Автореферат и диссертация по медицине (14.00.25) на тему:Поиск новых потенциальных противотромботических средств на экспериментальных моделях с метаболическими нарушениями
- Ученая степень
- кандидата медицинских наук
- ВАК РФ
- 14.00.25
Автореферат диссертации по медицине на тему Поиск новых потенциальных противотромботических средств на экспериментальных моделях с метаболическими нарушениями
На правах рукописи
БОЧАРНИКОВА НАТАЛЬЯ ВЛАДИМИРОВНА
ПОИСК НОВЫХ ПОТЕНЦИАЛЬНЫХ ПРОТИВОТРОМБОТИЧЕСКИХ СРЕДСТВ НА ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫХ МОДЕЛЯХ С МЕТАБОЛИЧЕСКИМИ НАРУШЕНИЯМИ
14.00.25-«Фармакология, клиническая фармакология» 14.00.03-«Эндокринология»
АВТОРЕФЕРАТ
диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук
Москва -2005
Работа выполнена в Государственном общеобразовательном учреждении высшего профессионального образования «Московский государственный медико-стоматологический университет» федерального агентства по Здравоохранению и Социальному развитию
Научные руководители:
Официальные оппоненты:
Ведущая организация:
Доктор медицинских наук, профессор Александр Георгиевич Муляр.
Доктор медицинских наук, профессор Андрей Львович Давыдов.
Доктор медицинских наук, профессор Владимир Александрович Макаров.
Заслуженный деятель науки РФ, доктор медицинских наук, профессор, Старкова Нинелла Трофимовна.
Всероссийский научный центр по безопасности биологически активных веществ
Защита состоится на заседании
диссертационного совета при ГОУ ВПО «Московский
государственный медико-стоматологический университет» Росздрава (127473, Москва, ул. Делегатская, 20/1).
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО «Московский государственный медико-стоматологический университет» Росздрава (125206, Москва, ул. Вучетича, д. 10а).
Автореферат разослан «_»_2005г.
Ученый секретарь диссертационного совета, доктор медицинских наук, профессор
М.В.Балуда.
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
Актуальность проблемы. Тромбоэмболия, ишемия и инфаркт миокарда - наиболее распространенные виды заболеваний, в значительной степени определяющие качество и продолжительность жизни людей. Они являются естественным исходом большинства заболеваний кровеносных сосудов - от атеросклероза и множества диспластических и иммунных патологий, до генетически обусловленных обменных вазопатий и дисфункций системы гемостаза, в том числе ангиодисплазий (З.С.Баркаган 2000). Особое место среди сосудистой патологии занимают диабетические поражения сосудов, являющиеся ведущей причиной смертности у больных сахарным диабетом типа 2 (Е.И.Соколов, соавт.,1997; М.И.Балаболкин, 1998; А.Л.Давыдов, 2000; Ferranim E.,1997).
Сахарный диабет (СД) рассматривается как группа метаболических заболеваний, характеризующихся гипергликемией, обусловленной абсолютной или относительной инсулиновой недостаточностью, сочетающихся со специфическими микро- и макрососудистыми осложнениями, нейропатиями и другими патологическими изменениями в различных органах и тканях. Для СД характерны нарушения обмена углеводов, жиров и белков (МИ. Балаболкин и др.,2002; Reaven G.M.,1998). В последние годы существенно пополнились знания о гемокоагуляционных и реологических изменениях сердечно-сосудистой системы при СД типа 2. Наряду с нарушениями функции эндотелия сосудов, тромбоцитов, изменениями активности свертывания крови, активацией свободно-радикальных процессов в организме и снижением антиоксидантной активности, выявлено большое число еще недавно совершенно неизвестных факторов высокого риска тромбообразования (гипергомоцистеинемия,
дефицит оксида азота и др.ХБалуда МВ.,1996; З.С.Баркаган, 2000; Альтшулер М.Ю., 2002).
Известно, что значительную роль в развитии сосудистых осложнений у больных СД типа 2 играет повышенная активность тромбоцитов, которые являются связующим звеном между сосудистым и коагуляционным компонентами гемостаза (Балаболкин М.И.1996; Бышевский А.Ш.,1996; Sowers J.R. et al.,2003). Таким образом, для успепшой ликвидации тромботических и ишемических осложнений при СД типа 2 необходимо лекарственное воздействие, направленное на устранение не только гипергликемии и гиперлипидемии, но и повышенной агрегационной активности тромбоцитов.
Такое воздействие способны оказать производные бензимидазола, которые, как известно, являются селективными ингибиторами тромбок-сансинтетазы (TXSyn) и тем самым, угнетают образование мощного эндогенного фактора тромбообразования - тромбоксана А (ТХА^ (А.Г.Муляр,1995).
Исходя из вышеизложенного, поиск новых лекарственных препаратов среди данного класса химических веществ представляется важнейшей задачей.
Работа выполнена в соответствии с НИР ГОУ ВПО «Московский государственный медико-стоматологический университет» федерального агентства по Здравоохранению и Социальному развитию (№ Госрегистрации 01200100390).
Дель исследования.
Изучение новых производных имидазо- и пиримидо -бенз-имидазолов с последующим отбором наиболее активного и малотоксичного потенциального антиагреганта для лечения сердечно-сосудистой патологии при СД типа 2.
Задачи исследовании.
1. Оценить степень метаболических нарушений у пациентов контрольной группы и больных, страдающих СД типа 2 в сочетании с ИБС и у больных СД типа 2 без ИБС (основные группы).
2. Исследовать влияние новых имидазо- и пиримвдо[1,2,а]-бенз-имидазолов на индуцированную агрегацию тромбоцитов в условиях in vitro (кровь пациентов из контрольной группы и больных из основных групп).
3. Выявить вещества, наиболее эффективно подавляющие агрегацию тромбоцитов и исследовать антиагрегационный эффект отобранных соединений в условиях in vivo (опыты на животных).
4. Оценить влияние потенциального лекарственного препарата на способность нейтрофилов вырабатывать активные формы кислорода («дыхательный взрыв») и изменение уровня свободного кальция [Ca2+]í в цитоплазме форменных элементов крови больных с метаболическими нарушениями (в условиях in vitro).
5. Определить острую токсичность перспективного противотромбо-тического средства
Научная новизна.
В представленной работе впервые исследована противотромботи-ческая активность новых имидазо- и
Отобрано перспективное соединение РУ-673 с выраженной способностью угнетать агрегацию тромбоцитов при диабетических нарушениях гемостаза в условиях in vitro. Показано, что перспективное соединение при внутрижелудочном введении дозозависимо подавляет основную функцию данных форменных элементов крови.
Установлено, что потенциальный антиагрегант снижает повышенное содержание уровня свободного кальция в цитоплазме
лимфоцитов человека, подавляет образование реактивных радикалов кислорода.
РУ-673 относится к 4 классу - малотоксичные соединения. Ранее данная группа химических веществ не изучалась. Практическая ценность исследований.
Результаты проведенных исследований свидетельствуют о перспективности дальнейшего изучения по параметрам безопасности потенциального лекарственного препарата, угнетающего агрегацию тромбоцитов. Результаты анализа «структура - действие» позволили дать рекомендации химикам-синтетикам по дальнейшему синтезу новых производных бензимидазола с предполагаемым антиагрега-ционным действием. Полученные данные легли в основу пакета документов, предназначенных для получения в Росздраве разрешения на первую фазу клинических испытаний при лечении тромботических и ишемических осложнений при СД типа 2.
Основные положения, выносимые на защиту. -выявление биохимических маркеров метаболических нарушений (кровь больных СД типа 2 и в сочетании с ИБС);
-изучение антиагрегационной активности новых производных бенз-имидазола на экспериментальных моделях с метаболическими нарушениями (кровь доноров, больных СД типа 2 в сочетании с ИБС и больных СД типа 2 без патологии сердечно-сосудистой системы);
-изучение способности соединения РУ-673 подавлять агрегацию тромбоцитов в опытах in vivo (на животных);
-установление некоторых аспектов механизма антиагрегационного действия потенциального противотромботического средства (влияние на образование свободных радикалов кислорода и уровень свободных ионов кальция [Ca2+]i);
-констатация низкой острой токсичности перспективного антиаг-реганта.
Апробация работы.
Результаты работы были доложены и обсуждены на совместном заседании кафедр фармакологии, клинической фармакологии, эндокринологии и диабетологии МГМСУ. Протокол №7 от 11.05.05г.
Публикации. По материалам диссертации опубликовано 4 работы.
Объем и структура работы.
Диссертация состоит из введения, трех глав, заключения, выводов, практических рекомендаций и библиографии, включающей 81 отечественный и 134 иностранных источников. Работа изложена на 141 страницах, содержит 32 рисунка, 13 таблиц.
Материалы и методы исследования.
Материалы исследования. В качестве материала для исследования были взяты 27 вновь синтезированных химических соединений, любезно предоставленных заведующим кафедрой фармакологии Волгоградской Медицинской академии, член-корр. РАМН, доктором медицинских наук, профессором А. А.Спасовым.
Для исследований крови in vitro, больные были разделены на' две группы в соответствии с характером клинического течения заболевания, возрастом, индексом массы тела, наличием абдоминального ожирения.
В группу №1 вошли пациенты в возрасте от 45 до 65 лет с диагнозом СД типа 2 и развившейся ИБС-стенокардией напряжения П, Ш функционального класса, с абдоминальным ожирением (ИМТ-25,0-30,0 кг/рост м2, ОТ/ОБ равно или больше 0,95), умеренной гипертензией, средней степенью тяжести СД, длительностью заболевания от 2-14 лет.
Группа №2 состояла из пациентов с диагнозом СД типа 2, с абдоминальным ожирением (ИМТ-25,0-30,0 кг/рост м2, ОТ/ОБ равно или больше 0,95), легкой и средней степенью тяжести СД, мягкой ги-
пертензией, клинических проявлений ИБС у данных больных не наблюдалось. Длительность заболевания СД типа 2 колебалась от нескольких месяцев до 8 лет.
В контрольную группу вошли пациенты в возрасте от 40 до 55 лет с нормальной массой тела, без отягощенного по сахарному диабету и ИБС анамнезу.
Эксперименты in vivo по оценке функции тромбоцитов проводились на 240 крысах массой острая токсичность определялась на 144 мышах массой 16±2,0г. Животные содержались на стандартной диете при свободном доступе к воде, накануне опыта животных не кормили.
Методы исследования.
