Автореферат и диссертация по медицине (14.03.09) на тему:Полиморфизмы генов про- и противовоспалительных цитокинов, мутации генов BRCA 1/2 при злокачественных новообразованиях органов женской репродуктивной системы

На правах рукописи

АНОХИНА ЕЛЕНА НИКОЛАЕВНА

Полиморфизмы генов про- и противовоспалительных цитокинов, мутации генов ВКСА1/2 при злокачественных новообразованиях органов женской репродуктивной системы

14.03.09 - клиническая иммунология, аллергология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

005567997

2 9 АПР 2015

Майкоп - 2015

005567997

Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Адыгейский государственный университет»

Научный руководитель: доктор биологических наук, профессор

Тугуз Аминат Рамазановна

Официальные оппоненты: Аниеимова Наталья Юрьевна, доктор

биологических наук, ФГБНУ «Российский онкологический научный центр им.

H.H. Блохина», ведущий научный сотрудник лаборатории клеточного иммунитета

Симбирцев Андрей Семенович, доктор медицинских наук, профессор, ФГУП

«Государственный научно-исследовательский институт особо чистых биопрепаратов», директор

Ведущая организация: ГБОУ ВПО «Кубанский государственный

медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации.

Защита диссертации состоится «18» июня 2015г. в 14 часов на заседании диссертационного совета Д 001.035.01 в ФГБНУ «Научно-исследовательский институт вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова» по адресу: г. Москва, Малый Казенный переулок, д. 5А.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГБНУ «Научно-исследовательский институт вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова».

Автореферат разослан « /7 » 2015г.

Ученый секретарь диссертационного совета

кандидат биологических наук ____ Яковлева Ирина Владимировна

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность исследования. Злокачественные новообразования (ЗНО) органов женской репродуктивной системы занимают одно из ведущих мест в структуре общей заболеваемости и смертности населения развитых стран [Давыдов и др., 2009; Чиссов и др., 2012; Каприн и др., 2014]. За последние 10 лет (2003-2013 гг.) в России и Республике Адыгея (РА) наблюдается устойчивая тенденция к росту смертности от рака молочной железы (прирост в 2013 г. составил 2,63 и 4,7%), яичников (3,39 и 1,9%), тела и шейки матки (8,82/3,56% и 6,04/5,9%), что в значительной степени обусловлено поздней диагностикой заболеваний [Каприн и др., 2015].

Исследование молекулярно-генетических предикторов онкологических заболеваний с учетом варьирования фенотипических проявлений генетических систем позволит выявить информативные детерминанты для доклинической диагностики и первичной профилактики неоплазий [В .П. Пузырев, 2007]. В мировой практике злокачественные новообразования женских репродуктивных органов преимущественно ассоциируют с генами BRCA1 и BRCA2 (Breast cancer antigen), поддерживающими стабильность генетического аппарата клеток, репарации ДНК и обеспечивающими целостность генома [Wang et al., 2000; Nathanson et al., 2001; Venkitaraman, 2001]. Мутации и многочисленные полиморфные варианты генов BRCA1/2, снижающие супрессивный эффект продуктов генов BRCA1/2 на опухолевые клетки и обуславливающие развитие ЗНО молочной железы, желудка и др. локализаций, неравномерно распределены в мировых популяциях, чаще выявляются у евреек-Ашкенази с аденокарциномой молочной железы (до 22%), но для других этнических групп не имеют прогностической значимости [Levy-Lahad et al., 1997; Mehdipour et al., 2006; Krajc et al., 2008; Esteves et al., 2009; Brozek et al., 2011; Kwong et al., 2012; Blay et al., 2013].

Актуальность исследования обусловлена поиском прогностически информативных генов-маркеров злокачественных новообразований. Гены

медиаторов иммунной системы — основных про- и противовоспалительных цитокинов, регулирующие системные воспалительные реакции организма, вовлечены в патофизиологические процессы, включая и неопластические [Кологривова и др., 2011]. В ряде работ представлены весьма противоречивые сведения о роли цитокинов при некоторых злокачественных новообразованиях [Han et al., 2008; Konwar R. et al., 2009; Roszak et al., 2012].

Фактором, определяющим двойственную роль цитокинов в развитии системных заболеваний, могут быть полиморфизмы их генов в виде точечных мутаций (SNP - single nucleotide polymorphisms) с заменой одного нуклеотида на другой, делеций нуклеотидов или небольших фрагментов гена, инсерций, многочисленных тандемных повторов частей генов и т.д. SNP в экзонах, интронах и в промоторных участках регулируют интенсивность экспрессии и, соответственно, биологические эффекты цитокинов [Кутихин и др., 2012].

Цель работы: исследование ассоциации полиморфизмов генов основных про- и противовоспалительных цитокинов, мутаций генов BRCA1/2 со злокачественными новообразованиями органов женской репродуктивной системы у жителей Республики Адыгея.

Задачи:

1. Анализ распределения мутаций генов-супрессоров опухолевого роста BRCA1/2 (5382insC, 185delAG, 4153delA, Cys61Gly, 2080delA, 3819delGTAAA, 3875delGTCT, 6174delT) у доноров и онкологических больных.

2. Типирование полиморфизмов генов IL-17A (G197A), IL-17F (A7488G, Hisl61Arg), IL-2 (T330G), IL-12B (А1188С), IL-10 (G1082A, С819Т, С592А), IL-4 (С589Т), ассоциированных со злокачественными новообразованиями органов женской репродуктивной системы.

3. Выявление SNP-маркеров опухолевой профессии и прогностически неблагоприятных гистотипов низкодифференцированной аденокарциномы молочной железы.

4. Исследование влияния полиморфизмов генов IL-17A (G197A), IL-2 (T330G), IL-10 (G1082A, С819Т, С592А), IL-4 (С589Т) на спонтанную и стимулированную in vitro продукцию цитокинов мононуклеарными клетками крови доноров и онкологических больных.

Научная новизна работы.

Впервые у жителей Республики Адыгея:

- определены частоты 8 мутаций генов BRCA1/2 у доноров и больных со злокачественными новообразованиями женских репродуктивных органов;

- типированы аллельные варианты генов основных про- и противовоспалительных цитокинов: IL-17A (G197A), IL-17F (A7488G, Hisl61Arg), IL-2 (T330G), IL-4 (С589Т), IL-10 (G1082A, C819T, C592A), IL-12B (A1188C) в этнических группах населения PA;

- установлены аллельные варианты генов IL-17A (G197) и IL-10 (819Т), ассоциированные с опухолевой прогрессией и прогностически неблагоприятным гистотипом низкодифференцированной аденокарциномы молочной железы.

- выявлены этнические различия по ассоциации полиморфизмов генов основных про- и противовоспалительных цитокинов со злокачественными новообразованиями женских репродуктивных органов (у русских женщин -G197 аллель IL-17A, 819Т полиморфный вариант IL-10, у адыгеек - 7488G полиморфизм IL-17F, 592А аллель IL-10).

Впервые исследовано влияние полиморфизмов генов IL-2, IL-4, IL-10, IL-17A и гаплотипов гена IL-10 на сывороточные уровни и продукцию цитокинов in vitro мононуклеарными клетками периферической крови (РВМС) онкологических больных с гистологически верифицированным диагнозом рака молочной железы.

