Автореферат и диссертация по медицине (14.03.02) на тему:Патоморфологический и молекулярно-биологический анализ немелкоклеточного рака легкого. Диагностика и прогноз

На правах рукописи

Кобяков Дмитрий Сергеевич

ПАТОМОРФОЛОГИЧЕСКИЙ И МОЛЕКУЛЯРНО-БИОЛОГИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ НЕМЕЛКОКЛЕТОЧНОГО РАКА ЛЕГКОГО. ДИАГНОСТИКА И ПРОГНОЗ

14.03.02 - патологическая анатомия

АВТОРЕФЕ PAT диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук

Новосибирск - 2015

Работа выполнена в лаборатории исследований молекулярно-генети-ческих характеристик опухоли Федерального государственного бюджетного научного учреждения «Российский онкологический научный центр имени Н.Н.Блохина» Алтайский филиал (Барнаул).

Научные консультанты: доктор медицинских наук,

профессор Лазарев Александр Федорович

доктор медицинских наук Авдалян Ашот Меружанович

Официальные оппоненты:

Горчаков Владимир Николаевич, доктор медицинских наук, профессор, заведующий лабораторией функциональной морфологии лимфатической системы ФГБНУ «НИИ клинической и экспериментальной лимфологии» (Новосибирск).

Жукова Наталья Анатольевна, доктор медицинских наук, старший научный сотрудник лаборатории фармакологических исследований ФГБУН «Новосибирский институт органической химии имени Н.Н.Ворожцова» СО РАН.

Фурсов Сергей Александрович, доктор медицинских наук, профессор, профессор кафедры онкологии Г БОУ ВПО «Новосибирский государственный медицинский университет» МЗ РФ.

Ведущая организация:

ФГБНУ «НИИ молекулярной биологии и биофизики», лаборатория молекулярных механизмов канцерогенеза (Новосибирск).

Защита состоится: «_» _ 2015 г. в _ час.

на заседании совета Д 001.037.01 в ФГБНУ «Институт молекулярной патологии и патоморфологии» по адресу 630117, Новосибирск, ул. Ти-макова, 2.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке и на сайте ФГБНУ «Институт молекулярной патологии и патоморфологии» http:// pathomorphology.soramn.ru

Автореферат разослан «_»_2015 г.

Ученый секретарь Диссертационного совета доктор биологических наук, профессор

Молодых Ольга Павловна

россииск/

ГОСУДЛРСИИ-БИ15ЛИОТР1

201'.)_

БЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Рак легкого - серьезная медицинская и социальная проблема, в развитых странах он является наиболее часто встречающейся злокачественной опухолью и наиболее распространенной причиной смерти от онкологической патологии. По данным мировой статистики, ежегодно выявляются более 1 млн. 600 тыс. больных этой нозологией и около I млн.400тыс. человек умирают [Jemal А. et а)., 2011 ]. Пятилетняя выживаемость составляет 16%, и варьируется от 73% при 1А стадии до 2% при 4 стадии [Goldstraw Р. et al., 2007]. В России и странах СНГ рак легкого так же занимает 1 место среди онкологических заболеваний, показывая тенденции аналогичные мировой статистике [Давыдов М.И., Аксель Е.М., 2012; Каприн А.Д. и др., 2012; Siegel R. et al., 2012; Woolhouse l., 2011].

Не менее 80% рака легкого приходится на немелкоклеточный рак (HMKPJI). Несмотря на определенные успехи в диагностике и лечении результаты, в целом, остаются малоутешительными. Общепризнанно, что основными факторами прогноза, влияющими на продолжительность жизни оперированных больных HMKPJI, являются клинико-морфологические параметры опухоли. Международная классификация по системе TNM не лишена недостатков в плане прогнозирования течения заболевания, так как в один и тот же показатель включаются больные HMKPJI, неоднородные по другим факторам, имеющим прогностическое значение. Поэтому в практической онкологии после хирургического лечения больных НМКРЛ, однородных по системе TNM, наблюдается выздоровление у одних, а у других наступает прогрессирование и рецидивирование. В связи с этим актуальным является исследование фундаментальных молекулярно-био-логических параметров, определяющих как прогноз, так и показания для последующей полихимиотерапии и направленной таргстной терапии НМКРЛ [Новик A.A. и др., 2004; Захарычев В.Д., 2010].

На сегодняшний день существуют определенные трудности в достоверной оценке пролиферативного потенциала, так как пролиферация включает в себя не только количество пролиферирующих клеток (про-лиферативная активность, фракция роста), но и скорость прохождения (продолжительность) клеточного цикла. Для оценки пролиферативной активности общепризнанным и доступным является иммуногистохими-ческое определение уровня антигена Ki-67. Антиген Ki-67 выявляется в клетках в позднюю G1, S, G2, М фазы, однако, функциональное значение этого ядерного белка в процессе пролиферации не совсем ясно.

Фермент топоизомераза IIa (TopoIIa) - белок с ферментативной активностью, участвующий в топологической сборке ДНК во время транскрипции, конденсации и сегрегации хромосом. Выявляется в клетках в S, G2, М фазы клеточного цикла, в связи с чем является также маркером пролиферативной активности. Кроме того, в схемы химиотерапии НМКРЛ

включены препараты антрациклинового ряда, ингибирующис фермент топоизомеразу На, степенью активности которого и обусловлена чувствительность опухоли к данным препаратам.

Ag-ЯОР-белки являются маркером скорости клеточного цикла. До 75% окрашивания Ag-ЯОР-белков составляют два главных аргирофильных белка С23 (нуклеолин) и В23 (нуклеофозмин), играющих важнейшую роль в синтезе рибосомальной РНК [Hernandez-Verdun D. et al., 2010]. Количественное содержание Ag-ЯОР-белков имеет обратную зависимость с длительностью клеточного цикла и временем удвоения опухоли [Canet V. et al., 2001; Trere D. et al., 1997; Trere D„ 1998].

Основополагающими догмами биологии опухоли являются изменения как процесса пролиферации, так и процесса программируемой гибели клетки - апоптоза. Р53 является транскрипционным фактором, регулирующим функцию большинства генов; bcl-2 является антиапоптотическим, а Ьах - проапоптотическим белком митохондриального пути апоптоза.

Ангиогенез имеет фундаментальное значение для роста и распространения новообразований различных локализаций. В настоящее время, в эпоху развития таргетной терапии, одной из мишеней для такого типа лечения являются сосуды опухоли - кровеносные и лимфатические [Имянитов Е.Н., 2014]. Иммуногистохимическая визуализация антигенов CD 34 и подопланина позволяет на микроскопическом светооптическом уровне оценивать разные стороны ангиогенеза в HMKPJI - гемангиогенеза и лимфангиогенеза.

Онкогены семейства Her(erbB) часто гиперэкспрессируются при раке легкого [Pelosi G. et al., 2005]. Онкоген Нег2 находится на длинном плече хромосомы 17 (q 12-q21), продуктом этого онкогена является мембранный белок Нег2. В раковых клетках гиперэкспрессия этого онкогена часто происходит за счет амплификации. Повышение содержания белка Нег2 и амплификация гена Нег2 частое событие в инвазивном раке молочной железы, связанное с плохим прогнозом, резистентностью к гормонотерапии и ответом опухоли на терапию Нег2 монокпональными антителами трастузумаб (герцептин). Повышение содержания белка Нег2 и амплификация гена Нег2 найдены также и при злокачественных опухолях желудка, толстой кишки, а также легких [Завалишина Л.Э. и др., 2012; Reinmuth N. et al., 2000], что открывает возможность таргетной терапии опухолей этих локализаций.

Таким образом, на сегодняшний день актуальным является исследование молекулярно-биологических маркеров (Ag-ЯОР-белков, маркеров про-лиферативной активности, апоптоза, ПМЦР-Г и ПМЦР-Л, статуса белка и гена Нег2) во взаимосвязи с клинико-морфологическими параметрами, выживаемостью больных и прогнозом при HMKPJI.

Цель исследования: изучить патоморфологические и молекулярно-биологические параметры немелкоклеточного рака легкого во взаимосвязи с их прогностической значимостью.

Задачи исследования:

1. Определить дифференциально-диагностическую значимость мо-лекулярно-биологических параметров немелкоклеточного рака легкого в сопоставлении с неизмененным легким.

2. Изучить молекулярно-биологические характеристики во взаимосвязи с клинико-морфологическими параметрами немелкоклеточного рака легкого: возрастом, полом, стадией заболевания, показателями Т и N, наибольшим размером опухоли, гистогенезом, дифферснцировкой.

3. Определить взаимосвязи между молекулярно-биологическими параметрами немелкоклеточного рака легкого.

4. Изучить общую 5-летнюю выживаемость больных немелкокле-точным раком легкого в зависимости от клинико-морфологических и молекулярно-биологических параметров, а также коэкспрессии молеку-лярно-биологических маркеров.

5. Выявить независимые факторы 5-летней выживаемости больных немелкоклеточным раком легкого.

6. Разработать комбинированную морфобиомолекулярную модель прогноза для больных немелкоклеточным раком легкого на основании многофакторного анализа клинико-морфологических и молекулярно-биологических факторов.

Научная новизна. Впервые при НМКРЛ и его гистогенетических вариантах (Ак и Пк) на большом клиническом материале (243 больных), с использованием метода тканевых матриц комплексно изучены молекулярно-биологические маркеры: Ag-ЯОР-белки, экспрессия маркеров пролиферативной активности (Ki-67 и топоизомсразы На), Ag-ЯОР-белки в MIB-1 позитивных клетках, показатель пролиферации, экспрессия маркеров апоптоза (р53, bcl-2 и Ьах), ПМЦР-Г и ПМЦР-Л, экспрессия белка Нег2 и статус гена Нег2 и СЕР17. На операционном материале НМКРЛ применены SISH метод (для выявления амплификация гена Нег2 и состояния СЕР17), а также метод двойного окрашивания на антиген Ki-67 и Ag-ЯОР-белки (для изучения Ag-ЯОР-белков в пролиферирующих клетках) с последующим компьютерным анализом изображений.

Впервые на большом клиническом материале выявлены и систематизированы данные о молекулярно-биологических параметрах при неизмененном легком и НМКРЛ: ИП и КВ Ag-ЯОР-белков, маркерах пролиферативной активности (ИМ Ki-67 и ИМ TopoIIa), Ag-ЯОР-белках в MIB-1 позитивных клетках, показателе пролиферации, маркерах апоптоза (р53, bcl-2 и Ьах), ПМЦР-Г и ГГМЦР-Л, экспрессии белка Нег2 и амплификации гена Нег2. Выявлена дифференциально-диагностическая значимость определения данных молекулярно-биологических маркеров в операционном материале для разграничения НМКРЛ и неизмененного легкого.

Впервые при НМКРЛ и его гистогенетических вариантах (Ак и Пк) проведено комплексное, систематическое исследование взаимосвязи между клиническими критериями, клинико-морфологическими пара-

метрами по системе TNM и молекулярно-биологическими маркерами, а также исследование корреляционных взаимосвязей между молекулярно-биологическими маркерами: ИП и КБ Ag-ЯОР-белков, маркерами пролиферативной активности (ИМ Ki-67 и ИМ TopoIIa), площадью Ag-ЯОР-белков в М1В-1 позитивных клетках, показателем пролиферации, маркерами апоптоза (р53, bcl-2 и Ьах), Г1МЦР-Г и ПМЦР-Jl, экспрессией белка Нег2 и амплификацией гена Нег2.

Впервые на большом материале при НМКРЛ и его гистогенетических вариантах (Ак и Пк) проанализирована 5-летняя выживаемость в зависимости от молекулярно-биологических маркеров: ИГ1 и КВ Ag-ЯОР-белков, ИМ Ki-67 и ИМ TopoIIa, площади Ag-ЯОР-белков в М1В-1 позитивных клетках, показателя пролиферации, экспрессии р53, bcl-2 и Ьах, ПМЦР-Г и ПМЦР-Л, экспрессии белка Нег2 и амплификации гена Нег2. Также показана взаимосвязь 5-летней выживаемости и коэкспрессии вышеперечисленных молекулярно-биологических маркеров.

Проведены детальные одно- и многофакторные анализы прогноза жизни при НМКРЛ и его гистогенетических вариантах (Ак и Пк) с включением следующих групп факторов: клинических (возраст, пол, тип операции, полихимиотерапия, лучевая терапия, полихимио- и лучевая терапия), кли-нико-морфологических (показатель Т, наибольший размер, показатель N, стадия, гистогенез, дифференцировка) и молекулярно-биологических (ИП и КВ Ag-ЯОР-белков, ИМ Ki-67 и ИМ TopoIIa, площади Ag-ЯОР-белков в MIB-1 позитивных клетках, показателя пролиферации, экспрессии р53, bcl-2 и Ьах, ГТМЦР-Г и ПМЦР-Л, экспрессии белка Нег2 и амплификации гена Нег2. На основании многофакторного регрессионного анализа по Коксу разработаны комбинированные, морфобиомолекулярные модели прогноза при НМКРЛ, Ак и Пк.

Теоретическая и практическая значимость. Теоретическая значимость работы заключается в том, что на большом клиническом материале при неизмененном легком и при IIMKPJI, а также при гистогенетических вариантах - Ак и Пк, комплексно изучен целый спектр молекулярно-биологических маркеров: Ag-ЯОР-белки, экспрессия маркеров пролиферативной активности (Ki-67 и топоизомеразы Па), Ag-ЯОР-белки в MIB-1 позитивных клетках, показатель пролиферации, экспрессия маркеров апоптоза (р53, bcl-2 и Ьах), ПМЦР-Г и ПМЦР-Л, экспрессия белка Нег2 и статус гепа Нег2 и СЕР17. Выявлены взаимосвязи между вышеперечисленными молекулярно-биологическими маркерами, с одной стороны, и между молекулярно-биологическими маркерами и клиническими, клини-ко-морфологическими параметрами IIMKPJ1, Ак и Пк.

Практическая значимость работы представлена, во-первых, определением дифференциально-диагностической значимости исследованных молекулярно-биологических маркеров для разграничения НМКРЛ и неизмененного легкого. Во-вторых, скорректирована оценка выживаемости на основании анализа 5-летней общей выживаемости в зависимости от

экспрессии молекулярно-биологических маркеров при НМКРЛ, Ак и Пк. В-третьих, оптимизировано клиническое прогнозирование по разработанным морфобиомолекулярным моделям прогноза на основании многофакторного анализа при НМКРЛ, Ак и Пк. В анализе использована действующая классификация стадий рака легкого по системе TNM 7 пересмотра, что облегчает применение полученных данных на практике.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Дифференциально-диагностическое значение между неизмененным легким и НМКРЛ имеют следующие молекулярно-биологические маркеры: ИП и КВ Ag-ЯОР-белков, ИМ Ki-67, ИМ TopoIIa, площадь Ag-ЯОР-белков в MIB-1 позитивных клетках, показатель пролиферации, экспрессия р53, bcl-2 и Ьах, ПМЦР-Г и ПМЦР-Л, экспрессия белка Нег2 и амплификация гена Нег2.

2. Клинико-морфологические параметры НМКРЛ (пол, стадия заболевания, показатели Т и N, наибольший размер опухоли, гистогенез, дифференцировка) взаимосвязаны с молекулярпо-биологическими характеристиками: ИП и КВ Ag-ЯОР-белков, ИМ Ki-67, ИМ TopoIIa, площадью Ag-ЯОР-белков в MIB-1 позитивных клетках, показателем пролиферации, экспрессией р53, bcl-2 и Ьах, ПМЦР-Г и Г1МЦР-Л, экспрессией белка Нег2 и амплификацией гена Нег2.

