Автореферат и диссертация по медицине (14.03.03) на тему:Патогенетическая роль изменений фосфолипидного и перекисного статуса эякулята при нарушении фертильности у мужчин

На правах рукописи

Кошмелев Александр Александрович

патогенетическая роль изменений фосфолипидного и перекисного статуса эя1сулята при нарушении фертилъности у мужчин

14.03.03. - Патологическая физиология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

6 ДЕК 2012

Чита-2012

005056829

005056829

Работа выполнена в ГБОУ ВПО "Читинская государственная медицинская академия" Минздравсоцразвития России

Научный руководитель:

доктор медицинских наук, профессор Хышиктусв Банр Сергеевич

Официальные оппоненты:

Витковский Юрий Антонович, доктор медицинских наук, профессор, ГБОУ ВПО "Читинская государственная медицинская академия" Мияздравсоцразвития России, заведующий кафедрой нормальной физиологии

Саклаков Алексей Викторович, кандидат медицинских наук, Министерство здравоохранения Забайкальского края, консультант по хирургии

Ведущая организация: ГБОУ ВПО "Новосибирский государственный медицинский университет" Минздравсоцразвития России

Зашита состоится декабря 2012 года в 900 часов на заседании диссертационного совета Д 208.118.01 при ГБОУ ВПО "Читинская государственная медицинская" Минздравсоцразвития России, 672090, г. Чита, ул. Горького, 39а.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГБОУ ВПО "Читинская государственная медицинская академия" Минздравсоцразвития России, 672090, г. Чита, ул. Горького, 39а.

Автореферат разослан " " /^яиУг^ 2012 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, Д 208. 118. 01

д.м.н., профессор

И.Н. Гаамоленко

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Характерной чертой демографической ситуации в России в последние 15 лет является систематическая убыль абсолютной численности населения, которая происходит вследствие суженного его воспроизводства, когда последующее поколение меньше предыдущего (Акопян А.С., 2008; Курило Л.Ф. и соавт., 2000).

Сегодня ог 14% до 20% супружеских пар репродуктивного возраста страдает бесплодием (Александрова JT.A. и соавт., 2009; Артифек-сов С.Б. и соавт., 1998; Евдокимов В.В. и соавт., 2009; Griveau J.F. et al., 2005). В среднем каждая седьмая пара в мире бесплодна и в половине случаев это связано с нарушениями репродуктивной функции у мужчин (Rao В.В. et al., 1989). Тенденция к росту мужского фактора в структуре бесплодного брака и ухудшению качества спермы диктует необходимость пристального изучения существующей проблемы (Aitken R.J. et al., 1997; Balercia G. et al., 2004; Cavallini G., 2006; Mancini A. et al, 2004).

В последнее десятилетие убедительно доказывается роль окислительного стресса как фактора, снижающего мужскую фертильность (Божедомов В.А. и соавт., 2011; Колесникова Л.И. и соавт., 2011; Gharagozloo P., Aitken R.J., 2011; Agarwal A. et al., 2012). Незначительная генерация активных форм кислорода (АФК) необходима для нормальной регуляции функции сперматозоидов, процесса капацитации и акросомальной реакции (Жабин С.Г. и соавт., 2005, 2006; Kothari S. et al., 2010). Однако, избыточная продукция АФК приводит к повреждению мембраны сперматозоидов, снижению их подвижности и нарушению оплодотворяющей способности (Александрова Л.А. и соавт., 2009; Rajender S. et al., 2011). Кроме того, АФК непосредственно повреждают ДНК хромосом (Aitken R.J. et al., 2011; Курашова H.A., 2012) и инициируют опосредованный эндонуклеазами апоптоз сперматозоидов, что приводит, в конечном счете, к бесплодию (Makker К. et al., 2009; Oehninger S. et al., 2011; Shukla K.K. et al., 2012).

Негативное влияние на фертильность мужчин оказывают различные факторы, такие как загрязнение окружающей среды, психоэмоциональное напряжение, привычные интоксикации и другие (Артифек-сов С.Б., 1989). Все они провоцируют развитие окислительного стресса, в его лимитировании важную роль играют антиоксиданты, к которым относится и убихинон или коэнзим Q|0 (KoQ|0), являющийся также компонентом цепи переноса электронов и таким образом участвующий в энергетическом метаболизме (Божедомов В.А., и соавт., 2008,

2009). Кроме того, убихинон восстанавливает аптиоксидантную активность а-токоферола (Артифексов С.Б., 1992). Результаты исследований G.Balercia et al. (2009) свидетельствуют о корреляционной зависимости между уровнем KoQI0 в организме и количеством сперматозоидов, их подвижностью. Поскольку сперматозоиды содержат митохон-дрион - гигантский конгломерат митохондрий, необходимый для выработки АТФ, энергия распада которого используется для движения мужских половых клеток, нарушение обмена KoQ10 будет отражаться на функциональной активности последних.

Как известно, основным субстратом для свободных радикалов являются фосфолиниды, качественный состав и структурная организация которых будут во многом определять интенсивность процессов липоперок-сидации. Благодаря своим уникальным свойствам фосфолипиды имеют возможность как непосредственно влиять на половые клетки, так и опосредованно повышать детородную функцию (Cross N.L., 1994; Скатков С.А., 2002, 2003; Jones R. et al., 2007). В то же время при различных видах патоспермии изменения фосфолипидного спектра семенной жидкости и их взаимосвязь с показателями перекисного и функционального статуса половых клеток в литературе практически не освещены.

Таким образом, одним из резервов снижения числа бесплодных браков может стать углубленное понимание причин и механизмов нарушений мужской репродуктивной функции, которые представляются недостаточно изученными. Поиск адекватных индикаторов репродуктивного здоровья мужчины, дополняющих и расширяющих рекомендованные ВОЗ методы диагностики, является актуальной на сегодняшний день задачей.

В связи с вышеизложенным, целыо настоящего исследования явилось раскрытие закономерностей изменений показателей фосфолипидного и перекисного статуса сперматозоидов и спермоплазмы при бесплодии у мужчин.

Задачи исследования:

1. Изучить сдвиги спектра фосфолипидов эякулята у мужчин при различных вариантах патозооспермии.

2. Исследовать параметры системы "ПОЛ - антиоксиданты" и содержание коэнзима Q10 в крови и компонентах эякулята у инфертильных мужчин в зависимости от характеристики спермограммы.

3. Оценить характер корреляционных взаимоотношений между исследованными биохимическими показателями семенной жидкости и подвижностью половых клеток в норме и патологии фертильности.

Научная новизна. Впервые при мужском бесплодии раскрыты закономерности изменений параметров фосфолипидного статуса сперматозоидов и семенной плазмы у пациентов с различными вариантами патоспермии. Показано, что независимо от характера нарушений сперматогенеза в компонентах эякулята по сравнению с нормозоосперми-ей регистрируется накопление лизоформ фосфолипидов, дефицит фос-фатидилхолина, фосфатидилинозитола и сфингомиешша. Наиболее выраженные сдвиги присущи лицам с астенозоо-, олигозоо- и тератозо-оспермией. При всех формах патоспермии в сиермоплазме по сравне-ншо с половыми клетками выявляется более значительное повышение уровня фосфатидилсерина (на 100% и более).

Приоритетным в работе явилось установление взаимосвязей между подвижностью сперматозоидов и изученными биохимическими показателями: при нормокинезисе у пациентов с астено-, терато-, олиго-зооспермией, как и у здоровых лиц, подвижность спермиев прямо коррелирует с уровнем ТБК-активных продуктов в половых клетках, а при олигоспермии и полизооспермии эта связь становится отрицательной. Для прогрессивно-слабоподвижных клеток у больных с поли-, олиго- и тератозооспермией большее значение имеют изменения уби-хинона в спрематозоидах, величины которого положительно связаны с их подвижностью. В случае наличия воспалительного компонента при астенозооспермии число статистически значимых корреляций существенно уменьшается. Для клеток с подвижностью категории "С" общих закономерностей в проявлении корреляционных зависимостей у обследуемых больных не наблюдается.

Теоретическая и практическая значимость работы. Полученные результаты расширяют представления о патогепезе мужской ин-фертильности. В работе рассматриваются вероятные механизмы фос-фолипидных сдвигов, происходящих как в сперматозоидах, так и в семенной плазме, а также особенности изменений показателей пере-кисного статуса при различных нарушениях сперматогенеза.

В половых клетках наиболее выраженный дисбаланс в системе "ПОЛ - антиоксиданты" выявляется при полизоо- и астенозооспермии с наличием воспаления. При этом у последних и лиц со сниженной подвижностью спермиев без воспалительных признаков имеется более глубокий дефицит (разница более чем 2 раза) КоС>|0, что приводит еще и к подавлению подвижности мужских половых клеток. Данный факт обусловлен уменьшением интенсивности АТФ-генерирующих процессов, в которых немаловажную роль играет убихинон. Проме-

жуточное положение по степени нарушений перекисяого гомеостаза в сперматозоидах занимаю г лица с тератозооспермией, а минимальные сдвиги характерны для пациентов с олиго- и олигозооспермией. В спер-моплазме наибольшая степень разбалансировки в системе "ПОЛ - ан-тиоксиданты" наблюдается при полизоо-, олигозоо- и астенозооспер-мии с наличием воспаления, а наименьшая - при сниженной подвижности половых клеток без воспалительных признаков. Полученные результаты необходимо учитывать, при назначении соответствующей ан-тиоксидантной терапии, эффективность которой при мужском бесплодии в настоящее время убедительно доказывается.