Научно-практическая значимость:

На основании экспериментальных данных показано, что с неоплазиями женских репродуктивных органов ассоциированы полиморфизмы генов противовоспалительных IL-4, IL-10, влияющие на продукцию цитокинов.

Типированные молекулярно-генетические детерминанты опухолевой профессии и прогностически неблагоприятных гистотипов неоплазий расширят представления о механизмах клеточной трансформации и будут способствовать разработке медиаторной концепции канцерогенеза.

Полученные новые данные могут быть востребованы в предиктивной медицине и включены в перечень скрининговых панелей онкологических диспансеров для донозологической диагностики ЗНО женских репродуктивных органов; использованы в преподавании дисциплин федерального компонента «Генетики», «Иммунологии» для биологических факультетов университетов, в разработках курса лекций по «Клинической генетике», «Клинической иммунологии» в медицинских ВУЗах, на курсах повышения квалификации медицинских работников.

Положения, выносимые на защиту:

1. Мутации генов BRCA1/2 прогностически не значимы при ЗНО женских репродуктивных органов в этнических группах населения РА.

2. Факторами риска развития рака молочной железы (РМЖ), тела (РТМ) и шейки матки (РШМ) являются 7488G (161Arg) аллель, A7488G (Hisl61Arg) генотип гена IL-17F, 592А аллель гена 1L-10 (преимущественно у адыгов), G197 - гена IL-17A, 819Т полиморфизм гена IL-10, А1188А генотип и А1188 аллель гена IL-12B (у русских женщин), 589Т аллель гена IL-4 (для адыгов и русских).

3. Опухолевая прогрессия сопряжена с носительством G197 аллели гена IL-17А, ТЗЗО аллельного варианта гена IL-2, 589Т аллели гена IL-4, А1188 -IL-12B, G1082 и 819Т аллелей гена IL-10.

4. РВМС онкологических больных по сравнению с донорами характеризуются сниженной продукцией медиаторов, регулирующих этапы реализации воспалительной реакции и противоопухолевого иммунитета: триггерного IL-17, ростового IL-2, прогаювоспалигельного IL-10.

Апробация работы. Основные положения диссертационной работы представлены в материалах научно-практических конференций: VIII ежегодной научной конференции студентов и аспирантов базовых кафедр Южного научного центра РАН (Ростов-на-Дону, 2012); Всероссийской научно-практической конференции «Актуальные вопросы медицинской науки» (Ярославль, 2012); II Всероссийской научной конференции молодых ученых «Проблемы биомедицинской науки третьего тысячелетия» (Санкт-Петербург, 2012); Международной научной конференции молодых ученых, аспирантов и студентов «Перспектива-2013» (Нальчик, 2013); 18-ой международной Пущинской школе-конференции молодых ученых «Биология - наука XXI века» (Пущино, 2014); VI съезда вавиловского общества генетиков и селекционеров (ВОГиС) и ассоциированных генетических симпозиумов (Ростов-на-Дону, 2014).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 15 печатных работ, из них 1 методическое пособие; 8 статей в ведущих рецензируемых научных журналах, рекомендованных ВАК РФ; 6 публикаций - в материалах российских конференций.

Внедрение результатов исследования. Работа выполнена в рамках аналитической ведомственной целевой программы, проводимой по заданию Минобрнауки РФ в 2012-2014 гг. (ЕЗН, код ГРНТИ 34.2341, 34.23.53, 34.13.37, № проекта 4.1334.2011, № гос. контракта 01201276009).

Материалы диссертационного исследования внедрены в учебный процесс Адыгейского государственного университета и лечебного факультета Майкопского государственного технологического университета в рамках биологических и клинических дисциплин: «Нормальная физиология»,

«Медицинская генетика», «Иммунология» для подготовки биологов и врачей общей практики.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 137 страницах компьютерного текста, содержит 46 таблиц, иллюстрирована 10 рисунками, состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, результатов исследований, обсуждения полученных результатов, выводов, практических рекомендаций, приложения, библиографического указателя используемой литературы, включающего 48 отечественных и 232 иностранных источников.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материалы и методы.

Общая характеристика больных и доноров. В исследование включено 343 женщин этнических групп адыгов (п=83), русских (п=242) и др. национальностей (п=18), проживающих в Республике Адыгея. Доноры (п=171) - женщины в возрасте 31,3±13,8 лет, подобраны эмпирически, без клинических проявлений онкопатологии и других хронических заболеваний.

Онкологические больные (п=172, средний возраст 52,8±9,8 лет) -пациентки Адыгейского Республиканского онкологического диспансера г. Майкопа (2011-2013 гг.) с гистологически верифицированными диагнозами злокачественных новообразований женских репродуктивных органов (молочной железы, яичников, тела и шейки матки). Исследование проведено в соответствии с ФЗ РФ от 21 ноября 2011 г. № 323-ф3 «Об основах охраны здоровья граждан в Российской Федерации» с соблюдением принципов добровольности и конфиденциальности.

Молекулярно-генетические методы. Генотипирование образцов ДНК проводили ПЦР-методом аллель-специфическими праймерами с использованием коммерческих тест-систем НПФ «Литех» (Россия); ООО «ДНК-технология» (Россия) с электрофоретической детекцией результатов и

в режиме реального времени (PCR-Real Time). Геномная ДНК выделена из стабилизированной ЭДТА цельной периферической крови реагентами «ДНК-экспресс-кровь» (НПФ «Литех», Россия) и «ПРОБА-ГС-ГЕНЕТИКА» (ООО ДНК-Технология, Россия) с последующей амплификацией в программируемом термостате «Терцик» (ООО «ДНК-Технология») и термоциклере ДТ-Lite (ООО ДНК-Технология, Россия). Результаты электрофоретической детекции продуктов амплификации визуализированы УФ-облучением (длина волны 310 нм) в трансиллюминаторе Gel Doc XR («Bio-Rad», USA) с помощью программы «Quantity One» («Bio-Rad», USA). Детекция и учёт результатов в режиме Real Time осуществлялись амплификатором автоматически. Качество геномной ДНК тестировано на спектрофотометре «NanoDrop 2000с» (Termo Scientific, USA).

Выделение РВМС. Мононуклеарные клетки периферической крови выделены из стабилизированной гепарином (25 ед/мл) периферической крови на одноступенчатом градиенте фиколла («Histopaque», плотность 1.077, «Sigma», USA), центрифугированием при 4°С и 400g в течение 30 минут. Лимфоидные клетки, образовавшие интерфазное кольцо, собраны пипеткой и трехкратно отмыты средой 199 («ПанЭко», Москва). После каждой отмывки в 10-кратном объеме среды, клетки осаждены центрифугированием при 300g и 4°С. Ресуспендированные в 1 мл среды РВМС, разведены рабочей культуральной средой (фосфатным солевым буфером, «ПанЭко», Москва) до концентрации 2-5-106 клеток/мл.

Постановка спонтанной и стимулированной продукции цитокинов. Для оценки уровня спонтанной продукции медиаторов in vitro, интактные РВМС больных и доноров с концентрацией 2-5-106 клеток/мл в среде RPMI-1640 («ПанЭко», Москва), содержащей 10% фетальной сыворотки («ПанЭко»), 80 мкг/мл гентамицина, культивированы в 24-луночных планшетах «Costar» в течение 18 ч в С02 - инкубаторе («Sanyo», Япония) при

37°С и 5% С02. Конечные концентрации ФГА («ПанЭко»), использованные для стимулированной продукции цитокинов, составили 5 мкг/мл.