3. Разные характеристики пролиферации (ИП и КВ Ag-ЯОР-белков, площадь Ag-ЯОР-белков в MIB-1 позитивных клетках, показатель пролиферации, ИМ Ki-67, ИМ TopoIIa) являются взаимосвязанными, отражая единый процесс повышения пролиферативного уровня НМКРЛ. Имеются особенности изменения процесса пролиферации НМКРЛ во взаимосвязи с экспрессией р53, bcl-2, Ьах, белка Нсг2 и амплификацией гена Нег2.

4. Низкий показатель общей 5-летней выживаемости больных НМКРЛ взаимосвязан с клинико-морфологическими (тип операции пневмонэкто-мия, показатель Т2-3, показатель N1-3, стадия заболевания II-III, наибольший размер опухоли > Зсм, гистогенез Ак, дифференцировка умеренная-низкая) и молекулярно-биологическими параметрами (большими количественными значениями ИП и КВ Ag-ЯОР-белков, площади Ag-ЯОР-белков в MIB-1 позитивных клетках, показателя пролиферации, ИМ Ki-67, ИМ TopoIIa, ПМЦР-Г и ПМЦР-Л, р53 положительной и bcl-2 отрицательной экспрессией, положительной экспрессией белка Нег2, амплификацией гена Нег2 и увеличением СЕР17). Также выживаемость больных НМКРЛ взаимосвязана с коэкспрессией Ag-ЯОР-белков, Ki-67, TopoIIa, Ag-ЯОР-белков в MIB-1 позитивных клетках; и в незначительной стеиени с коэкспрессией маркеров апоптоза (р53, bcl-2 и Ьах), ПМЦР-Г и ПМЦР-Л.

5. Неблагоприятными факторами прогноза являются: при НМКРЛ - большие количественные значения площади Ag-ЯОР-белков в MIB-1 позитивных клетках, ПМЦР-Г, КВ Ag-ЯОР-белков, ИМ Ki-67, а также показатель N1-3, наибольший размер опухоли > 3 см; при Ак - большие количественные значения показателя пролиферации, ПМЦР-Г, ИМ Ki-67,

ИМ Topolla, площади Ag-ЯОР-бслков в М1В-1 позитивных клетках; при Пк - большие количественные значения ПМЦР-Г, ИМ Topolla, площади Ag-ЯОР-белков в MIB-1 позитивных клетках, Г1МЦР-Л, КВ Ag-ЯОР-белков, а также тип операции пневмонэктомия.

6. Комбинированная морфобиомолекулярная модель прогноза основана на клинико-морфологических и молекулярно-биологических параметрах НМКРЛ. Данная модель имеет наибольшую значимость фактора прогноза жизни больных НМКРЛ по сравнению с клинико-морфологическими и молекулярно-биологическими факторами.

Апробация работы. Материалы диссертации доложены на российской научно-практической конференции с международным участием «Современные аспекты диагностики и лечения рака легкого» (Томск, 2013); 9 конференция по фундаментальной онкологии «Петровские чтения», в рамках VIII Всероссийского съезда онкологов (Санкт-Петербург, 2013); Всероссийской конференции с международным участием «Современные подходы в клинико-морфологической диагностике и лечении заболеваний человека» (Санкт-Петербург, 2013); XVIII Российском онкологическом конгрессе (Москва, 2014); Всероссийской конференции, посвященной 155-летию кафедры патологической анатомии Военно-медицинской академии им. С.М. Кирова «Актуальные вопросы патологической анатомии в мирное и военное время» (Санкт-Петербург, 2014); 10 конференции по фундаментальной онкологии «Петровские чтения» (Санкт-Петербург, 2014); VIII Съезде онкологов и радиологов стран СНГ и Евразии (Казань, 2014); Всероссийской конференции с международным участием «Проблемы современной онкологии» (Барнаул, 2009); Всероссийской конференции с международным участием «Новые методы в онкологической практике» (Барнаул, 2013); Всероссийской конференции с международным участием «Таргетная терапия в онкологии» (Барнаул, 2014); Ученом совете Алтайского филиала ФГ'БУ «Российский онкологический научный центр им. Н.Н.Блохина» РАМН.

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 47 научных работ, из них 16 статей в журналах по списку ВАК и 7 статей в зарубежных рецензируемых журналах.

Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, главы «Материал и методы исследований», 8 глав «Результатов собственных исследований», обсуждения полученных данных, выводов, практических рекомендаций и списка цитируемой литературы. Общий объем диссертации 326 страниц машинописного текста. Указатель литературы содержит 567 работ отечественных и зарубежных авторов. Диссертация иллюстрирована 109 таблицами и 66 рисунками.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Исследование выполнено на операционном материале, полученном от 243 пациентов, находившихся на лечении в торакальном отделении

Алтайского филиала РОН1Д им. H.H. Блохина РАМН «Алтайский краевой онкологический диспансер» (г. Барнаул). Средний возраст больных составил 59,4±7,7 лет (от 35 до 75 лет); мужчины - 209 случаев (86%), женщины - 34 случая (14%). В 173 случаях (71 %) выполнена лобэктомия, в 70 случаях (29%) - пневмонэктомии. Предоперационная химио-лучевая терапия не проводилась, постоперационная химио-лучевая терапия проведена 92 больным (38%). При проведении химиотерапии в большинстве случаев использовался цисплатин и этопозид. При лучевой терапии назначалась суммарная очаговая доза 50-60 Гр.

Клинико-морфологические параметры определены согласно классификации TNM 7 пересмотра. Показатель Т в 66 случаях (27%) соответствовал Т1, в 147 случаях (61%) - Т2 и в 30 случаях (12%) -ТЗ. Опухоли с показателем Т4 в исследовании отсутствовали. Наибольший размер опухоли в 104 случаях (43%) был менее 3 см, в 139 случаях (57%) - более 3 см. Показатель N в 156 случаях (64%) соответствовал N0, в 87 случаях (36%) - N1-3.1 стадия - 138 случаев (57%), II стадия - 60 случаев (25%), III стадия - 45 случаев (18%). 111 случаев (46%) Ак и 132 случая (54%) 11к. Высокая, умеренная и низкая дифференцировка была в 63 случаях (26%), 117 случаях (48%) и 63 случаях (26%) соответственно. Случаи с отдаленными метастазами (параметр М1) и первично-множественными опухолями исключены из исследования. В качестве контроля в 10 случаях исследованы кусочки неизмененного легкого, полученные из отдаленных от опухоли участков.

Метод тканевых матриц. В каждом случае из трех парафиновых блоков (блоков-доноров) забраны столбики ткани иглой с внутренним диаметром 1,5 мм, на основании просмотра соответствующих гистологических препаратов. Столбики ткани помещены в шесть парафиновых блоков-реципиентов, с формированием тканевых матриц 12x12 столбиков и размером 20x20 мм. С парафиновых блоков-реципиентов изготавливались серийные гистологические срезы толщиной 4 мкм и переносились на стекла.

Для выявления Ag-ЯОР-белков срезы окрашивали по одностадийной методике. После стандартной депарафинизации срезы автоклавировали при 120°С 20 минут в 0,01 М цигратном буфере (рН=6,0). На срезы наносили раствор, состоящий из 1 части 2% желатина в 1% муравьиной кислоте и 2 частей 50% нитрата серебра, инкубировали в термостате 16 минут при 37°С во влажной камере. Докрашивания ядер не проводили.

Двойное окрашивание на антиген Ki-67 и Ag-ЯОР-белки. После стандартной депарафинизации срезы автоклавировали при 120°С 20 минут в 0,01 М цитратном буфере (рН=6,0). Иммуногистохимическое окрашивание проводили стрептавидин-биотиновым методом с первичными антителами к Ki-67 (клон MIB-1, DAKO) и хромогеном - new fuchsin, согласно протоколу производителя. После инкубации с хромогеном срезы отмывали в бидистилированной воде. Далее срезы окрашивали азотнокислым серебром по одностадийной методике, во влажной камере при 37°С

19 минут. Докрашивание ядер не проводили, срезы заключали в водную среду Faramount(DAKO).

Компьютерный анализ изображений. Применяли следующее оборудование: микроскоп СХ41 (Olympus) проходящего света с подсоединенной цветной видеокамерой DP72 (Olympus). Программное обеспечение - анализатор изображений ImageJ 1.42. Исследовали только ядра интерфазных клеток, при увеличении микроскопа в 1000 раз (объектив хЮО, 1.25, oil, окуляр х10), с использованием иммерсионной системы. В каждом случае исследовались 100 ядер клеток, с 10-30 цифровых изображений, полученные с 10 полей зрения. Протокол анализа: 1. вручную отмечали ядра клеток, которые автоматически сохранялись на жесткий диск в файл множественных изображений и переводились в серое изображение; 2. определяли среднюю площадь Ag-ЯОР-белков в 20-25 ядрах малых лимфоцитов и проводили калибровку программы по средним значениям для каждого случая. ИП Ag-ЯОР-белков определяли как отношение площади Ag-ЯОР-белков в клетке к значению средней площади Ag-ЯОР-белков в ядре малого лимфоцита. 3. автоматическое выделение гранул серебра в ядрах клеток по значению серого и перевод в бинарное изображении (пороговое значение серого - 110). Измерение площади на бинарном изображении, с последующим расчетом среднего значения площади, ИП и KB Ag-ЯОР-белков. Показатель пролиферации (1111) вычислялся как произведение ИМ Ki-67 на Ag-ЯОР-белков (MIB-1).

Иммуногистохимический метод проводился в автоматическом режиме в автостейнере BenchMark XT (Ventana). Система визуализации ultra View Universal DAB Detection Kit (Ventana), хромоген DAB. Использовались две группы первичных антител: 1 группа (дифференциально-диагностические маркеры) - цитокератин 7 (SP52, Ventana, RTU), цитокератип

20 (SP33, Ventana, RTU), TTF-1 (SP 141, Ventana, RTU), высокомолекулярный кератин (34ßE 12, Ventana, RTU), цитокератины 5/6 (D5/16B4, Ventana, RTU); 2 группа (молекулярно-биологические маркеры) - Ki-67 (MIB-1, Dako, 1:150), Topoisomerase IIa (JS5B4, Ventana, RTU), p53 (DO-7, Dako, RTU), bcl-2 (124, Dako, RTU), bax(SP47, SpringBio, 1:20), CD34 (QBEnd/10, Ventana, RTU), podoplanin (D2-40, Ventana, RTU), I Ier2 (4B5, Ventana, RTU). Оценку экспрессии молекулярно-биологических маркеров проводили согласно протоколу производителя и общепринятым методикам.

SISH метод проводился в автоматическом режиме в автостейнере BenchMark XT (Ventana). Использовались INFORM HER2 Dual ISH DNA Probe Cocktail, ultra View Silver ISH DNP Detection, ultra View Red ISH DIG Detection. Оценку результатов SISH метода проводили согласно инструкции к набору: подсчитывали метку в 20/40 ядрах опухолевых клеток (увеличение х 1000), вычисляли соотношение Нег2/СЕР17. Оценку амплификации проводили согласно рекомендациям производителя: при соотношении Нег2/СЕР17<1,8, считали, что амплификация гена Нег2 отсутствует, а при соотношении Нег2/СЕР17>2,0 - наличие амплификации.

При соотношении Нег2/СЕР 17= 1,8-2,0 в просчет включали дополнительный объем клеток до тех пор пока не получали пограничного уровня. Для оценки состояния СЕР 17 использовали классификацию, предложенную Wang S. с соавторами (2002): при наличии менее 2,25 красных меток -отсутствие увеличения СЕР17, при наличии более 2,25 красных меток - увеличение СЕР 17. По состоянию гена Нег2 и СЕР17 выделены четыре типа опухоли: отсутствие амплификации гена Нег2 и отсутствие увеличения СЕР17 - тип N, отсутствие амплификации гена Нег2 и наличие увеличения СЕР17 - тип Р, наличие амплификации гена Нег2 и отсутствие увеличения СЕР17 - тип А, наличие амплификации гена Нег2 и наличие увеличения СЕР17 - тип АР.

Статистическая обработка данных проведена в программе STATIST1CA 6.0. Предварительно определяли распределение данных (критерий Шапиро-Уилка), на основании которого выбирали параметрические или непараметрические методы описания. При параметрическом распределении меру центральной тенденции представляли в виде M ± с.о.; при непараметрическом распределении - Me (и.и.). Различия между величинами оценивали непараметрическими методами: двусторонний точный критерий Фишера, тест Краскелла-Уоллиса, U-критерий Манна-Уитни. Корреляцию оценивали непараметрическими методами: тест %2, коэффициент корреляции Спирмена (г). Выживаемость больных рассчитывали акгуариальным способом. Общую 5-летнюю выживаемость больных определяли с даты операции до даты последнего наблюдения или смерти от любой причины. Для анализа выживаемости использовали метод Каплана - Мейера, для сравнения между группами - тест log-rank. Использовали регрессионный анализ - модель пропорциональных интен-сивностей Кокса. Достоверность оценивали при р<0,05.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Ag-ЯОР-белки. В ядрах клеток неизмененного эпителия альвеол ИП Ag-ЯОР-белков составил 1,31 ±0,20, KB Ag-ЯОР-белков 28,3±3,1%. В эпителии бронхов ИП Ag-ЯОР-белков составил 1,85±0,24, KB Ag-ЯОР-белков 29,3±3,3%. В НМКРЛ ИП Ag-ЯОР-белков составил 6,52±1,66, KB Ag-ЯОР-белков - 30,5±4,6%. В клетках НМКРЛ наблюдалось статистически значимое увеличение ИП и KB Ag-ЯОР-белков по сравнению с неизмененным эпителием альвеол и бронхов (р<0,001 ).

Возраст больных НМКРЛ, Ак и Пк не взаимосвязан с ИП и KB Ag-ЯОР-белков. При НМКРЛ у лиц мужского пола по сравнению с женским найдено статистически значимое увеличение ИП Ag-ЯОР-белков (соответственно 6,71±1,63 и 5,69-И ,65, р=0,002) и KB Ag-ЯОР-белков (соответственно 31,03±4,59% и 28,25±3,86%, р<0,001). Аналогичная тенденция прослеживается при Ак; однако, при Пк различия статистически пе достоверны.

При НМКРЛ ИП и КВ Ag-ЯOP-бeлкoв достоверно больше в группе Т2-3 по сравнению с Т1, при наибольшем размере опухоли более 3 см по сравнению с опухолью менее 3 см, при Пк по сравнению с Ак, при умеренной и низкой дифференцировке по сравнению с высокодиффе-ренцированной карциномой. Также ИП Ag-ЯOP-бeлкoв был больше при показателе N1-3 по сравнению с показателем N0, при II и III стадии по сравнению с I стадией (табл. 1).

При НМКРЛ ИП и КВ Ag-ЯOP-бeлкoв имели корреляцию с показателем Г, наибольшим размером опухоли, гистог енезом и дифференциров-кой. Также ИП Ag-ЯOP-бeлкoв коррелировал с показателем N и стадией заболевания (табл. 2). В гистогенетических типах НМКРЛ (Ак и Пк) прослеживалась аналогичная динамика количественного содержания ИП и КВ Ag-ЯOP-бeлкoв в зависимости от клинико-морфологических параметров.

Количественные показатели ИП и КВ Ag-ЯOP-бeлкoв при НМКРЛ имели корреляцию как друг с другом (г=0,43, р<0,001), так и с молеку-лярно-биологическими маркерами - Ag-ЯOP-бeлкaми (М1В-1), ПП, ИМ Ю-67, ИМ ГороПа. Также ИП Ag-ЯOP-бeлкoв при НМКРЛ имел корреляцию с экспрессией р53, Ьс1-2 и амплификацией гена Нег2 (табл. 3). Корреляционные взаимосвязи ИП и КВ Ag-ЯOP-бcлкoв с молекулярно-биолог ическими маркерами были тождественны и при гистогенет ических типах НМКРЛ - Ак и Пк.