Внедрение в практику. Теоретические положения, раскрываемые в диссертации, внедрены в учебный процесс кафедры патологической физиологии, кафедры химии и биохимии и курса урологии ГБОУ ВПО Читинская государственная медицинская академия Минздравсоц-развития РФ.

Апробация диссертации. Основные положения и результаты диссертации представлены и обсуждены на Всероссийской научно-практической конференции "Актуальные проблемы клинической и экспериментальной медицины", посвященной 55-летию ЧГМА. (Чита, 1-2 октября 2008 г.); на VIII научно-практической конференции урологов Дальнего востока "Современные технологии в урологии", (Благовещенск, 19-21 сентября, 2009 г.); на III межрегиональной научно-практической конференции урологов Байкальского региона "Некоторые аспекты диагностики и лечения в урологии", (Чита, 3 ноября, 2010 г.); на IV межрегиональной конференции урологов Байкальского региона "Современные технологии в урологии", (Улан-Удэ, 19-20 августа, 2011 г.); на VIII международной научно-практической конференции "Научное пространство Европы", (Польша, 7-15 апреля, 2012 г.); VII международном конгрессе ПААР (профессиональной ассоциации андрологов России), (Сочи, 23-26 мая 2012 г.).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 8 печатных работ, из которых 3 статьи в рецензируемых научных журналах и изданиях, определенных ВАК Министерства образования и науки РФ.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 124 страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, главы собственных исследований, заключения, выводов, содержит 11 таблицы, иллюстрирована 10 рисунками. Указатель литературы включает 332 источника, из которых 97 отечественных и 235 зарубежных.

Основные положения, выносимые на защиту

1. Изменения фосфолшшдного спектра сперматозоидов и семенной плазмы при мужской инфертильности, независимо от характера нарушений сперматогенеза, характеризуются ростом лизоформ фос-фолипидов, уменьшением доли фосфатидшгхолина, фосфатидилино-зитола и сфингомиелина по сравнению с нормозооспермией. Наибольшие изменения происходят у пациентов с астснозоо-, олигозоо-и тератозоосиермией. При всех формах патоспермии в спермоплаз-ме по сравнению с половыми клетками выявляется более значительное повышение уровня фосфатидилсерина.

2. Максимальный перекисный дисбаланс в сперматозоидах регистрируется у лиц с полизоо- и астенозооспермией с наличием воспаления, при этом в обеих группах больных с астенозооспермией наблюдается резкое снижение содержания KoQI0. Менее выраженные нарушения перекисного гомеостаза в сперматозоидах характерны для лиц с тератозооспермией, а незначительные изменения присущи олнго- и олигозоослермии.

3. Наиболее существенные сдвиги системы "Г10Л - антиоксиданты" в спермоплазме выявляются при полизоо-, олигозоо- и астенозоос-пермии с наличием воспаления, а минимальные - при астенозоос-пермии без воспалительных признаков.

4. Количество и характер корреляционных зависимостей между подвижностью сперматозоидов и биохимическими показателями главным образом определяются категорией подвижности половых клеток, а также видом нарушений сперматогенеза.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ Клиническая характеристика обследованных групп. Для решения поставленных задач нами была изучена сперма мужчин, обратившихся в клинику по поводу бесплодия в браке за период 20092010 гг. У всех было получено информированное согласие на проведение исследований. В работе с обследуемыми соблюдались этические принципы, предъявляемые Хельсинкской Декларацией Всемирной Медицинской Ассоциации (World Médical Association Déclaration of Helsinki, 1964, 2000 ред.).

Обследовано 120 мужчин без выраженной соматической патологии в возрасте от 24 до 36 лет. По социальному статусу наибольший процент (92%) составляли рабочие и гражданские служащие.

У всех пациентов с помощью метода полимеразной цепной реакции были исключены заболевания, передающиеся половым путем. Кроме того, в исследование не включались лица с наличием антиспермаль-ных антител и воспалительными заболеваниями предстательной железы.

Дополнительные критерии исключения: подтвержденные эндокринные причины бесплодия; регулярный прием лекарственных средств; хронический алкоголизм; перенесенные оперативные вмешательства на органах мошонки, паховых каналах и сосудах яичка; генетические аномалии; острые и хронические воспалительные процессы специфической и неспецифической этиологии мочеполового тракта (орхоэпи-дидимиты, простатиты, везикулиты, уретриты); варикозное расширение вен семенного канатика.

По характеру изменений спермограммы пациенты были разделены

на шесть групп:

1 группа (п = 22) - астенозооспермия с признаками воспалительного процесса (признаки воспалительного процесса, после исключения сопутствующей патологии, были выставлены на основании незначительных изменений в спермограмме - до 2 млн. лейкоцитов в 1 мл;

слизь слабо выражена);

2 группа (п = 25) - астенозооспермия без признаков воспалительного процесса;

3 группа (п = 16) - полизооспермия;

4 группа (п = 13) - олигоспермия;

5 группа (п = 21) - олигозооспермия;

6 группа (п = 23) - тератозооспермия.

Для "чистоты эксперимента" в наше исследование не включались лица с сочетанными нарушениями спермограммы (тератоастенозоос-пермия, олигоастенотератозооспермия и др.).

В контрольную группу вошли 38 практически здоровых мужчин в возрасте от 23 до 34 лет с нормальными показателями спермограммы и доказанной фертилыюстью (в течение года у половых партнеров данных лиц наступала беременность).

Методика клинического исследования эякулята. Лабораторное исследование эякулята включало определение физико-химических свойств и клеточного состава. Микроскопию спермы осуществляли при большом увеличении (объектив х40, окуляр х10). Анализ эякулята проводили согласно "Руководства ВОЗ по лабораторному исследованию и обработке эякулята человека", 4 и 5 редакций (1999 г., 2010 г. соответственно).

Исследование показателей системы "нерекисное окисление линидов - антиокснданты". Для изучения уровня промежуточных интермедиатов свободнорадикального окисления линидов использовали тест с тиобарбитуровой кислотой (Каршнценко Л.И., 2002). Общую антиокислительную активность в биологических средах изучали методом М.Ш.Промыслова и соавт. (1990) в незначительной модификации. Концентрацию коэнзима Q[0 в биологических материалах определяли с помощью коммерческого набора Coenzyme Q компании "Chromsystems" (Германия).

Изучение фосфолипидного состава в спермоилазме и сперматозоидах. Экстракцию липидов из биологических объектов проводили методом j.Folch et al. (1957). Содержание фосфолипидов оценивали при помощи высокоэффективной жидкостной хроматографии с использованием ультрафиолетовой детекции и изократического элюиро-вания по методике L.Terry et al. (1983). Идентифицировали следующие фракции фосфолипидов: фосфатидилхолин, лизофссфатидилхолин, фосфатидилэтаноламин, лизофосфатидилэтаноламин, сфингомиелин' фосфатидилсерин, фосфатидилинозитол.

Статистическая обработка результатов. Статистическую обработку полученного материала проводили с использованием пакетов STATISTICA 6.1 для Windows. Проверку на нормальность распределения количественных показателей проводили с использованием критерия Шапиро-Уилка. Так как не все изучаемые показатели подчинялись нормальному закону распределения, применяли непараметрические методы сравнения. Параметры фосфолипидного спектра приведены в виде средних величин со стандартным отклонением (M±SD), остальные изученные параметры представлены в виде медианы и меж-квартильного интервала (25-й; 75-й персентили); сравнение независимых выборок проводился с помощью U-критерия Манна-Уитни для парных признаков. Корреляционный анализ проводили по Спирмену Критический уровень значимости при проверке статистических гипотез принимался р<0,05.

результаты собственных исследований

Показатели спермограммы в исследуемых группах.

Анализируя данные параметры эякулята, можно констатировать следующее: во-первых, у всех пациентов отмечалось выраженное снижение концентрации половых клеток по сравнению со здоровыми людьми, хотя эти значения были в пределах нормативных, за исключением,

оли-

лиц с полизооспермией (177 млн/мл) и, естественно, больных гозооспермией (11,3 млн/мл); во-вторых, в контроле процент прогрес-снвно-активноподвижных сперматозоидов (категория А) был гораздо выше чем у всех обследованных пациентов, причем во 2, 4 и 5 группах этих клеток было более чем в 5 раз (р<0,001) меньше. Однако, если исходить из нормативных значений по ВОЗ, то у лиц с полизооспермией и тератозооспермией данный показатель укладывается в эти пределы. В-третьих, наибольшее количество клеток категории С регистрировалось в 1, 2 и 5 группах, при этом у пациентов с олигозоос-

„срмисй на долю непрогрессивно-подвижных сперматозоидов приходилось почти 60% (р<0,001).

