Автореферат и диссертация по медицине (14.03.03) на тему:Патогенетическое обоснование включения дигидрокверцетина в комплексное лечение больных раком молочной железы

На правахрукописи

00460

МАЙКОПАРОВА Санда Челечбиевна

192

ПАТОГЕНЕТИЧЕСКОЕ ОБОСНОВАНИЕ ВКЛЮЧЕНИЯ ДИГИДРОКВЕРЦЕТИНА В КОМПЛЕКСНОЕ ЛЕЧЕНИЕ БОЛЬНЫХ РАКОМ МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ

14.03.03 - патологическая физиология 14.01.12 - онкология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

11 3 МАЙ-2010

Нижний Новгород 2010

004601192

Работа выполнена в Нижегородской государственной медицинской академии

Научные руководители:

доктор биологических наук, профессор Клавдия Николаевна Конторщикова доктор медицинских наук, профессор Анна Валерьевна Алясова

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор Татьяна Евгеньевна Потемина (Нижегородская государственная медицинская академия, г. Н. Новгород) доктор медицинских наук, профессор Владимир Васильевич Ершов (Институт ФСБ РФ г. Н. Новгород)

Ведущая организация: ГУ «Научно-исследовательский институт

общей патологии и патофизиологии РАМН» г. Москва

Защита состоится 20 мая 2010 г. в_на заседании диссертационного

совета Д 208.061.03 Нижегородской государственной медицинской академии (603005, г. Н. Новгород, пл. Минина и Пожарского, д. 10/1).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Нижегородской государственной медицинской академии (г. Н. Новгород, ул. Медицинская, д. За).

]

Автореферат разослан « к^/уи^-^-2010 года.

Ученый секретарь диссертационного совета доктор медицинских наук,

профессор Е.А. Дурново

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Рак молочной железы занимает первое место среди злокачественных новообразований у женщин. В большинстве развитых стран мира имеет место тенденция к неуклонному росту заболеваемости и смертности женщин от рака молочной железы (Трапезников Н.Н., Аксель Е.М., 1998; Дарская Е.А. и др., 1999; Лактионов К.П., Беришвили А.И., 2006; Семиглазов В.В., Тулузов Э.Э., 2009; Rampaul R.S. et al., 2001; Coronelía J.A. et al., 2002). В структуре заболеваемости злокачественными новообразованиями населения России рак молочной железы (РМЖ) составляет 19,3% (Поддубная И.В., 2009). Абсолютное число больных с впервые установленным диагнозом заболевания в течение последних 10 лет увеличивается в среднем на 3,9% ежегодно, а заболеваемость возросла на 26,3% (Летягин В.П. и др., 2008). Около 30% больных от всех зарегистрированных случаев рака молочной железы погибают от основного заболевания в течение 10 лет.

Частота встречаемости рака молочной железы, его многообразие, длительная и часто стойкая нетрудоспособность больных, трудности в лечении данной патологии определяют актуальность, медико-социальную значимость заболевания, обусловливают необходимость поиска новых дополнительных методов его лечения и профилактики.

В настоящее время важная роль в возникновении и развитии злокачественных новообразований отводится нарушениям функционирования иммунной системы и активации свободно-радикального окисления. Показано (Бурлако-ва Е.Б., Пальмина Н.П., 1990; Тюкавкина Н.А. и др., 1997; Сандыбаев М.Н., 2001; Алясова А.В. и др., 2006; Kandaswami С. et al., 2005), что специфические блокаторы липопероксидации - антиоксиданты - оказывают защитное действие при проведении лучевой и лекарственной терапии, улучшают показатели иммунитета и позволяют получить положительный клинический эффект у онкологических больных. Однако широкое внедрение в практику лечения рака молочной железы антиоксидантных препаратов сдерживается недостаточностью клинических данных о закономерностях протекания процессов перекисного окисления липидов при опухолевом росте и состоянии эндогенной антиоксидантной системы защиты на этапах развития, лечения и исхода заболевания, небольшим выбором антиоксидантов, разрешенных к применению в клинике, отсутствием сведений об особенностях влияния различных препаратов, обладающих антиок-сидантным эффектом, на свободно-радикальные процессы, иммунологический статус больных раком молочной железы на этапах химио-лучевого лечения.

К природным антиоксидантам, обладающим наибольшей активностью, относятся биофлавоноиды. Одним из представителей этой группы является препарат «Биоскан С», созданный на основе дигидрокверцетина. В литературе имеются только единичные публикации, посвященные применению дигидрокверцетина в онкологической практике. Для обоснования включения дигидрокверцетина в качестве дополнительного компонента противоопухолевой

терапии в состав комплексного и комбинированного лечения пациенток, страдающих раком молочной железы, представляется целесообразным изучить его антипролиферативное действие на клетки различных видов бластом.

Цель исследования: выявить влияние дигидрокверцетина на показатели про- и антиоксидантной системы и иммунологического статуса больных раком молочной железы в процессе комплексного лечения.

Задачи исследования:

1. Выявить особенности про- и антиоксидантного статуса больных раком молочной железы в процессе комплексного лечения.

2. Охарактеризовать состояние иммунной системы больных и изучить его взаимосвязь с показателями про- и антиоксидантного звена гомеостаза.

3. Проанализировать влияние дигидрокверцетина на показатели перекис-ного окисления липидов и антиоксидантной системы защиты в процессе комплексного лечения больных.

4. Выявить влияние дигидрокверцетина на показатели иммунной системы больных.

5. Оценить действие дигидрокверцетина на опухолевые клетки в культуре.

Научная новизна. Впервые патогенетически обосновано применение

биофлавоноидотерапии в комплексном лечении больных раком молочной железы.

Выявлено влияние дигидрокверцетина на динамику показателей антиоксидантной системы защиты и перекисного окисления липидов, а также показатели иммунного статуса больных раком молочной железы в процессе комплексного лечения.

Показано возрастание детоксикационных возможностей организма больных на фоне применения дигидрокверцетина.

Практическая значимость работы. Оценка состояния про- и антиоксидантного звена гомеостаза и иммунной системы больных в процессе комплексного лечения позволяет своевременно выявить метаболические и иммунологические нарушения, возникающие под влиянием цитостатиков, и назначить корригирующую терапию.