5-летняя выживаемость больных НМКРЛ имела статистически значимое отличие (р<0,001) в зависимости от ИП Ag-ЯOP-бeлкoв: 49,8±5,2% - при небольшом ИП <6,52 и 28,6±4,7% - при большом ИП >6,52 (рис. I, а). Также 5-летняя выживаемость больных НМКРЛ имела статистически значимое отличие (р<0,001) в зависимости от КВ Ag-ЯOP-бeлкoв: 50,2±4,9% - при небольшом КВ <30,5% и 25,8±4,9% - при большом КВ >30,5%. Аналогичная динамика показателя 5-летней выживаемости найдена при гистогенетических типах НМКРЛ - Ак и Пк. При однофакторном регрессионном анализе прогностическое значение имели ИП Ag-ЯOP-белков (х2= 19,4-36,8; р<0,001) и КВ Ag-ЯOP-бeлкoв (*2=9,1 -29,6; р<0,001) при НМКРЛ, Ак и Пк.

Таким образом, в клетках НМКРЛ наблюдалось повышение ИП и КВ Ag-ЯOP-бeлкoв по сравнению с неизмененным эпителием альвеол и бронхов, что имеет практическое дифференциально-диагностическое значение. Имеется тендерная взаимосвязь с ИП и КВ Ag-ЯOP-бeлкoв. ИП и КВ Ag-ЯOP-бeлкoв взаимосвязаны с основными клинико-морфологиче-скими и большинством молекулярно-биологических параметров НМКРЛ, Ак и Пк. Большие количественные показатели ИГ1 и КВ Ag-ЯOP-бeлкoв являются неблагоприятными прогностическими факторами и взаимосвязаны с низким показателем выживаемости больных НМКРЛ, Ак и Пк.

Ag-ЯOP-бeлки (М1В-1) и ПП. В неизмененном эпителии бронха Ag-ЯОР-белки (М1В-1) составила 2,19*0,27 мкм2, ПП 8,8±1,1. В неизмененном

Характеристика ИП Ag-ЯОР-белков КВ Ag-ЯОР-белков

М±с.о. р М±с.о. р

Показатель Т

Т 1 5,89±1,49 <0,001 29,5±4,5 0,006

Т 2-3 6,81±1,68 31,1±4,6

Наибольший размер

< 3 см 5,84±1,54 <0,001 29,3±4,0 <0,001

>3 см 7,05±1,58 31,5±4,8

Показатель N

N0 6,27±1,59 <0,001 30,3±4,5 0,1

N 1-3 7,06±1,70 31,2±4,8

Стадия

I 6,23±1,62 <0,001 30,4±4,5 0,5

II-III 6,99±1,64 30,9±4,7

Гистогенез

Ак 6,05±1,78 <0,001 29,8±4,7 0,02

Пк 6,96±1,46 31,2±4,4

Дифференцировка

высокая 5,90±1,54 <0,001 29,4±3,7 0,02

умеренная - низкая 6,761-1,66 31,0±4,8

Таблица 2. Корреляционные взаимосвязи между клинико-морфологиче-скими и молекулярно-биологическими параметрами при НМКЕЛ (коэффициент Спирмена)

Молекулярно-биологические маркеры Показатель Т Наибольший размер Показатель N Стадия Гистогенез Дифференцировка

ИП А£-ЯОР-белков 0,34' 0,45' 0,34' 0,341 0,36' 0,33'

КВ Лg-ЯOP-бeлкoв 0,29' 0,34' 0,13 0,06 0,29' 0,27'

Ак-ЯОР-белки (М1В-1) 0,46' 0,44' 0,39' 0,35' 0,04 0,33'

ПП 0,29' 0,39' 0,30' 0,33' 0,37' 0,37»

ИМ Ю-67 0,09 0,212 0,11 0,12 0,31» 0,222

ИМ ТороПа 0,09 0,25' 0,13 0,13 0,38' 0,232

Р53 0,05 0,12 0,07 0,03 0,153 0,05

Ьс1-2 -0,06 -0,07 -0,153 -0,182 -0,153 -0,11

Ьах 0,05 0,06 0,05 0,04 0,163 0,02

ПМЦР-Г 0,06 0,03 0,05 0,02 0,163 0,10

ПМЦР-Л 0,04 0,02 0,01 0,05 0,01 0,02

Статус белка Нег2 0,10 0,05 0,143 0,09 0,24' 0,04

Состояние гена Нег2 0,01 0,03 0,12 0,10 0,241 0,05

Примечание:1 - р<0,00 ,2-р<0,01,3 -р<0,05

Таблица 3. Корреляционные взаимосвязи между молекулярно-биологическими маркерами при НМКРЛ (коэффициент Спирмена)

Молекулярно-биологические маркеры ИП Ag-ЯОР-белков КВ Ag-ЯОР-белков ИМ Ki-67 jS "о CL (2 S я Ag-ЯОР-белки (М1В-1) а с гч CL bcl-2 X я ПМЦР-Г ПМЦР-Л

ИМ Ki-67 0,34] 0,35' - - - - - - - - -

ИМ Topolla 0,32' 0,26' 0,68» - - - - - - - -

Ag-ЯОР-белки (MIB-1) 0,711 0,39' 0,27' 0,26' - - - - - - -

ПП 0,43' 0,36' 0,74" 0,52' 0,49' - - - - - -

р53 0,24' 0,1 0,222 0,213 0,203 0,25' - - - - -

bcl-2 -0,222 -0,04 0 -0,11 -0,24* -0,11 -0,02 - - - -

bax 0,05 0,13 0,232 0,193 0,05 0,202 0,07 -0,01 - - -

ПМЦР-Г 0,07 0,05 0,06 0,1 0,02 0,01 0,08 -0,07 0,01 - -

ПМЦР-Л 0,03 0 0,11 0,13 0,06 0,05 0,07 0 0,01 0,04 -

Статус белка Нег2 0,08 0,06 0,07 0,14 0,173 0,02 0,02 -0,03 0,08 0,04 0,11

Состояние гена Нег2 0,143 0,02 0,163 0,163 0,06 0,212 0,05 -0,02 0,06 0,01 0,06

Примечание: 1 - р<0,001,2 - р<0,01,3 - р<0,05.

Рис. 1. Графики выживаемости по Каплану-Мейеру больных НМКРЛ с небольшим (-) и большим (+) ИП А§-ЯОР-белков (а) и А§-ЯОР-белков (М1В-1) (б). По оси абсцисс - время жизни (в днях), по оси ординат - доля выживших больных.

эпителии альвеолы М1В-1 позитивные клетки отсутствовали. В НМКРЛ Ag-ЯOP-бeлки (М1В-1) составила 10,47 (8,57-12,69) мкм2; ПП - 304,2 (172,9-476,5). В клетках НМКРЛ наблюдалось статистически значимое увеличение Ag-ЯOP-бeлки (М1В-1) и ПП по сравнению с неизмененным эпителием бронхов (р<0,001).

Отсутствовала статистически значимая взаимосвязь возраста больных НМКРЛ, Ак и Пк с Ag-ЯOP-бcлки (М1В-1) и ПП, а также пола больных -с Ag-ЯOP-бeлки (М1В-1). Найдено статистически значимое увеличение ПП при НМКРЛ у лиц мужского пола по сравнению с женским - соответственно 323,9(192,2-531,5) и 137,2(33,9-333,6) (р<0,001). Аналогичная тенденция прослеживается при Ак; однако, при 11к различия статистически не достоверны.

При НМКРЛ Ag-ЯOP-бeлки (М1В-1) и ПП достоверно больше в группе Т2-3 по сравнению с Т1, при наибольшем размере опухоли более 3 см по сравнению с опухолью менее 3 см, при показателе N1-3 по сравнению с показателем N0, при II и III стадии по сравнению с I стадией, при умеренной и низкой дифференцировке по сравнению с высокодифференци-рованной карциномой. Также ПП был больше при 11к по сравнению с Ак (табл. 4). При НМКРЛ Ag-ЯOI;)-бeлки (М1В-1) и ПП были взаимосвязаны с показателем Г, наибольшим размером опухоли, показателем Ы, стадией заболевания и дифференцировкой. Также ПП коррелировал с гистогенезом (см. табл. 2). В гистогенетических типах НМКРЛ (Ак и Пк) прослеживалась аналогичная динамика количественного содержания Ag-ЯOP-бeлкoв (М1В-1) и ПП в зависимости от клинико-морфологических параметров.

При НМКРЛ Ag-ЯOP-бeлкoв(MIB-l) и Г1Г1 имели корреляцию как друг с другом, так и с молскулярно-биологичсскими маркерами - ИП и КВ Ag-ЯОР-белками, ИМ К1-67, ИМ ТороНа, экспрессией р53. Также Ag-ЯOP-белки (М1В-1) коррелировала с экспрессией Ьс1-2 и белка Нег2, а ПП - с экспрессией Ьах и амплификацией гена Нег2 (см. табл. 3). Корреляционные

Таблица 4. Клинико-морфологические параметры НМКРЛ и Аб-ЯОР-белки (М1В-1), ПП _

Характеристика Ag-ЯOP-бeлки (М1В-1) ПП

Ме (и.и.) р Ме (и.и.) Р

Показатель Т

Г 1 8,95 (7,60-10,91) <0,001 222,0 (96,8-409,7) 0,006

Т 2-3 11,08 (8,92-13,16) 330,1 (192,2-531,5)

Наибольший разме р

< 3 см 8,93 (7,60-10,92) <0,001 203,5 (110,6-405,9) <0,001

> 3 см 11,60 (9,37-13,42) 345,2 (215,0-558,4)

Показатель N

N0 9,43 (8,04-11,88) <0,001 273,4(145,3-409,7) 0,003

N 1-3 11,89 (10,37-14,23) 384,7 (214,1-618,0)

Стадия

I 9,35 (7,89-11,87) <0,001 248,5 (137,5-404,7) <0,001

11-111 11,41 (9,21-13,75) 357,7 (214,1-575,0)

Гистогенез

Ак 10,20 (8,79-12,53) 0,8 218,4(80,3-454,1) <0,001

Пк 10,58 (8,37-12,69) 343,3 (222,0-558,4)

Дифференцировка

высокая 8,79 (7,73-10,95) <0,001 192,5 (96,8-330,1) <0,001

умеренная-низкая 11,01 (8,97-13,04) 343,8 (195,4-532,5)

взаимосвязи А§-ЯОР-белков (М1В-1) и ГШ с молекулярно-биологическими маркерами в целом были тождественны и при гистогенетических типах НМКРЛ - Ак и Пк; однако, имелись и отличия. Отсутствовала корреляция А§-ЯОР-белков (М1В-1) с экспрессией р53, Ьс1-2 и белка Нег2 при Ак; с ИМ Ю-67, ИМ ТороПа и экспрессией р53 при Пк. Отсутствовала корреляция ПП с экспрессией Ьах при Ак; с экспрессией Ьс1-2 при Пк.

5-летняя выживаемость больных НМКРЛ имела статистически значимое отличие (р<0,001) в зависимости от Ag-ЯOP-бeлкoв (М1В-1): 61,2±5,4% - мри небольшой площади <10,47 мкм2 и 16,2±4,2% - при большой >10,47 мкм2 (рис. 1, б). Также 5-летняя выживаемость больных НМКРЛ имела статистически значимое отличие (р<0,001) в зависимости ог ПП: 50,2±4,9% - при небольшом 1111 <304,2 и 25,8±4,9% - при большом ПП >304,2. Аналогичная динамика показателя 5-летней выживаемости найдена при гистогенетических типах НМКРЛ - Ак и Пк. При однофакторном регрессионном анализе прогностическое значение имели А§-ЯОР-белки (М1В-1) (х2=25,5-59,3; р<0,001) и ПП (х2=5,4-11,4; р<0,05) при НМКРЛ, Ак и Пк.

Таким образом, в клетках НМКРЛ наблюдалось повышение Ag-ЯOP-белков (М1В-1) и ПП по сравнению с неизмененным эпителием бронхов, что имеет практическое дифференциально-диагностическое значение.

Имеется тендерная взаимосвязь с ПП. А§-ЯОР-белки (М1В-1) и ПГ1 взаимосвязаны с основными клинико-морфологическими и большинством молекулярно-биологических параметров НМКРЛ, Ак и Пк. Большие количественные показатели А§-ЯОР-белков (М1В-1) и ПП являются неблагоприятными прогностическими факторами и взаимосвязаны с низким показателем выживаемости больных НМКРЛ, Ак и Пк.

ИМ К-67 и ИМ ТороНа. В неизмененном эпителии альвеол ИМ К ¡-67 и ИМ ТороПа составил менее 1% (единичные положительные клетки). В неизмененном эпителии бронхов ИМ К1-67 составил 4 (1-8)%, ИМ ТороНа - менее 1% (единичные положительные клетки). При НМКРЛ ИМ Кл-67 составил 25 (18-42)%, ИМ ТороПа - 19 (12-27)%. При НМКРЛ наблюдалось повышение ИМ К1-67 и ИМ ТороПа по сравнению с неизмененным эпителием альвеол и бронхов (р<0,001).

Возраст больных НМКРЛ, Ак и Пк не взаимосвязан с ИМ К1-67 и ИМ ТороПа. При НМКРЛ у лиц мужского пола по сравнению с женским найдено статистически значимое увеличение ИМ К1-67 (соответственно 30 (19-45)% и 14(5-22)%, р<0,001) и ИМ ТороНа (соответственно 20(13-28)% и 7 (3-17)%, р<0,001). Аналогичная тенденция прослеживается при Ак; однако, при Пк различия статистически не достоверны.

При НМКРЛ ИМ К1-67 и ИМ ТороНа достоверно больше при наибольшем размере опухоли более 3 см по сравнению с опухолью менее 3 см, при Пк по сравнению с Ак, при умеренной и низкой дифференцировке по сравнению с высокодифференцированной карциномой (табл. 5). При НМКРЛ ИМ К1-67 и ИМ ТороПа были взаимосвязаны с наибольшим размером опухоли, гистогенезом и дифференцировкой (см. табл. 2). В целом при гистогенетических типах НМКРЛ (Ак и Пк) прослеживалась аналогичная динамика ИМ К1-67 и ИМ ТороПа во взаимосвязи с клинико-морфологическими параметрами.

При НМКРЛ ИМ Кл-67 и ИМ ТороПа имели корреляцию как друг с другом, так и с молекулярно-биологическими маркерами - ИП и КВ А§-ЯОР-белков, Ag-ЯOP-бeлкaми (М1В-1), ПП, экспрессией р53, Ьах и амплификацией гена Нег2 (см. табл. 3). Корреляционные взаимосвязи ИМ К1-67 и ИМ ТороПа с молекулярно-биологическими маркерами в целом были тождественны и при гистогенетических типах НМКРЛ - Ак и Г1к; однако, имелись и отличия. Отсутствовала корреляция ИМ Ю-67 с экспрессией Ьах при Ак; с Ag-ЯOP-бeлкaми (М1В-1), экспрессией р53, Ьах и амплификацией гена Нег2 при Пк. Отсутствовала корреляция ИМ ТороПа с Ag-ЯOP-бeлкaми (М1В-1), экспрессией р53, Ьах и амплификацией гена Нег2 при Пк; с ИП Ag-ЯOP-бeлкoв и экспрессией Ьах при Ак, в то же время при Ак отмечалась корреляция ИМ ТороПа с экспрессией Ьс1-2.