Закономерности изменений фосфолипидного состава спермы у мужчин при нарушении фертилькости в зависимости

от характеристики эякулята Оценивая фосфолипидный профиль лиц контрольной группы необходимо отметить особенности состава сперматозоидов и спермоп-лазмы Если в половых клетках превалирующими фракциями были фос-фатидилхолин (42%) и сфингомиелин (20%), то в их окружении наряду с ФХ и СМ в значительных количествах присутствовали фосфаги-дилэтаноламин (почти 20%) и его лизоформа (15%). Следует подчеркнуть что в обеих субстанциях регистрируется высокий уровень лизо-фосфолипидов: более 20% и 22% в сперматозоидах и спермоплазме соответственно, что косвенно свидетельствует о достаточно высокой

активности фосфолипазы Аг

В сперматозоидах во всех исследуемых группах пациентов снижалось в среднем на треть содержание фосфатидилхолина на фоне роста его лизоформ, особенно выраженном при олиго-, полизоо-, олигозоо-, и ас-тенозооспермии с признаками воспалительного процесса (табл. 1). Незначительное падение доли фосфатидилэтаноламина было характерным для пациентов 1 и 2 группы, а в 3 и 6 группах наблюдалась противоположная тенденция. Однако цифры ЛФЭА повышались практически у всех обследуемых лиц, за исключением больных с полизооспермией.

Необходимо отметить, что у всех мужчин с нарушением фертиль-ности. в половых клетках, уменьшалось содержание трудноокисляе-мого сфингомиелнна, максимальный дефицит (почти в 2 раза) его регистрируется при полизоо-, олиго- и олигозооспермии (табл. 1).

Подобная картина сдвигов со стороны ФХ, ЛФХ и ЛФЭА наблюдалась и в спермоплазме (табл. 2). Однако наибольший рост лизоформ фосфолипидов в данном биологическом материале был характе-

рен для лиц 1, 5 и 6 групп. Их цифры превышали таковые у здоровых лиц на 23%, 20% и 25% соответственно. При этом у пациентов с тера-тозооспермией существенно возрастали обе фракции. Необходимо подчеркнуть, что в половых клетках пул лизофосфолшшдов был максимальным в 1, 4 и 5 группах.

Содержание фосфатидилэтаноламина и сфингомиедина в сиермоп-лазме у всех обследуемых было равномерно сниженным, тогда как величины ФС повышались в 2 и более раза у больных с астенозоо- (с признаками воспалительного процесса и без него), полизоо-, олиго- и олигозоосиермией (табл. 2).

Падение уровня фосфатндилинозитола также характерно для всех групп, причем максимальный дефицит данной фракции был выявлен у пациентов 1, 5 и 6 групп.

Таким образом, при нарушении фертильности у мужчин существенно изменяется спектр фосфолипидов как половых клеток, так и их окружения, наиболее глубокие сдвиги присущи лицам с астенозоо-, олиго-зоо- и тератозсосиермией; выявленные изменения приводят к нарушениям не только структуры биомембран сперматозоидов, но и их функциональной акгивности, что, возможно, является одной из причин мужского бесплодия; изучение фосфолипидного профиля эякулята может быть использовано в качестве дополнительного критерия диагностики нарушения фертильности и оценки эффективности проводимой терапии.

Параметры перекисиого статуса и содержание Ко(}]0 в крови и семенной жидкости у мужчин с нарушением фертильности.

Результаты, полученные при исследовании параметров крови, свидетельствуют о том, что практически у всех обследованных пациентов показатели липопероксидации находятся в пределах контрольных значений и не являются информативными. Так у пациентов с астенозооспермией с признаками воспаления содержание КоС>10 умеренно снижалась, как и в группе полизооспермии, а концентрация ТБК-активных продуктов повышалась на 34,5% (р<0,02) по сравнению со здоровыми людьми.

В половых клетках регистрировалось повышение уровня промежуточных продуктов ПОЛ у пациентов 1, 2, 3 и 6 групп, тогда как активность пула радикальных ингибиторов подавлена практически у всех обследуемых, за исключением лиц с олигоспермией. Так, наибольший рост ТБК-акгивных веществ наблюдался при астенозооспер-мии с признаками воспаления и полизооспермии, их величины составляли 181,5% (р<0,001) и 153,1% (р<0,001) от контроля соответствен-

Таблица 1

Относительное содержание фосфолипидов (%) в сперматозоидах у обследуемых лиц (М±8Б)

Фракция фосфолипидов Исследуемые группы

Нормозо-оспермия -контроль (п=38) Астенозооспе-рмия с признаками воспаления 1 группа (п=22) Астенозооспер-мия без признаков воспаления 2 группа (п=25) Полизооспермия 3 группа (п=16) Олигоспермия 4 группа (п=13) Олигозо-оспермия 5 группа (п=21) Тератозо-оспермия 6 группа (п=23)

ФХ 42,25±0.99 29.33+2,96 * 31,93+3.69 * р<0,05 29,21 ±5,14 * 25,26+2.26* р.р <0,001 р,<0,05 25,36+0,44 * р.р. <0.001 р,<0,05 33,40+2.55 * р,р„р4<0,001 р,<0,05

ЛФХ 10,49±0,34 27,23+3,25 * 19,01 ±5,63 * р<0,001 27.55+4,29 * р, <0.001 29,11 ±5,99* р, <0,001 27,17±8,41 * р,<0,05 15,55±1.90 * р,р„р,,р4<0,001 *р,<0.05

ФЭЛ 10,41±0.35 8,87+2,10 * 8,99+2,03 * 15,78+3.06 * р,р, <0,001 8.62±4,25 р2<0,001 9,96±1,!2 р, <0.001 !3.64±2,25 * р,р,.р5,р4<0,001 р,<0,05

ЛФЭА 9,72+0,63 14.70±5,84 * 16,74+2,93 * 8,89+2.40 р<0,05 р, <0,001 17,58 ±5,53 * р,<0,001 !7,82±9,88 * р,<0,05 12,94+2.66 * р,.р,<0,001 р,"<0,05

СМ 20,07±0,73 13,31 ±2,16 * 16,57+2,29 * р<0,001 11,29+2,48 * р<0,05 р, <0,001 11,91 ±2,34* р<0,001 11,88±0,33 * р<0,05 р <0,001 17,70+2,44 * р,р2,р3,р4<0.001

ФС 4,54 ±0,56 5,13±0,80 * 4,83±1,10 5,40±1,45 * 5,74+1.78 * 6.08+0,80 * р,р,<0,05 4.16±0,63 р.р. <0,001 р,.р„р,<0,05

ФИ 2,53+0,16 1.43+0,36 * 1,93+0.49 * р<0,05 1.88±0,29 4 р<0,001 1,78±0,51 * р<0,05 1,72±0,32 * р<0,05 2,62±0,82 р.р4 <0,001 р])р„р.<0,05

Примечание: п - число обследованных лиц; * - статистически значимые различия по сравнению с контролем; р - уровень статистически значимых различий между 1 и другими группами, р, - уровень статистически значимых различий между 2 и другими группами, р2 - уровень статистически значимых различий между 3 и другими группами, р3 - уровень статистически значимых различий между 4 и другими группами, р4 - уровень статистически значимых различий между 5 и 6 группами.

Таблица 2

Относительное содержание фосфолипидов (%) в спермоплазме у обследуемых лиц (М±80)

Фракция фосфолипидов Исследуемые группы

Нормозо-оспермия -контроль (п=38) Астенозооспе-рмия с признаками воспаления 1 группа (п=22) Астенозооспер-мпя без признаков воспаления 2 фухтпа (п=25) Паш <зоосперм! 1я 3 группа (п—16) Олигоспермия 4 группа■ (п=13) Олигозо-оспермпя 5 группа (п=21) Тератозо-оспермия 6 фуппа (п=23)

ФХ 25,86+0,36 14,1112,13 * 18,3712,35 * р<0,001 16,9611,84 * р<0,001 15,33+1.05* р, <0,001 Р,<0,05 16,1913,13 * р,р,<0,05 15,7012,35 * р,<0,05

ЛФХ 7,3510,60 23,7613,64 * 15,8814,17 * р<0,001 18,81+5,11 * р<0,05 21,03+2,15* р<0,05 р. <0,001 17,2017.64 * р<0,05 22,1915,09 * р,<0.001 р4<0,05

ФЭА 19,63±1,83 12,48+2,19 * 13,7511,64 * 13,3811,40 * 11,68+1,12* р, =0,001 р,<0,05 12.86+0,09 * Р1<0,05 р,<0,001 13,9511,09 * р<0.05 р„р4 <0,001

ЛФЭА 15,3!+0,44 22,1014,10 * 20,9011,93 * 19,6013,88 * 17,0513,10* р,р, <0,001 р,<0,05 25,86+3,29 * р<0,05 р,,р„р, <0,001 25,1911,16 * р<0,05 р„р„р,<0,001

С\1 19,74±1,98 11,0911,96 * 14.28+2,41 * р<0,00! 13,32+2,42 * р<0,05 * ОО ^ •Г: 12,49+3,41 * 12,0910,73 * р,<0,05

ФС 6,8010,26 14,55+3,80 * 13,16+1,95 + 14,5815,05 * 20,0714,27* р,р. <0.001 р,<0,05 •12,6813,27 * р3<0,001 8,1711,08 * р.,р,,р3,р40,001

ФИ 5,3210,63 1,9010,43 * 3,65Ю,55 * р<0,001 3,3410,47 * р<0,001 3,3110,50 * р<0,001 2,7111,03 * р,р,,р2,р,<0,05 2,7211,18 * р,р,<0,05

Примечание: п - число обследованных лиц; * - статистически значимые различия по сравнению с контролем; р - уровень статистически значимых различий между 1 и другими группами, р1 - уровень статистически значимых различий между 2 и другими группами, р2 - уровень статистически значимых различий между 3 и другими группами, р3 - уровень статистически „ значимых различий между 4 и другими группами, р4 - уровень статистически значимых различий между 5 и 6 группами.