Включение дигидрокверцетина в состав комплексного лечения больных раком молочной железы способствует улучшению переносимости ими ци-тостатических препаратов и уменьшению частоты и выраженности побочных эффектов полихимиотерапии.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Антиоксидантные свойства дигидрокверцитина у больных раком молочной железы проявляются снижением показателей свободно-радикального окисления и уровней продуктов липопероксидации.

2. Применение дигидрокверцитина у больных раком молочной железы сопровождается выраженным иммуномодулирующим эффектом.

3. Дигидрокверцетин проявляет активность в отношении злокачественных опухолевых клеток.

Внедрение результатов исследования. Материалы диссертации используются в учебном процессе на кафедре онкологии ФПКВ и кафедре клинической лабораторной диагностики ФПКВ Нижегородской государственной медицинской академии.

Апробация диссертации. Основные положения диссертации доложены на X Российском онкологическом конгрессе (Москва, 2006), научно-практической конференции «Инновационные технологии в медицине» (Саранск, 2006), научно-практической конференции «Нейронауки и здоровье человека» (Н. Новгород, 2007), заседаниях Нижегородского общества рентгенологов и онкологов в 2007,2008 гг.

Апробация диссертации проводилась на межкафедралыюм заседании кафедр патологической физиологии, патологической анатомии, нормальной анатомии, гистологии, биологии, онкологии, клинической лабораторной диагностики ФПКВ и проблемной комиссии «Регенерация, адаптация, функциональная морфология, гомеостаз» ГОУ ВПО НижГМА (протокол № 6 от 11 ноября 2009 года).

Личный вклад автора заключается в самостоятельном клиническом обследовании и лечении больных раком молочной железы, вошедших в исследование, обработке экспериментального материала по работе с культурой клеток, данных клинических, инструментальных, биохимических, иммунологических исследований. Вся полученная информация проанализирована, систематизирована и обработана статистическими методами.

Публикации по теме диссертации. По теме диссертации опубликовано 6 печатных работ, в том числе 1 информационно-методическое письмо, 1 статья в журнале, рецензируемом ВАК РФ.

Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, 2 глав собственных наблюдений и результатов исследований, заключения, выводов, практических рекомендаций, указателя литературы (139 отечественных и 68 иностранных авторов). Текст диссертации изложен на 116 страницах машинописного текста, содержит 14 таблиц и 12 рисунков.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материалы л методы исследования

Проведенное исследование выполнено на кафедре клинической лабораторной диагностики факультета повышения квалификации врачей (зав. кафедрой - проф. К.Н. Конторщикова) Нижегородской государственной медицинской академии на базе Нижегородского областного диагностического центра и на кафедре онкологии факультета повышения квалификации врачей (зав. кафедрой - проф. И.Г. Терентьев) Нижегородской государственной медицинской академии на базе Нижегородского областного онкологического диспансера, а также на базе онкологического диспансера г. Майкопа (Республика Адыгея).

В основу работы положены результаты обследования 110 больных раком молочной железы (РМЖ) в возрасте 35-68 лет (медиана - 51,6 года) и 30 клинически здоровых женщин, сопоставимых по возрасту с обследованными больными. Диагноз РМЖ подтвержден данными патологоанатомического анализа послеоперационного материала. На основании клинико-инструментального обследования пациенток и с учетом постхирургической классификации РМЖ у 10 больных (9,1%) установлена I, у 44 (40,0%) - II, у 56 (50,9%) - III стадия заболевания. Среди обследованных женщин 42 (38,2%) впервые поступили в стационар, остальные (68 человек - 61,8%) ранее получали противоопухолевое лечение. В адъювантном режиме полихимиотерапию (ПХТ) получали 64 женщины (58,2%), в неоадъювантном и в последующем в адъювантном режимах - 46 (41,8%). В качестве основной применялась схема CAF (89 человек

- 80,9%), у 6 пациенток (5,4%) в связи с сопутствующей патологией использована схема CMF. В остальных наблюдениях (15 больных - 13,6%) - таксановые режимы. В динамике обследовано 38 больных (34,5%).

В соответствии с «Гистологической классификацией опухолей молочной железы» ВОЗ (1981) у всех пациенток новообразование характеризовалось инфильтрирующим характером роста. Преобладал (86 больных - 78,2%) инфильтрирующий протоковый рак. В большинстве случаев опухоль характеризовалась низкой степенью гистологической дифференцировки (65 женщин

- 59,1%) и III степенью злокачественности (70 человек - 63,6%). Метастатическое поражение периферических лимфатических узлов (ЛУ) исходно было выявлено у 82 больных (74,5%).

Обследование больных включало клинические методы (100%) и инструментальные: маммографию (86,4%) и/или ультразвуковое исследование (УЗИ) молочных желез (20,9%), пункционную биопсию опухоли молочной железы и/или ЛУ (100,0%), рентгенографию грудной клетки (100,0%), компьютерную томографию (36,4%) и/или УЗИ органов брюшной полости (100,0%), УЗИ органов малого таза (63,6%). Всем больным проводилось гинекологическое обследование. По показаниям выполнялось рентгенологическое исследование желудочно-кишечного тракта (13,6%).

Экспериментальная часть работы была выполнена на клеточных линиях культуры клеток Hela (карцинома шейки матки) и клеток печени человека Chang liver, полученных из филиала ФГУП НПО «Микроген» МЗ РФ «Нижегородское предприятие по производству бактериальных препаратов ИмБио», имеющего лицензию на производство культуры клеток (сертификат производства № 001420.02-73024). При выращивании клеток использовалась среда 199. Для обеих клеточных линий посевная доза составляла 50-100 клеток в 1 мл, кратность рассева 1:4 — 1:10. Снятие клеток осуществлялось с помощью раствора Версена (4/5) с 0,25% трипсином, частота пассирования составляла 5-7 суток. Подсчет количества клеток проводили в суспензии с использованием камеры Горяева при увеличении 150x250. В первый день эксперимента клетки перевивали на стекла, помещенные в пробирки с питательной сре-

дой, и инкубировали при температуре 37° С в течение 48 часов. На третий день эксперимента навески дигидрокверцетина (ДКВ) по 150, 50, 20, 10, 5 и 2,5 мг растворяли в 10 мл раствора (5 мл 0,9% NaCl + 5 мл питательной среды), помещали в стерильные флаконы и растворяли на водяной бане в течение 5 минут. В каждую пробирку добавляли 2 мл полученного раствора, содержащего ДКВ, так, чтобы стекла погружались в жидкость полностью. Контролем служили клеточные линии, находящиеся в 2 мл смеси, состоящей из физиологического раствора (0,9% NaCl) и питательной среды в соотношении 1:1. Результаты оценивались на пятый день эксперимента. Препараты фиксировали раствором эозин-метиленового синего по Май-Грюнвальду и окрашивали азур-эозиновым красителем по Романовскому в течение 3 минут. Далее стекла промывали холодной проточной водой, высушивали на воздухе и просматривали в микроскоп. В каждой серии количество анализируемых образцов равнялось 10.