5-летняя выживаемость больных НМКРЛ имела статистически значимое отличие (р<0,01) в зависимости от ИМ К1-67: 50,3±5,5% - при небольшом ИМ К1-67<25% и 31,6±4,7% - при большом ИМ Кь67>25% (рис. 2, а). Также 5-летняя выживаемость больных НМКРЛ имела ста-

Таблица 5. Клинико-морфологические параметры НМКРЛ и ИМ Ю-67, ИМ ТороПа

Характеристика ИМ Ю-67 ИМ ТороПа

Ме (и.и.) Р Ме (и.и.) |_ Р

Показатель Т

Т 1 22 (15-38) 0,1 18(9-25) 0,2

Т 2-3 28 (19-43) 20(12-28)

Наибольший размер

< 3 см 22 (13-38) <0,01 17 (9-22) <0,001

> 3 см 30 (21-45) 22 (13-29)

Показатель N

N 0 27(16-40) 0,2 18(11-25) 0,3

N 1-3 29 (20-45) 20(13-27)

Стадия

1 26 (16-39) 0,09 18(11-24) 0,1

П-Ш 29 (19-46) 21 (12-28)

Гистогенез

Ак 20(11-38) <0,001 14(6-21) <0,001

Г1к 30 (23-45) 22 (16-28)

Дифференцировка

высокая 19(13-32) <0,001 16(9-23) <0,01

умеренная-низкая 30 (20-45) 20(12-28)

гистически значимое отличие (р<0,01) в зависимости от ИМ ТороПа: 53,0±5,5% - при небольшом ИМ Торо11а<19% и 31,7±5,1 % - при большом ИМ ТороПа>19%. Аналогичная динамика показателя 5-легней выживаемости найдена при гистогенетических типах НМКРЛ - Ак и Пк. При однофакторном регрессионном анализе прогностическое значение имели ИМ Кл-67 (%2=5,1-12,2; р<0,05) и ИМ ТороПа ДО=9,6-28,3; р<0,01) при НМКРЛ, Ак и Пк.

Таким образом, в клетках НМКРЛ наблюдалось повышение ИМ Кь67 и ИМ ТороПа по сравнению с неизмененным эпителием альвеол и бронхов, что имеет практическое дифференциально-диагностическое значение. Имеется гендерная взаимосвязь с ИМ К1-67 и ИМ ТороПа. ИМ К1-67 и ИМ ТороПа взаимосвязаны с клинико-морфологическими (размером, гистогенезом и дифференцировкой) и большинством молекулярно-биологических параметров НМКРЛ, Ак и Пк. Большие количественные показатели ИМ К1-67 и ИМ ТороПа являются неблагоприятными прогностическими факторами и взаимосвязаны с низким показателем выживаемости больных НМКРЛ, Ак и Пк.

р53, Ьс1-2 и Ьах. В неизмененном эпителии альвеол отсутствовала экспрессия р53, Ьс1-2 и Ьах. В неизмененном эпителии бронхов отсутствовали р53-положительные клетки, Ьс1-2-положительные клетки определялись

Рис. 2. Графики выживаемости по Кагшану-Мейеру больных НМКРЛ с небольшим (-) и большим (+) ИМ Кл-67 (а), отрицательной (-) и положительной (+) экспрессией Ьс1-2 (б). По оси абсцисс - время жизни (в днях), по оси ординат - доля выживших больных.

только в базальном слое, Ьах-положительные клетки определялись во всех слоях. При НМКРЛ положительная экспрессия р53 определялась в 44%, Ьс1-2 - в 18%, Ьах - в 55%. Таким образом, при НМКРЛ наблюдалось повышение экспрессии р53, Ьс1-2 и Ьах по сравнению с неизмененным эпителием альвеол (р<0,001), а также повышение экспрессии р53 и Ьс1-2 и снижение экспрессии Ьах по сравнению с неизмененным эпителием бронхов (р<0,001).

Возраст больных НМКРЛ, Ак и Пк не взаимосвязан с экспрессией р53, Ьс1-2 и Ьах. Найдено статистически значимое увеличение положительной экспрессии Ьах при НМКРЛ у лиц женского пола по сравнению с мужским - соответственно 26 случаев (76%) и 101 случая (51%) (р=0,006). Аналогичная тенденция прослеживается при Ак; однако, при Пк различия статистически не достоверны.

При Пк по сравнению с Ак найдено статистически значимое (р<0,05) увеличение количества случаев с положительной экспрессией р53 (соответственно 65 случаев (51 %) и 39 случаев (36%)) и Ьс1-2 (соответственно 30 случаев (23%) и 13 случаев (12%)). Количество случаев с положительной экспрессией Ьах достоверно больше в Ак по сравнению с Пк (соответ ственно 69 случаев (63%) и 61 случай (48%), р<0,05). При НМКРЛ отмечается достоверное увеличение количества случаев с положительной экспрессией Ьс1-2 в группе опухолей без метастазов в лимфатические узлы по сравнению с опухолями с наличием метастазов (соответственно 34 случая (23%) и 9 случаев (10%), р<0,05), при 1 стадии заболевания по сравнению со 11-111 стадиями (соответственно 30 случаев (25%) и 13 случаев (11 %), р<0,01). При НМКРЛ была найдена корреляция гистогенеза с экспрессией р53, Ьс1-2 и Ьах, а также показат еля N и стадии заболевания с экспрессией Ьс1-2 (см. табл. 2). При Ак отсутствовала взаимосвязь экспрессии р53, Ьс1-2 и Ьах с клинико-морфологическими параметрами. При Пк экспрессия Ьс1-2

имела корреляцию со стадией заболевания (р=0,01) и на уровне тенденции к статистической значимости с показателем N (р-0,06).

При НМКРЛ положительная экспрессия р53 имела прямую корреляцию с ИП Ag-ЯOP-бeлкoв, Ац-ЯОР-белки (М1В-1), ПП, ИМ Кь67, ИМ ТороИа (см. табл. 3). Корреляционные взаимосвязи экспрессии р53 с молекулярно-биологическими маркерами в целом были тождественны и при гистогенети-ческихтипах НМКРЛ - Ак и Пк; однако, имелись и отличия. Отсутствовала корреляция экспрессии р53 с Д§-ЯОР-белки (МIВ-1) при Ак; с ИМ Кл-67 и ИМ ТороИа при Пк. При НМКРЛ положительная экспрессия Ьс1-2 имела обратную корреляцию с ИП Ag-ЯOP-бcлкoв и Ag-ЯOP-бeлкaми (М1В-1). При Ак отсутствовала взаимосвязь экспрессии Ьс1-2 с Ag-ЯOP-бeлкaми (М1В-1), но найдена взаимосвязь с ИМ ТороИа (р=0,04). Корреляционные взаимосвязи экспрессии Ьс1-2 с молекулярно-биологическими маркерами были тождественны при Пк и НМКРЛ; однако, при Пк отмечается также взаимосвязь с ПП (р=0,006). При НМКРЛ положительная экспрессия Ьах имела прямую корреляцию с ПП, ИМ К1-67 и ИМ ТороИа. Однако при гистог енетических вариантах НМКРЛ (Ак и Пк) отсутствовала взаимосвязь экспрессии Ьах с молекулярно-биологическими маркерами.

5-летняя выживаемость больных НМКРЛ имела статистически значимое отличие в зависимости от экспрессии р53 (р=0,03): 46,2±4,7% - при отрицательной экспрессии и 32,4±5,1 % - при положительной экспрессии. Также 5-летняя выживаемость больных НМКРЛ имела статистически значимое отличие в зависимости от экспрессии Ьс1-2 (р=0,004): 35,6±3,8% - при отрицательной экспрессии и 58,4±8,8% - при положительной экспрессии (рис. 2, б). Выживаемость больных НМКРЛ при положительной экспрессии Ьах была ниже по сравнению с отрицательной экспрессией (36,8±4,7% и 44,8±5,2% соответственно), однако, отличие не достоверно (р=0,7). Аналогичная динамика показателя 5-летней выживаемости найдена только при Пк. При однофакторном регрессионном анализе прогностическое значение имели экспрессия р53 (%2=4,6-4,7; р<0,05) и Ьс1-2 (Х2=4,1-8,5; р<0,05) при НМКРЛ и Пк.

Таким образом, при НМКРЛ изменялась экспрессия р53, Ьс1-2 и Ьах по сравнению с неизмененным эпителием альвеол и бронхов, что имеет практическое дифференциально-диагностическое значение. Имеется гендерная взаимосвязь с экспрессией Ьах. Экспрессия р53, Ьс1-2 и Ьах была взаимосвязана с гистогенезом НМКРЛ, а также экспрессия Ьс1-2 - с показателем N и стадией заболевания. Экспрессия р53, Ьс1-2 и Ьах имела корреляцию с молекулярно-биологическими маркерами, взаимосвязанными с пролиферацией. Положительная экспрессия р53 и отрицательная экспрессия Ьс1-2 являются неблагоприятными прогностическими факторами и взаимосвязаны с низким показателем выживаемости больных НМКРЛ и Пк.

ПМЦР-Г и ПМЦР-Л. В неизмененных альвеолах ПМЦР-Г составила 86 (73-102), лимфатические сосуды отсутствовали. В неизмененных бронхах ПМЦР-Г составила 22 (17-31), ПМЦР-Л - 4 (2-7). При НМКРЛ

типИ

Рис. 3. Графики выживаемости по Каопану-Мейеру больных НМКРЛ с небольшой (-) и большой (+) ПМЦР-Г (а) и четырех типов НМКРЛ, по состоянию гена Нег2 и СЕР 17. По оси абсцисс - время жизни (в днях), по оси ординат доля выживших больных.

ПМЦР-Г составила 43 (34-60), ПМЦР-Л - 4 (2-9). При НМКРЛ наблюдалось снижение ПМЦР-Г по сравнению с альвеолами и повышение по сравнению с бронхами (р<0,001), а также повышение ПМЦР-Л по сравнению с альвеолами (р<0,001) и отсутствие отличия по сравнению с бронхами. Отсутствовала статистически значимая взаимосвязь возрастно-половых характеристик больных НМКРЛ, Ак и Пк с ПМЦР-Г и ПМЦР-Л.

Не найдено статистически значимого отличия ПМЦР-Г и ПМЦР-Л в зависимости от клинико-морфологических параметров НМКРЛ, Ак и Пк: показателя Т, наибольшего размера, показателя 1М, стадии заболевания и дифференцировки (см. табл. 2). Отмечалось статистически значимое увеличение ПМЦР-Г при Ак по сравнению с Пк - соответственно 47 (36-64) и 40 (30-59) (р=0,01). ПМЦР-Л не имела отличий в зависимости от гистогенеза.

При НМКРЛ, Ак и Пк отсутствовали статистически значимые связи ПМЦР-Г и ПМЦР-Л с экспрессией молекулярно-биологических маркеров, а также между ПМЦР-Г и ПМЦР-Л (см. табл. 3). При Ак ПМЦР-Г имела корреляцию с ИП Ag-ЯOP-бeлкoв и Ag-ЯOP-бeлкoв (М1В-1).

5-летняя выживаемость больных НМКРЛ имела статистически значимое отличие (р--0,008) в зависимости от ПМЦР-Г: 49,8±5,2% - при небольшой ПМЦР-Г<43 и 29,8±4,8% - при большой ПМЦР-Г>43 (рис. 3, а). Также 5-летняя выживаемость больных НМКРЛ имела статистически значимое отличие (р=0,03) в зависимости от ПМЦР-Л: 48,3±5,5% - при небольшой Г1МЦР-Л<4 и 34,0±4,6% - при большой ПМЦР-Л>4. Аналогичная динамика показателя 5-летней выживаемости найдена при Ак и Пк в зависимости от ПМЦР-Г, а также при 11к в зависимости от ПМЦР-Л. При одиофакторном регрессионном анализе ПМЦР-Г имела взаимосвязь с выживаемостью больных НМКРЛ, Ак и Пк (х2=7,3-10,0; р<0,()1); взаимосвязь с ПМЦР-Л отсутствовала.

Таким образом, при HMKPJI по сравнению с неизмененным легким наблюдались отличия ПМЦР-Г и ПМЦР-Л, что имеет практическое дифференциально-диагностическое значение. Отсутствовала гендерно-воз-растная взаимосвязь с ПМЦР-Г и ПМЦР-Л. ПМЦР-Г имела взаимосвязь с гистогенезом. Также ПМЦР-Г имела корреляцию с незначительным количеством молекулярно-биологических маркеров (ИП Ag-ЯОР-белков и Ag-ЯОР-белками (М1В-1). Большая ПМЦР-Г является неблагоприятным прогностическим фактором и взаимосвязана с низким показателем выживаемости больных.

Статус белка и гена Нег2. В неизмененном эпителии альвеол и бронхов отсутствовала положительная экспрессия белка Нег2 и амплификация гена Нег2. При НМКРЛ положительная экспрессия белка Нег2 найдена в 106 случаях (49%). При НМКРЛ амплификация гена Нег2 найдена в 19 случаях (9%), увеличение СЕРП в 26 случаях (12%). В 4 случаях (2%) Ак амплификация гена Нег2 (без увеличения СЕР 17) определялась в виде кластеров. В остальных 15 случаях (7%) амплификация генаНег2 определялась в виде отдельных множественных копий, из которых в 7 случаях - совместно с увеличением СЕР17 и в 8 случаях - без увеличения СЕР 17. В одном случае Ак с высоким уровнем амплификации гена Нег2 найдена неоднородность амплификации гена Нег2: в участках опухоли с желсзи-стоподобным строением отмечался низкий уровень амплификации гена Нег2, а в участках солидизации - высокий уровень амплификации гена Нег2. Таким образом, в клетках НМКРЛ наблюдалось увеличение количества случаев с положительной экспрессией белка Нег2, амплификацией гена Нег2 и увеличения СЕР17 по сравнению с неизмененным эпителием альвеол и бронхов (р<0,001).

Отсутствовала статистически значимая взаимосвязь пола и возраста больных НМКРЛ, Ак и Пк с положительной экспрессией белка Нег2. Возраст больных НМКРЛ, Ак и Пк не взаимосвязан со статусом гена Нег2. Найдено статистически значимое увеличение количества случаев с амплификацией гена Нег2 при НМКРЛ у лиц женского пола по сравнению с мужским - соответственно 6 случаев (18%) и 13 случаев (7%) (р=0,04). Однако, при Ак и Пк различия статистически не достоверны.

Отмечалось статистически значимое увеличение количества случаев с положительной экспрессией белка Нег2 в группе опухолей с наличием метастазов в лимфатические узлы по сравнению с опухолями без метастазов (соответственно 44 случая (58%) и 62 случая (44%), р=0,048) и при Ак по сравнению с Пк (соответственно 61 случай (62%) и 45 случаев (38%), р<0,001). Положительная экспрессия белка Нег2 была взаимосвязана с показателем N и гистогенезом (см. табл. 2). Некоторые отличия имелись в экспрессии белка Нег2 при гистогенетических вариантах НМКРЛ: при Ак положительная экспрессия белка Нег2 коррелировала с наибольшим размером опухоли (г=0,21, р=0,03), при Пк - с показателем N (г=0,31, р=0,006) и стадией заболевания (r=0,21, р=0,03). Количество случаев

с амплификацией гена Нег2 достоверно больше при Ак по сравнению с Пк (соответственно 16 (16%) и 3 (3%) случая, р<0,001). Отмечалось статистически значимое увеличение количества случаев с увеличением СЕР17 в группе опухолей с наличием метастазов в лимфатические узлы по сравнению с опухолями без метастазов (соответственно 14 (18%) и 12 (8%) случаев, р=0,047). Амплификация гена Нег2 коррелировала с гистогенезом НМКРЛ, а состояние СЕРП - с показателем N (см. табл. 2).

При НМКРЛ и Пк экспрессия белка Нег2 коррелировала с Ag-ЯOP-белками (М1В-1). При НМКРЛ и Ак амплификации гена Нег2 имела корреляцию с ИПА§-ЯОР-белков, ПП, ИМ К1-67 и ИМ ТороПа (см. табл. 3). При НМКРЛ, Пк и Ак отмечалась корреляция между положительной экспрессией белка Нег2 и амплификацией гена Нег2 (г=0,32, р<0,001). Только при положительной экспрессии белка Нег2 найдена амплификация гена Нег2.

