Автореферат и диссертация по медицине (14.00.15) на тему:Гормональная дизрегуляция как компонент хронического эндотоксикоза (морфофункциональное исследование)

На правах рукописи

Калашникова Светлана Александровна

ГОРМОНАЛЬНАЯ ДИЗРЕГУЛЯЦИЯ КАК КОМПОНЕНТ ХРОНИЧЕСКОГО ЭНДОТОКСИКОЗА (морфофункциональное исследование)

14.00.15 - патологическая анатомия 14.00.16 — патологическая физиология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук

Москва - 2009

7 6 тон

003473312

Работа выполнена в Государственном учреждении «Волгоградский научный центр Российской академии медицинских наук

и Администрации Волгоградской области» и Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Волгоградский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»

Научные консультанты:

член-корреспондент РАМН,

доктор медицинских наук, Писарев Вячеслав Борисович профессор

доктор медицинских наук, Новочадов Валерий Валерьевич профессор

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, Туманов Владимир Павлович профессор

доктор медицинских наук Филатов Владимир Васильевич

доктор медицинских наук, Яковлев Михаил Юрьевич профессор

Ведущая организация: Государственное учреждение «Научно-исследовательский институт морфологии человека Российской академии медицинских наук»

Защита состоится «28» сентября 2009 года в 14.00 часов на заседании диссертационного Совета Д 208.072.04 при ГОУ ВПО РГМУ Росздрава по адресу: 117997, г. Москва, ул. Островитянова, д. 1.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО РГМУ Росздрава по адресу: 117997, г. Москва, ул. Островитянова, д. 1.

Автореферат разослан «_»_2009 года.

Ученый секретарь

диссертационного Совета, А.И. Щёголев

доктор медицинских наук,

профессор

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность.

В последнее десятилетие в теоретической медицине и клинической практике выделено новое направление - нейроиммуноэндокринология [Ак-маев И.Г., 2001, 2003; Гриневич В.В., 2003, 2007; Кветной И.М., с соавт., 2005; Кузнецов С.Л. с соавт., 2008; Zhang Н. et al., 2003; Mosiienko Н.Р., 2007]. Благодаря новому интегрированному подходу к исследованию пато- и морфогенеза многих заболеваний, это направление позволило значительно расширить представления о природе ряда важнейших болезней и разработать ряд эффективных подходов к их диагностике и лечению [Крыжановский Г.Н. с соавт., 2004; Бобынцев И.И., Северьянова Л.А., 2005; Евсеев В.А., 2007; Cai Z. et al., 2007; Oertel Y.C., 2008].

В рамках комплексного исследования механизмов развития хронического эндотоксикоза (ЭТ), осуществлявшегося под руководством чл.-корр. РАМН В.Б. Писарева, ранее были установлены патогенетические моменты этого патологического процесса и его морфологические проявления [Новоча-дов В.В., Писарев, 2005; Писарев В.Б. с соавт., 2008; Зарипова И.В., 2008], метаболические особенности [Новочадов В.В., 2001; Марков Д.Е., 2004] и аспекты вегетативной дизрегуляции [Фролов В.И., 2004; Богачев А.А., 2005].

Основу хронического ЭТ составляет неконтролируемый перенос по организму эндогенных токсических соединений в весьма умеренных концентрациях, но в течение длительного времени с повреждением клеток-мишеней, органов и тканей и реакциями на него [Яковлев М.Ю., 2002, 2005; Мишнёв О.Д., с соавт., 2003; Гаджиева Х.К. с соавт., 2006; Зайратьянц О.В., Кактурский Л.В., 2008; Sharshar Т. et al., 2003; Yamaga J. et al., 2003].

В пато- и морфогенезе такого процесса современные исследования выделяют два взаимосвязанных между собой звена: собственно токсическое воздействие на эндотелий сосудов, клетки паренхиматозных органов и внеклеточный матрикс, где доминирует эндотоксиновая агрессия как результат увеличения количества ЛПС и нарушений антиэндотоксинового иммунитета [Яковлев М.Ю. с соавт., 2000, 2006; Аниховская И.А. с соавт., 2005] и цито-киновое - системный воспалительный ответ на эндогенную интоксикацию [Еськов А.П. с соавт., 2003; Гусев Е.Ю. с соавт., 2006].

Формирование подобного сложного патологического процесса немыслимо без развития нейроэндокринной дизрегуляции, в организме должны присутствовать ее признаки в виде гормонального дисбаланса и морфологических проявлений на уровне эндокринных органов и в точках приложения действия гормонов. Имеющиеся в литературе сведения о морфологии и

функции органов эндокринной системы при остром ЭТ единичны и противоречивы [Востриков С.М. с соавт., 2004; Глумов В.Я., Филатов В.В., 2005; Висмонт Ф.И. с соавт., 2007; Touchette K.J., et al. 2002; Watanobe H. 2002; Wang Y., et al., 2000, 2004], a при хроническом процессе - практически отсутствуют [Денисов А.Г., 2005, 2008; Зайратьянц О.В., 2006; Полякова JI.B., 2008; Serdiuk S.E. et al., 2005; Cooper D.S., 2007]. С этих позиций, актуальным представляется комплексное исследование органов эндокринной системы при хроническом ЭТ в сопоставлении с маркерами эндогенной интоксикации, гормональным профилем и морфологическими изменениями в органах-мишенях эндогенной интоксикации.

Цель работы - установить закономерности морфологических изменений в органах эндокринной системы при хроническом эндотоксикозе и участия развивающиейся на этой основе гормональной дизрегуляции в его пато-и морфогенезе.

Задачи исследования.

1. Изучить основные патоморфологические изменения, развивающиеся в органах эндокринной системы при хроническом эндотоксикозе, выделить и охарактеризовать ведущие процессы, лежащие в их основе.

2. Установить структурные основы, последовательность и сравнительную выраженность патологии адреналовой, тиреоидной, гонадной эндокринных осей и паравентрикуло-инсулярного пути при хроническом эндотоксикозе.

3. Сопоставить морфологические изменения в органах-мишенях эндогенной интоксикации, особенности гормонального профиля и динамику интегральных показателей эндотоксикоза в периферической крови с выходом на математическое моделирование патологических изменений.

4. Выявить иммуногастохимическими методами распределение маркеров ФНО-зависимого апоптоза в отдельных железах внутренней секреции и определить роль этого процесса в механизмах устранения эндокриноцитов при хроническом эндотоксикозе.

5. Выявить распределение NOS-3 и определить роль эндотелиальной нитроксидсинтазы в сосудистом механизме повреждения эндокриноцитов и патологическом ремоделировании отдельных желез внутренней секреции при хроническом эндотоксикозе.

6. Показать стереотипные ультраструктурные изменения в эндокрино-цитах различных желез внутренней секреции при развитии хронического эн-

дотоксикоза и выявить особенности в зависимости от их принадлежности к различным регуляторным осям.

7. Оценить возможность уменьшения тяжести эндокринопатии и общих проявлений эндотоксикоза при введении экспериментальным животным эстрогенов или тиреостатиков.

Научная новизна.

Сформирована концепция об участии основных эндокринных органов в пато- и морфогенезе основных патологических изменений в печени и почках, а также участии выявленных гормональных сдвигов в развитии компенсаторных и приспособительных процессов в этих органах.

Впервые для объяснения механизмов и динамики развития хронического ЭТ, субстрата формирующейся полиорганной патологии, был применен подход, основанный на анализе характера и механизмов гормональной дизре-гуляции. Показана роль мультигландулярной эндокринопатии в формировании недостаточности печени и почек при хроническом ЭТ.

С помощью современных методов морфологического исследования показано, что ФНО-зависимый апоптоз при хроническом ЭТ является одним из ведущих механизмов устранения эндокриноцитов в гипофизе, щитовидной железе и яичниках. Установлено, что в механизмах повреждения и гибели эндокриноцитов надпочечников, гонад и инсулярного аппарата при хроническом ЭТ существенную роль играет гиперэкспрессия эндотелиальной нитро-ксидсинтазы, опосредующая избыточную васкуляризацию желез внутренней секреции, хронический тканевой отек и повреждение сохранившихся эндокриноцитов, а также стромальную пролиферацию.

Сопоставление гормонального профиля и структурных изменений в гипоталамусе, гипофизе, щитовидной железе, инсулярном аппарате поджелудочной железы, надпочечниках, яичниках и семенниках в динамике хронического ЭТ позволило обосновать основные закономерности, очередность и сравнительную интенсивность разрушения основных гормональных осей при этом патологическом процессе.

Анализ ультраструктурных изменений в эндокриноцитах основных эндокринных органов при хроническом ЭТ подтвердил стереотипность внутриклеточных реакций на повреждение, а также выявил дополнительные признаки, зависящие от типа секреции, ангиоархитектоники железы и ее нагружен-ности при данной патологии.

Показано, что применение эстрогенов и тиреостатическая терапия способны корректировать гормональный дисбаланс и уменьшать выраженность эндогенной интоксикации и повреждения печени и почек при хроническом ЭТ.

Научно-практическая значимость.

Полученные данные расширяют современные представления о хроническом ЭТ с позиций вовлечения в его развитие механизмов эндокринной дисфункции. Они мотивируют врачей клинической практики на поиски скрытой эндокринной патологии у лиц с хроническими заболеваниями, сопровождающимися эндогенной интоксикацией. С другой стороны, на основании работы обосновывается поиск хронической эндогенной интоксикации в эндокринологии, как возможной причины заболевания.

Метод разделения эндокриноцитов по результатам радиальной морфо-метрии на классы (гиперфункционирующие, нормально функционирующие, с гипофункцией и истощенные) приемлем для любых исследований в области эндокринологии для скрининга направления и выраженности изменений под действием экзо- или эндогенных стимулов.

Ряд гормональных воздействий (введение эстрогенов, тиреостатиков) может быть использовано для модификации общепринятых моделей хронических токсин-индуцированных процессов с доказанной модуляцией ими развивающейся органопатологии в экспериментальной медицине.

Использование материалов работы при преподавании физиологии, патофизиологии, патологической анатомии и эндокринологии в высших учебных заведениях позволяет повысить качество подготовки современного врача.

Основные положения, выносимые на защиту.

1. Ключевыми патоморфологическими изменениями в органах эндокринной системы при хроническом эндотоксикозе являются мозаичное сочетание участков повреждения, гибели, атрофии и гипертрофии эндокриноцитов, сосудистых реакции и пролиферации стромы.

2. Степень повреждения эндокриноцитов при хроническом эндотоксикозе и характер компенсаторных процессов в конкретной железе зависит от ее исходного функционального состояния, вовлеченности в системные механизмы адаптации к токсическому процессу при общей тенденции к субком-пенсированной гипофункции и стромальной пролиферации с частичным замещением объема утраченных эндокриноцитов.

3. Результатом структурных изменений в органах эндокринной системы при хроническом эндотоксикозе является мультигландулярный гормональный дисбаланс, представляющий собой взаимосвязанную последовательность нарушений основных вертикальных эндокринных осей, внутриосевых взаимоотношений.

4. Классические вертикальные регуляториые эндокринные оси при развитии хронического эндотоксикоза повреждаются в различной степени: максимальная дизрегуляция, патология периферических желез и разрушение внутриосевых взаимоотношений свойственно гонадной оси, менее выраженная патология - тиреоидной оси и инсулярному пути, и минимальные изменения - адреналовой оси.

5. Существенное значение в механизмах устранения функционирующих эндокриноцитов желез внутренней секреции имеют ФНО-зависимый апоптоз и сосудистый механизм, опосредованный через эндотелиальную нитроксидсинта-зу, которая экспрессируется в эндотелии сосудов этих желез.

6. Применение тиреостатиков и эстрогенов способно ослаблять уровень эндогенной интоксикации, и связанную с ним тяжесть патологии печени и почек при хроническом эндотоксикозе.

Апробация работы и публикации.

Основные результаты исследования докладывались и обсуждались на П Общероссийской конференции «Проблемы морфологии» (Сочи, 2003); научной конференции «Новые технологии в медицине» (Волгоград, 2004); V Общероссийской конференции «Гомеостаз и инфекционный процесс» (Кисловодск, 2004); V Российском съезде анатомов, гистологов и эмбриологов (Казань, 2004); Ш Российском конгрессе по патофизиологии (Москва, 2004); Всероссийском симпозиуме «Эндотоксикоз: природа, диагностика и принципы коррекции» (Волгоград, 2005); V Сибирском физиологическом съезде (Томск, 2005); П Всероссийской конференции «Клинико-морфологические аспекты эндокринопа-тий» (Белгород, 2006); VII общероссийской конференции «Гомеостаз и инфекционный процесс» (Москва, 2006); П съезде Российского общества патологоанатомов (Москва, 2006); П Всероссийской конференции «Новые информационные технологии в медицине» (Волгоград, 2007); международной конференции «Структурные преобразования органов и тканей в норме и при воздействии антропогенных факторов» (Астрахань, 2007); IX Международном конгрессе Ассоциаций морфологов (Бухара, 2008); Международной конференции, посвященной 100-летию со дня рождения академика Д. А. Жданова (Москва, 2008).

Апробация работы осуществлена на расширенном заседании сотрудников отдела общей и экспериментальной патологии Волгоградского научного центра РАМН и администрации Волгоградской области, кафедр патологической анатомии и патологической физиологии Волгоградского государственного медицинского университета 20 октября 2008 года. По теме диссертации опубликовано 49 научных работ, в том числе 14 публикаций в журналах, действующего «Перечня ...ВАК».

Внедрение результатов работы.

Материалы диссертации внедрены в учебный процесс кафедр факультетской терапии, патологической анатомии, судебной медицины Волгоградского государственного медицинского университета, кафедры семейной медицины Ульяновского государственного университета. Практические рекомендации используются в работе ГУ «Волгоградского научного центра РАМН и администрации Волгоградской области», Волгоградского областного патологоанатомиче-ского бюро, ГУЗ «Волгоградское областное бюро СМЭ», Областном онкологическом центре Ульяновской области.

Структура и объем диссертации.

Диссертация изложена на 305 страницах машинописного текста, содержит 87 таблиц, иллюстрирована 59 рисунками. Она состоит из введения, обзора литературы, главы описания материалов и методов исследования, главы собственных исследований, заключения, выводов и списка использованной литературы. Список литературы содержит 334 источника (211 на русском и 123 - на иностранных языках).

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Работа носила экспериментальный характер и была выполнена с использованием 141 белых нелинейных крыс обоего пола (в том числе 21 - контрольные группы различных серий опытов). Протокол экспериментов составлен в соответствии с действующими нормативными документами в области биоэтики и правил лабораторной практики, программа экспериментов была согласована с Локальным независимым этическим комитетом по этической экспертизе диссертационных исследований (протокол № 18-2006 от 20 ноября 2006 года).

Использовали две модели хронического ЭТ: у 36 крыс с преимущественным поражением печени [Писарев В.Б. с соавт., 2002], у 36 - с преимущественным поражением почек [Новочадов В.В., Писарев В.Б., 2005]. Токсический гепатит и нефропатия в сочетании с печеночной и почечной недостаточностью воспроизводятся в этих моделях к 30 сут эксперимента, а к 90 сут удается воспроизводить более выраженные нарушения, связанные с формированием цирроза печени и нефросклероза.

Отдельная часть исследования была посвящена проведению патогенетической терапии, направленной на уменьшение тяжести хронического ЭТ путем целенаправленного изменения гормонального дисбаланса. Коррекция тиреостатическими препаратами осуществлялась с помощью препарата Тиа-мазол per os 24 крысам-самцам в дозе 20 мг/кг/сут в течение 5 дней и поддер-

живающей дозой 10 мг/кг массы животного 1 раз в 7 дней [Сег^его В.А., е1 а1., 1996]. Гиперэстрогенемшо вызывали 24 крысам-самкам путем внутримышечного введения 0,1% масляного раствора Эстрадиола из расчета 50 мкг/кг/сут в течение 7 дней с поддерживающей дозой 50 мг/кг массы животного 1 раз в 5 дней [Дедов И.И., с соавт., 2002.]

Морфологическим доказательством наличия хронического ЭТ являлись признаки прогрессирующего повреждения печени и почек с развитием в них компенсаторных процессов: хронического гепатита/гепато-фиброза и дисме-таболическойнефропатии/нефросклероза.

В качестве лабораторно-биохимических показателей ЭТ в плазме крови крыс определяли вещества средней молекулярной массы (ВСММ), олигопепти-дов [Малахова МЛ., 1995] и концентрацию продукта свободнорадикального окисления липидов - малонового диальдегида (МДА). В гомогенатах печени и почек определяли активность ацилазы, как маркера токсического повреждения [Фролов В.И. с соавт., 1991]. Эти исследования подтвердили, что во всех случаях у крыс развивалась хроническая эндогенная интоксикация (табл. 1).

Таблица 1

Биохимические показатели выраженности хронического ЭТ у крыс-самцов (на примере модели с преимущественным поражением печени, М±т)

Показатели Контрольпая группа С роки эксперимента

30 сут 60 сут 90 сут

ВСММ, усл. ед. Олигопептиды, мг/л МДА, ммоль/л Ацилаза печени, мккат/г белка Ацилаза почек, мккат/г белка 0,16± 0,02 115,5 ±13,8 5,33 ±0,43 27,91 ± 1,93 35,61 ± 2,90 0,43 ± 0,05* 268,5 ± 29,8* 11,40 ±0,94* 9,06 ±0,87* 35,61 ± 2,90 0,49± 0,05* 289,4 ±30,5* 10,53 ±1,25* 7,58 ± 0,73* 18,21 ± 1,78* 0,51 ± 0,06* 291,0 ±36,4* 11,08 ±1,35* 5,97 ± 0,68* 13,61 ± 1,45*

Примечание. *Р<0,05 по сравнению с крысами контрольной группы

Поскольку течение и исход различных патологических процессов во многом определяются уровнем реактивности организма [Крыжановский Г.Н., 2001, 2004; Акмаев Г.Н., 2003], которая существенно зависит от пола, в сериях по исследованию гонадной оси показатели развития хронического ЭТ раздельно проанализированы для крыс-самцов и самок. В последующем при сопоставлениях они выражались в процентах от соответствующих исходных величин.

Подготовку материала для патоморфологического исследования эндокринных органов - паравентрикулярного ядра гипоталамуса (РУ), гипофиза, щитовидной железы (ЩЖ), надпочечников, яичников/семенников, поджелудочной железы проводили с помощью общепринятых методик [Саркисов Д.С., Перов Ю.Л., 1996; Коржевский Д.Э., 2005].

Для прямого морфометрического исследования был использован компьютерный комплекс «Видеотест-Морфо» (Россия). Подсчитывали численную плотность и объемные доли (ОД) отдельных структур, показатели размеров и их соотношения [Автандилов Г.Г., 2002].

Степень повреждения эндокриноцитов оценивали по соотношению неизмененных клеток, эндокриноцитов, находящихся в состоянии повышенной функциональной секреции, крайнего истощения, повреждения или некроза (свыше 1000 клеток на одну железу). Результаты дополняли с помощью оригинального метода радиальной морфометрии, разработанного в Волгоградском научном центре РАМН [Новочадов В.В., 2005]. Он реализован в виде программного приложения «Radiana», позволяющий представить распределение яркости в радиальном и секторальном направлениях в единицах RGB виде матрицы данных MS Excel с расчетом коэффициентов этой функции.

Иммуногистохимическое исследование проводили с использованием наборов антител фирмы «Novocactra Laboratories Ltd» (Великобритания);

- TRAIL (TNF-Related Apoptosis-Inducing Ligand, клон 27B12),

- каспаза-3 (Caspase-3, клон JHM62);

- эндотелиальная нитроксидсинтаза (NOS-3, клон RN5).

Визуализацию проводили с помощью непрямого иммунопероксидазно-

го метода. По степени экспрессии клетки относили к одному из классов: негативные, слабопозитивные, позитивные и гиперэкспрессирующие с выражением доли каждого класса в процентах [Петров C.B., Райхлин Н.Т., 2004].

Для проведения ультрамикроскопического исследования животных подвергли эвтаназии путем внутривенной инфузии 4%-ного раствора пара-форма на 0,1 M какодилатном буфере (суправитальной фиксации) под нембу-таловым наркозом. Дофиксацшо производили в 4%-ном растворе параформа на 0,1 M какодилатном буфере с последующей постфиксацией в 1%-ном растворе тетраокиси осмия на 0,1М какодилатном буфере (рН=7,4). Материал заливали в смесь эпона и аралдита, ультратонкие срезы получали на ультрамикротоме LKB-8800. После контрастирования в 2,5%-ном растворе уранил-ацетата в течение 40 минут и 0,3%-ном растворе цитрата свинца в течение 20 минут срезы изучались в электронных микроскопе Tesla BS-500 при ускоряющем напряжении 60 кВ. Фотодокументирование производили с использованием фотопленок «ФТ-40».

Для оценки функционального состояния органов эндокринной системы при хроническом ЭТ были определены концентрации гормонов в сыворотке крови с учетом наличия определенных эндокринных осей:

- адреналовой оси: АКТГ - кортизол.

- тиреоидной: ТТГ - Тз и Т4 (общий и свободный), тиреоглобулин.

- гонадной: ФСГ, ЛГ, пролактин - тестостерон, эстрадиол, прогестерон.

- паравентрикуло-инсулярного пути: инсулин.

Исследование проводили методом ELISA с использованием спектрофотометра Stat Fax 2100 и вошера Stat Fax 2600 (AWARENESS Technology, USA) с помощью тест-систем «Вектор-Бест» (Новосибирск, Россия) и «DRG» (Germany).

Статистическая обработка проведена общепринятыми для медико-биологических исследований методами с помощью программных пакетов EXCEL 7.0 (Microsoft, USA) и АРКАДА (Диалог-МГУ, Россия). При регрессионном анализе выявлены наиболее значимые показатели, определение которых целесообразно для оценки влияния эндокринной дизрегуляции на выраженность изменений в данном органе при ЭТ [Платонов А.Е., 2000; Петри

A, Сабин К., 2003; Новиков Д.А, Новочадов В.В., 2005].