Исследование агрегации тромбоцитов проводилось по методу Born (1962) на агрегометре фирмы «Chrono-log» (США), соединенным с компьютером, что позволило производить графическую запись агрегограмм. Основной принцип метода заключается в измерении степени изменения оптической плотности плазмы, богатой тромбоцитами, при добавлении к ней индуктора агрегации АДФ, в концентрации (Баркаган З.С., Мамонт А.П., 1999). В течение одного дня вещество тестировалось в трех концентрациях; проводились два опыта на двух образцах плазмы, полученных от двух доноров или трех дозах на двух образцах плазмы, полученной от животных. Для каждого образца плазмы подсчет числа тромбоцитов выполнялся однократно, до эксперимента. Степень агрегации под влиянием одного индуктора агрегации замерялась (контроль) на каждом образце плазмы дважды (в начале и в конце эксперимента).
Уровень ЛМ/с-определялся иммунотурбодиметрией с помощью наборов «LaBsystems»(Чехия).
Определение х-ЛПВП, осуществлялось иммуноферментным методом с использованием антител против человеческих липопротеинов; anoAl и апоВ100 - иммунотурбодиметрией; х-ЛПНП-гомогенным методом прямого ферментативного измерения без осаждения; ОХС и ТГ-ферментативным фотометрическим методом. Все исследования проводились на биохимическом анализаторе фирмы
«Ciba-Corning» (США) реагентами фирмы «DiaSys»(TepMaHHa).
При оценке уровня ИРИ использовался общепринятый радио-имунный метод.
Определение АЧТВ, ПВ, фибриногена, антитромбина III, плаз-миногена, каллекреин-зависимого фибршюлиза(Ш-аЗФ) проводили по стандартным методикам наборами фирмы «Технология-стандарт» на коагулометре «Start-4» (Швейцария).
Для определения активных форм кислорода (АФК) использовался модифицированный метод хемилюмининсцентного анализа (Е.И Асташкин, 2002), в качестве люминофора был взят люцигенин (конечная концентрация люцигенина в пробе составила 20 мкМ). После активации нейтрофилов формилпептидом и форболовым эфиром, хемилюминесценция регистрировалась в виде количества импульсов в минуту на люминометре «Биотокс-7», соединенном с компьютером. Запись интегрального сигнала от образца крови производилась каждые 6 сек. Объем пробы составил 100 мкл, количество нейтрофилов в суспензии - 1млн/мл. Эксперимент проводился на образцах цельной крови доноров и больных.
При изучения уровня свободного кальция [Ca2+]i, лимфоциты выделялись из обогащенной плазмы с помощью дифференциального центрифугирования в градиенте плотности (удельная
плотность 1,078 г/мл) в течение 30 минут при 3000 об/мин. Величина концентрации свободных ионов кальция в цитоплазме клеток
определялась с помощью флуоресцентного индикатора ионов кальция (Fura-2/AM). Измерение флуоресценции проводилось на спектро-флуориметре «Hitachi F-4000» (Япония) в термостатируемой кювете при температуре 37°С. Длина волны возбуждения флуоресценции составляла 335нм.
Острая токсичность исследуемого вещества рассчитывалась по методу Кербера (1931 г). Животные были разделены на группы по 6 особей в каждой. Опытным группам животных внутрижелудочно вводили разные дозы исследуемого соединения на 1% растворе крахмала. Контрольной группе животных - соответствующий объем раствора крахмала. После 24 часов наблюдения рассчитывалась средняя летальная доза: LD50 = LDwo -£(ZxD)/n,
где, Z - среднее арифметическое значение погибших животных в двух соседних группах.
D - разница между двумя соседними дозами. n - количество животных в группе.
Полученные данные подвергались статистической обработке с использованием пакета прикладных программ "MED STAT", "Microsoft Excel."
ПОЛУЧЕННЫЕ РЕЗУЛЬТАТЫ Современные научные данные позволяют рассматривать СД, как комплекс нарушений обмена веществ, способствующих развитию и прогрессированию сердечно-сосудистых заболеваний. Сосудистые поражения являются интегративным следствием всех функционально-биохимических и морфологических изменений.
Для подтверждения наличия у больных метаболических нарушений было оценено состояние углеводного и липидного обменов в сыворотке крови у представителей всех трех исследуемых групп.
Было установлено, что концентрация HbAlc определялась на уровне 7,65%±0,3 у пациентов из основной группы №1 и 6,8%±0,5 у пациентов группы №2, при контрольном значении у здоровых лиц 4,2%±0,2 (табл.1).
В группе доноров инсулиновая секреция натощак равнялась 8,28±4,1 мМЕ/л. В группе №1 (больные СД типа 2 в сочетании с ИБС) содержание инсулина натощак было в 1,7 раза больше, чем в группе №2 (больные СД типа 2 без ИБС) и в 4 раза больше, чем в контрольной группе.
Значения общего холестерина в обеих основных группах больных отличались незначительно, но по критериям ВОЗ(1998г) являлись аномальными и в 1,5 раза превышали таковой показатель в контрольной группе.
Повышенная концентрация триглицеридов (3,5±0,3 ммоль/л) в группе №1 соответствовала СД типа 2 с диагностированной ИБС, в группе №2 она была несколько ниже но в 1,5 раза
превышала этот же показатель в контрольной группе.
Сниженную атерогенную защиту у больных СД типа 2 с ИБС характеризовали ХС-ЛПВП и белковый компонент ЛПВП- AnoAl, значения которых не превышали 0,98±0,7ммоль/л и 1,04±0,6г/л соответственно. У пациентов группы № 2 эти показатели не отличались от контрольных цифр.
Концентрация ХС-ЛПНП у пациентов группы №1 в 1,3 раза превысила такой же показатель у пациентов группы № 2 и в 2,2 раза была выше, чем в контрольной группе, что и объясняет патологически высокие значения АпоВ - 1,79±0,7г/л и 1,16±0,4г/л в обеих основных группах (табл.1).
Таблица 1.
Показатели нарушения метаболизма у пациентов контрольной и ___ больных основных групп (М ±ш). _
^ Пациенты Показатели4"», сыворотки кроюК^ Контрольная группа п-25 Основная группа №1 (больные СД типа2сИБС) п-25 Основная группа №2 (больные СД типа 2) п-22
НЬА1с% 4,2±0,2 7,6±0,3* 6,80±0,5*
ИРИмМЕ/л 8,28+1,2 36,3±2,2* 23,7±1,5*
Холестерин ммоль/л 4,9±0,2 7,3±0,4* 6,7 ±0,4*
Триглицериды ммоль/л 1,6*0,7 3,5±0,3* 2,4±0,5*
хс-лпвп 1,7+0,2 0,98±0,7** 1,5±0,2
Апо-А г/л 1,78+0,3 1,04±0,2** 1,6±0,2
ХС-ЛПНП ммол/л, 2,4±0,2 5,2±0,3** 4,4±0,3**
Апо-В г/л 0,78±0,2 1,79±0,4** 1,1640,2**
Примечание :* - при р<0,01,**- при р<0,001 достоверно, по сравнению
с контролем.
Таблица 2.
Показатели плазменного и клеточного гемостаза у пациентов контрольной и больных основных групп (М ±т)._
Пациенты Контрольная группа п-25 Основная группа №1 (больные СД типа2сИБС) п-25 Основная -группа №2 (больные СД типа 2)
Показатели гемошза п-22
АЧТВ, сек. 33,6±0,6 22,4±0,7* 26,7±0,8*
ПВ,сек. 13,8±0,5 10,6±0,3* 11,4=40,4
Фибриноген,г/л 2,9±0,1 4,39±0,2* 4,0±0,2*
Антитромбин III % 102,4±4,1 61,7±2,4* 67,2±2,8*
Плазминоген,% 105,9±7,2 70,8±2,5* 81,5±3,7*
ХП-аЗФ,мин. 6,7±0,6 20,6±1,42* 12,7±0,8*
Агрегация тромбоцитов 52,4±1,26 78,7±1,79* 68,8±1,29*
ицпуц-АДФ %
Примечание :*- достоверно, при р<0,01, по сравнению с контролем.
Важную роль в развитии метаболических нарушений играет изменение основных показателей плазменного гемостаза.
Было установлено, что у больных обеих основных групп наблюдались следующие изменения, характеризующие тромботические нарушения (табл.2). Значения АЧТВ и ПВ у пациентов группы №2 отличались от контрольных цифр, но приближались к нижнему значению нормы, в то время, как у пациентов группы № 1 они были в 1,5 раза ниже, по сравнению с такими же показателями в контрольной группе.
У пациентов обеих основных групп концентрация фибриногена колебалась в пределах 4,39±0,2 г/л (группа №1) и 4,0±0,2г/л (группа №2), что превышает контрольные значения в 1,4 раза (табл.2). При анализе антикоагулянтной активности, отмечалось снижение АТ-Ш до 61,7%±4,2 (группа №1) и 67,2%±3,8 (группа№2) (р<0,01).
У пациентов контрольной группы концентрация плазминогена составляла 105,9±3,0%, что соответствует норме, и почти в 1,4 раза превышала аналогичные показатели у больных обеих основных групп.
При изучении ХПа-калликреин-зависимого фибринолиза наблюдалось замедление времени лизиса эуглобулинов: 20,б±0,7мин в группе № 1 и 12,7±0,5мин в группе №2, при контрольном значении 6,7±0,Змин.
Агрегация тромбоцитов у больных СД типа 2 в сочетании с ИБС и больных СД типа 2 без патологии сердечно-сосудистой системы превышала таковую у контрольной группы на 46% и 31% соответственно.
Таким образом, полученные данные свидетельствуют о выраженных метаболических нарушениях у пациентов, страдающих СД типа 2 в сочетании с ИБС и у пациентов с СД типа 2. Это позволило использовать кровь данных больных, а также доноров в качестве модельной среды при исследовании антиагрегапионной способности вновь синтезированных имидазо- и пиримидобензимидазолов.
При оценке влияния новых производных бензимидазола на функцию тромбоцитов было установлено, что при использовании крови доноров три вещества из 27 тестируемых соединений во всех исследуемых концентрациях оказывают статистически значимое подавление АДФ- индуцированной агрегации тромбоцитов.
Так, вещество РУ-673 в концентрации 10"3М вызывало падение оптической плотности плазмы, обогащенной тромбоцитами, на 37,8±1,1% при контрольном значении 62,4±0,9% (р<0,05). При последующем разведении исследуемого вещества до концентрации 5x10*4 антиагрегационный эффект составил 26,1% от исходного значения. Дальнейшее уменьшение концентрации РУ-673 до 10"^ оказывало более слабое воздействие (10,2%). В концентрации значения оптической плотности плазмы, обогащенной тромбоцитами, не отличались от нормы.
Угнетение агрегации тромбоцитов веществом РУ-1151 было наиболее выраженным в концентрации
(падение оптической
плотности плазмы, по сравнению с исходным снижалось на 47,2%), в более низкой концентрации оно не превышало 14,7%. В
концентрации наблюдаемый эффект полностью прекращался.