5-летняя выживаемость больных НМКРЛ имела статистически значимое отличие в зависимости от экспрессии белка Нег2 (р=0,02): 46,8±5,2% - при отрицательной и 30,9±5,0%- при положительной. Аналогичная взаимосвязь прослеживается только при Пк, при Ак- отсутствует. 5-летняя выживаемость больных НМКРЛ при наличии амплификации гена Нег2 была ниже по сравнению с опухолями, в которых отсутствовала амплификация гена Нег2 (31,0±11,5% и 39,9±3,8% соответственно), однако, отличие не достоверно (р=0,5). Выживаемость больных НМКРЛ при наличии увеличения СЕРП была ниже по сравнению с опухолями, в которых отсутствовало увеличение СЕРП (25,6±8,9% и 42,3±3,8% соответственно), однако, имеется только тенденция к статистической достоверности (р=0,07).

При анализе выживаемости больных НМКРЛ с четырьмя типами опухоли выявлено отсутствие отличий между типами N и АР (р=0,3; выживаемость соответственно 44,6±4,0% и 55,1±19,6%) и между типами А и Р (р=0,7; выживаемость соответственно 9,2±8,8% и 9,5±7,0%). Наблюдалось статистически значимое снижение выживаемости больных с типами А и Р, с одной стороны, по сравнению с типами N и АР, с другой стороны (рис. 3, б). При гистогенетических типах НМКРЛ (Ак и Пк) отмечена сходная тенденция взаимосвязей. При однофакторном регрессионном анализе при НМКРЛ и Пк имела прогностическое значение положительная экспрессия белка Нег2 (соответственно х2=5,8 и х2=.4,2; р<0,05); при Пк - амплификация гена Нег2 (х2=2,6; р<0,05) и увеличение СЕРП (#=6,2; р<0,01).

Таким образом, при НМКРЛ наблюдалось повышение экспрессии белка Нег2 и появление амплификации гена Нег2 по сравнению с неизмененным эпителием альвеол и бронхов, что имеет практическое дифференциально-диагностическое значение. Имеется тендерная взаимосвязь с амплификацией гена Нет2. Экспрессия белка Нег2 и амплификация гена Нег2 взаимосвязаны с показателем N и гистогенезом, а также с молеку-лярно-биологическими маркерами, взаимосвязанными с пролиферацией. Экспрессии белка Нег2 и состояние гена Иег2, СЕРП взаимосвязаны с выживаемостью больных и прогнозом при НМКРЛ и Пк.

Анализ выживаемости и коэкснрессия молекулярно-биологических маркеров. Найдена взаимосвязь показателя 5-летней выживаемости при НМКРЛ от взаимной коэкспрессии молекулярно-биологических маркеров.

При исследовании ИП и КВ А§-ЯОР-белков наблюдалось последовательное уменьшение показателя 5-летней выживаемости в ряду типов -ИП Ag-ЯOP-бeлкoв/-KB Ag-ЯOP-бeлкoв, -ИГ1 А§-ЯОР-белков/+КВ ЯОР-белков, +И1Т Ag-ЯOP-бcлкoв/-KB Ag-ЯOP-бeлкoв и +ИП Ag-ЯOP-белков/+КВ Ag-ЯOP-бeлкoв - соответственно 53,2±6,0%, 38,5±10,0%, 38,7±9,1% и 20,7±5,2% (рис. 4, а). Найдено статистически значимое отличие (р<0,05) выживаемости больных между типами: 1) -ИП Ag-ЯOP-белков/-КВ Ag-ЯOP-бeлкoв и +ИП Ag-ЯOP-бeлкoв/+KB Ag-ЯOP-бeлкoв, 2) -ИП Ag-ЯOP-бeлкoв/-KB Ag-ЯOP-бeлкoв и +ИП Ag-ЯOP-бeлкoв/-KB Ag-ЯOP-бeлкoв, 3) -ИП Ag-ЯOP-бeлкoв/+KB Ag-ЯOP-бeлкoв и +ИП Ag-ЯОР-белков/+ИП Ag-ЯOP-бeлкoв. Не найдено статистически значимого отличия выживаемости больных с типами -ИП Ag-ЯOP-бeлкoв/+KB Ag-ЯОР-белков и +ИП Ag-ЯOP-бeлкoв/-KB Ag-ЯOP-бeлкoв.

Исходя из полученных данных типы -ИП Ag-ЯOP-бeлкoв/+KB Ag-ЯОР-белков и +ИП Ag-ЯOP-бeлкoв/-KB Ag-ЯOP-бeлкoв объединены в «промежуточный» тип, в котором ИП и КВ Ag-ЯOP-бeлкoв имели противоположные значения (-ИП Ag-ЯOP-бeлкoв /+КВ Ag-ЯOP-бeлкoв и +ИП Ag-ЯOP-бeлкoв /-КВ Ag-ЯOP-бeлкoв). Выживаемость больных с «промежуточным» типом НМКРЛ статистически значимо отличалась от опухолей с типом -ИП Ag-ЯOP-бeлкoв/-KB Ag-ЯOP-бeлкoв и типом +ИП Ag-ЯOP-бeлкoв/+KB Ag-ЯOP-бeлкoв и имела промежуточное значение -38,4±6,8% (рис. 4, б).

При исследовании ИП Ag-ЯOP-бeлкoв и ИМ К1-67 наблюдалось последовательное уменьшение показателя 5-летнсй выживаемости в ряду типов -ИПAg-ЯOP-бeлкoв/-ИMKi-67,-ИПAg-ЯOP-бeлкoв/+ИMKi-67,+ИПAg-ЯОР-бслков/-ИМ Кь67 и +ИП Ag-ЯOP-бeлкoв/+ИM К1-67 - соответственно 56,8±7,4%, 43,9±8,1%, 33,8±8,7% и 23,8±5,6%. Найдено статистически значимое отличие (р<0,05) выживаемости больных между типами: 1) -ИП Ag-ЯOP-бeлкoв/-ИM К1-67 и +И11 Ag-ЯOP-бeлкon/+KB Ag-ЯOP-бeлкoв, 2) -ИП Ag-ЯOP-бeлкoв/-ИM К1-67 и +ИП Ag-ЯOP-бeлкoв/-ИM К1-67,3) -ИП Ag-ЯOP-бeлкoв/+ИM К1-67 и +ИП Ag-ЯOP-бeлкoв/+ИM К1-67. Не найдено статистически значимого отличия выживаемости больных с типами -ИП А§-ЯОР-белков/+ИМ Ю-67 и +ИП Ag-ЯOP-бeлкoв/-ИM К1-67.

Исходя из полученных данных типы -ИП Ag-ЯOP-бeлкoв/+ИM Кь 67 и +ИП Ag-ЯOP-бeлкoв/-ИM К1-67 объединены в «промежуточный» тип, в котором ИП Ag-ЯOP-бeлкoв и ИМ К1-67 в клетках опухоли имели противоположные значения (-И11 Лg-ЯOP-бeлкoв/+ИM Ю-67 и +ИП Ag-ЯОР-белков/-ИМ К1-67). Выживаемость больных с «промежуточным» типом НМКРЛ статистически значимо отличалась от опухолей с типом -ИП Ав-ЯОР-белков/-ИМ К1-67 и типом +ИП Ag-ЯOP-бeлкoв/+ИM К1-67 и имела промежуточное значение - 41,0±5,9%.

Рис. 4. Графики выживаемости по Каплаиу-Мейеру больных НМКРЛ в зависимости от количественных показателей ИП и КВ Ag-ЯOP-бeлкoв. По оси абсцисс - время жизни (в днях), по оси ординат - доля выживших больных.

При исследовании ИГ1 Ag-ЯOP-бeлкoв и ИМ ТороПа наблюдалось последовательное уменьшение показателя 5-летней выживаемости в ряду типов -ИП А§-ЯОР-белков/-ИМ ТороПа, -ИП Ag-ЯOP-бeлкoв/+ИM ТороПа, +ИП Ag-ЯOP-бeлкoв/-ИM ТороПа и +ИП Ag-ЯOP-бeлкoв/+ИM ТороПа - соответственно 56,7±7,2%, 47,5±9,3%, 37,5±9,1% и 21,0±5,9%. Найдено статистически значимое отличие (р<0,05) выживаемости больных между типами: 1) -ИП Ag-ЯOP-бeлкoв/-ИM ТороПа и +ИП Ag-ЯОР-белков/+ЙМ ТороПа, 2) -ИП Ag-ЯOP-бeлкoв/+ИM ТороПа и +ИП Ag-ЯOP-бeлкoв/+ИM ТороПа.

При исследовании КВ Ag-ЯOP-бeлкoв и ИМ Кь67 наблюдалось последовательное уменьшение показателя 5-летней выживаемости в ряду типов -КВ Ag-ЯOP-бeлкoв/-ИM Кь67, -КВ Лg-ЯOP-бeлкoв/+ИM К¡-67, +КВ Ag-ЯOP-бeлкoв/-ИM Кь67 и +КВ Ag-ЯOP-бeлкoв/+ИM К1-67 - соответственно 57,3±7,1%, 40,5±7,0%, 38,9±9,9% и 18,3±5,5%. Найдено статистически значимое отличие (р<(),05) выживаемости больных между типами: 1) -КВ Лg-ЯOP-бeлкoв/-ИM Кь67 и +КВ Лg-ЯOP-бeлкoв/+ ИМ К¡-67, 2) +КВ Ag-ЯOP-бeлкoв/- ИМ К1-67 и +КВ Ag-ЯOP-бeлкoв/+ ИМ К¡-67, 3) -КВ Ag-ЯOP-бeлкoв/+ ИМ Кн67 и +КВ Лg-ЯOP-бeлкoв/+ИM Кь67. Не найдено статистически значимого отличия выживаемости больных с типами -КВ Ag-ЯOP-бeлкoв/+ИM К1-67 и +КВ А§-ЯОР-белков/- ИМ К ¡-67.

Исходя из полученных данных типы -КВ Ag-ЯOP-бeлкoв/+ИM К5-67 и +КВ Лg-ЯOP-бeлкoв/- ИМ К¡-67 объединены в «промежуточный» тип, в котором КВ Ag-ЯOP-бeлкoв и ИМ Кь67 в клетках опухоли имели противоположные значения (-КВ Ag-ЯOP-бcлкoв/+ИM Кь67 и +КВ Ag-ЯОР-бслков/-ИМ К!-67). Выживаемость больных с «промежуточным» типом НМКРЛ статистически значимо отличалась от опухолей с типом -КВ Ад-ЯОР-белков/-ИМ Кн67 и типом 4 КВ Ag-ЯOP-бeлкoв/1 ИМ Кь67 и имела промежуточное значение - 40,1 ±5,6%.

При исследовании КВ А£-ЯОР-белков и ИМ ТороПа наблюдалось последовательное уменьшение показателя 5-летней выживаемости в ряду типов -КВ Ag-ЯOP-бeлкoв/-ИM ТороНа, -КВ А§-ЯОР-белков/+ИМ ТороПа, +КВ Ag-ЯOP-бeлкoв/-ИM ТороНа и +КВ Ag-ЯOP-бeлкoв/+ИM ТороПа - соответственно 58,4±7,2%, 45,7±7,9%, 39,1±9,0% и 15,7±6,3%. Найдено статистически значимое отличие (р<0,05) выживаемости больных между типами: 1) -КВ Ag-ЯOP-бeлкoв/-ИM ТороПа и +КВ Ag-ЯOP-белков/+КВ Ag-ЯOP-бeлкoв, 2) +КВ Лg-ЯOP-бeлкoв/-ИM ТороПа и +КВ Ag-ЯOP-бeлкoв/+ИM ТороПа, 3) -КВ Ag-ЯOP-бeлкoв/+ ИМ ТороПа и +КВ Ag-ЯOP-бeлкoв/^-ИM ТороНа.

При исследовании Ag-ЯOP-бeлкoв (М1В-1) и ИМ Кь67 наблюдалось последовательное уменьшение показателя 5-летней выживаемости в ряду типов ^-ЯОР-белков (М1В-1 )/-ИМ Ю-67. ^-ЯОР-белков (М1В-1)/+ИМ Кь67, +Ag-ЯOP-бeлкoв (М1В-1)/-ИМ К1-67 и +Ag-ЯOP-бeлкoв (М1В-1)/+ИМ К¡-67 - соответственно 65,2±8,1%, 53,6±8,0%, 28,7±7,7% и 9,9±4,2%. Найдено статистически значимое отличие (р<0,01) выживаемости больных между типами: 1) -Ag-ЯOP-бeлки (М1В-1)/-ИМ К1-67 и +Ag-ЯOP-бeлки (М№-1)/+ ИМ Ю-67, 2) +Ag-ЯOP-бeлки (М1В-1)/-ИМ К1-67 и +Ag-ЯOP-бeлки (М1В-1 )/+ИМ К|-67, 3) -Ag-ЯOP-бeлки (М1В-1 )/-ИМ К1-67 и +Ag-ЯOP-бeлки (М1В-1 )/-ИМ Ю-67,4) -Аё-ЯОР-белки (М1В-1)/+ИМ К1-67 и ^-ЯОР-белки (М1В-1)/+ИМ К1-67, 5) -Аё-ЯОР-белки (М1В-1)/+ИМ Ю-67 и +Ag-ЯOP-бeлки (М1В-1)/- ИМ К1-67.

При исследовании Ag-ЯOP-бeлкoв(MIB-l) и ИМ ТороНа наблюдалось последовательное уменьшение показателя 5-летней выживаемости в ряду типов ^-ЯОР-белков (МГВ-1 )/+ИМ ТороПа, ^-ЯОР-белков (М1В-1 )/-ИМ ТороПа, +Ag-ЯOP-бeлкoв (М1В-1)/-ИМ ТороПа и +Ag-ЯOP-бeлкoв (М1В-1 )/+ИМ ТороПа- соответственно 64,7±9,6%, 61,5+7,2%, 23,9±8,3% и 8,2±4,7%. Найдено статистически значимое отличие (р<0,001) выживаемости больных между типами: 1) -Ag-ЯOP-бeлки (М1В-1)/-ИМ ТороПа и +Ag-ЯOP-бeлки (М1В-1 )/+ИМ ТороПа, 2) -Ag-ЯOP-бeлки (М1В-1 )/-ИМ ТороПа и +Ag-ЯOP-бeJlки (М1В-1 )/-ИМ ТороПа, 3) ^-ЯОР-белки (М1В-1)/+ИМ ТороПа и +Ag-ЯOP-бcлки (М1В-1)/+ИМ ТороНа, 4) ^-ЯОР-белки (М1В-1)/+ИМ ТороПа и +Ag-ЯOP-бeлки (М1В-1)/- ИМ ТороНа.

При исследовании ИМ ¥Л-61 и ИМ ТороНа наблюдалось последовательное уменьшение показателя 5-летней выживаемости в ряду типов -ИМ К1-67/-ИМ ТороПа, +ИМ Ю-67/-ИМ ТороПа, тип -ИМ Ю-67/+ИМ ТороПа, тип +ИМ К1-67/+ИМ ТороПа - соответственно 56,4±7,2%, 41,9±9,4%, 40,8±15,1% и 25,0±5,6%. Найдено статистически значимое отличие (р<0,05) в выживаемости больных между типами: 1) -ИМ Ю-67/-ИМ ТороПа и +ИМ К1-67/+ИМ ТороПа, 2) -ИМ К1-67/+ИМ ТороПа и +ИМ Ю-67/+ИМ ТороПа.

