleukin-4 promoter polymorphism for associations with asthma and atopy. // J Med Genet. 1996. - V. 33. - P. 689.
136. Walley A.J., Wiltshire S., Ellis C.M. et al. Linkage and allelic association of chromosome 5 cytokine cluster genetic markers with atopy and asthma associated traits. // Genomics. 2001. - V. 72 (1). -P. 15-20.
137. Walker C.E., Bode L., Boer T.T. et al. Allergic and nonallergic asthmatics have distinct patterns of T-cell activation and cytokine production in peripheral blood and bronchoalveolar lavage. // Am. Rev. Respir. Dis. 1992. - V. 146. - P. 109-112.
138. Walker C., Jr J.C., Virchow P.L. et al. T cell subsets and their soluble products regulate eosinophilia in allergic and nonallergic asthma.//J. Immunol.- 1991.-V. 146. P. 1929-1932.
139. Wenner C.A., Szabo S.J., Murphy K.M. Identification of IL-4 promoter elements conferring Th2-restricted expression during Thelper cell subset development. // J. Immunol. 1 997. - V. 1 58. -P. 765-773.
140. Wills-Karp M., Luyimbazi J., Xu X. et al. Interleukin-13: central mediator of allergic asthma.// Science. 1998.-V. 282.-P. 2258-2261.
141. Woolcock A.J., Peat J.K. Evidence for the increase of asthma worldwide // The rising trends in asthma Ed. D. Chadwick, G. Cadrew. J. WILey & Sons, Chichester. - 1997. P. 122-139.
142. Yamaguchi Y., Hayashi Y., Sugama Y. et al. Highly purified murine interleukin 5 (IL-5) stimulates eosinophil function and prolongs in vitro survival. IL-5 as an eosinophil factor. // J Exp Med. 1988. -V. 167.-P. 1737-1740.
143. Yan L., Galinsky R.E., Bernstein J.A. et al. Histamine N-methyltransferase pharmacogenetics: association of a common functional polymorphism with asthma. // Pharmacogenetics. 2000. -V. 10. - P. 261-266.
144. Zhang Y., Lefort J., Kearsey V. et al. A genome-wide screen for asthma-associated quantitative trait loci in a mouse model of allergic asthma. // Hum. Mol. Genet. 1999. - V. 8. - P. 601-605.
145. Zheng T., Zhu Z., Wang Z. Inducible targeting of IL-13 to the adult lung causes matrix metalloproteinase- and cathepsin-dependent emphysema. / J. Clin. Invest. 2000. - V. 106(9). - P. 1081-1093.
146. Zheng T., Zhu Z., Liu W. et al. Cytokine regulation of IL-13Ralpha2 and IL-13Ralphal in vivo and in vitro. // J. Allergy Clin. Immunol.2003.-V. 11 (4). P. 720-728.
147. Zhou G., Zhai Y., Dong X. et al. Haplotype structure and evidence for positive selection at the human I LI 3 locus. / / Mol.Biol.Evol.2004.-V. 21 (1).-P. 29-35.
148. Zhu Z, Homer R.J., Wang Z. et al. Pulmonary expression of interleukin-13 causes inflammation, mucus hypersecretion, subepithelial fibrosis, physiologic abnormalities, and eotaxin production. // J Clin Invest. 1999. - V. - 102. - P. 779-788.
149. Zhu Y., Chen L., Huang Z. et al. IL-5 primes Th2 cytokine-producing capacity in eosinophils through a STAT5-dependent mechanism. // J. Immunol. 2004. - V. 173 (5) - P. 2918-2922.
150. Zhu Z., Lee C.G., Zheng T., Chupp G. et al. Airway inflammation and remodeling in asthma. Lessons from interleukin 11 and interleukin 13 transgenic mice. // Am. J. Respir. Crit Care Med.-2001.-V. 164 (10).-P. 67-70.