Автореферат и диссертация по медицине (14.03.03) на тему:Патогенетическое обоснование применения электрохимически-активированных растворов в комплексном лечении эрозивно-язвенных поражений слизистой оболочки полости рта у больных красным плоским лишаем (кли

На правах рукописи

Мрикаева Оксана Масалбековна

ПАТОГЕНЕТИЧЕСКОЕ ОБОСНОВАНИЕ ПРИМЕНЕНИЯ ЭЛЕКТРОХИМИЧЕСКИ-АКТИВИРОВАННЫХ РАСТВОРОВ В КОМПЛЕКСНОМ ЛЕЧЕНИИ ЭРОЗИВНО-ЯЗВЕННЫХ ПОРАЖЕНИЙ СЛИЗИСТОЙ ОБОЛОЧКИ ПОЛОСТИ РТА У БОЛЬНЫХ КРАСНЫМ

ПЛОСКИМ ЛИШАЕМ (клинико-экспериментальное исследование)

14.03.03 - Патологическая физиология 14.01.14 - Стоматология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

2 ! '' 1 П -7ГМ I " ' ■■■ ■-! ¿и! }

Владикавказ - 2014

00554УЭО.

005549537

Работа выполнена в государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Северо-Осетинская государственная медицинская академия» Министерства здравоохранения Российской Федерации и федеральном государственном бюджетном учреждении науки «Институт биомедицинских исследований» Владикавказского научного центра Российской академии наук и Правительства Республики Северная Осетия - Алания

Научные руководители:

ДЗУГКОЕВА Фира Соломоновна - доктор медицинских наук, профессор ЗОЛОЕВ Родион Владимирович - доктор медицинских наук, доцент Официальные оппоненты:

КОЖИН Александр Алексеевич - доктор медицинских наук, профессор, заслуженный деятель науки РФ, лауреат премии Правительства РФ, профессор кафедры биофизики и биокибернетики федерального государственного автономного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Южный федеральный университет»

ДМИТРИЕВА Лидия Александровна - доктор медицинских наук, профессор, заслуженный врач РФ, профессор кафедры пародонтологии государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Московский государственный медико-стоматологического университет им. А.И. Евдокимова» Министерства здравоохранения Российской Федерации

Ведущая организация: федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Российский университет дружбы народов».

Защита состоится 17 июня 2014 года в 13.00 часов на заседании диссертационного совета Д 208.095.01 на базе государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Северо-Осетинская государственная медицинская академия» Министерства здравоохранения Российской Федерации (362019, РСО-Алания, г. Владикавказ, ул. Пушкинская, 40)

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Северо-Осетинская государственная медицинская академия» Министерства здравоохранения России (362019, г. Владикавказ, ул. Пушкинская, 40) и сайте www.sogma.ru

Автореферат разослан 15 мая 2014 г.

Ученый секретарь диссертационного совета ---^ У

доктор медицинских наук, профессор жЗ^ И.Г. Джиоев

Общая характеристика работы Актуальность исследования. К настоящему времени накоплены значительные клинические и экспериментальные данные литературы, свидетельствующие о том, что в генезе воспалительных проявлений слизистой оболочки полости рта, в том числе при эрозивно-язвенной форме красного плоского лишая (КПЛ), патогенетическую роль играют процессы перекисного окисления липидов (ПОЛ) и снижение активности ферментов антиоксидантной защиты (АОЗ) клеток (Самойлова О.П., 2007, 2008; Тиунова Н.В., 2009; Томас П. Хэбиф., 2008; Kuwahara R.T., Skinner R.B., Rosenberg E.W., 2000). Эти изменения стационарного равновесия в системе играют роль в дезорганизации гомеостатических механизмов микроваскулярного ложа, развитии хронической гипоксии тканей пародонта, изменении их проницаемости и развитии патологической воспалительной реакции (Канканян А.П., 1998; Абасканова П. Д., 2011). Система ПОЛ - АОС находится во взаимосвязи с имуннобиологическими свойствами организма, поскольку представители неспецифической защиты - полиморфноядерные лейкоциты и моноциты способны генерировать АФК и обеспечивать «презентацию» антигена в ходе индукции иммунных специфических реакций (Дмитриева Л.А., 2001). Продукты ПОЛ обладают антигенными свойствами, запуская аутоиммунные процессы повреждения тканей. Выраженные нарушения в гуморальном и клеточном звеньях системы иммунитета у больных КПЛ отмечают Рабинович О.Ф., Ханукова Л.М., Хамидулина К.Ф., 2009; Митронин A.B.. 2011. Наряду с существующими данными литературы (Девятов В.А. и др., 2001; Бабушкин О.С., Назин В.А., 2001; Резников K.M. и др., 2006), недостаточно изученным остается вопрос об оптимизации лечения новыми современными технологиями, в частности использованием комплексной терапии с электрохимически-активированными растворами (ЭХАР).

Цель работы: показать патогенетическую роль дисбаланса в системе ПОЛ-АОЗ в формировании дистрофически-воспалительной патологии слизистой оболочки полости рта при красном плоском лишае, обосновать и разработать новые методы повышения эффективности лечения путем

з

включения электрохимически-активированных растворов в алгоритм этиопатогенетической терапии.