но. При олиго- и олигозооетгермии величины промежуточных интер-медиатов ПОЛ не отличались от контрольных (рис. 1).

Астено-зооспермия с признаками воспаления

Астено-зооспермия без признаков воспаления

Полл- Оли гос перми я Олиго-

зооспермия зооспермия

Терато-зоослермия

ИТБК-аетивные продукты ВОДА НКоОЮ

* - достоверные различия по сравнению с нормозооспермией.

Рис. 1. Параметры перекисного статуса и содержание Ко<3,„ в сперматозоидах у мужчин с нарушением фертилыюсти (нормозооепермия (контроль) -100%).

Со стороны антиокислительной активности сперматозоидов максимальное ее снижение было характерным также для пациентов 1 и 3 групп, при этом ее цифры были статистически значимо ниже, чем у ниц с олигоспермией и тератозооспермией.

Содержание убихинона падало более чем в 2,5 раза или на Ьа/о (р<0 001) при пониженной подвижности сперматозоидов (независимо от наличия воспаления), в меньшей степени его величины снижались в 3 5 и 6 труппах и составляли 82,8% (р<0,001), 78,6% (р<0,001) и 69 1% (р<0,001) от контроля соответственно. При этом у пациентов с нарушенной морфологией половых клеток концентрация КоС^ достоверно отличалась от таковой во всех других обследуемых группах.

Исследование тех же показателей в спермоплазме выявило следующее- наибольшее накопление промежуточных интермедиатов липо-пероксидаиии было характерно для пациентов с полизоо-, олигозоо- и астенозооспермией с признаками воспаления, их уровень повышался в и более раз по сравнению со здоровыми людьми (рис. 2).

Максимальный дефицит факторов антиоксидантной защиты, в том числе и убихинона, регистрировался у пациентов 1, 3 и 5 групп. Циф-

ры АОА у них составляли соответственно 44,7% (р<0,001), 42,3% (р<0,001) и 48,0% (р<0,001) от контроля, а содержание Код - 44,5% (р<0,001), 46,9% (р<0,001) и 49,4% (р<0,001).

Астено-зооспермия с признаками воспаления

Астено-зооспермия без признаков вое паления

Поли- Олигоспермия Олиго-

зооспермия зооспермия

Терэто-зооспермия

ИТБК-активные продукты 0ОАА НКоСПО

* - достоверные различия по сравнению с нормозооспсрмией.

Рис. 2. Параметры перекисного статуса и содержание KoQ10 в спермоплазме у мужчин с нарушением фертильности (пормозооспермия (контроль) -100%).

Вышеприведенные результаты свидетельствуют о важной патогенетической роли локального оксидативного стресса при мужской ин-фертильности, причем картина изменений в компонентах семенной жидкости зависит от характера патоспермии.

Корреляционные взаимоотношения между параметрами фосфолиг.идного, иерекиспого статуса и подвижностью сперматозоидов при патозооспермии.

В связи с тем, что одной из главных причин мужского бесплодия является снижение подвижности сперматозоидов, а также то, что ключевым механизмом последнего служит отрицательное воздействие избыточной генерации свободных радикалов, нами был проведен корреляционный анализ между величинами спектра ФЛ, показателями системы "ПОЛ - антиоксиданты" и подвижностью половых клеток.

У здоровых лиц при нормокинезисе регистрируются сильные отрицательные связи между подвижностью и уровнем ЛФХ в спермоп-лазме (г=-0,81; р<0,001) и ФИ в половых клетках (г—0,81: р<0,00)),

что вполне логично, так как содержание таковых значительно влияет на функциональные свойства спермиев. В тоже время прямая средней силы зависимость существует и с величинами ТБК-активных продуктов, что также свидетельствует о готовности сперматозоидов к гиперактивации и акросомальной реакции. При нормозооспермии в случае прогрессивно-слабоподвижных сперматозоидов (категория В) изменяется направленность связи между подвижностью и уровнем ЛФХ в спермоплазме и ФИ в половых клетках, а в последшгх с ФХ регистрируется положительная корреляция средней силы. Сильная зависимость наблюдается и с концентрацией коэнзима д10 (т=0,91; р<0,001) который играет немаловажную роль в обеспечении двигательной функции спермиев.

Характер корреляционных взаимоотношений в контрольной группе несколько изменяется при непрогрессивно-подвижных клетках (категория С): появляются новые зависимости с ЛФЭА, СМ в сперматозоидах и с ФЭА в семенной плазме; регистрируется отрицательная сильная связь между подвижностью и содержанием ФИ в спермоплазме (г=-0,70; р<0,001) на фоне сохраняющихся зависимостей со стороны ФХ (как при гипокинезисе) и ТБК-позитивных веществ (как при нормокинезисе) в спермиях.

У больных с астенозоосиермией без признаков воспаления корреляционные зависимости, в отличие от контроля, приобретают иной характер. Так, при нормо- и гипокинезисе (категории А и В соответственно) возникают совершенно другие взаимоотношения, причем между уровнем ЛФХ в половых клетках и их подвижностью эта связь становится отрицательной. Вероятно активация фосфолипаз А2 и С приводит к падению скорости движения сперматозоидов, на что указывает наличие сильной обратной зависимости с ЛФЭА (г=-0,79; р<0,001) и прямой - с ФЭА (г=0,89; р<0,001). Эти изменения протекают на фоне активации процессов ПОЛ, которые в случае нормокинезиса способствуют прямолинейному движению с относительно высокой скоростью (не менее 25 мкм/сек), о чем свидетельствует положительная сильная взаимосвязь с уровнем ТБК-активных продуктов (г=0,90; р<0,001). Кроме того, снижение подвижности сопровождается и уменьшением количества сфингомиелина в половых клетках.

У данных пациентов при дискинезисе (категория С) появляются некоторые связи, присущие здоровым лицам (в аналогичной подгруппе), в частности отрицательные корреляции с ЛФХ в спермиях (гЮ,64; р<0,05) и с ФИ в семенной плазме (г=-0,81; р<0,005). Однако, в последней величины ФЭА (г=-0,62; р<0,05) имеют обратную взаимосвязь,

тогда как в контроле она прямая. Несколько необычной выглядит зависимость с Ко<310, поскольку снижение его содержания не вызывает повышение подвижности половых клеток.

Присоединение воспалительного компонента у больных с астенозс-осиермией резко снижает количество корреляций. Если при нормокине-зисс Iк две, то при гинокипезисе и дискинезисс остается по одной в каждой подгруппе. При этом в случае нормальной подвижности сперматозоидов регистрируется средней силы связь с содержанием ТБК-активных продуктов (г-0,50; р<0,05), как и в аналогичной подгруппе здоровых лиц. У непрогрессивно-подвижных клеток существует положительная зависимость с цифрами ФИ, тогда как в контроле она носит отрицательный характер. Эти результаты свидетельствуют о снижении значения сдвигов перекисного и фосфолипидного статуса и возрастании роли воспалительных реакций п ограничении подвижности сперматозоидов.

У пациентов с полизоосиермией также имеются существенные различия с контролем в характере корреляционных взаимоотношений между изучаемыми параметрами (рис. 6). Так, при нормокинезисе выявляются отрицательные связи (пять из шести) с уровнем ЛФЭА (г=-0,б2; р<0,05), ФЭА (г=-0,80; р<0,005) в семенной плазме, ЛФХ, ФИ и ТБК-активного материала в половых клетках, причем величины последнего у здоровых лиц имеют положительную зависимость.

При гииокинезисе и дискинезисе количество зависимостей уменьшается до четырех в каждой подгруппе, при этом в первой регистрируется прямая корреляция с содержанием клеточного коэнзима (г=0,81; р<0,005), а во второй - с цифрами ФЭА в плазме как у здоровых лиц.

При олигоспермии в случае нормокинезиса характер корреляционных зависимостей имеет определенное сходство с таковым как у пациентов с полизооспермией. Одинаковые по направлению и локализации связи регистрируются с уровнем ЛФХ, ФХ, промежуточных продуктов ПОЛ в сперматозоидах (г=-0,73; р<0,005) и ФЭА в семенной плазме (г=0,62; р<0,05), при этом, присутствующая и в контрольной группе, корреляция с ФХ половых клеток приобретает сильный характер (г-0,75; р<0,005).