Иммуноферментный анализ. Образцы сыворотки для ИФА отобраны в пробирки после инкубации крови в термостате при 37°С и центрифугирования в режиме 400g 15мин. Уровни цитокинов в сыворотках, культурапьной среде интактных и стимулированных in vitro ФГА РВМС детектированы в триплетах твердофазным сэндвич-ИФА (ELISA) на коммерческих тест-системах ООО «Цитокин» (Санкт-Петербург, Россия) в 96-плашечном спектрофотометре («BioRad», США) с помощью программы «Земфира 4.0» («BioRad», США).

Статистический анализ экспериментальных данных. Сравнительный статистический анализ частот генотипов, гаплотипов и аллелей генов цитокинов опытной и контрольной групп проведен с помощью критерия (хи-квадрат), U-критерия Манна-Уитни. Достоверность различий концентрации цитокинов в образцах сывороток, культурапьной среде РВМС доноров и больных определяли с использованием критерия Стьюдента (t). Различия считались статистически значимыми при р<0,05. Расчеты проведены в пакете программ SPSS Statistics 17.0 (Inc., Chicago, USA).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ОБСУЖДЕНИЕ

Мутации генов BRCA1/2 при злокачественных новообразованиях женских репродуктивных органов

Для исследования роли мутаций генов - супрессоров опухолевого роста в патогенезе ЗНО репродуктивных органов, у жительниц РА проанализировано распределение частот наиболее распространенных в мире 8 мутаций генов BRCA1/2 (5382insC, 185deIAG, 4153delA, Cys61Gly, 2080delA, 3819delGTAAA, 3875delGTCT, 6174delT) у доноров (n=45) и больных с РМЖ, РТМ, РШМ (п=59). Несмотря на то, что эти мутации высокопенетрантны для некоторых народов Европы [Gorski et al., 2004; Pohlreich et al., 2005; Silin et al., 2009; Negura et al., 2010], других регионов

мира, России [Л.НЛюбченко, 2009; В.П. Шубин, 2011; Н.И. Поспехова, 2011; А.Р.Фарахтдинова, 2012; О.С. Лобейко, 2012] и сопредельного с Республикой Адыгеей Краснодарского края [5382insC - 19,1%, H.B. Порханова, 2009], в наших исследованиях только у одной из 56 обследованных женщин (1,8%) выявлена 5382insC - вторая по распространенности в мире мутация генов BRCA1. У русской женщины-носительницы этой мутации в возрасте 33 лет гистологически верифицирована низкодифференцированная аденокарцинома молочной железы (T2N2M0, Illa стадии), инфильтрирующий протоковый рак с метастазами в лимфоузлы.

Низкий процент выявляемое™ мутаций BRCA1/2 у жителей РА по аналогии с населением Испании (0% - Diez et al., 1999), Германии (1,1% -Hamann et al., 2003), Ирана (0% - Mehdipour et al., 2006), Чили (0% - Jara et al., 2006), а также других стран мира предполагает необходимость поиска более информативных генов, вовлеченных в патогенез неоплазий.

Полиморфизмы генов провоспалительных цитокинов IL-17(A, F), IL-2, IL-12B при неоплазиях женских репродуктивных органов

Эндогенные низкомолекулярные биорегуляторы - цитокины запускают воспалительную реакцию организма, но в некоторых случаях вовлечены в патогенетические механизмы развития онкологических заболеваний. Эффекты действия иммунорегуляторных молекул обусловлены их соотношением и уровнями в системном кровотоке. Дисбаланс цитокиновой сети с оверэкспрессией основных провоспалительных медиаторов регулируются полиморфными вариантами промоторных и структурных регионов соответствующих генов [Forones et al., 2001; Mocellin et al., 2004; Smyth et al., 2004; Hamidullah et al., 2012].

Для исследования роли полиморфизмов генов основных провоспалительных цитокинов в патогенезе злокачественных новообразований, проведен сравнительный анализ частот генотипов и аллелей четырех интерлейкинов, регулирующих основные этапы реализации

базовой воспалительной реакции и противоопухолевого иммунитета: триггерных 1Ь-17А («2275913, С197А) и 1Ь-17Р («763780, А74880, №з161А^), регуляторного 1Ь-2 («2069762, ТЗЗОО), стимулирующего пролиферацию антигенспецифичных эффекторных Т-лимфоцитов, 1Ь-12В («3212227, А1188С) - ключевого медиатора усиления клеточно-опосредованного иммунного ответа, повышающего активность ЫКУЬАК.

В общих группах доноров и онкологических больных ЗНО женских репродуктивных органов статистически значимые различия по частотам исследованных БЫР генов подтверждены для 1Ь-17А («2275913, С197А), 1Ь-17Р («763780, А7488С, №з161Аг§); 1Ь-12В («3212227, А1188С). Отмечены этнические особенности в ассоциированности аллельных вариантов этих генов с заболеваниями (табл.1).

Таблица 1. Распределение полиморфизмов генов провоспалительных цитокинов в этнических группах доноров и онкологических больных_

Ген, БЫР Русские Адыги

Больные Донорь Р (Ж (95% С1) Зольные Доноры Р ОЯ (95% С1)

И-17А п=52 п=22 п=9 п=18

аюю 0,481 0,227 3,15(1,01-9,8) 0,333 0,500 0,5 (0,09-2,64)

Э197А 0,404 0,545 0,11 0,56(0,21-1,54) 0,333 0,222 0,70 1,75 (0,3-10,3)

А197А 0,115 0,227 0,44(0,12-1,64) 0,333 0,278 1,3 (0,23-7,32)

0197 0,683 0,500 0,017* 2,15(1,05-4,42) 0,500 0,611 0,17 0,64(0,2-1,99)

197А 0,317 0,500 0,46 (0,23-0,96) 0,500 0,389 1,57 (0,5-4,92)

/¿-17Г п=13 п=11 п=11 п=19

А7488А 0,692 0,636 1,29(0,23-7,05) 0,273 0,895 0,04 (0,01-0,32)

А7488в 0,308 0,364 0,96 0,78(0,14-4,27) 0,727 0,105 0,002* 22,7 (3,14-163)

□74880 0 0 0,85 (0,02-46,4) 0 0 1,70 (0,03-9,14)

А7488 0,846 0,818 0,80 1,22 (0,27-5,59) 0,636 0,947 0,003* 0,10(0,02- 0,52)

74880 0,154 0,182 0,82(0,18-3,74) 0,364 0,053 10,3 (1,9-54,5)

/¿-2 п=41 п=25 п=12 п=26

ГЗЗОТ 0,488 0,320 2,02 (^>,72-5,72) 0,250 0,346 0,63 (0,14-2,93)

ТЗЗОО 0,415 0,560 0,41 0,56(0,20-1,52) 0,500 0,539 0,63 0,86 (0,22-3,37)

ОЗЗОО 0,097 0,120 0,79 (0,16-3,88) 0,250 0,115 2,56 (0,43-15,1)

ТЗЗО 0,695 0,600 0,26 1,52 (0,73-3,17) 0,500 0,615 0,45 0,63 (0,24-1,66)

ЗЗОО 0,305 0,400 0,66 (0,32-1,37) 0,500 0,385 1,60 (0,60-4,25)