Задачи исследования:

1. Клинически оценить состояние слизистой оболочки полости рта, стоматологический статус у больных с эрозивно-язвенной формой красного плоского лишая слизистой оболочки полости рта до и после комплексного этиопатогенетического лечения.

2. Изучить роль сопряженных систем ПОЛ и АОС организма в патогенезе эрозивно-язвенных поражений слизистой оболочки полости рта у этой категории больных.

3. Выявить влияние комплексного лечения с электрохимически-активированными растворами на морфологические и биохимические показатели крови пациентов, страдающих эрозивно-язвенной формой красного плоского лишая слизистой оболочки полости рта. Оценить эффективность комплексного лечения на степень выраженности эрозивно-язвенных поражений слизистой оболочки полости рта.

4. Изучить влияние электрохимически-активированных растворов на активность ферментов АОС в эксперименте на интактных кроликах in vivo и in vitro.

Научная новизна

Установлена патогенетическая роль системы ПОЛ-АОЗ в развитии эрозивно-язвенных поражений слизистой оболочки полости рта у больных КПЛ. Показано участие нарушений в клеточном звене иммунитета в развитии деструктивно-воспалительной патологии полости рта. Впервые доказана эффективность комбинированного лечения с ЭХАР на клинико-лабораторные данные у больных с эрозивно-язвенной формой красного плоского лишая слизистой оболочки полости рта. На основании экспериментальных данных впервые установлено влияние ЭХАР на активность основных ферментов антиоксидантной защиты организма при введении раствора интактным кроликам in vivo и in vitro.

4

Научно-практическая значимость

Настоящая работа имеет как общефундаментальное, так и прикладное клиническое значение. Проведенные научные исследования позволили углубить наши представления о патогенезе дистрофически-воспалительного процесса слизистой оболочки полости рта у больных с эрозивно-язвенной формой красного плоского лишая в клинике, установить роль сопряженных систем ПОЛ-АОС в дестабилизации клеточных мембран. На основании полученных клинических, биохимических и экспериментальных данных разработано индивидуальное, комплексное, этиопатогенетическое лечение красного плоского лишая слизистой оболочки полости рта, включающее местное применение электрохимически-активированных растворов (анолита и католита), что способствовало улучшению клинического состояния СОПР, ускорению эпителизации элементов поражения.

Комбинированное применение традиционных фармакологических средств и ЭХАР в исследовании является дополнением к соответствующим разделам учебных курсов терапевтической стоматологии, фармакологии и патологической физиологии.

Основные положения, выносимые на защиту

1. В патогенезе эрозивно-язвенной формы красного плоского лишая играет роль дисбаланс в системе ПОЛ-АОЗ клеток. Установлено повышение концентрации вторичного продукта ПОЛ - МДА в эритроцитах и снижение активности фермента СОД, тогда как каталазы и концентрация церулоплазмина в острой фазе заболевания повышались. Одновременно отмечается снижение концентрации суммарных метаболитов оксида азота в сыворотке крови и угнетение клеточного звена иммунитета.

2. Комплексная терапия эрозивно-язвенной формы красного плоского лишая с применением электрохимически-активированных растворов вызывает угнетение интенсивности окислительного стресса: снижение концентрации МДА, повышение активности фермента СОД, снижение активности каталазы, концентрации церулоплазмина, повышение

5

концентрации суммарных метаболитов N0 и активация Т-клеточного звена иммунитета.

3. Включение анолита и католита в стандартную программу лечения эрозивно-язвенной формы красного плоского лишая позволяет, по сравнению с традиционным лечением, ускорить достижение лечебного эффекта, снизить сроки эпителизации и улучшить состояние слизистой оболочки полости рта у пациентов. Самостоятельное применение электрохимически-активированных растворов оказывает лечебное действие, близкое по эффективности к традиционному лечению.

4. В механизме эффективности комплексного лечения принимает участие окислительно-восстановительный потенциал, генерируемый электрохимически-активированными растворами и способствующий повышению активности ферментов антиокислительной системы, что установлено в модельных экспериментах на интактных кроликах in vivo и in vitro.

Личный вклад автора

Автор самостоятельно разработала методические подходы к решению поставленной цели и задач, выполнила экспериментальные и клинические исследования, провела математическую и статистическую обработку с анализом и обобщением полученных результатов. Самостоятельно и в соавторстве подготовлены и опубликованы материалы работы.

Апробация работы

Материалы диссертации докладывались на X международном конгрессе «Здоровье и образование в XXI веке» «Инновационные технологии в биологии и медицине» (Москва, 2009); Международной конференции «Высокие технологии, фундаментальные и прикладные исследования в физиологии, фармакологии и медицине» (Санкт-Петербург, 2012); III международной научно-практической конференции «Молодые ученые в решении актуальных проблем науки» (Владикавказ, 2012). Апробация диссертации проведена в ГБОУ ВПО СОГМА Минздрава России на

совместном заседании кафедр патологической физиологии, стоматологии №1, №2, №3 и отделов ИБМИ ВНЦ РАН и Правительства РСО-Алания.

Публикации по теме диссертации По теме диссертации опубликовано 8 научных работ, в том числе 2 в рецензируемых журналах, рекомендованных ВАК Министерства образования и науки Российской Федерации.