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Морфологические изменения в паравснтрикулярном ядре гипоталамуса крыс при хроническом эндотоксикозе.

Исследования PV при хроническом ЭТ были проведены нами совместно с

B.И. Фроловым (2004). Полученные результаты выявили наличие однонаправленных изменений в моделях с преимущественным поражением печени и почек. В PV преобладали нейроны с вакуолизированной цитоплазмой, ядра нередко были деформированы и смещены к периферии клетки, в некоторых из них отсутствовали ядрышки. Среда сохранившихся нейронов выявлялись единичные клетки-тени, нейронофагия сочеталась с набуханием и частичной фрагментацией окружающих проводников, вблизи поперечных срезов полнокровных капилляров и венул отчетливо обнаруживались зоны периваскулярного отека.

В динамике ЭТ происходило уменьшение ОД нейронов, более выраженное в модели с преимущественным поражением печени (Р<0,05). На 90-е сут эксперимента достоверно уменьшался средний размер ядер нейронов (примерно на 20% в обеих моделях). Выявленные изменения сопровождались увеличением коэффициента микроглия/нейрон. Полученные данные соответствуют полученным ранее доказательствам достаточно высокой чувствительности PV к разнообразным экзогенным повреждениям, что в первую очередь определяется функциональной нагруженностью ядра и слабостью его исходного микроглиального представительства [Писарев В.Б., 1990; Гуров Д.Ю., 2005; Потанин М.Б., 2008].

При исследовании распределения яркости методом радиальной морфо-метрии были выявлены четыре типа нейронов (рис. 1).

I тип - неизмененные

II тип - стимулированные

10% 30% 50% 70% 90% III тип - истощенные

10% 30% 50% 70% 90%

IVтип - грубо поврежденные и клетки-тени

10%

30% 50%

70%

90%

10%

30%

50%

70%

90%

Рис. 1. Радиальная морфометрия нейронов паравентрикулярного ядра гипоталамуса. Четыре типа клеток в зависимости от характера функции радиального распределения яркости перикариона. По оси абсцисс - относительное расстояние от границы ядра до внешней границы перикарина.

Нейроны I типа характеризовались монотонным нарастанием яркости от центра ядра к периферии с пиком яркости на 76-84% расстояния от ядра до плазмалеммы. Такие нейроны по всем остальным морфологическим признакам были отнесены к неповрежденным. Нейроны II типа отличались монотонным снижением яркости от ядра к периферии перикариона, пик яркости выявлялся на расстоянии 0-20% от границы ядра. Эти клетки соответствовали нейронам, находящимся в состоянии раздражения (функциональной стимуляции). Для нейронов III типа отличием от предыдущих являлось наличие «двугорбой» кривой. Пики яркости были расположены на расстоянии от ядра в пределах 41-75% и 86-94%. Такие нейроны имели все признаки истощения при гистологическом исследовании. Наконец, нейроны IV типа имели распределение яркости в виде обращенной параболы, с монотонным нарастанием и последующим снижением от центра ядра к периферии. Пик яркости располагался в пределах 50-75% расстояния от ядра до внешней границы перикариона. Эти клетки гистологически выглядели как грубо измененные нейроны и клетки-тени.

В PV животных контрольной группы были обнаружены нейроны II (42,6%), III (37,5%) и IV типов (19,9%). При ЭТ выявлено уменьшение в 1,8 раза нейронов III типа (Р<0,001), увеличение нейронов IV типа (в 1,4 раза, Р<0,05) и появление до 5% клеток I типа. Полученные данные явились дополнительным доказательством двунаправленности изменений нейронов PV при эндотоксикозе: наряду с появлением большого процента поврежденных и гибнущих клеток обнаруживаются нейроны с явлениями функциональной стимуляции и внутриклеточной перестройки.

Естественно, большинство изменений в PV гипоталамуса при хронических интоксикациях хорошо описаны и выглядят достаточно стереотипно [Туманов В.П., с соавт., 2003; Филатов В.В., Глумов В.Я., 2003; Писарев В.Б. с соавт., 2006; Евсеев В.А., 2007; Watanobe Н., et al., 2003; Zhang W., 2003; Wu Y.H. et al., 2006; Doyon C. et al, 2007], но в рамках настоящего исследования они характеризуют тот морфологический субстрат центральных механизмов гормональной дизрегуляции, который участвует во всех последующих эндокринных изменениях при хроничексом ЭТ.

Морфофункциональные изменения гипофиза крыс при хроническом эндотоксикозе.

В ходе моделирования хронического ЭТ выявлены сходные изменения в обеих моделях, более выраженные при сочетанном введении ЛПС и ТХМ. На 30-е сут хронического ЭТ при окраске по Маллори в аденогипофизе преобладали базофилы с просветлениями в цитоплазме, в ряде случаев - пикно-тическими ядрами. В некоторых аденоцитах выявлено набухание, явления вакуольной дегенерации. По мере увеличения длительности эксперимента увеличивалось количество хромофобных клеток. Нарушения в аденогипофизе на 90-е сут ЭТ характеризовались более выраженными стромально-сосудистыми изменениями: на фоне увеличения периваскулярного отека и полнокровия обнаружен набухший эндотелий с признаками повреждения. Клеточные элементы распределены неравномерно, среди хромофильных клеток превалировали базофилы, в отдельных клетках которых обнаружены признаки дегенерации и вакуолизации цитоплазмы.

При морфометрии аденогипофиза выявлено достоверное снижение объемной доли (ОД) базофилов к 60-м сут хронического ЭТ (в 1,4 раза - при моделировании ЭТ с развитием гепатофиброза; в 1,45 раза - при ЭТ с развитием нефросклероза). На 90-е сут экспериментального ЭТ происходило дальнейшее уменьшение объемной доли базофилов по сравненшо с количеством базофилов в аденогипофизе крыс контрольной группы (в 1,7 и в 1,3 раза соответственно, Р<0,05). При этом по мере увеличения длительности ЭТ у жи-

вотных обеих экспериментальных групп увеличивалось количество вакуоли-зированных базофилов. Обращало на себя внимание достоверное увеличение ОД соединительной ткани (Р<0,05) и ОД ацидофильных аденоцитов на всем протяжении эксперимента (табл. 2).

Таблица 2

Морфометрические показатели аденогипофиза у крыс при хроническом ЭТ (модель с преимущественным поражением печени, М±т)

Объемная доля, % Контрольная группа Сроки эксперимента

30 сут 60 сут 90 сут

Ацидофилы Базофплы Хромофобы Строма Сосуды 39,03±1,66 21,00±1,09 32,07±0,4 2Д±0,11 5,8±0,13 38,14±1,58 18,06±1,38 31,2±2,13* 6,1±0,09* 6,5±0,11* 47,05±1,75*# 14,81±1,08*# 17,58±1,18*# 7,1±0,11* 13,46±0,18** 45,34±1,47* 12,11±1,71*# 19,64±1,11* 9,8±0,14*# 13,11±0,09*

Примечание: здесь и далее * - Р<0,05 по сравнению с крысами контрольной группы; *' Р<0,05 по сравнению с предыдущим сроком эксперимента

Иммуногистохимическое исследование выявило прирост экспрессии эндотелиальной нитроксидсинтазы (NOS-3) в клетках аденогипофиза (в 7,3 раза при хроническом ЭТ с преимущественным поражением печени, в 5,11 раз - при ЭТ с преимущественным поражением почек). Достоверно увеличилась доля эндотелиоцитов, гиперэкспрессирующих NOS-3 (в 3,87 и в 2,39 раза), и доля клеток с умеренной экспрессией фермента (в 2,95 и в 1,93 раза, соответственно). Был показан прирост экспрессии TRAIL в аденоцитах, а при исследовании каспазы-3 было зарегистрировано увеличение доли иммунопозитивньк клеток до 80% среди всех аденоцитов (Р<0,05) на 90-е сут эксперимента. Нарастание экспрессии маркеров ФНО-зависимого апоптоза в динамике хронического ЭТ убедительно свидетельствует о достоверном участии данного механизма апоптоза в рассматриваемом патологическом процессе.

При изучении ультраструкгуры на 30-е сут ЭТ изменения были обнаружены преимущественно в адренокортикотропоцитах аденогипофиза. В них уменьшалось число везикул, митохондрии были увеличены в размерах, с просветлением матрикса и небольшим количеством крист. Цистерны ЭПС были значительно расширены с образованием вакуолеоподобных полостей. В остальных аденоцитах выраженных изменений не отмечалось. В дальнейшем уже во всех выявленных аденоцитах обнаруживалось расширение цистерн на фоне снижения числа секреторных гранул. Уменьшение размеров митохондрий, просветление митохондриального матрикса, деградация крист и увеличение секрета выявлены ;на фоне вакуолей, образованных цистернами ЭПС.

При морфометрии электронограмм выявлялось увеличение фактора формы ядра, указывающее на увеличенную инвагинацию кариолеммы и сви-

детельствующее об активации внутриядерных процессов трансляции. Уменьшение ОД митохондрий и отношения яркости матрикса митохондрий к яркости цитоплазмы в системе RGB по мере увеличения длительности хронического ЭТ являлось косвенным отражением внутриклеточного энергодефицита. ОД везикул к окончанию эксперимента (90-е сут) уменьшилась в 1,75 раза по сравнению с группой сравнения (Р<0,05).

Изменения в гипофизе, как органе центральной гормональной регуляции, при хронических дисметаболических процессах и интоксикации, описывались достаточно подробно [Филаретов A.A., 1996; Мхитаров В.А. с соавт., 2000; Акмаев И.Г., 2001, 2007; Григоренко A.A. с соавт., 2002; Fernandes G.A. et al., 2002; Beishuizen A., Thijs L.G., 2003]. Применительно к концепции настоящего исследования важным является выявленное сочетание более выраженного повреждения и гибели базофилов аденогипофиза при наличии гипертрофии ацидофилов, в совокупности рассматриваемое как субстрат гипо-физарных механизмов гормонального дисбаланса при хроничсеком ЭТ.

Морфологические изменения надпочечников и дисбаланс гормонов адреналовой оси у крыс при хроническом эндотоксикозе.

В надпочечниках крыс на 30-е сут хронического ЭТ (более - в пучковой и сетчатой зонах коркового вещества) выявлялись многочисленные эндокри-ноциты с мелкоглыбчатым распадом ядерного хроматина, резкой вакуолизацией и делипоидизацией цитоплазмы. Участки повреждения были окружены зонами рыхлой соединительной ткани, с признаками гиалиноза и кальциноза. Обнаружено уменьшение объема всех зон коркового вещества. Увеличение ОД мозгового вещества было обусловлено выраженной гипертрофией клеток, в цитоплазме которых наблюдалась резкая вакуолизация цитоплазмы. К 90-м сут развивалась выраженная атрофия коркового вещества, максимально измененной выглядела сетчатая зона. Наблюдаемое увеличение ОД соединительной ткани в корковом веществе, было расценено как адаптационная перестройка.

При морфометрии выявлены различия в интенсивности повреждения эн-докриноцитов между зонами коркового вещества и мозговым веществом надпочечника. ОД клубочковой зоны надпочечника на 30-е сут ЭТ уменьшалась, а в последующем превышала аналогичные значения в контрольной группе в 1,2 и 1,46 раза, соответственно (Р<0,05). Средний объем ядер эндокриноцитов увеличивался в 1,57 раза, а ядерно-цитоплазматичское отношение оказывалось повышенным только на относительно ранних сроках развития ЭТ, а к 90-м сут не имело достоверных отличий от показателей в контрольной группе. Сопоставление данных изменений позволяет трактовать их как проявление функцио-

нального напряжения клеток клубочковой зоны с развитием истощения по мере развития хронического ЭТ.

Аналогичные, но выраженные в большей степени изменения регистрировались в пучковой зоне надпочечника (табл. 3).

Таблица 3

Морфометрические показатели пучковой зоны коркового вещества надпочечников крыс при хроническом ЭТ (модель с преимущественным поражением печени, М±ш)

Показатели Контрольная группа С роки эксперимента

30 сут 60 сут 90 сут

ОД зоны, % Средний объем ядер, мкм3 Ядерно-цитоплазма-тическое отношение 18,22±0,08 23Д9±0,48 0,125±0,011 12,30±0,08* 23,00±1,19 0,171±0,017* 19,01±0,15*# 19,58±1,09*# 0,123±0,010# 25,39±0,16*# 16,43±0,94*# 0,078±0,009*#

Сетчатая зона коркового вещества при количественном анализе была наименее измененной. Ее ОД в общем объеме паренхимы органа практически не изменялась, а колебания среднего ОД ядер имели ту же динамику, что и в других зонах коркового вещества. Увеличение ядерно-цитоплазматического отношения в сетчатой зоне сохранялось до 60-х сут, что свидетельствовало о более поздних сроках развития декомпенсации и истощения этих клеток при хроническом ЭТ.

В мозговом веществе надпочечника регистрировались качественно отличные изменения. ОД мозгового вещества к 30-м сут ЭТ была увеличенной, а затем уменьшалась. Параллельно увеличивались ОД ядер и ЯЦО, что свидетельствовало о постепенном нарастании функциональной активности сохранившихся медуллярных эндокриноцитов на поздних сроках эксперимента. Обращала на себя внимание неоднородность повреждения ткани надпочечника: зоны с наличием относительно высокого процента клеток с повышенной функциональной активностью и низким содержанием дистрофически измененных и/или некротизированных клеток мозаично чередовались с участками выраженных альтеративных изменений.

При радиальной морфометрии эццокриноцитов основные патологические изменения заключались в значительном снижении вариабельности интенсивности окраски по секторам и уменьшении тангенса угла кривой яркости цитоплазмы. Интенсивность выявленных изменений увеличивалась в ряду пучковая зона < клубочковая зона < сетчатая зона.

При иммуногистохимическом выявлении эндотелиальной нитроксид-синтазы в надпочечниках объемная плотность иммунопозитивиых клеток при хроническом ЭТ была выше, чем в контроле, они совпадали по локализации с

участками максимального повреждения и стромальной пролиферации. Начиная с 30-х сут эксперимента, в надпочечниках выявлялось увеличение экспрессии TRAIL и каспазы-3, оно было максимально выражено на 60-е сут хронического ЭТ, независимо от модели и сохранялось до окончания опыта.

При ультрамикроскопическом изучении эндокриноцитов пучковой зоны коркового вещества надпочечника на 30-е сут хронического ЭТ обнаружено резкое снижение количества липидосодержащих везикул. Оставшиеся везикулы были электронно-прозрачными, при этом часть из них было увеличена в размерах и вакуолизирована. На 60-е сут везикулы в спонгиоцитах оказывались значительно меньше, они были более однородньми по размеру, неравномерно заполнены умеренно электронно-плотным содержимым (концентрирующимся в центре) и окруженным светлым ободком. Увеличение количества рибосом свидетельствовало об усилении синтетических процессов в клетке. К окончанию эксперимента (90-е сут) часть эндокриноцитов не содержала везикул, в других спонгиоцитах внутреннее пространство везикул было заполнено содержимьм слабой электронной плотности. В премембранном слое везикул обнаруживались мелкие гранулы, выстилавшие везикулы изнутри, по типу «ожерелья». Обращало на себя внимание уменьшение количества крист в митохондриях и просветление митохондриального матрикса. Уменьшение ОД везикул зарегистрировано на ранних сроках эксперимента (30-е сут) в 1,53 раза по сравнению с контрольной группой и достоверное снижение ОД везикул на 90-е сут ЭТ (в 2,36 раз по сравнению с предыдущим сроком эксперимента) в сочетание с уменьшением активности митохондрий являлось доказательством истощения эндокриноцитов.

Итак, в условиях хронического ЭТ наблюдается длительно существующее повреждение эндокриноцитов, преимущественно коркового вещества органа, приводящее в итоге к атрофии надпочечников и частичному стро-мальному замещению утраченного объема паренхимы. Частично эти процессы реализуются через ФНО-опосредованный апоптоз эндокриноцитов NO-зависимые механизмы индукции стромальной пролиферации.

При исследовании гормонов адреналовой оси у животных с хроническим ЭТ было зарегистрировано незначительное увеличение уровня АКТГ на 30-е сут с последующим повышением до 90-х сут эксперимента (рис. 2).

При этом наибольший скачок АКТГ на 90-е сут - в 6,9 раза, был обнаружен у животных модели хронического ЭТ с преимущественным поражением почек, в то время как у крыс с преимущественным поражением печени уровень изучаемого гормона увеличивался в 5,5 раза (Р<0,05).

0123456789

Рис. 2. Гормоны адреналовой оси в сыворотке крови крыс при хроническом ЭТ. За единицу принято значение показателя в контрольной группе животных.

Уровень кортизола в крови на 30-е сут хронического ЭТ был максимальным и превышал показатель в контроле в 4,39 раза, затем начинал падать, так что на 90-е сут эксперимента, несмотря на высокое содержание АКТГ, уровень кортизола был в 1,6 раза ниже, чем у животных контрольной группы (Р<0,05).

В ходе корреляционного анализа установлено, что у интактных животных уровень кортизола находился в сильной корреляционной зависимости от уровня АКТГ (R=0,89), на 30-е сут хронического ЭТ связь между гормонами ослабевала (R=0,69), а к 90-м сут можно было говорить о полном разобщении связи между гормонами (R=0,15).

Ср^ди всех эндокринных осей, адреналовая изучена при хронических воздействиях в связи с классической концепцией стресса и выделением стрес-сорной составляющей этих процессов [Бажанова Е.Д., Теплый Д.Л., 2004; Данилов Г.Е. с соавт., 2004; Бобынцев И. И., с соавт., 2007; Кузнецов С.Л. с со-авт., 2008; Dallman M.F. et al, 2004; McCormick C.M. et al. 2007; Ulrich-Lai Y.M. et al., 2007]. Полученные собственные данные детализируют механизмы формирования и субстрат гормональной дизрегуляции адреналовой оси при развитии хронического ЭТ.

Морфологические изменения щитовидной железы и дисбаланс гормонов тиреоидной оси у крыс при хроническом эндотоксикозе.

В щитовидной железе выявлялось мозаичное нарушение гистоархитек-тоники органа. По мере увеличения длительности ЭТ структурные преобразования в ЩЖ характеризовались фазовыми изменениями и не имели принципиальных особенностей в различных моделях. На ранних сроках хронического ЭТ железа сохраняла нормопластический тип строения и характеризовалась снижением количества фолликулярных тироцитов, развитием вакуольной дистрофии и десквамацией отдельных клеток в просвет фолликула. По мере увеличения сроков ЭТ происходило ремоделирование ткани щитовидной железы по макрофолликулярному типу с образованием малочисленных гнездных очагов с микрофолликулярной трансформацией и стромальным замещением объема утраченной паренхимы.

m

□ 90 сут

□ 60 сут

□ 30 сут

Количественные показатели подтверждали и детализировали описанные качественные изменения (табл. 4).

Для определения функциональной активности эндокриноцитов ЩЖ был использован оригинальный метод радиальной морфометрии [Калашникова С.А. с соавт., 2007]. У крыс контрольной группы в железе преобладали клетки, находящиеся в состоянии физиологической секреции (II тип).

Таблица 4

Морфометрические показатели ЩЖ у крыс при хроническом ЭТ (модель с преимущественным пораженцем печени, М±ш)

Показатели Интактные животные Сроки эксперимента

30 сут 60 сут 90 сут

Средний наружный диа- 91,3±5,2*"

метр фолликула, мкм 125,4±11,7 118,9±27,6 115,1±27,8*

Высота фолликулярного 16,5±2,5**

эпителия, мкм 31,0±9,1 25,1±5,7* 29,8±18,3*

ОД коллоида, % 18,7±0,4 17,9±0,9 19,9±1,2 10,5±0,9*"

ОД фолликулярного

эпителия, % 74,9±3,1 72,4±9,1 50,2±7,4*# 60,9±2,3*

ОД шггерфолликулярного

эпителия, % 3,9±0,1 4,5±0,1 4,3±0Д 5,2±0,9*

ОД стромы, % 1,1±0,1 2,4±0,1 16,0±1,1*# 18,5±1,9*#

ОД сосудистого русла, % 1,3±0,1 2,9±0,1 9,5±0,9*# 14,9±1,2*#

Клетки с гипосекрецией (I типа) составляли всего 1,0%. При хроническом ЭТ в обеих моделях достоверно нарастало число эндокриноцитов с повышенной секрецией (III тип, Р<0,05). К 90-м сут хронической эндогенной интоксикации количество клеток с гиперсекреторной активностью уменьшалось, одновременно нарастало до 12,5% число клеток в состоянии повреждения и функционального истощения (IV тип, Р<0,01).

Иммуногистохимическое исследование выявило увеличение процента-эндотелиальных клеток, гиперэкспрессирующих нитроксидсинтазу в ЩЖ крыс при хроническом ЭТ с преимущественным поражением печени в 5,1 раза к 90-м сут эксперимента, в модели с преимущественным поражением почек - в 3,7 раза. На 30-е сут эксперимента наблюдалось 5-кратное увеличение частоты экспрессии TRAIL, а к окончанию эксперимента (90-е сут) им-мунопозитивные клетки располагались сплошным тонким слоем по периметру фолликула с преимущественной локализацией лиганда на апикальной поверхности •гароцитов. Параллельно выявлено увеличение экспрессии каспа-зы-3: на 30-е сут хронического ЭТ иммунопозитивными оказывались до 80% тироцитов. На 60-е сут апикальная часть фолликулярных клеток давала им-мунопозитивное окрашивание в виде маргинальной полоски по всему пери-

метру фолликула. К 90-м сут до 15% эндокриноцитов были резко иммунопо-зитивными, уменьшены в размерах, с пикнотичным ядром.

