Автореферат и диссертация по медицине (14.00.23) на тему:Сравнительная морфофункциональная характеристика эндокриноцитов семенников позвоночных

^ л

На правах рукописи

л,

Шевлюк Николай Николаевич

СРАВНИТЕЛЬНАЯ МОРФОФУНКЦИОНАЛЬ-НАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ЭНДОКРИНОЦИТОВ СЕМЕННИКОВ ПОЗВОНОЧНЫХ (ОНТОГЕНЕЗ, СЕЗОННЫЕ ИЗМЕНЕНИЯ, ДЕЙСТВИЕ ЭКСТРЕМАЛЬНЫХ ФАКТОРОВ)

14.00.23 - гистология, цитология, эмбриология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

Москва 1997

Работа выполнена на кафедре гистологии, цитологии и эмбриологии Оренбургской государственной медицинской академии и на кафедре гистологии и эмбриологии педфака Российского государственного медицинского университета.

Научные консультанты: заслуженный деятель науки Российской

Федерации, академик РАМН, доктор медицинских наук, профессор О.Б.Волкова; академик МАИ, чл.-корр. АЕ РФ, доктор биологических наук, профессор А. А. Стад -НИКОВ

Официальные оппоненты: академик РАМН, доктор биологических

наук, профессор И.Г.Акмаев; доктор медицинских наук, профессор Т.К. Дубовая;

доктор биологических наук, профессор Л.Ф.Курило

Ведущее учреждение - Российский Университет Дружбы народов

Защита диссертации состоится "_"_1997 г.

в 1400 часов на заседании Диссертационного совета Д 084.14.04. при Российском государственном медицинском университете (117869, г. Москва, ул. Островитянова, 1).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке РГМУ.

Автореферат разослан " У " Ше^Ас¿- 1997 г.

Ученый секретарь Диссертационного совета, доктор медицинских наук,

профессор А.Н.Тихомиров

ВВЕДЕНИЕ

1. Актуальность проблемы. Одним из важнейших факторов, определяющих гомеостаз для развивающихся половых клеток, являются интерстициальные эндокриноциты семенников (клетки Лейдига), которые не только модулируют действие гонадотропных гормонов, но также оказывают специфическое действие на орган, участвуя в обеспечении всех сторон гистофизиолопш семенников.

Анализ исследований последних десятилетий по структурно-функциональной характеристике семенников показал, что наибольшее число работ, касающихся эндокринных структур мужской гонады, выполнено на материале лабораторных и некоторых сельскохозяйственных животных [Lording D.W., DeKretserD.M., 1972; Невструе-ва В.В., 1974; Gravis С., 1977; Van Staaten H., W., Wensing C.I., 1977; Aoki A., Fawcett D.W., 1978; David-Ferreira J.P. et al., 1978; Peter W. et al., 1980; Дедов В.И., 1980; Mori H., Christensen A.К., 1980; Wrobel К. et al., 1987, 1988; Jonson L., Neaves W.B., 1981; Jonson L., Thompson D.L., 1987; Zirkin B.R., Ewing L.L., 1987; Angelova P. et al., 1989 и др.]. Обширная литература посвящена изучению эндокриноцитов семенников человека [Mietkiewski К. et al., 1962; Волкова О.В., Пекарский М.И., 1976; Amat P. et al., 1986; Nistal M. et al., 1986; Schulze С., 1987; Prince F.P., 1990 и др.]. К настоящему времени выяснены многие аспекты строения и функций интерстициальных эндокриноцитов семенников различных позвоночных, сформулированы основные положения о закономерностях развития эндокриноцитов семенников в эмбриональном и постнатальном онтогенезе позвоночных животных и человека. Получены ультраструктурные характеристики клеток Лейдига лабораторных и сельскохозяйственных животных, а также человека. В то же время ощущается дефицит информации о данных клетках рыб, амфибий, рептилий, птиц и диких млекопитающих. Крайне недостаточно работ сравнительного плана, посвященных вопросам эволюционной динамики эндокриноцитов. Следует констатировать фрагментарность и противоречивость информации по вопросам классификации клеток Лейдига, источников их возникновения в эмбриональном и постнатальном онтогенезе. Недостаточно изучены механизмы обновления в популяции пубертатных эндокриноцитов семенников позвоночных. Дискуссионными являются сведения об адаптивных и реактивных изменениях клеток Лейдига в условиях воздействия на организм различных дестабилизирующих факторов. Слабо изучена динамика вариаций в популяции интерстициальных эндокриноцитов при сезонных изменениях репродуктивной активности, а имеющиеся сведения по этому вопросу противоречивы. Много неясного остается в отношении роли и значимости меж- и внутрисистемных механизмов регуляции секреторной функции эндокриноцитов.

Все это обосновывает актуальность проведения исследования, посвященного вопросам сравнительной характеристики структурно-функциональных особенностей интерстициальных эндокриноцитов семенников различных позвоночных как одного из звеньев сложной системы центральных и местных регуляторных факторов, взаимодействующих в семеннике и обеспечивающих оптимальные условия для сперматогенеза. Изучение эндокриноцитов в сравнительно-эволюционном аспекте и в условиях различных экспериментальных моделей позволит получить новые констатации, весьма ценные как для биологии тканей, так и прикладной эндокринологии.

2. Цель и задачи исследования. Целью настоящей работы является сравнительное исследование интерстициальных эндокриноцитов семенников представителей различных классов позвоночных в онтогенезе, при сезонных колебаниях репродуктивной активности, в условиях действия экстремальных факторов; определение диапазона структурно-функциональной изменчивости и адаптационных свойств эндокриноцитов в указанных условиях; исследование пара- и ауток-ринных внутригонадных отношений. В соответствии с поставленной целью были определены следующие задачи:

1. Выяснение динамики дифференцировки и функциональной активности интерстициальных эндокриноцитов семенников позвоночных на этапах онтогенеза.

2. Выяснение коррелятивных взаимоотношений между параметрами морфофункционального состояния интерстициальных эндокриноцитов и степенью активности сперматогенеза в извитых канальцах в онтогенезе, при сезонных изменениях репродуктивной активности и в условиях действия экстремальных дестабилизирующих факторов.

3. Исследование характера взаимоотношений интерстициальных эндокриноцитов с их микроокружением (сосуды, фибробласты и др.).

4. Определение реактивных и адаптивных возможностей интерстициальных эндокриноцитов в условиях воздействия различных дестабилизирующих факторов (гипофизэктомия, разрушение и стимуляция различных областей гипоталамуса, эмоционально-болевой стресс, умеренная дегидратация организма, воздействие комплекса техногенных факторов санитарно-защитной зоны газзавода).

5. Установление диапазона дегерминационных потенций интерстициальных эндокриноцитов семенников млекопитающих животных при непосредственном влиянии на них некоторых нейропепти-дов (окситоцин, вазопрессин) в условиях их культивирования in vitro, а также in vivo в диффузионных камерах.

3. Научная новизна исследования. Получены новые данные о структурной организации ингерстициальной ткани семенников позвоночных, выявлены различные разновидности ее морфологической

организации. Впервые представлена ультраструктурная характеристика интерстициальных эндокриноцитов семенников ряда позвоночных (ящерица прыткая, суслики малый и рыжеватый, сурок байбак, пеструшка степная, козел оренбургской пуховой породы). Описана морфология интерстициальных эндокриноцитов семенников ряда животных естественных биоценозов в условиях сезонных изменений их репродуктивной активности. Обнаружены новые факты, свидетельствующие о наличии феномена активизации эндокринных и герминативных структур семенников ряда позвоночных (наземные грызуны из семейства беличьих - суслики малый и рыжеватый, сурок байбак) вне сезона размножения. Впервые с использованием светоопти-ческих и электронномикроскопических методов описаны морфологические эквиваленты повышения секреторной активности эндокриноцитов семенников перед залеганием этих животных в зимнюю спячку. Обнаружены явления параллелизма морфогенетических преобразований в популяциях эндокриноцитов семенников амфибий, рептилий птиц и млекопитающих на этапах цирканнуального ритма репродукции. Получены дополнительные доказательства принадлежности пубертатной популяции эндокриноцитов семенников позвоночных к клеточным популяциям стабильного типа. Обнаружено позитивное влияние слабых стрессорных воздействий на активизацию репликативного и репаративного синтеза ДНК в ядрах эндокриноцитов. Получены новые констатации, касающиеся временной организации функционирования эндокриноцитов и герминативных структур семенников ряда животных естественных биоценозов, которые могут свидетельствовать о наличии у этих позвоночных эндогенного цирканнуального ритма в функционировании эндокринных и герминативных структур семенников. Выявлены новые доказательства значимости паракринных взаимоотношений в семенниках для секреторной активности эндокриноцитов мужских гонад.

Получены новые данные о характере реактивных и адаптивных преобразований эндокриноцитов семенников в условиях воздействия различных дестабилизирующих факторов (эмоционально-болевой стресс, умеренная дегидратация организма, стимуляция и разрушение различных областей гипоталамуса, гипофизэктомия, воздействие техногенных факторов газзавода).

Впервые установлено прямое позитивное влияние нонапепти-дов ядер переднего гипоталамуса на сохранность культивируемых интерстициальных эндокриноцитов семенников в условиях органных культур in vitro и в диффузионных камерах in vivo, а также на диапазон их реактивных и адаптивных преобразований при культивировании.

4. Научно-практическая значимость работы. Результаты исследования расширяют и дополняют сведения по морфофункциональ-

ной характеристике эндокриноцитов семенников представителей различных классов позвоночных. Уточнен ряд дискуссионных представлений, касающихся ультраструктурных особенностей эндокриноцитов. Результаты работы позволили уточнить ряд спорных теоретических вопросов, касающихся реализации детерминационных свойств интерстициальных эндокриноцитов семенников в процессе морфо-генетических преобразований на этапах эмбрионального и постна-тального онтогенеза и в условиях сезонных изменений репродуктивной активности. Результаты исследования дополняют существующие представления о вне- и внутрисистемных механизмах регуляции секреторного процесса в эндокриноцитах. Полученные в результате исследования факты углубляют существующие представления о роли и значимости различных областей гипоталамуса в регуляции морфоге-нетических процессов в популяции интерстициальных эндокриноцитов семенников. В своей совокупности полученные результаты создают предпосылки для дальнейшего исследования морфогенети-ческих процессов в семенниках, уточняют и углубляют представления о факторах и механизмах регуляции интратестикулярного гомео-стаза.

5. Внедрение. Полученные сведения могут быть использованы в учебном процессе при изучении морфологических, функциональных и экологических аспектов репродукции в соответствующих разделах анатомии, гистологии, физиологии, зоологии позвоночных и экологии.

Материалы по вопросам адаптивных и реактивных морфогене-тических преобразований в популяции эндокриноцитов в условиях воздействия различных дестабилизирующих факторов могут быть использованы с целью выработки объективных критериев оценки отклонений от нормальных состояний семенников при анализе органов репродуктивной системы в различных экстремальных условиях.

Сферой внедрения полученных результатов могут быть лаборатории НИИ и кафедры вузов, исследующие вопросы морфологических, физиологических и экологических аспектов репродукции.

Материалы работы используются в учебном процессе при лекционном и практическом преподавании на кафедрах гистологии Оренбургской, Омской, Тюменской и Ярославской медицинских академий, Самарского медицинского университета, на кафедрах анатомии и гистологии, акушерства и патанатомии Оренбургского аграрного университета, на кафедрах зоологии, анатомии и физиологии человека и животных Оренбургского педагогического университета.

6. Основные положения, выносимые на защиту.