При исследовании р53, Ьс1-2 и Ьах наблюдалось последовательное уменьшение показателя 5-летней выживаемости в ряду иммунофенотипов опухоли: 1) -р53/+Ьс1-2, -р53/-Ьс1-2, +р53/+Ьс1-2 и +р53/-Ьс1-2 - соответ-

ственно 70,1 ±12,5%, 38,9±5,1%, 32,6±12,7% и 30,3±5,6%; 2) -р53/-Ьах, -р53/+Ьах, +р53/-Ьах и +р53/+Ьах - соответственно 47,4±7,3%, 43,5±6,4%, 38,8±7,5% и 25,3±6.8%; 3) +Ьс1-2/-Ьах, +Ьс1-2/+Ьах, -Ьс1-2/-Ьах и -Ьс1-2/+Ьах-соответственно 58,9±13,3%, 56,2±10,8%, 39,5±5,7% и 32,4±5,1%. При анализе парной коэкспрессии р53 и Ьс1-2 статистически значимые отличия выживаемости больных получены только для иммунофенотипа -р53/+Ьс1-2 (р<0,001). При анализе парной коэкспрессии р53 и Ьах больные с иммунофенотипом +р53/+Ьах имели наихудшую выживаемость — отличие достоверно по сравнению с иммунофенотипами -р53/-Ьах и -р53/+Ьах (р<0,05). При анализе парной коэкспрессии Ьс1-2 и Ьах статистически значимые отличия (р<0,05) выживаемости больных найдены между типами 1) +Ьс!-2/-Ьах и -Ьс1-2/-Ьах; 2) +Ьс!-2/-Ьах и -Ьс1-2/+Ьах; 3) +Ьс1-2/+Ьах и -Ьс1-2/+Ьах.

При исследовании ПМЦР-Г и Г1МЦР-Л наблюдалось последовательное уменьшение показателя 5-летней выживаемости в ряду типов -ПМЦР-Г/-ПМЦР-Л, -Г1МЦР-Г/+ПМЦР-Л, +ПМЦР-Г/-ПМЦР-Л и +ПМЦР-Г/+ПМЦР-Л-соответственно 59,7±7,5%, 38,9±7,7%, 35,8±7,3% и 25,7±6,0%. Однако, статистически значимые отличия выживаемости больных получены только для иммунофенотипа -ПМЦР-Г /-ПМЦР-Л (р<0,05).

Таким образом, продолжительность общей 5-летней выживаемости больных НМКРЛ взаимосвязана как с экспрессией отдельных молекуляр-но-биологических маркеров, так и с их взаимной коэкспрессией.

Многофакторный анализ и модели прогноза. Проведенный многофакторный регрессионный анализ по Коксу с включением широкого спектра клинических критериев, клинико-морфологических параметров и молекулярно-биологическим маркеров показал нижеследующие совокупности факторов прогноза.

При НМКРЛ неблагоприятными факторами 5-летней выживаемости являются (х2=141,2; р<0,001): площадь А§-ЯОР-белков в М1В-1 позитивных клетках 10,47 мкм2 и более ((3=1,01, стандартная ошибка=0,28, р<0,001), ПМЦР-Г 43 и более (Р=0,56, стандартная ошибка=0,20, р=0,006), КВ Ag-ЯОР-белков 30,5% и более (Р=0,57, стандартная ошибка=0,21, р=0,007), ИМ К1-67 25% и более (Р=0,71, стандартная ошибка=0,28, р=0,009), показатель N1-3 (Р=0,86, стандаргная ошибка=0,38, р=0,02), наибольший размер опухоли 3 см и более ((3=0,52, стандартная ошибка=0,26, р=0,04).

При Ак неблагоприятными факгорами 5-летней выживаемости являются (х2=80,7; р<0,001): показатель пролиферации 218,4 и более ((3=1,68, стандартная ошибка=0,68, р=0,01), ПМЦР-Г 47 и более (р=0,71, стандартная ошибка=0,31, р=0,02), ИМ Кь67 20% и более (Р=1,55, стандартная ошибка=0,69, р=0,02), ИМ ТороПа 14% и более (Р=1,09, стандартная ошибка=0,50, р=0,03), площадь А§-ЯОР-белков в М1В-1 позитивных клетках 10,56 мкм2 и более (р=1,29, стандартная ошибка=0,65, р=0,046).

При Пк неблагоприятными факторами 5-летней выживаемости являются (х2=118,6; р<0,001): ПМЦР-Г 40 и более (Р=1,60, стандартная

ошибка=0,40, р<0,001), ИМ ТороНа 22% и более (0=1,31, стандартная ошибка=0,50, р=0,008), площадь Ag-ЯOP-бeлкoв в М1В-1 позитивных клетках 10,67 мкм2 и более (Р=1,15, стандартная ошибка=0,45, р=0,009), ПМЦР-Л 4 и более ((5=0,85, стандартная ошибка=0,33, р=0,009), тип операции пневмонэктомия ((3=0,80, стандартная ошибка=0,32, р=0,01), КВ А§-ЯОР-белков 31,2% и более ((5=0,87, стандартная ошибка=0,36, р=0,01).

Были разработаны три модели прогноза для НМКРЛ, Ак и Г1к, на основании результатов проведенного многофакторного регрессионного анализа по Коксу. При формировании моделей проводили пошаговое включение в многофакторный регрессионный анализ независимых факторов прогноза, из всего множества клинических, клинико-морфологических и молекулярно-биологических параметров, полученных на предыдущем этапе - начиная от наиболее значимых и заканчивая менее значимыми.

Для индивидуального прогнозирования 5-летней выживаемости больных НМКРЛ расчет морфобиомолекулярного показателя следует производить по следующей формуле:

^нмкрл = 1,19*Х1 + 0,91 *Х2 + 0,57хХЗ + 0,56*Х4 + 0,45*Х5 + 0,43хХ6, где УНМКРЛ - морфобиомолскулярный показатель при НМКРЛ, X - значение фактора (в баллах): XI - показатель N (0 баллов - показатель N0 и 2 балла - показатель N1 -3), Х2 - А§-ЯОР-белки (М1В-1) (0 баллов - <10,47 мкм2 и 2 балла - >10,47 мкм2), ХЗ - наибольший размер (0 баллов - <3см и 1 балл - >3см), Х4 - ПМЦР-Г (0 баллов - <43 и 1 балл - >43), Х5 - ИМ Ю-67 (0 баллов - <25% и 1 балл - >25%), Х6 - КВ Ag-ЯOP-бeлкoв (0 баллов - <30,5% и 1 балл ->30,5%).

Значения медианы, нижнего и верхнего квартилей Унмкрд были определены как пороговые значения-соответственно 2,83, 1,01 и4,65. Выделены четыре прогностические группы, соответственно пороговым значениям Унмкрл: 1 группа - с благоприятным прогнозом, Унмкрд < 1,01; 2 группа

- с относительно благоприятным прогнозом, У11МКРЛ >1,01 и < 2,83; 3 группа - с относительно неблагоприятным прогнозом, УНМкрл > 2,83 и < 4,65; 4 группа - с неблагоприятным прогнозом, УНМКРЛ > 4,65. Показатель 5-летней выживаемости больных НМКРЛ составил: 70,6±8,6% - с благоприятным прогнозом, 50,3±8,4% - с относительно благоприятным прогнозом, 29,8±7,3% - с относительно неблагоприятным прогнозом, 0% - с неблагоприятным прогнозом (после операции больные умерли в течение 1000 дней). Между группами отличия показателей выживаемости были статистически значимыми (рис. 5).

Для индивидуального прогнозирования 5-летней выживаемости больных Ак расчет морфобиомолекулярного показателя следует производить по следующей формуле:

УАк = 0,96*Х1 + 0,89хХ2 + 0,85 хХЗ + 0,73 *Х4 + 0,73 хХ5 + 0,70хХ6, где УАк - морфобиомолекулярный показатель при Ак, X - значение фактора (в баллах): XI - показатель N (0 баллов - показатель N0 и 1 балл

- показатель N1-3), Х2 - ИМ Кь67 (0 баллов - <20% и 1 балл - >20%),

0.4

-У

ь.

»—л

А

А»

-1 а

А—,

р=0,01

-Ч-» •••+•

р=0,01 ..........♦

р< 0,001

1 группа

2 группа

3 группа

0 400 800 1200 1600 2000 _ - 4 группа

Рис. 5. График выживаемости по Каплаиу-Мейеру больных НМКРЛ в зависимости от значения морфобиомолекулярного показателя НМКРЛ (УНМКРЛ). По оси абсцисс - время жизни (в днях), по оси ординат - доля выживших больных.

ХЗ - наибольший размер (0 баллов - <3см и 1 балл - >3см), Х4 - Ag-ЯОР-белки (М1В-1) (0 баллов - <10,56 мкм2 и 1 балл ->10,56 мкм2), Х5

- ПМЦР-Г (0 баллов-<47 и 1 балл->47), Х6-показатель пролиферации (О баллов - <218,4 и 1 балл - >218,4).

Значения медианы, нижнего и верхнего квартилей УЛк были определены как пороговые значения - соответственно 2,32, 1,58 и 3,90. Выделены четыре прогностические группы, соответственно пороговым значениям УЛк: 1 группа - с благоприятным прогнозом, УАк < 1,58; 2 группа - с относительно благоприятным прогнозом, УЛк > 1,58 и < 2,32; 3 группа - с относительно неблагоприятным прогнозом, УАк > 2,32 и < 3,90; 4 группа

- с неблагоприятным прогнозом, УЛк > 3,90. Показатель 5-летней выживаемости больных Лк составил: 61,6±18,1 % — с благоприятным прогнозом, 37,5±12,5% - с относительно благоприятным прогнозом, 13,5±8,3% - с относительно неблагоприятным прогнозом, 0%—с неблагоприятным прогнозом (после операции больные умерли в течение 1000 дней). Между группами отличия показателей выживаемости были статистически значимыми (р<0,05).

Для индивидуального прогнозирования 5-летней выживаемости больных Пк расчет морфобиомолекулярного показателя следует производить по следующей формуле:

УПк= 1,29хХ1 + 1,20хХ2 + 1,05хХЗ + 1,02хХ4 + 0,94хХ5 + 0,80*Х6,

где УПк - морфобиомолекулярный показатель при Пк, X - значение фактора (в баллах): XI - ИМ ТороИа (0 баллов - <22% и 1 балл - >22%), Х2 -А§-ЯОР-белки (М1В-1) (0 баллов-<10,67 мкм2 и 1 балл->10,67 мкм2), ХЗ - показатель N (0 баллов - показатель N0 и 1 балл - показатель N1 -3),

Х4 - ПМЦР-Г (0 баллов - <40 и 1 балл - >40), Х6 - КВ А§-ЯОР-белков (О баллов - <31,2% и 1 балл - >31,2%), Х6 - ПМЦР-Л (0 баллов - <4 и 1 балл - >4).

Значения медианы, нижнего и верхнего квартилей УПк были определены как пороговые значения - соответственно 3,25,2,09 и 4,34. Выделены четыре прогностические группы, соответственно пороговым значениям Упк: 1 группа - с благоприятным прогнозом, УПк < 2,09; 2 группа - с относительно благоприятным прогнозом, УПк > 2,09 и < 3,25; 3 группа - с относительно неблагоприятным прогнозом, УПк > 3,25 и < 4,34; 4 группа - с неблагоприятным прогнозом, УПк > 4,34. Показатель 5-летней выживаемости больных Пк составил: 84,0±10,3% - с благоприятным прогнозом, 53,0±11,5% - с относительно благоприятным прогнозом, 30,2±12,8% - с относительно неблагоприятным прогнозом, 0% - с неблагоприятным прогнозом (после операции больные умерли в течение 1000 дней). Между группами отличия показателей выживаемости были статистически значимыми (р<0,05).

При однофакторном регрессионном анализе морфобиомолекулярный показатель имел влияние на выживаемость больных НМКРЛ (%2=80,1, Р=0,46, стандартная ошибка 0,05, р<0,001), Ак (х2=36,2, Р=0,65, стандартная ошибка 0,11, р<0,001) и Пк(х2=57,1, Р=0,76, стандартная ошибка 0,01, р<0,001), превосходя по значимости клинические, клинико-морфологические и молекулярно-биологические факторы.

Таким образом, многофакторный анализ с включением всего 6 клини-ко-морфологических и молекулярно-биологических параметров в оценке индивидуального прогноза показал высокую статистическую значимость и может стать основой моделирования индивидуального прогноза в комбинированной морфобиомолекулярной модели выживаемости у больных НМКРЛ, Ак и Пк.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

НМКРЛ - немелкоклеточный рак легкого;

Ак - аденокарцинома легкого;

Пк - плоскоклеточный рак легкого;

ПМЦР-Г - плотность микроциркуляторного русла кровеносных сосудов;

ПМЦР-Л - плотность микроциркуляторного русла лимфатических сосудов;

ПП - показатель пролиферации;

ИМ - индекс метки;

ИП - индекс площади;

КВ - коэффициент вариации;

Ag-ЯOP-бeлки - аргирофильные белки ядрышкообразующих районов;

Ag-ЯОР-белки (MI В-1) - площадь Ag-ЯОР-белков в MI В-1 позитивных клетках;

SISH (silver in situ hybridization) - метод хромогенной гибридизации in situ фирмы Ventana;

TopoIIa - белок топоизомераза Ha;

«-» - небольшая или отрицательная экспрессия маркера - меньше порогового значения для соответствующего маркера;

«+» - большая или положительная экспрессия маркера - больше порогового значения для соответствующего маркера

М ± с.о. - среднее ± стандартное отклонение;

Me (и.и.) - медиана (интерквартильный интервал).

ВЫВОДЫ

1. Между неизмененным легким и HMKPJI были отличия в экспрессии молекулярно-биологических маркеров (р<0,001): ИП и KB Ag-ЯОР-белков, ИМ Ki-67, ИМ TopoIIa, площади Ag-ЯОР-белков в MIB-1 позитивных клетках, показателе пролиферации, экспрессии р53, bcl-2 и Ьах, 11МЦР-Г, ПМЦР-Л, экспрессии белка Нег2 и амплификации гена Нег2.

2. При НМКРЛ отмечались тендерные отличия в экспрессии моле-кулярно-биологических маркеров. При мужском поле по сравнению с женским отмечались большие значения ИП и KB Ag-ЯОР-белков, показателя пролиферации, ИМ Ki-67, ИМ TopoIIa, а также меньшая частота положительной экспрессии Ьах и амплификации гена Нег2.

3. Показатель Т НМКРЛ достоверно коррелировал с ИП и KB Ag-ЯОР-белков, площадью Ag-ЯОР-белков в MlB-1 позитивных клетках, показателем пролиферации (г=0,29-0,46; р<0,001). При показателе Т2-3 по сравнению с Т1 статистически значимо возрастали ИП и KB Ag-ЯОР-белков, площадь Ag-ЯОР-белков в MIB-1 позитивных клетках и показатель пролиферации.

4. Показатель N НМКРЛ был взаимосвязан с ИП Ag-ЯОР-белков, площадью Ag-ЯОР-белков в М1В-1 позитивных клетках, показателем пролиферации, экспрессией bcl-2, экспрессией белка Нег2 и состоянием СЕР17 (г=0,14-0,39; р<0,05). При показателе N1-3 по сравнению с показателем N0 отмечались большие количественные значения ИП Ag-ЯОР-белков, площади Ag-ЯОР-белков в М1В-1 позитивных клетках, показателя пролиферации, а также большая частота отрицательной экспрессии bcl-2, положительной экспрессии белка Нег2 и увеличение СЕР 17.

5. Стадия НМКРЛ была взаимосвязана с ИП Ag-ЯОР-белков, площадью Ag-ЯОР-белков в М1В-1 позитивных клетках, показателем пролиферации и экспрессией bcl-2 (г=0,18-0,35; р<0,01). При стадии I-II по сравнению со стадией I отмечались большие количественные значения ИП Ag-ЯОР-белков, площади Ag-ЯОР-белков в MIB-1 позитивных клетках, показателя пролиферации, а также большая частота отрицательной экспрессии bcl-2.