И-12В п=40 п=25 п=13 п=26

А1188А А1188С 0,775 0,200 0,360 0,560 0,004» 6,12(2,03-18,4) 0,20 (0,06-0,59) 0,308 0,692 0,538 0,462 0,40 0,38(0,09-1,56) 2,63 (0,64-10,7)

С1188С 0,025 0,080 0,29 (0,03-3,43) 0 0 1,96(0,04-104)

А1188 0,875 0,640 0,002* 3,94(1,63-9,48) 0,654 0,769 0,28 0,57(0,20-1,59)

1188С 0,125 0,360 0,25 (0,11-0,61) 0,346 0,231 1,76(0,63-4,96)

Примечания: п - количество обследованных; * р<0,05

\

С неоплазиями у русских женщин достоверно ассоциирована G197 аллель IL-17A (р=0,017), а у этнических адыгов - 7488G (161Arg) полиморфизм IL-17F (р=0,003), что отличается от данных, полученных в немногочисленных работах для стран Азии. Так, Wang L. et al. (2012) рассматривают А197А генотип и 197А аллель IL-17A как ассоциированные с РМЖ (р=0,0016; р=0,0029 соответственно), Quan Y. et al. (2012) отмечает, что с РШМ сопряжена 197А аллель IL-17A (р=0,008). Противоречивые данные по распределению частот исследованных G197A аллелей IL-17A у больных женщин, проживающих в разных регионах мира - РФ (Республика Адыгея) и в Китае, объясняются, очевидно, не только географической разобщенностью популяций, но и историческим происхождением народов.

Для А1188С полиморфизмов гена IL-12B, повышающего цитотоксическую активность естественных киллеров подтверждена ассоциированность А1188А генотипа и А1188 аллеля (соответственно р=0,004 и р=0,002) со ЗНО только в этнической группе русских женщин. Следует отметить, что у больных РМЖ, по данным Kaarvatn М.Н. et al., (2012, Норвегия) чаще выявляется «нормальная» А1188 аллель гена IL-12B. По исследованным SNP (rs2069762, T330G) гена IL-2 между донорами и больными со ЗНО женских репродуктивных органов не установлено достоверных межэтнических различий.

Полиморфизмы генов противовоспалительных цитокииов IL-4, IL-10 при неоплазиях женских репродуктивных органов

IL-4 и IL-10, традиционно называемые противовоспалительными цитокинами, сходны по механизму действия, могут трансформировать базовую воспалительную реакцию организма и влиять на противоопухолевый иммунитет. С целью исследования роли полиморфизмов генов IL-4 и IL-10 в патогенезе злокачественных новообразований женских репродуктивных органов, нами проанализировано частотное распределение аллелей и генотипов IL-4 (С589Т, rs2243250), IL-10 (G1082A, rsl800896;

С819Т, ге1800871; С592А, Ы800872) в этнических группах доноров и онкологических больных РА (табл. 2).

Таблица 2. Этногенетический анализ распределения полиморфизмов генов 1Ь-4 и 1Ь-10 в норме и при неоплазиях женских репродуктивных органов

Ген, Русские Адыги

БЫР Больные Доноры Р (Ж (95% С1) Больные Доноры Р (Ж (95% С1)

11-4 п=39 п=25 п=14 п=25

С589С 0,410 0,680 0,33 (0,11-0,94) 0,500 0,800 0Д5 (0,06-1,05)

С589Т 0,436 0,280 0,08 1,99(0,68-5,84) 0,429 0,200 0,10 3,0 (0,71-12,69)

Т589Т 0,154 0,040 4,36 (0,49-38,6) 0,071 0 5,67(0,2-148,8)

С589 0,628 0,820 0,02* 0,37 (0,16-0,87) 0,714 0,900 0,03* 0,28 (0,08-0,96)

589Т 0,372 0,180 2,70(1,15-6,34) 0,256 0,100 3,6(1,05-12,38)

¡1-10 п=41 п=34 п=15 п=15

в 1082 0,439 0,324 1,64 (0,63-4,22) 0,467 0,333 1,75 (0,4-7,66)

в 1082 0,463 0,441 0,24 1,09 (0,44-2,73) 0,333 0,533 0,54 0,44(0,1-1,92)

А1082 0,098 0,235 0,35 (0,1-1,29) 0,200 0,133 1,63(0,23-11,5)

в 1082 0,671 0,544 0,11 1,71 (0,88-3,31) 0,633 0,600 0,79 1,15(0,41-3,26)

1082А 0,329 0,456 0,59 (0,3-1,14) 0,367 0,400 0,87(0,31-2,46)

С819С 0,429 0,833 0,15 (0,02-0,95) 0,625 0,500 1,67(0,25-11,1)

С819Т 0,500 0,167 0,10 5,0(0,79-31,63) 0,375 0,200 0,22 2,4(0,29-19,79)

Т819Т 0,071 0 2,78 (0,1-74,7) 0 0,300 0,13(0,01-2,86)

С819 0,679 0,917 0,04* 0,19(0,04-1,0) 0,813 0,600 0,17 2,89(0,62-13,5)

819Т 0,321 0,083 5,21 (1,0-27,15) 0,187 0,400 0,35 (0,07-1,62)

С592С 0,500 0,800 0,25 (0,03-1,82) 0,333 0,700 0,21 (0,03-1,49)

С592А 0,400 0,200 0,31 2,67 (0,36-19,7) 0,222 0,200 0,19 1,14(0,13-10,4)

А592А 0,100 0 3,32 (0,12-91,6) 0,444 0,100 7,2 (0,62-83,35)

С592 0,700 0,900 0,11 0,26 (0,05-1,49) 0,444 0,800 0,02* 0,2 (0,05-0,84)

592А 0,300 0,100 3,86(0,67-22,1) 0,556 0,200 5,0(1,19-21,04)

Примечания: п - количество обследованных; * р<0,05

В группе русских женщин с РМЖ, РЯ, РШМ и РТМ, по сравнению с донорами статистически значимо повышены частоты 589Т аллели 1Ь-4 (р=0,02) и 819Т полиморфизма 1Ь-10 (р=0,04). ЗНО у адыгов ассоциированы с 592А БИР гена 1Ь-10 (р=0,02). «Мутантная» 589Т аллель 1Ь-4 с высокой частотой выявляется у онкологических больных независимо от их этнической принадлежности, что может иметь важное фундаментальное значение в канцерогенезе, поскольку 1Ь-4 обуславливает уровень экспрессии молекул МНС-И. Типирование трех локусов гена 1Ь-10 (ОЮ82А, С819Т, С592А) в геномной ДНК здоровых и больных женщин РА подтвердило данные для европейских женщин и у жительниц Китая с РМЖ [LangsenIehner и. е1 а!., 2005; Благодатских А.Е. и др., 2011; Не .1.-11. е1 а!., 2012].

SNP генов цитокинов в зависимости от степени дифференцировки аденокарциномы и опухолевой прогрессии

Для выявления БЫР-маркеров прогностически неблагоприятных гистотипов злокачественных новообразований и опухолевой прогрессии при неоплазиях женских репродуктивных органов, нами исследованы частоты полиморфных вариантов генов 1Ь-17А (0197А), 1Ь-17Р (А7488С, Н1з161Аг§), 1Ь-2 (ТЗЗ(Ю), 1Ь-4 (С589Т), 1Ь-10 (ОЮ82А, С819Т, С592А), 1Ь-12В (А1188С) у больных с высокой, умеренной и низкой степенью дифференцировки аденокарциномы с вовлечением в опухолевый процесс регионарных лимфатических узлов (табл. 3-4).