При ультрамикроскопическом исследовании фолликулярных эндокриноцитов максимальные изменения были зарегистрированы в ЭПР, тотальное расширение цистерн, деформация и уменьшение электронной плотности которого свидетельствовало о повреждении синтетического аппарата эндокриноцитов под действием эндогенных токсических соединений. По-видимому, выявленные нарушения возникают не на уровне начального синтеза тиреоглобули-на, а в процессе его транспортировки в аппарат Гольджи и непосредственно в нем, при формировании конечного тиреоглобулина [Юкина Г.Ю. с соавт.,

Достоверно увеличение фактора формы кариолеммы регистрировалось, начиная с 60-х сут ЭТ, уменьшение эффективного объема ядра реализовалось за счет многочисленных инвагинаций кариолеммы. Отношение яркостей эу-и гетерохроматина по мере увеличения срока эксперимента снижалось практически линейно в 1,7 раза к 90-м сут (Р<0,01). Аналогичная тенденция выявлена при изучении отношения яркостей эухроматина и матрикса цитоплазмы в системе RGB. ОД митохондрий после небольшого увеличения к 60-м сут эксперимента (в 1,17 раз больше, чем в контрольной группе, Р<0,05), снижалась, и к 90-м сут была несколько ниже, чем в контрольной группе. Аналогичной была динамика отношения яркостей митохондрий и цитоплазмы, что косвенно отражало истощение их функции к 90-м сут ЭТ. Данное утверждение подтверждалось увеличением, а затем уменьшением ОД везикул в динамике эксперимента.

Таким образом, сопоставление структурных изменений на различных уровнях при хроническом ЭТ свидетельствовало о значительной тканевой перестройке в ЩЖ и наличии морфологического субстрата гормональной дисфункции фолликулярных эндокриноцитов.

При хроническом ЭТ выявлены существенные изменения профиля гормонов тиреоидной оси в сравнении с животными контрольной группы (рис. 3).

2004].

Т4 сеоб

□ 90 сут В 60 сут

□ 30 сут

Т4 общий

ТТГ

С

4

-3

-2

■1

Рис. 3. Гормоны тиреоидной оси в сыворотке крови крыс при хроническом ЭТ. За единицу принято значение показателя в интактной группе животных.

По мере нарастания сроков эксперимента у крыс зарегистрировано незначительное снижение ТТГ, уровень которого к 90-м сут эксперимента снизился в 1,6 раза (Р<0,05). Уровень трийодтиронина менялся незначительно: повышался к 60-м сут в 1,2 раза, и снижался в 1,3 раза на 90-е сут экспериментального ЭТ. Максимальный подъем Т4. был зарегистрирован на 30-е сут ЭТ, когда его общее содержание повышалось в 2,5 раза. В дальнейшем уровень тироксина снижался, но и на 90-е сут его количество по-прежнему превышало аналогичные значения в контроле в 1,4 раза (Р<0,05). Содержание тиреоглобулина к 30-м сут хронического ЭТ было в 4,0 раза ниже, чем в контрольной группе, на 90-е сут - в 2,7 раза (оба Р<0,001).

При корреляционном анализе установлено усиление связи между ТТГ и периферическими тиреоидными гормонами на 30-е сут опыта. Наиболее сильными были взаимосвязи ТТГ с общим трийиодтиронином и общим тироксином (R=0,81 и R=0,99, соответственно). К 90-м сут эксперимента связь ТТГ -Тз отсутствовала, а с Т4 и его свободной фракцией была сильной и отрицательной. Таким образом, происходящие в ходе хронического ЭТ изменения, затрагивали как вертикальные, так и горизонтальные связи.

Полученные нами данные не противоречат имеющимся в литературе сведениям о характере структурно-функциональных преобразований фолликулярного эпителия ЩЖ при хроническом воздействие токсических агентов [Хмельницкий O.K. с соавт., 2000; Раскоша О.В., Ермакова О.В., 2006; Лунь-кова JI.K. с соавт., 2007]. В то же время, сопоставление отдельных механизмов (ФНО-зависимого апоптоза, эндотелиальной дисфункции и связанного с ней стромального замещения утраченных паренхиматозных элементов, появление автономно секретирующих эндокриноцитов) раскрывает ряд новых моментов в развитии тиреоидного дисбаланса при хроническом ЭТ.

Морфологические изменения семенников и дисбаланс гормонов гонадной оси у крыс-самцов при хроническом эпдотоксикозе.

На 30-е сут хронического ЭТ выявлены незначительные морфологические изменения инкреторного аппарата мужских половых желез. Отмечено увеличение клеток объема интерстициальной ткани в межканальцевых пространствах за счет гиперплазии гландулоцитов и относительное количество клеток Лейдига, приходящихся на один семенной канатик. ОД интерстици-ального эпителия увеличивалась в течение всего эксперимента, к 90-м сут хронического ЭТ превышая значения в контрольной группе в 1,2 раза.

Наибольшие изменения при хроническом ЭТ, независимо от модели, касались нарушения сперматогенеза. В динамике эксперимента выявлялось все большее число канальцев, не содержавших зрелых сперматозоидов, к 90-

м сут ЭТ появлялись канальцы со слущенным эпителием, уменьшалось количество светлых (делящихся) сперматогоний, часть сперматоцитов имели пик-нотические ядра. Индекс сперматогенеза снижался в 1,72 раза по сравнению с контрольными показателями (Р<0,01).

Таким образом, основными изменениями в семенниках крыс при хроническом ЭТ, являлись уменьшение делящихся сперматогоний и зрелых сперматозоидов при сохранении сперматогенного эпителия и гландулоцитов. По-видимому, местные факторы регуляции обеспечивают защиту и обусловливают относительно меньшее повреждение семенников эндогенными токсическими соединениями, по сравнению с другими органами эндокринной системы.

Данные, полученные при изучении половых гормонов в сыворотке крови самцов, свидетельствовали о вовлеченности гонадной оси в общий пейзаж нарушений гормонального профиля при хроническом ЭТ (рис. 4).

Тестостерон

Пролактин

за,

□ 90 сут

□ 60 сут

□ 30 сут

Рис. 4. Гормоны гонадной оси в сыворотке крови крыс-самцов при хроническом ЭТ. За единицу принято значение показателя в контрольной группе животных.

На 30-е сут ЭТ уровень ФСГ увеличился в 2,7 раза, ЛГ - в 2,3 раза, а пролактина - в 2,2 раза (Р<0,05), эти изменения сохранялись или несколько нарастали (ФСГ) в дальнейшем. Содержание тестостерона в сыворотке крови самцов уменьшалось, более интенсивно - в модели с преимущественным поражением печени: в 5,9 раз, по сравнению с контрольной группой (Р<0,001). Уровень тестостерона в крови интактных крыс имел умеренную отрицательную связь с ФСГ (г=-0,95), в то время как между ЛГ и пролактином связь была слабой. На 30-е сут хронического ЭТ произошло резкое усиление связей со всеми гипофизарными гормонами, которые несколько ослабевали на 60-е сут патологического процесса. К 90-м сут ЭТ были сформированы сильная отрицательная связь ФСГ-тестостерон (г=-0,98) и сильная положительная связь ЛГ-тестостерон (R=0,97).

Исследования морфологии семенников, мужской гонадной оси и сперматогенеза при хроническом стрессе и интоксикациях являются единичными [Галимов Ш.Н. с соавт., 1999; Hadid R. et al., 1995; Papadopoulos A.D., Ward-

law S.L., 2000]. В рамках рассматриваемой концепции мы пришли к выводу о максимально высокой чувствительности рассматриваемых эндокринных органов к действию эндогенных токсичексих соединений.

Морфологические изменения яичников и дисбаланс гормонов гонадной оси у крыс-самцов при хроническом эндотоксикозе.

На ранних сроках ЭТ (30-е сут) структурные преобразования в ткани яичника у крыс характеризовались незначительной гиперемией и отдельными периваскулярными кровоизлияниями в корковое вещество яичника. В дальнейшем по мере нарастания сроков ЭТ уменьшалось число примордиальных, первичных, вторичных фолликулов. Третичные фолликулы не обнаруживались. Выявлялось значительное количество кистозно-атрезирующихся фолликулов и активное разрастание паренхиматозных элементов, представленных эпителиальными и соединительнотканными (текальными) элементами. Обращали на себя внимание уплощенные клетки внутреннего слоя гранулезы со скудным содержанием эозинофильной цитоплазмы.

При иммуногистохимическом исследовании в эндотелии сосудов яичника в динамике ЭТ выявлялся прирост экспрессии нитроксидсинтазы. Участки микроциркуляторного русла, содержащие большое количество эндоте-лиоцитов, гиперэкспрессирующих NOS-3, располагались очагами, преимущественно на удалении от примордиальных и первичных фолликулов. Количество иммунопозитивных клеток к TRAIL неуклонно возрастало к 90-м сут эксперимента, охватывающего не только клетки гранулезы, а в отдельных случаях - теку коркового вещества и паренхиму яичника. При этом распределение иммунопозитивных клеток к каспазе-3 было неравномерным. Как известно, на протяжении эстрального цикла гибель клеток путем апоптоза и их регенерация происходят в строго регулируемой последовательности и зависят от стадии цикла. Подавляющее большинство фолликулов в яичнике подвергаются атрезии посредством ФНО-зависимого апоптоза, который происходит в основном в клетках гранулезы [Кузнецова И.В., Коновалова В.Н., 2004; Van Delft M.F., Huang D.C., 2006].

На ультрамикроскопическом уровне в фолликулярных эпителиоцитах на всех сроках эксперимента ядра были представлены преимущественно эу-хроматином с большим количеством ядрышек, матрикс митохондрий имел высокую электронную плотность. Внутриклеточные органеллы имели признаки пониженной секреторной функции. При морфометрии выявлялось незначительное уменьшения фактора формы, увеличение яркости эухроматина по отношению к гетерохроматину (в 1,37 раза по сравнению с интактной группой) и цитоплазме (в 1,1 раза), Р<0,05. Увеличение объемной плотности

митохондрий и их яркости по отношению к цитоплазме было максимальным на 60-е сут ЭТ и превышало таковой показатель в группе контрольных животных в 1,17 и в 1,63 раза, соответственно. Уменьшение ОД везикул по сравнению с контрольной группой (в 1,87 раза к 90-м сут) свидетельствовало о снижение секреторной активности.

Изменения гормонов гонадной оси у самок с хроническим ЭТ с преимущественным поражением печени были более выраженными, чем у животных с ЭТ с преимущественным поражением почек. Так, уровень ЛГ на 30-е сут эксперимента увеличился в 2,3 и в 1,6 раза, к окончанию эксперимента (90-е сут) - в 2,5 и в 1,9 раза соответственно. Уровень пролактина на 90-е сут ЭТ превышал интактный в 2,1 раза у самок с преимущественным поражением печени, и в 1,7 раза — у животных с преимущественным поражением почек. Содержание эстрадиола и прогестерона достоверно снижалось в обеих экспериментальных группах (рис. 5).

Прогестерон Эстрадиол Пролактин ЛГ

0 90 сут

□ 60 сут

□ 30 сут

-5

Рис. 5. Гормоны гонадной оси в сыворотке крови крыс-самок при хроническом ЭТ. За единицу принято значение показателя в интактной группе животных.

При хроническом ЭТ происходила реверсия взаимозависимости гипо-физарных гормонов. К 90-м сут ЭТ изначально сильная положительная связь ФСГ - ЛГ трансформировалась в сильную связь, противоположную по знаку (г = -0,93), в то время как исходно отрицательная средняя по силе корреляция между ЛГ и пролактином к окончанию эксперимента становилась сильной положительной (г = 0,75). Часть связей, существовавших в гонадной оси крыс контрольной группы, при развитии хронического ЭТ утрачивалась (ФСГ - эстрадиол и ЛГ - эстрадиол). В других случаях произошло усиление ранее малозначимых связей (ФСГ - прогестерон, ЛГ - прогестерон). К 90-м сут были нарушены как вертикальные, так и горизонтальные связи, что свидетельствовало о существенных нарушениях, происходящих в гонадной оси крыс-самок при хроническом ЭТ.

Замещение стромой фолликулярных эндокриноцитов в яичнике при ЭТ, на наш взгляд, представляет собой результат патологического ремодели-рования фолликула, происходящего на фоне дисбаланса половых гормонов, а

морфологические изменения в яичниках, в свою очередь, являются субстратом усугубления гормонального дисбаланса. Зарегистрированная нами про-лактинемия, обнаруживаемая и доминирующая на всех сроках эндогенной интоксикации согласуется с литературными данными, согласно которым введение бактериального ЛПС увеличивает продукцию и выброс пролактина [Besnard N. et al., 2001; De Laurentiis А. с соавт., 2002].

Морфологические изменения иисулярного аппарата и дисбаланс инсулина у крыс при хроническом эндотоксикозе.

В островках поджелудочной железы на 30-е сут ЭТ выявлялся отёк междольковых перегородок с умеренной лимфоцитарной инфильтрацией и очаговыми кровоизлияниями в жировой клетчатке по периферии органа. К 60-м сут в паренхиме железы отмечались участки с выраженным явлением перидуктального и периацинарного склероза. В этих зонах выявлялась пролиферация эпителия выводных протоков и формирование мелких протоков. Отдельные островки были полностью склерозированы. Для других островков было характерно выраженное полнокровие капилляров, в большинстве эн-докриноцитов определялась гиперхромия ядер. Эти изменения становились более интенсивными к 90-м сут хронического ЭТ. При морфометрии установлено достоверное уменьшение ОД островков Лангерганса, (на 90-е сут ЭТ - в 1,65 раза по сравнению с показателями в контрольной группе, Р<0,05). Соответственно, ОД инсулоцитов в островках снижалась на протяжении всего эксперимента, и к 90-м сут ЭТ была в 1,52 раза меньше, чем у крыс контрольной группы (Р<0,05).

Экспрессия NOS-3 в сосудах панкреатических островков увеличивалась с 3% до 23% к 90-м сут хронического ЭТ, иммунопозитивные эндотелиоциты локализовались преимущественно в капиллярах по периферии островков. При изучении экспрессии TRAIL на ранних сроках эксперимента определялось окрашивание единичных эндокриноцитов и ацинарных клеток (4%), к 90-м сут ЭТ иммунопозитивных инсулоцитов было значительно больше (29%), они располагались диффузно на территории островка. На 30-е сут хронического ЭТ единичные каспазо-позитивные клетки выявлялись на границе с ацинар-ной тканью, по мере увеличения сроков эксперимента появлялись все более многочисленные клетки с экспрессией каспазы-3 на периферии островков.

При ультрамикроскопии островков Лангенгарса на 30-е сут ЭТ отмечено увеличение количества секреторных везикул в а-клетках при незначительном уменьшении количества везикул в р-клетках. В дальнейшем в большинстве а-клеток выявлялось большое количество секреторных везикул, а количество (3-клеток продолжало снижаться, в них все чаще обнаруживались при-

знаки пониженной секреторной активности: полиморфизм гранул и появление более крупных везикул. При морфометрии к 30-м сут выявлялись увеличение фактора формы кариолеммы и количества эухроматина в ядре, расцененные как признаки активации ядерного аппарата. Уменьшение ОД митохондрий (в 1,26 раза по сравнению с показателями в контрольной группе) на фоне увеличения их яркости (в 1,1 раза). К 60-м сут ОД митохондрий несколько увеличивалась, а относительная яркость их матрикса оставалась практически на том же уровне, что свидетельствовало о напряженности энергетических процессов в клетке. Секреторная активность (3-клеток увеличилась, о чем можно судить по достоверному приросту ОД везикул (в 1,53 раза, Р<0,05). К окончаншо эксперимента (90-е сут) зарегистрировано уменьшение фактора формы, яркости активного хроматина, ОД митохондрий, их относительной яркости и ОД секретируемых везикул. Все это в совокупности расценено как признаки снижения секреторной активности (3-клеток.

Уровень инсулина при хроническом ЭТ на 30-е и 60-е сут в обеих моделях определялся в пределах 15-20% выше показателей контрольной группы, а к 90-м сут процесса значительно снижался, достигая лишь 2/3 от значений в контроле (Р<0,05). У животных контрольной группы имелась сильная обратная корреляционная связь между содержанием АКТГ и инсулина в крови (г = -0,87). На 30-е сут эксперимента происходило ослабление зависимости (г = - 0,51), а к окончанию эксперимента обнаружена уже умеренная положительная связь (г = 0,63).

Таким образом, исследование структурно-функциональных изменений эндокриноцитов поджелудочной железы при действии ЭТС, показало, что процессы повреждения и деструкции носили мозаичный характер и сочетались с процессами регенерации. Отчетливо выраженные изменения в эндок-риноцитах сопровождались перестройкой ультрамикроскопического строения Р-эндокриноцитов и снижением секреции инсулина. Гипоинсулинемия при SIRS и хронических токсических состояних ранее описывалась [Гельфанд Б.Р. с соавт., 2006; Federici M.et al., 2001; Nedungadi T.P. et al., 2006], но нами детализированы отдельные механизмы ее формирования при хроническом ЭТ в составе общей гормональной дизрегуляции.

Математический анализ и моделирование эндокринной дизрегуляции при хроническом эндотоксикозе.

Доказательство участия эндокринной дизрегуляции в пато- и морфогенезе хронического ЭТ было проведено с системных позиций при использовании математического моделирования с использованием корреляционного анализа и построения регрессионных уравнений. В результате корреляцион-

ного анализа между гормонами периферической крови, входящих в состав основных гормональных осей, и биохимическими маркерами эндогенной интоксикации выявлено значительное количество сильных и умеренных математических связей (рис. 6).

ВСММ Олигопептиды IV Г ТА

.У

Э страдпол

Прогестерон

Пролактни

Т4 ФСГ

ВСММ Олигопептиды МДА

• / ^ й- | КорТНМЛ -0,22 /\ /Я4

Ш/VIV

Инсулин //;>,& [-о,57/л\п ^ (\

!

Эстраднол

Прогестерон

актин

ФСГ

Сильная =

Средняя -

Слайяя------ Отрицательная

Корреляция Положительная [";;гжт;ч

□ П

Рис. 6. Корреляционные связи между маркерами эндогенной интоксикации и профилем гормонов в крови у крыс контрольной группы и при хроническом ЭТ.

У животных контрольной группы гормоны тиреоидной оси не имели значимых корреляционных связей с маркерами эндогенной интоксикации. Для адреналовой оси установлено наличие сильных обратных связей корти-зола с ВСММ (-0,85) и МДА (-0,79). Среди гормонов гонадной оси наиболее сильные корреляционные связи обнаружены между ЛГ и олигопептидами (0,77) - у самцов, эстрадиолом и ВСММ (0,84) - у самок.

На 30-е сут ЭТ произошло формирование сильных корреляционных связей между гормонами адреналовой оси и маркерами эндогенной интоксикации. На этом же сроке обнаружены значимые корреляции между гормонами тиреоидной оси: ТТГ, Тз, Т4. Гормоны гонадной оси имели сильные корреляционные связи с ВСММ, олигопептидами и МДА (г в пределах 0,78-0,98 по модулю). В динамике хронического ЭТ часть связей ослабло, однако основные гормоны осей сохраняли сильные связи с одним и более маркером эндогенной интоксикации. На 90-е сут сохранялась общая тенденция в образовании умеренных и сильных корреляционных зависимостей между гормонами эндокринных осей и маркерами эндогенной интоксикации.

Отдельные закономерности выявлены в корреляциях между уровнями гормонов и показателями повреждения печени и почек.

Установлено увеличение числа и усиление ранее существовавших корреляционных связей между гормонами тиреоидной оси и морфометрически-ми показателями печени и почек по мере увеличения срока эксперимента. Наиболее значимые корреляции: Т4 - ОД соединительной ткани печени (0,86), Т4 - ОД гепатоцитов (-0,84); Т4 - ОД интерстициальной ткани почек (0,88), Т4 - количество склерозированных клубочков (0,95).

Корреляционный анализ между содержанием половых гормонов у самцов и тяжестью ЭТ выявил рост количества и силы связей в ряду: ЛГ - ФСГ -тестостерон - пролактин по мере увеличения сроков ЭТ.

У самок при изучении корреляций между гормонами г онадной оси и морфометрическими показателями печени и почек наиболее сильные связи обнаружены у эстрадиола с ОД гепатоцитов (0,85), ОД соединительной ткани печени (-0,82) и количеством склерозированных почечных клубочков (-0,87).

Аналогичные многочисленные корреляционные связи, имеющие логическое обоснование, были обнаружены при попарном сопоставлении между группами количественных показателей, описывающих изменения в эндокринных органах, гормональном профиле и маркеров ЭТ.

В итоге, корреляционный анализ морфометрических показателей позволил нам на математическом уровне доказать участие различных элементов эндокринной системы в пато- и морфогенезе повреждения печени и почек при хроническом ЭТ (рис. 7).

Коэффициент микро-глия/нейрон в РУ ядре гипоталамуса [ОД ацидофилов [Пролактин ТАКТГ

[ОД стромы ЩЖ, [Высота фолликулярного эпителия ТТЗ, |Т4

¿ОД ядер пучковой зоны коркового вещества надпочечника

[ОД а-клеток ост-

ровков поджелудоч-

ной железы

¿Диаметр семенных

канальцев,

¿тестостерона

Гипоталамус Гипофиз

Щитовидная железа

Надпочечники

Инсулярный аппарат

Яичники/ семенники

[ОД нейронов РУ ядра гипоталамуса [ОД базофилов |ФСГ, |ЛГ, [ТТГ

[ОД коллоида ЩЖ, [средний наружный (1 фолликула ЩЖ, [ОД фолликулярного эпителия

[СО ядер эндокрин-ноцитов пучковой зоныкоркового вещества, [Кортизол

[ОД р-клеток островков поджелудочной железы, [Инсулин

ПЕЧЕНЬ И ПОЧКИ

[ОД митохондрий, [ОД везикул фолликулярных эпителиоцитов яичника, [Эстраднол

С

О

- повреждающие влияния

- компенсаторные влияния

Рис. 7. Обобщенные представления о влиянии различных структур эндокринной системы на развитие морфофункционалыгых изменений в печени и почках при хроническом ЭТ.