Внедрение результатов работы Результаты работы внедрены в учебный процесс на кафедрах патологической физиологии, стоматологии №3 ГБОУ ВПО СОГМА Минздрава РФ. Разработан метод применения электрохимически-активированных растворов в комплексном лечении эрозивно-язвенных поражений слизистой оболочки полости рта больных красным плоским лишаем, практические рекомендации внедрены в клиническую практику кафедр стоматологии №1 и №3 ГБОУ ВПО СОГМА Минздрава России и Республиканского кожно-венерологического диспансера г. Владикавказа.

Объем и структура диссертации Диссертация изложена на 123 страницах компьютерного текста и состоит из введения и 5-ти глав: обзора литературы, материалов и методов исследования, собственных данных - 3 главы, заключения и общих выводов, списка использованной литературы (120 источников отечественных и 62 зарубежных авторов), иллюстрирована 15 таблицами и 26 рисунками.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Материалы и методы исследования

Материал клинического исследования, анализированный в работе, составлен на результатах обследования и лечения 69 пациентов с эрозивно-язвенной формой красного плоского лишая (МКБ - 10, L 43) и 15 здоровых лиц обоих полов. Исследования выполнены на кафедре стоматологии №3 ГБОУ ВПО СОГМА Минздрава РФ, на базе Республиканского кожно-венерологического диспансера г. Владикавказ и отдела патобиохимии

7

Института биомедицинских исследований ВНЦ РАН с 2010-2013гг. Тендерные различия: женщин - 58, мужчин - 11, средний возраст больных составил 56,69±1,19 лет. Наибольшее количество пациентов (79,7 %) имели давность заболевания 1-11 лет (3,7±0,34). Включение больных в процесс лечения по новой технологии происходило с информированного согласия больных. Пациенты были распределены на следующие группы: 1. контроль (15 чел.); 2. больные КПЛ на фоне монотерапии ЭХАР (18 чел.); 3. больные КПЛ на фоне традиционного лечения (26 чел.); 4. больные КПЛ на фоне комплексной терапии (традиционное лечение и терапии ЭХАР) (25 чел.). Для оценки статуса пациентов была разработана учетная карта, в которой указывали возраст, пол больного, жалобы, давность заболевания, наличие соматических заболеваний, локализацию и площадь патологического процесса на слизистой оболочке полости рта, показатели оценки состояния пародонта и гигиены полости рта и данные биохимических исследований на момент обращения и в динамике. Клиническое состояние слизистой оболочки полости рта до и после лечения оценивали по следующим показателям: упрощенный индекс гигиены - УИГР, РМА - папиллярно-маргинально-альвеолярный индекс, SBI - индекс кровоточивости, WTS -индекс налета языка, S - площадь повреждения - планиметрия. Биохимические исследования включали: определение концентрации малонового диальдегида (МДА) в лизате эритроцитов по реакции с тиобарбитуровой кислотой (Asakawa Т., Matsushita S., 1980); активности ферментов антиокислительной системы (АОС): каталазы (Королюк М.А., Иванова Л.И., Майорова И.Г., 1988); СОД (Макаревич О.П., Голиков П.П., 1983), концентрации церулоплазмина методом Равина (Камышников B.C., 2003), суммарных метаболитов оксида азота - NOx в сыворотке крови (Метельская В.А. и др., 2004). Было проведено исследование морфологической картины периферической крови и показателей Т-клеточного звена иммунитета и фагоцитоза.

В экспериментальной части работы были использованы 16 кроликов

8

"Шиншилла" массой тела 2-2,5 кг, содержащиеся в течение всего опыта в виварии Московского государственного медико-стоматологического университета им. А.И. Евдокимова. 5 интактных кроликов служили контролем, а на 11 кроликах изучали влияние ЭХАР на активность ферментов АОС.

Результаты клинических исследований и их обсуждение Анализ материала, полученный на основании учетных карт, позволил выяснить, что возраст обследуемых больных колеблется от 30 до 72 лет. Количество пациентов, страдающих КПЛ с повреждением СОПР до года, составило 34,8% - (24 чел.), от 1 года до 5лет - 46,4% (32 чел.), от 5-10 лет -16,0 % (11 чел.), более 10 лет -2,9 % (2 чел.).

У подавляющего большинства пациентов - 65 человек (94%) в анамнезе была выявлена сопутствующая патология: заболевание желудочно-кишечного тракта, сердечно-сосудистой и нервной системы, эндокринная патология и аллергические состояния.