Таблица 3. Распределение БЫР генов провоспалительных цитокинов в зависимости от распространенности опухолевого процесса_

Ген, SNP Степень дифференцировки аденокарциномы Вовлеченность регионарных л/узлов

Высокая и умеренная Низкая Р X2 TuNoMo Ti-tNi-зМо Р х2

JL-I7A п=42 п=14 п=36 п=29

G197G 0,405 0,714 0,389 0,552

G197A 0,429 0,214 0,13 4,04 0,444 0,345 0,41 1,78

А197 А 0,167 0,071 0,167 0,103

G197 197А 0,605 0,390 0,808 0,192 0,031* 3,83 0,611 0,389 0,724 0,276 0,18 1,83

IL-17F п=15 п=6 п=13 п=11

А7488А 0,467 0,667 0,308 0,727

A7488G 0,533 0,333 0,71 0,69 0,692 0,273 0,12 4,20

G7488G 0 0 0 0

А7488 7488G 0,733 0,227 0,833 0,167 0,26 0,76 0,654 0,346 0,864 0,136 0,09 2,80

IL-2 п=21 п=15 п=28 п=25

ТЗЗОТ 0,476 0,467 0,322 0,560

T330G 0,429 0,333 0,64 0,90 0,464 0,400 0,09 4,90

G330G 0,095 0,200 0,214 0,040

ТЗЗО 0,690 0,633 0,61 0,26 0,554 0,760 0,03* 4,95

330G 0,310 0,367 0,446 0,240

1L-12B п=22 п=15 п=26 п=27

А1188А 0,636 0,667 0,500 0,778

А1188С 0,364 0,267 0,42 1,74 0,462 0,222 0,09 4,87

С1188С 0 0,067 0,038 0

Al 188 1188С 0,818 0,182 0,800 0,200 0,84 0,04 0,731 0,269 0,889 0,111 0,04* 4,33

Примечания: п - количество обследованных; * р<0,05

Таблица 4. Частоты SNP IL-4, IL-10 в зависимости от распространенности опухолевого процесса_

Степень дифференцировки Вовлеченность регионарных

аденокарциномы л/узлов

Высокая и умеренная Низкая Р х2 TMNoMO TMNUMO Р х2

IL-4 п=22 п=14 п=25 п=27

С589С 0,409 0,357 0,86 0,30 0,560 0,333

С589Т 0,409 0,500 0,400 0,444 0,09 4,77

Т589Т 0,182 0,143 0,040 0,222

С589 0,614 0,607 0,96 0,01 0,760 0,556 0,03* 4,79

589Т 0,386 0,393 0,240 0,444

IL-10 п=23 п=27 п=23 п=27

G1082G 0,304 0,593 0,435 0,482

G1082A 0,478 0,333 0,09 4,72 0,435 0,370 0,90 0,22

А1082А 0,217 0,074 0,130 0,148

G1082 0,543 0,759 0,02* 5,15 0,652 0,667 0,88 0,02

1082А 0,457 0,241 0,348 0,333

С819С 0,600 0,462 0,778 0,357

С819Т 0,400 0,462 0,60 1,03 0,222 0,571 0,13 4,04

Т819Т 0 0,077 0 0,072

С819 819Т 0,800 0,200 0,692 0,308 0,41 0,68 0,889 0,111 0,643 0,357 0,05* 3,50

С592С 0,556 0,500 0,600 0,454 0,36

С592А 0,222 0,250 0,97 0,06 0,100 0,364 2,05

А592А 0,222 0,250 0,300 0,182

С592 592А 0,667 0,333 0,625 0,375 0,78 0,08 0,650 0,350 0,636 0,364 0,93 0,01

Примечания: л - количество обследованных; * р<0,05

Ассоциированность с низкодифференцированной аденокарциномой подтверждена для SNP провоспалительного IL-17A (G197 аллель, р=0,031) и противовоспалительного IL-10 (G1082 аллель, р=0,02). Метастазирование в регионарные лимфатические узлы сопряжено с повышением частот полиморфных вариантов генов IL-2 (ТЗЗО аллели, р=0,03), противовоспалительных IL-4 (589Т, р=0,03) и IL-10 (819Т, р=0,05), провоспалительного IL-12В (AI 188, р=0,04).

По данным Kong F. et al. (2010) с высокой вероятностью лимфогенного метастазирования РМЖ у жителей Китая ассоциирован А1082А генотип, а в России (г. Новосибирск) - С592С генотип гена IL-10 [Благодатских А.Е. с соавт., 2011], что не согласуется с данными, полученными в наших исследованиях.

Сывороточные уровни, спонтанная и стимулированная in vitro продукция цитокинов РВМС при злокачественных новообразованиях женских репродуктивных органов

Патогенетическая роль цитокинов в неопластических процессах, обусловленная преимущественно гипо- или гиперпродукцией, определяет необходимость исследования сывороточных концентраций про- и противовоспалительных цитокинов, уровней спонтанной и стимулированной in vitro ФГА продукции медиаторов в культуре РВМС больных со ЗНО женских репродуктивных органов (табл.5).

Таблица 5. Концентрации цитокинов в сыворотках, культуральной среде РВМС доноров и больных с неоплазиями__

Цитокины, биологическая среда Концентрации цитокинов M±m, pg/ml t

Больные Доноры

М+т, pg/ml | Me М±т, pg/ml | Me

1Ь-17А n=20 n=17

Сыворотка крови 2218,2+214,8 2308,8 2561,6±62,8 2496,6 1,43

Культура интактных РВМС 15,8+15,4 0 134,5+49,0 36,8 2,47*

Стимулированная продукция РВМС+ФГА 24,1+9,5 0 198,9±51,8 92,1 3,59**

1Ь-2 п=27 п=17

Сыворотка крови 244,5+ 101,6 17,9 279,2± 149,3 0 0,19

Культура интактных РВМС 699,1+150,0 500,0 1254,2±95,9 1281,3 3,12*

Стимулированная продукция РВМС+ФГА 532,3+58,1 468,8 1186,5±96,6 1171,9 5,80*

1Ь-4 п=27 п=17

Сыворотка крови 110,5+22,5 78,5 111,4±47,5 63,5 0,02

Культура интактных РВМС 81,8+7,3 69,9 108,2±16,8 103,6 1,70

Стимулированная продукция РВМС+ФГА 69,8+5,5 59,2 90,4+13,1 70,7 1,73

1Ь-10 п=27 п=17

Сыворотка крови 4,8+0,9 3,7 2,7±0,5 2,7 0,87

Культура интактных РВМС 2,8+0,5 1,2 41,2+26,7 17,9 4,99*

Стимулированная продукция РВМС+ФГА 2,1 ±0,9 0,5 208,1+70,2 273,7 10,32**

Примечания: М - средняя арифметическая; т - стандартная ошибка среднего; п -количество обследованных; Ме- медиана; I- критерий Стьюдента: * р<0,05; **р<0,01

Интактные РВМС онкологических больных по сравнению с донорами характеризуются достоверно сниженной продукцией IL-17A и отсутствием стимуляции при инкубации с ФГА (Ме: 0/36,8 и 0/92,1 соответственно). Полученные данные не согласуются с исследованиями Селиховой Ю.Б. (2008), которая на небольших выборках больных (п=13) и доноров (п=13) отмечает способность стимулированных ЛПС и ФГА РВМС больных РМЖ продуцировать более высокие концентрации IL-17 по сравнению с РВМС доноров (соответственно 302±51 и 106±6,3 pg/ml).