1. Морфофункциональная характеристика интерстициальных эндокриноцитов семенников представителей различных классов позвоночных (амфибии, рептилии, птицы, млекопитающие) свидетельст-

вует о наличии параллелизмов в структурной организации и функциональной активности этих структур в процессах эволюционных преобразований органов репродуктивной системы позвоночных.

2. В процессе реализации цирканнуального ритма репродуктивной активности в популяциях эндокриноцитов семенников закономерно проявляются морфологические эквиваленты, отражающие изменения стероидогенной функции эндокриноцитов. Пик функциональной активности эндокриноцитов опережает по времени пик активности сперматогенеза.

3. У ряда исследованных позвоночных (лягушка озерная, грызуны из семейства беличьих - суслики малый и рыжеватый, сурок байбак) выявляются два пика морфологически идентифицируемой активизации секреторной активности эндокриноцитов: в сезон размножения и вне его, перед залеганием животных в зимнюю спячку.

4. Возникновение новых эндокриноцитов семенников у половозрелых представителей позвоночных может происходить в процессе дифференпировки их из малодифференцированных предшественников, постоянно присутствующих в интерстициальной ткани органа.

5. Адаптивные и реактивные преобразования эндокриноцитов в ответ на действие различных дестабилизирующих факторов характеризуются широким спектром морфофункциональных проявлений в зависимости от характера стрессора, его силы и длительности действия. Слабые стрессорные воздействия оказывают позитивное влияние на ДНК-синтетическую способность эндокриноцитов. А сильные стрессоры приводят к угнетению процессов дифференцировки и секреторной активности эндокриноцитов.

6. Паракринные взаимоотношения в семеннике являются одним из существенных факторов, модулирующих адаптивные и реактивные сдвиги в популяции эндокриноцитов, возникающие под воздействием различных (как регуляторных, так и дестабилизирующих факторов).

7. Нонапептидэргические нейроны ядер переднего гипоталамуса оказывают позитивное влияние на сохранность интерстициальных эндокриноцитов семенников в условиях их совместного сокультиви-рования в двойных диффузионных камерах.

7. Апробация работы. Материалы диссертации доложены и обсуждены на 2-й конференции "Актуальные проблемы развития человека и млекопитающих" [Симферополь, 1983], научной конференции "Мезенхима и ее производные в онто- и филогенезе", посвященной 100-летию со дня рождения академика А.А.Заварзина [Пермь, 1986], X Всесоюзном съезде анатомов, гистологов и эмбриологов [Винница, 1986], на III Всесоюзной конференции "Эндокринная система организма и вредные факторы внешней среды" [Са-

марканд, 1987], на зональной конференции морфологов "Эпителий и соединительная ткань в нормальных, экспериментальных и патологических условиях [Тюмень, 1988], на областной конференции "Медицинские аспекты охраны производственной и окружающей среды" [Оренбург, 1989], на VII зональной научно-практической конференции молодых ученых-медиков "Медико-биологические и экологические проблемы развития Севера" [Архангельск, 1990], на научной конференции "Реактивность и регенерация тканей" [Ленинград, 1990], на IV Всесоюзной конференции "Эндокринная система организма и вредные факторы окружающей среды" [Иваново, 1991], на научно-практической конференции "Компенсаторно-приспособительные механизмы внутренних органов и головного мозга в норме, патологии и эксперименте" [Тюмень, 1991], на XI Всесоюзном съезде анатомов, гистологов и эмбриологов [Полтава, 1992], на научной конференции "Критерии и методы оценки жизнеспособности тканей в раневом процессе" [С.Петербург, 1993], на международном симпозиуме "Проблемы саногенного и патогенного эффектов экологических воздействий на внутреннюю среду организма" [Чолпон-Ата, 1993], на V международном совещании по суркам стран СНГ [Гайдары, Украина, 1993], на II Всероссийской конференции "Влияние антропогенных факторов на структурные преобразования органов, тканей, клеток человека и животных" [Саратов, 1993], на III съезде анатомов, гистологов, эмбриологов Российской федерации [Тюмень, 1994], на научной конференции, посвященной 50-летию Оренбургского медицинского института [Оренбург, 1994], In Second international conf. of marmots [Aussois, France, 1994], In 2nd european congress of mammology [Southampton, England, 1995], на IV Всероссийской конференции "Нейроэндокринология-95", посвященной 70-летию чл.-корр. РАН проф. А.А.Поленова [С.-Петербург, 1995], на Всеармейском научном совещании "Гистогенез и регенерация тканей" - гистологических чтениях, посвященных памяти проф. А.А.Клишова {С.Петербург, 1995], на III Всероссийской научно-практической конференции "Антропогенные воздействия на здоровье человека" [Калуга, 1996], на VI международном совещании по суркам стран СНГ [Чебоксары, 1996], на научно-практической конференции морфологов Тюменской области "Компенсаторно-приспособительные механизмы внутренних органов и головного мозга в норме, патологии и эксперименте" [Тюмень, 1996], на научном совещании в Военно-медицинской академии "Ги сто генетический анализ изменчивости и регенерации тканей", посвященном 100-летию со дня рождения академика Н.Г.Хлопина [С.Петербург, 1997], на III Международной конференции по суркам "Сурки Голарктики как фактор биоразнообразия" [Чебоксары, 1997].

8. Публикации. По материалам диссертации опубликовано 50 научных работ.

9. Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 442 страницах машинописного текста.

Работа состоит из введения, обзора литературы, главы "Материал и методы исследования", 4-х глав собственных исследований с обсуждением полученных результатов, заключения и выводов. Диссертация иллюстрирована 101 рисунком и 44 таблицами. Библиография включает 592 отечественных и зарубежных источника. Диссертация написана на русском языке.

СОДЕРЖАНИЕ ДИССЕРТАЦИИ МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Объекты исследования. Объектом исследования служили семенники, взятые у 676 представителей различных классов позвоночных, 15 плодов млекопитающих (на примере пренатального онтогенеза козлов оренбургской пуховой породы) и 96 органотипических культур семенников, культивируемых в условиях in vitro и in vivo. Сравнительное исследование интерстициальных эндокриноцитов семенников было проведено на позвоночных животных, представляющих классы амфибий, рептилий, птиц и млекопитающих (326 особей). Исследованные животные, в основном, являлись представителями естественных биоценозов, кроме этого изучены также семенники некоторых сельскохозяйственных и лабораторных животных (табл. 1). Из класса амфибий нами исследована лягушка озерная Rana ridibun-da, из класса рептилий - ящерица прыткая Lacerta agilis, из класса птиц - голубь сизый Columba livia. Среди млекопитающих объектами служили представители отрядов грызунов, зайцеобразных, хищных и парнокопытных. Исследованные грызуны относились к семействам беличьих (суслик рыжеватый Citellus major Р., суслик малый Citellus pygmaeus Р., сурок байбак Marmota bobac M.), хомяковых (полевка обыкновенная Microtus arvalis P., пеструшка степная Lagurus lagurus Р.), мышиных (мышь домовая Mus domesticus R., крыса серая Rattus norvegicus В.) Из отряда зайцеобразных исследован кролик Oryctola-gus cuniculus L., из отряда хищных - собака Canis lupus. Представителями отряда парнокопытных явились некоторые сельскохозяйственные животные - бык красной степной породы, хряк крупной белой породы и козел оренбургской пуховой породы.

Объем изученного материала, использованного для сравнительного анализа эндокриноцитов семенников представителей различных классов позвоночных.

Класс Вид Число исследованных особей

Амфибии: Лягушка озерная 18

Рептилии: Ящерица прыткая 15

Птицы: Голубь сизый 20

Млекопитающие: Мышь 10

Крыса 10

Кролик 10

Суслик малый 47

Суслик рыжеватый 45

Сурок байбак 73

Полевка обыкновенная 10

Пеструшка степная 10

Собака 10

Козел оренбургской пуховой 29 (постнаталь-

породы ный онтогенез),

15 плодов

Хряк крупной белой породы 10

Бык красной степной породы 10

Итого: 326 особей и

15 плодов

При выборе объектов исследования учитывали их принадлежность к различным классам позвоночных, а также особенности их репродуктивной активности. Все исследованные амфибии, рептилии и птицы относятся к позвоночным с выраженной сезонностью в размножении. А среди представителей класса млекопитающих взяты как виды с выраженной сезонностью в репродуктивной активности (суслики малый и рыжеватый, сурок байбак, козел), так и животные, не имеющие сезонных колебаний в репродукции (мышь, крыса, кролик, полевка обыкновенная, пеструшка степная, собака, хряк и бык). Для установления сезонной динамики интерстициальных эндокриноцитов у видов с сезонным характером репродукции семенники для ис-

следования брали в различные календарные периоды года с учетом сезонной динамики репродуктивной активности (у обоих видов сусликов семенники изучались ежемесячно в период с начала апреля и до конца августа, начиная с первых выходов животных на поверхность и до начала зимней спячки, а у сурков, кроме того, исследовали и семенники животных в период начала шбернации).

Среди животных с сезонным характером размножения изучены семенники как у "производителей длинного дня" (лягушка, ящерица, суслики малый и рыжеватый), так и у "производителей короткого дня" (козел оренбургской пуховой породы). Сбор материала осуществлялся на территории Оренбургской области (животные естественных биоценозов отлавливались в условиях их среды обитания, материал от сельскохозяйственных животных получали в племенных хозяйствах, лабораторных животных для экспериментов получали в виварии Оренбургской медицинской академии). Определение таксономической принадлежности позвоночных проводили с учетом рекомендаций и указаний Терентьева П.В. [1961], Барабаш-Никифоро-ва И.И., Формозова A.A. [1963], Бобринского H.A. и соавт. [1965], Наумова С.П. [1972], Кузнецова Б.А. [1973], Карташова H.H. [1974], Соколова В.Е. [1973, 1977, 1979, 1984]. При сборе материала и практическом определении видовой принадлежности и возраста животных естественных биоценозов мы пользовались помощью и консультациями доцента кафедры зоологии Оренбургского государственного педагогического университета В.Н.Руди. При определении породной принадлежности и возраста сельскохозяйственных животных руководствовались соответствующими документами племенных хозяйств Оренбургской области. При сборе материала по эмбриональному и постнатальному онтогенезу козлов оренбургской пуховой породы нам была оказана помощь доцентом Оренбургского аграрного университета Э.М.Бикчентаевым и ассистентом этого же университета Н.В. Обуховой.

Для экспериментальных исследований нами использованы лабораторные животные - половозрелые крысы (207) и кролики(53).

Анализ влияния факторов санитарно-защитной зоны газзавода на эндокриноциты гонад проведен на материале от 90 представителей различных классов позвоночных (ящерица прыткая, голубь сизый, суслики малый и рыжеватый, пеструшка степная и полевка обыкновенная). Органотипическое культивирование семенников в условиях in vitro и in vivo проводили с использованием в качестве доноров и реципиентов белых беспородных крыс.

Экспериментальные модели. Моделирование эмоционально-болевого стресса проводили на 42 белых беспородных крысах-самцах массой 250 - 270 г. по методике Desiderata О et al. [1974]. В специальной

камере животных подвергали воздействию тока силой 4 мА, избежать которого животные могли только путем ухода на платформу, расположенную в центре камеры. Это приводило к выработке условного рефлекса избегания, проявлявшегося в постоянном нахождении крыс на платформе. Последующее нанесение коротких сильных ударов тока (6 мА в течение 2 с) через пол платформы сопровождалось формированием стрессорной реакции у животных, обуслоаленной как наличием конфликта между выработанным условным рефлексом избегания и безусловным болевым раздражителем, так и постоянным напряженным ожиданием электроболевого раздражения. В камере животные находились 5 часов. Семенники для исследования брали в различные сроки после завершения сгрессорных воздействий (непосредственно после прекращения 5-часового опыта, а также через 2, 3, 5, 6 и 7 суток), по 7 крыс на каждую стадию. Контролем служили семенники 24 интактных крыс-самцов аналогичной массы.