Жалобы на момент обращения оценивали по 3-х бальной системе. Было выявлено, что 90% больных жаловались на боли, которые их беспокоили во время приема пищи, разговора и даже в покое, 97% больных отмечали чувство жжения, 73% - шероховатость слизистой полости рта и 53% пациентов отмечали чувство стянутости слизистой оболочки полости рта. Исходный уровень гигиенического состояния полости рта пациентов во всех группах на момент обращения оценивался как неудовлетворительный, о чем свидетельствовали данные среднего статистического значения индекса УИГР во всех группах. Выявлена высокая степень распространенности признаков поражения пародонта, которая с возрастом значительно возрастала и соответствовала критерию средней степени тяжести гингивита. Наиболее высокие показатели индекса кровоточивости десневой борозды (SBI) отмечались во 2-ой группе больных, хотя в третьей и четвертой группах этот показатель также превышал допустимый уровень. Аналогичные изменения были характерны для индекса налета языка Winkel Tongue Coating - WTS. В

9

каждой группе был проведен анализ результатов планиметрии, и было установлено, что площадь поражения нарастала соответственно во второй, третьей и четвертой группах. Для выяснения патогенетического механизма эрозивно-язвенного повреждения СОПР мы определяли концентрацию МДА в эритроцитах, активность СОД, каталазы, концентрацию церулоплазмина и суммарных метаболитов оксида азота в сыворотке крови. Анализ полученных данных у всех больных до лечения показал повышение интенсивности процесса ПОЛ (табл.1). Концентрация МДА в эритроцитах увеличилась статистически достоверно (р<0,001). Активность СОД снизилась сравнительно с уровнем контроля на 53,75 % (р<0,001), активность каталазы повысилась на 79,2 %, концентрация церулоплазмина на 27,62 %. Длительно протекающий окислительный стресс и развивающийся воспалительный процесс сопровождались нарушением микроциркуляции, о чем свидетельствует в наших исследованиях снижение концентрации суммарных метаболитов оксида азота. В пользу развития воспалительного процесса свидетельствуют гематологические изменения, а именно: увеличение процентного содержания в крови палочкоядерных форм нейтрофилов на фоне лейкоцитоза. Воспалительный процесс слизистой оболочки полости рта сопровождался изменениями в клеточном звене иммунитета, который проявлял себя как в количественном, так и в качественном дисбалансе (табл.1). До лечения у больных с эрозивно-язвенной формой КПЛ отмечено понижение процентного содержания Т-лимфоцитов - общих, О-лимфоцитов, популяций Т-лимфоцитов (СО-З), Т-хелперов (СБ-4), Т-супрессоров (СЭ-8) и повышение В-лимфоцитов периферической крови. Последние, пролиферируя, могут образовывать клон плазматических клеток, способных продуцировать иммуноглобулины, вызывающие реакцию сенсибилизации организма. О повышенной реактивности организма свидетельствовали данные повышения содержания эозинофилов в периферической крови. Выявлялись признаки вторичного

ю

иммунодефицита с нарушением всего Т-клеточного звена иммунитета, выполняющего основные иммунорегулирующие функции.

Таким образом, у больных красным плоским лишаем эрозивно-язвенные повреждения слизистой оболочки полости рта сопровождались развитием воспалительного процесса. Этому способствует угнетение клеточного звена иммунитета: дефицит Т-общих, Т-хелперов, Т-супрессоров и повышение В-лимфоцитов (табл.3). В патогенезе этих повреждений принимает участие нарушение в системе перекисное окисление липидов -антиокислительная защита. Продукты ПОЛ вызывают дестабилизацию липидного матрикса мембраны эпителиоцитов слизистой оболочки полости рта, повышенную проницаемость сосудов, что и способствует развитию воспаления слизистой полости рта и образованию эрозий.

После проведенных клинико-лабораторных исследований и постановки диагноза пациенты были обучены навыкам гигиены полости рта и языка, им проводили профессиональную гигиену. Для антисептической обработки полости рта у пациентов второй и четвертой групп использовали электрохимически-активированные растворы, в третьей группе использовали мирамистин. Во всех группах больных общее лечение было традиционным -седативная, антигистаминная, иммунокорригирующая и витаминотерапия.

Лечение эрозивно-язвенных поражений слизистой полости рта в обследуемых группах отличалось. Так, во второй группе после обезболивания очагов поражения проводили их изоляцию от слюны, очищение эрозивной поверхности с помощью увлажненной анолитом салфетки, с последующим наложением аппликации анолита нейтрального на 20-30 минут. Для улучшения биоцидной активности раствор нагревался до +40°С. Также пациенту в закрытых стеклянных емкостях на дом выдавался раствор АН для полоскания полости рта (3-4 раза в день по 2-3 мин.). На 7 день в алгоритм лечения был введен раствор католита, который применялся свежеприготовленным, так как лечебные свойства раствор сохраняет в течение суток. Таким образом, аппликации АН чередовали с

11

аппликациями КН по 20-30 мин. Во избежание нейтрализации действия растворов между аппликациями выдерживали интервал времени (10-15 мин.). В 3-ей группе пациентам на фоне общего лечения местно назначали антисептическую обработку раствором мирамистина и аппликации на 15-20 мин 0,5% преднизолоновой мазью, масляным раствором витамина А (ретинол ацетат 3,4%), в основной группе местная терапия включала традиционное лечение, идентичное третьей группе, с включением в комплекс электрохимически-активированных растворов (АН, КН) по схеме, применяемой во второй группе.

Обследование больных и регистрация показателей проводили на 7, 14 день и через месяц с момента обращения. Пациенты были информированы о необходимости тщательного соблюдения назначений врача по уходу за полостью рта для закрепления клинического эффекта.