При инкубации вещества РУ-1152 в плазме, обогащенной тромбоцитами, процент падения оптической плотности достигал максимальных значений в концентрации
(27,6%
от исходного). В
концентрации агрегация подавлялась лишь на 14% от
контроля; причем дальнейшее уменьшение концентрации тестируемого соединения в плазме не дало статистически значимого эффекта.
В следующей серии исследований (in vitro), было изучено влияние веществ на функцию кровяных пластинок
больных СД типа 2 с ИБС и СД типа 2 без сопутствующей патологии сердечно-сосудистой системы.
В обеих основных группах на фоне изначально высокой функциональной активности тромбоцитов, соединение РУ-1151 в дозе снижало активность АДФ почти в 1,7 раза (42,6%); в более низкой концентрации
5x10-41 оно действовало значительно слабее и угнетало агрегацию по группам на 16,6% и 26,2% соответственно, по сравнению с контролем.
Антиагрегационный эффект РУ-1152 проявился в диапазоне концентраций
В обеих группах в концентрации 10"3М данное действие составило 38%, а при последующем снижении концентрации на порядок ослабевало в 2 раза.
Под влиянием РУ-673 в концентрации 10-3 агрегация подавлялась почти в 2 раза в обеих основных группах. Эта тенденция сохранялась в концентрации но была менее выражена и составила
соответственно по группам 23,4%, И 20,6% по отношению к контролю.
Данные, свидетельствующие о способности новых производных бензимидазола угнетать агрегацию тромбоцитов в условиях in vitro в крови пациентов, страдающих СД типа 2 с ИБС и без патологии сердечно-сосудистой системы, были подтверждены серией опытов в условиях живого организма на интактных крысах. '
Вещество РУ-1152 при внутрижелудочном введении крысам не оказало сколько-нибудь существенного влияния на АДФ-индуци-рованную агрегацию тромбоцитов ни в одном из временных промежутков, ни в одной из исследуемых доз (1,5; 3,0; 6,0мг/кг).
Вещества РУ-1151, РУ-673 проявили высокую специфическую активность. Оба соединения при внутрижелудочном введении в дозе 3,0 мг/кг угнетали АДФ- индуцированную агрегацию у животных (рис.1), причем РУ-673 начинало действовать через 30 мин; степень инициации агрегации кровяных пластинок при этом снизилась на 20,2%. Через час действие индуктора склеивания тромбоцитов ослабевало в 1,5 раза
(30,2%). Ангиагрегационный эффект РУ-1151 в аналогичной дозе был кратковременным, проявился только через час после начала опыта и был в 1,5 раза (20%) слабее, чем действие РУ -673 в том же временном промежутке.
Рис. 1. Влияние веществ РУ-673 и РУ-1151 в дозе 3,0 мг/кг на АДФ -индуцированную агрегацию тромбоцитов крыс in vivo (в % по отношению к контролю).
Рис.2. Влияние веществ РУ-673 и РУ-1151 в дозе 6,0 мг/кг на АДФ -индуцированную агрегацию тромбоцитов крыс in vivo (в % по отношению к контролю).
Увеличение дозы обоих веществ в 2 раза (6,0 мг/кг) привело к изменению качественного и количественного воздействия на процесс агрегации (рис.2).
Снижение оптической плотности плазмы, богатой тромбоцитами, начиналось через 30 мин с момента введения вещества животным: РУ-1151 на 13,4%, а РУ-673 на 15%. Однако уже к первому часу наблюдения антиагрегационный эффект РУ-673 возрос на 43,7% от контроля и почти в 1,5 раза превысил аналогичные показатели РУ-1151 (29,5%). Антиаг-регационный эффект у обоих соединений сохранялся в течение следую-
щего часа и через три часа наблюдения был сопоставим с исходными значениями оптической плотности плазмы, обогащенной тромбоцитами.
Таким образом, результаты, полученные в опытах in vitro, и в опытах in vivo свидетельствуют, что наиболее выраженной способностью подавлять индуцированную агрегацию тромбоцитов обладает новое производное пиримидо-[1,2-а]-бензимидазола с условным шифром РУ-673.
Кроме того, у больных СД типа 2, соединение РУ-673 ингибирует спонтанное образование радикалов кислорода в суспензиях нейтрофилов и, индуцированное стандартными агентами-формилпептидом и форболовым эфиром, то есть обладает выраженным антиоксидантным действием.
Как известно, при сахарном диабете повышение функциональной активности тромбоцитов связано в первую очередь с развитием окислительного стресса, вызванного гипергликимией. Образующиеся свободные радикалы кислорода, длительно активизируя процессы ПОЛ, изменяют фосфолипидный состав мембраны тромбоцита и, повышая активность фосфолипазыС (PLC), стимулируют образование инозитол трифосфата (InsP3), что в свою очередь, приводит к повышению [Ca2+]i за счет мобилизации его из внутриклеточных депо.
С другой стороны, при СД типа 2 на фоне инсулинорезистентности, происходит снижение синтеза ц-ГМФ за счет подавления активности N0-синтетазы и выработки N0. Это тоже способствует повышению уровня свободного кальция в цитоплазме тромбоцитов, которое
коррелирует с повышенной индуцированной агрегацией, выявленной нами у пациентов обеих основных групп.
Исследования, проведенные по изучению влияния вещества РУ-673 на изменение внутриклеточной концентрации свободных ионов Са2+ в лимфоцитах больных СД типа 2, позволили сделать выводы, что данное вещество концентрационно-зависимым образом способно переводить каль-
циевые каналы плазматических мембран лимфоцитов, регулируемых внутриклеточными кальциевыми депо (Store operated Са2+ channels - SOC каналы) из закрытого состояния, в открытое. Это позволяет экзогенному Са2+ поступать в эндоплазматический ретикулум (ER) - депо данных форменных элементов крови и снижать уровень [Ca2+]i в плазме крови, чем, по-видимому, и объясняется антиагрегационный эффект РУ-673.
Лимфоциты в качестве объекта исследований были выбраны не случайно, их механизмы кальциевого ответа сходны с таковыми у тромбоцитов, благодаря своей стабильности они менее подвержены воздействию центрифугирования, изменению рН среды и другим манипуляциям, необходимым для проведения данных экспериментов.
При анализе «структура-действие» производных пиримидо-[1,2-а] бензимидазола можно высказать предположение, что высокая антиагрегационная активность вещества РУ-673 вероятно обусловлена выраженной реакционной способностью, возникающей при наличии спиртовой группы -ОН, которая в биологических условиях может фосфорилироваться, что создает возможности для усиления биологической активности. С другой стороны, присутствие в структуре вещества-галогена, являющегося, как известно, сильно гидрофобным атомом, способствует растворению в липидах и проникновению через липидные мембраны. Не исключено, что именно эти особенности создают преимущества для взаимодействия с теми ферментными системами, которые обеспечивают антиагрегантный эффект препарата.
Рис 3. Структура вещества РУ-673
Менее выраженная антиагрегационная активность вещества РУ-1151 может быть вызвана присутствием в химической структуре этокси-фенилового радикала, который представляет собой простой эфир, что объясняет наблюдаемые свойства вещества.
Слабое подавление веществом РУ-1152 действия АДФ на функции тромбоцитов объясняется наличием в структуре метилового эфира остатка этоксибензойной кислоты, который может гидроксилироваться, что, как правило, сопровождается ослаблением биологической активности.
В заключительной серии экспериментов было установлено, что вещество РУ-673 относится к IV классу - «малотоксичные вещества» (Сидоров К.К. 1973г.), так как его 1ЛЭ$о составила 2834мг/кг.
Таким образом, учитывая высокую противотромботическую активность и низкую токсичность РУ-673, представляется необходимым проведение дальнейших исследований этого вещества по параметрам безопасности в
Рис. 4. Структура вещества РУ-1151.
Рис. 5. Структура вещества РУ-1152.
целях получения разрешения на последующие клинические испытания в качестве лекарственного препарата с антиагрегационным действием.
ВЫВОДЫ
1. Среди вновь синтезированных дериватов имидазо- и пиримидо-бензимидазола выявлены соединения: ЗН-[(этил-2-гвдроксибеюил)-Я1-р]-1,2-К-пиримидобензимидазол (РУ-673); ЗЫ-[(2-этоксифенил)]-1,2-К-
пиримидобензимидазола гидрохлорид
метилбензоат)]-1,2-М-пиримидобензимидазола гидробромид (РУ-1152), обладающие антиагрегационной активностью.
2. По сравнению с другими потенциальными антиагрегантами из данного класса соединений, вещество
М-пиримидобензимидазол (РУ-673) при пероральном введении более выражено препятствует экспериментально индуцированной агрегации тромбоцитов.
3. Перспективное лекарственное средство, производное пиримидо-бензимидазола (РУ-673) обладает выраженным антиоксидантным эффектом, ингибируя образование свободных радикалов кислорода в суспензиях нейтрофилов у больных СД типа 2.
4. Отобранное для клинических испытаний вещество (РУ-673) снижает уровень свободного кальция в цитоплазме лимфоцитов как у доноров, так и больных СД типа 2.
5. Вещество ЗМ4(этил-2-гвдроксибензил)-Егр]-1,2-Ы-пиримидобен-зимидазол (РУ-673) является малотоксичным соединением и может быть рекомендовано для дальнейших исследований по параметрам безопасности.
Практические рекомендации.
Материалы данного исследования используются при чтении лекций
и ведении практических занятий по профилю соответствующих тем на кафедрах общей химии, биохимии и фармакологии МГМСУ.
Выявление антиагрегационной способности изученных веществ позволило сформулировать рекомендации химикам-синтетикам по последующему синтезу новых веществ с заданными (антиагрегацион-ными) свойствами.
Полученные данные легли в основу пакета документов, предназначенных для получения в Росздраве разрешения на первую фазу клинических испытаний вещества РУ-673 в качестве лекарственного препарата - антиагреганта.
СОКРАЩЕНИЯ
АДФ - аденозиндифосфорная кислота
HbAlc - гликозилированный гемоглобин
Х-ЛПВП - холестерин липопротеидов высокой плотности
Х-ЛПНП - холестерин липопротеидов низкой плотности
Апо-А1 - аполипопротеин-А1
Апо-В10С1- аполипопротеин-ВЮО
АЧТВ - активированное частичное тромбопластиновое время
АТ-Ш - антитромбин-Ш
FMLP - формил-метионил-лейцил-фенилаланин (формилпептид)
РМА - форбол-меристат-ацетат (форболовый эфир)
PLC - фосфолипаза С
ЬиРЗ - инозитолтрифосфат
DAG - диацилглицерин
[Са 2+]i - свободный цитоплазматический Са 2+ тромбоцитов
TFPI - ингибитор пути тканевого фактора
ТХА2 - тромбоксан А2
TXSyn - тромбоксансинтетаза
Список опубликованных работ по теме диссертации;
1. Е.И. Соколов, А.Л. Давыдов, Н.В. Перова, Н.В. Бочарникова /Соче-танное применение плазмофореза и лазеротерапии у больных с ише-мической болезнью сердца и инсулиннезависимым сахарным диабетом: Методика проведения, показания, противопоказания, профилактика нежелательных эффектов/Методические рекомендации./ М., МГМСУ-1999.,-12с.