Эксперимент по моделированию умеренной дегидратации организма выполнен на 18 белых беспородных крысах-самцах массой 220250 г. Умеренную дегидратацию организма вызывали заменой питьевой воды на 2,5% раствор хлористого натрия [Ве1епку М.А. е1 а!., 1979]. Семенники для исследования брали у животных через 7, 14,24 суток от начала эксперимента (по 6 крыс на каждую стадию). Контролем служили 12 интактных крыс такой же массы, содержащихся в обычных условиях вивария и получавших ту же пищу, но не ограниченных в питье.

Гипофизэктомия проведена на 20 белых беспородных крысах-самцах массой 180-230 г. Удаление гипофиза осуществляли по методике, разработанной Федотовым В.П. и соавт. [1971] с помощью прибора для трансаурикулярной гилофизэкгомии. Семенники для исследования у животных брали через 9 суток после операции. Контролем служили семенники 10 ложнооперированных крыс такой же массы.

Эксперименты по электрической стимуляции различных ядер гипоталамуса и по электролитическому разрушению гипоталамических структур были проведены профессором А.А.Стадниковым. Нами была проведена гистологическая обработка семенников от этих экспериментальных животных. Опыты по стимуляции супраоптических, па-равентрикулярных и медиобазальных областей гипоталамуса были выполнены на 25 (10, 5 и 10 соответственно) половозрелых кроликах-самцах (возраст 4,5 - 5 месяцев). Режим стимуляции 50 гц, 1 мс, длительностью 30 минут в течение 7-10 дней. Взятие материала проводили по окончании последней стимуляции. Контролем служили 10 ложнооперированных кроликов такого же возраста.

Электролитическое разрушение гипоталамических структур было проведено на 12 половозрелых кроликах (6 животным проводили раз-

рушение супраоптических ядер и 6 - разрушение медиобазальной области гипоталамуса) и 30 белых беспородных крысах-самцах массой 180 - 230 г. (по 10 животных с разрушением супраоптических, пара-вентрикулярных и медиобазальных областей гипоталамуса). Взятие материала для исследования проводили через 14 суток после разрушения гипоталамических ядер. Контролем служили ложноопериро-ванные животные (6 кроликов и 15 крыс).

С целью анализа воздействий комплекса техногенных факторов на эндокриноциты гонад исследовали семенники 90 позвоночных различных классов, постоянно обитающих в санитарно-защитной зоне газоперерабатывающего завода (ящерица прыткая, голубь сизый, суслики малый и рыжеватый, полевка обыкновенная, пеструшка степная - по 10 животных от каждого вида, кроме сусликов - у каждого вида сусликов исследованы семенники от 25 животных). Отлов животных проводили в весенне-летнее время - с начала апреля до конца июня. Животных без выраженной сезонности в репродуктивной активности брали для исследования в июне. Материал от сусликов изучался на этапах изменения их репродуктивной активности с начала апреля до конца июня. Контролем служили семенники животных этих же видов, обитающих в экологически благополучных регионах Оренбургской области, отловленных в те же календарные периоды года (не менее 10 особей каждого вида).

Культивирование органотипических культур семенников в условиях in vitro проведено на материале, полученном от 6 белых беспородных крыс-самцов массой 180-230 г. Сразу после забоя животных в стерильных условиях вырезали кусочки семенников размером 1x1 мм. и помещали во флаконы со средой - среда 199 с 20% фетальной бычьей сывороткой [Рыбкин И.И., 1995]. Эксплантаты культивировали в течение 3 суток при постоянном вращении флаконов со скоростью 1/3 оборота в минуту. Проведено 3 серии экспериментов (по 10 эксплантатов на каждую серию): 1) контрольное культивирование; 2) культивирование с внесением в среду вазопрессина в дозе 0,5x10 s IE; 3) культивирование с внесением в среду окситоцина в дозе 0,5x10 5 ME. Взятие материала для культивирования и фиксации, а также внесение гормонов в среду проводили в ранние утренние часы.

Органотипическое культивирование семенников в условиях in vivo в диффузионных камерах проведено с использованием 12 белых беспородных крыс-самцов (6 крыс-доноров и 6 крыс-реципиентов) по методике Algire G. et al. [1954], Евгеньевой Т.П. [1983, 1994] в модификации Дедкова Э.И. [1995, 1996]. Диффузионные камеры представляли собой два плотно входящих друг в друга кольца из органического стекла, диаметром 14 мм. для большого кольца и 10 мм для меньшего [Дедков Э.И., 1996]. На одну из сторон каждого из колец предварительно при помощи ацетона наклеивали миллипоровый фильтр фир-

мы "Бупрог" с величиной пор 0,3 мкм. В полость каждой камеры помещали 3-4 кусочка (трансплантата) семенника размерами 1x1 мм, взятых от одного животного донора. Диффузионная камера "бочонок" монтировалась из двух колец. Щель между двумя кольцами замазывалась клеем, приготовленным из растворенных в ацетоне обрезков фильтра. Крысам-реципиентам под наркозом производили подкожную имплантацию одной диффузионной камеры в область передней брюшной стенки. Культивируемые фрагменты семенников исследовали через 3 и 6 суток от начала имплантации, всего по этому разделу исследовано 24 органотипических культуры мужской гонады.

Совместное культивирование семенников и фрагментов гипоталамуса, содержащих супраоптические и/или паравентрикулярныеядра проводили в двойных диффузионных камерах по методике Дедкова Э.И. [1996]. Данный раздел работы выполнен на 18 крысах-самцах массой 180-230 г. (9 крыс доноров и 9 реципиентов). Двойные диффузионные камеры представляют три плотно входящих друг в друга кольца, изготовленных из органического стекла (диффузионная камера + добавочное кольцо с предварительно наклеенным миллипоровым фильтром). На фильтр добавочного кольца двойной диффузионной камеры помещали 3-4 кусочка семенника. В диффузионные камеры помещали в одном случае фрагменты гипоталамуса, содержащие супраоптические и паравентрикулярные ядра, в другом - только супраоптические ядра, в третьем - только паравентрикулярные ядра. Из добавочного кольца и диффузионной камеры монтировалась двойная диффузионная камера "бочонок", в которой прямому контакту между кусочками семенников и фрагментами гипоталамуса препятствовал только разделяющий их миллипоровый фильтр. Как и в предыдущем эксперименте, крысам-реципиентам под наркозом в область передней брюшной стенки производили подкожную имплантацию двойной диффузионной камеры. Взятие материала проводили после 6 суток культивирования. Для контроля на каждую серию опыта монтировали двойную диффузионную камеру, в которую вместо участков гипоталамуса помещали фрагменты коры больших полушарий тех же крыс-доноров. Всего в данном разделе исследованы 42 культуры семенников.

Способы обработки полученного материала. При обработке полученного материала (семенники, имплантаты семенников, а также в ряде случаев гипофизы и гипоталамусы) использовали гистологические, гистохимические, электронномикроскопические, радиоавтографические, радиоиммунологические и морфометрические методы исследования.

Для светооптических исследований материал фиксировали в 1012% водном растворе нейтрального формалина, спирт-формоле, жид-

кости Буэна [Пирс Э., 1962]. Парафиновые срезы толщиной 5-7 мкм окрашивали гематоксилином Майера и эозином, периодатом калия и реактивом Шиффа по Мак Манусу [Пирс Э., 1962], полутонкие срезы толщиной 1 мкм. окрашивали по методу Sato Т., Shamoto М. [1973]. Аргентафинные структуры в интерстиции гонад выявляли по методике Массона-Гамперля [Ромейс Б., 1953].

Для целей электронной микроскопии материал фиксировали в охлажденном 2,5% р-ре глутарового альдегида на S-коллединовом буфере (рН 7,2-7,4). Постфиксацию проводили по Millonig G. [1961]. Материал дегидратировали в ацетоне возрастающей концентрации и заливали в эпон 812 и аралдит. Ультрагонкие срезы, полученные на ультрагоме LKB-5, перед просмотром подвергали двойному контрастированию в 2% водном р-ре уранил-ацетата при температуре +37 градусов Цельсия в течение 2 часов и цитрате свинца [Reynolds E.S., 1963]. Срезы изучали на электронном микроскопе ЭМВ 100 АК, фотографирование структур проводили при увеличении от 5400 до 40000.

ДНК-синтетическую способность интерстициальных эндокри-ноцитов семенников экспериментальных крыс изучали методом све-тооптической радиоавтографии с использованием в качестве индикатора 3Н-тимидина (мол. активность 1,96 ПБК/моль), вводимого крысам за 1 час до эвтаназии внутрибрюшинно из расчета 0,025 мбк на 1 г. массы тела животного. Для приготовления гасторадиоавто-графов использовали жидкие эмульсии типа "М" и "Р" производства НИИХИМФото (Жинкин JI.H., 1959). Для подсчета индекса ме-чения ядер от каждого животного анализировали не менее 10000 интерстициальных эндокриноцитов семенников.

Тестостерон в крови у экспериментальных животных определяли радиоиммунологическим методом с помощью стандартного набора реактивов для прямого определения тестостерона в малом объеме крови.

Морфометрию структур семенников проводили на препаратах и электроннограммах. На срезах семенников определяли относительную площадь, занимаемую интерстициальной тканью и извитыми семенными канальцами (процентное соотношение). На препаратах осуществляли подсчет эндокриноцитов на условную единицу площади (в квадрате со стороной 35 мкм). Измеряли линейные и объемные показатели эндокриноцитов, их ядер и ядрышек, подсчитывали ядер-но-цитоплазматическое отношение. В зависимости от формы структур объемы эндокриноцитов и их ядер рассчитывали по формуле эллипсоида либо шара [ХесинЯ.Е., 1967]. Кроме того, проводили измерение диаметров извитых семенных канальцев (на строго поперечных срезах). Морфометрию структур семенников проводили с использованием стандартных окулярных сеток Г.Г.Автандилова и С.Б.Сте-фанова, а также окулярного винтового микрометра МОВ-1-15хУ4,2.

На элекгроннограммах с использованием стандартных методов [Автандилов Г.Г., 1990] проводили измерение количественных показателей ультраструктур цитоплазмы - относительную площадь, занимаемую на элекгроннограммах гладкой эндоплазматической сетью, митохондриями, липидными каплями, а также линейные размеры структур эндоплазматической сети, митохондрий, липидных включений, подсчет численности митохондрий, липидных капель и везикул гладкой эндоплазматической сети в единице площади электроннограммы.

Полученные результаты обрабатывали на компьютере по правилам параметрической статистики, с использованием критериев оценки достоверности результатов по Стьюденту, с учетом вариабельности первичных измеряемых объектов и индивидуальной изменчивости [Ташкэ Э., 1980; Автандилов Г.Г., 1990].

ПОЛУЧЕННЫЕ РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

В результате выполнения работы получены новые данные о структурной организации интерстициальной ткани семенников представителей различных классов позвоночных, выявлены различные разновидности ее морфологической организации (различающиеся по степени представленности интерстициальных структур в органе, соотношению стромальных и эндокринных компартментов).

Установлено несколько разновидностей структурной организации интерстициальной ткани семенников изученных позвоночных:

1. Интерстициальная ткань хорошо развита, занимает не менее 20-30% объема органа. В интерстиции значительно содержание как Интерстициальных эндокриноцитов, так и соединительнотканных стромальных элементов (это характерно для свиней).

2. Интерстициальная ткань хорошо развита. В определенные периоды репродуктивной активности особей может занимать больше половины объема органа, при этом количество стромальных компонентов в интерстиции очень низкое (в семенниках сурков).