Одной из задач выполняемого статистического анализа является вычисление величин параметров, прижизненное измерение которых чрезвычайно инвазивно или практически невозможно, но сведения о которых диагностически значимы и весьма информативны. В то же время существуют показатели, с помощью которых оценивается тяжесть хронического ЭТ (биохимические маркеры эндогенной интоксикации) и/или наличие эндокринного дисбаланса (гормональный профиль). Они характеризуются малой инвазив-ностью при получении, точностью определения, технической простотой и

<

экономической доступностью. Именно эти параметры были использованы для нахождения искомых морфометрических показателей.

Из всей генеральной совокупности в качестве искомых параметров нами отобраны морфометрические показатели эндокринных органов, которые формируют основные гормональные оси, вовлекаемые в патологический процесс при хроническом ЭТ.

После математических преобразований с пересчетом параметров в относительных единицах (X) и учетом данных корреляционного анализа, в частности, для расчета ОД ацидофилов гипофиза было получено:

Уацидофшо в = 39,03 (0,473 - 0,027Хпролактина + 0,56ХАцилаза почек) Для расчетного определения морфометрических показателей пучковой зоны коркового вещества надпочечников оказалось возможным построить следующую систему уравнений:

Г 1) УУлоля = 18,22(1,6058-0,3807ХАК1Т-0,4911ХАц„ек)

2) ^Гдоля ядер = 3>12 (1,222 — 0,219Х0лигопепттоы)

3) г,ядср = 23,185(0,628 + 0,3754ХАци„ек)

. 4) =0,125(0,3803+0,4386ХАКТГ+0,4702ХАц_ек)

Для расчета функциональной активности щитовидной железы достаточно измерить параметры "ТзСВОб.", "Т3о6щ ", "ВСММ", "Ацилаза почек", "МДА", "Олигопептиды", "Ацилаза почек" и решить систему уравнений:

"1) ^.фолликула - 125,53 (- 0,032 + 0,9418 ХТЗсвоб + 0,0925 ХАцилюа почек )

2) У«.Ф.иит. = 30,86 (-1,3 + 2,43+ 0,304 Хпсмм -0,339Х0лигоп -0,107ХМДА)

3)Уу_ = 18 ,7(- 1,2453 + 0,5249 Х„0бш +1,7196 ХПшЛ )

Итак, разработана математическая модель, позволяющая с высокой долей вероятности прогнозитровать структурные изменения, возникающие в органах эндокринной системы при хроническом ЭТ.

Формировние концепции гормональной дизрегуляции как компонента хронического эндотоксикоза.

Итак, нами установлено, что длительная эндогенная интоксикация приводит к развитию гормональной дизрегуляции, которая характеризуется изменениями уровня гормонов в периферической крови и разобщением внутри-осевых горизонтальных и вертикальных связей. С морфологических позиций, необходимо подчеркнуть стереотипность событий, происходящих в органах

<

эндокринной системы. Они могут быть описаны на 30-е сут как преобладание явлений раздражения и стимуляции при крайнем истощении отдельных эн-докриноцитов и дистрофии клеток с сохранением общей структуры желез. Дальнейшее повреждение реализуется в зональную атрофию эндокриноци-тов. К 90-м сут атрофические процессы в эндокриноцитах и их нарастающий численный дефицит в результате апоптической гибели играют ключевую роль в формировании эндокринопатий при хроническом ЭТ. В то же время на самых поздних стадиях ЭТ присутствуют эндокриноциты в состоянии гиперстимуляции и гиперфункции.

Сопоставление гистологического, морфометрического и ультраструктурного исследований фолликулярных эндокриноцитов при хроническом ЭТ свидетельствовали о наличии нарушения секреции, и мозаичности повреждения, что проявлялось чередованием участков с повышенной функциональной активностью и фрагментов с явлениями истощения.

Элиминация и атрофия эндокриноцитов сопровождаются явлениями нарастающей стромальной пролиферации, развивающейся в паренхиме железы. Данное явление носит явный компенсаторный характер и является результатом цитокиновой агрессии в отношении паренхимы эндокринных органов. При этом пролиферация соединительной ткани возмещает не только убыль паренхимы, но и имеет определенное местно-стабшшзирующее значение для оставшихся активных эндокриноцитов. Сосудистые нарушения имеют явно неспецифический характер и вызваны как цитокиновой агрессией, так и первичной природой эндогенной интоксикации. Данный механизм можно рассматривать как первичный для ряда дисметаболических, токсических и гипоксических повреждений эндокриноцитов. Сформировавшаяся полигландулярная эндокри-нопатия приводит к появленшо в кровеносном русле ЭТС, которые оказывают вторичное повреждающее действие на органы-мишени и органы эндокринной системы (рис. 8).

Переходя к вопросу о механизмах повреждения органов эндокринной системы, следует сказать, что мы старались выделить наиболее значимые и типовые процессы, присущие большинству.

Говоря о роли МО-зависимой эндотелиальной дисфункции в механизме сосудистых реакций, морфологически выраженных в виде периваскулярного отека, полнокровия капилляров, очагов кровоизлияния, увеличения ОД соединительной ткани, которые выявлены при хроническом ЭТ во всех изученных эндокринных органах, необходимо подчеркнуть ее двойственное действие. С одной стороны, оксид азота является стимулятором фибропластических процессов, способствует прогрессированшо стромальной пролиферации и активно участвует в капиллярогенезе [Голиков П.П., 2004; Дунай В.И., 2007].

метаболиты повреждени!

Рис. 8. Схема развития эндокринной дизрегуляции. Динамика структурных преобразований в органах энд| системы при хроническом эндотоксикозе.

С другой стороны, избыточное содержание оксида азота приводит к активации перекисного окисления липидов, вследствие этого образуется ряд токсических соединений, в том числе (при взаимодействие с супероксид-радикалами) - пероксинитрит, который является проапоптическим фактором [Мойбенко А.А. с соавт., 2005; Fan J. et al., 2002; Morishima N. et al., 2002].

Фрагменты поврежденного эндотелия совпадали с участками скопления NOS-3-позитивных клеток на территории всех изученных органов эндокринной системы. Обнаруженное увеличение экспрессии NOS-3 в местах повышенной стромальной пролиферации, является дополнительным свидетельством апоптической гибели эдокриноцитов и компенсаторном замещении функциональной паренхимы соединительной тканью.

Таким образом, NO-зависимая эндотелиальная дисфункция является существенным компонентом в развитии патологических изменений в эндокринных органах при хроническом ЭТ. Она максимально выражена в надпочечниках и гонадах, меньше - в инсулярном аппарате поджелудочной железы и гипофиза, и не имеет практического значения в щитовидной железе.

Проведенные исследования показали, что одним из ведущих механизмом устранения эндокриноцитов при хроническом ЭТ является ФНО-зависимый апоптоз. В базофильных аденоцитах гипофиза, щитовидной железе и яичниках на всех сроках эксперимента выявлялась гиперэкспрессия TRAIL (Аро 2L), запускающего механизм апоптоза, и нарастающая по мере увеличения длительности эксперимента. Его наличие означало появление чувствительности клетки к основному эндогенному посреднику ЛПС - ФНО. Параллельно увеличивалось количество иммунопозитивных клеток против каспазы-3, которая является ключевым маркером апоптоза. С момента преобразования проскаспазы-3 и активации каспазы-3, процесс гибели клетки становится необратимым [Еропкин М.Ю., Еропкина Е.М., 2003; ZuccoF., 1996; Van Delft M.F., Huang D.C., 2006]. Таким образом, ведущим механизмом гибели эндокриноцитов при хроническом ЭТ в аденогипофизе, ЩЖ и яичниках являлся ФНО-зависимый апоптоз.

В тоже время в надпочечниках, семенниках и островках поджелудочной железы количество иммунопозитивных клеток против основных маркеров ФНО-зависимого апоптоза не имело достоверных различий с интактной группой. Мы полагаем, что в различных органах эндокринной системы количество рецепторов TRAIL, располагающихся на цитоплазматической мембране, вариабельно. Более того, в динамике ЭТ оно может изменяться неоднозначным и даже разнонаправленным образом. Вследствие этого, несмотря на идентичность воздействия ЭТС по длительности и концентрации, мы наблюдали различия в механизмах гибели эндокриноцитов.

Морфофункциоиальные изменения органов эндокринной системы при экспериментальной коррекции эндокринного дисбаланса у крыс при хроническом эндотоксикозе.

В результате проведенного анализа установлено, что наиболее значимыми гормонами, недостаток которых негативно отражается на выраженности эндогенной интоксикации и тяжести хронического ЭТ, являются корти-зол, инсулин и эстрадиол. Если введение глюкокортикоидов и инсулина широко применяется в комплексном лечении сепсиса и состояний, сопровождающихся хронической эндогенной интоксикацией [Cooper M.S., Stewart P.M., 2003; Balk R.A., 2003; Briegel J. et al., 2004], то в отношении эстрогенов в качестве протективных препаратов при СПОН литературных данных нет. Повышенное содержание Т3 и Т4 в периферической крови усиливает эндогенную интоксикацию и является фактором, способствующим развитию органо-патологии. Логично предположить, что одним из путей коррекции эндокри-нопатии при хроническом ЭТ может стать медикаментозное снижение уровня тиреоидных гормонов. Эти моменты послужили побудительным мотивом для проведения пробной патогенетической терапии эндокринопатии, возникшей при хроническом ЭТ, с помощью тиреостатиков и эстрогенов.

При микроскопическом исследовании печени и почек у крыс с хроническим ЭТ на фоне коррекции эндокринопатии были выявлены менее выраженные патологические изменения, чем в группе без коррекции. Применение тиреостатиков вызывало снижение убыли гепатоцитов на 21,6% и уменьшение прироста соединительной ткани - на 17,9%.

Коррекция эстрогенами, также приводила к уменьшению убыли гепатоцитов и уменьшению ОД соединительной ткани в печени, по сравнению с базовой моделью ЭТ, но в меньшей степени, чем тиреостатики (на 15,4 и 8,3%, соответственно). В почках введение эстрогенов сопровождалось уменьшением прироста ОД интерстициальной ткани, и к 90-м сут эксперимента (90-е сут) этот показатель был на 36,6% меньше, чем при ЭТ без коррекции. Склерозированные клубочки обнаруживались лишь на 90-е сут ЭТ, в то время как у крыс базовой модели они определялись на всех сроках эксперимента. Применение тиреостатиков снижало прирост ОД интерстициальной ткани почек лишь на 5,1%) и уменьшало количество склерозированных клубочков на 23,7%, по сравнению с показателями морфометрии почек у крыс с хроническим ЭТ без коррекции эндокринопатии.

При изучении биохимических маркеров хронического ЭТ установлено, что при коррекции эндокринопатии как тиреостатиками, так и эстрогенами, происходило частичное уменьшение показателей выраженности эндогенной интоксикации (табл. 5).

Таблица 5

Биохимические показатели выраженности хронического эндотокснкоза у крыс на фоне коррекции эндокринопатии (М±т)

Хронический эндотоксикоз Сроки эксперимента

30 сут | 60 сут | 90 сут

ВСММ, усл. ед. (контроль 0,16 ± 0,02)

Без коррекции С коррекцией тиреостатиками С коррекцией эстрогенами 0,43 ± 0,05* 0,23±0,03*" 0,21±0,03*# 0,49± 0,05* 0,28±0,01*# 0,25±0,01*" 0,51 ± 0,06* 0,31±0,01*" 0,27±0,01*"

Олигопептиды, мг/л (контроль 115,5 ± 13,8)

Без коррекции С коррекцией тиреостатиками С коррекцией эстрогенами 268,5 ± 29,8* 160,17±9,2*" 125,8±3,11*# 289,4 ±30,5* 180J2±3,51*# 171,99±4,05*# 291,0 ±36,4* 220,27±9,2** 190,33±5,1*"

МДА, ммоль/л (контроль 5,33 ± 0,43)

Без коррекции С коррекцией тиреостатиками С коррекцией эстрогенами 11,40 ±0,94* 8,19±0,91* 6,51±0,09# 10,53 ± 1,25* 8,93±0,91* 7,32±0,09* 11,08 ±1,35* 8,99±0,11*й 8,05±0,08*#

Примечание. Здесь и далее * - Р<0,05 по сравнению с показателями в контроле; " - Р<0,05 по сравнению с показателем соответствующего срока базовой модели

Тиреостатики и эстрогены уменьшали выраженность признаков повреждения РУ ядра гипоталамуса. Снижение ОД нейронов (к 90-м суткам ЭТ без коррекции - на 46,0%) при использовании тиреостатиков и, в особенности, эстрогенов не было столь выражено (снижение на 19,1% и 8,1%, соответственно). Аналогичным образом тиреостатики и эстрогены частично корректировали уменьшение размеров ядер крупноклеточной части РУ, характерное для ЭТ. Как эстрогены, так и тиреостатики практически полностью устраняли прирост коэффициента микроглия/нейрон в РУ ядре гипоталамуса.

В аденогипофизе введение тиреостатиков и эстрогенов при хроническом ЭТ приводило к уменьшению прироста ацидофильных аденоцитов, сопровождалось приростом ОД базофильных аденоцитов, в то время как в отношении остальных морфометрических показателей существенных различий с группой без коррекции не выявлялось.

Структурные изменения, выявленные в надпочечниках крыс при хроническом ЭТ на фоне проводимой патогенетической коррекции, свидетельствовали о том, что использование тиреостатиков (а в еще большей степени -эстрогенов) способствовало частичному ослаблению процессов повреждения

эндокриноцитов, атрофии и стромальной пролиферации во всех зонах коркового вещества надпочечников, а также ослабляло гипертрофию, сосудистые реакции и процессы повреждения в мозговом веществе надпочечников, свойственные хроническому ЭТ.

Патогенетическая терапия (к 90-м сут ЭТ) позволила частично скорректировать изменения гормонального профиля адреналовой оси (табл. 6).

Таблица 6

Изменения гормонального профиля адреналовой оси в периферической крови при хроническом эндотоксикозе у крыс на фоне коррекции эндокринопатии (М±ш)

Хронический эндотоксикоз Сроки эксперимента

30 сут | 60 сут | 90 сут

АКТГ, пг/мл (контроль 3,14 ± 0,02)

Без коррекции С коррекцией тиреостатиками С коррекцией эстрогенами 3,38 ± 0,09 2,91±0,09 6,41±0,09*# 4,13± 0,37 9,93±0,09** 3,55*0,09* 5,50 ± 0,58* 3,57±0,08я 3,30±0,08*

Кортизол, нмоль/л (контроль 22,15 ± 0,18)

Без коррекции С коррекцией тиреостатиками С коррекцией эстрогенами 96,69± 12,15* 35,15±1,3** 44,17±1,1*# 56,47 ±5,98*" 33,55±0,99*" 30,78±1,2*# 13,85 ±2,06** 30,59±0,09*# 23,11±1,09*

При применении патогенетической коррекции исчезла мозаичность поражения, присущая ЩЖ при базовой модели хронического ЭТ. Изменения в ЩЖ при использовании тиреостатиков и эстрогенов носили разнонаправленный характер.

При хроническом ЭТ, корректируемым тиреостатиками, ЩЖ имела крупнофолликулярный тип строения, отсутствовала пролиферация фолликулярного эпителия, отмечено незначительное содержание межфолликулярного эпителия, в просвете фолликулов определялось значительное количество компактного коллоида, без явлений краевой вакуолизации. Отмечалось умеренное увеличение количества межфолликулярного эпителия, при этом явления склероза практически полностью отсутствовали. Происходило увеличение среднего наружного диаметра фолликула, который на 90-е сут эксперимента превышал значения в группе животных с ЭТ без лечения на 95,72%, и на 42,5% по сравнению с показателями контрольной группы. Высота фолликулярного эпителия у крыс с хроническим ЭТ на фоне коррекции тиамазолом динамично снижалась и к 90-м сут была на 22,4% ниже, чем у крыс с ЭТ базовой модели. ОД коллоида превышала таковые значения у крыс с ЭТ без лечения на 186,7%, и на 60,9% - в сравнении с показателями в контроле.

Признаки, выявленные при изучении ЩЖ при хроническом ЭТ на фоне коррекции эстрогенами, характеризовали повышение ее функциональной активности: уменьшение размеров фолликулов сочеталось с увеличением высоты фолликулярного эпителия, незначительной пролиферацией фолликулярного эпителия. Количество рыхлого интрафолликулярного коллоида было незначительным, с явлениями краевой вакуолизации. Происходило увеличение диаметра фолликулов на 22,7%, увеличение высоты фолликулярного эпителия на 164,8%, дальнейшее снижение ОД коллоида на 17,1% по сравнению с показателями при ЭТ без лечения. Таким образом, применение эстрогенов при хроническом ЭТ приводило к микрофолликулярной трансформации ЩЖ и развитию ее гиперплазии. Полученные данные косвенно подтверждались результатами радиальной морфометрии, согласно которым максимальное количество нормосекреторных и гипосекреторных эндокриноцитов обнаруживалось при коррекции тиреостатиками. В тоже время при применении эстрогенов преобладали тироциты с нормальной и повышенной секрецией, также как и при хроническом ЭТ без коррекции.

Содержание гормонов тиреоидной оси в периферической крови у крыс при хроническом ЭТ на фоне патогенетической коррекции, свидетельствовало о более выраженном корректирующем действии тиамазола, по сравнению с эстрадиолом (табл. 7).

Таблица 7

Изменения гормонального профиля тиреоидной оси в периферической крови у крыс при хроническом ЭТ на фоне коррекции эндокринопатнн (М±т)

Хронический ЭНДОТОКСИКОЗ Сроки эксперимента

30 сут | 60 сут | 90 сут

ТТГ, нмоль/л (контроль 1,53±0,32)

Без коррекции С коррекцией тиреостатиками С коррекцией эстрогенами 1,06±0,6 0,68±0,08*" 1,52±0,09 1,01±0,3* 1,10±0,09 1,05±0,09* 0,95±0,11* 3,21±0,09*" 0,99±0,07*"

Тз общий нмоль/л (контроль 10,2±0,9)

Без коррекции С коррекцией тиреостатиками С коррекцией эстрогенами 10,84±0,7 9,31±0,7* 16,11±0,09** 12,45±1,1 8,43±0,7*# 13,46±0,91*й 8,84±0,9 7,11±0,1*# . 10,25±0,09*"

Т4 общий, нмоль/л (контроль 65,24±1,9)

Без коррекции С коррекцией тиреостатиками С коррекцией эстрогенами 165,05 ±11,3* 63,17 ±1,3" 69,11 ±1,3" 114,35 ±10,1* 71,29 ±1,7*" 72,97 ±1,7* 94,22±6,7* 66,08±1,3" 75,17±1,3*й

Данный факт представляется нам вполне логичным, так как при хроническом ЭТ базовой модели в плазме крови крыс определялся повышенный уровень тиреоидных гормонов, следовательно, назначение тиреостатиков должно было приводить к определенной коррекции гормонального профиля тиреоидной оси.

При гистологическом исследовании семенников у животных с хроническим ЭТ, моделируемом на фоне коррекции эндокринопатии тиреостатиков обращало внимание отсутствие канальцев, содержавших зрелые сперматозоиды. Кроме этого, обнаружено значительное число канальцев со с лущенным эпителием, уменьшилось количество светлых (делящихся) сперматого-ний, единичные сперматоциты имели пикнотические ядра.

Применение тиреостатиков для коррекции эндокринопатии при хроническом ЭТ привело к частичной нормализации гормонального профиля гонадной оси. Прирост ЛГ снизился в 1,4 раза по сравнению с уровнем гормона при ЭТ без лечения. Содержание тестостерона на фоне применения тиамазола увеличилось, и было максимально скорректировано на 30-е сут, превысив содержание тестостерона при ЭТ базовой модели 3,3 раза, что практически соответствовало уровню гормону у крыс-самцов контрольной группы (табл. 9).

Таблица 9

Изменения гормонального профиля гонадной оси у крыс-самцов при хроническом эндотоксикозе с коррекцией тиреостатиками, (М±т)

Хронический Сроки эксперимента

эндотоксикоз 30 сут 60 сут 90 сут

ФСГ, мМЕ/мл (контроль 0,16 ± 0,02)

Без коррекции С коррекцией 0,43 ± 0,05* 1,55±0,07** 0,49± 0,05* 1,53±0,03** 0,51 ± 0,06* 1,49±0,01*#

ЛГ, мМЕ/мл (контроль 73,1 ± 6,57)

Без коррекции С коррекцией 129,3 ± 11,6* 89,97±2,17* 117,6±9,3* 91,08±1,13*Ä 133,2 ± 12,3* 98,59±2,17*"

Пролактин, мМЕ/л (контроль 4,27 ± 0,33)

Без коррекции С коррекцией 6,91 ± 0,72 6,75±0,80 9,12 ±0,81* 9,98±0,90* 10,05 ± 0,93* 15,33±1,01*#

Тестостерон, нмоль/л (контроль 35,61 ± 2,90)

Без коррекции С коррекцией 9,06 ± 0,87* 29,54 ±1,01* 7,58 ± 0,73* 23,76± 1,07** 5,97 ±0,68* 15,21 ± 0,98*"

При коррекции эстрогенами в яичниках, в отличие от дегенеративно измененных яичников крыс-самок базовой модели хронического ЭТ, преобладали вторичные фолликулы. Фолликулярный эпителий был представлен многослойным кубическим эпителием с гиперхромными крупными ядрами, расположенными эксцентрично, ближе к основанию эпителиальной клетки, обращенному к теке. В полости фолликулов, заполненных фолликулярной

жидкостью эозинофильиого характера, обнаруживались центрально расположенные яйцеклетки.