Сывороточные концентрации IL-2 по сравнению с другими цитокинами представлены широким диапазоном значений у доноров, больных и достоверно не различаются (табл.5). Повышение сывороточных уровней IL-2 отмечены у больных с аденокарциномой желудка [Forones N. et al., 2001], при РМЖ [Lyon D. et al., 2008; Садвакасова Г.С. и др., 2010; Erdei Е. et al., 2010]. Существенные различия в полученных экспериментальных данных, возможно, являются влиянием сопутствующих патологий у онкологических больных или этническими особенностями обследованных групп, что требует дальнейших исследований.

Сведения о продукции IL-2 РВМС больных с онкопатологией в мировых базах данных HuGEN, Pubmed немногочисленны. В отечественных работах показано, что РВМС онкологических больных со ЗНО различных локализаций (легких, желудка, молочной железы и др. органов) по сравнению с РВМС доноров характеризуются низкой спонтанной продукцией IL-2 [Тугуз А.Р., 2002]. В наших исследованиях на больных с неоплазиями молочной железы, тела и шейки матки получены аналогичные данные: интактные РВМС доноров, по сравнению с больными, продуцируют более высокие уровни IL-2 (р<0,05), но не стимулируются поликлональным митогеном ФГА (табл. 5).

Сывороточные концентрации противовоспалительного IL-4 у доноров и больных РМЖ, РШМ, РТМ не различаются (соответственно, 111,4±47,5/ 110,5±22,5 pg/ml), что не согласуется с данными Алимходжаевой J1.T. (2009)

и Lyon D. et al. (2008), которые отмечают достоверное повышение уровня IL4 в сыворотках крови больных РМЖ по сравнению с донорами. В диссертационном исследовании Тугуз А. Р. (2002), наоборот, показано статистически значимое повышение концентрации IL-4 в сыворотках доноров по сравнению с онкологическими больными. Наиболее информативным показателем участия IL-4 в патогенезе неоплазий мог быть сравнительный анализ уровней спонтанной и стимулированной in vitro продукции IL-4 РВМС в норме и при онкопатологии, однако в наших экспериментальных исследованиях в культуральной среде РВМС обследованных групп детектированы невысокие концентрации (108,2±16,8 / 81,8±7,3 pg/ml соответственно) этого медиатора. Следует отметить, что ФГА in vitro не оказывает стимулирующее действие на продукцию IL-4 РВМС больных и доноров (табл. 5).

Уровни IL-10 в образцах сыворотки доноров и онкологических больных обнаружены в следовых количествах (2-5 pg/ml), которые достоверно не различались, что согласуется с мировыми данными [Roh J. et al., 2002; Rao V. et al., 2008; Pooja S., 2012]. По аналогии с результатами Я.В. Кухарева (г. Томск, 2010), в культуральной среде с интактными РВМС доноров детектированы более высокие концентрации противовоспалительного IL-10, достоверно (р<0,05) отличающиеся от уровня медиатора, продуцируемого РВМС обследованных больных.

Влияние SNP генов цитокинов иа сывороточные уровни, спонтанную и стимулированную in vitro продукцию медиаторов

Для исследования влияния SNP генов IL-17A (G197A), IL-2 (T330G), IL-4 (С589Т), IL-10 (Gl 082А, С819Т, С592А) на продукцию соответствующих медиаторов иммунной системы, впервые в зависимости от генотипов промоторных регионов соответствующих генов цитокинов в экспериментах in vitro нами проанализированы концентрации про- и

противовоспалительных цитокинов в сыворотках, культуральной среде интактных и стимулированных in vitro ФГА РВМС доноров и больных с неоплазиями женских репродуктивных органов (табл.6-7).

Таблица 6. Влияние генотипов генов 1Ь-17А, 1Ь-2,1Ь-4 на уровни продукции цитокинов РВМС онкологических больных и доноров

Цитокины, биологичес кая среда Группы Концентрации цитокинов M±m, pg/ml t1 t2 t3

1Ь-17А G197G G197A А197А

Сыворотка крови больные 2661± 145,9 1819±402,8 1953,6±782 2,06' 1,47ь 0,17е 0,02* 0,62е l,62h

доноры 2526±151,3 2523±44,9 -

Культура интактных РВМС больные 0,2±0,2 39,4±38,5 0±0 1,10" 0,5 6Ь 0,61е 0,17а 3,64g* 0,78ь

доноры 104,6±35,8 125,9±110,1 -

РВМС+ФГА больные 39,0±14,4 16,3±16,3 0±0 1,05' 1,51ь 0,59е 0,96' 2,97в* l,87h

доноры 258,8±89,7 148,3±73,3 -

ГЬ-2 ТЗЗОТ T330G G330G

Сыворотка крови больные 440,6*224 201,5±138 17,8±10,3 0,96" 1,41' 0,84т 0,83" 0,78' 1,3 Г 0,71" 0,59е 0,97f

доноры 246,8±157 100,7±97,8 984,4±90,4

Культура интактных РВМС больные 515,2±130 703,8±259,7 994,7±433 0,57" 1,33' 0,60т 1,75" 0,62' 1,06™ 2,29" 2,57е* 0,46f

доноры 1037±187 1406±119,6 1187,5± 16

РВМС+ФГА больные 443,8±66,0 553,6*96,2 630,2±163 0,86" 1,26' 0,42га 1,18" 0,55' 0,39™ 3,3 7а* 3,85е* 1,91г

доноры 1018±157 1267,6±135 1281±343,7

1Ь-4 С589С С589Т Т589Т

Сыворотка крови больные 122,6±35,9 119,4±45,3 64,8±9,0 0,06" 0,99р 1,00г 1,22" 1,05s 0,61™

доноры 67,92±5,9 183,9±129,4 -

Культура интактных РВМС больные 82,3±11,7 79,2±14,4 85,3±9,1 0,17" 0,16Р 0,30г 2,54"* 2,35s* 0,76™

доноры 131,5±18,7 61,8±2,7 -

РВМС+ФГА больные 71,6±10,6 67,2±5,8 70,1±9,0 0,32° 0,08р 0,29' 0,94" 1,85s 0,79"

доноры 105,8±16,1 59,4±5,7 -

Примечания: М - средняя арифметическая; ш - стандартная ошибка среднего; I1- критерий Стьюдента для больных и I - для доноров в сравнении уровней цитокинов в зависимости от генотипов: а- ОСЛЗА; Ь- Св/АА; с- СА/АА; к- ТТЛЧ1; 1- ТТ/СО; т- ТС/ОО; п- СС/СТ; р- СС/ТТ; г-СТ/ТТ; I*- критерий Стьюдента в сравнении уровней цитокинов в зависимости от генотипов: Ов; И- вА; с1- ТТ; е- ТС; Г- вв; е- СС; СТ; * р<0,05

Таблица 7. Влияние генотипов гена 1Ь-10 на уровни продукции цитокина РВМС онкологических больных и доноров_