3. При умеренном развитии интерстициальной ткани в органе в ней хорошо выражены стромальные соединительнотканные компоненты (семенники собак, кроликов, быков, голубей, ящериц).

4. Слабое развитие интерстициальной ткани в органе. При этом , большая часть ее приходится на эндокринный компартмент (семенники лягушек, крыс, мышей, полевок, пеструшек, козлов).

Морфогенетические процессы в популяции эндокриноцитов семенников млекопитающих на этапах эмбрионального и постнаталь-ного периодов онтогенеза (на примере козлов оренбургской пуховой породы). Установлено, что в эмбриогенезе козлов дифференциро-

ванные клетки Лейдига фетальной генерации активно функционируют уже в конце первой половины эмбриогенеза. Эти данные укладываются в русло существующих представлений о ранней дифференци-ровке эндокриноцитов мужской гонады в эмбриогенезе, предшествующей и определяющей последующие морфогенетические процессы в извитых канальцах, а также влияющей на сексуальную диффе-ренцировку других структур организма [Иванова Е.А., 1972; Moon J.S., Raiside J.J., 1972; Gondos В. et al., 1974; Волкова O.B., Пекарский М.И., 1976; Daikoku S. etal., 1976; Zirkin B.R., Ewing L.L., 1987; Jost A. et al., 1988 и др.].

В этот период эмбриогенеза (60-75 суток развития) эндокрино-циты в гонадах располагаются небольшими группами вокруг капилляров, либо сконцентрированы перитубулярно, что свойственно и дефинитивному состоянию семенников. Реже встречаются одиночные эндокриноциты. Клетки характеризуются округлой, овальной, полигональной, реже - отростчатой и веретеновидной формой. Эндокриноциты в этот период имеют максимальные размеры по сравнению со всеми другими стадиями эмбриогенеза. Большинство клеток в популяции по своим морфологическим характеристикам относятся к высокодифференцированным, секреторно активным клеткам.

Во второй половине эмбриогенеза на фоне значительного увеличения численности клеток Лейдига отмечается снижение морфологических показателей их функциональной активности. В конце эмбриогенеза и в первые дни после рождения на единицу площади интерстициальной ткани семенников приходится максимальное количество эндокриноцитов. В течение первого месяца постнатальной жизни козлят в семенниках отмечаются регрессивные изменения в популяции эндокриноцитов и большая часть клеток Лейдига фетачь-ной генерации погибает. К 4,5-5 месяцам постнатальной жизни животных количество эндокриноцитов в гонадах резко возрастает, появляется новая генерация клеток, характерная для половозрелых животных. Увеличение численности эндокриноцитов в пубертатный период, очевидно, связано не только с размножением клеток в популяции, поскольку митозы наблюдаются редко. Вероятно, основным источником возникновения новых эндокриноцитов в этот период является их дифференцировка из малодифференцированных предшественников. Аналогичный способ возникновения пубертатной популяции описан Gondos В. et al. [1974], Lording D.W., De Kretser D.M. [1972], Van Straaten H.W., Wensing C.J. [1978] на примере других видов млекопитающих.

В возрасте 4,5-5 месяцев эндокриноциты козлят приобретают все признаки, свойственные клеткам Лейдига половозрелых особей. В это время для них характерен большой объем цитоплазмы, ядра крупные, средний объем их составляет 96,8+4,2 мкм3 (увеличение с

периодом новорожденное™ более чем в два раза). В клетках интенсивно развита гладкая эндоплазматическая сеть, последнюю представляют канальцы и множественные везикулы. Митохондрии в цитоплазме многочисленны, имеют округлую либо удлиненную форму, просветленный матрикс, кристы тубулярной формы. Часто наблюдается тесное топографическое соседство митохондрий с везикулами агранулярного ретикулума, хотя липидные капли в цитоплазме встречаются редко и размеры их небольшие. Данные признаки характеризуют эндокриноциты как функционально высоко активные структуры. Плазмалемма эндокриноцитов неровная, с множеством микроворсинок.

Высокая функциональная активность клеток Лейдига в пубертатный период указывает на существенное значение авдрогенов как одного из морфогенетических факторов при дифференцировке семенников. Дефинитивную организацию эти структуры приобретают лишь после завершения дифференцировки клеток Лейдига, которая предшествует завершению дифференцировки структур извитых семенных канальцев.

Количество и размеры клеток Лейдига у половозрелых животных существенно варьируют в зависимости от возраста животных и от сезонных колебаний репродуктивной активности.

Сравнительная характеристика эндокриноцитов семенников представителей различных классов позвоночных. Полученные результаты на материале представителей различных классов позвоночных (амфибии, рептилии, птицы и млекопитающие) позволяют говорить о наличии динамичных внутрисистемных взаимоотношений в семеннике между интерстициальными эндокриноцитами и герминативным компартментом в разные периоды жизни животных. Пику активности сперматогенеза всегда предшествует активизация интерстициаль-ных эндокриноцитов. При этом у всех изученных позвоночных возрастает количество клеток Лейдига, которые идентифицируются как зрелые, функционально активные.

Сравнительный анализ полученного материала позволяет предложить несколько подходов к идентификации и классификации ин-терстициальных эндокриноцитов семенников позвоночных:

1. Используя в качестве критерия групповое или одиночное расположение эндокриноцитов, можно выделить две разновидности клеток: а) кластерные (располагающиеся группами) и б) одиночные. Топографическая локализация кластерных клеток в основном связана с сосудами. Группа этих клеток чаще всего окружена структурой, напоминающей базальную мембрану (которая является общей для группы клеток). Между соседними клетками и структурами сосудов всегда имеются зоны контактов различных видов. Одиночные эндок-

риноциты чаще локализованы перитубулярно, реже - перивазально. Обычно одной своей поверхностью эти клетки контактируют с капиллярами либо со стенками канальца, доходя до миоидных клеток. Базальная мембрана для этих клеток менее характерна.

2. При использовании в качестве критериев формы клеток, эн-докриноциты семенников различных позвоночных могут быть распределены на: а) шаровидные клетки (на срезах имеют округлую форму); б) эллипсоидные (на срезах - овальные); в) полигональные; г) грушевидные; д) веретеновидные; е) отростчатые.

3. При оценке комплекса светооптических признаков, определяющих степень дифференцированности и зрелости клеток (форму и размеры клеток и их ядер, степень развитости цитоплазмы, состояние ядерного хроматина, наличие или отсутствие явлений деструкции в клетках), можно выделить 4 разновидности эндокриноци-тов: а) малодифференцированные; б) дифференцированные, зрелые, активно функционирующие; в) зрелые, находящиеся в неактивном состоянии (например, находящиеся на стадии задержки вывода секрета); г) стареющие клетки; д) деструктивно измененные, гибнущие клетки.

4. На основании ультраструктурных показателей цитоплазмы и ядра идентифицированы: а) крупные клетки овальной, округлой, грушевидной, иногда отростчатой формы с хорошо развитой цитоплазмой. Элементы агранулярного эндоплазматического регикулума равномерно распределены по цитоплазме. Митохондрии многочисленны, кристы в них чаще всего тубулярные, матрикс умеренной электронной плотности. Эти клетки всегда содержат липидные включения, в них можно наблюдать контакты везикул агранулярного рети-кулума, митохондрий и липидных капель. Ядра клеток овальной или округлой формы, содержание гегерохроматина в них умеренное. Чаще всего такие клетки имеют базальную мембрану. Расположены они группами либо одиночно. Такие клетки являются зрелыми, функционально активными; б) клетки овальной, округлой либо отростчатой формы. В клетках развит, но неравномерно распределен по цитоплазме гладкий эндоплазматический ретикулум, количество митохондрий уменьшено, распределение их также неравномерное. Контакты митохондрий и везикул гладкой эвдоплазматической сети малочисленны или отсутствуют, липидных капель в цитоплазме нет либо они единичны. Такую морфологическую характеристику могут иметь как стареющие эндокриноциты, так и зрелые клетки, находящиеся в состоянии покоя; в) клетки веретеновидной формы с большим содержанием фибриллярных структур в цитоплазме. Они характеризуются более слабым развитием мембранных органелл в цитоплазме по сравнению с двумя первыми разновидностями клеток. Такой вид могут иметь малодифференцированные клетки; г) клетки округлой, оваль-

ной или удлиненной формы с узким ободком цитоплазмы вокруг вдра, ядро обычно крупное, светлое. Липидные капли отсутствуют, базаль-ная мембрана вокруг клеток не выражена. Подобная морфологическая картина также характеризует малодифференцированные клетки; д) клетки, заполненные большим количеством элекгронноплотных ли-пидных капель, гладкий эндоплазмагический ретикулум в них развит умеренно, митохондрии имеют электронноплотный матрикс с плохо различимыми кристами. Такую картину могут иметь функционально малоактивные клетки, находящиеся на стадии задержки вывода секрета, либо стареющие клетки; е) клетки с локальными либо множественными очагами деструкции мембранных органелл. Везикулы гладкой эвдоплазматической сети резко расширены, в цитоплазме много лизо-сом и миелиноподобных телец. Митохондрий в клетках немного, ба-зальная мембрана отсутствует. Это стареющие, гибнущие клетки.

Было установлено, что у млекопитающих, у которых сезонность в размножении не выражена (или выражена слабо) степень развития интерстициальной ткани семенников мало различается среди разных видов. У большинства животных без сезонных колебаний репродуктивной активности интерстициальная ткань в органе развито слабо (крысы, мыши, кролики, полевки, пеструшки) (табл. 2). И только у хряков на долю интерстиция приходится до 30% площади срезов органа (см. табл. 2). Основу популяции клеток Лейдига животных без сезонности в репродукции составляют округлые, овальные или полигональные клетки средних размеров с хорошо развитой цитоплазмой, со средними, иногда крупными размерами ядер (табл. 3). В этих клетках хорошо развит гладкий эндоплазматический ретикулум, многочисленны митохондрии, могут выявляться липидные капли в цитоплазме. Это зрелые, дифференцированные клетки, способные синтезировать андрогены.

Животные, у которых не выражена сезонность в размножении (крысы, мыши, кролики, полевки, пеструшки), как правило, содержат в цитоплазме эндокриноцитов мало липидных включений либо последние отсутствуют. У животных же с сезонным характером репродукции практически всегда в цитоплазме подобных клеток выявляется много липидных капель различной электронной плотности. Больше всего их содержат клетки Лейдига ящерицы прыткой, рыжеватого суслика и сурка байбака. Из изученных позвоночных только в эндокриноцитах семенников сурка байбака выявлено значительное содержание пигментных включений. Иногда содержание пигмента в клетках настолько высокое, что это определяет цвет семенника, варьирующий от оливкового до коричневого.