Для прогрессивно-слабоподвижных спермиев (категория В) присущи совершенно иные (от описанных выше) корреляционные взаимоотношения между изучаемыми параметрами. Так, содержание сфин-гомиелина в клетках отрицательно коррелирует (г—0,75; р<0,001), а в плазме - положительно (г=0,74; р<0,005). Такая же закономерность характерна для ЛФХ и ФХ в семенной жидкости, а уровень первого

фосфолипида в сперматозоидах имеет прямую сильную зависимость с

их подвижностью (г=0,76; р<0,001).

При дискинезисе (категория С) в реципрокных отношениях находятся фракции ФЭЛ и ЛФЭА, которые равнозначно сильно влияют на подвижность половых клеток. В свою очередь концентрация ФХ (г-0,84; р<0,001) положительно взаимосвязана, а уровень АОА в половых клетках (г=-0,74; р<0,005) - отрицательно с их двигательной способностью.

Максимальное количество самых разнообразных зависимостей было характерно для больных с олигозооспермией, причем для всех подгрупп. Интересно отметить, что при прямолинейном движении клеток со скоростью не менее 25 мкм/сек регистрируются те же самые зависимости (с ФИ, ЛФХ, ФХ и ТБК-активными продуктами), что и у здоровых лиц при нормокинезисе. Однако в этом случае у данных пациентов появляются прямые корреляции с уровнем ФХ (г=0,55; р<0,05) и Код,0 (г-0,58; р<0,05) и обратная - с ЛФХ в сперматозоидах (г=-0,92; р-<0,001).

При гипокинезисе (категория В) существует лишь одна подобная с контролем связь в соответствующей подгруппе - с убихиноном, с содержанием ФИ в половых клетках эта связь меняет направление. Остальные пять зависимостей являются новыми. Подобная картина сдвигов по сравнению со здоровыми людьми характерна и для подгруппы "категория С".

Обращает на себя внимание то, что во всех подгруппах существуют связи между параметрами системы "ПОЛ - антиоксиданты" (Ко010 и ТБК-позитивным материалом) и подвижностью спермиев, причем если для категории клеток А и В эти взаимоотношения носят прямую направленность, то для непрогрессивно-подвижных клеток они становятся отрицательными. Данный факт, вероятно, обусловлен тем, что перекисный дисбаланс приводит к непрямолинейному движению сперматозоидов, либо их шевелению на месте.

При тератозооспермии для нормокинезиса регистрируются по две прямых и обратных зависимостей в патовых клетках. Величины ТБК-активных продуктов (г=0,84; р<0,005) и ЛФХ (г=0,83; р<0,005) положительно коррелировали с подвижностью сперматозоидов, причем если в первом случае эта связь была подобной как у здоровых лиц, то во втором - противоположной. Кроме того, в данной подгруппе существуют отрицательные корреляции с уровнем ФХ (г=-0,84; р<0,001) и АОА(г=(),83; р<0,001).

У прогрессивно-слабоподвижных сперматозоидов выявляются только две сильные прямые зависимости с КоО|0 (как в контроле) и фосфатидил-серином (г=0,86; р<0,001). Необходимо отметить, что у пациентов этой и вышеприведенной подгруппы скорость движения половых клеток зависела только от исследуемых клеточных показателей, а свойства семенной плазмы на этот параметр не оказывали никакого влияния.

При дискинезисе (категория С) характер корреляционных взаимоотношений изменяется: сохраняется как в контроле всего лишь одна положительная зависимость с уровнем ЛФХ; возникают новые сильные корреляции с содержанием ФЭА в сиермиях (г--0 83- р<0 001) ЛФХ (г--0,84; р<0,001) и ФХ в плазме (г-0,82; р<0,005),' при'этом первые две имеют отрицательную направленность; регистрируется прямая связь средней силы с уровнем сфингомиелина.

Резюмируя вышеизложенные данные в этом разделе, можно выделить некоторые общие закономерности: практически при всех видах пато-зооспермии между скоростью движения сперматозоидов и изученными биохимическими показателями возникают многочисленные разнообразные корреляционные зависимости, причем их характер определяется категорией подвижности клеток. Так, при нормокинезисе у пациентов с астено-, тераго-, олигозооспермией, как и у здоровых лиц, подвижность спсрмиев напрямую определяется интенсивностью процессов липоперок-сидации, а при олигослермии и полизоослермии эта связь приобретает противоположную направленность. Большее значение у больных с поли, олиго- и тератозооспермией для прогрессивно-слабоподвижных сперматозоидов имеют изменения содержания убихинона, дефицит которого приводит к подавлению скорости их движения. При дискинезисе общих закономерностей в проявлении корреляционных взаимоотношений у обследуемых больных не наблюдается. Аналогичные по направлению и силе связи, как у контроля в соответствующей подгруппе, регистрируются по величинам ЛФЭА в сперматозоидах при тератозооспермии, ФЭА в семенной жидкости при полизоослермии и ФИ в плазме при астекозоос-пермии без признаков воспаления.

Гаким образом, можно констатировать, что сдвиги фосфолипид-ного и перекисного статуса как в половых клетках, так и в окружающей их среде существенно влияет на подвижность сперматозоидов, что, в конечном итоге, может приводить к инфертильности. Следует отметить, что в случае наличия воспалительного компонента при пато-зооспермии роль этих изменений значительно уменьшается.

ВЫВОДЫ

1. При нарушении фертильности у мужчин, независимо от характера нарушений сперматогенеза, существенно изменяется спектр фосфо-липидов как половых клеток, так и их окружения, характеризующийся накоплением их лизоформ, дефицитом фосфатидилхолина, фосфатидилинозитола и сфингомиелина по сравнению с нормозо-оспермией. Наиболее глубокие сдвиги присущи лицам с астенозоо-, олигозоо- и тератозооспермией.

2 Рост уровня фосфатидилсерина (на 100% и более) характерен для семенной плазмы при всех формах патоспермии по сравнению со

сперматозоидами.

3. Величины параметров системы "ПОЛ - антиоксиданты" в крови практически всех обследованных пациентов находятся в пределах контрольных значений и не являются информативными.

4 В половых клетках наиболее значительные сдвиги перекисного статуса (накопление продуктов ПОЛ на фоне снижения антиокислительной активности) наблюдаются при полизоо- и астенозооспермии с наличием воспаления. У последних и лип со сниженной подвижностью сперми-ев без воспалительных признаков имеется существенный дефицит Ко(310 (разница более чем 2 раза) по сравнению с контролем. Промежуточное положение по степени нарушений перекисного гомеостаза в сперматозоидах занимают лица с тератозооспермией, а минимальные сдвиги регистрируются при олиго- и олигозооспермии.

5 В семенной плазме наибольшая интенсивность процессов липопе-роксидации при дефиците пула радикальных ингибиторов регистрируется у больных с полизоо-, олигозоо- и астенозооспермии с признаками воспалительного процесса.

6 При патозооспермшт между подвижностью сперматозоидов и биохимическими показателями имеются многочисленные корреляционные зависимости, причем их характер определяется категорией подвижности клеток. При нормокинезисе у пациентов с астено-, терато-, олигозоосперми-ей как и у здоровых лиц, подвижность спермиев прямо коррелирует с уровнем ТБК-активных продуктов в сперматозоидах, а при олигоспермии и полизооспермии эта связь становится отрицательной. Для прогрессивно-слабоподвижных клеток у болышх с поли-, олиго- и тератозооспермией большее значение имеют изменения убихинона в половых клетках, величины которого положительно связаны с их подвижностью. В случае наличия воспалительного компонента при астенозооспермии число статистически значимых корреляций существенно уменьшается.

7. Для клеток с подвижностью категории "С" общих закономерностей в проявлении корреляционных зависимостей у обследуемых больных не наблюдается. В сперматозоидах при тератозооспермии регистрируется сильная прямая связь с величинами ЛФЭА, а в спермоп-лазме у пациентов с полизооспермией существует аналогичная по направлению зависимость с уровнем ФЭА и при астенозооспермии без признаков воспаления - отрицательная корреляция с ФИ.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ: Статьи, опубликованные в рецензируемых журналах, определенных ВАК Минобрнауки России:

1. Хышнктуев Б.С., Кошмелев A.A. Особенности изменений фос-фолипидного состава семенной жидкости у мужчин с нарушением фертильностн // Клиническая лабораторная диагностика. - 2010. - №7. - С. 27-31.

2. Хышиктуев Б.С., Кошмелев A.A. Фосфолинидный статус сперматозоидов при нарушении фертильностн // Сибирский медицинский журнал. Иркутск. - 2010. - №5. - С. 72-75.

3. Кошмелев A.A., Хышиктуев Б.С., Терешков П.П. Некоторые параметры перикисного статуса спермоплазмы у мужчин с нарушением фертильиости [Электронный ресурс) // Забайкальский медицинский вестник. - 2012. - №1. . с. 46-50. - Режим доступа: http://medacadem. chita.ru/zmv (15.06.2012)

Работы, опубликованные в других изданиях:

4. Кошмелев A.A., Терешков П.П. Содержание коэнзима QI0 в спер-моплазме при нарушении фертильностн у мужчин // Актуальные проблемы клинической и экспериментальной медицины. Всероссийская научно-пракгическая конференция, посвященная 55-летию ЧГМА Чита, 1-2 октября 2003 г. - Чита, 2003. - С. 189.