Применение эстрогенов в большей степени нормализовало изменения гормонального профиля гонадной оси, чем использование тиреостатиков (табл. 10).

Таблица 10

Изменения гормонального профиля гонадной оси у крыс-самок при хроническом ЭТ с коррекцией эцдокринопатии эстрогенами (М±т)

Хронический эндотоксикоз Сроки эксперимента

30 сут | 60 сут | 90 сут

ФСГ, мМЕ/мл (контроль 1,56 ± 0,09)

Без коррекции С коррекцией 1,55 ± 0,07 1,51±0,08 1,49 ± 0,02 1,18±0,09*# 1,55 ±0,05 1,09±0,08**

ЛГ, мМЕ/мл (контроль 115,5 ± 13,8)

Без коррекции С коррекцией 268,5 ± 29,8* 93,11±3,71*# 289,4 ±30,5** 102,09±4,19*" 291,0 ±36,4* 93,19±2,01*#

Пролактин, мМЕ/л (контроль 5,33 ± 0,43)

Без коррекции С коррекцией 11,40 ±0,94* 13,35±0,08** 10,53 ± 1,25* 13,86±0,09" 11,08 ±1,35* 11,74±1,01*"

Эстрадиол, пг/мл (контроль 27,91 ± 1,93)

Без коррекции С коррекцией 9,06 ± 0,87* 65,98 ±1,98*" 7,58 ± 0,73* 57,15 ±1,98*" 5,97 ±0,68* 36,47±1,13*"

Прогестерон, нмоль/л (контроль 35,61 ± 2,90)

Без коррекции С коррекцией 30,17 ± 2,90 43,17 ±0,91*" 18,21 ± 1,78* 41,19±0,91*" 13,61 ± 1,45* 40,75±0,8#

Гистологическая картина поджелудочной железы при хроническом ЭТ на фоне коррекции тиреостатиками и эстрогенами была аналогичной микроскопической картине поджелудочной железы у животных контрольной группы. В центральных отделах панкреатических островков обнаруживались эн-докриноциты больших размеров с умеренно эозинофильной цитоплазмой и крупным бледно окрашенным ядром. В периферических отделах располагались клетки меньших размеров с интенсивно окрашенным ядром и эозинофильной цитоплазмой. Между эндокриноцитами островков Лангерганса чётко прослеживались расширенные кровеносные капилляры, в просвете которых определялись эритроциты.

При морфометрии панкреатических островков у крыс при хроническом ЭТ на фоне коррекции, уже на ранних сроках эксперимента (30-е сут), произошла нормализация показателя ОД островков до контрольных значений, сохранявшаяся до 60-х сут ЭТ. На 90-е сут ЭТ на фоне коррекции тиреостатиками ОД островков была скорректирована на 22,54%, а при применении эстрогенов - на 45,1% по сравнению с показателями ОД у крыс с ЭТ без лечения. Максимальная коррекция показателя ОД, занимаемой в панкреатических

островках Р-эндокриноцитами, достигалась при использовании эстрогенов, применение тиреостатиков приводило к менее значимой коррекции. На 90-е сут ЭТ увеличение ОД Р-эндокриноцитов при использовании эстрадиола приводило к нормализации показателя на 28%, в то время как применение тиама-зола - на 20,6% по сравнению с показателями у крыс с ЭТ без коррекции. ОД, занимаемая в островках а-эндокриноцитами, у крыс с ЭТ на фоне коррекции, не имела достоверных отличий от показателя ОД у животных с хроническим ЭТ без лечения и в среднем на 42,45% превышала ОД, занимаемую в островках а-эндокриноцитами у животных контрольной группы.

При изучении периферического гормона паравентрикуло-вагусного пути - инсулина у животных при хроническом ЭТ на фоне патогенетической коррекции установлено, что применение тиреостатиков частично нормализовало содержание инсулина в периферической крови. На 90-е сут ЭТ при коррекции тиамазолом уровень инсулина был скорректирован на 18,14%. При коррекции эстрогенами уровень инсулина повысился на 45,6% по сравнению с уровнем гормона у крыс с хроническим ЭТ без лечения, и к окончанию опыта содержание инсулина не имело достоверных отличий от показателей у крыс контрольной группы.

Итак, представленные данные свидетельствуют об умеренной выраженности морфофункциональных нарушений, возникающих в органах-мишенях и органах эндокринной системы при хроническом ЭТ, на фоне патогенетической терапии тиреостатиками. При хроническом ЭТ, сопровождающимся дефицитом тиреоидных гормонов, ведущими изменениями в эндокринных органах являются стромально-пролиферативные процессы, свидетельствующие о происходящей адаптационной перестройке. Изменения, выявленные в печени и почках, были менее выраженными, чем у животных с ЭТ без коррекции, что является доказательством протективного действия, оказываемого тиреостатиками на органы-мишени при данном патологическом процессе.

Оценивая эффект, оказываемый избыточным содержанием эстрогенов в сыворотке крови крыс при хроническом ЭТ, отмечено их протективное действие. Умеренные изменения гормонального профиля на протяжении всего экспериментального ЭТ и отсутствие типичных для эндотоксикоза структурных изменений в эндокринных органах и органах-мишенях (печень, почки) являются подтверждением высказанного нами мнения о возможности успешной коррекции эндокринопатии, сопровождающей развитие ЭТ, эстрогенами.

ВЫВОДЫ

1. Структурными основами гормонального дисбаланса при хроническом эндотоксикозе являются прогрессирующее повреждение и уменьшение количества эндокриноцитов, компенсаторная гиперфункция сохранившихся клеток и частичное стромальное замещение дефицита объема паренхимы эндокринных желез. Выраженность гистологических изменений в эндокринных органах при хроническом эндотоксикозе убывает в ряду: надпочечники > яичники, семенники > щитовидная железа, инсулярный аппарат поджелудочной железы > паравентрикулярное ядро гипоталамуса > аденогипофиз. Дисбаланс основных эндокринных осей, возникающий вследствие вовлечения в патологический процесс желез внутренней секреции, является обязательным компонентом дальнейшего прогрессирования хронического эндотоксикоза.

2. Повреждение и гибель нейронов паравентрикулярного ядра гипоталамуса, базофильных клеток аденогипофиза и спонгиоцитов пучковой зоны коркового вещества надпочечников при хроническом эндотоксикозе становится основой дисбаланса адреналовой оси: гиперфункции центрального звена с увеличением уровня АКТГ в 6,9 раза и развития субкомпенсированного гипокортицизма со снижением уровня кортизола в 1,6 раза.

3. При хроническом эндотоксикозе происходит стадийное ремоделиро-вание ткани щитовидной железы по макрофолликулярному типу с образованием малочисленных гнездных очагов с микрофолликулярной трансформацией и последующим стромальным замещением объема утраченной паренхимы. Эти изменения, в сочетании с повреждением и гибелью базофильных клеток аденогипофиза, лежат в основе формирования дисбаланса тиреоидной оси: гипо-фунцкии центрального звена со снижением уровня 111 в 1,6 раза и развития субкомпенсированного гипертиреоза с повышением уровня общей фракции Т4 в 2,54 раза и свободной - в 1,53 раза. Крайним проявлением нарушений внут-риосевых взаимоотношений является автономная секреция периферических тиреоидных гормонов тироцитами.

4. В семенниках крыс-самцов при хроническом эндотоксикозе развиваются прогрессирующая атрофия клеток Лейдига и умеренное снижение сперматогенеза. Эти изменения в сочетании с гипертрофией ацидофильных клеток аденогипофиза лежат в основе формирования дисбаланса гонадной оси: постоянно высоких концентраций ФСГ, ЛГ и пролактина и резкого - в 5,69 раза, снижения уровня тестостерона. Нарушения у самок характеризуются дегенеративными изменениями в растущих фолликулах яичников, их атре-

тической трансформацией и кистозно-атретическими изменениями органа с потерей цикличности и монотонным снижением периферических гормонов: снижение эстрадиола - в 4,67 раза, прогестерона - в 2,62.

5. Инсулярный аппарат поджелудочной железы, как конечное звено па-равентрикуло-вагусного пути, реагирует на хроническую эндогенную интоксикацию уменьшением объемной доли островков Лангерганса в 1,65 раза, их склерозированием, уменьшением количества р-клеток, что сопровождается снижением уровня инсулина в сыворотке крови в 1,5 раза.

6. Комплекс морфофункциональных изменений в органах эндокринной системы при хроническом эндотоксикозе, определяемый как полигландуляр-ная эндокринопатия, участвует в развитии хронической патологии печени и почек, повреждение и недостаточность функции которых замыкает порочный круг хронической эндогенной интоксикации.

7. Математическое моделирование процесса, корреляционный анализ взаимосвязей между интегральными показателями хронической эндогенной интоксикации, гормональным профилем и морфометрическими характеристиками желез внутренней секреции при хроническом эндотоксикозе, свидетельствует о разобщении центральных и местных механизмов регуляции по мере прогрессирования хронического эндотоксикоза.

8. Особенности исходного представительства и последующего прироста экспрессии лиганда TRAIL, выявляемого иммуногистохимически, при хроническом эндотоксикозе определяют высокое значение ФНО-зависимого апоптоза в механизмах устранения эндокриноцитов в аденогипофизе (базо-фильные клетки), щитовидной железе и яичниках. Для ацидофильных адено-цитов и спонгиоцитов пучковой зоны коры надпочечников ФНО-зависимый апоптоз в условиях хронической эндогенной интоксикации не является типичным.

9. Гиперэкспрессия эндотелиальной нитроксидсинтазы, повсеместно выявляемая при иммуногистохимическом исследовании в эндокринных органах при хроническом эндотоксикозе и нарастающая по мере увеличения продолжительности эндогенной интоксикации играет существенную роль в механизмах сосудистых реакций, опосредуя неоваскуляризацию желез внутренней секреции, хронический тканевой отек и заместительную стромальную пролиферацию. Повреждение эндотелия и гиперэкспрессия эндотелиальной нитроксидсинтазы имеет неодинаковую выраженность и убывает в ряду:

надпочечник, гонады > инсулярный аппарат поджелудочной железы > гипофиз > щитовидная железа.

10. Основные внутриклеточные изменения в эндокриноцитах при хроническом эндотоксикозе зависят от степени вовлеченности конкретного органа в патологический процесс и его функционального статуса. Для клеток, находящихся в состоянии повышенной функциональной активности (кортико-цитов и тиреотропоцитов аденогипофиза, тироцитов) характерны признаки усиления синтетических процессов в виде расширения цистерн эндоплазма-тической сети, увеличения числа секреторных везикул, просветления мито-хондриального матрикса. Для тироцитов характерно уменьшение количества лизосом, что свидетельствует о нарушении цикла интернализации тиреогло-булина. Для спонгиоцитов пучковой зоны коркового вещества надпочечников, фолликулярных клеток яичников и (3-инсулоцитов характерны как внутриклеточные признаки истощения (уменьшение численности секреторных везикул, уменьшение размеров и повышение электронной плотности митохондрий), так ультрамикроскопические признаки гиперфункции небольшой части эндокриноцитов, сохранившихся неповрежденными.

11. При хроническом эндотоксикозе тиреостатик мерказолил и экзоген-но вводимый эстрадиол частично корректируют эндокринный дисбаланс и патологические изменения в эндокринных органах, уменьшают выраженность эндогенной интоксикации и интенсивность повреждения внутренних органов - печени и почек.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Взаимосвязь нарушений обмена липидов и вторичного повреждения внутренних органов при хроническом экспериментальном эндотоксикозе // Медико-биологические и психолого-педагогические аспекты адаптации человека: Материалы II Всерос. н.- пр. конфер. - Волгоград: ВолГУ, 2003. - С. 144-145. (соавт. В.В. Новочадов).

2. Морфофункциональные особенности надпочечников морских свинок // Медико-биологические и психолого-педагогические аспекты адаптации человека: Материалы II Всерос. н.-пр. конфер. - Волгоград: ВолГУ, 2003. - С. 40-42. (соавт. В.В. Новочадов).

3. Вегетативный дисбаланс и вторичное повреждение печени при хроническом эндотоксикозе // Успехи совр. естествознания. - 2003. - №11. - С. 74-75. (соавт. В.И. Фролов, В.В. Новочадов).

4. Корреляционный анализ морфометрических показателей почек и вегетативных структур при хроническом эндотоксикозе // Фундаментальные исследования - 2004. - N1. - С. 106-107. (соавт. В.И. Фролов, С.М. Востриков, В.В. Новочадов).

5. Липидный дисбаланс в ткани надпочечников в оценке тяжести хронического эндотоксикоза (экспериментальное исследование) // Успехи совр. естествознания. - 2004. - №2. - С. 35-36. (соавт. С.М. Востриков).

6. Морфология надпочечников при острой алкогольной интоксикации и эндотоксикозе у крыс: сходства и отличия // Материалы н.-пр. конфер. «Медико-социальные аспекты улучшения демографической ситуации в Волгоградской области». -Волгоград, 2004. - С. 88-90. (соавт. С.М. Востриков, В.В. Новочадов).

7. Морфология хронического эндотоксикоза в условиях вегетативпой дисрегуляции // Морфол. ведомости. - 2004. - № 1-2. - С. 74-75. (соавт. С.М. Востриков, В.В. Новочадов).

8. Количественная морфология эндокриноцитов надпочечников и инсу-лярного аппарата поджелудочной железы кошек при хроническом эндотоксикозе // Новые технологии в медицине: Матер, н. конфер, посвящ. 65-летию каф. топографической анатомии и оперативной хирургии ВолГМУ. - Волгоград. - 2004. -С. 229-230. (соавт. С.М. Востриков, В.В. Новочадов).

9. Патоморфологические изменения в надпочечниках при хроническом эндотоксикозе в условиях вегетативной дизрегуляции // Медико-биологические и психолого-педагогические аспекты адаптации человека: Мат. 3-й Всерос. н.-пр. конфер. - Волгоград: ВолГУ, 2004. - С. 278-280. (соавт. С.М. Востриков, Л.В. Полякова, Г.А. Скляренко).

10. Возможности компьютерной морфометрии в оценке патологии надпочечников при хроническом эндотоксикозе // Морфол. ведомости. - 2004. - № 3-4. - С. 92-93. (соавт. С.М. Востриков, Г.Л. Снигур, В.В. Новочадов).

11. Морфофуикциональная характеристика вегетативных ганглиев сердца при хроническом эндотоксикозе // Вестник Волгоградского гос. мед. унта. - 2004. - N11. - С. 13-15. (соавт. В.И. Фролов, Д.Е. Марков, В.В. Новочадов).

12. Моделирование хронического эндотоксикоза на фоне вегетативной дизрегуляции: механизмы органопатологии // Тез. докл. III Росс. Конгресса по патофизиологии России. — М., 2004. - С. 21. (соавт. В.И. Фролов, В.В. Новочадов, С.М. Востриков).

13. Морфологическая характеристика щитовидной железы при хроническом эндотоксикозе // Морфология процессов индивидуального развития, адаптации и компенсации: Труды ВолГМУ. - Т.62, вып. 1. - Волгоград: Изд-во ВолГМУ, 2005. - С. 73-75. (соавт. Л.В. Полякова).

14. Новые модели хронического эндотоксикоза // Фундаментальные исследования. - 2005. -N1. - С. 39-40. (соавт. В.В. Новочадов).

15. Гель-фильтрация и спектроскопия молекул средней молекулярной массы плазмы крови в оценке эндогенной интоксикации при хроническом эндоток-сикозе // Новые технологии в медицине: Труды ВолГМУ. - Т. 61, вып.1. - С. 293-295. (соавт. А.Н. Горячев).

16. Морфология и липидный спектр тканей яичников крыс при хроническом эндотоксикозе // Новые технологии в медицине: Труды ВолГМУ. - 2005. -Т. 61, вып.1. - С. 286-287. (соавт. А.Г. Денисов, В.В. Новочадов).

17. Патология со стороны яичников при хроническом эндотоксикозе: кли-нико-анатомические наблюдения // Бюл. Волгоградского научного центра РАМН. - 2005. - N1. - С. 44-45. (соавт. А.Г. Денисов).

18. Патогенез и структурные основы кортикостероидной недостаточности при остром и хроническом эндотоксикозе // Бюл. Волгоградского научного центра РАМН. - 2005. - N1,- С.33-34. (соавт. А.Г. Денисов).

19. Морфометрическое исследование надпочечников, щитовидной железы и яичников кошек при хроническом эндотоксикозе // Совр. наукоемкие технологии. - 2005. - №2. - С.35-36. (соавт. И.В. Зарипова, С.М. Востриков, А.Г. Денисов).

20. Иммуногистохимическая характеристика стромальной пролиферации в надпочечнике при хроническом эндотоксикозе // Бюл. Волгоградского научного центра РАМН. - 2005. - №2. - С.10-12. (соавт. С.М. Востриков, Г.Л. Снигур, В.В. Новочадов).

21. Полигландулярная эндокринопатия как неотъемлемый Компонент хронического эндотоксикоза // Успехи совр. естествознания - 2005. - №8. - С. 82. (соавт. В.В. Новочадов).

22. Модели хронического эндотоксикоза // Успехи совр. естествознания -2005. - №8. - С. 85. (соавт. В.В. Новочадов).

23. Закономерности изменения морфометрической структуры ткани щитовидной железы при хроническом эндотоксикозе // Успехи совр. естествознания. -2005. -№10. - С. 74-75. (соавт. Л.В. Полякова, В.В. Новочадов).

24. Концепция полигландулярной эндокринной недостаточности при хроническом эндотоксикозе // Бюл. Сибирской медицины. - 2005. - Прил. 1. - С. 87. (соавт. В.В. Новочадов).

25. Механизмы развития хронического эндотоксикоза в условиях моделирования вегетативной дизрегуляции // Бюл. Сибирской медицины. - 2005. - Т. 4 - Прил. 1. - С. 8. (соавт. В.В. Новочадов, В.И. Фролов).

26. Хроническая полигландулярная эндокринопатия как мультифакгори-альная патология // Медико-биологические аспекты мультифакгориальной патологии: Материалы Российской н. конфер. с междунар. участием. - В 2-х т.т. -Курск, 2006. - Т. 1. - С. 347-349. (соавт. Л.В. Полякова, В.В. Новочадов).

27. Компьютерный анализ в оценке нейроэндокринной дизрегуляции как компонент органопатологии при хроническом эндотоксикозе // Бюл. Волгслрад-

ского научного центра РАМН. - 2006. - №2. - С. 42-43. (соавт. JI.B. Полякова,

A.Г. Денисов, A.B. Волков, Н.В. Ермолаев, И.М. Кузнецов).

28. Морфологические особенности периферических органов эндокринной системы при хронической интоксикации // Верхневолжский мед. журнал. - 2006. - Си. вып. - С. 58-59. (соавт. JI.B. Полякова, А.Г. Денисов).

29. Гормональный статус крыс с хронической эндогенной интоксикацией // Фундаментальные исследования. - 2006. - №5. - С. 96-97. (соавт. В.В. Новоча-дов, Л.В. Полякова, А.Г. Денисов, А.Н. Горячев).

30. Зависимость гормонального статуса крыс от морфологической структуры органов эндокринной системы в условиях хронической интоксикации // Клинико-морфологические аспекты эндокринопатий: Материалы II Всерос. кон-фер. с междунар. участием. - Белгород, 2006. - С. 38-39. (соавт. Л.В. Полякова,

B.В. Новочадов).

31. Морфофункциональная характеристика щитовидной железы при хроническом эндотоксикозе // Клинико-морфологические аспекты эндокринопатий: Материалы II Всерос. конфер. с междунар. участием. - Белгород, 2006. - С. 3941. (соавт. Л.В. Полякова, В.В. Новочадов).

32. Структурные и функциональные изменения в щитовидной железе при хроническом эндотоксикозе // Бюл. Волгоградского научного центра РАМН. -

2006. - №3. - С. 41-43. (соавт. Л.В. Полякова, В.В. Новочадов, A.B. Разваляева).

33. Морфогенез полигландулярной эндокринопатии при бактериальном эндотоксикозе // Материалы II съезда Российского об-ва патологоанатомов. - В 2-х т.т. - М„ 2006. - Т. 2. - С. 185-187. (соавт. Л.В. Полякова, В.В. Новочадов,

A.Г. Денисов).

34. Морфологические изменения в аденогипофизе и яичниках крыс-самок при хроническом эндотоксикозе с преимущественным поражением почечной паренхимы // Бюл. Волгоградского научного центра РАМН. - 2007. - №2. - С. 2730. (соавт. А.Г. Денисов).

35. Гормональный дисбаланс и хроническая эндогенная интоксикация при дисметаболической нефропатии у крыс // Бюл. Волгоградского научного центра РАМН. - 2007. - №1. - с. 16-18. (соавт. Л.В. Полякова, И.М. Кузнецов, В.В. Новочадов).

36. Структурно-функциональные изменения щитовидной железы как компонент хронического эндотоксикоза // Бюл. экспер. биологии и медицины. - 2007. - № 12. - С. 707-711. (соавт. Л.В. Полякова, В.В. Новочадов).

37. Радиальная морфометрия эндокриноцитов как способ оценки их функциональной активности // Бюл. Волгоградского научного центра РАМН. -

2007. - №3. - С. 50-51. (соавт. Л.В. Полякова, И.М. Кузнецов, А.Н. Горячев,

B.В. Новочадов).

38. Количественные методы в оценке нейроэндокринной регуляции при хроническом эндотоксикозе // Астраханский мед. журнал. - 2007. - №2. - С. 8485. (соавт. JI.B. Полякова, А.Н. Горячев, Г.А. Скляренко).

39. Структурно-функциональные изменения гипофиза как компонент хронического эндотоксикоза // Морфол. ведомости. - 2007. - №3-4. - С. 25-28. (соавт. В.В. Новочадов, В.Б. Писарев).