Диапазон изменчивости морфологических параметров эндокриноцитов семенников у животных без выраженной сезонности в репродуктивной активности существенно отличается от таковой у жи-

Сравнительная морфометрическая характеристика структур семенников некоторых млекопитающих без выраженной сезонности в размножении

Виды Количество исследованных особей Диаметр извитых Площадь интерстици- Количество эндокриноцитов на условную единицу площади интерстициаль-ной ткани (М+т) Средние объемы Содержание зрелых, функционально активных эндокриноцитов, % (М±ш)

млеко- семенных альной ядер эндок-

питающих канальцев, мкм (М±ш) ткани,% (М+т) риноцитов, мкм3 (М+т)

Крыса 10 198,3±5,8 7,38±1,09 8,72+0,55 72,46±4,90 63,20±4,72

Кролик 10 153,6±4,5 5,60+0,85 5,61±0,43 66,02+4,10 54,80+3,23

Мышь 10 149,5±6,1 8,46+0,60 7,90±0,40 76,40±5,36 56,00±3,91

Пеструшка степная 10 205,0+12,7 4,20+0,31 6,80±0,54 77,85+4,30 67,00±3,28

Полевка обыкновенная 10 155,3±7,9 6,22+0,5 6 7,15+0,33 72,59+5,87 63,90+4,27

Собака 10 194,0+7,2 15,2+0,71 5,52+0,38 89,05±7,60 52,76+3,45

Бык красной степной породы 10 201,8+6,3 15,7+1,4 14,72±0,45 73,67+5,64 61,20±3,16

Хряк крупной белой породы 10 241,2+13,8 23,2± 1,7 7,47+0,43 103,9±6,48 64,59±4,93

Процентное содержание эндокриноцитов с различными объемами ядер в семенниках некоторых млекопитающих без выраженной сезонности в размножении

Вид млекопитающих Число исследованных особей Содержание эндокриноцитов с различными объемами ядер, % (М±т)

до 30 мкм3 31-50 мкм3 51-70 мкм3 71-100 мкм3 свыше 100 мкм3

Крыса 10 7,5+1,3 34,1+2,5 40,0±5,6 12,6+2,3 5,8+0,4

Мышь 10 12,4±0,9 29,5±2,3 21,0+2,2 23,7+2,5 13,4+1,4

Кролик 10 - 25,2+2,0 28,1±3,0 34,0+3,2 12,7±1,1

Пеструшка степная 10 28,3+3,1 32,1+3,0 29,3±2,7 11,3±0,8

Полевка обыкновенная 10 9,5+1,3 39,4+4,5 41,1±4,5 10,0+1,4 -

Собака 10 7,5+0,9 19,0+3,1 25,9±3,3 32,6+3,3 15,0+1,2

Хряк крупной белой породы 10 - 2,5+0,5 19,4+1,3 18,2+0,6 59,9+5,7

Бык красной степной породы 10 4,3±0,6 9,9±0,8 23,1+3,4 33,0+4,7 29,7+3,0

вотных с сезонным характером размножения. Это касается численности эндокриноцитов, их формы, размеров клеток и их ядер, ультраструктурных характеристик цитоплазмы. Все эти параметры у животных без сезонности в размножении более стабильны.

В пубертатной популяции клеток Лейдига различных позвоночных нам не удалось обнаружить митотической активности, что подтверждает существующее положение о том, что данная клеточная популяция относится к популяциям стабильного типа. Проведенный анализ включения тимидина в ядра эндокриноцитов показал, что у крыс включение 3Н-тимидина колеблется в пределах 6-13 промилле. Столь низкий уровень включения радиометки свидетельствует о том, что, скорее всего, включение тимидина в ядра отражает возможности только репаративного синтеза ДНК. Стабильность в данной клеточной популяции обеспечивается динамическим равновесием между процессами дифференцировки эндокриноцитов из их малодифференциро-ванных предшественников и процессами их гибели. Кроме того, одним из факторов поддержания клеточного гомеостаза данной популяции могут являться явления эндомигоза. На это косвенно указывает величина ядер эндокриноцитов, объемы ядер могут различаться в число раз, кратное двум. Это согласуется с данными ряда исследователей [Техвер Ю.Т., 1968; Бо^ие! 1.Р., Яаипапс! К, 1985; КеггГ.В. ег а1., 1985].

Сравнительная характеристика эндокриноцитов семенников в процессе сезонных изменений репродуктивной активности. Изученные позвоночные с сезонным характером репродуктивной активности по диапазону изменчивости морфофункциональных параметров семенников могут быть подразделены на 2 группы:

1. Животные с большим диапазоном изменчивости морфофункциональных параметров семенников. К этой группе животных относятся яшерица прыткая, малый и рыжеватый суслики, сурок байбак. У этих животных наступающая после сезона спаривания регрессивная стадия в развитии гонад демонстрирует настолько глубокую степень угнетения семенников, что извитые канальцы семенников в стадии регрессии практически не отличаются от аналогичных структур эмбрионов.

2. Животные, в семенниках которых диапазон изменчивости эндокринных и герминативных структур в связи с сезонностью в репродукции выражен слабее. К этой группе относятся лягушка озерная, козел, голубь сизый.

Эндокриноциты семенников животных 1-й группы после завершения сезона спаривания также демонстрируют морфологические эквиваленты снижения секреторной активности (табл. 4, 5, 6, 7), но степень выраженности угнетения эндокринной функции была разной у представителей различных видов. В наименьшей степени это

Морфометрическая характеристика структур семенников ящерицы прыткой Lacerta agilis в условиях сезонного изменения репродуктивной активности

Уровень репродуктивной активности Количество исследованных особей Диаметр извитых семенных канальцев, мкм (М±т) Площадь интерсти-циальной ткани, % (М+т) Количество эндокри-ноцитов на условную единицу площади интерстициальной ткани, % (М±ш) Объем ядер эндокри-ноцитс^в, мкм (М+т) Содержание зрелых, функционально активных эндокриноцитов, % (М±ш)

Репродуктивная активность (апрель) 5 143,8±2,2 8,0410,53 12,07 ±0,78 60,90±4,21 66,30±3,25

Репродуктивный покой (июнь) 5 74,0+6,2* 15,6211,8* 9,3310,70* 28,52±2,8б* 38,0012,60*

Таблица 5 Морфометрическая характеристика структур семенников сизого голубя Columba livia в условиях сезонного изменения репродуктивной активности

Уровень репродуктивной активности Количество исследованных особей Диаметр извитых семенных канальцев, мкм (М±га) Площадь интерсти-циальной ткани, % (М±т) Количество эндокри-ноцитов на условную единицу площади интерстициальной ткани, % (М+т) Объем ящер эндокри-ноцитов, мкм3 (М±т) Содержание зрелых, функционально активных эндокриноцитов, % (М±т)

Репродуктивная активность (апрель) 5 189,9±3,1 6,95+0,48 11,60±0,63 36,57±2,15 64,61+2,96

Репродуктивный покой (сентябрь) 5 128,414,2* 15,17+1,09* 10,5410,44* 27,12±1,47* 36,6712,58*

Морфометрические показатели интерстициальной ткани семенников рыжеватого суслика Citellus major Pallas в течение весеннего и летнего сезонов

Время отлова и участие животных в размножении Число исследованных особей Площадь интерстициальной ткани, % (М±т) Число эндокри-ноцитов на условную единицу площади (М±т) Объем ядер эндокрино-цитов, мкм3 (М+т) Содержание зрелых, функционально активных эндокри-ноцитов, % (М±т)

1-я половина апреля (репродуктивная активность) 12 6,3±0,5 18,9+1,8 77,6+4,1 69,2+5,2

1 -я половина апреля (животные завершили размножение или не участвовали в нем 5 12,110,7* 18,6+2,1 89,1±5,8* 60,4+4,2

2-я половина апреля (репродуктивный покой 6 13,8+0,7* 18,4±2,2 75,1+4,8 58,4±2,3*

Май (репрод. покой) 10 1б,7±0,9* 15,4±0,5* 72,3±5,7 54,3+3,4

Июнь (репрод. покой) 6 16,9+0,7 16,8+0,9 77,1+4,3 52,6+1,8

Июль (репрод. покой) 6 12,7+0,4* 16,2+0,4 82,1+5,7 55,6±3,7

1 половина августа (репрод. покой) 6 8,7±0,6* 15,4+0,6 80,4±4,2 55,2+4,6

проявилось у рыжеватого суслика, а наиболее рельефно - у сурка байбака. У рыжеватого суслика в течение всего весенне-летнего периода в популяции эндокриноцитов преобладают клетки средних и крупных размеров с развитой цитоплазмой, объемы их ядер тоже значительны (табл. 6) и в течение весны и лета колеблются в пределах 70 -90 мкм3. А у сурка байбака в мае - июне наблюдается снижение размеров эндокриноцитов и их ядер более чем в два раза (табл. 7). При анализе состояния популяции эндокриноцитов у сурков и сусликов на большом числе животных (так, что на каждый месяц весны и лета приходилось от 5 до 10 животных) обнаружен интересный феномен. Так, достигнув пика угнетения своей секреторной функции, эндок-риноциты семенников примерно за 1-1,5 месяца до наступления зимней спячки снова начинали проявлять признаки активизации секреторной функции. Причем, уровень такой активизации сопоставим с той, которая отмечалась в сезон размножения. Несколько позже отмечалась и активизация процессов сперматогенеза. Диаметр извитых семенных канальцев увеличивался примерно в два раза, эпителиос-перматогенный пласт становился многослойным и в нем начинали регистрироваться мейотические деления. То есть, наблюдается феномен активизации эндокринных и герминативных структур семенников сурков и сусликов перед их залеганием в зимнюю спячку. Значение феномена активизации эндокринной и герминативной функций семенников в период, предшествующий залеганию животных в зимнюю спячку, не может быть полностью объяснено имеющимися данными литературы [Спивакова Л.В., 1988; Шат А.Р., 1991]. Очевидно, что повышенная секреторная функция эндокриноцитов в этот период является одним из морфогенетических факторов, активизирующих спермагогенную активность извитых семенных канальцев. В пользу этого положения свидетельствует тот факт, что активизации сперматогенеза всегда предшествует повышение функциональной активности клеток Лейдига.

Можно предположить, что обнаруженная нами активизация эндокринного и герминативного компартментов семенников сурков и сусликов является отражением эндогенных цирканнуальных ритмов в репродукции. Если по классификации Р.В.Шорта (1987) позвоночные делягся на "производителей длинного дня" и "производителей короткого дня", то сурки вообще не укладываются в эту классификацию. Это связано с тем, что по данным Бибикова Д.И. (1989), Машкина В.И. (1996) спаривание и беременность самок и даже часть лактации проходят в норах, еще до выхода животных на поверхность, то есть в условиях полной темноты. И, следовательно, периодичность этих процессов никак не может быть связана с длительностью фотопериода. В пользу положения о наличии эндогенного цирканнуаль-ного ритма в репродуктивной активности грызунов из семейства бе-

Морфометрические показатели интерстициальной ткани семенников сурка байбака Marmota bobac М. в условиях весеннего и летнего сезонов

Время отлова и участие животных в размножении Исследовано особей Площадь интерстициальной ткани, % (М±т) Число эндокри-ноцитов на условную единицу площади (М+т) Объем ядер эндокрино- ЦИТОВ, мкм3 (М±т) Содержание зрелых, функционально активных эндокри-ноцигов, % (М±т)

Начало апреля - животные 6 19,6±2,8 9,3+0,3 137,8+6,5 64,2±2,9

участвовали в репродукции

Начало апреля - животные

не участвовали в репродук-

ции 6 46,5+5,7* 11,2+0,5* 82,4+7,9* 50,3+4,1*

Май (репродуктивный по-

кой) 9 67,6±3,6* 8,9±0,5* 48,4+3,2* 40,9+4,6*

Июнь (репродуктивный

покой) 7 49,9+2,4* 7,1±0,3* 61,6±4,2* 55,8+2,9*

Июль (репродуктивный

покой) 20 41,4+2,3* 14,0+0,5* 61,6+2,5 56,0±3,8

Август (репродуктивный

покой) 18 41,4±3,3 8,4±0,5* 98,3±4,5* 56,0+2,6

* Различия по сравнению с предыдущей стадией значимы при Р < 0, 05.

личьих свидетельствуют сведения о том, что в годы как с ранней, так и поздней весной состояние гонад зависело в основном от календарных сроков, а не от погодных условий.