Анализируя жалобы, предъявляемые пациентами, во всех группах было выявлено, что с каждым посещением наблюдалась тенденция к снижению показателей симптоматики во всех трех группах больных, о чем свидетельствовали данные клинического обследования. На 2-3 неделе лечения было отмечено прогрессивное повышение эффективности местного применения ЭХАР в полости рта больных основной группы, что подтвердилось достоверным снижением показателей данных симптомов.

Регулярный контроль за состоянием пациентов позволил зарегистрировать динамику эпителизации эрозивно-язвенных поражений. По окончании курса лечения были выявлены различные сроки эпителизации, преимущество было за комплексным лечением. Так, в 4 группе через месяц наблюдали значительное ускорение процессов заживления, что выражалось в уменьшении размеров эрозивных дефектов слизистой оболочки по сравнению со 2 и 3 группами (табл.2). В результате сравнительного анализа было выявлено, что площадь повреждения в основной группе уменьшилась в 2,8 раза, во второй и третьей группах в -1,4 и 1,8 раза соответственно.

На фоне традиционного лечения достоверно снизилась концентрация

12

МДА в эритроцитах (р<0,001), но осталась повышенной сравнительно с контролем (табл.1). Повысилась и активность СОД по сравнению с уровнем до лечения (р<0,001). В противоположность этому активность каталазы и концентрация церулоплазмина достоверно снизились (р<0,001).

Монотерапия с электрохимически-активированными растворами эффективно подавила интенсивность ПОЛ, снижалась концентрация МДА, повышалась активность СОД (р<0,001), тогда как активность каталазы и концентрация церулоплазмина снижались. При сравнительном анализе более значительные результаты понижения концентрации МДА были получены в основной группе на фоне комплексной терапии, что составило 36 %.

Что касается АОС, то результаты свидетельствуют о повышении активности СОД (р<0,001) на 14,24 % относительно данных, полученных на фоне традиционного лечения, и данных терапии только ЭХАР - на 29,62 %. Активность каталазы и концентрация ЦП снизились более значительно при сравнении с уровнем на фоне традиционного лечения, и это составило 9,41 % и 2,53 % соответственно, а при терапии ЭХАР - 13,52 % и 7,76 %.

Со стороны морфологической картины периферической крови на фоне лечения выявлены следующие позитивные изменения: процентное содержание палочкоядерных форм лейкоцитов значительно снизилось на фоне комплексной терапии сравнительно с исходным показателем и традиционной терапией у больных КПЛ.

Уменьшилось процентное содержание полиморфноядерных лейкоцитов на фоне комбинированного лечения в 4 раза, тогда как на фоне традиционной терапии - в 2 раза. Содержание агранулоцитов - моноцитов, лимфоцитов также снизилось и на фоне комбинированного лечения достоверно не отличалось от уровня нормы. Что касается Т-клеточного звена, то анализ данных демонстрирует повышение Т-лимфоцитов общих, Т-лимфоцитов активных, Т-хелперов (СО-4), Т-супрессоров (СЭ-8) и снижение В-лимфоцитов. Одновременно происходит угнетение реакции фагоцитоза по данным процента фагоцитоза и индекса фагоцитоза.

13

Таблица №1

Изменение биохимических показателей крови у больных красным плоским лишаем

группы кол-во МДА, нмоль/мл N0, мкмоль СОД, ед.акт. каталаза, мкат/л ЦП, мг/л

Контроль 15 17,38±0,24 68,45±0,6 67,4±0,52 228,8±2,33 262,55±3,99

больные КПЛ на фоне монотерапии ЭХАР

до лечения 18 30,46±0,32 "") 40,39±1,24"") 37,61±0,79 ') 409,94±3,23п") 335,06±1,72"")

после лечения 18 25,4±0,2 '"У222) 47,47±0,71 1ш) 2222) 48,21 ±0,3 ип)2221) 298,1±3,25 |ш)2222) 299,7±0,26 пп) 2222)

больные КПЛ на фоне традиционного лечения

до лечения 26 31,02±0,32 "") 39,23±0,78 "") 36,23±0,58 "") 398,61±2,50 "") 328,84±2,06 "")

после лечения 26 23,2±0,09ш') 2222)3333) 52,4±0,38 "")"") 3333ч 54,7±0,19П11)2222) 3333) 284,58±2,13 1п|) 2222) 333) 283,6±2,35"") 2222) 3333)

больные КПЛ на фоне комплексной терапии (традиционное лечение и терапии ЭХАР)

до лечения 25 30,05±0,3 1Ш) 41,32±0,65 "") 38,12±0,7 "") 406,30±1,71 "") 334,36±1,33 "")

после лечения 25 19,2±0,17 1111^2222^ 3333^ 4444^ 59,71 ±0,42 1111^2222^ 3333^ 4444^ 62,49±0,19 1111^ 2222^ 3333^ 4444^ 257,8±5,26 Ж1 ^ 2222^ 3333^ 4444^ 276,44±0,19 111^2222^3333^444^

относительно ЭХАР; 4444) - достоверность относительно традиционной терапии.