Оценка показателей антиоксидантной системы защиты и перекисного окисления липидов гомогената из культуры опухолевых и здоровых клеток, а также в плазме крови больных осуществлялась на кафедре клинической лабораторной диагностики факультета повышения квалификации врачей (заведующая кафедрой - проф. К.Н. Конторщикова) Нижегородской государственной медицинской академии. Для проведения исследований использовался биохе-милюминометр БХЛ-06, разработанный Нижегородским научно-исследовательским центром «Биофармавтоматика», сопряженный с компьютером IBM PC/AT в диалоговом режиме. Анализировались следующие показатели хеми-люминограммы:

- tg-2a - показатель, характеризующий скорость спада процессов свободно-радикального окисления в плазме;

- индекс Imax/ОЛ, где Imax (имп/сек) - максимальная интенсивность свечения, показывающая потенциальную способность биологического объекта к перекисному окислению липидов;

- индекс S/ОЛ, где S - светосумма (за 30 секунд), отражающая содержание в плазме радикалов, соответствующих обрыву цепи свободно-радикального окисления, обратно пропорциональна антиоксидантной активности пробы (Владимиров Ю.А., Арчеков А.И., 1972), ОЛ - содержание общих липидов в плазме крови.

Определение количества ОЛ осуществлялось по методу V. Chromy (1975) с использованием диагностических наборов фирмы «Lachema». Экстракцию липидов из анализируемого материала проводили методом J. Folch et al. (1957). Концентрацию общих липидов выражали в г/л.

Содержание первичных продуктов липопероксидации (диеновых коньюга-тов - ДК, триеновых коньюгатов - ТК) оценивалось методом ультрафиолетовой спектроскопии на спектрофотометре СФ-26 фирмы «ЛОМО» (г. Санкт-Петербург) по методу И.А. Волчегорского (1989) при длине волны 233 нм и 275 нм, соответственно. Основания Шиффа (ОШ) - конечные продукты ПОЛ - измеря-

лись с помощью серийного отечественного прибора «Флуориметр РФ» (Москва). Применялся флуориметрический метод D.L. Fletcher et al. (1973) при длине волны возбуждения 365 нм и длине волны эмиссии 420 нм. Концентрацию ДК и ТК выражали в единицах оптической плотности относительно количества общих липидов, ОШ - в относительных единицах на мг общих липидов. Всего выполнено 80 исследований на гомогенатах из культуры опухолевых клеток и 220 анализов плазмы крови больных.

Биохимический анализ крови включал определение глюкозы, мочевины, общего билирубина, ферментативной активности сыворотки крови (аланин-аминотрансферазы, аспартатаминотрансферазы, у-глютамилтрансферазы). Исследования выполнялись в лаборатории Нижегородской областной клинической больницы и в лаборатории онкологического диспансера г. Майкопа (Республика Адыгея). Использовались унифицированные лабораторные методы. Всего выполнено 220 исследований.

Иммунологические исследования были выполнены на кафедре молекулярной биологии и иммунологии (заведующий - д.б.н., профессор В.В. Новиков) Нижегородского государственного университета им. Лобачевского, а также в отделении лабораторной диагностики Нижегородской областной клинической больницы (главный врач - P.M. Зайцев), в лаборатории онкологического диспансера г. Майкопа (Республика Адыгея).

Работа с моноклональными антителами выполнялась в соответствии с методическими рекомендациями А.Ю. Барышникова (2001). Для иммунофеноти-пирования клеток периферической крови использовалась стандартная панель моноклональных антител: ИКО-31; ИКО-бО; ИКО-86; ИКО-92; ИКО-Ю5; ИКО-116; ИКО-160. Все моноклональные антитела были отечественного производства. Всего выполнено 220 исследований.

Кроме того, проводились следующие тесты:

1. оценка содержания иммуноглобулинов методом простой иммунодиффу-зии по Манчини;

2. определение количества циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК) в соответствии с методическими рекомендациями H.A. Константиновой (1985). Использовался тест по Хашкову, основанный на способности полиэтиленгли-коля с относительной молекулярной массой равной 6000 а.е.м. при низких концентрациях (не более 5,0%) прицепитировать ЦИК.

Больные, участвовавшие в исследовании, были разделены на три группы: 1 группа - 35 больных РМЖ, получавших адъювантную ПХТ и дигидрокверце-тин; 2 группа - 55 женщин, страдающих РМЖ, получавших только адъювантную ПХТ; 3 группа - 20 больных, получавших адъювантную ПХТ и препарат-плацебо.

Группы были сопоставимы по возрасту, сопутствующей патологии, стадии заболевания и размеру первичного очага.

Больные подписывали 2 экземпляра информированного согласия, одобренного местным этическим комитетом, на участие в исследовании. Степень ток-

сических побочных эффектов химиотерапии после курса лечения оценивалась по шкале токсичности CTC-NCIC (Переводчикова Н.И., 2000).

Препарат «Биоскан С», использовавшийся для проведения антиоксидант-ной терапии, изготовлен ООО «Росбиопром» (г. Саров), № государственной регистрации 000141.Р.643.08.98 от 27.08.98, из высокоактивного природного полифенольного соединения - дигидрокверцетина и обладает антиокси-дантной, иммуномодулирующей и Р-витаминной активностью (Конторщи-кова К.Н. и др., 1999). Препарат был расфасован в виде порошка во флаконы по 50 мл и перед употреблением разводился в 50 мл физиологического раствора. Согласно рекомендациям предприятия-изготовителя, «Биоскан С» применялся по 15 мл раствора 2 раза в день per os в течение 14 дней. В качестве препарата-плацебо использовалась декстроза, расфасованная в виде порошка во флаконы по 50 мл. Перед употреблением препарат-плацебо разводился в 50 мл физиологического раствора и использовался по той же схеме. Результаты проведения терапии оценивались по 3-балльной шкале (хороший терапевтический эффект, удовлетворительный терапевтический эффект, неудовлетворительный терапевтический эффект), которая была разработана по количественно-качественным критериям состояния больных при выписке из стационара. Кроме того, больные заполняли опросники по оценке качества жизни: Ноттингамский расширенный индекс активности повседневной жизни (Nouri F., Lincoln N., 1987; Wade D.T. 1992), батарея тестов физических возможностей и функциональных ограничений РАНД (Stewart A. etal, 1978; WadeD.T., 1992).