2. А.А. Смирнов, О.И. Надеева, Н.В. Бочарникова /Результаты применения предуктала у пожилых пациентов с рефрактерной стенокардией, страдающих сахарным диабетом// «Сахарный диабет», 2001, №3, с.55-57.
3. А.А. Смирнов, Давыдов А.Л., Н.В. Бочарникова /Результаты применения триметазидина у пациентов с рефрактерной стенокардией, страдающих сахарным диабетом типа 2. // «Сахарный диабет», 2003, №2, с.22-22.
4. А.Г. Муляр,М.Т, Гасанов Ю.С. Авфукова, Н.В. Бочарникова /Поиск потенциальных антиагрегантов среди новых производных имидазоло-и пиримидобензимидозола// XII Российский национальный конгресс. «Человек и лекарство», Сб. научн. трудов, Москва, 2005, с.644-645.
Заказ №417. Объем 1 пл. Тираж 100 экз.
Отпечатано в ООО «Петроруш». г. Москва, ул. Палиха-2а, тел. 250-92-06 www.postator.ru
15 КЮЛ 2005
Чч"~ 261
Оглавление диссертации Бочарникова, Наталья Владимировна :: 2005 :: Москва
ВВЕДЕНИЕ.
ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.
1.1.Механизмы тромбоцитарного гемостаза.
1.1.1.Структура тромбоцита.
1.2 Тромбоцитарное звено гемостаза.
1.3. Рецепторная регуляция активности тромбоцитов.
1.4.Современные представления о состоянии тромбоцитарного гемостаза при СД типа 2 и ИБС.
1.5 Антиагреганты - современное состояние вопроса.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.
2.1 Материалы исследования.
2.2.Методы исследования.
2.2.1.Определение гликозилированного гемоглобина.
2.2.2 Определение липидов крови.49 /
2.2.3. Определение эластазы плазмы.
2.2.4. Определение иммунореактивного инсулина и С-пептида.
2.2.5. Исследование агрегации тромбоцитов.
2.2.6. Определение гемостатических показателей.
2.2.6.1. Определения протромбинового времени.
2.2.6.2. Определение активированного частичного тромбопластинового времени (АЧТВ).
2.2.6.3. Определение фибриногена.(метод Clauss).
2.2.6.4.0пределение антитромбина- III.
2.2.6.5.Определение ХП-а -калликреин- зависимого фибринолиза .55 2.2.6.6. Определение плазминогена.
2.2.7. Регистрация образования активных форм кислорода в нейтрофилах человека.
2.2.8. Изучение уровня свободного кальция [Ca2+]i в цитоплазме лимфоцитов человека.
2.9. Определение острой токсичности.
РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ.
3.1. Определение маркеров метаболических нарушений.
3.2.Исследование антиагрегационной способности новых химических соединений в опытах in vitro.
3.2.1 АДФ - индуцированная агрегация тромбоцитов.
3.3. Исследования in vivo.
3.4. Изучение влияния нового производного пиримидо [1,2-а]-бензимидазола (соединения РУ-673) на спонтанное образование радикалов кислорода, а также индуцированное стандартными агентами в суспензии нейтрофилов доноров и больных СД типа 2.
3.5. Изучение влияния соединения РУ-673 на изменение внутриклеточной концентрации свободных ионов Са в лимфоцитах человека. а) Влияние РУ-673 на исходно активированные SOC каналы. б) Влияние РУ-673 на активность SOC каналов, индуцированных СопА. в) Влияние РУ-673 на активность SOC каналов, индуцированных ингибиторами Са2+-АТР-азы депо.
3.6. Определение острой токсичности соединения РУ-673.
Введение диссертации по теме "Фармакология, клиническая фармакология", Бочарникова, Наталья Владимировна, автореферат
Тромбоэмболии, ишемии и инфаркты органов - наиболее распространенные виды патологии человека, удерживающие в цивилизованных странах первое место среди причин инвалидизации и смертности населения и, в значительной степени, определяющие качество и среднюю продолжительность жизни людей. Они являются естественным исходом большинства заболеваний кровеносных сосудов - от атеросклероза и множества диспластических и иммунных ангиопатий до генетически обусловленных обменных вазопатий и дисфункций системы гемостаза, в том числе ангиодисплазий и тром-бофилий [74,5,9,36,115,216]. Особое место среди сосудистой патологии занимают диабетические поражения сосудов, являющиеся ведущей причиной смертности у больных СД типа 2. Эпидемиологические данные свидетельствуют о высокой ассоциации сердечно-сосудистых заболеваний с распространенностью СД типа 2, доля которого среди других форм диабета достигает 85-90% [16,19,20,158,21]. СД типа 2 характеризуется значительными нарушениями обмена углеводов, жиров и белков. В связи с сопряженными микро- и макрососудистыми осложнениями, эти нарушения часто приводят к существенному повышению заболеваемости и смертности, в первую очередь в связи с осложнениями со стороны сердечно-сосудистой, нервной, костно-мышечной систем, почек и глаз[10,12,36,39,41,98]. В момент установления диагноза около 40% пациентов с СД типа 2 уже имеют поражение крупных сосудов, 40%-микро-или макроальбуминурию, 15%-ринопатию, 50%-гипертриг-лицеридемию и 50%-гипертензию [30].
В последние годы существенно пополнились знания о механизмах различных видов тромбообразования, в том числе и при СД. На этой основе пересматриваются подходы к созданию лекарственных средств предупреждения и терапии патологии сосудов[9,33,18,20,58].
Таким образом, поиск лекарственных препаратов, оказывающих противодействие основным патогенетическим факторам, приводящим к прогрессированию каскада сосудистых осложнений у больных СД типа 2, представляется исключительно важной задачей. Цель исследования.
Скрининг новых производных имидазо- и пиримидо[1,2,а]-бенз-имидазола с последующим выбором наиболее активного и малотоксичного потенциального лекарственного препарата для лечения тромботических и ишемических осложнений у больных СД типа 2.
Задачи исследования.
1. Оценить степень метаболических нарушений у больных, страдающих СД типа 2 в сочетании с ИБС, у больных СД типа 2 без ИБС (основные группы), а также у пациентов контрольной группы.
2. Исследовать влияние новых имидазо- и пиримидо[1,2,а]-бенз-имидазолов на индуцированную агрегацию тромбоцитов в условиях in vitro (кровь пациентов из контрольной группы и больных из основных групп).
3. Выявить вещества наиболее эффективно подавляющие агрегацию тромбоцитов и исследовать антиагрегационный эффект отобранных соединений в условиях in vivo (опыты на животных).
4. Оценить влияние потенциального лекарственного препарата на способность нейтрофилов вырабатывать активные формы кислорода («дыхательный взрыв») и изменение уровня свободного кальция [Ca2+]i в цитоплазме форменных элементов крови больных с метаболическими нарушениями (в условиях in vitro).
5. Определить низкую острую токсичность перспективного про-тивотромботического средства.
Изученные явления.
Клеточный гемостаз. Биохимические маркеры метаболических нарушений. Изменение уровня (Са ) в цитоплазме форменных элементов крови, «дыхательный взрыв», острая токсичность. Объекты и объем исследования.
Эксперименты проведены на нелинейных крысах-самцах массой 190±30 г, на 144 белых беспородных мышах-самцах массой 16,0±2,0 г и на крови доноров и больных, страдающих СД типа 2 в сочетании с ИБС и больных с СД типа 2 без ИБС. Методы исследования.
1. Оценка функциональной активности тромбоцитов по методу Борна.
2. Определение показателей гемостаза, липидного и углеводного обменов у доноров, больных СД типа 2 в сочетании с ИБС и больных с СД типа 2 без ИБС.
3. Спектрофлюориметрия.
4. Хемилюминисценция.
5. Острая токсичность по Керберу.
6. Обработка полученных данных методом вариационной статистики.
Используемая аппаратура.
1. Агрегометр фирмы «Chrono-log»(CIIIA).
2. Компьютер Pentium 111(для фиксации графической регистрации процесса агрегации).
3. Биохимический анализатор «Express-550».
4. Анализатор для HbAlc фирмы«Копе1аЬ».
5. Коагулометр фирмы «Rosche» (Швейцария).
6. Спектрофлюориметр «Hitachi-4000» (Япония).
7. Люминометр «Биотокс-7».
8. Радиоизотопный счетчик «MultiGamma-1261».
Научная новизна.
В представленной работе впервые исследована противот-ромботическая активность новых производных имидазо- и пиримидо-[1,2,а]-бензимидазола. Отобраны перспективные соединения с выраженной способностью угнетать агрегацию тромбоцитов при диабетических нарушениях гемостаза в условиях in vitro. Показано, что перспективные соединения при внутрижелудочном введении дозозависимо подавляют основную функцию данных форменных элементов крови.
Установлено, что потенциальный антиагрегант снижает повышенное содержание уровня свободного кальция [Ca2+]i в цитоплазме лимфоцитов человека, подавляет образование реактивных радикалов кислорода.
Перспективный антиагрегант относится к 4 классу - «малотоксичные соединения». Ранее данная группа химических веществ не изучалась.
Практическая ценность исследований.
Результаты проведенных исследований свидетельствуют о перспективности дальнейшего изучения по параметрам безопасности потенциального лекарственного препарата, угнетающего агрегацию тромбоцитов. Результаты анализа «структура - действие» позволили дать рекомендации химикам-синтетикам для дальнейшего синтеза новых производных бензимидазола с предполагаемым антиаг-регационным действием. Полученные данные являются основной частью пакета документов, предназначенного для подачи в Росздрав с целью получения разрешения на первую фазу клинических испытаний при лечении тромботических и ишемических осложнений при СД типа 2.
Ожидаемые результаты.
В результате проведенных экспериментов планируется предложить новый высокоэффективный и малотоксичный перспективный лекарственный препарат для лечения диабетических нарушений гемокоагуляции и выяснить отдельные механизмы его действия.
Сферы применения.
После дальнейшего успешного изучения хронической токсичности, намечается представление пакета документов по доклиническому изучению потенциального противотромботического средства в РосЗдрав, с целью получения разрешения на первую фазу клинических испытаний.
ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
Заключение диссертационного исследования на тему "Поиск новых потенциальных противотромботических средств на экспериментальных моделях с метаболическими нарушениями"
выводы
1. Среди вновь синтезированных дериватов имидазо- и пиримидо-бензимидазола, выявлены соединения:ЗЫ-[(этил-2-гидроксибензил)-Кгр]-1,2-Ы-пиримидобензимидазол (РУ-673); ЗЫ-[(2-этоксифенил)]-1,2-№-пиримидобензимидазола гидрохлорид (РУ-1151); ЗЫ-[(2-оксиэтил-4 метилбензоат)]-1,2-№-пиримидобензимидазола гидробромид (РУ-1152), обладающие антиагрегационной активностью.
2. По сравнению с другими потенциальными антиагрегантами из данного класса соединений вещество ЗК-[(этил-2-гидроксибензил)-К1р]-1,2-N-пиримидобензимидазол (РУ-673) при пероральном введении, более выражено препятствует экспериментально индуцированной агрегации тромбоцитов.
3. Перспективное лекарственное средство, производное пиримидо-бензимидазола (РУ-673) обладает выраженным антиоксидантным эффектом, ингибируя образование свободных радикалов кислорода в суспензиях нейтрофилов у больных СД типа 2.
4. Отобранное для клинических испытаний, вещество (РУ-673) снижает уровень свободного кальция в цитоплазме лимфоцитов как у доноров, так и больных СД типа 2.
5. Вещество ЗЫ-[(этил-2-гидроксибензил)-Кгр]-1,2-Ы-пиримидобен-зимидазол (РУ-673) является малотоксичным соединением и может быть рекомендовано для дальнейших исследований по параметрам безопасности.
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ
Материалы данного исследования используются при чтении лекций и ведении практических занятий по профилю соответствующих тем на кафедрах общей химии, биохимии и фармакологии МГМСУ.
Данные о выявленной антиагрегационной способности изученных веществ позволили сформулировать рекомендации химикам-синтетикам для последующего синтеза новых веществ с заданными (антиагрегационными) свойствами.
Полученные в работе результаты, являются основным пакетом документов, предназначенным для получения разрешения в Росздраве на первую фазу клинических испытаний в качестве антиагрегационного лекарственного препарата.
СОКРАЩЕНИЯ
Са 2+] - свободный цитоплазматический Са 2+-тромбоцитов
АА арахидоновая кислота
ADP аденозиндифосфат
BHG бутилгидроксихинон
Са 2+ ионы кальция экзогенные по отношению к тромбоцитам
Con А конковалин А,
DAG диацилглицерин
ER депо-эндоплазматический ретикулум
FMLP формил-метионил-лейцил-фенилаланин (формилпептид)
HbAlc гликозилированный гемоглобин
InsP3 инозитол трифосфат
02- супероксиданион
РКС протеинкиназа С
PLC фосфолипаза С
РМА форбол-меристат-ацетат (форболовый эфир)
SOD супероксиддисмутаза
TFPI ингибитор пути тканевого фактора
TG тапсигаргин, необратимый ингибитор С2+-АТФ-азы
TXA2 тромбоксан А2
TXSyn - тромбоксансинтетаза
АДФ аденозиндифосфорная кислота
AnoAl аполипопротеин-А1
AnoBl00 - аполипопротеин-В 100
AT-III антитромбин-Ш
АЧТВ активированное частичное тромбопластиновое время
СД типа 2 - сахарный диабет типа 2
Х-ЛПВП - холестерин липопротеидов высокой плотности
Х-ЛПНП - холестерин липопротеидов низкой плотности
Список использованной литературы по медицине, диссертация 2005 года, Бочарникова, Наталья Владимировна
1. Авдонин П.В, Ткачук В.А. Рецепторы и внутриклеточный кальций// М.5 «Наука», 1994, стр.246.
2. Авдонин П.В, Ткачук В.А. Рецепторы и внутриклеточный кальций// М., «Наука», 1994, стр.218.
3. Аверков О.А., Славина Н.Н. Нестабильная стенокардия: Краткосрочное применение тиклопидина с использованием нагрузочной дозы, влияние на АДФ индуцированную агрегацию тромбоцитов.// Кардиология .2005 стр29-36.
4. Альтшулер М.Ю.Нарушения в системе гемостаза у больных с диабетической гангреной нижних конечностей// Сборник научных трудов Саратов: Изд-во Сарат. мед. ун-та.-1996.-е 114-116.
5. Андрусенко А. В. Эндокринные заболевания и синдромы: классификация.//-М.: Знание, 1998.-177 с.
6. Аронов Д.М., Перова Н.В., Ахмеджанов Н.М. Диагностика и лечение атерогенных дислипидемий: Метод, пособие для врачей.-//М., 1996.-44 с.
7. Асташкин Е.И, Беникова Н.В. Влияние аллицина на Са+2 ответы лимфоцитов человека// «Доклады Академии наук»2002,т386, №6,стр 822-824.
8. Асташкин Е.И., Петров Е.А., Глезер М.Г. и др./Аналог АСТН4-10 вызывает дыхательный взрыв, связанный с фагоцитами крови человека // Вопр. биол. и фармац. химии, М., 2001, №3, -с.25-29.
9. Балаболкин М.И. Патогенез сосудистых осложнений сахарного диабета // Тез. докл. I Росс, диабетол. конгресса. М., 1998. - С. 36.
10. Балаболкин М.И. Сахарный диабет. М.: Медицина, 1994. - 384 с.
11. Балаболкин М.И. Состояние и перспективы борьбы с сахарным диабетом // Пробл. энд. 1997. - Т.69, № 6. - С. 3 - 9.
12. Балаболкин М.И. Эндокринология. -// М.: «Универсум паблишинг», 1998.-с 540
13. Балаболкин М.И. Эндокринология. -// М.: «Универсум паблишинг», 1998. с 584.
14. Балаболкин М.И., Клебанова Е.М., Креминская В.М. Новая классификация, критерии диагностики и показатели компенсации сахарного диабета // Тер. арх. 2000. - Т.72, № 10. - С. 5 - 10.
15. Балаболкин М.И., Клебанова Е.М., Креминская В.М. Сахарный диабет и ангиопатии // Актуальные вопросы эндокринологии: Тез. Докл. научн, конф. Под ред. И.В. Терещенко. Пермь, 1999. - С. 11.
16. Балаболкин М.И., Клебанова Е.М., Креминская В.М. Дифференциальная диагностика и лечение эндокринных заболеваний» (руководство).// Москва, «Медицина», 2002.
17. Балаболкин М.И., Креминская В.М. Патогенез и профилактика сосудистых осложнений сахарного диабета // Тер. арх. 1999. - Т.71, № 10.-С. 5-12.
18. Балуда В.П., Балуда М.В., Деянов И.И. и др. Физиология системы гемостаза.//-М., 1995.-243 с.
19. Балуда М.В. Индуцированные гепарином тромбоцитопения, артериальные и венозные тромбозы осложнения гепаринотерапии // Тер. арх.-1996. - Т.68,№12.-С. 19-22.
20. Баркаган З.С. Очерки антитромбической фармакопрофилактики и терапии. //-М., 2000-С. 91-103.
21. Бобырева JI.E. Свободнорадикальное окисление, антиоксиданты и диабетические ангиопатии // Пробл. энд. 1996. - Т.42, № 6. - С. 14 - 20.
22. Бондарь И.А., Климентов В.В., Поршенников И.А. Окислительная модификация белков при диабетических микроангиопатиях // Сах. диаб. -2000.-ЖЗ .-С.9-П.
23. Бышевский А.Ш. Тромбоциты (состав, функции, биомедицинское значение) //А.Ш. Бышевский, C.JI. Галян, И.А. Дементьева и др. / Тюменская медицинская академия, 1996. 144 с. 44.
24. Бышевский А.Ш., Галян С.Л.Влияние соединений , модифицирующих превращения арахидоновой кислоты в тромбоцитах на эффекты эстрадиола // Гемостаз и реология. 2004,» с28-43
25. Волковой А.К. Функциональная активность тромбоцитов при сахарном диабете 2 типа в процессе лечения препаратами сульфонилмочевины / А.К. Волковой, Л.В. Недосугова, И.А. Рудько и др. // Сах. диаб. 2004. -№3.-С. 2326.
26. Воробьев Г.Е «Гематология» //М., «Медицина» 1992 , с342.
27. Воскобой И.В., Киричук В.Ф., Юданова Л.С. Состояние сосудисто-тромбоцитарного гемостаза у больных с различными формами нестабильной стенокардии // Российские мед. вести. 2000. - № 1. - С. 32 -35.
28. Всемирная организация здравоохранения: Комитет экспертов ВОЗ по сахарному диабету. Второй доклад: Серия техн. докл.-М., 1991.-90.Всерос. съезд эндокринологов: Актуальные проблемы эндокринологии. -М., 1996.-С. 5-7.
29. Галенок В.А., Диккер В.Е., Гришпун М.Н. Роль гликозилированного гемоглобина в генезе гипоксии при сахарном диабете// Клин, медицина.-1983.-№5.-С. 80-84.
30. Галенок В.А., Жук Е.А. Иммунологические аспекты патогенеза диабетических ангиопатий // Тер. арх. 1998. - Т.70, № 10. - С. 5 - 10.
31. Генделека Г.Ф., Кузнецова Н.П. Распространенность вторичной резистентности к пероральным сахароснижающим средствам среди больных сахарным диабетом 2 типа// Врачеб. дело.-1995.-№1-2.-С. 103-105.
32. Граник В.Г. Лекарства. Фармакологический, биохимический и химический аспекты // М.,2001.- с. 407.
33. Граник В.Г. Основы медицинской химии // М., 2001 .-с.385.
34. Давыдов A.JI. Гемодинамические и метаболические нарушения у больных сахарным диабетом 2 типа в сочетании с ишемической болезнью сердца: Автореф. дис. д-ра мед. наук. — М., 2000 — 48 с.
35. Давыдов A.JL, Соколов Е.И., Цыпленкова В.Г. Morphological peculiarities of heart and coronary vessels damage in type 2 diabetes. // 7 World Congress for Microcirculation: Submitted papers. Monduzzi Editore., Italy.-2001.-P. 565 - 568.
36. Дедов И.И. Влияние антиоксидантов на состояние перекисного окисления липидов и функцию Р клеток у больных с впервые выявленным сахарным диабетом / И.И. Дедов, В.А. Горелышева, О.М. Смирнова и др. // Пробл. энд. -1995. - Т.41, № 5. - С. 16-20.
37. Дедов И.И. Поздние осложнения сахарного диабета // М. Медицина. 200296.
38. Дедов И.И., Мельниченко Г.А., Фадеев В.В. Эндокринология. М.: Медицина, 2000. - 632 с.
39. Дедов И.И., Чазова Т.Е., Сунцов Ю.И.Эпидемиология сахарного диабета (пособие для врачей) М.,20003,сЗ8-43.