Показатели клинического состояния слизистой оболочки полости рта у больных красным плоским лишаем

Таблица №2

группы кол-во УИГР, балл РМА, % вВ1, % WTC, балл Площадь, см1

больные КПЛ на фоне монотерапии ЭХАР

до лечения 18 1,81±0,13 35,44±1,38 25,17±2,58 8,78±0,61 3,11±0,2

после лечения 18 1,3±0,096 '") 12,83±0,97 "") 12,17±0,42 "") 3,11±0,36"") 2,2±0,19 '")

больные КПЛ на фоне традиционного лечения

до лечения 26 2,0±0,12 34,5±0,94 24,0±2,24 8,46±0,54 2,99±0,17

после лечения 26 0,80±0,087 п") 2222) 10,31 ±0,62 "")') 10,69±0,64 "") 1,73±0,26 "") 222) 1,65±0,15 п")2)

больные КПЛ на фоне комплексной терапии (традиционное лечение и терапии ЭХАР)

до лечения 25 2,1±0,14 34,4± 1,02 24,72±1,98 8,28±0,49 3,07±0,13

после лечения 25 0,47±0,06 1,п)2222)3") 6,88±0,31 П|,)22Ц)ШЗ) 5,68±0,45 ||И)2Щ) ззззч 0,96±0,17 и")2222)33) 0,74±0,06 »")2222)3333)

относительно ЭХАР; ) - р<0,001; ) - р<0,01 - достоверность относительно традиционной терапии.

Эти изменения периферической крови свидетельствуют с одной стороны об угнетении реакции воспаления в слизистой оболочке рта, липопероксидации и о стимуляции иммунобиологических свойств организма (табл.3).

Следует отметить, что у части больных длительная традиционная терапия воспалительного процесса сопровождалась сохранением эрозивно-язвенных поражений. Использование ЭХАР местно, в комбинации с медикаментозной терапией (общей и местной), способствовало угнетению процесса ПОЛ, повышению активности супероксиддисмутазы и значительному улучшению состояния полости рта, подавлению воспалительного процесса по данным гематологических показателей, вследствие повышения иммунобиологических свойств организма, что и способствовало уменьшению площади повреждения и частично заживлению эрозивно-язвенных образований СОПР.

Впервые примененная комплексная медикаментозная терапия с электрохимически-активированными растворами показала себя более эффективной в сравнении с результатами традиционного лечения.

Нужно полагать, что окислительно-восстановительный потенциал, генерируемый электрохимически-активированными растворами, способствует повышению активности антиокислительного фермента - СОД, угнетению образования активных форм кислорода и ингибированию ПОЛ, повышению Т-клеточного звена иммунитета и угнетению реакции фагоцитоза и индекса фагоцитоза.

Результаты экспериментальных исследований

При работе с животными использовались все международные этические нормативы, принятые в международной практике при работе с животными. Исследование влияния ЭХАР на активность ферментов АОС у интактных кроликов показало присутствие индивидуальных вариаций активности ферментов: супероксиддисмутазы, каталазы и пероксидазы.

Полученные данные обработали методом вариационной статистики.

Таблица № 3

Гематологические показатели у больных красным плоским

лишаем

Морфологические показатели в % Здоровые (контроль) Больные КПЛ Лечение ЭХАР Традиционное лечение Традиционное лечение + ЭХАР

нейтрофилы п/я 3,02±0,015 12,8±2,03 mi) 10,28±0,18 6,5±0,5 ,)222) 3,48±0,008 1111)2222) 3333 ^ 4444)

с/я 57,2±0,4 66,4±2,93 63,44±0,23 58,4±0,91 222) 54,25±2,39 222,

эозофилы 4,15±0,01 7,95±0,01 uii) 6,33±0,16 4,22±0,01 1111) 2222^ 3,91 ±0,008 1111)2222) 3333^ 4444)

моноциты 6,18±0,01 11,05±0,26 nil) 9,0±0,14 7,88±0,007 1111) 2222^ 6,2±0,01 1111)2222) 3333 ) 4444)

лимфоциты 29,36±0,09 36,2±0,079 34,89±0,47 8 31,3±0,07 2222) 28,11±0,05 1111)2222) 3333) 4444)

В-лимфоциты 25,7±0,08 35,25±2,66 ш) 31,33±0,53 27,32±0,01 1111) 222^ 24,2±0,37 1111у222) 3333 ) 4444)

Т-лимф.обшие 60,2±0,50 32,71±1,82 mi) 38,78±0,78 6 4б±2,45 ИМ) 2222) 58,9±0,16 11)2222) 3333) 4444)

Т-лимф. активные 30,7±0,87 25,5±1,97 26,44±0,33 28,2±0,4 ш. 30,41±0,072 22) 3333) 4444)

0-лимфоциты 28,0±0,87 21,83±1,60 23,61±0,24 4 27,29±1,78 2) 28,12±0,74 2222)

Т-хелперы (CD-4) 30,7±0,87 26,4±0,68 27,56±0,25 28,9±0,097 V22) 33,25±1,13 2222) 3333)4444)

Т-супрессоры (CD-8) 29,5±0,63 24,14±0,70 111 25,78±0,32 27,61 ±0,072 III) 222) 29,67±0,76 2222) 333) 444)

% фагоцит (фагоц.активн.) 62,3±1,33 94,17±1,76 nil) 88,72±0,57 78,86±1,24 1111) 2222) 63,11±0,06 2222) 3333) 4444)

индекс фагоцитоза 30 мин 4,1±0,23 6,88±0,17 mi) 6,12±0,11 5,06±0,007 1111) 2222 j 4,26±0,41 2222)

относительно контроля; "") - р<0,001; 2") - р<0,01; ) - р<0,02; ) - р<0,05; -достоверность относительно КПЛ; 3333) - р<0,001;3") - р<0,01; ) - р<0,02; 3) - р<0,05; -достоверность относительно ЭХАР; 4444) - р<0,001; 444) - р<0,01; 44) - р<0,02;4) - р<0,05; -достоверность относительно традиционной терапии.