5. Кошмелев A.A. Изучение параметров окислительного стресса у мужчин с инфертилыгостью // Материалы VIII научно-практической конференции урологов Дальнего востока "Современные технологии в Í009°™c"'8^Л8абГ°ВеЩеНСК' 19"2! октября 2009 г. - Благовещенск,

6. Бунина E.H., Казакова II.Ю„ Лаврищева Т.Г., Кошмелев А А Петрова М.В., Силецкая Н.Г., Ильина И.П Состояние сперматогенеза у мужчин репродуктивного возраста Забайкальского края // Забайкальский медицинский журнал. - 2011. - №4. - С. 34-35.

7. Кошмелев A.A., Хышиктуев Б.С., Терешков П.П. Окислительный стресс и мужская репродуктивная система // Материалы VIII международной научно-практической конференции "Научное пространство Европы", 7-15 апреля 2012 г. - Польша, 2012. - С. 61-65.

8. Кошмелев A.A. KoQIO спермоплазмы у мужчин с нарушением фер-тильнсти. // Сборник тезисов VII международного конгресса Г1ААР (профессиональной ассоциации андрологов России) Сочи 23-26 мая 2012 г. - Сочи, 2012. - С. 55.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

АОА -антиоксидантнаяактивность

дрЗ . антирадикальная защита

АСАТ - антисгхермальные антитела

АТФ - аденозинтрифосфат

АФК - активные формы кислорода

ВОЗ - всемирная организация здравоохранения

ВРТ - вспомогательные репродуктивные технологии

ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота

КоО - убихинон или коэнзим С210

ЛФХ - лизофосфагидилхолин

ЛФЭА - лизофосфатидилэтаноламин

МБ - мужское бесплодие

МДА - малоновый диальдегид

НАДФ - восстановленная форма никотшгамидадешшдинуклеотида фосфата

ОС - окислительный стресс

ПОЛ - перекисное окисление липидов

СМ - сфингомиелин

СОД - с-уперокс-иддисмутаза

Ср - свободные радикалы

СРО - свободиорадикальное окисление

ТБК -тиобарбитуровая кислота

ФИ - фосфатидилинозитол

ФЛ - фосфолиниды

ФС - фосфатидилсерин

ФХ - фосфатидилхолин

ФЭА - фосфатидилэтаноламин

Лицензия ИД №03077 от 23.10.00. Подписано в печать 16.11.2012. Бумага офсетная. Гаршпура Times NewRoman Формат 60 х 84 Усл. псч. л. 1,0 Тираж 100. Заказ № 180/2012.

Отпечатано в информационно-издательском центре ЧГМА 672090, Чита, ул. Горького, 39а.

Актуальность проблемы. Характерной чертой демографической ситуации в России в последние 15 лет является систематическая убыль абсолютной численности населения, которая происходит вследствие суженного его воспроизводства, когда последующее поколение меньше предыдущего [3, 77].

Сегодня от 14% до 20% супружеских пар репродуктивного возраста страдает бесплодием [7, 12, 46, 230].

В среднем каждая седьмая пара в мире бесплодна и в половине случаев это связано с нарушениями репродуктивной функции у мужчин [329].

Тенденция к росту мужского фактора в структуре бесплодного брака и ухудшению качества спермы диктует необходимость пристального изучения существующей проблемы [132, 202, 248, 286]. При этом обследование мужчин характеризуется гораздо меньшим риском для здоровья, так как в большинстве случаев не требует применения инвазивных процедур и может быть выполнено в более короткие сроки с меньшими затратами, нежели у женщин [54].

Хотя единого мнения о роли мужского фактора в бесплодном браке нет, так, по данным разных авторов, он составляет от 30 до 60% [17, 52].

Все это происходит па фоне общемировой тенденции ухудшения качества спермы (в 1,7 раза за период 60 лег) [18], которая прослеживается в Европе и в отдельных регионах России [89].

В многочисленных публикациях указывается на снижение как количественных, так и качественных показателей эякулята у мужчин во всем мире в последние десятилетия, что приводит к снижению их репродуктивных возможностей [129, 284].

Анализ причин бесплодия обнаруживает рост удельного веса мужского фактора за последние 20 лет в среднем на 10-12%. Данные ВОЗ, обобщившей наблюдения многих авторов за последние 40 лет, свидетельствуют об уменьшении репродуктивного потенциала мужчин. Среднестатистические параметры эякулята современного мужчины неуклонно снижаются. Например, концентрация половых клеток в семейной жидкости уменьшилась в 3 раза, и эта тенденция сохраняется: концентрация сперматозоидов снижается ежегодно примерно на 2 %, а их подвижность - на 1,5% [81]. В последние 10-15 лет нижняя граница количества спермиев в эякуляте, условно разделяющей нормоспермию и олигозооспермию, составляет 20 млн./мл [329]. Пересмотрены в сторону снижения так же и два других основных показателя спермограммы: относительное количество подвижных и морфологически нормальных форм. В настоящее время в соответствии с принятыми критериями ВОЗ (2000) подвижность более 50% спермиев при относительном содержании морфологически нормальных форм более 30% трактуется как нормоспермия. Таким образом, прослежена отчётливая тенденция к снижению активности сперматогенной функции у мужчин к концу XX - началу XXI века.

Исходя из вышеизложенного, одним из резервов снижения числа бесплодных браков может стать углубленное понимание причин и механизмов нарушений мужской репродуктивной функции, которые представляются недостаточно изученными. Поиск адекватных индикаторов репродуктивного здоровья мужчины, дополняющих и расширяющих рекомендованные ВОЗ методы диагностики, является актуальной на сегодняшний день задачей.

Цель исследования: раскрыть закономерности изменения показателей фосфолипидпого и перекисного статуса сперматозоидов и спермо-плазмы при бесплодии у мужчин.

Задачи исследования: 1. Изучить сдвиги спектра фосфолипидов эякулята у мужчин при различных вариантах патозооспермии.

2. Исследовать параметры системы «ПОЛ - антиоксиданты» и содержание коэнзима С>ю в крови и компонентах эякулята у ипфертильпых мужчин в зависимости от характеристики спермограммы.

3. Оценить характер корреляционных взаимоотношений между исследованными биохимическими показателями семенной жидкости и подвижностью половых клеток в норме и патологии фертильности.

Научная новизна. Впервые при мужском бесплодии раскрыты закономерности изменений параметров фосфолигшдного статуса сперматозоидов и семейной плазмы у пациентов с различными вариантами патоспер-мии. Показано, что независимо от характера нарушений сперматогенеза в компонентах эякулята по сравнению с нормозооспермией регистрируется накопление лизоформ фосфолипидов, дефицит фосфатидилхолина, фосфа-тидилинозитола и сфингомиелина. Наиболее выраженные сдвиги присущи лицам с астенозоо-, олигозоо- и тератозооспермией. При всех формах па-тоспермии в спермоплазме по сравнению с половыми клетками выявляется более значительное повышение уровня фосфагидилсерина (на 100% и более).

Приоритетным в работе явилось установление взаимосвязей между подвижностью сперматозоидов и изученными биохимическими показателями: при пормокипезисе у пациентов с астено-, терато-, олигозоосперми-ей, как и у здоровых лиц, подвижность спермиев прямо коррелирует с уровнем ТБК-активных продуктов в половых клетках, а при олигоспермии и полизооспермии эта связь становится отрицательной. Для прогрессивно-слабоподвижных клеток у больных с поли-, олиго- и тератозооспермией большее значение имеют изменения убихинона в спрематозоидах, величины которого положительно связаны с их подвижностью. В случае наличия воспалительного компонента при астенозооспермии число статистически значимых корреляций существенно уменьшается. Для клеток с подвижностыо категории «С» общих закономерностей в проявлении корреляционных зависимостей у обследуемых больных не наблюдается.

Теоретическая и практическая значимость работы. Полученные результаты расширяют представления о патогенезе мужской инфсртилыю-сги. В работе рассматриваются вероятные механизмы фосфолипидных сдвигов, происходящих как в сперматозоидах, так и в семенной плазме, а также особенности изменений показателей перекисного статуса при различных нарушениях сперматогенеза.

В половых клетках наиболее выраженный дисбаланс в системе «ПОЛ - антиоксиданты» выявляется при полизоо- и астеиозооспермии с наличием воспаления. При этом у последних и лиц со сниженной подвижностью спермиев без воспалительных признаков имеется более глубокий дефицит (разница более чем 2 раза) КоСЬо, что приводит еще и к подавлению подвижности мужских половых клеток. Данный факт обусловлен уменьшением интенсивности АТФ-генерирующих процессов, в которых немаловажную роль играет убихипоп. Промежуточное положение по степени нарушений перекисного гомеостаза в сперматозоидах занимают лица с тератозооспермией, а минимальные сдвиги характерны для пациентов с олиго- и олигозооспермией. В спермоплазме наибольшая степень разба-лансировки в системе «ПОЛ - антиоксиданты» наблюдается при полизоо-, олигозоо- и астеиозооспермии с наличием воспаления, а наименьшая - при сниженной подвижности половых клеток без воспалительных признаков. Полученные результаты необходимо учитывать, при назначении соответствующей антиоксидаптной терапии, эффективность которой при мужском бесплодии в настоящее время убедительно доказывается.