40. Добровольский А.Б., Титаева Е.В. Система фибринолиза: регуляция активности и физиологические функции ее основных компонентов.// Биохимия,2002, вып.1,с 116-126.
41. Доценко В.JI., Яровая Г.А. Эластаза лейкоцитов в плазме крови и ее роль в нарушении регуляции процессов свертывания крови. // Вопросы медицинской химии.2002 №2 стр.44.
42. Ена Е.М. Внутрисосудистое свертывание крови при сахарном диабете / Я.М. Ена, Е.А. Сушко, Т.Г. Волковская и др. // Пробл. энд. 2002. - Т.37, №5.-С. 64-70.
43. Ефимов А.С. Диабетические ангиопатии. 2-е изд. - М.: Медицина, 1989.288 с.
44. Задкова Г.Ф., Авакян Т.Ю., Марков Х.М. Влияние а-токоферола на развитие диабетической ангиопатии, агрегацию тромбоцитов и состояние системы простациклин тромбоксан у крыс со стрептозотоциновым диабетом // Пробл. энд. - 2002. - Т.39, № 5. - С. 40 - 43.
45. Калинин А.П. Диабетическая стопа / А.П. Калинин, Д.С. Рафибеков,М.И. Ахунбаев и др. // Бишкек, 2000. 284 с.
46. Клиническая эндокринология: Руководство для врачей / Под ред. Н.Т. Старковой. М: Медицина, 1991. - 512 с.
47. Королева Т.В. Клинические аспекты нарушений внутрисосудистой микроциркуляции у больных сахарным диабетом: Автореф. дис. докт. мед. наук.-М., 1999.-50 с.
48. Котов С.В., Калинин А.П., Рудакова И.Г. Диабетическая нейропатия. -М.: Медицина, 2000. 232 с.
49. Кочемасова Т.В. Состояние эндотелия и адгезия лейкоцитов при сахарном диабете // Сах. диаб. 2004. - № 3. - С. 59 - 62.
50. Лакин К.М. Фармакологическое воздействие на баланс тромбоксана и простациклина в организме/ К.М. Лакин В. А. Макаров Н.В., Н.В. Новиков и др//Фармакология и токсикология .-1984. Т.47,№2 С67-80.
51. Мазуров А.В., Васильев С.А. Структура и функции мембранных гликопротеидов тромбоцитов // Гематол. и трансфузиолог. 1999. - Т.39, №1.-С. 29-34.
52. Марков Д.С. Связь перекисного окисления липидов и системы гемостаза при сахарном диабете // Тез. докл. III Всерос. Съезда эндокринологов: Актуальные проблемы эндокринологии. М., 2000.-С.71.
53. Меньшикова Е.Б., Зенков Н.К. Антиоксиданты и ингибиторы радикальных окислительных процессов // Усп. совр. биол. Т. 113, Вып. 4. -С. 442 -455. Меньшикова Е.Б., Зенков Н.К., Реутов В.П. Биохимия // М., 2000. т. 65. вып. 4.-С.485.
54. Михайлова Е.В., Панкова С.С., Князева А.П. Применение антиоксидантов у больных сахарным диабетом II типа // Тез. докл. III Всерос. съезда эндокринологов: Актуальные проблемы эндокринологии. -М.1996 с 76-130.
55. Муляр А.Г. Лекарственная регуляция агрегации тромбоцитов // диссертация на соискание степени доктора медицинских наук, Москва, 1995,-с.220
56. Нелаева А.А. О состоянии мембран тромбоцитов у больных инсулинезависимым сахарным диабетом при диабетическом кетоацидозе/ А.А. Нелаева, И.А. Трошина, И.В. Медведева, Т.Д. Журавлева//Пробл. Энд. 1998. - Т.44, № 4. - С. 18-22.
57. Нелаева А.А. Перекисное окисление липидов и гемостаз у больных инсулинезависимым сахарным диабетом / А.А. Нелаева, А.Ш. Бышевский, И.А. Трошина, Т.Д. Журавлева // Пробл. энд. 2003. - Т.44, № 5.- С. 10
58. Нелаева А.А., Трошина И.А. Состояние перекисного окисления липидов в мембранах тромбоцитов у больных ИНЗСД и коррекция витаминами-антиоксидантами.// «Сахарный диабет» 3(4)2003.
59. Никифоров О.Н. Перекисное окисление липидов и состояние системы антиоксидантой защиты у больных инсулиннезависимым сахарным диабетом // Пробл. энд. 1997. - Т.43, № 5. - С. 16 - 19.
60. Офозу Ф.А. Тромбоциты как модель регуляции свертывания крови на клеточных мембранах и ее значение./ТБиохимия,2002,том 67,вып.1, с56-65.
61. Панченко Е.П. Ингибиторы ИВ / IIIA рецепторов новое направление в антитромботической терапии // Тер. арх. - 1997. - Т.69, № 9. - С. 66 -70.
62. Петрищев Н.Н, «Гемостаз», учебн. пособ., Санкт-петербург, 1999, с 20-22.
63. Ральченко И.В.Автореферат, дисс. докт. биолог, наук/ Роль тромбоцитов, лейкоцитов и эритроцитов в реализации связи между гемостазом и ПОЛ. // Уфа,2003, с.42-44.
64. Ройтман Е.В. Изменение реологических свойств крови и осмотической резистентности эритроцитов при активации свободнорадикальных процессов / Е.В. Ройтман, И.И. Дементьева, О.А. Азизова и др. // Гемостаз и реология. 2000.-№1 (1)--С. 15-17.
65. Салазникова О.А. Автореферат диссертации на соискание степени к.м.н. Влияние гипогликемических средств на гемостаз и реологию крови // Волгоград, 2001.
66. Сергеев П.В., Шимановский H.JL, Петров В.И. Рецепторы // М-В.,1999.с 637
67. Смирнова Н.Б. Состояние общего гемостаза при различных стадиях диабетической ретинопатии / Н.Б. Смирнова, Л.Д. Чиркова, И.М. Беловалова,
68. П.К. Дудникова // Матер. IV Всерос. конгр. эндокринологов: Актуальные проблемы современной эндокринологии. С - Пб., 2001. - С.
69. Смирнов А.А./Результаты применения предуктала (триметазидина) у пожилых пациентов с рефрактерной стенокардией, страдающих СД типа2 // Сахарный диабет.2001,с 55-57.
70. Смирнова О.М., Горелышева В.А. Показатели перекисного окисления липидов и активность антиоксидантных ферментов в лимфоцитах периферической крови в дебюте ИЗСД // Сах. диабет. 1999. - №2. - С. 7 -10.
71. Соколов Е.И. Современные возможности в коррекции антиромбогенной активности стенки сосудов / Е.И. Соколов, С.А. Попков, М.В. Балуда и др. // Тез. докл. I Росс, диабетолог. конгресса. М, 1998. -С. 293.
72. Соколов Е.И., Старкова Н.Т., Щукина Г.Н. и др. Метаболический синдром «Х»-как основа ИБС// Кардиология.-1997.-№3 .-С. 4-8.
73. Титов В.Н.Атеросклероз как патология полиеновых жирных кислот .М.,2002,стр391-393.
74. Тумкина М.Е.//Комбинированное действие пептида форсмил-метил-лейцил- фенилаланина и форболового эфира на дыхательный взрыв моноцитов человека /Вестник Российского гос. мед. Университета 2003 №2(28) стр. 213
75. Халиулин .Спектр фармакологической активности новых производных тиазолобензимидазола/А.Н. Халиулин и др.//Вопросы теоретической и практической медицины:Материалы 68 итоговой научно-практич конф. молодых ученых Башкирии -Уфа. -2003, сЗ 1.
76. Шитикова А.С. Тромбоцитарное звено гемостаза.// учебное пособие, Санкт-петербург, 1999, с 3-10.
77. Яровая Г.А., Блохина Т.Б. Контактная система. Новые представления о механизмах активации и биорегулирующих функциях.//Биохимия .2002, том 67,вып. 1,с 16-29.
78. Andrade-Gordon P., Maryanoff В. Е., Derian С. К., et al // Jbesign, synthesis, and biological characterization of a peptide-mimetic antagonist for a tethered-ligand receptor/Proc. Natl. Acad. Sci. 1999. 96: 12257-12262.
79. Arjanand H., Roukoz В., Surabhi S., //Platelets and antiplatelet therapy in patients with diabetes mellitus /J Invasive Cardiol.,2003 , 15:264-268.
80. Arjomand H, Roukoz B, Surabhi SK, Cohen M., // Platelets and antiplatelet therapy in patients with diabetes mellitus /.J Invasive Cardiol. 2003 15(5):264-9
81. Armstrong, P. W.// Unsticking platelets: the role of glycoprotein Ilb/IIIa receptor blockade/Can. Med. Assoc. 1999. 161: 1423-1424.
82. Baba H., Kohno Т., Moore K. A., et al. // Direct activation of rat spinal dorsal horn neurons by prostaglandin E2 / J. Neurosci. 2001. 21: 1750-1756.
83. Barry 0. P., Kazanietz M. G., Pratico D., et al.// Arachidonic acid in platelet microparticles up-regulates cyclooxygenase-2-dependent prostaglandin formation via a protein kinase С / J. Biol. Chem. 1999. 274: 7545-7556.
84. Bouche C, Goldfine AB .//.Prevention of type 2 diabetes: are we ready. Minerva Med. 2003;94(1):9-18.
85. Boyer J., Adams M, Ravi R., et al.//2-Chloro N6-inethyl-(N)-methanocarba-2-deoxyadenosine-3',5'-bisphosphate is a selective high affinity P2Y1 receptor antagonist/Br. J. Pharmacol. 2002. 135: 2004-2010.
86. Breyer M. D., Breyer R. M. // G-protein-coupled prostanoid receptors and the kidney / Annu. Rev. Physiol. 2001. 63: 579-605.
87. Brock Т., Nish R., Peters-Golden M. // Arachidonic acid is preferentially metabolized by cyclooxygenase-2 to prostacyclin and prostaglandin E2 /J. Biol.Chem. 1999.274:11660-11666.
88. Bylund J., Hidestrand M., Ingelman-Sundberg M., et al.// Identification of CYP4F8 in human seminal vesicles as a prominent 19-hydroxylase of prostaglandin endoperoxides / J. Biol. Chem. 2000. 275: 21844-21849.
89. Calverley D.C., Hacker M.L.,et al. //Increased platelet Fc receptor expression as a potential contributing Cause of platelet hypersensitivity to collagen in diabetes mellitus / J Haematol. 2003, 121 : 139 -42.
90. Cannon C.P. // Small molecule, glycoprotein Ilb/IIIa receptor inhibitors as up steam therapy in acute coronary syndromes :insights from the Tactics Timi-18 trial // J Am Coll Cardiolog .,2004,41 :43-48.