Цитокины, биологичес кая среда Группы Концентрации цитокинов M±m, pg/ml t1 t2 t3

1Ь-10 G1082G G1082A А1082А

Сыворотка крови больные 5,73+2,1 4,89±0,9 2,06+0,6 1,45' 1,05ь 1,51е 0,05' 0,50ь 0,40е 0,768 l,06h 1,12'

доноры 3,7+0,34 3,34+0,6 3,02+0,6

Культура интактных РВМС больные 3,18+0,9 3,47+0,8 0,6+0,3 0,53' 2,19ь 2,21е 0,22* 3,17Ь* 6,77е* 2,74«* 9,3 9h* 33,5'*

доноры 41,2+26,7 47,4+10,8 126,8+4,5

РВМС+ФГА больные 0,96+0,3 3,36+1,6 0,25+0,25 1,17" 1,28ь 1,0е 0,94' 1,3 8Ь 1,63е 5,71е* 27,0h* 6,74'*

доноры 208,1+70,2 141,8+9,1 107,5+19,0

1Ь-10 С819С С819Т Т819Т

Сыворотка крови больные 5,21+1,4 3,89+1,0 12,8+1,27 0,59" 2,24р 5,03г 1,52° 2,05р 0,88г 0,68s 1,00™ l,26d

доноры 2,95+0,39 5,8+1,85 8,8+2,8

Культура интактных РВМС больные 2,14+0,64 4,17+1,0 1,07+0,2 1,74" 0,71р 1,95г 3,72"» 2,15р 0,27г 1,11' 5,53™* 2,67d

доноры 4,0+2,0 17,17+2,9 19,17+6,77

РВМС+ФГА больные 2,39+1,45 1,92+0,51 1,61+1,19 0,21" 0,23р 0,29г 0,29" 0,11р 0,13' 6,67s* 7,45w* 2,15d

доноры 74,17+27,3 65,17+14,15 69,5+31,6

1Ь-10 С592С С592А А592А

Сыворотка крови больные 4,61+1,67 5,12+0,9 3,10+1,82 0,20° 0,414 1,13" 0,66° 0,414 0,98" 0,24х l,13y 0,56'

доноры 5,50+1,7 7,50+2,5 4,50+1,73

Культура интактных РВМС больные 2,04+0,73 3,41+1,26 3,67+1,24 1,00° 1,00ч 0,13" 0,75° 3,37"* 3,15й* 8,83х* 4,76y* 0,23'

доноры 46,17+11,3 62,5+18,8 3,17+1,76

РВМС+ФГА больные 2,83+1,77 1,3+0,54 2,11+0,9 0,57° 0,19q 0,83" 1,53° 4,56ч 1,42" 10,2х 2,78y 1,98'

доноры 74,0+13,9 37,17+19,7 8,83+3,28

Примечания: М - средняя арифметическая; m - стандартная ошибка среднего; ^-критерий Стьюдента для больных и t2 - для доноров в сравнении уровней цитокинов в зависимости от генотипов: а- GG/GA; b- GG/AA; с- GA/AA; n- СС/СТ; р- СС/ТТ; г- СТ/ТТ; о- СС/СА; q- СС/АА; и-СА-АА; tJ- критерий Стьюдента в сравнении уровней цитокинов в зависимости от генотипов: g-GG; h- GA; i- AA; d- TT; s- CC; w- CT; х- CC; y- CA; * - достоверные различия при p<0,05

Сывороточные концентрации свободных цитокинов IL-2, IL-4, IL-10, IL-12 IL-17A у доноров и онкологических больных не зависят от исследованных SNP промоторных регионов генов, что вероятнее всего регулируется уровнем растворимых рецепторов цитокинов а крови. Однако у

доноров полиморфные варианты промоторных регионов генов влияют на уровни спонтанной и стимулированной in vitro ФГА продукции IL-4, IL-10 РВМС: С589Т-генотип IL-4 и G1082 аллель IL-10 в гомо- и гетерозиготном состоянии достоверно снижают спонтанную продукцию медиаторов, а С819Т, С592А, С592С полиморфизмы IL-10 повышают уровень противовоспалительного цитокина в культуральной среде интактных РВМС доноров (табл.7). У больных со ЗНО в культуре интактных и стимулированных ФГА РВМС концентрации про- и противовоспалительных цитокинов не зависят от генотипов промоторных регионов соответствующих генов, но статистически значимо снижены по сравнению с донорами в отношении всех исследованных SNP.

Выводы

1. Мутации генов-супрессоров опухолевого роста BRCA1/2 5382insC, 185delAG, 4153delA, CysôlGly, 2080delA, 3819delGTAAA, 3875delGTCT, 6174delT y жителей Республики Адыгея не ассоциированы с гистологически верифицированной аденокарциномой молочной железы, яичников, тела и шейки матки.

2. Аллельные варианты и генотипы IL-17A (G197), IL-17F (161Arg, HislôlArg генотип), IL-12B (Al 188, А1188А генотип), IL-4 (589Т, Т589Т генотип) у жителей Республики Адыгея ассоциированы со злокачественными новообразованиями органов женской репродуктивной системы. Этнические различия установлены по полиморфизмам гена IL-10: у русских женщин чаще выявляется 819Т, а у адыгов - 592А аллель.

3. Метастазирование в регионарные лимфатические узлы у больных ЗНО связано с повышением частот аллелей: ТЗЗО гена IL-2, 589Т IL-4, 819Т IL-10, А1188 - IL-12B. Маркерами прогностически неблагоприятных гистотипов низкодифференцированной аденокарциномы молочной железы являются G197 аллель IL-17A и G1082 полиморфизм гена IL-10.

4. Полиморфные варианты промоторных регионов генов IL-4 и IL-10 влияют на продукцию соответствующих медиаторов РВМС доноров: С589Т-генотип IL-4, гомозиготный G1082G и гетерозиготный G1082A генотипы IL-10

снижают, а С819Т, С592А, С592С генотипы IL-10 in vitro повышают спонтанную продукцию цитокинов РВМС.

Практические рекомендации:

1. Рекомендовать при диспансеризации населения Республики Адыгея использование в качестве молекулярно-генетических маркеров повышенного риска развития злокачественных новообразований органов женской репродуктивной системы G197 аллель гена IL-17A, 161Arg полиморфизм IL-17F и 819Т, 592A SNP гена IL-10.

2. Включить SNP-типирование генов IL-17A (G197), IL-10 (G1082, 819Т), IL-2 (ТЗЗО), IL-4 (589Т), IL-12B (AI 188) в стандартное обследование онкологических больных для прогноза течения основного заболевания.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. G197/197A полиморфизмы гена провоспалительного 1L-17A при сердечнососудистых заболеваниях и злокачественных новообразованиях женских репродуктивных органов у жителей Республики Адыгея / А.Р. Тугуз, Д.В. Муженя, E.H. Анохина, A.C. Дорошенко, Т.М. Ашканова // Вестник Адыгейского Государственного Университета. Серия естественно-математических и технических наук. -2012. -Выпуск 1(98).- С. 120-129.

2. Анохина, E.H. Этногеографические особенности распределения мутаций генов BRCA 1/2 при злокачественных новообразованиях женских репродуктивных органов / E.H. Анохина // Вестник Адыгейского Государственного Университета. Серия естественно-математических и технических наук. - 2012. -Выпуск2(101).-С. 80-93.