40. Радиальная морфометрия в оценке изменений нейронов, вызванных воздействием эндогенных факторов // Вестник новых мед. технологий. - 2008. - №1. - С. 24-26. (соавт. Н.В. Ермолаев, A.B. Волков, В.В. Новочадов).

41. Компьютерная морфометрия фаций сыворотки крови при клиновидной дегидратации при экспериментальном диабете // Вестник новых мед. технологий. - 2008. - №1. - С.22-24. (соавт. А.Н. Горячев, В.В. Новочадов).

42. Оргапопатология хронического эндотоксикоза моделируемого в условиях эндокринного дисбаланса // Морфология. - 2008. - Т. 133, №2. - С. 5556. (соавт. В.В. Новочадов, JI.B. Полякова, И.М. Кузнецов, Г.А. Скляренко).

43. Нейроморфология хронического эндотоксикоза: механизмы повреждения и защиты нейронов // Морфология. - 2008. - Т. 133, №2. - С. 9697. (соавт. В.В. Новочадов, Н.В. Ермолаев Н.В, В.Б. Писарев, А.Н. Горячев).

44. Математическое моделирование компонента тиреоидиой дизрегу-ляции при хроническом эндотоксикозе // Вестник новых мед. технологий. 2008. - №3. - С. 167-168. (соавт. А.Н. Горячев, В.В. Новочадов).

45. Патоморфология печени и почек при хроническом эндотоксикозе в условиях тироидиого дисбаланса II Морфология. - 2008. - Т. 133, №4. - С. 63. (соавт. А.Н. Горячев, Г.А. Скляренко).

46. Ультраструктуриые изменения иисулярного аппарата поджелудочной железы при хроническом эндотоксикозе // Морфология. - 2008. -Т.133, №4. - С. 71. (соавт. В.В. Новочадов).

47. Морфофункциональные особенности семенников у крыс при хроническом эндотоксикозе // Морфол. ведомости. - 2008. - № 3-4. - С. 24-27. (соавт. В.В. Новочадов).

48. Эстрогены и модуляция гипоталамо-гипофизарно-тиреоидной оси при хронической эндогенной интоксикации у крыс // Бюл. Волгоградского научного центра РАМН. - 2009. - №1. - С. 49-53. (соавт. В.В. Новочадов).

49. Тиреоидная модуляция ФНО-зависимого апоптоза и формирование хронической патологии печени при эндогенной интоксикации у крыс // Бюл. экспер. биологии и медицины. - 2009. - Т. 147, №2. - С. 201-206. (соавт. А.Н. Горячев, В.В. Новочадов, А.И. Щёголев).

Подп. в печать 25.01.09. Формат 60х 84/16 Бум. пл. 65 г/м2.

Печать офсетная. Усл. печ. л. 2.0 Тираж 100. Заказ 12. Волгоградский государственный медицинский университет, 400131, Волгоград, Пл. Павших борцов, 1.

Актуальность.

В последнее десятилетие в теоретической медицине и клинической практике выделено новое направление - нейроиммуноэндокрииология [Ак-маев И.Г., Гриневич В.В, 2001, 2003; Кветной И.М., с соавт., 2005; Кузнецов C.JI. с соавт., 2008; Wang Q. Et al., 2009J. Благодаря новому интегрированному подходу к исследованию пато- и морфогенеза многих заболеваний, это направление позволило значительно расширить представления о природе ряда важнейших болезнен и разработать ряд эффективных подходов к их диагностике и лечению [Крыжаиовский Г.Н. с соавт., 2003; 2004; Бобыпцев И.И. с соавт., 2007; Евсеев В.А., 2001; 2007; Cai Z. et al., 2003, 2007; Oertel Y.C., 2008].

В рамках комплексного исследования механизмов развития хронического эндотоксикоза (ЭТ), осуществлявшегося под руководс'1 вом чл.-корр. РАМН В.Б. Писарева, ранее были установлены патогенетические моменты этого патологического процесса и его морфологические проявления [Ново-чадов В.В., Писарев, 2005; Полякова Л.В. с соавт., 2006; Писарев В.Б. с соавт., 2008], метаболические особенности [Новочадов В.В., 2001; Кравцов А.А., 2006] и аспекты вегетативной дизрегуляции [Фролов В.И., 2004; Бога-чев А.А., 2006].

Основу хронического ЭТ составляет неконтролируемый перепое по организму эндогенных -токсических соединений в весьма умеренных концентрациях, но в течение длительного времени, что сопровождается повреждением клеток-мишеней, органов и тканей и реакциями на него [Яковлев М.Ю., 2002, 2005; Мишпёв О.Д., с соавт., 2003; Гаджиева Х.К. с соавт., 2007; Зайратьянц О.В., Кактурский Л.В., 2008; Bik W. el al., 2004; Shimosawa M. et al., 2009].

В пато- и морфогенезе такого процесса современные исследования выделяют два взаимосвязанных между собой звена: собственно 'юксическое f воздействие на эндотелий сосудов, клетки паренхиматозных органов и внеклеточный мафикс, где доминирует эндотоксиновая агрессия как результат увеличения количества ЛПС и нарушении антиэндотоксииового иммунитета [Яковлев М.Ю. с соавт., 2000, 2006; Аниховская И.А. с соавт., 2005] и цитокиновое - системный воспалительный огвег на эндогенную интоксикацию [Еськов А.П. с соавт., 2003; Гусев Е.Ю. с соавт., 2006; Castellheim A. el al, 2009].

Формирование подобного сложного патологического процесса lie-мыслимо без развития нейроэндокринной дизрегуляция, в организме должны присутствовать ее признаки в виде гормонального дисбаланса и морфологических проявлений на уровне эндокринных органов и в точках приложения действия гормонов. Имеющиеся в литературе сведения о морфологии и функции органов эндокринной системы при остром ЭТ единичны и противоречивы [Филатов В.В., Глумов В.Я., 2003; Востриков С.М., 2005; Висмонт Ф.И. с соавт., 2007; Яглова ТТ.В. с соавт., 2009; Watanobe Н., Habu S., 2003; Ogino IT. et al., 20091, а при хроническом процессе - практически отсутствуюi [Денисов А.Г., 2005; Зайрагьянц О.В., 2006; Полякова Л.В., 2008; Uribe R.M. et al., 1999; Rivier С., 2003; Vonghia L., 2008J. С этих позиций, актуальным представляется комплексное исследование органов эндокринной системы при хроническом ЭТ в сопоставлении с маркерами эндогенной интоксикации, гормональным профилем и морфологическими изменениями в органах-мишенях эндогенной интоксикации.

Цель работы — установить закономерности морфологических изменений в органах эндокринной системы при хроническом эндотоксикозе и участия развивающиейся на этой основе гормональной дизрегуляции в его пато- и морфогенезе.

Задачи исследования.

1. Изучить основные натоморфологичсские изменения, развивающиеся в органах эндокринной системы при хроническом эндотоксикозе, выделить и охарактеризовать ведущие процессы, лежащие в их основе.

2. Установить структурные основы, последовательность и сравнительную выраженность патологии адрепаловой, тиреоидной, гонадной эндокринных осей и паравентрикуло-инсулярного пути при хроническом эндотоксикозе.

3. Сопоставить морфологические изменения в органах-мишенях эндогенной интоксикации, особенности гормонального профиля и динамику интегральных показателей эндотоксикоза в периферической крови с выходом на математическое моделирование патологических изменений.

4. Выявить иммуногистохимическими методами распределение маркеров ФЫО-зависимого апоптоза в отдельных железах внутренней секреции и определить роль этого процесса в механизмах устранения эндокрипоци-тов при хроническом эндотоксикозе.

5. Выявить распределение NOS-3 и определить роль эндотелиальпой нитрокспдсинтазы в сосудистом механизме повреждения эндокриноцитов и патологическом ремоделировании отдельных желез внутренней секреции при хроническом эндотоксикозе.

6. Показать стереотипные ультраструктурные изменения в эндокри-поцитах различных желез внутренней секреции при развитии хронического эндотоксикоза и выявить особенности в зависимости от их принадлежности к различным регуляторным осям.

7. Оцепить возможность уменьшения тяжести эндокрипопатии и общих проявлений эндотоксикоза при введении экспериментальным животным эстрогенов или тиреоста гиков.

Научная новизна.

Сформирована концепция об участии основных эндокринных органов в пато- и морфогенезе основных патологических изменений в печени и почках, а также участии выявленных гормональных сдвигов в развитии компенсаторных и приспособительных процессов в этих органах.

Впервые для объяснения механизмов и динамики развития хронического ЭТ, субстрата формирующейся полиорганной патологии, был применен подход, основанный па анализе характера и механизмов гормональной дпзрсгуляции. Показана роль мультигландулярной эидокрипопатии в формировании недостаточности печени и почек при хроническом ЭТ.

С помощью современных методов морфологического исследования показано, что ФНО-зависимый апошоз при хроническом ЭТ являс1ся одним из ведущих механизмов устранения эндокриноцитов в гипофизе, щию-видпой железе и яичниках. Установлено, что в механизмах повреждения и гибели эндокриноцитов надпочечников, гонад и ипсулярного аппарата при хроническом ЭТ существенную роль играет гиперэкспрессия эндотелиаль-ной нитроксидсшназы, опосредующая избыточную васкуляризацию желез внутренней секреции, хронический тканевой отек и повреждение сохранившихся эндокриноцитов, а также стромальпую пролиферацию.

Сопоставление гормонального профиля и структурных изменений в гипоталамусе, гипофизе, щитовидной железе, инсулярпом аппарате поджелудочной железы, надпочечниках, яичниках и семенниках в динамике хронического ЭТ позволило обосновать основные закономерности, очередность и сравнительную шпенспвпость разрушения основных гормональных осей при этом патологическом процессе.

Анализ ультраструктурных изменений в эндокрипоцшах основных эндокринных органов при хроническом ЭТ подтвердил стереотипность внутриклеточных реакций на повреждение, а также выявил дополнительные признаки, зависящие от типа секреции, ангиоархитектоники железы и се па-груженности при данной патологии.

Показано, что применение эстрогенов и тиреостатическая терапия способны корректировать гормональный дисбаланс и уменьшать выраженность эндогенной интоксикации и повреждения печени и почек при хроническом ЭТ.

Научно-практическая значимость.

Полученные данные расширяют современные представления о хроническом ЭТ с позиций вовлечения в его развитие механизмов эндокринной дисфункции. Они мотивируют врачей клинической практики на поиски скрытой эндокринной патологии у лиц с хроническими заболеваниями, сопровождающимися эндогенной интоксикацией. С другой стороны, на основании работы обосновывается поиск хронической эндогенной интоксикации в эндокринологии, как возможной причины заболевания.

Метод разделения эндокрипоцигов по результатам радиальной мор-фометрии на классы (гиперфупкционирующие, нормально функционирующие, с гипофункцией и истощенные) приемлем для любых исследований в области эндокринологии для скрининга направления и выраженноеги изменений под действием экзо- или эндогенных стимулов.

Ряд гормональных воздействий (введение эстрогенов, тиреостатиков) может быть использовано для модификации общепринятых моделей хронических токсин-индуцировапных процессов с доказанной модуляцией ими развивающейся оргапопатологии в экспериментальной медицине.

Использование материалов работы при преподавании физиологии, патофизиологии, патологической анатомии и эндокринологии в высших учебных заведениях позволяет повысить качество подготовки современного врача.

Основные положении, выносимые на защиту.

1. Ключевыми патоморфологическими изменениями в органах эндокринной системы при хроническом эпдотоксикозе являются мозаичное сочетание участков повреждения, гибели, атрофии и гипертрофии эндокрииоци-тов, сосудистых реакции и пролиферации стромы.

2. Степень повреждения эпдокрипоцитов при хроническом эпдотоксикозе и характер компенсаторных процессов в конкретной железе зависит от ее исходного функционального состояния, вовлеченности в системные механизмы адаптации к токсическому процессу при общей тенденции к субкомпенсировапиой гипофункции и стромальиой пролиферации с частичным замещением объема утраченных эндокрипоцитов.

3. Результатом структурных изменений в органах эндокринной системы при хроническом эпдотоксикозе является мультигландулярный гормональный дисбаланс, представляющий собой взаимосвязанную последовательность нарушений основных вертикальных эндокринных осей, внутри-осевых взаимоотношений.

4. Классические вертикальные регуляторные эндокринные оси при развитии хронического эндотоксикоза повреждаются в различной степени: максимальная дизрегуляция, патология периферических желез и разрушение впутриосевых взаимоотношений свойственно гонадной оси, менее выраженная патология — тиреоидной оси и инсулярпому пути, и минимальные изменения — адреналовой оси.

5. Существенное значение в механизмах устранения функционирующих эндокриноцитов желез внутренней секреции имеют ФНО-зависимый апоптоз и сосудистый механизм, опосредованный через эпдотелиальпую нитроксидсинтазу, которая экспрессирустся в эндотелии сосудов этих желез.

6. Применение тиреоетатиков и эстрогенов способно ослаблять уровень эндогенной интоксикации, и связанную с ним тяжесть патологии печени и почек при хроническом эндотокснкозе.

Апробация работы и публикации.

Основные результаты исследования докладывались и обсуждались па II Общероссийской конференции «Проблемы морфологии» (Сочи, 2003); научной конференции «Новые технологии в медицине» (Волгоград, 2004); V Общероссийской конференции «Гомеостаз и инфекционный процесс» (Кисловодск, 2004); V Российском съезде анатомов, гистологов и эмбриологов (Казань, 2004); III Российском конгрессе по патофизиологии (Москва, 2004); Всероссийском симпозиуме «Эндотоксикоз: природа, диагностика и принципы коррекции» (Волгоград, 2005); V Сибирском физиологическом съезде (Томск, 2005); II Всероссийской конференции «Клипико-морфологические аспекты эндокринопатий» (Белгород, 2006); VII общероссийской конференции «Гомеостаз и1 инфекционный' процесс» (Москва, 2006); II съезде Российского общества патологоанатомов (Москва, 2006); II Всероссийской конференции «Новые информационные технологии в медицине» (Волгоград, 2007); международной конференции «Структурные преобразования органов и тканей в норме и при воздействии антропогенных факторов» (Астрахань, 2007); IX Международном, конгрессе Ассоциаций морфологов (Бухара, 2008); Международной конференции, посвященной 100-летию со дня рождения академика Д.А. Жданова (Москва, 2008).

Апробация работы осуществлена на расширенном заседании сотрудников отдела общей и экспериментальной патологии Волгоградского научного центра РАМН и администрации Волгоградской области, кафедр патологической анатомии и патологической физиологии Волгоградского государственного медицинского университета 20 октября 2008 года. По теме диссертации опубликовано 49 научных работ, в том числе 14 публикаций в журналах, действующего «Перечня . ВАК».

Внедрение результатов работы.

Материалы диссертации внедрены в учебный процесс кафедр факультетской терапии, патологической анатомии, судебной медицины Волгоградского государственного медицинского университета, кафедры семейной медицины Ульяновского государственного университета. Практические рекомендации используются в работе ГУ «Волгоградского научного центра РАМН и администрации Волгоградской области», Волгоградского областного патологоанатомического бюро, ГУЗ «Волгоградское областное бюро СМЭ», Областном онкологическом центре Ульяновской области.

Структура и объем диссертации.

Диссертация изложена на 305 страницах машинописного текста, содержит 87 таблиц, иллюстрирована 59 рисунками. Она состоит из введения, обзора литературы, главы описания материалов и методов исследования, главы собственных исследований, заключения, выводов и списка использованной'литературы. Список литературы содержит 334 источника (211 на русском и 123 - на иностранных языках).

ВЫВОДЫ

1. Структурными основами гормонального дисбаланса при хрониче- ' ском эпдотоксикозс являются прогрессирующее повреждение и уменьшение количества эндокриноцитов, компенсаторная гиперфункция сохранившихся клеток и частичное стромальпос замещение дефицита объема паренхимы эндокринных желез. Выраженность гистологических изменений в эндокринных органах при хроническом эндотоксикозе убывает в ряду: надпочечники > яичники, семенники > щитовидная железа, инсулярный аппарат поджелудочной железы > паравентрикулярное ядро гипоталамуса-> адено-гипофиз. Дисбаланс основных эндокринных осей, возникающий вследствие вовлечения в патологический процесс желез внутренней секреции, является обязательным компонентом дальнейшего прогрессирования хронического эндотоксикоза.

2. Повреждение и гибель нейронов паравептрикулярного ядра гипоталамуса, базофильиых клетою адеиогипофиза и спопгиоцитов пучковой зоны коркового вещества надпочечников при хроническом эндотоксикозе становится, основой дисбаланса адреналовой оси: гиперфункции центрального звена с увеличением уровня АКТГ в 6,9 раза и развития субкомпенсирован-ного гипокортицизма со снижением уровня кортизола в 1,6 раза.

3. При хроническом эндотоксикозе происходит стадийное ремодели-рование ткани щитовидной железы по макрофолликулярному типу с образованием малочисленных гнездных очагов с микрофолликулярной трансформацией и последующим стромальным замещением объема утраченной паренхимы. Эти изменения, в сочетании с повреждением и гибелью базофильиых клеток адеиогипофиза, лежат в основе формирования дисбаланса тиреоидной оси: гипофунцкии центрального звена со снижением уровня ТТГ в 1,6 раза и развития субкомпенсировапного гипертиреоза с повышением уровня общей фракции Т4 в 2,54 раза и свободной - в 1,53 раза. Крайним проявлением нарушений внутриосевых взаимоотношений является автономная секреция периферических тиреоидных гормонов тироцитами.

4. В семенниках крыс-самцов при хроническом эндотоксикозе развиваются прогрессирующая атрофия клеток Лейдига и умеренное снижение сперматогенеза. Эти изменения в сочетании с гипертрофией ацидофильных клеток аденогипофиза лежат в основе формирования дисбаланса гонадной оси: постоянно высоких концентраций ФСГ, ЛГ и пролактина и резкого - в 5,69 раза, снижения уровня тестостерона. Нарушения у самок характеризуются дегенеративными изменениями в растущих фолликулах яичников, их атретической трансформацией и кистозно-атретичсскими изменениями органа с потерей цикличности и монотонным снижением периферических гормонов: снижение эстрадиола,— в 4,67 раза, прогестерона — в 2,62.

5. Инсулярный аппарат поджелудочной железы, как конечного звена паравентрикуло-вагуспого пути, реагирует на хроническую эндогенную интоксикацию уменьшением объемной доли островков Лапгсргапса в 1,65 раза, их склерозированием, уменьшением количества [3-клеток, что сопровождается снижением уровня инсулина в сыворотке крови в 1,5 раза.

6. Комплекс морфофуикциоиальпых изменений в органах эндокринной системы при хроническом эндотоксикозе, определяемый как полиглап-дулярная эндокринопатия, участвует в развитии хронической патологии печени и почек, повреждение и недостаточность функции которых замыкает порочный круг хронической эндогенной интоксикации.

7. Математическое моделирование процесса, корреляционный анализ взаимосвязей между интегральными показателями хронической эндогенной интоксикации, гормональным профилем и морфометрическими характеристиками желез внутренней секреции при хроническом эндотоксикозе, свидегельствует о разобщении центральных и местных механизмов регуляции по мере прогрессирования хронического эпдотоксикоза. •

8. Особенности исходного представительства и последующего прироста экспрессии лиганда TRAIL, выявляемого иммуногистохимически, при хроническом эндотоксикозе определяют высокое значение ФНО-зависимого апоптоза в механизмах устранения эндокриноцитов в адепоги-пофизе (базофильные клетки), щитовидной железе и яичниках. Для ацидофильных аденоцитов и спонгиоцитов пучковой зоны коры надпочечников ФНО-зависимый апогггоз в условиях хронической эндогенной интоксикации не является типичным.

9. Гиперэкспрессия эндотелиальной нитроксидсинтазы, повсеместно выявляемая при иммупогистохимическом исследовании в эндокринных органах при хроническом эндотоксикозе и нарастающая по мере увеличения продолжительности эндогенной интоксикации играет существенную роль в механизмах сосудистых реакций, опосредуя иеоваскуляризацию желез внутренней секреции, хронический тканевой отек и заместительную стро-мальную пролиферацию. Повреждение эндотелия и гиперэкспрессия эндотелиальной нитроксидсинтазы имеет неодинаковую выраженность и убывает в ряду: надпочечник, гонады > инсулярный аппарат поджелудочной железы > гипофиз > щитовидная железа.

10. Основные внутриклеточные изменения в эндокриноцитах при хроническом эндотоксикозе зависят от степени вовлеченности конкретного органа в патологический процесс и его функционального статуса. Для клеток, находящихся в состоянии повышенной функциональной активности (кор-тикоцитов и тиреотропоцитов аденогипофиза, тироцитов) характерны признаки усиления синтетических процессов в виде расширения цистерн эндо-плазматической сети, увеличения числа секреторных везикул, просветления митохондриального матрикса. Для тироцитов характерно уменьшение количества лизосом, что свидетельствует о нарушении цикла интернализации тиреоглобулина. Для спонгиоцитов пучковой зоны коркового вещества надпочечников, фолликулярных клеток яичников и р-инсулоцитов характерны как внутриклеточные признаки истощения (уменьшение численности секреторных везикул, уменьшение размеров и повышение электронной плотности митохондрий), так ультрамикроскопические признаки гиперфункции небольшой части эндокриноцитов, сохранившихся неповрежденными.

11. При хроническом эндотоксикозе тиреостатик мерказолил и экзо-генно вводимый эстрадиол корректируют эндокринный дисбаланс и патологические изменения в эндокринных органах, уменьшают выраженность эндогенной интоксикации и интенсивность повреждения внутренних органов - печени и почек.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Итак, в связи с поставленной целыо - определить морфологический субстрат, механизмы и роль гормональной дизрегуляции в формировании органопатологии при хроническом ЭТ, было проведено комплексное экспериментальное исследование. Необходимым этапом работы явился математический анализ, поскольку нервная, эндокринная и иммунная системы функционируют непрерывно, и поэтому изменение параметров работы одной из систем приводит к изменению в другой [Балаболкин М.И., 20001.