91. Carr M.E. //Development of platelet contractile force as, a research and clinical measure of platelet function / Cell. Biochem. Biophys. ,2003,38:55-78.
92. Cases A., // Macro-and microvascular disease in type -2 diabetes mellitus / Nefrologia, 2002,22:406-5.
93. Caughey G. E., Cleland L. G., Gamble J. R., et al. // Up-regulation of endothelial cyclooxygenase-2 and prostanoid synthesis by platelets. Role of thromboxane A2 / J. Biol. Chem. 2001. 276: 37839-37845
94. Climetson K.I.//Platelet receptors, and their Role in diseases //Clin. Chem. Lab Med .2003, 41,:253-284.
95. Cocks T.M., Fong В., Chow J.M., et al // Aprotective role for protease-activated receptors in the airways / Nature. 1999. 398, 156- 160.
96. Colwell JA, Nesto RW //The Platelet in Diabetes: Focus on prevention of ischemic events./Diabetes Care. 2003 26(7):2181-8.
97. Cosentino F., Eto M., et al., // Hing glucose causes upregulation of cyclooxygenase-2 and alters prostanoid proflce in hamen endothelial cells :role of protein kinase С and reactive oxygen species. / Circulation . 2003, 107:1017-23.
98. Coughlin, S. R.// How the protease thrombin talks to cells / Proc. Natl. Acad. i. 1999. 96: 11023-11027.
99. Coughlin, S.R. // Thrombin signaling and protease-activated receptors/ Nature. 2000.407:258-264.
100. Cross P., Dicrinson R., Parry M., Randall M. //Selektive Thromboxane Synhetaseinghibitors.l.l-(aetoxy)alkyl.-lH-imidazoles./Y.Med.Chem., 1985,vol.28, №10, p. 1427-1432.
101. Daniel J., Dangelmaier C., Jin J., et al.// Role of intracellular signaling events in ADP-induced platelet aggregation/ Thromb. Haemost. 1999.82:1322-1326.
102. Degraeve F., BollaM., Blaie S., et al //Modulation of COX-2 expression by statins in human aortic smooth muscle cells. /J Biol. Chem. 2001. 276: 46849-46855
103. Delamaire M.//Impaired leucocyte functions in diabetic patients. Diabet Med.2001 14,29-34.
104. Dranoff J. A., Masyuk A. I., Kruglov E. A., et al.// Polarized expression and function of P2Y ATP receptors in rat bile ductepithelia / Am. J.Physiol. 2001.281:1059-1067.
105. Egan K., Austin S., Smyth E., et al.// Accelerated atherogenesis in prostacyclin receptor deficient mice / Circulation. 2000. 102:176.
106. Englist N,.Taube J ., et ai. //A novel role for CD36- in VLDL- enhanced platelet activation / J Diabetes, 2003 52 :1248-1258.
107. Faruqi T.R., Weiss E.J., Shapiro M.J., et al.// Stmcture-function analysis of protease-activated receptor 4 tethered ligand peptides. Determinants of specificity and utility in assays of receptor function / J. Biol. Chem. 2000. 275:19728-19734.
108. Ferrannini E. Insulin resistance is central to the burden of diabetes //Diabetes /Metabolism Rew.-1997.-V. 13, N 2.-P. 81-86.
109. Ferrannini E., Bjorntorp P., Deslypere J.P. Obesity: Type 2 Diabetes.-London: Colwood House medic. Publications, 1996.-12 p.
110. Foster C, Prosser D., Agans M., et al.// Molecular identification and characterization of the platelet ADP receptor targeted by thienopyridme antithrombotic dnigs / J. Clin. Invest. 2001. 107: 1591-1598.
111. Gent M., Easton Y. D., Hachinski V.C. et al.// The Canalian American Ticlopidine Studi (CATS) in Tromboembolic Stroke// Lancet.-1989-Vol.1. -N8649.-P. 1215-1220.
112. Greco N., Tonon G., Chen W., et al.//. Novel structurally altered P2X1 receptor is preferentially activated by adenosinediphosphate in platelets and megakaryocyte cells/Blood. 2001. 98: 100-107.
113. Gresele P, et al., //Acute, short-term hyperglycemia enhances chear stress-induced platelet activation in patients with type 2 diabetes mellitus /J Am Coll Cardiolog., 2003 41,: 1013-20.
114. Grobben В., Claes P., Kolen K., et al.// Agonists of the P2YAC-receptor activate MAP kinase by a ras-independent pathway in rat C6 glioma / J. Neurochem. 2001.78: 1325-1338.
115. Grosser Т., Yusuff S., Cheskis E., et al. // Developmental expression of functional cyclooxygenases in zebrafish / Proc. Natl. Acad,. 2002.99: 8418-8423.
116. Hechler В., Toselli P., Ravanat C., et al.// Mp-1 ligand increases P2Y1 receptor gene expression in megakaryocytes with no concomitant change in platelet response to ADP / Mol. Pharmacol. 2001. 60: 1112-1120.
117. Hocking D. C., Kowalskl К.// A cryptic fragment from fibronectins III1 module localizes to lipid rafts and stimulates cell growth and contractility /J. Cell Biol. 2002. 158: 175-184.
118. Hollopeter G. et al.// Identification of the platelet ADP receptor targeted by antithromboticdrugs / Nature. 2001.409:202-207.
119. Ни H, Li N, Yngen M. //Enhanced leukocyte-platelet cross-talk in Type 1 diabetes mellitus: relationschip to mikroangiopathy / Trombosis and Haemostasis, 2004, №2, (58-64).
120. Janssen L.J.// Isoprostanes: an overview and putative roles in pulmonary pathophysiology / Am. J. Physiol. 2001. 280: 1067-1082.
121. Jantzen H.-M. et al.// Evidence for two distinct G-protern-coupled ADP receptors mediatingplatelet activation / Tliromb. Haemost. 1999. 81:111-117.
122. John F.,Keaney N., et all.// Diabetes ,Oxidative Stress, and platelet activation arteioschwer tromb /.Vase. Biolog .2003 (189-191).
123. Jung S. M., Moroi M. /Platelet collagen receptor integrin a2pl activation involves differential participation of ADP-receptor subtypes P2Yi andP2Yi2 but not intracellular calcium change // Eur. J. Biochem. 2001.268:3513-3522.
124. Kahn M.L., Nakanishi-Matsui M., Shapiro M.J., et al.// Protease- activated receptors 1 and 4 mediate activation of human platelets by thrombin / J.Clin. Invest. 1999. 103,879-887.
125. Knobler H, Savion N. // Shearindyced platelet adhesion and aggregation on subendothelium are increased in diabetic patients / Tromb. Res. 2002, 36:181190.
126. Leon C., Hechler В., Freund M., et al.// Defective platelet aggregation and increased resistance to thrombosis in purinergic P2Yi receptor-null mice / J Circulation. 2001. 103:718-723
127. Li D, Mehta J.L.:// 3-hydroxy-3-methylglutaryl coenzyme A reductase inhibitors protect against oxidized low-density lipoprotein-induced endothelial dysfunction./J. Endothelium. 2003; 10(1): 17
128. Lincoff A.M. //Important triad in Cardiovascular medicine diabetes , coronari intervention, and platelet glycoprotein Ilb/IIIa receptor blocade. / Circulation, 2003 ,107: 1556-9.
129. Lindemann S., Tolley N. D., Dixon D. A., et al.// Activated platelets mediate inflammatory signaling by regulated interleukin 1 synthesis / J. Cell Biol. 2001. 154:485-490.
130. Ma H., Hara A., Xiao C. Y., et al.// Increased bleeding tendency and decreased susceptibility to thromboembolism in mice lacking the prostaglandin E receptor subtype EP3 / Circulation. 2001. 104: 1176- 1180.
131. Mahaut-Smith M. P., Ennion S. J., Rolf M. G., et al.// ADP is not an agonist at P2Xi receptors: evidence for separate receptors stimulated by ATP and ADP on human platelets / J. Pharmacol. 2000. 131: 108-114.
132. Majors A. K., Sengupta S., Willard B. //.Homocysteine binds to human plasma fibronectin and inhibits its interaction with fibrin / Arterioscler. Thromb. 2002.22: 1354-1359.
133. Markovitz J. H., Tolbert L., Winders S. E.// Increased serotonin receptor density and platelet GPIIb/IIIa activation among smokers /Arterioscler. Thomb. 1999. 19: 762-766.
134. Marso St., Lihcoff M., et al., //Results of the Epistent (Evalution of Platelet Ilb/IIIa Inhibitor for Stenting Trial) diabetic substudy / Horm. Metab. Res .2003 .29: 2477-2483.
135. Matsumoto H., Ma W.-g., Smalley W., et al.// Diversification of cyclooxygenase-2-derived prostaglandins in ovulationand implantation / Biol Reprod. 2001.64: 1557-1565.150. Mazur E.M. Platelet. 1994
136. Meter —Ewert N.K., Nesto R.W. //Targeting the use of glycoprotein lib / Illb antagonists- the diabetic patient ./Rev Cardiovasc Med .2003 ,1 :20-27.
137. Methia N., Andre P., Dems С. V.// Localized reduction of atherosclerosis in von Willebrand factor-deficient mice / Blood. 2001. 98: 1424- 1428.
138. Moreland R. В., Albadawi H., Bratton C.J I. 02-dependent prostanoid synthesis activates functional PGE receptors on corpus cavernosum smooth muscle / Am. J. Physiol. 2001. 281: 552-558.
139. Mullally J. E„ Moos P. J., Edes K.// Cyclopentenone prostaglandins of the series inhibit the ubiquitin isopeptidase activity of the proteasome pathway / J. Biol. Chem. 2001. 276: 30366-30373.
140. Murakami N., Okazaki M., //Increase in hepatic mR NA expression of coagulant factors in type 2 diabetic model mice / Trombosis. Res., 2003, 111:81-87.
141. Nammiya S., Fitzgerald G. A. // Genetic and pharmacological analysis of prostanoid receptor function / J. Clin. Invest. 2001. 108: 25-30.
142. Norel X., Walch L., Labat C. et al. // Prostanoid receptors involved in the relaxation of human bronchial preparations / Br. J. Pharmacol. 1999. 126: 867-872.
143. Offermanns S. // The role of heterotrimeric G proteins in platelet activation //Biol. Chem. 2000. 381:389-396.
144. Ohlmann P., Eckly A., Freund M., et al.// ADP induces partial platelet aggregation without shape change and potentiates collagen-induced aggregation in the absence of Gaq / Blood. 2000. 96: 2134-2139.
145. Orumura M., Imarischi M., et al. //Role for thromboxane A2 from glomerular trombin nephropathy with type 2 diabetic Rats / Life Sci., 2003, 24 :2695-6.