Статистическая обработка полученных результатов осуществлялась с применением пакета программ STATISTICA 6.0.

Результаты собственных исследований и их обсуждение

Анализ показателей биохимического анализа крови выявил, что у больных раком молочной железы наблюдается недостоверное повышение активности антиоксидантной системы защиты (АСЗ), не способное компенсировать в полной мере возросший уровень перекисного окисления липидов (ПОЛ). По сравнению с показателями здоровых лиц величина tg-2cc увеличивалась на 17,6% (р>0,05), а коэффициент S/ОЛ возрастал (р<0,005) на 87,4%, индекс Imax/ОЛ - на 91,9% (р<0,005). Одновременно увеличивались (р<0,005) уровни молекулярных продуктов ПОЛ: уровень ДК - на 81,9%; ТК - на 86,9%, ТК - на 80,5% (рис. 1,2).

Полученные данные свидетельствовали о развитии в организме пациенток состояния пероксидного стресса.

Изменения активности антиоксидантной системы защиты и перекисного окисления липидов наблюдались, начиная с ранних стадий опухолевого процесса, и нарастали к III стадии заболевания. На фоне снижения величины показателя tg-2oe наблюдалось статистически значимое увеличение индексов Imax/ОЛ и S/ОЛ, а также уровней диеновых конъюгатов, триеновых конъюга-тов и оснований Шиффа, превышавшее при III стадии заболевания не только

Показатели

биохемилюминисценции, ед.

16,6*

* - различия достоверны по сравнению с контрольной группой (р<0,005)

0,2

1д-2а Э/Ол 1тах/Ол 1 группа - больные (п=110)

2,1

0,4

ЖШШШ

1д-2а Э/Ол 1тах/0л Группы 2 группа - здоровые (п=30)

Рис. I. Показатели биохемилюминисценции .у больных и здоровых женщин

15 -| 12 -9 -6 -

Молекулярные продукты

12,7*

* - различия достоверны по сравнению с контрольной группой (р<0,005)

I I

ДК ТК ОШ ДК ТК ОШ Группы

1 группа - больные (п=110) 2 группа - здоровые (п=30)

Рис. 2. Содержание молекулярных продуктов перекисного окисления липидов у больных и здоровых женщин

значения контрольной группы (р<0,005), но и показатели пациенток с 1-11 стадиями опухолевого процесса. Полученные данные свидетельствовали о том, что на ранних стадиях рака молочной железы интенсификация процессов ли-пипероксидации протекает под частичным контролем антиоксидантной системы защиты. Однако развитие местнораспространенного опухолевого процесса или изменений в лимфоузлах, соответствующих N2, при небольших размерах первичного очага сопровождается значительным напряжением компенсаторных возможностей антиоксидантной системы защиты и развитием состояния пероксидного стресса.

Изменения про-, антиоксидантного звена гомеостаза были взаимосвязаны с типом гистологического строения опухоли и степенью ее злокачественности.

Развитие слизистого рака молочной железы сопровождалось наиболее значимым нарушением процессов образования и элиминации перекисей. Неодинаковый характер изменений показателей хемилюминограммы и содержания молекулярных продуктов липопероксидации, возможно, связан с различной степенью нарушений процессов синтеза и утилизации липидов и их фракций в зависимости от гистологического типа строения опухоли. В литературе (Хышиктуев Б.С., 1993) отмечена возможность существования не только прямой, но и обратной зависимости между морфологическим субстратом заболевания и трансформацией антиоксидантного статуса пациентов.

У больных карциномой III степени злокачественности величина tg-2oc и уровни молекулярных продуктов перекисного окисления липидов были достоверно ниже, чем у больных опухолями II степени злокачественности. Появление более агрессивно протекающей опухоли сопровождалось преимущественным угнетением функционирования антиоксидантной системы защиты на фоне физиологически целесообразного снижения уровня биоэнергетических процессов, направленного на поддержание жизнедеятельности организма в условиях окислительного стресса.

Применение многомерного факторного анализа позволило выделить три латентных независимых друг от друга фактора, объясняющих связи между показателями ПОЛ и АСЗ у больных РМЖ. В состав первого фактора вошли признаки, определяющие интенсивность процессов свободно-радикального окисления: уровень ДК, ОШ, индексы Imax/ОЛ и S/ОЛ, количество общих липидов. Второй фактор составила величина tg-2a, характеризующая скорость спада процессов свободно-радикального окисления в плазме крови пациенток. В качестве третьего фактора была выделена концентрация триеновых конъ-югатов. Этот показатель является косвенным признаком дефицита в организме полиненасыщенных жирных кислот, в частности, арахидоновой (С20:4), эйко-зопентаеновой (С22:5) и эйкозогексаеновой (С22:6), необходимых для построения клеточных мембран нормальных и малигнизированных клеток.

Развитие рака молочной железы сопровождалось изменениями структуры популяции мононуклеарных клеток периферической крови: повышением (р<0,005) уровней CD16\ CD71+, CD25+клеток и снижением (р<0,005) содержания CD4+ ЛФ и иммунорегуляторного индекса (ИРИ) по сравнению с группой здоровых женщин (рис. 3). Прослеживались тенденции к увеличению числа CD8+, CD95+ клеток и снижению уровня CD50+ клеток. Представленные данные свидетельствовали о том, что иммунная система больных раком молочной железы достаточно сохранна и, несмотря на депрессию некоторых ее компонентов, в целом носит черты активации. Однако наряду с активацией компонентов иммунной системы, осуществляющих противоопухолевую защиту, имеет место повышение уровня компонентов, способствующих развитию опухоли. Проведение в этих условиях иммуномодулирующей терапии будет

способствовать не только улучшению качества жизни больных, но и позволит повысить эффективность специфического лечения.

Исследование иммунного статуса в зависимости от стадии заболевания подтвердило изменения иммунного ответа, выявленные в общей группе больных, а именно достоверное снижение по сравнению с контролем числа СЭ4+ ЛФ и ИРИ (р<0,005) на фоне повышения уровней С016+, СБ7Г, СБ25+ клеток (р<0,005). У больных I стадией РМЖ также имело место возрастание относительно группы здоровых лиц уровня СЭ8+ ЛФ (р<0,005).