Системы с отрицательной и положительной обратной связью обеспечивают взаимодействие отдельных эндокринных органов, всей эндокринной и нервной системы [Апохип П.К., 1998]. Стойкое изменение равновесия между ними ведет к изменению концентрации регулирующих факторов и вызывает нарушение как функции, так и структуры этих органов [Пальцев М.А., 2006; Бобыпцев И.И. с соавт., 20071.

Для решения поставленных задач наиболее адекватными представляются две основных модели хронического ЭТ: совместное введение малых доз ТХМ и ЛПС (для моделирования ЭТ с преимущественным поражением печепи) п совместное введение малых доз гентамицина и ЛПС (для моделирования ЭТ с преимущественным поражением почек). Хроническую ЭИ верифицировали по увеличению содержания в плазме веществ средней молекулярной массы, их олигопептидных фракций, концентрации МДА, снижению активности ацилазы печени и почек. Развитие хронического ЭТ сопровождалось появлением характерных патоморфологических изменений в печени (уменьшению объемной доли гепатоцитов, увеличению объемной доли соединительной ткани, увеличению размеров ядер звездчатых ретику-лоцитов, увеличению объемной доли пекротизированных гепатоцитов) и в почках (увеличение объемной доли ткани интерстиция, уменьшение мочевого пространства, снижения канальцевого индекса, увеличения объемной доли склерозироваипых клубочков). Оценивая динамику изменений, мы пришли к выводу о том, что основная органопатология при формировании хронического ЭТ развивается между 30 и 90 сут эксперимента.

Проведенный анализ морфофункциопальпых изменении в эндокринной системе строился в соответствии с общепринятыми представлениями о существовании сопряженных осей. В связи с этим перед нами стал вопрос о рассмотрении нарушений в адреналовой, тиреоидной, гонадной осях, а также паравептрикуло-инсулярпом пути. При этом необходимо было выяснить, являются ли выявленные изменения гормонального профиля функциональными и обратимыми, пли в их основе лежит прогрессирующая структурная перестройка. Для ответа на данный вопрос было проведено морфологическое исследование органов эндокринной системы.

Результаты наших исследований свидетельствуют о системном влиянии, оказываемом ЛПС, и вовлечении при хроническом ЭТ не только классической стрессорной, но и тиреоидной, и гонадной осей. По многочисленным литературным данным ЛПС является системным (иммунологический) стрессором, основные эффекты которого заключаются в активации адреналовой системы [Яковлев М.Ю., 2005]. В развитии этой активации основную роль играют широко известный набор цитокинов, таких как ИЛ-1, ИЛ-6, ФНО-а. Их стимуляция периферических иммунных клеток определяет основные эффекты изменений адреналовой системы при действии ЛПС [Beishuizcn A. et al., 2003J.

По нашим данным, адрсналовая ось являлась наиболее стабильной из рассматриваемых. В ответ на токсическое воздействие произошла активация адреналовой системы и повышения уровня гормонов, входящих в ее состав, однако внутриоссвые вертикальные взаимоотношения сохранялись до 60-х сут эксперимента. К 90-м сут ЭТ нами зарегистрировано разобщение связи АКТГ — кортизол, когда снижение уровня АКТГ сопровождалось выраженным увеличением содержания кортизола в сыворотке периферической крови, превышающей контрольные значения в 3,1 раза.

Выбор PV ядра гипоталамуса в качестве объекта исследования был очевиден, так как оно обладает значительным кон туром гуморальной регуляции [Евсеев В.А., с соавт., 2001; Боголепов Н.Н. с соавт., 2002; Туманов В.П., с соавт., 2003; Смирнов А.В., 2005; Писарев В.Б. с соавт., 2006; Watanobe Н., et al., 2003]. Нейроны PY ядра содержат большое количество рецепторов к ключевым гормонам, в частности глюкокортикоидам, мипера-локортикоидам и эстрогенам [Nadeau S., Rivesl S., 2003; Wu Y.H. et al., 2006; Doyon C. et al, 2007]. Изменения в PY ядре при хронических интоксикациях, обнаруживаемые иммуногистохимическими методами заключались в нарушении синтеза - кортиколиберина и вазопрессииа, связанные с уменьшением активности нейрональных карбоксипептидаз [Писарев В.Б., 1990; Писарев В.Б., с соавт., 19.98, 2000; Акмаев И.Г., 2001; Филатов В.В., Глумов В.Я., 2003; Барабан с соавт., 2007; Watanobe Н., et al., 2003].

Полученные результаты выявили наличие однонаправленных изменений в обеих моделях. При хроническом ЭТ в PY ядре гипоталамуса развивался комплекс нарушений в виде различных структурных изменений микроциркуляторного русла, нейронов, нервных проводников и элементов нейроглии. Начиная с 30-х сут эксперимента, постоянно выявлялись признаки повышения проницаемости артерий, вен и капилляров, разрыхление стенок сосудов и пропитывание их плазменными белками, фибрипоидный некроз и гиалиноз стенки сосудов. Указанные изменения степок сосудов прогрессировали при возрастании сроков эксперимента. Вокруг сосудов также местами встречались небольшие лимфоцитарные инфильтраты. Интенсивность поражения PV ядра обусловлено тем, что наиболее восприимчивыми к эндогенной интоксикации являются эволюционно более молодые ядра с преобладанием парасимпатической активности [Фролов В.И., 2004]. В целом, полученные данные свидетельствуют о наличии особенностей строения PV ядра, опосредующих его весьма высокую степень повреждения, при развитии хронического ЭТ. Они в первую очередь определяются функциональной нагруженностыо PV и слабостью его микрогли-ального представительства.

Изменения, выявленные при хронической эндогенной интоксикации в гипофизе крыс, имели отличия в зависимости от отдела, что, по-видимому, связано с различным эмбриональным происхождением адено- и нейрогипо-физа. Так, в аденогипофизе основным было нарушение состава клеточной популяции, которое заключалось в увеличении объемной доли ацидофильных адепоцитов, на фоне умеренного снижения базофильпых и^хромофоб-ных клеток. Данное явление представлялось нам вполне логичным, так как при сопоставлении количества ацидофилов и уровня синтезируемого ими пролактипа, отмечено сопряженное монотонное увеличение обоих показателей по мере нарастания длительности экспериментального ЭТ.

В нейрогипофизе при хроническом ЭТ развивался комплекс нарушений в виде различных структурных изменении, при этом на первый план выступал сосудистый компонент, реализующийся в виде полнокровия сосудов микроциркуляторного русла, периваскулярного и перецеллюлярпого отека с явлениями спонгиоза. Сосудистые нарушения имели явно неспецифический характер и вызваны-как цитокиновой агрессией, так и-первичной природой эндогенной интоксикации. В меньшей степени был представлен цитолитический компонент повреждения, выраженность которого нарастала по мере продолжительности эндогенной интоксикации, при этом обнаруживались питуициты с признаками кариорексиса, вакуолизации цитоплазмы, появлялись пикнотически измененные ядра и апоптозные тельца.

Изменения в гипофизе, как органе центральной гормональной регуляции, при хронических дисмегаболических процессах и интоксикации, описывались достаточно подробно [Филаретов А.А., 1996; Мхитаров В.А. с соавт., 2000; Акмаев И.Г., 2001, 2007; Григоренко А.А. с соавт., 2002;

Fernandes G.A. ct al., 2002; Beishuizen A., Thijs L.G., 2003]. Применительно к концепции настоящего исследования важным является выявленное сочетание более выраженного повреждения и гибели базофилов адепогипофиза при наличии гипертрофии ацидофилов, в совокупности рассматриваемое как субстрат гипофизарпых механизмов гормонального дисбаланса при хроническом ЭТ.

В надпочечниках местом наибольшего повреждения при хроническом ЭТ является сетчатая зона па границе с мозговым веществом. Корковое и мозговое вещество относительно независимы в морфофункциональном и эмбриологическом отношении. Корковое вещество представлено интерре-наловой тканью мезодермального происхождения, тогда как мозговое - параганглиями эктодермального гепеза. На границе между указанными слоями обнаруживают так называемые смешанные клетки. Допускают, что они являются переходной формой в процессе трансформации (дифференциров-ки) - адренокортикоцитов коркового вещества в медуллярные (хромаффип-ные) клетки, и, возможно поэтому, являются более уязвимыми [Висмопт Ф.И. с соавт., 20071.

Таким образом, одним из ведущих механизмов морфогенеза при повреждении надпочечников является прямое токсическое действие, реализуемое путем проникновения эндогенных токсических соединений непосредственно из кровотока к клетке. При этом избыточная васкуляризация надпочечников обеспечивает максимальный объем повреждения органа.

Опосредованное действие эндогенных токсических соединений заключается в высвобождении из эндотелия медиаторов и изменении проницаемости сосудистой стенки с возникновением ишемических, свободнораi дикальпых, осмотических и электролитных механизмов повреждения эндокриноцитов. Кроме этого, необходимо учитывать, что эндокриноциты имеют богатый рецепторный аппарат, и поэтому являются весьма уязвимыми в цитокиповом каскаде, запуск которого осуществляется в ответ на действие эндогенных токсических соединений. Высокий уровень митотической активности и метаболизма в определенной степени снижают резистентность надпочечников к действию многих патогенных факторов. Множественность клеточного состава органа позволяет ему на местном уровне замкнуть несколько порочных кругов, усиливающих тканевое повреждение. Структурные основы дизрегуляторного механизма, в основе которого лежит нарушения соотношения нервных и гуморальных воздействий стимулирующего и тормозного типа должны обнаруживаться как в центральных органах регуляции, так и местно. Адрепаловая ось является основным эффектором стрессорной реакции, в связи с этим при всех процессах, сопровождающих ЭТ, на эти органы оказывается двойная нагрузка: гормональная стимуляция и медиаторно-токсическое воздействие.

Среди всех эндокринных осей, адрепаловая изучена при хронических воздействиях в связи с классической концепцией стресса и выделением стессориой составляющей этих процессов [Бажанова Е.Д., Теплый Д.Л., 2004; Данилов Г.Е. с соавт., 2004; Бобынцев И. И:, с соавт., 2007; Кузнецов С.Л. с соавт., 2008; Dallman M.F. et al., 2004; McCormick C.M. et al. 2007; Ulrich-Lai Y.M. et al., 2007]. Полученные собственные данные детализируют механизмы формирования и субстрат гормональной дизрегуляции адреиа-ловой оси при развитии хронического ЭТ.

Менее устойчивой к хронической эндогенной интоксикации являлась тиреоидная ось, при этом возникшие изменения в большей степени затронули выработку тиреотропного гормона, содержание которого резко уменьшилось. При проведении корреляционного анализа было выявлено разобщение вертикальных и горизонтальных внутриосевых связей, усугубляющееся по мере увеличения сроков эксперимента. Полученные данные представляются нам вполне логичными, так как известно, что при SIRS нарушения возникают как в центральной части регуляции тиреоидной оси, так и изменяется метаболизм периферических тиреоидных гормонов. [Бонда-ренко JI.A., 2007; Boelen A., et al., 2004]. Изучение гормональной регуляции я. процессов перекисного окисления липидов привело к выводу, что метаболические эффекты гормонов ЩЖ, являющихся активными регуляторами окислительно-восстановительных процессов в органах и тканях являются физиологическими антиоксидантами. При этом речь идет только о физиологических концентрациях этих гормонов, в то время как при их повышенном содержании был обнаружен прооксидантный эффект [Надолышк Л.И., Валентюкевич О.И., 2007; Tonclli L.H., et al., 2004J.

Щитовидная железа - единственный орган эндокринной системы, в котором происходит двунаправленное перемещение продуктов, предназначенных для секреции в кровь. Синтезируемый и содержащий связанные йодтиронины ТГ вначале пересекает апикальную мембрану тироцитов, откладываясь в коллоид полости фолликула, а затем вновь поступает в клетки и перемещается к их базальпой мембране, при этом, высвобождая йодтиронины, которые и выделяются в кровь.

Изменения в ЩЖ при хроническом ЭТ носили мозаичный характер, при этом участки с признаками повышенной функции чередовались с зонами атрофии фолликулярного эпителия. Щитовидная железа на ранних сроках хронического эндотоксикоза сохраняла пормопластический тип строения и характеризовалась снижением количества фолликулярных тироцитов, развитием вакуольной дистрофии и десквамацией отдельных клеток в просвет фолликула. По мере увеличения сроков эндогенной интоксикации происходило ремоделирование ткани щитовидной железы по макрофолликуляр-ному типу с образованием малочисленных гнездных очагов с микрофолли-кулярпой трансформацией и стромальиым замещением объема утраченной паренхимы.

Полученные нами данные не противоречат имеющимся в литературе сведениям о характере структурно-функциональных преобразований фолликулярного эпителия ЩЖ при хроническом воздействие токсических агентов [Хмельницкий O.K. с соавт., 2000; Раскоша О.В., Ермакова О.В., 2006; Лунькова JI.K. с соавт., 2007].

В патоморфозе ЩЖ важная роль принадлежала стромальной пролиферации, которая была максимально выраженной на 60-е сут хронического ЭТ. Активно развивающаяся соединительная ткань представляет собой ответную компенсаторную реакцию па цитокиповую агрессию и является неспецифичной. С одной стороны, стромальная пролиферация возмещает убыль паренхимы органа, с другой - оказывает местио-стабилизирующее действие для оставшегося фолликулярного эпителия, препятствуя коллапсу коллоида. Сосудистые нарушения также имели неспецифический характер и были вызваны как активацией цитокинового каскада, так и первичной природой эндогенной пптоксикации. Его изменения при хроническом ЭТ в большей степени играли роль па ранних сроках ЭТ, когда в ткани щитовидной железы отмечались многочисленные кровоизлияния, а также вторичные изменения в очагах предшествующей геморрагии. Этот механизм можно рассматривать как первичный для ряда дисметаболических, токсических и гипоксических повреждений тироцитов.

Таким образом, в щитовидной железе при хроническом ЭТ выявляются все структурные признаки тиреоидной дисфункции (гипертиреоза). Гиреоидные гормоны попадают в системный кровоток и оказывают вторичное повреждающее действие на органы-мишени, тем самым, участвуя в поддержании хронической эндогенной интоксикации и формировании по-лиоргаппой недостаточности.

Наиболее уязвимой, как у самцов, так и у самок, оказалась гонадная ось, где были зарегистрированы выраженные изменения гормональной активности. На уровне гипофиза основными участниками оси «гипоталамус -гипофиз — яичники» являются клетки-гонадотрофы и пролакторофы, вырабатывающие, соответственно ФСГ, ЛГ и пролактин. Гонадотрофы составляют 10-15% от всех клеток аденогипофиза и располагаются вблизи пролактслрофов. Эта особенность позволяет считан,, что между ними имеются паракршшые взаимоотношения. Синтез гормонов осуществляется в одной и той же клетке, а не в разных, как считалось ранее [Генгин М.Т., с соавт., 2003; Кореневский А.В. с соавт., 2007]. Зарегистрированное нами повышение уровня гипофизарных гормонов (ФСГ, ЛГ), в норме увеличивающих содержание периферических половых гормонов (тестостерона, эстрадиола, nporeciepoHa), при хроническом ЭТ приводило к их падению, максимально выраженному к окончанию (90-м су l) эксперимента.

Зарегистрированная нами пролактинемия, обнаруживаемая на всех сроках эндогенной интоксикации согласуется с литературными данными, согласно которым введение бактериального ЛПС увсличивае1 продукцию и выброс пролактина [De Lauientiis А. с соавт., 2002]. Баюериальный ЛПС увеличивает продукцию и выброс пролактина, и эта стимуляция находится под контролем выброса цитокииов, среди которых доминируе: TNF-a (ФНО). Поскольку хорошо известно, что выброс пролактина находится под дофаминергпческим контролем, De Laurentiis А. и соавт. (2002), провели исследования, в коюрых изучали активность дофаминергичсской системы, измерение уровня факторов ФНО при экспериментальной эндотоксемии продолжительностью 3 ч у крыс. Результаты показывают, чю ЛПС и ФНО повышают выброс дофамина, под действием которого измепяе1ся активность гипоталамо-гипофизарной оси. Повышение дофамипергической активности с помощью ЛПС может быть факюром, запускающим SIRS. По мнению McKenzie S. с соавт. (2006), секреция пролактина находится под контролем нейрокипипа А, который является специфическим стимулятором этого выброса на уровне гипоталамуса. Было показано, что при внутри-брюшинном введение бактериального ЛПС уровень нейрокинина А значительно снижается, и, в дальнейшем это отражается на выбросе пролактина и секреции соответствующих тропных юрмонов гипофизом. Эти находки также были подтверждены отрицательными корреляциями между уровнем

ИЛ-6 и нейрокипииа А в системном кровотоке. Таким образом, нейрокинин А признан одним из ключевых медиаторов, опосредованно влияющих на функционирование гипоталамо-гипофизарно-яичниковой оси при эндоток-семии.

Как известно, для, женского организма характерен циклический характер смены преобладающего полового гормона [Костючек Д.Ф. с соавт., 2006]. Сходные гормональные колебания у грызунов описываются как эст-рус (преобладание ФСГ и эстрогенов) и диэструс. При отсутствии наступления беременности и формировании неудовлетворенной доминанты размножения формируется ациклический мультиэструс, в котором обычно пребывают все экспериментальные животные в изолированных половых группах при проведении опытов [Серов В.Н., Кан Н.И., 2004; Fernandes G.A. et al., 2002]. Обнаруженное на ранних сроках эксперимента снижение эстрального фона, сопровождающееся напряжением и компенсаторным подъемом прогестерона, к 60-м сут эксперимента сменялось потерей связей периферических гормонов с регулирующей гипоталамо-гипофизарной системой. Проявлением нарушения впутриосевых взаимоотношений явилось прогрессивное снижение уровня эстрогенов и более монотонное падение прогестерона, несмотря на стабильную концентрацию ФСГ па протяжении всего хронического ЭТ. Полученные нами, данные пе противоречат литературным сведениям, согласно которым бактериальный ЛПС оказывает прямое разрушающее действие на эс тральный цикл непосредственно па территории яичника. Авторы склоняются к мысли, что ГГГ ось является крайне чувствительным звеном при эндогенной интоксикации, и, в свою очередь ее изменения на поздних стадиях активно модулируют общий итог воздействия бактериального ЛПС в организме [Karsch F.J. с соавт., 2002J.

Развитие яичек находится под влияние множества факторов, включая физические параметры, питательные вещества, экстрацеллюлярпые матричные компоненты, мембранные факторы между соседними клетками и многие другие. В дополнение к развитию и дифферепцировке - исключительно важным этапам эмбриогенеза - сигнальные молекулы вовлечены в процессы поддержания целостности тканей гопад, их клеточного обновления и локальных механизмов контроля межклеточных взаимодействий [Князькин И.В. с соавт., 2007]. Так, определяется высокая экспрессия сома-тогропин-рилизинг гормона (STHRTI), иммунореактивного гипофизарпого пептида, активирующего аденилатциклазу (РАСАР), гонадотропин-рилизинг гормон (GnRH), обнаруженный в семенных извитых канальцах и клетках Сертоли крысы. Аргинин-вазопрессин (AVP) и рецепторы к нему выявлены в яичках человека и большинства млекопитающих: ипгпбирует синтез гонадотропинов в тестикулярных клетках и контролирует тссгику-лярпый кровоток. Кроме этого обнаружены вещество Р (SP), нейропептид Y (NPY), ингибин (INIT) и активип (ACT), названные так в связи с эффектами, оказываемыми на синтез и высвобождение ФСГ. Обнаруженные факторы местной регуляции, ио-видимому, обеспечивают защиту и обусловливают меньшее повреждение семенников ЭТС при хроническом ЭТ, по сравнению с другими органами эндокринной системы. Основными изменениями, зарегистрированными, нами при хронической эндогенной интоксикации, является уменьшение делящихся сперматогоний и зрелых сперматозоидов, на фоне сохранившегося сперматогенного эпителия.

Яичник является периферической железой оси гипоталамо-гипофизарпо-гонадной оси, в связи с этим на его территории разворачиваются основные межклеточные взаимодействия по формированию полового гормонального дисбаланса при хронической интоксикации. Реализация процессов трансформации органа под действием ЭТС затрагивает как яйцеклетки, клетки гранулезы, теки, так и стромальные элементы - фибробласты, сосудистую сеть, мопоцитарное представительство [Ветров В.В., 2001; Курьянова Н.Н., Сердюков А.Г., 2002; Айгадулова С.В. с соавт., 2007; Логвинов С.В. с соавт., 2007; Andonegui G. et al., 2002]. Морфологические изменения яичников на разных сроках эндотоксикоза могут быть признаны субстратом гормонального дисбаланса, который мы выявили у этих животных при ИФА периферической крови. Наличие на всех сроках достаточно представительного пула эстроген — продуцирующих клеток и фазовые изменения численности прогестерон — продуцирующих эндокриноцитов соответствовали как характеру гормонального профиля, так и местным последствиям гормонального дисбаланса в виде нарушений созревания и естественной инволюции фолликулов, активизации заместительной стромальпой пролиферации. Таким образом, склерокистозная трансформация представляет собой естественный исход патологического ремоделирования фолликула, происходящего на фоне дисбаланса половых гормонов, в свою очередь, морфологические изменения яичников являются субстратом гормонального дисбаланса.