В контрольной группе активность каталазы, о которой судили по убыли субстрата перекиси водорода (экстинкции), в среднем составила 0,32±0,004 усл.ед., что пропорционально количеству ферментированного субстрата. Разброс данных составил от 0,302 до 0,341 усл.ед. В опытной группе потребление субстрата за время реакции возрастало, что свидетельствовало о повышении активности фермента на 21%. Динамика показателя активности каталазы при введении раствора in vitro имело аналогичную тенденцию, то

есть сохранялось стимулирующее влияние ЭХАР на активность данного энзима в лизате эритроцитов (рис.1).

каталаза in vivo каталаза in vitro

□ контроль ВЭХАР П контроль ■ ЭХАР

Рисунок 1. Влияние ЭХАР на активность каталазы у кроликов in vivo и in vitro.

Таким образом, активность каталазы в опытной группе выше, сравнительно с контрольной группой, на 29%. Анализ данных активности СОД, полученных in vivo на кроликах, показал, что происходит активация фермента супероксиддисмутазы, при этом чувствительность СОД эритроцитов к действию ЭХАР статистически достоверно возрастает на 27% (рис.2).

СОД in vivo СОД in vitro

□ контроль НЭХАР □ контроль ШЭХАР

Рисунок 2. Влияние ЭХАР на активность СОД у кроликов при введении in vivo и in vitro.

Полученные нами данные подтверждают, что более активная СОД, обеспечивающая реакцию дисмутации супероксиданион радикала, способствует более быстрой реакции образования перекиси водорода, как менее реактивного соединения. В другом варианте исследования,

проведенные в экспериментах in vitro, позволили выявить прямое влияние электрохимически-активированных растворов на активность СОД (р<0,001).

пероксидаза in vivo

□ контроль ИЭХАР

пероксидаза in vitro

□ контроль ИЭХАР

Рисунок 3. Влияние ЭХАР на активность пероксидазы у кроликов in vivo и in vitro.

Для выяснения характера влияния ЭХАР на активность пероксидазы мы предприняли проведение экспериментов на выделенных эритроцитах кролика in vitro. Полученные данные воздействия анолита нейтрального на активность фермента в лизате эритроцитов кроликов, интактных и подвергшихся введению католита нейтрального in vivo, показали, что в среднем имеет место тенденция к активации фермента как в контрольной, так и в опытной группах (р<0,001) (рис.3). Влияние индивидуально по каждому из животных и позволяет выявить, что как при высоких, так и при низких значениях активности фермента влияние ЭХАР in vitro проявлялось в активации фермента, однако у трех кроликов отмечалось подавление ферментативной реакции.

Таким образом, у подавляющего большинства кроликов полученные результаты свидетельствовали об активации пероксидазы (р<0,001).

Патогенетическая схема развития эрозивно-язвенных повреждений слизистой оболочки полости рта при красном плоском лишае

в осгалительнын процесс в СОПР 1

г ,

зрмиано-вззенныесбрадоааш ]

Рисунок 4. Патогенетическая схема

Выводы

1. Манифестация эрозивно-язвенной патологии слизистой оболочки полости рта у больных красным плоским лишаем характеризуется развитием окислительного стресса, повышением образования активных форм кислорода фагоцитирующими клетками, содержания малонового диальдегида в эритроцитах и дисбалансом в АОС: снижением активности СОД и компенсаторным повышением активности каталазы и концентрации церулоплазмина.

2. Продукты ПОЛ нарушают физико-химические свойства эпителиоцитов слизистой оболочки полости рта, повышают проницаемость сосудистой стенки для плазмы крови, вызывают снижение содержания оксида азота и микроциркуляторной гемодинамики, что свидетельствует о развитии воспалительного процесса. Эти биохимические и функциональные изменения сопровождаются нарушением клинического состояния слизистой оболочки полости рта и эрозивно-язвенными проявлениями у больных красным плоским лишаем.

3. У больных с эрозивно-язвенной формой красного плоского лишая слизистой оболочки полости рта выявлено снижение содержания всего спектра Т-клеточного звена лимфоцитов, повышение В-лимфоцитов, содержания полиморфноядерных лейкоцитов, а также моноцитов, процента фагоцитарной активности и фагоцитарного индекса, что свидетельствует об обострении заболевания.

4. Комплексное лечение с электрохимически-активированными растворами способствует угнетению интенсивности ПОЛ, снижению концентрации МДА в эритроцитах, нормализации дисбаланса в АОС: повышению активности СОД, снижению активности каталазы и концентрации церулоплазмина, а также повышению суммарных метаболитов NOx.