Иммунокомпетентность больных была взаимосвязана с гистологическим типом строения опухоли и степенью ее злокачественности. У больных с опухолями инфильтрирующего протокового типа, кроме общих признаков, характеризующих заболевание, дополнительно наблюдалось достоверное увеличение относительно группы контроля уровня СБ8+ ЛФ и статистически значимое снижение числа СЭ50+ клеток. В случаях инфильтрирующей дольковой карциномы дополнительно имело место достоверное возрастание по сравнению с группой здоровых лиц количества С08+ ЛФ. У пациенток с комбинированным типом РМЖ дополнительно наблюдалось достоверное снижение по сравнению с контролем числа СБ50+ клеток на фоне значимого увеличения количества С095+ клеток. Иммунограммы больных с гистологически подтвержденным слизистым вариантом РМЖ отличались от соответствующих значений здоровых лиц только по общим признакам, характеризующим заболевание. Возможно, особенности иммунного ответа больных являются одним из факторов, определяющих отличия клинического течения разных гистологических вариантов заболевания.

Повышение степени злокачественности новообразования сопровождалось нарастанием дисфункции системы иммунитета. Возможно, подобные различия иммунного ответа связаны с участием самой опухоли в процессах созревания иммунокомпетентных клеток и в изменениях на их поверхностях уровня экспрессии мембранных белков.

Отмечено, что направленность и интенсивность иммунологических реакций определяются изменениями липидного бислоя мембран лимфоцитов (Зен-ков Н.К. и др., 2001) и зависят от интенсивности процессов липопероксидации. Между уровнем СБ50+ клеток и показателями 1шах/ОЛ и Б/ОЛ выявлена умеренная положительная корреляция (г=+0,43; р=0,002 и г=+0,41; р=0,002 соответственно).

Наличие опухоли изменяет существующие взаимосвязи между иммунологической реактивностью организма и метаболическими процессами. Создается порочный круг, способствующий прогредиентности течения заболевания. Нормализация или улучшение деятельности хотя бы одного из нарушенных звеньев будут способствовать восстановлению функционирования других механизмов гомеостаза. С этой целью предпочтительно использовать вещества, обладающие одновременно способностью корригировать антиоксидантную систему защиты, иммуномодулирующим, детоксикационным и антистрессор-ным действием, но не усиливающие токсичность цитостатиков и не имеющие

Относительное содержание антигенположительных клеток, %

—I—--—I—--—I—-г |—I—-ииимя—,—-1"v"" —I—-ышиаам—,

CD4" CD8' CD16* CD25* CD71* CD95* CD50*

Рис. 3. Относительное содержание антигенположительных клеток у больных раком молочной железы и здоровых

¡11 - больные раком молочной железы (п НО) Д - контрольная группа (п=30)

* - различия между группами статистически достоверны (р<0,005).

собственных побочных эффектов. Этим требованиям во многом удовлетворяет препарат «Биоскан С», созданный на основе дигидрокверцетина. Предпосылкой для его применения в комплексном лечении больных раком молочной железы явились результаты экспериментальных исследований (Суколин-ский В.Н., 1990; Давыдова Т.В., 1998), показавшие, что введение витаминов и антиоксидантов не стимулирует рост опухолей, а напротив, может приводить к задержке развития новообразований.

Учитывая вышеизложенное, представлялось целесообразным использовать препарат «Биоскан С» на фоне полихимиотерапии у больных раком молочной железы, проведя предварительно изучение его активности в отношении опухолевых клеток в экспериментальных условиях.

Данные микроскопического исследования клеток из культуры Hela показали, что активность дигидрокверцетина начинала проявляться при самой низкой концентрации препарата, а именно 2,5 мг (табл. 1). При этом в клетках выявлялись размытые ядра, начало кариолизиса, неизмененные клетки сохранялись в 17% случаев.

При увеличении навески препарата до 20 мг количество неизмененных клеток снижалось до 2%, а число клеток с размытым контуром и началом кариолизиса составило 53%. Представленные данные свидетельствовали о том, что добавление в питательную среду, окружающую опухолевые клетки, дигидрокверцетина способствовало развитию деструктивных изменений, приводящих

в конечном итоге к их гибели. Клетки печени человека Chang liver оставались без изменений при использовании всех доз ДКВ.

Таблица 1

Микроскопические изменения в опухолевых клетках при воздействии на них различных концентращш дигидрокверцетина

Микроскопические признаки Концентрация дигидрокверцетина

2,5 мг 5 мг 10 мг 20 мг

1 2 3 4

Голые ядра 5% 20% 17% 11%

Клетки без ядра, цитоплазма и клеточная мембрана сохранены 21% 23% 15% 15%

Контуры ядра размыты, начался кариолизис 32%* 38,5%* 15%* 53%

Гиперхромная окраска, клеточные структуры не различаются 2%* _ 7,5% 15%

Контуры ядра нарушены или оно фраг-ментировано, цитоплазма фрагменти-рована, клеточная оболочка разрушена 33%* 14% 50,5%* 11%

Неизмененные клетки 17%* 15%* 10%* 2%

* - различия достоверны по сравнению навеской 4 (20 мг).

Применение дигидрокверцетина в физиологическом растворе способствовало достоверной активации реакций липопероксидации в клетках культуры опухолей по сравнению с соответствующими показателями, полученными в опухолевых клетках контрольной серии того же срока жизни. При этом прослеживался дозозависимый эффект действия препарата. Так, при навеске дигидрокверцетина 5 мг величина индекса 1шах/ОЛ, характеризующего активность свободно-радикальных реакций, увеличилась более чем в 3 раза (р<0,05); при использовании навески 10 мг и 20 мг - в 5 раз (р<0,05) по сравнению со значением данного показателя в контрольной группе. Одновременно возрастал уровень первичных продуктов липопероксидации - диеновых конъюгатов, что свидетельствовало об активации начальных процессов перекисного окисления липидов (табл. 2). Увеличение индекса Б/ОЛ указывало на снижение активности антиоксидантной системы защиты в опухолевых клетках. Последнее явилось причиной активации процессов липопероксидации и, возможно, способствовало запуску апоптотических реакций, что, в конечном итоге, приводило к гибели клеток.