6. Гисто! енети чс с к ий тип НМКРЛ был взаимосвязан с ИГ1 и KB Ag-ЯОР-белков, показателем пролиферации, ИМ Ki-67, ИМ ТороПа, экспрессией р53, bcl-2, bax, ПМЦР-Г, экспрессией белка Нег2 и амплификация гена Нег2 (г=0,15-0,38; р<0,05). При Пк по сравнению с Ак отмечались большие количественные значения ИП и КВ Ag-ЯОР-белков, показателя пролиферации, ИМ Ki-67, ИМ Topolla, а также большая частота положительной экспрессии р53, bcl-2 и меньшая частота положительной экспрессии bax, положительной экспрессии белка Нег2 и амплификации гена Нег2.

7. Наибольший размер и степень гистологической дифференцировки НМКРЛ были взаимосвязаны с ИП и КВ Ag-ЯОР-белков, площадью Ag-ЯОР-белков в MIB-1 позитивных клетках, показателем пролиферации, ИМ Ki-67, ИМ ТороПа (г=0,21 -0,45; р<0,01). При наибольшем размере опухоли более 3 см по сравнению с опухолью менее 3 см, а также при умеренной и низкой дифференцировке по сравнению с высокодифференцирован-ной опухолью отмечались большие количественные значения ИП и КВ Ag-ЯОР-белков, площади Ag-ЯОР-белков в М1В-1 позитивных клетках, показателя пролиферации, ИМ Ki-67, ИМ ТороПа.

8. При НМКРЛ разнонаправленные характеристики пролиферации -ИП и КВ Ag-ЯОР-белков, площадь Ag-ЯОР-белков в MIB-1 позитивных клетках, показатель пролиферации, ИМ Ki-67, ИМ ТороПа - являются взаимосвязанными, отражая единый процесс повышения пролиферативного уровня. Также имелись взаимосвязи отдельных характеристик пролиферации с экспрессией р53, bcl-2, bax, белка Нег2 и состоянием гена Нег2.

9. Общая 5-летняя выживаемость больных НМКРЛ составила 41,3±3,5%. Показатель 5-летнсй выживаемости при НМКРЛ, Ак и Пк был статистически значимо взаимосвязан с рядом клинико-морфологических и молекулярно-биологических параметров опухоли: типом операции (р<0,01), показателем Т (р<0,05), наибольшим размером (р<0,001), показателем N (р<0,001), стадией заболевания (р<0,05), гистогенезом (р<0,05), дифференцировкой (р<0,001), ИП Ag-ЯОР-белков (р<0,001), КВ Ag-ЯОР-белков (р<0,001), площадью Ag-ЯОР-белков в MIB-1 позитивных клетках (р<0,001), показателем пролиферации (р<0,001), ИМ Ki-67 (р<0,01), ИМ ТороПа (р<0,01), экспрессией р53 (р<0,05), bcl-2 (р<0,05), ПМЦР-Г (р<0,05), ПМЦР-Л (р<0,05), экспрессией белка Нег2 (р<0,05), амплификацией гена Нег2 (р<0,05), увеличением СЕР17 (р<0,05).

10. Показатель 5-летней выживаемости больных НМКРЛ был взаимосвязан с коэкспрессией молекулярно-биологических маркеров - Ag-ЯОР-белков, маркеров пролиферативной активности (Ki-67, топоизомераза IIa) и Ag-ЯОР-белков в М1В-1 позитивных клетках; в меньшей степени с коэкспрессией маркеров апоптоза (р53, bcl-2 и Ьах) и ангиогенеза (ПМЦР-Г, ПМЦР-Л).

11. Неблагоприятными факторами 5-летнсй выживаемости по данным многофакторного регрессионного анализа являются: при НМКРЛ - площадь Ag-ЯОР-белков в MIB-1 позитивных клетках 10,47 мкм2 и более

(Р=1,01, р<0,001), ПМЦР-Г 43 и более (Р=0,56, р=0.006), КВ Ag-ЯOP-белков 30,5 и более ((3=0,57, р=0,007), ИМ Кл-67 25% и более (Р=0,71, р=0,009), показатель N1-3 (Р=0,86, р=0,02), наибольший размер опухоли 3 см и более (Р=0,52, р=0,04); при Ак - показатель пролиферации 218,4 и более (Р=1,68, р=0,01), ПМЦР-Г 47 и более (р=0,71, р=0,02), ИМ К1-67 20% и более (Р=1,55, р=0,02), ИМ ТороПа 14% и более (р=1,09, р=0,03), площадь А§-ЯОР-белков в М1В-1 позитивных клетках 10,56 мкм2 и более (Р=1,29, р=0,046); при Пк - ПМЦР-Г 40 и более (р=1,60, р<0,001), ИМ ТороПа 22% и более (Р=1,31, р-0,008), площадь Ag-ЯOP-бeлкoв в М1В-1 позитивных клетках 10,67 мкм2 и более (Р=1,15, р=0,009), ПМЦР-Л 4 и более (р=0,85, р=0,009), тип операции пневмонэктомия ((3=0,80, р=0,01), КВ Ag-ЯOP-бeлкoв 31,2 и более (р=0,87, р=0,01).

12. При однофакторном регрессионном анализе морфобиомолеку-лярный показатель был прямо взаимосвязан с выживаемостью больных НМКРЛ (х2=80,1, р=0,46, стандартная ошибка 0,05, р<0,001), Ак (*2=36,2, Р=0,65, стандартная ошибка 0,11, р<0,001) и Пк (^2=57,1, Р=0,76, стандартная ошибка 0,01, р<0,001). На основании оценки морфобиомолекулярного показателя 5-летняя выживаемость больных составила: при НМКРЛ 70,6±8,6% - с благоприятным прогнозом, 50,3±8,4% - с относительно благоприятным прогнозом, 29,8±7,3%- с относительно неблагоприятным прогнозом, 0% - с неблагоприятным прогнозом; при Ак 61,6±18,1% - с благоприятным прогнозом, 37,5±12,5%-с относительно благоприятным прогнозом, 13,5±8,3% - с относительно неблагоприятным прогнозом, 0% - с неблагоприятным прогнозом; при Пк 84,0±10,3% - с благоприятным прогнозом, 53,0±11,5% - с относительно благоприятным прогнозом, 30,2±12,8% - с относительно неблагоприятным прогнозом, 0% - с неблагоприятным прогнозом.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. При исследовании опсрационно-биопсийного материала с дифференциально-диагностической целью между неизмененным легким и НМКРЛ необходимо исследовать следующие молекулярио-биологические маркеры: ИП Ag-ЯOP-бeлкoв, КВ Ag-ЯOP-бeлкoв, ИМ Кь67, ИМ ТороПа, площадь Ag-ЯOP-бeлкoв в М1В-1 позитивных клетках, показатель пролиферации, экспрессию р53, Ьс1-2, Ьах, 1ТМЦР-Г, ПМЦР-Л, экспрессию белка Нег2, амплификацию гена Нег2.

2. Для оптимизации индивидуального послеоперационного прогноза и при динамическом наблюдении за больными НМКРЛ, Ак и Пк, помимо традиционных клинических данных и клинико-морфологических параметров, в группу интенсивного диспансерного наблюдения необходимо включать больных с неблагоприятными молекулярно-биологическими факторами прогноза: ИП Ag-ЯOP-бeлкoв (при НМКРЛ >6,52, при Ак>6,05, при Пк >6,96), КВ Ag-ЯOP-бeлкoв (при НМКРЛ >30,5%, при Ак >29,8%,

при Пк>31,2%), площадь Ag-ЯОР-белков в MIB-1 позитивных клетках (при HMKPJI >10,47 мкм2, при Ак >10,56 мкм2, при Пк >10,67 мкм2), показатель пролиферации (при HMKPJI >304,2, при Ак >218,4, при Пк >343,3), ИМ Ki-67 (при НМКРЛ >25%, при Ак >20%, при Пк >30%), ИМ TopoIIa (при НМКРЛ >19%, при Ак >14%, при Пк >22%), положительной экспрессией р53, отрицательной экспрессией bcl-2, ПМЦР-Г (при НМКРЛ >43, при Ак >47, при Пк >40), ПМЦР-Л (при НМКРЛ и Пк >4), положительной экспрессией белка Нсг2, амплификацией гена Нег2, увеличением СЕР17.

3. Для индивидуального прогнозирования 5-летней выживаемости больных НМКРЛ необходимо учитывать следующие факторы: показатель N, площадь Ag-ЯОР-белков в MIB-1 позитивных клетках, наибольший размер опухоли, ПМЦР-Г, ИМ Ki-67, КВ Ag-ЯОР-белков. Расчет следует производить по следующей формуле:

Y нмкрл = 1,19*Х1 +0,91хХ2 + 0,57хХЗ + 0,56хХ4 + 0,45*Х5 + 0,43*Х6,

гдеУнмкрд-морфобиомолекулярный показатель при НМКРЛ, Х-значение фактора (в баллах): X1 - показатель N (0 баллов - показатель N0 и 2 балла

- показатель N1-3), Х2 - площадь Ag-ЯОР-белков в MIB-1 позитивных клетках (0 баллов -<10,47 мкм2 и 2 балла—>10,47 мкм2), ХЗ - наибольший размер (0 баллов - <3см и 1 балл - >3см), Х4 - ПМЦР-Г (0 баллов - <43 и 1 балл - >43), Х5 - ИМ Ki-67 (0 баллов - <25% и 1 балл - >25%), Х6 - КВ Ag-ЯОР-белков (0 баллов - <30,5% и 1 балл - >30,5%).

4. Для индивидуального прогнозирования 5-летней выживаемости больных Ак необходимо учитывать следующие факторы: показатель N, ИМ Ki-67, наибольший размер опухоли, площадь Ag-ЯОР-белков в MIB-1 позитивных клетках, ПМЦР-Г, показатель пролиферации. Расчет следует производить по следующей формуле:

УЛк = 0,96хХ1 + 0,89хХ2 + 0,85хХЗ + 0,73хХ4 + 0,73хХ5 + 0,70хХ6, где YAk - морфобиомолекулярный показатель при Ак, X - значение фактора (в баллах): XI - показатель N (0 баллов - показатель N0 и 1 балл

- показатель N1-3), Х2 - ИМ Ki-67 (0 баллов - <20% и 1 балл - >20%), ХЗ - наибольший размер (0 баллов - <3см и 1 балл - >3см), Х4 - площадь Ag-ЯОР-белков в MIB-1 позитивных клетках (0 баллов - <10,56 мкм2 и 1 балл - >10,56 мкм2), Х5 - ПМЦР-Г (0 баллов - <47 и 1 балл - >47), Х6 -показатель пролиферации (0 баллов - <218,4 и 1 балл - >218,4).

5. Для индивидуального прогнозирования 5-летней выживаемости больных Пк необходимо учитывать следующие факторы: ИМ TopoIIa, площадь Ag-ЯОР-белков в М1В-1 позитивных клетках, показатель N, ПМЦР-Г, КВ Ag-ЯОР-белков, ПМЦР-Л. Расчет следует производить по следующей формуле:

УПк= 1,29хХ1 + 1,20хХ2 + 1,05хХЗ + 1,02хХ4 + 0,94хХ5 + 0,80хХ6, где УПк - морфобиомолекулярный показатель при Пк, X - значение фактора (в баллах): XI - ИМ TopoIIa (0 баллов - <22% и 1 балл - >22%), Х2

- площадь Ag-ЯОР-белков в MIB-1 позитивных клетках (0 баллов - <10,67 мкм2 и 1 балл - >10,67 мкм2), ХЗ - показатель N (0 баллов - показатель

N0 и 1 балл - показатель N1-3), Х4 - ПМЦР-Г (0 баллов - <40 и 1 балл

- >40), Х6 - KB Ag-ЯОР-белков (0 баллов - <31,2% и 1 балл - >31,2%), Х6 - ПМЦР-Л (0 баллов - <4 и 1 балл - >4).

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Кобяков Д.С., Лазарев А.Ф., Авдалян A.M., Бычкова Е.Ю., Климачев В.В. Пролиферативная активность и степень дифференцировки немел-коклеточного рака легкого // Сибирский онкологический журнал. - 2009.

- Приложение № 2. - С. 98-99.

2. Лазарев А.Ф., Кобяков Д.С., Авдалян A.M., Бычкова Е.Ю., Климачев В.В. Иммунофенотип p53/bcl-2 и пролиферативная активность рака легкого // Сибирский онкологический журнал. - 2009. - Приложение №

2. - С. 116-117.

3. Кобяков Д.С., Лазарев А.Ф., Климачев В.В., Авдалян A.M., Бычкова Е.Ю. Особенности пролиферативной активности рака легкого и лимфо-генное метастазирование // Материалы российской научно-практической конференции с международным участием. — Барнаул. - 2009. - С. 91-92.

4. Лазарев А.Ф., Кобяков Д.С., Климачев В.В., Авдалян A.M., Бычкова Е.Ю. Размер опухоли и особенности экспрессии р53 и bcl-2 в раке легкого // Материалы российской научно-практической конференции с международным участием. - Барнаул. - 2009. - С. 96.

5. Бобров И.П., Авдалян A.M., Климачев В.В., Лазарев А.Ф., Гервальд В.Я., Долгатов А.Ю., Самуйленкова О.В., Ковригин М.В., Кобяков Д.С. Модификация гистохимического метода выявления ядрышковых организаторов на гистологических срезах // Архив патологии. - 2010. - №

3.-С. 35-37.

6. Кобяков Д.С., Бобров И.П., Авдалян A.M., Климачев В.В., Лазарев А.Ф. Аргирофильные белки районов ядрышковых организаторов в аденомах с различной степенью дисплазии и аденокарциноме толстой кишки // Архив патологии. - 2010. - № 4. - С. 16-20.

7. Бычкова Е.Ю., Кобяков Д.С., Климачев В.В., Авдалян A.M., Бобров И.П., Круглова Н.М., Лазарев А.Ф. Взаимосвязь между аргирофильными белками районов ядрышковых организаторов и стадией (по TNM системе) в плоскоклеточном раке легкого // Материалы российской научно-практической конференции с международным участием. - Барнаул. - 2013. - С.

46-47.

8. Бычкова Е.Ю., Кобяков Д.С., Климачев В.В., Авдалян A.M., Бобров И.П., Круглова Н.М., Лазарев А.Ф. Взаимосвязь между аргирофильными белками районов ядрышковых организаторов и стадией (по TNM системе) в плоскоклеточном раке легкого // Материалы российской научно-практической конференции с международным участием. - Барнаул. - 2013. - С.

47-48.

9. Кобяков Д.С., Климачев В.В., Авдалян A.M., Бобров И.П., Бычкова Е.Ю., Лазарев А.Ф. Клинико-морфологические параллели количества аргирофильных белков районов ядрышковых организаторов при адено-карциноме легкого // Российский онкологический журнал. - 2013. -№

1. - С. 28-32.

10. Кобяков Д.С., Климачев В.В., Авдалян A.M., Бобров И.П., Бычкова Е.Ю., Лазарев А.Ф., Лушникова Е.Л., Непомнящих Л.М. Взаимосвязь между аргирофильными белками районов ядрышковых организаторов и стадией нлоскоклеточного рака легкого // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. - 2013. - Т. 156, № 7. - С. 93-97.

11. Кобяков Д.С., Климачев В.В., Авдалян A.M., Бобров И.П., Бычкова Е.Ю., Лазарев А.Ф. Аргирофильные белки районов ядрышковых организаторов и клинико-морфологические параллели при аденокарциноме легкого // Вопросы онкологии. - 2013. - Приложение к № 3. - С. 80-81.