У ряда животных 2-й группы (голубь сизый, козел оренбургской пуховой породы) в извитых канальцах в течение года никогда не происходит полного угнетения сперматогенеза. И вне сезона размножения у козлов и голубей идет сперматогенез, но на более низком уровне. Соответственно и колебания морфофункциональных параметров эндокриноцитов также выражены менее рельефно. У лягушек сперматогенез протекает очень своеобразно, зрелые сперматозоиды со, держатся в гонадах с начала осени до весны. А структура эндокриноцитов семенников большую часть года демонстрирует признаки высокой функциональной активности.

Морфофункциональные особенности эндокриноцитов семенников животных различных таксономических групп в условиях адаптации к экстремальным воздействиям. Стрессорные воздействия на организм вызывают в семенниках существенные структурно-функциональные изменения в эндокринных и герминативных структурах органа. При экспериментальном эмоционально-болевом стрессе в реакциях интерстициальных эндокриноцитов семенников проявляется определенная этапность. Для клеток Лейдиш в первые двое суток эмоционально-болевого стресса характерно: а) резкое расширение везикул гладкого ЭР, при этом возникают вакуоли, которые в 5-6 раз превышают размеры везикул гладкого ЭР в клетках Лейдига контрольных животных; б) слияние отдельных расширенных элементов эндо-плазматического ретикулума с образованием крупных внутриклеточных полостей; в) резкое усиление повреждения мембранных структур, увеличение числа ламеллярных телец; г) миелинизация митохондрий; д) повышение электронной плотности матрикса митохондрий. Таким образом, первыми признаками реакции интерстициальных эндокриноцитов на эмоционально-болевой стресс являются выраженные ультрамикроскопические признаки глубокого повреждения ор-ганелл, осуществляющих стероидогенез и энергетический обмен.

Через 3-5 суток от начала эксперимента регистрируются выраженные различия в реакциях интерстициальных эндокриноцитов: одни клетки остаются относительно сохранными и по ультраструкгурным признакам либо идентичны клеткам Лейдига в первые двое суток стресса, либо даже приближаются к норме. В других эндокриноцитах нарастают процессы деструкции агранулярного ЭР и митохондрий, отмечаются явления хроматолиза и грубой конденсации пристеночного хроматина. В цитоплазме клеток с разной степенью деструктивных изменений увеличивается содержание липидных включений, возрастает их гетероморфность. Почти на всех стадиях эксперимента отме-

чено снижение средних объемов ядер (табл. 8). Обращает на себя внимание уменьшение объемов ядер эндокриноцитов, локализованных около канальцев с XIV и VIII стадиями цикла сперматогенного эпителия, а также у канальцев с различными повреждениями сперматогенного эпителия. Подобные факты могут свидетельствовать о нарушении паракринных взаимоотношений в органе.

Значительно снижается доля высокоактивных клеток. Концентрация тестостерона уменьшена в первые пять суток эксперимента почти в два раза по сравнению с контролем (табл. 10). Полученные результаты о коррелятивной зависимости между нарушением морфологии клеток и их секреторной активности согласуются с данными ТопЬагсИ Н. а1., [1976], БсЬиНсе В. е1 а1. [1976], обнаруженными при других экспериментальных воздействиях на организм.

Выявлено также значительное снижение включения 3Н-тими-дина в ядра клеток Лейдига на всех исследованных стадиях опыта (табл. 9), что указывает на снижение репликативного и репаративно-го синтеза ДНК в эндокриноцитах.

Следует подчеркнуть существенность структурно-функциональной перестройки эндокриноцитов в этих условиях и отметить гибель некоторой часта эндокриноцитов в результате адаптационного сверхнапряжения. Оставшаяся часть клеток в процессе мобилизации своих адаптивных возможностей в условиях приспособления к факторам ЭБС не может обеспечивать прежний уровень секреторной активности.

В то же время мы наблюдали и проявления существенных адаптивных и репарагивных возможностей среди эндокриноцитов, вследствие чего прекращение действия стрессорных факторов позволяет эндокриноцитам снова, почти в той же мере, реализовать свои функциональные отправления.

Морфофункциональная характеристика эндокриноцитов семенников крыс в условиях умеренной дегидратации организма сходна с таковой при эмоционально-болевом стрессе, однако степень выраженности деструктивных изменений в эндокриноцитах при этом виде стрессорного воздействия выражена слабее.

Анализ воздействия комплекса факторов санитарно-защитной зоны газоперерабатывающего завода на семенники представителей различных позвоночных, обитающих в этой зоне, показал, что у всех отловленных особей в семенниках не выявлено грубых нарушений сперматогенеза. В то же время, полученные нами результаты указывают на предельно напряженный характер функционирования эндокринных и герминативных структур мужских гонад (на грани исчерпания их адаптивных возможностей). В частности, в популяции эндокриноцитов повышается доля клеток с признаками дезинтеграции секреторной деятельности.

Морфометрические показатели интерстициальных эндокриноцитов и извитых канальцев семенников половозрелых крыс в контроле и в условиях эмоционально-болевого стресса (ЭБС)

Контроль и стадии опыта Исследовано особей Диаметр извитых семенных канальцев, мкм (М±ш) Число эндокриноцитов на условную единицу площади (М+т) Средний объем ядер эндокриноцитов, мкм3 (М±ш) Содержание зрелых, функционально активных эндокриноцитов, % (М±т)

Контроль 24 198,3±7,4 8,7±0,6 54,2±2,8 63,2+2,8

Стадия 5 часов ЭБС 7 191,5±4,9 7,9+0,5 65,2+3,9* 56,5±2,0*

Стадия 2 суток ЭБС 7 196,3±3,5 6,8+0,6* 58,1±3,2 51,4+3,3*

Стадия 3 суток ЭБС 7 180,6+5,0* 6,4±0,3* 31,7+4,7* 49,4+2,1*

Стадия 5 суток ЭБС 7 187,9+5,8 6,8±0,5* 39,0±2,8* 43,6±3,0*

Стадия 6 суток ЭБС 7 173,2+6,3* 6,7±0,4* 40,1±3,3* 47,7+1,6*

Стадия 7 суток ЭБС 7 186,4+5,1 6,9+0,4* 43,0+3,6* 45,1+3,2*

Включение 3Н-тимидина в интерстициальные эндокриноциты семенников половозрелых крыс в условиях эмоционально-болевого стресса (ЭБС)

Контроль и стадии эксперимента Число исследованных животных Индекс мечения ядер, %С (М±га)

Контроль 9 12,20+2,11

Стадия 3 суток ЭБС 5 6,32+1,08*

Стадия 5 суток ЭБС 5 5,96+1,23*

Стадия 7 суток ЭБС 5 6,40+1,24*

* Различия по сравнению с предыдущей стадией значимы при Р < 0, 05.

Таблица 10

Содержание тестостерона в сыворотке крови половозрелых крыс в условиях эмоционально-болевого стресса (ЭБС) в нМ/л

Контроль и стадии эксперимента Число исследованных животных Содержание тестостерона, нМ/л (М+т)

Контроль 5 27,5+0,8

Стадия 5 суток ЭБС 5 15,3±1,2*

Стадия 6 суток ЭБС 5 22,2+0,6*

Стадия 7 суток ЭБС 5 23,2+1,1*

* Различия по сравнению с предыдущей стадией значимы при Р < 0, 05.

Для животных с сезонным характером репродуктивной активности (ящерица прыткая, голубь сизый, суслики малый и рыжеватый) установлены различия в длительности сезона репродукции по сравнению с животными, обитающими в экологически благополучных районах. У животных, обитающих в санитарно-защитной зоне газзавода, период репродуктивной активности оказался значительно короче. Морфофункциональные параметры эндокриноцитов семенников этих животных во многом сходны с таковыми, описанными для эндокриноцитов семенников животных, находящихся в стрес-сорных условиях. На фоне снижения секреторной активности эндокриноцитов семенников возрастает угроза серьезных дезинтеграцион-ных нарушений в эпителиосперматогенном пласте извитых семенных канальцев.

Гипофизэктомия приводит к существенным сдвигам в семенниках в целом и в интерстициальных эцдокриноцитах в частности. В органе возрастает доля интерстициальной ткани (стромальных компонентов). Размеры эндокриноцитов и их ядер уменьшаются вдвое. Наблюдается большое количество поврежденных и гибнущих клеток. Включение 3Н-тимидина снижается в три раза. Плотность расположения срезов извитых канальцев с признаками сохранения сперматогенеза существенно снижалась уже в первые дни после гипофизэк-томии. В то же время гипофизэктомия не приводила к полному выключению эндокринных и герминативных структур семенников. Все это свидетельствует о том, что выключение гипофизарных и гипота-ламических трансаденогипофизарных влияний не прекращает пара-кринных взаимодействий в системе "извитые семенные канальцы -клетки Лейдига". Наши данные согласуются в этом плане с результатами работ Hochereau de Reviers М.Т. et al. [1990]; Kawakami E. et al. [1993] и с известными фактами, свидетельствующими о том, что в филогенезе прежде всего оформляются и начинают активно функционировать периферические эндокринные железы [Мицкевич В В. 1978].

Экспериментальное изменение уровня гипоталамических гормонов при разрушении либо стимуляции различных областей гипоталамуса показало различие реакций эндокриноцитов в зависимости от характера экспериментального воздействия. Результаты экспериментов подтверждают имеющиеся данные [Поленов А.Л., 1968 - 1995; Акма-ев И.Г., 1979; Бабичев В.Н., 1981; Стадников A.A., 1989 и др.] о сложном взаимоотношении в системе гипогаламус-гипофиз-гонады. Степень выраженности структурно-функциональных изменений в семенниках, проявляющихся при разрушении и стимуляции медиобазаль-ного гипоталамуса, указывает на значительное участие этой области гипоталамуса в опосредованной регуляции гистофизиолоши интерстициальных эндокриноцитов семенников. Нами показано, что из-

менение уровня высвобождения гормонов из медиобазальной области гипоталамуса отражается как на процессах пролиферативной активности, так и на процессах дифференцировки и функциональной активности клеток Лейдига. В то же время, наши результаты свидетельствуют также и об определенном участии супраоптических ядер гипоталамуса в регуляции процессов пролиферации, цитодифферен-цировки и функциональной активности эндокриноцитов семенников. Супраоптические ядра в опытах in situ оказывают тормозящее влияние на пролиферативные процессы эндокриноцитов семенников. На это указывает динамика изменения численности эндокриноцитов в ходе опытов и динамика включения 3Н-тимидина. В то же время, следует отметить и некоторое позитивное влияние супраоптических ядер на синтетические процессы в клетках Лейдига.

В реализации гисто- и органогипических потенций при культивировании органных культур семенников in vitro и in vivo выявлены существенные различия в реакциях структур сперматогенного эпителия, стромальных элементов стенки извитых канальцев и элементов интерстициальной ткани. Со стороны клеточных элементов эпиге-лиосперматогенного пласта демонстрируются проявления сохранности части клеток. На фоне значительной гибели развивающихся половых клеток сустентоциты продолжают сохранять свои структурные характеристики. Сохранными остаются и клеточные элементы внутреннего и наружного клеточных слоев стенки канальцев.

В культуре in vitro интерстициальные эндокриноциты, исследованные на стадии 3 суток, находились в состоянии депрессии с различными признаками альтеративных изменений. Число сохранных клеток было невелико. Несколько лучшая сохранность эндокриноцитов отмечалась в условиях культивирования in vitro с добавлением в культуральную среду вазопрессина. Добавка окситоцина менее существенно влияла на морфофункциональные характеристики эндокриноцитов.

Значительно лучшие результаты дат о культивирование кусочков семенников в диффузионных и двойных диффузионных камерах совместно с супраоптическими и паравентрикулярными ядрами гипоталамуса in vivo. В этих экспериментах более высоким было количество сохранных, переживающих эндокриноцитов, в том числе и функционально активных.