Таблица 2

Показатели перекнспого окисления липидов и антиоксидантной системы защиты в опухолевых клетках контрольных и опытных серий

Серии Показатели

1ё-2а 1шах/ОЛ в/ол дк тк ош

Клетки печени, 20 мг 0,55±0,002 0,61±0,003 3,12±0,07 0,14±0,002 0,05±0,001 1,65±0,0б

Контроль 0,83±0,004 0,26±0,015 2,74±0,19 0,10±0,002 0,02±0,0012 4,0±0,75

Опыт 1 5 мг 0,50±0,003** 0,90±0,006*,** 3,95±0,21 V* 0,10±0,003 0,03±0,0013 2,50±0,63***

Опыт 2 10 мг 0,71±0,004** 1,49±0,007*,** 4,91 ±0,3 2*,** 0,12±0,002 0,05±0,0012*** 2,62±0,54*

Опыт 3 20 мг 0,67±0,10** 1,46±0,006*,** 4,34±0,51*,** 0,12±0,003 0,05±0,0011*** 2,62±0,81*

* - различия достоверны с культурой клеток печени (р<0,05);

** - различия достоверны с контрольной серией опухолевых клеток (р<0,05).

Таким образом, дигидрокверцетин продемонстрировал активность на культурах злокачественных опухолевых клеток, связанную с интенсификацией процессов липопероксидации в малигнизированных клетках. В культуре клеток печени даже при применении наиболее высокой дозы дигидрокверцетина изменений показателей антиоксидантной системы защиты и перекисного окисления липидов не отмечалось, что свидетельствовало об исходно отличающемся балансе про- и антиоксидантных систем в здоровых и злокачественных клетках.

Применение дигидрокверцетина в составе программ комплексного противоопухолевого лечения способствовало улучшению клинического состояния больных и повышало переносимость ими химиопрепаратов (табл. 3).

Таблица 3

Частота встречаемости клинической симптоматики у больных после курса цитостатнческой терапии

Симптомы Частота встречаемости Достоверность различий, р

группы больных

после применения дигидрокверцетина и химиотерапии, п= 35 после химиотерапии, п=55

Снижение аппетита 16(45,7%) 48 (87,3%)* 0,0001

Тошнота 23 (65,7%) 55 (100%)* 0,0001

Рвота 5(14,3%) 18 (32,7%)* 0,04

Изжога 10 (28,6%) 31(56,4%)* 0,005

Боли в эпигастральной области, в подреберных областях по ходу толстого кишечника 14 (40%) 36 (65,4%)* 0,01

Нарушение сердечного ритма, боли в области сердца 6(17,1%) 30 (54,5%)* 0,0001

Общая слабость 15 (42,9%) 34(61,8%)* 0,04

Потливость 12 (34,3%) 36(65,5%)* 0,002

Нарушение сна: бессонница, сонливость днем 11 (31,4%) 3 (8,5%) 19 (34,5%) 6(10,9%) 0,38 0,36

Инфекционные осложнения 2 (5,7%) 12 (21,8%)* 0,01

* - различия статистически достоверны между группой, получавшей дигидроквер-цетин, и группой сравнения, р<0,05.

Исчезали или заметно уменьшались симптомы интоксикации, повышалась работоспособность и двигательная активность, появлялось ощущение прилива энергии и сил, улучшалось настроение, появлялся интерес к окружающему. Достоверно снижалась частота появления тошноты и рвоты, реже развивались инфекционные осложнения. Клинический эффект после применения дигидро-кверцетина был зарегистрирован в 82,9% случаев. Ухудшения состояния больных, побочных эффектов и осложнений в результате применения препарата не отмечалось.

В группе, получавшей полихимиотерапию, побочное действие цитостати-ков было зарегистрировано практически у всех пациенток. Больные жаловались на слабость, снижение или отсутствие аппетита, выражали желание часть дневного времени проводить в постели, отмечали невозможность сразу после окончания лечения выполнять привычную работу по дому. По мере проведения курсов противоопухолевой терапии у пациенток, принимавших только ци-тостатики, нарастали явления симптомокомплекса усталости от химиопрепа-ратов. Больные становились вялыми, замкнутыми, жаловались на ощущение упадка сил, потерю интереса к окружающему, повышенную раздражительность. Использование препарата-плацебо не влияло существенным образом на частоту развития неблагоприятных побочных эффектов химиопрепаратов.

По данным биохемилюминесцентного анализа использование ДКВ на фоне полихимиотерапии сопровождалось тенденцией к снижению средней величины tg-2a к концу курса лечения. Однако сопоставление динамики tg-2a и концентраций молекулярных продуктов липопероксидации показало сохранение контроля антиоксидантной системы защиты над процессами свободно-радикального окисления (табл. 4). Исследование уровня молекулярных продуктов перекисного окисления липидов выявило, что концентрация диеновых конъ-

югатов уменьшалась на 37,5% (р<0,05), триеновых конъюгатов - на 42,3% (р<0,05), оснований Шиффа - на 39,0% (р<0,05). Снижения уровня начальных продуктов перекисного окисления липвдов удалось добиться у 26 человек (74,3%). Но, несмотря на корригирующее действие дигидрокверцетина на интенсивность процессов ПОЛ, сохранялись достоверные различия в показателях биохемилюминесцентного анализа и содержании молекулярных продуктов липопероксидации по сравнению с контрольной группой. По-видимому, подобные изменения связаны с прооксидантным действием химиопрепаратов, лежащим в основе реализации их цитостатической активности.

У больных, получавших только полихимиотерапию или полихимиотерапию и препарат-плацебо, наблюдалось снижение ресурсов антиоксидантной системы защиты, что в условиях инициации перекисного окисления липидов указывало на неспособность эндогенных антиоксидантов в полной мере компенсировать возросшие потребности организма.

Длительная персистенция метаболитов ПОЛ в организме пациенток оказывает многостороннее отрицательное воздействие на структуру и функцию жизненно важных органов. Нарушается эластичность, механическая прочность, изменяется проницаемость клеточных и субклеточных мембран (Конторщи-кова К.Н., 2000; Журавлев А.А., Зубкова СМ., 2008; Ве^епШ Ь. е1 а1, 1999). Происходит дезориентация ферментных систем, определенная пространственная конфигурация которых необходима для осуществления биохимических процессов, подавляется синтез ряда белков, ингибируется тканевое дыхание, наблюдается разобщение окислительного фосфорилирования, что, в свою очередь, вызывает угнетение всех видов обмена веществ.