3. Ассоциация G197/197A аллелей гена провоспалительного цитокина IL-17A с низкодифференцированной аденокарциномой при злокачественных новообразованиях женских репродуктивных органов в этнических группах населения Республики Адыгея / А.Р. Тугуз, E.H. Анохнна, Д.В. Муженя, Л.Д. Алдонина, К.А. Руденко, Т.М. Ашканова, А.Ф. Кизянов // Вестник Адыгейского Государственного Университета. Серия естественно-математических и технических наук.-2012. -Выпуск 3(106). -С. 123-130.

4. Анохина, E.H. 1082G/A, 819С/Т, 592С/А полиморфизмы промоторного региона гена интерлейкина-10 и их ассоциация со злокачественными новообразованиями женских репродуктивных органов / E.H. Анохина // Вестник

Адыгейского Государственного Университета. Серия естественно-математических и технических наук. - 2013. - Выпуск 2. - С. 30-36.

5. Тугуз, А.Р. Локусная гетерогенность генов IL-17A (G197) и IL-17F (161Arg) при злокачественных новообразованиях женских репродуктивных органов / А.Р. Тугуз, E.H. Анохина, Д.В. Муженя, К.А. Руденко // Иммунология. - 2013. - Т. 34. -С. 152-155.

6. Тугуз, А.Р. Сывороточные уровни, спонтанная и стимулированная in vitro продукция IL-17A, IL-2, IL-4, IL-10 при злокачественных новообразованиях женских репродуктивных органов / А.Р. Тугуз, E.H. Анохина, К.А. Руденко, Д.В. Муженя // Иммунология. - 2014. — № 1. - С. 24-27.

7. Анохина, E.H. Ассоциация полиморфизмов генов IL-4, IL-2 со злокачественными новообразованиями женских репродуктивных органов / E.H. Анохина, А.Р. Тугуз, К.А. Руденко, Д.В. Муженя // Вестник Адыгейского Государственного Университета. Серия естественно-математических и технических наук. - 2014. - Выпуск 1(133). - С. 51-55.

8. Тугуз, А.Р. Полиморфизмы гена противовоспалительного ИЛ-10, ассоциированные со злокачественными новообразованиями органов женской репродуктивной системы / А.Р. Тугуз, E.H. Анохина, Д.В. Муженя, К.А. Руденко // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. —2014. — Т. 158. — № 11. -С. 624-626.

9. Анохина, E.H. Ассоциация G197 полиморфизма гена IL-17A у больных со злокачественными новообразованиями женских репродуктивных органов / E.H. Анохина, А.Р. Тугуз, Д.В. Муженя, К.А. Руденко // Тезисы докладов VIII Ежегодной научной конференции студентов и аспирантов базовых кафедр Южного научного центра РАН. - Изд-во ЮНЦ РАН, г. Ростов-на-Дону. - 2012. - С. 6-7.

10. Анохина, E.H. Анализ частот G197 и 197А полиморфизмов гена IL-17A при злокачественных новообразованиях женских репродуктивных органов у жителей республики Адыгея / E.H. Анохина, Д.В. Муженя, К.А. Руденко, О.В. Соколова, А.Ф. Кизянов // Актуальные вопросы медицинской науки. Сборник научных работ студентов и молодых ученых Всероссийской научно-практической конференции. -Ярославль: «Издательско-полиграфический комплекс «Индиго». - 2012. - С. 68.

11. G197A полиморфизмы провоспалительного цитокина IL-17A при злокачественных новообразованиях женских репродуктивных органов и сердечнососудистых заболеваниях в этнических группах населения республики Адыгея / E.H. Анохина, А.Р. Тугуз, Д.В. Муженя, К.А. Руденко, И.В. Смольков, Д.С. Шумилов // Медицинский академический журнал. Материалы II Всероссийской научной конференции молодых ученых «Проблемы биомедицинской науки третьего тысячелетия». - Санкт-Петербург: Северо-Западное отделение РАМН. -2012.-С. 187-189.

12. Анохина, E.H. Ассоциация 0197/197А-аллелей гена IL-17A с сердечнососудистыми и онкологическими заболеваниями в этнических группах населения

Республики Адыгея / Е.Н. Анохина, Д.В. Муженя // Перспектива-2013. Материалы международной научной конференции студентов, аспирантов и молодых ученых. -Нальчик: изд-во КБГУ. - 2013. - С. 275-279.

13. Анохина, Е.Н. Прогностическая роль полиморфизмов генов основных про-и противовоспалительных цитокинов при злокачественных новообразованиях женских репродуктивных органов / Е.Н. Анохина, А.Р. Тугуз, К.А. Руденко, Д.В. Муженя // 18-я международная Путинская школа-конференция молодых ученых «Биология - наука XXI века». Сборник тезисов. - Москва. - 2014. - С. 237-238.

14. Анохина, Е.Н. Мутации генов BRCA1/2 и SNP генов основных про- и противовоспалительных цитокинов при неоплазиях женских репродуктивных органов / Е.Н. Анохина, А.Р. Тугуз, К.А. Руденко, Д.В. Муженя // Тезисы докладов VI съезда вавиловского общества генетиков и селекционеров (ВОГиС) и ассоциированные генетические симпозиумы. - Ростов-на-Дону. - 2014. - С. 97.

Методическое пособие 1. Тугуз, Ф.В. Эколо го-географическая оценка заболеваемости злокачественными новообразованиями населения Республики Адыгея. Методическое пособие / Ф.В. Тугуз, Е.Н. Анохина, С.Х. Беретарь, А.Р. Тугуз. -Майкоп: ИП Магарин О.Г. -2013.-40 с.

Список сокращений ЗНО - злокачественные новообразования ИФА - иммуноферментативный анализ ЛПС — липополисахариды ПЦР - полимеразная цепная реакция РМЖ - рак молочной железы РТМ - рак тела матки РШМ - рак шейки матки РЯ - рак яичника ФГА - фитогемагглютинин BRCA1/2 - гены Breast cancer antigen 1/2 IL - интерлейкин (от англ. interleukin)

LAK- лимфокин-активированный комплекс (от англ. Iymphokine-activated complex) МНС - главный комплекс гистосовместимости (от англ. Major histocompatibility complex)

NK - естественные киллеры (от англ. natural killer)

РВМС - мононуклеарные клетки периферической крови (от англ. peripheral blood mononuclear cells)

rs - цифровая эталонная последовательность полиморфизмов (от англ. reference sequence)

SNP - единичные нуклеотидные полиморфизмы (от англ. single nucleotide polymorphisms)

Анохина Елена Николаевна

ПОЛИМОРФИЗМЫ ГЕНОВ ПРО- И ПРОТИВОВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ ЦИТОКИНОВ, МУТАЦИИ ГЕНОВ ВИСАШ ПРИ ЗЛОКАЧЕСТВЕННЫХ НОВООБРАЗОВАНИЯХ ОРГАНОВ ЖЕНСКОЙ РЕПРОДУКТИВНОЙ СИСТЕМЫ

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Подписано в печать 16.04.2015. Бумага типографская №1. Формат бумаги 60x84/16. Гарнитура Times New Roman. Печ.л. 1,0. Тир. 100. Заказ 024.

Отпечатано на участке оперативной полиграфии Адыгейского государственного университета. 385000, г. Майкоп, ул. Первомайская, 208.