Внедрение в практику. Теоретические положения, раскрываемые в диссертации внедрены в учебный процесс кафедры патологической физиологии, кафедры химии и биохимии и курса урологии ГБОУ ВПО Читинская государственная медицинская академия Минздравсоцразвития РФ.

Апробация диссертации. Основные положения и результаты диссертации представлены и обсуждены на Всероссийской научно-практической конференции «Актуальные проблемы клинической и экспериментальной медицины», посвященной 55-летию ЧГМА. (Чита, 1-2 октября 2008 г.); на VIII паучпо-практической конференции урологов Дальнего востока "Современные технологии в урологии", (Благовещенск, 19 -21 сентября, 2009 г.); на III межрегиональной научно-практической конференции урологов Байкальского региона «Некоторые аспекты диагностики и лечения в урологии», (Чита, 3 ноября, 2010 г.); на IV межрегиональной конференции урологов Байкальского региона «Современные технологии в урологии», (Улан-Удэ, 19-20 августа, 2011 г.); на VIII международной научно-практической конференции "Научное пространство Европы", (Польша, 7-15 апреля, 2012 г.); VII международном конгрессе Г1ААР (профессиональной ассоциации андрологов России), (Сочи, 23 - 26 мая 2012 г.).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 8 печатных работ, из которых 3 статьи в рецензируемых научных журналах и изданиях, определенных ВАК Министерства образования и науки РФ.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 124 страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, главы собственных исследований, заключения, выводов, содержит 11 таблиц, иллюстрирована 10 рисунками. Указатель литературы включает 332 источника, из которых 97 отечественных и 235 зарубежных.

ВЫВОДЫ

1. При нарушении фертильности у мужчин независимо от характера нарушений сперматогенеза существенно изменяется спектр фосфолипи-дов как половых клеток, так и их окружения, характеризующийся накоплением их лизоформ, дефицитом фосфатидилхолина, фосфатидилино-зитола и сфингомиелина по сравнению с нормозооспермией. Наиболее глубокие сдвиги присущи лицам с астенозоо-, олигозоо- и тератозоос-пермией.

2. Рост уровня фосфатидилсерина (на 100% и более) характерен для семенной плазмы при всех формах патоспермии по сравнению со сперматозоидами.

3. Величины параметров системы «ПОЛ - антиоксиданты» в крови практически всех обследованных пациентов находятся в пределах контрольных значений и не являются информативными.

4. В половых клетках наиболее значительные сдвиги перекисного статуса (накопление продуктов ПОЛ па фоне снижения антиокислительной активности) наблюдаются при полизоо- и астепозооспермии с наличием воспаления. У последних и лиц со сниженной подвижностью спермиев без воспалительных признаков имеется существенный дефицит КоС)ю (разница более чем 2 раза) по сравнению с контролем. Промежуточное положение по степени нарушений перекисного гомеостаза в сперматозоидах занимают лица с тератозооспермией, а минимальные сдвиги регистрируются при олиго- и олигозооспермии.

5. В семенной плазме наибольшая интенсивность процессов липоперокси-дации при дефиците пула радикальных ингибиторов регистрируется у больных с полизоо-, олигозоо- и астепозооспермии с признаками воспалительного процесса.

6. При пагозооспермии между подвижностью сперматозоидов и биохимическими показателями имеются многочисленные корреляционные зависимости, причем их характер определяется категорией подвижности клеток. При нормокинезисе у пациентов с астено-, терато-, олигозоос-пермией, как и у здоровых лиц, подвижность спермиев прямо коррелирует с уровнем ТБК-активных продуктов в сперматозоидах, а при оли-госпермии и полизооспермии эта связь становится отрицательной. Для прогрессивно-слабоподвижных клеток у больных с поли-, олиго- и те-ратозооспермией большее значение имеют изменения убихинона в половых клетках, величины которого положительно связаны с их подвижностью. В случае наличия воспалительного компонента при астенозо-оспермии число статистически значимых корреляций существенно уменьшается.

7. Для клеток с подвижностью категории «С» общих закономерностей в проявлении корреляционных зависимостей у обследуемых больных не наблюдается. В сперматозоидах при тератозооспермии регистрируется сильная прямая связь с величинами ЛФЭА, а в спермоплазме у пациентов с полизооспермией существует аналогичная по напрвлению зависимость с уровнем ФЭА и при астенозооспермии без признаков воспаления - отрицательная корреляция с ФИ.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Охрана репродуктивного здоровья населения - одна из актуальных проблем современной медицины. Из всех физиологических систем человека наиболее чувствительной и лабильной является репродуктивная, и, как известно, в отличие от специфической патологии она в большей мере относится не столько к биологическому, сколько к социальному процессу, имеющему серьезное значение для оценки риска воспроизводства [55, 95]. Резкое увеличение численности пожилого населения, снижение уровня рождаемости, рост числа заболеваний, воздействие неблагоприятных экологических факторов привело к тяжелой демографической ситуации в мире [76]. Данные литературы свидетельствуют об отчетливой тенденции к увеличению частоты ипфертильного состояния мужчин во многих странах мира, достигая 30-50% [25, 96, 98, 267].

Фертильность мужчин может снижаться в результате следующих факторов:

• врожденные или приобретенные аномалии мочеполовых органов;

• инфекции мочеполовой системы;

• повышение температуры в мошонке (например, вследствие варикоцеле);

• эндокринные нарушения;

• генетические отклонения;

• иммунологические факторы [231].

Проблема мужского бесплодия напрямую связана с общебиологической проблемой механизмов, контролирующих точность и надежность передачи генетической информации в поколениях, обеспечивая наследственность и изменчивость. Бурное развитие экспериментальной эмбриологии и генетики позволяет преодолевать многие причины мужского и женского бесплодия с использованием методов вспомогательной репродуктивной технологии. Однако это требует тщательного изучения ближайших и отдалепных последствий искусственного вмешательства в репродуктивную сферу и разработки путей минимизации нежелательных последствий [94].

Приблизительно 15% сексуально активных пар не достигают беременности в течение 1 года и обращаются за помощью по этому поводу. В конечном счете 5% пар остаются бездетными, несмотря па попытки лечения. У половины (50%) бездетных пар бесплодие связано с «мужским фактором», проявляющимся отклонениями в параметрах эякулята. В ряде случаев женщина с хорошей способностью к зачатию может компенсировать субфертильность мужчины, поэтому обычно бесплодие проявляется при снижении фертильности у обоих партнеров [202].

По меньшей мере, в трети случаев причина мужского бесплодия не выявляется (идиопатическое бесплодие). Последнее обычно связано с гормональными нарушениями, возникающими вследствие загрязнения окружающей среды, процессом накопления свободных радикалов кислорода, генетическими отклонениями и рядом других факторов [135, 202].

Отсутствие четких диагностических критериев приводит к тому, что мужская стерильность с невыясненной этиологией может достигать 25% [1, 36, 67]. По другим данным, идиопатическими считаются от 30 до 75% случаев, что связывают с недостаточностью сведений об этиопатогенезе нарушений мужской фертильности [69, 204]. В последние десятилетия во всем мире происходит ухудшение качества репродуктивного здоровья мужчин за счет снижения активности сперматогенеза. Обнаружение более низкой концентрации сперматозоидов в эякуляте у 15-25% здоровых мужчин, имеющих детей, явилось причиной изменения нормативных показателей спермы. В процессе формирования инфертильности, обусловленной нарушениями гаметогенеза различной этиологии, происходит достоверное повышение эмбриональной смертности [267].

Важным звеном патогенеза в возникновении мужского бесплодия является нарушение биохимических и физико-химических свойств спермы

90]. Эксперты ВОЗ (2010) считают, что в 7-8% случаев причиной бесплодия служат нарушения качества спермы [327], в том числе и липидиого состава эякулята [8, 85, 86, 307, 326].

В настоящее время убедительно доказывается роль чрезмерной интенсификации свободпорадикальных процессов в репродуктивной системе как фактора, снижающего мужскую фертильность [5, 16, 49]. В небольших количествах активные формы кислорода (АФК) необходимы для нормальной регуляции функции сперматозоидов, процесса капациатации и акро-сомальиой реакции [32, 54, 197]. Однако, избыточная продукция АФК приводит к повреждению мембраны сперматозоидов, снижению их подвижности и нарушению оплодотворяющей способности [74]. Кроме того, АФК непосредственно повреждают ДНК хромосом [70, 197] и инициируют опосредованный эпдонуклеазами апоптоз сперматозоидов, что приводит, в конечном счете, к бесплодию [107, 203, 243]. Среди причин, приводящих к повышению продукции АФК, называют возраст, образ жизни (курение, избыточная масса тела, нехватка витаминов антиоксидантов и др.), иифекци-оппо-воспалительные заболевания, варикоцеле, диабет, многие другие [5]. Но значение каждого из них в развитии оксидативного стресса сперматозоидов требует уточнения.