5. Назначение животным per os электрохимически-активированных растворов сопровождается повышением у них активности ферментов АОЗ организма: СОД, каталазы, пероксидазы. Характер влияния электрохимически-активированных растворов зависит от исходного фона индивидуальной активности ферментов: при низких значениях активности энзимов - стимулирует, а при высоком фоне - подавляет.

6. Влияние электрохимически-активированных растворов на активность ферментов АОС у кроликов зависит от окислительно-восстановительного потенциала раствора, который обладает электронно-донорными свойствами.

Практические рекомендации

1. Для оптимизации комплексной терапии эрозивно-язвенной формы повреждения слизистой оболочки полости рта у больных красным плоским лишаем целесообразно включать ЭХАР в алгоритм лечения: аппликации АН, КН на эрозивно-язвенные поражения по 20-30 мин с интервалом 10-15 мин.

2. Лечение красного плоского лишая слизистой оболочки полости рта необходимо начинать после проведения профессиональной гигиены и обучения пациента рациональной гигиене полости рта в процессе диспансерного наблюдения.

3. Проводить диспансерное наблюдение при эрозивной форме красного плоского лишая 4 раза в год. Для оценки состояния слизистой оболочки полости рта использовать следующие критерии: упрощенный индекс гигиены (УИГР), РМА - папиллярно-маргинально-альвеолярный индекс, SBI

- индекс кровоточивости, WTS - индекс налета языка, S - площадь повреждения - планиметрия. В целях снижения частоты рецидивов при динамическом наблюдении назначать ванночки полости рта с теплым раствором (+40° С) анолита.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Мрикаева, О.М. Влияние электрохимически активированных систем на активность ферментов антиоксидантной защиты организма // Сборник научных статей X международного конгресса «Здоровье и образование в XXI веке» «Инновационные технологии в биологии и медицине», Москва. РУДН.

- 2009. - С.907.

2. Мрикаева О.М. Влияние электрохимически активированной воды (ЭХАС) на активность ферментов АОЗ у интактных кроликов / О.М. Мрикаева, Ф.С. Дзугкоева // Фундаментальные исследования. - 2012. -№3(2). - С. 250-252.

3. Дзугкоева, Ф.С. Перекисное окисление липидов (ПОЛ) -патогенетическое звено эндотелиальной дисфункции при различных

патологиях / Ф.С. Дзугкоева, О.Ю. Гармаш, О.М. Мрикаева и др. // Высокие технологии, фундаментальные и прикладные исследования в физиологии, фармакологии и медицине, Санкт-Петербург. - 2012. - Т. 1. - С.7-9.

4. Дзугкоев, С.Г. Некоторые механизмы гемодинамических нарушений у больных СД типа 1 и КПЛ / С.Г. Дзугкоев, О.М. Мрикаева // III международная научно-практическая конференция «Молодые ученые в решении актуальных проблем науки». Сборник работ молодых ученых. -Владикавказ, 2012. -ч. 1. -С. 102-103.

5. Дзугкоева, Ф.С. Состояние системы ПОЛ-АОЗ у больных красным плоским лишаем с эрозивно-язвенным процессом слизистой полости рта / Ф.С. Дзугкоева, О.М. Мрикаева, И.В. Можаева и др. // Материалы XXII съезда физиологического общества им. И.П.Павлова, Волгоград. 2013. -С.150.

6. Дзугкоева, Ф.С. Влияние комплексного лечения с ЭХАС на систему ПОЛ-АОС и функциональные показатели слизистой оболочки полости рта у больных КПЛ / Ф.С. Дзугкоева, О.М. Мрикаева, Е.А. Такоева и др. // Кубанский научный медицинский вестник. 2013. - №6(141). - С.88-92.

7. Мрикаева, О.М. Эффективность комплексного лечения с использованием ЭХАС на биохимические и функциональные показатели слизистой оболочки полости рта у больных КПЛ / О.М. Мрикаева, Ф.С. Дзугкоева // Материалы 9-ой международной научно-практической конференции «Достижения фундаментальных наук и возможности трансляционной медицины в решении актуальных проблем практического здравоохранения», Астрахань. - 2013. - С.62-63.

8. Дзугкоева, Ф.С. Биомаркеры сосудистых осложнений, вызванных солями тяжелых металлов, сахарным диабетом и красным плоским лишаем / Ф.С. Дзугкоева, Л.В. Гиголаева, С.Г. Дзугкоев, О.М. Мрикаева // Международная научная конференция «Химия, биология, биотехнологии в современном мире: теория и практика», Москва. - 2013. - С.36-39.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

АФК — активные формы кислорода АОС — антиоксидантная система ПОЛ — перекисное окисление липидов МДА - малоновый диальдегид СОД — супероксиддисмутаза ЦП - церулоплазмин

NOx - суммарные метаболиты оксида азота

КПЛ - красный плоский лишай

АОЗ - антиоксидантная защита

ЭХАР - электрохимически-активированный раствор

СОПР - слизистая оболочка полости рта

УИГР - упрощенный индекс гигиены

РМА — папиллярно-маргинально-альвеолярный индекс

SBI - индекс кровоточивости

WTS - индекс налета языка

S - площадь повреждения - планиметрия

АН - анолит нейтральный

КН - католит нейтральный