146. Pareti F. L, Lattuada A., Bressi C., et al. // Proteolysis of von Willebrand factor and shear stress-induced platelet aggregation in patients with aortic valve stenosis / Circulation. 2000. 102: 1290-1295.
147. Pathasali R., Smith N., // Aetered megakariocyte-platelet haemostatic axis in hipercholesterolaemia. / Platelets. 2001, 12 : 292-7.
148. Pickering J. G., Chow L. H., Li S., et al.// a5 pi integrin expression and luminal edge fibronectin matrix assembly by smooth muscle cells after arterial injury / Am. J. Pathol. 2000.156: 453-465.
149. Pigazzi A., Heydrick S., Folli F., et al.// Nitric oxide inhibits thrombin receptor-activating peptide-induced phosphoinositide 3-kinase activity in human platelets / J. Biol. Chem. 1999. 274: 14368-14375.
150. Poligone В., Baldwin A. S. // Positive and negative regulation of nf-kappa В by COX-2. Roles of different prostaglandins // J. Biol. Chem. 2001. 276: 3865838664.
151. Quinton Т. M., Ozdener F., Dangelmaier C., et al .// Glycoprotein VI-mediated platelet fibrinogen receptor activation occurs through calcium-sensitive and PKC-sensitive pathways without a requirement for secreted ADP / Blood.2003. 99: 3228-3234.
152. Rabini R.A. Vignini A., et al., //Evidence for reduction of pro -atherosclerotic properties in platelets from healthy centenaricens / Exp. Gerontol.,2003, 4:367-71.
153. Rady J. J., Campbell W. B.// Antianalgesic action of nociceptin originating in the brain is mediated by spinal prostaglandin E2 in mice / J. Pharmacol. Exp. Ther. 2001.296: 7-14.
154. Reaven G.M. Banting lecture 1988. Role of insulin resistance in human disease//Diabetes.-2003.- V.37,N 12.-P. 1595-1607.
155. Reaven G.M. Regulation of skeletal muscle morphology in type 2 diabetic subjects by troglitazone and metformin: relationship to glucose disposal. Metabolism. 2003;52(5):540-6
156. Reilly J., Miralles M., Wester W., et al.// Differential expression of prostaglandin E2 and interleukin-6 in occlusive and aneurysmal aortic disease / Surgery. 2002. 126:624-628.
157. Remijn J. A., Wu Y.-P., Jeninga E. H., et al.//Role of ADP receptor P2Y12 in platelet adhesion and thrombus formationin flowing blood / Artenoscler. Thromb.2004. 22: 686-691.
158. Robinson N, Barakat K, Dymond D // Platelet Ilb/IIIa antagonists followed by delayed stent implantation. A new treatment for vein graft lesions containing massive thrombus / Heart. 1999. 81: 434-437
159. Rocca В., Secchiero P., Ciabattoni G., et al.// Cyclooxygenase-2 expression is induced during human megakaryopoiesis and characterizes newly formed platelets / Proc. Natl. 2002. 99: 7634-7639.
160. Schmitz Т., Dallot E., Leroy M.J., et al. // .EP4 receptors mediate prostaglandin E2-stimulated glycosaminoglycan synthesis in human cervical fibroblasts in culture / Mol. Hum. Reprod. 2001.7: 397-402.
161. Serhan C. N., Prescott S. M. // The scent of a phagocyte: advances on leukotriene B4 receptors // J. Exp. Med. 2000. 192: 5-8.
162. Shinmura K., Tang X.-L., Wang Y., et al.// Cyclooxygenase-2 mediates the cardioprotective effects of the late phase of ischemic preconditioning in conscious rabbits / Proc. Natl. Acad. Sci. 2003. 97: 10197-21
163. Simon J., Filippov A. K., Goransson S., //Characterization and channel coupling of the P2Yi nucleotide receptor of brain capillary endothelial cells / 2002. J. Biol. Chem. 277: 31390-31400.
164. Simon J., Filippov A. K., Goransson S., et al.// Characterization and channel coupling of the P2 Yi nucleotide receptor of brain capillary endothelial cells /2002. J. Biol. Chem. 277: 31390-31400.
165. Southall M. D., Vasko M. R. // Prostaglandm receptor subtypes, EP3C and EP4, mediate the prostaglandm E2-mduced cAMP production and sensitization of sensory neurons //J. Biol. Chem. 2001. 276: 16083- 16091.
166. Sowers JR, Sowers PS, Peuler JD: //Role of insulin resistance and hiperinsulinemia in development of hypertension and atherosclerosis. /J Lab Klin Med 1994 ,123:647-652.
167. Sowers JR:// Modest weight gain and the development of diabetes: another perspective./Ann Intern Med 122;548-549, 1995.
168. Spencer B.,Ehtischam M., // Will Blocking the platelet save the diabetic? / Curculation. 2003 12 :2467-2472.
169. Stemme V., Swedenborg J., Claesson H., et al.// Expression of cyclo-oxygenase-2 in human atherosclerotic carotid arteries/ J. Vase. Endovasc. Surg. 2000.20:146-152.
170. Stocco C. 0., Zhong L., Sugimoto Y., et al .// Prostaglandin F2a -induced expression of 20a-hydroxysteroid dehydrogenase involves the transcription factor NUR77 / 2000. J. Biol. Chem. 275: 37202-37211.
171. Stock J. L., Shinjo K., Burkhardt J., et al. // The prostaglandin E2 EPi receptor mediates pain perception and regulates blood pressure / J. Clin. Invest. 2001. 107:325-331.
172. Storey R.F. et al.// The central role of the P2i receptor in amplification of human platelet activation, aggregation, secretion and procoagulant activity/ Br. J. Haematol. 2000. 110:925-934.
173. Takano S., Kimura J., Matsuoka I., et al.//No requirement of P2X1 purinoceptors for platelet aggregation / Eur. J. Pharmacol. 2001. 372:305-309.
174. Tam S.H. ,Sassoli P.M., et al., // Abciximab (ReoPro ,chimerik 7E3 Fab ) demonctrates egvivalent affinity and functional blocade of glycoprotein ПЪЛПа and avp 3 integrins. /.Tromb.Res 2003, 98 :1085-1091.
175. Taube JM, Aitman TJ, Baglin TP, Byrne CD.//A Novel Role for CD36 in VLDL-Enhanced Platelet Activation. Englyst Diabetes. 2003 52(5): 1248-55
176. Thomas D., Mason M. J., Mahaut-Smith M. P.// Depolarisation-evoked Ca2+ waves in the non-excitable rat megakaryocyte / J. Physiol.,.2001.537: 371-7
177. Tiklid (tiklopidine), Product Monograph., 1993-55p.
178. Tiklopidine//Lancet-1991-vol.337.-N8739.-p459-460.
179. Toledo DP, Akamine E, Nigro D, Passaglia RC, Carvalho MH, Fortes ZB. // Microvascular reactivity in experimental diabetes: responses of male and female rats /.Inflamm Res. 2003 52(5): 191-8.
180. Trovati M //Mechanisms in vol ved in platelet hyperaktivation and platelet- endothelium interrelationships in diabetes mtllitus. /Curr. Diabet Rep. 2000.
181. Trumel C. et al.// Akey role of adenosine diphosphate in the irreversible platelet aggregation induced by the PARi -activating peptide through the late activation of phosphoinositide 3-kinase / Blood. 1999. 94:4156-4165.
182. Tschoepe D., Menart В., et al. //Genetic variation of the platelet- surface integrin GPIIb-IIIa (PIAI/A2-SNP)shows a hingh association with Type -2 diabetes mellitus./ Diabetologia 2003 4:1245-1249
183. Tsilibary E.C.,// Microvascular basement membranes in diabetes mellitus. / J Pathol 2003;200(4):537-46
184. Turgeon V.L., Milligan C.E., Houenou LJ. // Activation of the protease-activated thrombin receptor PARI induces motoneuron degeneration in the developing avian embryo /J. Neuropathol. Exp. Neurol. 1999. 58: 499 504.
185. Turner N. A., Moake J.L. // Blockade of adenosinediphosphate receptors P2Y12 and P2Yi is required to inhibit platelet aggregation in whole blood under flow. / Blood. 2001. 98: 3340-3345.
186. UK Prospective Diabetes Study Group: Tight blood pressure control and risk of macrovascular and microvascular complications in tipe 2 diabe-tes:UKPDS38.BMJ317:703-713,1998.
187. Unmack M., Rangachari P., Skadhauge E. // Effects of isoprostanes and prostanoids on porcine small intestine // J. Pharmacol. Exp. Ther. 2001.296:434.
188. Urieli-Shoval S., Shubinsky G., Lmke R. P., et al // Adhesion of human platelets to serum amyloid A /.Blood. 2002. 99: 1224-1229.
189. Vicari A., Taglietty N., et al. //Deranged platelet calcium homeostasis in diabetic patients with end-stage renal failure. A possible link to increased cardiovascular mortality? / Diabetes . 1996 19 :1062-6.
190. Walraven С, Hart R, Wells G, Petersen P, Koudstaal P., Gullov A.:// .A clinical prediction rule to identify patients with atrial fibrillation and alow risk for stroke while taking aspirin, van,. Arch Intern Med. 2003;163(8):936-43
191. Weber A., Hohlfeld T , Schror К. // C-AMP is an important messenger for ADP-induced platelet aggregation / Platelets. 1999. 10:238-241.
192. Winocour PH, Fisher M. // Prediction of cardiovascular risk in people with diabetes //Diabet Med. 2003 ;20(7):515-27
193. Wong D., Kita Y., Uozumi N., et al.// Discrete role for cytosolic phospholipase A2a in platelets: studies usingsingle and double mutant mice of cytosolic and group 1IA secretory phospholipase A? /Exp. Med. 2002. 196:349-357.
194. Woulfe D., Yang J., Brass L. / ADP and platelets: the end of the beginning //J. Clin. Invest. 2001. 107: 1503-1505.
195. Wright D., Abran D., Bhattacharya M., et al.// Prostanoid receptors: ontogeny and implications in vascular physiology / Am. J. Physiol. 2001.281:.
196. Yamashiro K, Tsujikawa A, Ishida S, Usui T, Kaji Y, Honda Y, Ogura Y, Adamis AP.// Platelets accumulate in the diabetic retinal vasculature following endothelial death and suppress blood-retinal barrier breakdown / J Pathol. 2004;163(l):253-9
197. Yang J. et al.// Loss of signaling through the G protein, Gz, results in abnormal platelet activation and altered responses to psychoactive drags / Proc. Natl. Acad. Sci. 2000. 97:9984-9989.
198. Yokota Т., // Role of proteinkinase С on the expression of platelet-derived gravth factor and endotelin -1 in the retina of diabetic rats and cultured retinal capillary peritytes. / Diabetes. ,2004, 52 ;838-45.