На поздних сроках культивирования в диффузионных камерах на фоне нарастания гибели эндокриноцитов отмечалось усиление пролиферации и цитодифференцировки малодифференцированных элементов интерстициальной ткани, в основном, фибробластоподоб-ных клеток.

Полученные результаты укладываются в разрабатываемую концепцию об адаптогенном воздействии ядер переднего гипоталамуса

на различные клеточные и тканевые структуры организма [Поленов А.Л., 1968, 1979, 1980, 1983; Поленов А.Л. и соавт., 1994; Стадников А.А., 1989, 1995] и согласуются с результатами, полученными при культивировании других органов в аналогичных условиях [Валов С.Д., 1995; Дедков Э.И., 1995; Рыбкин И.И., 1995; Стадников А.А., 1997].

ВЫВОДЫ

1. В процессе эволюционного развития в семенниках позвоночных сформировалось несколько разновидностей структурной организации интерстиция, различающихся по степени представленности интерстициальных структур в органе, соотношению стромальных и эндокринных компонентов. Несмотря на различия, закономерной характеристикой интерстиция семенников рассматриваемых видов являются конкурентные отношения между секреторной активностью интерстициальных эндокриноцитов и синтетической активностью клеток фибробластического ряда.

2. У представителей различных классов позвоночных прослеживаются общие закономерности в структурно-функциональной организации интерстициальных эндокриноцитов. В то же время, степень развития основных структур стероидогенеза может различаться как у представителей разных классов, так и у таксономически близких видов с различным характером репродуктивной активности.

3. На этапах онтогенеза в семенниках млекопитающих происходит последовательная смена двух генераций эндокриноцитов - фе-тальной и дефинитивной (пубертатной).

- Фетальная генерация достигает морфофункциональной зрелости и пика активности в конце первой половины эмбриогенеза; к началу пубертатного периода данная генерация полностью исчезает из состава интерстиция.

- Дефинитивная генерация эндокриноцитов завершает даферен-цировку и достигает пика функциональной активности в период полового созревания.

- Появление морфологических эквивалентов высокой секреторной активности эндокриноцитов, как правило, предшествует активизации сперматогенеза в извитых канальцах семенников.

4. Пубертатная генерация эндокриноцитов семенников позвоночных в репродуктивном возрасте характеризуется стабильностью численности клеток, следовательно, относится к клеточным популяциям стабильного типа.

5. Поддержание численности в популяции эндокриноцитов семенников половозрелых особей происходит исключительно за счет

дифференцировки эндокриноцитов из их малодифференцированных предшественников (природа которых, однако, нуждается в уточнении). Как и в условиях интактного организма, для популяции интер-стициальных эндокриноцитов в условиях культур не характерна про-лиферативная активность. При этом в условиях культивирования органных культур семенников in vitro и in vivo в диффузионных камерах (и особенно в условиях их совместного сокультивирования с ядрами переднего гипоталамуса в двойных диффузионных камерах) сохраняются детерминированные органоспецифические особенности морфологии интерстициальных эндокриноцитов.

6. Выявлен широкий диапазон колебаний морфологической изменчивости интерстициальных эндокриноцитов семенников, характерный как для позвоночных с выраженной сезонностью в размножении, так и для позвоночных, репродуктивная активность которых мало зависит от сезона года. У животных с сезонностью в репродукции степень изменчивости ультраструктурных признаков эндокриноцитов всегда более глубока.

7. У видов животных с выраженной сезонностью (особенно у позвоночных с длительным периодом гибернации - амфибий, грызунов из семейства беличьих) присутствует феномен активизации эндокринной и герминативной функций семенников вне сезона размножения - перед залеганием в зимнюю спячку. При этом в морфо-физиологии органа также проявляется тенденция более ранней активизации эндокриноцитов в сравнении с эпителиосперматогенным пластом извитых семенных канальцев.

8. Для интерстиция семенников большинства позвоночных характерны два варианта топографического распределения интерстициальных эндокриноцитов - кластерный (групповой) и одиночный.

- Кластерный тип характерен для перивазальных зон органа. Относящиеся к этому типу клетки окружены базальным слоем и связаны друг с другом множеством контактов.

- Одиночный тип характеризуется, как правило, перитубуляр-ным расположением, меньшим количеством относящихся к нему эндокриноцитов и менее выраженным базальным слоем.

Отмеченные особенности топографии эндокриноцитов обеспечивают наличие в организме широкого спектра колебаний эндогенного уровня андрогенов в зависимости от физиологического состояния органа.

9. Экстремальные дестабилизирующие факторы (эмоционально-болевой стресс, дегидратация организма, воздействие техногенных факторов) приводят к дезинтеграции в системе "интерстициаль-ные эндокриноциты - извитые семенные канальцы", о чем свидетельствуют изменения светооптических, ультраструктурных и функциональных параметров указанных компартментов. Степень повреж-

дения эндокринных и герминативных структур гонад при экспериментальных дестабилизирующих воздействиях связана с интенсивностью и длительностью последних.

10. Популяция интерстициальных эндокриноцитов семенников обладает резервом адаптивных и реактивных возможностей, который позволяет ей сохранять определенный уровень функциональной активности даже в условиях действия экстремальных дестабилизирующих факторов (а в ряде случаев - практически полностью восстанавливать свои морфофункциональные свойства после прекращения действия этих факторов). Одним из наиболее ярких проявлений адаптивных реакций является изменение соотношения между клетками разных размеров: резкое снижение в популяции клеток крупных размеров и увеличение количества эндокриноцитов средней величины.

11. Экспериментальное нарушение гипоталамо-гипофизарных механизмов регуляции семенников (гипофизэктомия, разрушение медиобазальной области гипоталамуса) приводит к существенному угнетению функциональной активности интерстициальных эндокриноцитов, при этом нарушения в процессах сперматогенеза могут быть менее рельефными. Отмеченные факты свидетельствуют о возможности поддержания регуляции процесса сперматогенеза из резервов внутригонадных (пара- и аутокринных) механизмов.

12. При сокультивировании эндокриноцитов семенников с ядрами переднего гипоталамуса в двойных диффузионных камерах in vivo, а также (хотя и в меньшей степени) при добавлении нонапепти-дов (вазопрессина и окситоцина) в кульгуральную среду in vitro, улучшается структурная сохранность культивируемых эндокриноцитов в отличие от контрольных культур. Эти факты указывают на важное позитивное значение нонапептидов ядер переднего гипоталамуса для цитофизиологии эндокринных структур семенников.

РЕКОМЕНДАЦИИ ПО ИСПОЛЬЗОВАНИЮ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ

1. Материалы, посвященные морфогенетическим преобразованиям эндокриноцитов семенников на этапах онтогенеза, при сезонных изменениях репродуктивной активности и в условиях действия экстремальных дестабилизирующих факторов рекомендуются в практику научных исследований морфологических кафедр вузов и лабораторий НИИ морфологического профиля при исследовании вопросов регуляции гаметогенеза.

2. Сведения по вопросам адаптивных и реактивных преобразований в популяции эндокриноцитов семенников в условиях воздействия на организм различных неблагоприятных факторов могут быть

использованы для выработки объективных критериев отклонений от нормы состояний семенников при анализе органов репродуктивной системы в различных неблагоприятных условиях.

3. Данные по морфофункциональной характеристике эндокри-ноцитов семенников различных позвоночных могут быть включены в учебные пособия по гистологии, цитологии, эмбриологии, зоологии и сравнительной анатомии для биологических специальностей вузов.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Влияние электрической стимуляции различных зон гипоталамуса на гистофизиологию половых желез кролика. В сб.: Морфогенез и регенерация покровных и железистых эпителиев в онтогенезе и в условиях эксперимента. - Оренбург. - 1981. - С. 47-48.

2. Изучение структурно-функциональных особенностей адено-гипофиза и половых желез кролика в условиях длительной электрической стимуляции различных зон гипоталамуса. В сб.: Актуальные проблемы теоретической и клинической медицины. - Оренбург. - 1981. - С. 24 (соавт. А.А.Стадников).

3. Моделирование гипоталамо-аденогипофизарных взаимодействий в эксперименте на животных. Тез. докл. IX Всесоюзн. съезда анатомов, гистологов, эмбриологов. - Минск. - 1981. - С. 364-365 (соавт. А.А.Стадников, М.Ф.Митрофанова, С.Д.Валов).

4. Морфофункциональная характеристика семенников крыс в условиях длительного воздействия техногенных факторов производства по переработке газа с повышенным содержанием серы. В кн.: Актуальные проблемы развития человека и млекопитающих. - Симферополь. - 1983. - С. 32-33.

5. Морфофункциональная характеристика семенников крыс в условиях угнетения синтеза эндогенных простагландинов на фоне выключения различных областей гипоталамуса. В кн.: Гипоталамо-гипофизарный комплекс и периферические железы мишени. - Куйбышев. - 1984. - С. 83-87.

6. Морфофункциональное исследование адаптивных реакций стромальных элементов семенников лабораторных животных на воздействие комплекса производственных факторов предприятия по переработке газа с повышенным содержанием серы. В сб.: Мезенхима и ее производные. - Пермь. - 1986. - С. 75.

7. О роли гипоталамических нейропептидов в реализации эпителием аденогипофиза гистиотипических и органотипических свойств.

В кн.: X Всесоюзн. съезд анатомов, шстологов, эмбриологов. Винница, 17-19 сент. 1986. Тез. докл. - Полтава. - 1986. - С. 324 (соавт. A.A. Стадников, М.Ф.Митрофанова).

8. Изучение влияния факторов производства по переработке газа на структуру некоторых эндокринных органов. Тез. докл. III Всесоюзн. конф. Эндокринная система организма и вредные факторы внешней среды. - Л. - 1987. - С. 214 (соавт. A.A.Стадников).

9. Сравнительная характеристика гематотестикулярного барьера и интерстициальных эндокриноцитов в семенниках некоторых позвоночных в условиях сезонного угнетения сперматогенеза. Тез. докл. научн. конф. Реактивность и регенерация тканей. - Л. - 1990. - С. 78.

10. Изменение морфофункционального состояния аденогипо-физа, гонад и щитовидной железы при воздействии факторов газоперерабатывающего производства. В сб.: Медицинские аспекты охраны производственной и окружающей среды. Тез. докл. к обл. конф. -Оренбург. - 1989. - С. 36-39 (соавт. А.А.Стадников, М.Ф.Митрофанова).

11. Структурно-функциональное состояние гипоталамо-гипофи-зарно-гонадной системы в условиях стресса. В сб.: Медико-биологические и экологические проблемы развития Севера. Тез. докл. VII зональной научно-пракгич. конф. молодых ученых-медиков. - Архангельск. - 1990. - С. 30-31 (соавт. С.Д. Валов, А.А.Стадников).

12. Изучение реактивных изменений в компонентах гематотестикулярного барьера и интерстициальных эндокриноцитах гонад крыс в условиях умеренной дегидратации организма. В сб.: Системные и клеточные механизмы адаптации организма к действию повреждающих факторов. Тез. докл. конф. патофизиологов. - Челябинск. - 1991. - С. 141-142.

13. Реакция нонапептидэргических центров гипоталамуса, гипофиза и половых желез при умеренной дегидратации у крыс. В кн.: Эндокринная система организма и вредные факторы окружающей среды. Тез. докл. IV Всесоюзн. конф. - Л. - 1991. - С. 218 (соавт. A.A. Стадников).

14. К сравнительной характеристике интерстициальных эндокриноцитов семенников некоторых позвоночных. В кн.: Компенсаторно-приспособительные механизмы внутренних органов и головного мозга в норме, патологии и эксперименте. Материалы научно-пракгич. конф. - Тюмень. - 1991. - С. 115-117.