12. Лазарев А.Ф., Кобяков Д.С., Климачев В.В., Авдалян A.M., Бобров И.П. Взаимосвязь аргирофильных белков ядрышкообразующих районов и антигена Ki-67 с клинико-морфологическими параметрами и выживаемостью при аденокарциноме легкого // Вопросы онкологии. - 2013. - Приложение к № 3. - С. 90-91.

13. Кобяков Д.С., Климачев В.В., Авдалян A.M., Бобров И.П., Лазарев А.Ф. Взаимосвязь аргирофильных белков ядрышкообразующих районов и антигена Ki-67 с клинико-морфологическими параметрами и выживаемостью при аденокарциноме легкого // Российский онкологический журнал. - 2013. - № 3. - С. 21-27.

14. Кобяков Д.С., Климачев В.В., Авдалян A.M., Бобров И.П., Лазарев А.Ф., Лушникова Е.Л., Непомнящих Л.М. Взаимосвязь аргирофильных белков ядрышкообразующих районов и антигена Ki-67 с клинико-морфологическими параметрами и выживаемостью при плоскоклеточном раке легкого // Клеточные технологии в биологии и медицине. - 2014. - №

2. - С. 97-102.

15. Кобяков Д.С., Климачев В.В., Авдалян A.M., Бобров И.П., Бычкова Е.Ю., Лазарев А.Ф. Аргирофильные белки районов ядрышковых организаторов и клинико-форфологические параллели при аденокарциноме легкого // Сибирский онкологический журнал. - 2013. - Приложение № 2. - С. 36-37.

16. Лазарев А.Ф., Кобяков Д.С., Климачев В.В., Авдалян A.M., Бобров И.П., Бычкова Е.Ю. Взаимосвязь между аргирофильными белками районов ядрышковых организаторов и стадией (по TNM системе) в плоскоклеточном раке легкого // Сибирский онкологический журнал. - 2013. - Приложение № 2. - С. 46-47.

17. Кобяков Д.С., Климачев В.В., Авдалян A.M., Бобров И.П., Лазарев А.Ф. Взаимосвязь аргирофильных белков ядрышкообразующих районов и антигена Ki-67 с клинико-морфологическими параметрами и выживаемостью при аденокарциноме легкого // Сибирский онкологический журнал. - 2013. - № 5. - С. 5-11.

18. Кобяков Д.С., Климачев В.В., Авдалян A.M., Бобров И.П., Бычкова Е.Ю., Лазарев А.Ф. Взаимосвязь между аргирофильными белками районов ядрышковых организаторов и стадией (по TNM системе) в плоскоклеточном раке легкого // Материалы всероссийской конференции с международным участием «Современные подходы в клинико-морфологической диагностике и лечении заболеваний человека» памяти О.К.Хмельницкого. - Санкт-Петербург. - 2013. - С. 169-171.

19. Лазарев А.Ф., Кобяков Д.С., Климачев В.В., Авдалян A.M., Бобров И.Г1. Взаимосвязь аргирофильных белков ядрышкообразующих районов и антигена Ki-67 с выживаемостью при аденокарциноме легкого // Материалы всероссийской конференции с международным участием «Современные подходы в клинико-морфологической диагностике и лечении заболеваний человека» памяти О.К.Хмельницкого. - Санкт-Петербург. -2013.-С. 198-199.

20. Кобяков Д.С., Лазарев А.Ф., Климачев В.В., Авдалян A.M., Бобров И.П., Бычкова Е.Ю., Лушникова Е.Л., Непомнящих Л.М. Взаимосвязь экспрессии белка и амплификации гена HER2/NEU с клинико-морфологическими параметрами и выживаемостью при немелкоклеточном раке легкого (исследование методами иммуногистохимии и гибридизации in situ) // Материалы всероссийской конференции, посвященной 155-летию кафедры патологической анатомии Военно-медицинской академии им. С.М. Кирова «Актуальные вопросы патологической анатомии в мирное и военное время». - Санкт-Петербург. - 2014. - С. 115-117.

21. Лазарев А.Ф., Кобяков Д.С., Климачев В.В., Авдалян A.M., Бобров И.П., Бычкова Е.Ю., Лушникова Е.Л., Непомнящих Л.М. Исследование уровня экспрессии топоизомеразы Па во взаимосвязи с клинико-морфоло-гическими параметрами и пролиферацией (по выявлению аргирофильных белков ядрышкообразующих районов и антигена Ki-67) при аденокарциноме легкого // Материалы всероссийской конференции, посвященной 155-летию кафедры патологической анатомии Воснно-медицинской академии им. С.М. Кирова «Актуальные вопросы патологической анатомии в мирное и военное время». - Санкт-Петербург. - 2014. - С. 128-130.

22. Кобяков Д.С., Климачев В.В., Авдалян A.M., Бобров И.П., Лазарев А.Ф., Лушникова Е.Л., Непомнящих Л.М. Исследование уровня экспрессии топоизомеразы Па во взаимосвязи с клинико-морфологическими параметрами и пролиферацией (по выявлению аргирофильных белков ядрышкообразующих районов и антигена Ki-67) при аденокарциноме легкого // Вопросы онкологии. - 2014. - № 2.-С. 63-68.

23. Кобяков Д.С., Климачев В.В., Авдалян A.M., Бобров И.П., Лазарев А.Ф. Исследование активности топоизомеразы На во взаимосвязи с клинико-морфологическими пара-метрами и пролиферацией (по выявлению аргирофильных белков ядрышкообразующих районов и антигена Ki-67) при плоскоклеточпом раке легкого // Российский онкологический журнал. - 2014. -№ 2. - С. 22-27.

24. Кобяков Д.С., Климачев В.В., Авдалян A.M., Бобров И.П., Бычкова Е.Ю., Лазарев А.Ф. Her-2/neu, топоизомераза Па, р53 и клинико-морфо-логические параллели при немелкоклеточном раке легкого.// Материалы конференции по фундаментальной онкологии «Петровские чтения». -Санкт-Петербург. - 2014. - С. 47.

25. Кобяков Д.С., Авдалян A.M., Бобров И.П., Бычкова Е.Ю., Лазарев А.Ф., Лушникова Е.Л., Непомнящих Л.М. Взаимосвязь экспрессии белка и амплификации гена HER2/NEU с клинико-морфологическими параметрами немелкоклеточного рака легкого // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. - 2014. - Т. 157, № 6. - С.761-766.

26. Лазарев А.Ф., Кобяков Д.С., Авдалян A.M., Лушникова Е.Л., Непомнящих Л.М. Взаимосвязь аргирофильных белков ядрышкообразующих районов в Ki-67 позитивных клетках с клинико-морфологическими параметрами и выживаемостью при аденокарциноме легкого // Клеточные технологии в биологии и медицине. - 2014. - № 3. - С. 169-173.

27. Авдалян A.M., Кобяков Д.С., Климачев В.В., Бобров И.П., Бычкова Е.Ю., Круглова Н.М., Лазарев А.Ф., Лушникова Е.Л., Непомнящих Л.М. Исследование пролиферации (по выявлению аргирофильных белков ядрышкообразующих районов и антигена Ki-67) при плосколкеточном раке легкого // Материалы российской научно-практической конференции с международным участием. - Барнаул. - 2014. - С. 44.

28. Бычкова Е.Ю., Кобяков Д.С., Авдалян A.M., Бобров И.П., Лазарев А.Ф., Лазарев С.А., Круглова Н.М., Лушникова Е.Л., Непомнящих Л.М. Морфофункциональная активность клеток (по количеству аргирофильных белков области ядрышковых организаторов) как важный параметр прогноза при немелкоклеточном раке легкого // Материалы российской научно-практической конференции с международным участием. - Барнаул.-2014.-С. 53-54.

29. Кобяков Д.С., Лазарев А.Ф., Климачев В.В., Авдалян A.M., Бобров И.П., Бычкова Е.Ю., Лушникова Е.Л., Непомнящих Л.М. Взаимосвязь экспрессии белка и амплификации гена HER2/NEU с клинико-морфоло-гическими параметрами и выживаемостью при немелкоклеточном раке легкого (исследование методами иммуногистохимии и гибридизации in situ)// Материалы российской научно-практической конференции с международным участием. - Барнаул. - 2014. - С. 72-73.

30. Круглова Н.М., Кобяков Д.С., Авдалян A.M., Лазарев А.Ф., Лушникова EJI., Непомнящих Л.М. Взаимосвязь маркеров апоптоза (р53, bcl-2, Ьах) с клинико-морфологическими параметрами и выживаемостью при немелкоклеточном раке легкого// Материалы российской научно-практической конференции с международным участием. - Барнаул. - 2014. - С. 74-75.

31. Лазарев А.Ф., Кобяков Д.С., Климачев В.В., Авдалян A.M., Бобров И.П., Бычкова Е.Ю., Лушникова Е.Л., Непомнящих Л.М.Исследование активности топоизомеразы IIa во взаимосвязи с клинико-морфологическими параметрами и пролиферативной активностью при плоскоклеточном раке

легкого. // Материалы российской научно-практической конференции с международным участием. - Барнаул. - 2014. - С. 78.

32. Кобяков Д.С., Климачев В.В., Авдалян A.M., Бобров И.П., Лазарев А.Ф. Клинико-морфологическая значимость определения уровня экспрессии фермента гиразы топоизомеразы На при аденокарциноме легкого // Проблемы клинической медицины. - 2013. - № 2. - С. 29-34.

33. Кобяков Д.С., Лазарев А.Ф., Авдалян A.M. Взаимосвязь экспрессии белка и амплификации гена HER2/NEU с клинико-морфологическими параметрами и выживаемостью при немелкоклеточном раке легкого (исследование методами иммуногистохимии и гибридизации in situ). Материалы VIII съезда онкологов и радиологов СНГ и Евразии // Евразийский онкологический журнал. -2014. -№3. - С. 360-361.

34. Кобяков Д.С., Лазарев А.Ф., Авдалян A.M., Бычкова Е.Ю. Исследование уровня экспрессии топоизомеразы Па во взаимосвязи с клинико-морфологическими параметрами и пролиферацией (по выявлению аргирофильных белков ядрышкообразующих районов и антигена Ki-67) при аденокарциноме легкого. Материалы VIII съезда онкологов и радиологов СНГ и Евразии // Евразийский онкологический журнал. - 2014. -№3.-С. 361.

35. Кобяков Д.С., Бычкова Е.Ю., Авдалян A.M., Бобров И.П., Лазарев А.Ф., Лазарев С.А., Круглова Н.М., Лушникова Е.Л., Непомнящих A.M. Взаимосвязь аргирофильных белков ядрышкообразующих районов с клинико-морфологическими параметрами и выживаемостью при немелкоклеточном раке легкою // Онкология. - 2014. - № 4. - С.19-24.

36. Лазарев А.Ф., Кобяков Д.С., Авдалян A.M., Лушникова Е.Л., Непомнящих Л.М., Климачевский А. А. Исследование аргирофильных белков ядрышкообразующих районов и антигена Ki-67 при немелкоклеточном раке легкого // Фундаментальные исследования. - 2014. - № 10. - С. 523-529.

37. Кобяков Д.С., Авдалян A.M., Лазарев А.Ф., Климачев В.В., Бобров И.П. Взаимосвязь клинико-морфологических параметров и выживаемост и при аденокарциноме легкого с активностью ядрышковых организаторов в MIB-1 позитивных клетках. Материалы конференции XVI11 Российский онкологический конгресс с международным участием // Злокачественные опухоли. - Москва. -2014. - № 3. - С. 57-59.

38. Кобяков Д.С., Лазарев А.Ф., Лушникова Е.Л., Непомнящих Л.М. Взаимосвязь маркеров апоптоза (р53, bcI-2, bax) с клинико-морфологическими параметрами и выживаемостью при немелкоклеточном раке легкого // Сибирский онкологический журнал. - 2014. - № 5. - С. 10-16.

39. Кобяков Д.С., Авдалян A.M., Лазарев А.Ф., Лушникова Е.Л., Непомнящих Л.М. Взаимосвязь клинико-морфологичсских параметров и выживаемости при немелкоклеточ-ном раке легкого с экспрессией белка и амплификацией гена HER2/NEU // Российский онкологический журнал. - 2014. - № 5. - С. 31-36.

40. Кобяков Д.С., Авдалян A.M., Климачев В.В., Лазарев А.Ф., Луш-никова Е.Л., Непомнящих Л.М. Немелкоклеточный рак легкого: статус онкогена HER2/NEU (иммуногистохимический анализ и гибридизация in situ) // Архив патологии. - 2015. - Т. 77, № 2. (принята в печать).

41. Kobyakov DS, Klimachev VV, Avdalyan AM, Bobrov IP, Bychkova EY, Lazarev AF, Lushnikova EL, Nepomnyashchikh LM. Relationship between the argyrophilic proteins of the nucleolar organizer region and stage of squamous-cell carcinoma of the lung // Bull. Exp. Biol. Med. - 2013. - Vol.

156. №1.-P. 81-85.

42. Kobyakov D., Klimachev V., Avdalyan A., Bobrov I., Bychkova E., Kruglova N., Lazarev A., Lushnikova E., Nepomnyashchikh L. Association between Argyrophilic Proteins of Nucleolar Organizer Regions, Clinicomor-phological Parameters, and Survival in Non-Small-Cell Lung Cancer // Lung Cancer International. - 2014. Article ID 891917, 7 pages.

43. Kobyakov DS, Klimachev VV, Avdalyan AM, Bobrov IP, Bychkova EY, Kruglova NM, Lazarev AF, Lushnikova EL, Nepomnyashchikh LM. Argyrophilic proteins of nucleolar organizer regions and proliferative activity of cells in squamous cell carcinoma of the lung // Bull. Exp. Biol. Med. - 2014. - Vol. 157, № 5. - P. 677-682.

44. Kobyakov D.S., Bychkova E.Yu., Avdalyan A.M., Bobrov I.P., Lazarev A.F., Lazarev S.A., Kruglova N.M., Lushnikova E.L., Nepomnyaschikh L.M. Interrelation of Argyrophilic Proteins of Nucleolar Organizer Regions and Ki-67 with Clinical and Morphological Parameters and Survival in Patients with Non-small Cell Lung Cancer // British Journal of Medicine & Medical Research. - 2014. - Vol. 4, № 22. - P. 3941-3953.

45. Kobyakov DS, Avdalyan AM, Bobrov IP, Bychkova EY, Lazarev AF, Lushnikova EL, Nepomnyashchikh LM. Correlation of HER-2/Neu Protein Expression and HER2 Gene Amplification with Clinical Morphological Parameters of Nonsmall Cell Lung Cancer // Bull. Exp. Biol. Med. - 2014. - Vol.

157, № 6. - P. 789-793.

46. Lazarev AF, Kobyakov DS, Avdalyan AM, Lushnikova EL, Nepomnyashchikh LM. Relationship of argyrophilic proteins of nucleolal organizer regions in Ki-67(+) cells with clinical and morphological parameters in lung adenocarcinoma // Bull. Exp. Biol. Med. - 2014. - Vol. 158, № 1. - 145-149.

47. Kobyakov D.S., Avdalyan A.M., Lazarev A.F., Lushnikova E.L., Nepomnyashchikh L.M. Argyrophilic nucleolar organizer region in MIB-1 positive cells in non-small cell lung cancer: clinicopathological significance and survival // Cancer Biology & Medicine. - 2014. - Vol. 11. - P. 264-269.

Соискатель

Д.С.Кобяков

Подписано в печать 23.12.2014. Формат 60x84/16. Гарнетура Тайме. Бумага Zoom plus. Усл. печ. л. 2,0. Тираж 100 экз. Заказ № 08.

Отпечатано в типографии ОАО "НИИ систем" Новосибирск-58, ул. Русская. 39. т. 306-67-39

15--430$

2010016347

2010016347