Особенно страдает липидный обмен, что может привести к жировой дистрофии печени, сопровождающейся уменьшением содержания гликогена. Высокий уровень продуктов ПОЛ способствует ригидности мембран красных клеток и является причиной разрушения эритроцитов, повышает гемокоагуляцию и ингибирует фибринолитическую активность крови (Дубинина Е.Е., 2001; МаЩоуаш й. е( а!., 2002). По-видимому, инициация процессов ПОЛ участвует в реализации большинства токсических побочных эффектов цитостатических препаратов. В этих условиях использование дигидрокверцетина позволило поддержать достаточно высокий уровень функционирования эндогенных ан-тиоксидантных механизмов и усилить детоксикационные возможности организма больных, что клинически проявлялось снижением частоты встречаемости и уменьшением степени выраженности побочных эффектов цитостатиков.

Анализ показателей биохимического анализа крови по окончании терапии выявил, что использование дигидрокверцетина способствовало достоверному снижению активности печеночных ферментов: трансаминаз и у-глютамат-трансферазы. У пациенток 2 и 3 групп по окончании лечения прослеживались тенденции к увеличению активности аспартат- и аланинаминотрансфераз и значимое повышение активности у-глютамилтрансферазы (на 18,2% и 19,9%

Таблица 4

Динамика показателей перекисного окисления липпдов у больных после курса лечения

Группы больных Показатели

tg-2a, ед в/ОЛ, ед 1тах/ОЛ, ед общие липиды, г/л диеновые конъюгаты, ед. опт.пл/ мг. общ.лип триеновые конъюгаты, ед. опт. пл/ мп общ. лип основания Шиффа, отн.ед/ мг. общлип

1 группа, п=35 0,52±0,11 17,81±0,85х 2,46±0,31Х 1,12±0,09х 0,64±0,05Х 0,26±0,03х 13,56±1,22х

0,46±0,06 11,25±0,46Х-1 2,05±0,26х 1,20±0,05х 0,40±0,08Х'' 0,11±0,04х 8,27±0,87Х-1

2 группа, п=55 0,51 ±0,09 16,10±0,92х 2,31±0,42Х 1,05±0,12х 0,59±0,06Х 0,23±0,05х 11,98±1,13Х* 1'2

0,35±0,12 20,47±1,02Х'* '-2 2,98±0,36х 0,94±0,08Х 0,72±0,04х* 1~2 0,26±0,02х 14,39±1,05х

3 группа, п=20 0,50±0,14 15,92±1,22х 2,28±0,28х 1,08±0,10х 0,61±0,09Х 0,21±0,04х 12,66±1,11Х

0,33±0,13 19,64±1,16Х * иг 3,02±0,34х 0,87±0,07х 0,74±0,08Х'* '-3 0,23±0,06х 15,11±1,09х* '-3

Контрольная группа, п=30 0,42±0,04 2,08±0,12 0,19±0,004 5,85±0,02 0,11±0,03 0,03±0,001 2,48±0,08

- различия статистически достоверны при сравнении показателей между группами: * - р<0,05;

- различия статистически достоверны при сравнении показателей внутри каждой группы: 1 - р<0,05;

- различия статистически достоверны при сравнении с контрольной группой: х - р<0,05.

Примечание:

над чертой приведены показатели до лечения, под чертой - после лечения.

соответственно). Подобные изменения свидетельствовали о том, что применение дигидрокверцетина в составе комплексного лечения больных оказывает детоксицирующее и гепатопротекторное действия.

У пациенток, получавших дигидрокверцетин, иммунорегуляторный индекс после курса лечения в среднем составил 1,51 и возрастал относительно его исходных значений на 23,8%. Имели место тенденции к увеличению количества CD16+ и CD50+ клеток, концентраций IgA и IgG. Статистически достоверно снижалось относительно исходного уровня число циркулирующих иммунных комплексов. После курса лечения оно было значительно ниже (р<0,05), чем в группах, получавших полихимиотерапию или полихимиотерапию и плацебо.

Изменения иммунограммы и гемограммы у больных 2 и 3 групп по окончании курса лечения оказались сходными. Наблюдалось снижение числа CD4+ лимфоцитов, уменьшение уровня иммунорегуляторного индекса, снижение количества CD 16+ клеток (рис. 4). Содержание последних у пациенток 2 и 3 групп было значительно ниже, чем у женщин, вошедших в состав 1 группы. Подобные изменения указывали на то, что наряду с лечебным эффектом имело место иммунодепрессивное действие химиопрепаратов.

Известно, что отличительной особенностью CD 16+ клеток является их способность лизировать клетки-мишени без предварительной сенсибилизации (Дранник Г.М. и др., 1994; Караулов A.B., 2002). Возможно, что повышение числа CD 16+ клеток в группе, получавшей наряду с полихимиотерапией дигидрокверцетин, свидетельствует о формировании у этих пациенток более эф-

Относительное содержание

антигенположительных клеток, %

27,9

34,4'1-3

32,3''

CD4+ CD16+ CD 25+ CD95+ CD4+ CD16+ CD25+ CD95+ CD4+ CD16+ CD25+ CD95+ 1 группа 2 группа

. Группы

3гРУппа больных

Рис. 4. Относительное содержание антигенположительных мононуклеарных клеток после курса лечения

* - различия достоверны по сравнению с исходными показателями (р<0,05);

• - различия достоверны по сравнению с 1 группой (р<0,05).

фективного иммунного ответа. Напротив, уровни CD8+, CD25+, CD95+ клеток во 2 и 3 группах после курса лечения оказались достоверно выше, чем у женщин, вошедших в состав 1 группы.

Увеличение числа клеток с достаточной для выявления моноклональны-ми антителами плотностью CD25+ рецептора возникает при пролиферации Т-лимфоцитов под действием Т-клеточного ростового фактора интерлей-кина-2 и свидетельствует об активации иммунной системы больных. Однако одновременное возрастание числа CD95+ клеток указывает на повышение готовности активированных лимфоцитов вступить в апоптоз (Барышников А.Ю., Шишкин Ю.В., 2002; Царев О.Н., 2005). Предполагается, что взаимодействие FASL, локализованного на поверхности опухолевой клетки, с FAS (CD95+) цитотоксическими Т-ЛФ и NK-клетками индуцирует апоптоз последних (Shutsta S. et al., 1998), что приводит в конечном итоге к подавлению клеточных реакций и способствует ускользанию опухоли из-под иммунного надзора. Кроме того, увеличение числа CD25+ клеток может происходить за счет регуляторных Т-ЛФ, которые обладают иммуносупрессорными функциями и способны ограничивать противоопухолевый иммунный ответ.