15. Структурно-функциональное изучение внутри- и межсистемных механизмов в регуляции митотического, тканевого и органного гомеостаза. Тез. докл. XI съезда анатомов, гистологов, эмбриологов. -Полтава. - 1992. - С. 231-232 (соавт. А.А.Стадников, Ю.П.Семченко, М.Ф.Митрофанова, С.Д.Валов, В.С.Полякова).

16. Ультраструктурные изменения интерстициальных эндокри-

ноцитов семенников лабораторных животных в условиях различных видов стресса. В кн.: Материалы научн. конф. Критерии и методы оценки жизнеспособности тканей в раневом процессе. - СПб. - 1993.

- С. 49.

17. Особенности гистофизиологии гипоталамо-гипофизарно-гонадной системы при воздействии экстремальных дестабилизирующих факторов. В кн.: Проблемы саногенного и патогенного эффектов экологических воздействий на внутреннюю среду организма. Матер, междунар. симпозиума, 5-8 сент. 1993 г. - Чолпан-Ата. - 1993.

- С. 209-210 (соавт. А.А.Стадников).

18. К вопросу о размножении байбака в Оренбургской области. Тез. докл. междунар. (V) совещания по суркам стран СНГ. 21-23 сент. 1993 г., с. Гайдары (Украина). - М. - 1993. - С. 31 (соавт. В.Н.Руди, В.П.Соустин).

19. Структурно-функциональная характеристика интерстициаль-ных эндокриноцигов семенников в постнатальном онтогенезе козлов оренбургской пуховой породы. В кн.: Пути увеличения производства и резервы повышения качества сельскохозяйственной продукции. Тез. докл. XII научно-практ. конф. молодых ученых и специалистов (экономика, механизация, агрономия, ветеринария). -Оренбург. - 1993. - С. 153-154.

20. Ультраструктурное исследование интерстициальных эндокриноцигов семенников сусликов из популяции, обитающей в санитарной зоне Оренбургского газоперерабатывающего завода. В кн.: Влияние антропогенных факторов на структурные преобразования органов, тканей, клеток человека и животных. Матер. П-й Всерос. конф. - Часть 4. - Саратов. - 1993. - С. 95.

21. Ультраструктурная организация интерстициальных эндокриноцигов семенников у различных классов позвоночных (амфибии, рептилии, млекопитающие). Матер. Ш-ш съезда анатомов, гистологов, эмбриологов Российской Федерации (Тюмень, 21-23 июня 1994).

- Тюмень. - 1994. - С. 229.

22. Гистофизиология интерстициальных эвдокриноцитов семенников половозрелых быков красной степной породы. Тез. докл. ре-гиональн. конф. молодых ученых Урала и Поволжья, посвящ. 250-летию Оренбургской губернии и 60-летию образования Оренбургской области. - Т. 2. - Оренбург. - 1994. - С. 311-313.

23. О роли гипогаламических нонапептидов и монаминов в регуляции процессов пролиферации и цитодифференцировки покровных, железистых эпителиев и некоторых эвдокриноцитов // Актуальные вопросы теоретической и клинической медицины. Сб. научн. трудов Оренбургского мед. ин-та. - Т. 29. - Оренбург. - 1994. - С. 6065 (соавт. А.А.Стадников, Э.И.Дедков, И.И.Рыбкин, Ю.П.Семченко, А.Н.Мухортова, С.Д.Валов, В.С.Полякова, М.Ф.Митрофанова).

24. Структурно-функциональная характеристика интерстициаль-ных эндокриноцитов семенников некоторых сельскохозяйственных животных в условиях репродуктивной активности. Тез. докл. Всерос. научной и учебно-методической конф. по акушерству, гинекологии и биотехнике размножения животных. (Воронеж, 25-27 окт. 1994). -Воронеж. - 1994. - С. 208-209.

25. Ecology and morphology of the bobac (Marmota bobac) in Orenburg province // Actual problems of Marmots investigation. - M. - 1994. -p. 182-192 (соавт. V.N.Rudi, V.P.Soustin).

26. The moving forces and trends of reproduction of steppe marmot (Marmota bobac Muller, 1776) in Orenburg Region. Resumes-abstracts second int. conf. of marmots. Aussois (France). - 1994. - p. 120-121 (соавт. V.N.Rudi, V.P.Soustin).

27. Прикладные аспекты изучения функциональной морфологии гипоталамо-гипофизарно-гонадной системы в условиях воздействия различных дестабилизирующих факторов // Российские морфологические ведомости. - 1994. - № 4. - С. 45 (соавт. А.А.Стадников).

28. Морфофункциональная характеристика интерстициальных эндокриноцитов (клеток Лейдига) семенников некоторых позвоночных в условиях сезонного изменения репродуктивной активности // Морфология. 1995. - Т.108. - № 2. - С. 57-60.

29. The moipho-functional characteristics of gyrose testicular ducts and Leydig's cells in testes of Citellus major and Citellus pygmaeus in Orenburg province under seasons of seasonal dynamics. Abstracts of oral and poster papers 2 nd european congr. of mammalogy. Southampton (England). - 1995. - p. 84 (соавт. V.N.Rudi, A.A.Stadnikov, V.P.Soustin).

30. О взаимоотношениях интерстициальных эндокриноцитов и извитых канальцев семенников некоторых млекопитающих и рептилий, обитающих в санитарно-защитной зоне Оренбургского газзаво-да // Влияние антропогенных факторов на структурные преобразования клеток, тканей и органов человека и животных. Матер. III-й Всерос. научн. конф. (27-29 июня 1995, Волгоград), посвящ. 60-летию Волгоградской мед. акад. - Волгоград. - 1995. - С. 150.

31. Нейроэндокринная регуляция морфогенетических процессов в интерстициальной ткани семенников // Гистогенез и регенерация тканей. Матер, научн. конф., посвящ. памяти проф. А.А.Кли-шова (20/21 апреля 1995). - СПб. - 1995. - С. 123- 124.

32. Морфофункциональная характеристика интерстициальных эндокриноцитов (клеток Лейдига) семенников крыс в условиях активизации гипоталамо-гипофизарной нейросекреторной системы. Тез. докл. IV Всерос. конф. Нейроэндокринология-95 (11-13 апреля 1995), посвящ. 70-летию чл.-корр. РАН проф. А.Л.Поленова. - СПб. - 1995. - С. 138 (соавт. А.А.Стадников).

33. Гистофизиология извитых семенных канальцев и интерсти-циальных эндокриноцитов семенников некоторых грызунов перед залеганием их в спячку // Животный мир Урала и Северного Прикас-пия. Тез. докл. и материалы III региональн. конф. - Оренбург. - 1995. - С. 50-52.

34. Морфофункциональная характеристика эндокринных и герминативных структур семенников некоторых позвоночных, обитающих в санитарно-защитной зоне Оренбургского газоперерабатывающего завода. Тез. докл. Ш-й Всерос. научно-пракг. конф. Антропогенные воздействия на здоровье человека. - Калуга. - 1996. - С. 291292 (соавт. А.А.Стадников).

35. Некоторые морфофункциональные характеристики надпочечников байбака и их связь с состоянием структур гонад (по данным из Оренбургской области) // Сурки Северной Евразии: сохранение биологического разнообразия. Тез. докл. II междунар. (VI) совещания по суркам стран СНГ (Чебоксары, Чувашская республика, Россия, 9-13 сент. 1996). - М.: ABF. - С. 80-81 (соавт. В.П.Соустин, А.А.Стадников, В.Н.Руди, Ю.П.Семченко).

36. Гистофизиология ингерсгициальных эндокриноцитов и извитых семенных канальцев семенников байбака в период выхода из спячки (на материале из Оренбургской области). Там же. - С. 87-88.

37. Морфофункциональная характеристика эндокринных и герминативных структур семенников байбака перед залеганием в спячку (на материале из Оренбургской области). Там же. - С. 89-90.

38. Диапазон морфологической изменчивости интерстициаль-ных эндокриноцитов семенников млекопитающих в процессе изменения их репродуктивной активности // Компенсаторно-приспособительные механизмы внутренних органов и головного мозга в норме, патологии и эксперименте. Матер, научно-практ. конф. морфологов Тюменской области. - Тюмень. - 1996. - С. 200-202 (соавт. A.A. Стадников).

39. О взаимоотношении эндокринных и герминативных структур семенников некоторых млекопитающих в процессе сезонного изменения их репродуктивной активности. Там же, - С. 204-206.

40. Морфофункциональная характеристика гипоталамо-гипофи-зарно-гонадной системы крыс-самцов в условиях эмоционально-болевого стресса (ЭБС) // Морфология. 1996. - Т.110. - № 5. - С. 38-42 (соавт. A.A. Стадников).

41. Aspects écologique et morphologique de la reproduction de Marmota bobac Pali, dans la province d'Orenburg // Biodiversite chez les mar-motes. Moscow, Lyon. - 1996. - pp. 249-250 (соавт. V.N.Rudi, V.P.Soustin).

42. О влиянии факторов нонапептидэргических ядер гипоталамуса на клетки Лейдига в органных культурах семенников взрослых

крыс in vivo и in vitro // Гистогенетический анализ изменчивости и регенерации тканей. Матер, научн. совещания, посвященного 100-летию со дня рождения Н.Г.Хлопина (С.-Петербург, 3-4 апреля 1997 года). -СПб. - 1997. - С. 91.

43. Некоторые морфофункциональные особенности интерсти-циальных эндокриноцитов семенников сурка байбака Marmota bobac Mull, в сравнении с аналогичными структурами других представителей семейства беличьих // Возрождение степного сурка. Тез. докл. Межд. семинара по суркам стран СНГ (с. Гайдары, Харьковская область, Украина, 26-30 мая 1997 г.). - М.: ABF. - 1997. - С. 55-56.

44. Сезонная динамика морфофункциональных параметров эндокринных и герминативных структур семенников сурка байбака Marmota bobac Mull, и их связь с характером репродуктивной активности. Там же. - С. 56-57 (соавт. В.Н.Руди, А.А.Стадников).

45. Наземные беличьи (сурки и суслики) - уникальная модель для исследования морфогенетических процессов в органах репродуктивной системы. Тез. докл. III Межд. конф. по суркам. Сурки Го-ларктики как фактор биоразнообразия (Россия, Чувашская республика, г. Чебоксары, 25-30 авг. 1997 г.). - М.: ABF. - 1997. - С. 82-83 (соавт. В.Н.Руди, A.A. Стадников).

46. Факторы и механизмы регуляции функциональной активности семенников сурков (эндокринный, паракринный и аутокрин-ный аспекты). Там же. - С. 94 (соавт. А.А.Стадников, В.Н.Руди, JL-А.Лопатинская, О.Я.Николаева).

47. Феномен активизации эндокринных и герминативных структур семенников сурков перед залеганием в зимнюю спячку и его биологическое значение. Там же. - С. 109-110.

48. Интерстициальные эндокриноцигы (клетки Лейдига) сурков - светооптическая и ультраструктурная характеристика. Там же. - С. 110-111 (соавт. A.A.Стадников).

49. Динамика взаимоотношений интерстициальных эндокриноцитов и извитых канальцев семенников сурков в условиях сезонных изменений репродуктивной активности. Там же. - С. 111-112 (соавт. A.A.Стадников, В.Н.Руди).

50. Морфофункциональная характеристика интерстициальных эндокриноцитов семенников при культивировании органных культур мужской гонады в диффузионных камерах // Вопросы оперативной микрохирургии и микрохирургической анатомии. Материалы Российской научн. конф. (г. Оренбург, 1-3 окт. 1997 г.). - Оренбург. -1997. - С. 126.