В результате многолетних поисковых исследований И.Г. Акмаеву с соавт. (2003) удалось экспериментально доказать существование нисходящего гипогаламо-инсулярного пути, который берет начало в нейронах PV гипоталамуса, переключается синаптически на нейроны дорсального ядра вагуса в продолговатом мозге и по вагусу достигает панкреатических островков. В результате дальнейших исследований было установлено, что по этому пути к (З-клеткам панкреатических островков приходят стимулирующие влияния. Между тем в одной из популяций нейронов PV ядра, участвующих в формировании паравентрикуло-инсулярпого пути, секретируется KJ1, который но нортальпым сосудам достигает гипофиза и индуцирует секрецию АКТГ и ГК. Эти гормоны поступают в панкреатические островки по гуморальному пути и оказывают тормозящее влияние на выделение инсулина. Такого рода двойной контроль — явление обычное в регуляции эндокринных функций, в связи с вышеизложенным мы сочли возможным соче-танное изучение взаимозависимости содержания центрального гормона — АКТГ и периферического гормона, секретируемого (3-клеткам папкреатических островков поджелудочной железы — инсулина. Установленное прогрессивное снижение уровней АКТГ и инсулина по мере нарастания длительности хронической эндогенной интоксикации, свидетельствовало об утрате контроля со стороны центрального звена и о вовлеченности пара-вентрикуло-вагусного пути в патологический процесс.

Исследование структурно-функциональных изменений эндокриноцитов поджелудочпой железы при действии ЭТС, показало, что процессы деструкции сочетались с процессами регенерации: развивался апоптоз инсу-линобразующих (3-клсток, изменяется соотношение между последними; находящимися в состоянии покоя и функциональной активности. Отчетливо выраженные изменения в эпдокриноцитах сопровождались перестройкой ультрамикроскопичсского строения В-эндокрииоцитов, уменьшением количества ипсулярпых островков, значительное снижение числа ацино-инсулярных клеток с В-гранулами. В то же время обнаружены полиморфные Р-клсгки, с различиой ультраструктурпой организацией, в том. числе и в состоянии повышенной секреторной активности и дегрануляции, что в совокупности с гистологической картиной позволяет отнести это наблюдение к разряду фактов, указывающих на мозаичность поражения поджелудочной железы при хроническом ЭТ. Полученные данные не противоречат имею- , щимся в литературе сведениям, согласно которым описано появление в поджелудочной железе новообразованных островков при различных видах экспериментальной и клинической патологии [Иванова В.Ф., Пузырев А.А., 2006; Francini F. et al., 2001; Abe N. at al., 2002]. Роль ацинарного эпителия в цитогенезе эндокриноцитов нашла подтверждение и в выявлении в цитоплазме как экзо- , так и эндокриноцитов пептида тирозин-тирозина (PYY) [Urchurch В.Н. et al.,1994|. Именно он, согласно современным представлениям отражает общность происхождения клеток с внешней и внутренней секреции железы из единой стволовой клетки. При этом генез новых эндокринных клеток зависит от направленности действия повреждающего фактора на определенные клетки панкреатических островков [Пузырев Л.А. с соавт., 2003; Federici F. et al., 2001]. Однако, независимо от используемой модели, на первый план выступали сосудистые нарушения и склеротические изменения островкового аппарата поджелудочной железы, усиливающиеся по мере увеличения сроков эндогенной интоксикации.

Таким образом, нами установлено, что длительная эндогенная интоксикация приводит к развитию гормональной дизрегуляции; которая характеризуется изменениями уровня гормонов в периферической' крови и разобщением внутриосевых горизонтальных и вертикальных связей. С морфологических позиций, необходимо подчеркнуть стереотипность событий, происходящих в органах эндокринной системы. На протяжении всего хронического ЭТ, параллельно нарастанию выраженное га хронической эндогенной интоксикации и повреждению паренхимы печени и почек в эндокринных органах, происходит уменьшение количества функционально-активных эндокриноцитов. Его характеристика может быть описана па 30-е сут преобладанием явлений раздражения, стимуляцией и крайним истощением отдельных эндокриноцитов и дистрофии клеток при сохранении общей структуры желез. В дальнейшем прогрессирующие повреждения реализуются в зональной атрофии эндокриноцитов. Атрофические процессы в эндокриноцитах и их нарастающий численный дефицит в результате апоп-тической гибели играют ключевую роль в формировании эндокрииопатий при хроническом ЭТ. В то же время па самых поздних стадиях ЭТ присутствуют эидокриноциты в состоянии гиперстимуляции и, предположительно, гиперфункции.

Для определения функциональной активности эндокриноцитов и распределения их на классы был использован метод радиальной морфометрии. В зависимости от изменения тинкториальпых свойств от центра к периферии клетки были получены несколько типов кривых, соответствующих различной секреторной активности изучаемых эндокриноцитов, что позволило разделить их на нормально секретирующие, эндокриноциты в состоянии гипсрсекреции, гипосекреции и истощенные.

Каскад молекулярно-клеточных событий, индуцируемый в эндокри-ноцитах эндогенными токсическими соединениями, быстро приводит в изменением тонкой структуры и архитектоники клеток, что отчетливо идентифицируется па ультрамикроскопическом уровне. Ведущими электронно-микроскопическими критериями-эндокринопатии на ранних этапах хронического ЭТ являются изменения на уровне внутриклеточных синтетических процессов и характеризуются расширением цистерн эидоплазматической сети, увеличением» количества секреторных везикул и лизосом. В эндокри-поцитах отмечается общая нестабильность митохондриальных мембран, сопровождающаяся увеличением размера митохондрий, просветлением их матрикса и фрагментацией крист. К концу эксперимента выявляется-де-грануляция эидоплазматической сети и значительное уменьшение лизосом, что свидетельствует об истощении секреторного процесса. Некоторые особенности ультрамикроскопической- картины были выявлены при изучении фолликулярных эндокриноцитов щитовидной железы. Максимальные изменения были зарегистрированы в ЭПР, тотальное расширение цистерн, деформация и уменьшение электронной плотности которого свидетельствовало о повреждение синтетического* аппарата эндокриноцитов под действием эндогенных токсических соединений. Аналогичные изменения цистерн ЭПР описаны в фолликулярных эндокриноцитах ЩЖ белых мышей, возникающих при воздействии препарата циклофосфаиа, что было расценено авторами как нарушение синтеза тиреоглобулина или его транспорта в просвет фолликула [ЮкинаГ.ТО. с соавт., 2004].

В результате проведенных исследований установлено, что при длительной эндогенной интоксикации происходит парушение.синтеза тиреоид-ных гормонов, заключающееся в усиление синтетической функции ЭГГР на фоне выраженного снижения количества секреторных везикул.

По-видимому, выявленные нарушения возникают не на уровне начального синтеза тиреоглобулина, а в процессе его транспортировки в аппарат Гольджи и непосредственно в нем, при формировании конечного тиреоглобулина.

Сравнительный анализ характера эидокринопатии при ЭТ у самцов и самок позволил нам выявить ряд половых особенностей этого процесса.

Выраженность эндогенной интоксикации и тяжесть повреждения внутренних органов, по нашему мнению, оказываются постоянно более выраженными у самцов. Уровень кортизола и АКТГ в большей степени также повышаются у самцов при наличии примерно сходных морфологических изменений в надпочечниках. Уровень периферических тирсоидпых гормонов у самок был выше, чем у самцов па всех сроках эксперимента, при этом сосудистые нарушения и выраженность микрофолликулярной трансформации у них также были отчетливее. Степень нарушений центральных гормонов гонадной оси у самцов была выше, в сравнении с самками. Степень повреждения ипсулярного аппарата и нарушений уровня инсулина у самцов были менее выраженными.

Сопоставление данных гистологического, морфометрического и ультраструктурного исследования фолликулярных эндокриноцитов у крыс с хроническим ЭТ свидетельствовали о наличии нарушения секреторного процесса, и мозаичности повреждения, что проявлялось чередованием участков с повышенной функциональной активностью и фрагментов с явлениями истощеиия.

Элиминация и атрофия эндокриноцитов сопровождаются явлениями нарастающей стромальной пролиферации, развивающейся в паренхиме железы. Данное явление носит явный компенсаторный характер и является результатом цитокиновой агрессии в отношении паренхимы эндокринных органов. При этом пролиферация соединительной ткани возмещает не только убыль паренхимы, но и имеет определенное местно-стабилизирующее значение для оставшихся активных эндокриноцитов. Сосудистые нарушения имеют явно неспецифический характер и вызваны как цитокиновой агрессией, так и первичной природой эндогенной интоксикации. Данный механизм можно рассматривать как первичный для ряда дисметаболических, токсических и гипоксических повреждений эндокриноцитов.

Сформировавшаяся полиглапдуляриая. эндокрииопатия приводит к появлению в кровеносном русле токсических метаболитов, которые оказывают вторичное повреждающее действие на органы-мишени и органы эндокринной системы (рис. 59).

Таким образом, не оставляет сомнений тот факт, что формирование хронического эндотоксикоза, как и всех длительно прогрессирующих синдромов, происходит в условиях и при участии нейроиммунноэндокринной дизрегуляции.

Переходя к вопросу о механизмах- повреждения органов эндокринной системы, следует сказать, что мы старались выделить наиболее значимые и типовые процессы, присущие большинству.

Говоря о роли NO-зависимой эндотелиальной дисфункции в механизме сосудистых реакций, морфологически выраженных в виде иеривасу-лярного отека, полнокровия капилляров, очагов кровоизлияния, увеличения ОД соединительной ткани, которые выявлены при хроническом ЭТ во всех изученных эндокринных органах, необходимо подчеркнуть ее двойственное действие. С одной стороны, оксид азота является стимулятором фибропла-стических процессов, способствует прогрессировапию сгромалыюй пролиферации- и активно участвует в капиллярогенезе. С другой стороны, избыточное содержание оксида азота приводит к активации перскиспого окисления липидов, вследствие этого образуется ряд токсических соединений, в том числе при взаимодействие с супероксид-радикалами - перокси-нитрит, который является проапоптическим фактором. метаболиты повреждение

Рис. 59. Схема развития эндокринной дизрегуляции. Динамика структурных преобразований в органах эндокринной системы при хроническом эндотоксикозе.

Фрагменты поврежденного эндотелия совпадали с участками скопления иммунопозитивных клеток против эндотелиальной нитроксидсинтазы на территории всех изученных органов эндокринной системы. Обнаруженное увеличение экспрессии эндотелиальной нитроксидсинтазы в местах повышенной стромальной пролиферации, является дополнительным свидетельством апоп-тичсской гибели эдокрииоцитов и компенсаторном замещении функциональной паренхимы соединительной тканыо.

Таким образом, NO-зависимая эндотелиальпая дисфункция является универсальным и ведущим компонентом в развитии патологических изменений в паренхиме эндокринных органов при хроническом ЭТ. Экспрессия NOS-3 была максимально выраженной в надпочечниках и гонадах, меньшее количество иммунопозитивных клеток против эндотелиальной нитроксидсинтазы определялось в инсулярном аппарате поджелудочной железы и гипофиза. Наименьшее скопление иммунополозитивных клеток против NOS-3 зарегистрировано нами в щитовидной железе.

В последнее время развивается идея.о прямом эффекте ФНО-а на эндокринный гипоталамус, т.е. о первичной активации адреналовой оси па уровне гипоталамуса, а также па всех уровнях се регуляции [Beishuizen A., Thijs L.G., 2003].

Логично было предположить, что при воздействии ФНО-а сопряжено с ГГАС активируются и ГТТС, и ГТТС. Проведенные исследования показали, что одним из ведущих механизмом устранения-эндокриноцитов при хроническом эндотоксикозе является ФНО-зависимый апоптоз. В базофильных адено-цитах гипофиза, щитовидной железе и яичниках на всех сроках эксперимента выявлена гиперэкспрессия TRAIL (Аро 2L) лигапда DR3 DR5, запускающего механизм апоптоза, и нарастающая по мере увеличения длительности хронической ЭИ.

Его обнаружение па клетках и в цитоплазме означало появление чувствительности клетки к основному эндогенному посреднику ЛПС при ЭТ - фактору некроза, опухоли. Параллельно увеличивалось количество иммунопозитивных клеток против каспазы-3, которая является ключевым маркером апоптоза. С момента преобразования проскаспазы-3 и активации каспазы-3, процесс гибели клетки становится необратимым [Еропкин М.Ю., Еропкина Е.М., 2003; Zucco F., 1996; Van Delft M.F., Huang D.C., 2006].

В связи с этим, не оставляло сомнений, что ведущим механизмом гибели эндокриноцитов при хроническом1 ЭТ в аденогипофизе, ЩЖ и яичниках являлся именно TRAIL-зависимый апоптоз. В тоже время в надпочечниках, семенниках и островках поджелудочной железы количество иммунопозитивиых клеток против основных маркеров TRAIL-зависимого апоптоза не имело достоверных различий с контрольной группой. Мы полагаем, что в различных органах эндокринной системы количество рецепторов TRAIL, располагающихся на цитоплазматической мембране, вариабельно. Больше того, в динамике ЭТ оно может изменяться неоднозначно и даже разнонаправленным образом. Вследствие этого, несмотря на идентичность воздействия ЭТС по длительности и концентрации, мы наблюдали различия в механизмах гибели эндокриноцитов.

Корреляционный и многофакторпый регрессионный анализ, проведенный в главе 4, окончательно убедил пас в том, что сам по себе гормональный дисбаланс неотделим от развития ЭТ, большинство изменений во внутренних органах находятся во взаимосвязи с аналогичными (неспецифическими) и более специфичными (собственно эндокринными) изменения в железах внутренней секреции. Существуют устойчивые группы связей между пулами показателей; характеризующими отношения систем «эндогенная интоксикация -гормональный дисбаланс», «эндогенная интоксикация — морфология желез внутренней секреции» и «гормональный дисбаланс — морфология желез внутренней секреции». При этом появление и усиление групп родственных по смыслу корреляций оценивалось как появление связи между анализируемыми процессами, а исчезновение — как разобщение регуляторпой связи (разрушение эндокринной оси).

На основании математического анализа были моделированы зависимости, позволяющие в определенной мере прогнозировать характер морфологических изменений в эндокринных органах по известной выраженности эндогенной интоксикации и гормональному спектру. Подобные формулы после их определенной экстраполяции и подбора соответствующих коэффициентов могут быть взяты в основу прогностических алгоритмов в клинической практике.

На наш взгляд, более важным результатом математического анализа стало выделение особенностей гормонального спектра, позволяющего распределить основные изменения их концентраций в соответствии с их потенциальным влиянием на выраженность эндогенной интоксикации и тяжесть опосредованной ей повреждения внутренних органов. Подобный анализ с выделением вегетативных структур, в большей степени участвующих в повреждении и тех, которые связаны с развитием защитных, компенсаторных реакций был успешно проведен В.И. Фроловым в своей докторской диссертации (2004). Это позволило автору, в частности установить, что ряд ядер гипоталамуса (в том числе, и исследованное нами PV) обладают двойным эффектом, то есть влияют как па развитие повреждение, так и на защитные реакции при эндогенной интоксикации. Раздельный анализ, проведенный в отношении печени, почек, сердца и легких, позволил В.Б.Писареву и В.И.Фролову (2004) указать, что сенсорное ядро блуждающего нерва, ретикулярные ядра продолговатого мозга и парасимпатические ганглии внутренних органов при ЭТ в большей степени связаны с повреждающими эффектами, а моторное ядро и двойное ядро блуждающего нерва, нейроны боковых рогов спинного мозга и ганглии симпатической цепочки — с элементами защиты от повреждения и компенсации.

В нашем исследовании аналогичное построение привело нас к мысли, что дефицит глюкокортикоидов, инсулина, эстрогенов и относительный избыток периферических тиреоидпых гормонов оказывает максимально неблагоприятное действие на внутренние органы и способствует развитию оргапопа-тологии при хроническом ЭТ.

На сегодняшний день практически сложена и зарегистрирована в доказательных базах основная стратегия лечения больных SIRS и СПОИ токсического генеза. Она включает в себя: максимальное устранение или ограничение первопричины процесса; респираторную и гемодипамическую поддержку; протекцию витальных функций (симптоматическую, посиндромную терапию органных нарушений, профилактику осложнений) [Ерюхин И.А., с соавт., 2002; Миронов П.И., Руднов В.А., 1999; Jarrar D., 1999; Rivers Е. et al., 2001; Humenczyk-Zybala M. et al., 2001 ].

Б.Р. Гельфанд с соавг. (2006) на основании принципов доказательности (в том числе и па основании анализа Cochrane database) рекомендуют включать в лечение таких пациентов умеренные дозы кортикостероидов и инсулин как часть пугритивной метаболической поддержки.

Глюкокортикоиды также позиционируют как препараты песелективной ангицитокиновой терапии, поскольку эти гормоны могут ингибировать генерацию окиси азота, повышать чувствительность адрепергических рецепторов и уменьшать синтез провоспалительных цитокинов [Савельев B.C. и соавт., 2004; Warren B.L. et al., 2001; Briegel J. et al., 2004]. В насюящее время исходят из представлений о неэффективности высоких доз гндрокортизопа, а назначают «малые» дозы порядка 100-250 мг гидрокортизона [Cooper M.S., Stewart P.M., 2003; Manglik S. et al., 200; Balk R.A., 2003]. Установлено, что длительное применение кортикостероидов предотвращает формирование пневмосклероза в поздние стадии СПОН у больных с тяжелым сепсисом [Meduri G.U. al., 1998].

Поэтому, с учетом уже имеющегося в арсенале клиницистов успешного опыта применения глюкокортикоидов и инсулина, мы остановились па проверке эффективности еще двух принципиально возможных воздействий: экзогенного восполнения дефицита эстрогенов и ограничения активности периферических тиреоидных гормонов.

В наших опытах как применение тиреостатиков, так и эстрогена, действительно ослабляло выраженность эндогенной интоксикации, гормонального дисбаланса и тяжесть повреждения печени и почек. Сравнительный анализ выявил ряд сходств и различий в положительном действии указанных препаратов.

И тиреостатик тиамазол, и эстрадиол уменьшали к концу опыта прирост-содержания маркеров эндогенной интоксикации до значений, примерно на 2025% превышающих показатели .у крыс контрольных групп (без лечения - превышение значений на 70-145%). При этом эстрогены оказывали несколько больший эффект в отношении сдерживания прироста эндогенной интоксикации. Полной защиты печени и почек от действия эндогенных токсических соединений, естественно, не происходило, по было достигнуто некоторая стабилизация ОД гепатоцитов и ограничение прироста O/I, соединительной ткани (более выраженное при применении эстрогенов). Протективпый эффект в отношении почек был более заметен для тиреостатической терапии, и заключался в уменьшении количества склерозированных клубочков и ОД соединительной ткани.

При оценке гормонального дисбаланса установлено, что коррекция па-рушений адреналовой оси в большей степени наблюдалась при введении эстрогенов. Уровень АКТГ и коргизола в данном опыте превышали контрольные значения в пределах 10% от соответствующих показателей в контрольной группе (без лечения — превышение в разы). Параллельно этому практически нивелировались патологические изменения в корковом и мозговом веществе надпочечников. Применение тиреостатиков корректировало нарушения адреналовой оси в меньшей степени, причем в надпочечниках сохранялось характерные для ЭТ сосудистые реакции, снижение ОД пучковой зоны коркового вещее тва и уменьшение ОД мозгового вещества на фоне увеличения ОД клу-бочковой зоны коркового вещества.

При применении тиреостатиков, как и ожидалось, была достигнуто практически полная коррекция гормонального дисбаланса тиреоидпой оси. Это сопровождалось перестройкой ЩЖ по макрофолликулярному типу к 90-м сут процесса. Эстрогены вызывали меньшее снижение уровня периферических тиреоидпых гормонов, а в ткани ЩЖ выявлялся микрофолликулярпый тип строения, соответствующий гипертиреозу и ярче сохранялись сосудистые проявления ЭТ. Оба вида коррекции полностью устраняли мозаичный тип поражения железы, свойственный хроническому ЭТ.

В отношении гонадной оси эффекты тиреостатической терапии и введения эстрогенов были неоднородны. Тиамазол в большей степени корректировал повышенный при ЭТ уровень пролактинемии, а эстрадиол - нормализовал в большей степени дисбаланс ФСГ и ЛГ. При этом в адсногипофизе при введении эстрадиола ОД ацидофильных адспоцитов оказывалась больше, чем при использовании тиреостатика.

Независимо от модели в печени крыс при хроническом ЭТ развивался хронический гепатит и гепатофиброз, в почках выявлена дисметаболической нефропатия, формировался нефросклероз.

Обобщая все полученные данные, предлагаем механизм вовлечения эндокринных органов, печени и почек в патологический процесс с формированием следующего порочного круга: токсические агенты —> дистрофические изменения в паренхиматозных органах —> образование ЭТС и их выход в системный кровоток —> воздействие па центральное звено эндокринной регуляции (морфологические изменения в PV ядре гипоталамуса и адепогипофизе) —> нарушение осевых взаимоотношений в гипоталамо-гипофизарном комплексе, адреиаловой, тиреоидной, гонадной осях —> морфофункциональные изменения в конечных звеньях осей (периферических эндокринных железах): потеря центральной регуляции и цитолитическое повреждение эндокриноцитов ЭТС —> замена функционирующей паренхимы эндокринных желез па соединительную ткань —> компенсаторная автономная гиперфункция оставшихся-эндокриноцитов —> вторичное повреждение оргапов-мишеней (печени, почек) патологическими метаболитами, —> усиление образования ЭТС при уменьшении их де-токсикации и элиминации.

Итак, формирование органопатологии при хронической эндогенной интоксикации происходит при непосредственном участие эндокринной системы, а гормональный дисбаланс, на фоне которого развивается- патологический процесс, во многом определяет прогноз хронического эндотоксикоза. Использование тиреостатической терапии и экзогенное восполнение дефицита эстрогена, в равной мере, как и известное из литературы применение инсулина и глюкокортикоидов, способны уменьшать тяжесть развивающейся эидокринопатии и ЭТ в целом.