Прослеживались тенденции к снижению концентраций всех классов иммуноглобулинов.

У 32 больных 1 группы (91,4%) курсы полихимиотерапии были проведены своевременно, в соответствии с планом лечения и в полном объеме. Во

2 группе курсы полихимиотерапии своевременно и в полном объеме удалось провести только у 34 человек (61,8%, р<0,05 с 1 группой). В остальных случаях приходилось откладывать начало очередного курса лечения на 3-5 дней или уменьшать дозы препаратов на 20% от исходного. В 3 группе запланированное лечение удалось провести своевременно и в полном объеме только у 13 человек (65%, р<0,05 с 1 группой).

Лейкопения II-III степени была выявлена у 3 женщин (8,5%) 1 группы и достоверно чаще встречалась у больных во 2 (18 человек - 32,7%, р<0,05) и

3 группах (8 больных - 40,0%, р<0,05).

Таким образом, использование дигидрокверцетина позволило поддержать достаточно высокий уровень функционирования эндогенных антиоксидант-ных механизмов и усилить детоксикационные возможности организма больных, оказывало корригирующее воздействие на состояние иммунного статуса пациенток, что клинически проявлялось в снижении частоты встречаемости и уменьшении степени выраженности побочных токсических эффектов цитоста-тиков.

Выводы

1. Развитие рака молочной железы сопровождается недостоверным повышением активности антиоксидантной системы защиты, не способным компенсировать в полной мере возросший уровень перекисного окисления липидов.

2. У больных раком молочной железы наблюдаются значимые изменения структуры популяции мононуклеарных клеток: значительное повышение относительно группы здоровых лиц уровня СЭ16+, С071+, СЭ25+ клеток и достоверное снижение содержания СБ4+ лимфоцитов и иммунорегуляторного индекса. Интенсивность иммунологических реакций взаимосвязана с изменениями состояния про-, антиоксидантного звена гомеостаза.

3. Применение дигидрокверцетина в составе схем комплексного лечения позволяет поддерживать достаточно высокий уровень функционирования эндогенных антиоксидантных механизмов и усилить детоксикационные возможности организма больных, что клинически проявляется снижением частоты встречаемости и уменьшением степени выраженности побочных токсических эффектов цитостатиков.

4. Использование дигидрокверцетина оказывает корригирующее действие на состояние иммунного статуса пациенток, заключающееся в повышении уровня СБ 16+ клеток и иммунорегуляторного индекса и предупреждении значительного увеличения СБ25+ и СЭ95+ клеток, и способствует уменьшению иммуносупрессивного действия цитостатических препаратов, снижению частоты развития лейкопений.

5. В экспериментальных условиях дигидрокверцетин демонстрирует активность на культурах злокачественных опухолевых клеток, связанную с интенсификацией в них процессов липопероксидации.

Практические рекомендации

Оценка активности антиоксидантной системы защиты, перекисного окисления липидов и иммунного статуса больных в процессе комплексного лечения позволяет своевременно выявить метаболические и иммунологические нарушения, возникающие под влиянием цитостатиков, и назначить корригирующую терапию.

Использование дигидрокверцетина в составе комплексного лечения больных раком молочной железы способствует улучшению переносимости ими цитостатических препаратов, повышению детоксикационных возможностей организма, улучшению функционирования эндогенных антиоксидантных механизмов, коррекции дисфункций иммунной системы, что клинически проявляется снижением частоты и выраженности побочных эффектов полихимиотерапии.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Майкопарова, С. Ч. Современные методы диагностики и лечения рака молочной железы в интернете / СЛ. Майкопарова // Ниж. мед. журнал. - 2006. -№ 7.-С. 211-213.

2. Майкопарова, С. Ч. Оценка антиоксидантной активности препарата «Био-скан С» / СЛ. Майкопарова, A.B. Алясова, К.Н. Конторщикова // Материалы научно-практической конференции: Инновационные технологии в медицине. -Саранск, 2006.-С. 118.

3. Майкопарова, С.Ч. Применение дигидрокверцетина у больных раком молочной железы / С.Ч. Майкопарова, A.B. Алясова, К.Н. Конторщикова // Материалы X Российского онкологического конгресса. - Москва, 2006. -С. 166-167.

4. Майкопарова, С. Ч. Влияние биофлавоноидов на показатели вегетативной регуляции больных раком молочной железы / СЛ. Майкопарова, A.B. Алясова, М.Ю. Кирсанов // Материалы научно-практической конференции: Нейронауки и здоровье человека. - Н. Новгород, 2007. - С. 97-98.

5. Майкопарова, С.Ч. Антиоксиданты в комплексном лечении больных раком молочной железы / С.Ч. Майкопарова // Материалы научно-практической конференции: Нейронауки и здоровье человека. - Н. Новгород, 2007. -С. 98-100.

6. Майкопарова, С. Ч. Биофлавоноидотерапия в комплексном лечении рака молочной железы: Информационно-методическое письмо. - Н. Новгород, 2009. -17 с.

Список сокращений

АСЗ - антиоксидантная система защиты

ДК - диеновые конъюгаты

дкв - дигидрокверцетин

МКА — моноклональные антитела

ол - общие липиды

ош - основания Шиффа

ПОЛ - перекисное окисление липидов

пхт - полихимиотерапия

РМЖ — рак молочной железы

тк - триеновые конъюгаты

Imax - максимальная интенсивность свечения

S - светосумма

МАЙКОПАРОВА Сайда Челечбиевна

ПАТОГЕНЕТИЧЕСКОЕ ОБОСНОВАНИЕ ВКЛЮЧЕНИЯ ДИГИДРОКВЕРЦЕТИНА В КОМПЛЕКСНОЕ ЛЕЧЕНИЕ БОЛЬНЫХ РАКОМ МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ

АВТОРЕФЕРАТ

Сдано в набор 12.04.2010 г. Подписано в печать 14.04.2010 г. Формат 60x84/16. Печать офсетная. Усл. печ. л. 1,2. Тираж 100 экз. Заказ № 107. ООО «Качество», 385000, г. Майкоп, ул. Крестьянская, 221/2, тел.: (8772) 57-09-92.