Таким образом, одним из резервов снижения числа бесплодных браков может стать углубленное понимание причин и механизмов нарушений мужской репродуктивной функции, которые представляются недостаточно изученными. Поиск адекватных индикаторов репродуктивного здоровья мужчины, дополняющих и расширяющих рекомендованные ВОЗ методы диагностики, является актуальной па сегодняшний день задачей. В связи с вышеизложенным, целью настоящего исследования явилось раскрытие закономерностей сдвигов фосфолипидного спектра и показателей системы «ПОЛ - аптиоксиданты» в компонентах эякулята при различных видах па-тозооспермии.

Нами были изучены образцы эякулята у 120 инфертильных пациентов, которые в зависимости от характера изменений спермограммы были разделены следующие группы: с астеиозооспермией с признаками воспалительного процесса, астеиозооспермией без признаков воспалительного процесса, полизооспермией, олигоспермией, олигозооспермией и терато-зооспермией. В спермоплазме и сперматозоидах изучался спектр фосфо-липидов (ФЛ), а также уровень ТБК-активных продуктов, антиокислительная активность и содержание убихинона (коэнзима Ою).

В процессе оплодотворения участвуют две клетки (яйцеклетка и сперматозоид), при слиянии которых происходит взаимодействие двух клеточных мембран. Основу последних, как известно, представляет би-слой, состоящий из полярных (амфифильиых) липидов, главным образом фосфолипидов. В настоящее время многие авторы указывают на связь ФЛ с фертильностыо [8, 242], что подтверждается их использованием в качестве активных компонентов пищевых добавок и некоторых лекарственных препаратов, предназначенных для лечения недостаточности функции половых желез у мужчин [85, 87, 250]. Вероятно, не случайно для получения фосфолипидов, наиболее доступными для потребителей и технологов, являются яйца птиц и бобы сои. Эти источники представляют собой не что иное, как компоненты репродуктивных органов, то есть они самой природой предназначены для использования в качестве строительных блоков, необходимых для эффективного воспроизводства как в животном, так и в растительном мире [86]. Однако, в литературе имеется недостаточно сведений об изменениях спектра ФЛ в компонентах эякулята при мужской инфертильности.

Нами обнаружены значительные сдвиги фосфолипидного состава как половых клеток, так и семенной плазмы при патозооспермии, причем характер этих изменений незначительно зависел от вида нарушений сперматогенеза. Так, в сперматозоидах, практически при всех формах накапливаются лизофосфолипиды - ЛФХ и ЛФЭА, при этом доля первого увеличивается у всех обследованных, а содержание второго остается на уровне контрольных цифр лишь у больных с полизооспермией. Как известно, ли-зоформы ФЛ могут обладать про- или противовоспалительными свойствами, что определяется их уровнем в тканях [199]. Необходимо подчеркнуть, что рост ЛФХ был значительным (более чем в 2,5 раза) в группах лиц с по-лизоо-, олиго-, олигозоо- и астепозооспермией с признаками воспалеиия. На этом фойе повышение фракции ЛФЭА было гораздо меньше. Данные сдвиги могут быть обусловлены двумя разными механизмами: либо под влиянием фосфолипазы А2, либо активацией процессов липопероксидации [242]. В нашем случае, вероятно, преобладает второй вариант (см. раздел З.З.), хотя и не исключается чрезмерная активация ферментативного гидролиза ФЛ.

В сперматозоидах во всех исследуемых группах пациентов снижалось в среднем на треть содержание фосфатидилхолина, который поддерживает преимущественно ламеллярпую конфигурацию мембраны, что и объясняет значительный вклад ФХ в ее стабильность. В «неактивном» состоянии для мужских половых клеток характерна асимметричность фос-фолипидных слоев, осуществляющаяся за счет активности М§ -АТФ зависимых белков и флиппаз [212]. В процессе активации происходит восстановление симметрии локального участка мембраны сперматозоида (ак-росомы), что способствует слиянию с яйцеклеткой. В ряде работ показано индуцирующее влияние ФХ на акросомную реакцию [159, 192]. Цифры фосфатидилинозитола в половых клетках - еще одного фосфолипида, участвующего в процессе капацитации и акросомальном экзоцитозе, уменьшались при всех формах патологии, за исключением лиц с тератозооспер-мией. По нашему мнению, существенное падение уровня ФХ и ФИ является неблагоприятным признаком в плане фертильиости обследуемых пациентов.

В семенной плазме также регистрировались значительные отклонения в спектре ФЛ и имели подобную направленность как и в сперматозоидах, т.е. возрастали величины лизоформ на фоне падения доли ФХ и ФЭА, также наблюдался дефицит СМ и ФИ.

Обращает на себя внимание следующий факт: если в половых клетках повышение цифр фосфатидилсерина по сравнению с контролем было незначительным (на 13-34%) или имело лишь тенденцию к таковому, то в спермоплазме его уровень увеличивался в 2 и более раз, за исключением больных с тератозооспермией (рис. 10). В клеточных мембранах в физиологических условиях ФС за счёт постоянной активности флиппаз локализуется только па цитозольной стороне липидного бислоя [160]. В связи с этим можно предположить, что при патозооспермии усилены процессы апоптоза половых клеток, поскольку одним из его ранних признаков является экспрессия на внешней стороне плазматической мембраны специфических молекулярных маркеров (главным образом, фосфатидилсерина), распознаваемых фагоцитирующими клетками [225]. Немногочисленные работы, подтверждают факт усиления апоптоза сперматозоидов у бесплодных мужчин [123, 263, 288]. Вероятно в половых клетках избыток ФС «сбрасывается» с экстернальпого листка плазматической мембраны, что приводит к значительному росту величин ФС в спермоплазме.

В итоге, нарушения фосфолипидного статуса эякулята характерны для всех инфертильных пациентов, однако, наиболее глубокие сдвиги присущи лицам с астеиозоо-, олигозоо- и тератозооспермией. В основе этих изменений лежат, вероятно, следующие общие механизмы: 1) у всех обследуемых пациентов происходит чрезмерная активация фосфолипазы А2, которая приводит к увеличению лизоформ ФЛ как в половых клетках, гак и в их окружении. Данный факт обусловлен активацией свободпоради-кальных процессов в органах сперматогенеза и эякуляте; 2) организм пытается поддержать пул фосфатидилхолина и фосфатидилэтаполамипа, однако чрезмерная генерация лизоформ приводит к тому, что доля первых падает; 3) одной из причин дефицита ефингомиелипа является преимущественное использование ЦДФ-холина в синтезе фосфатидилхолина, а не данного сфинголипида; 4) рост уровня фосфатидилсерипа, помимо его участия в апоптозе, может быть связан с низкой активностью декарбокси-лирования ФС, что также приводит к снижению величии ФЭА; 5) возникающий системный недостаток фосфатидилипозитола, очевидно, вызван дефицитом инозитола в клетках мужской репродуктивной системы.

Астено- Астено- Поли- Олигоспермия Олиго- Тератозооспермия с зооспермия без зооспермия зооспермия зооспермия признаками признаков воспаления ворпаления

Сперматозоиды НСпермоплазма - достоверные различия по сравнению с нормозооспермией. Рис. 10. Содержание фосфатидилсерипа в сперматозоидах и спермоплазме у обследуемых лиц (нормозооспермия (контроль) - 100%).

Таким образом, выявленные изменения приводят к нарушениям не только структуры биомембран сперматозоидов, но и их функциональной активности, что возможно является одной из причин мужского бесплодия; изучение фосфолипидпого профиля эякулята может быть использовано в качестве дополнительного критерия диагностики нарушения фертильпости и оценки эффективности проводимой терапии.

На следующем этапе работы нами был оценен перекисный статус в крови и сперме, который характеризовался накоплением промежуточных продуктов липопероксидации на фойе подавления общей антиокислительной активности как в половых клетках, так и в их окружении. Степень дисбаланса в системе «ПОЛ - антиоксидапты» как в сперматозоидах, так и семенной плазме зависит от характера нарушений спермограммы, в отличие от сдвигов, которые происходят в крови. В сыворотке практически у всех обследованных пациентов изученные параметры не отличались от контрольных значений. Однако, в недавнем исследовании Б. Вепес1е11л е1 а1. (2012) сообщается, что в образцах крови, бесплодных мужчин регистрируются низкие величины общей АОА и витамина Е и каротиноидов, при этом цифры последних и АОА положительно коррелируют с количеством, подвижностью и морфологическими особенностями сперматозоидов, что свидетельствует о тесной связи между пулом аитиоксидаптов в крови и качеством спермы [174].

В половых клетках наиболее существенные сдвиги перекиспого статуса наблюдаются при полизоо- и астенозооспермии с наличием воспаления. Однако у последних и лиц со сниженной подвижностью снермиев без воспалительных признаков имеется более выраженный дефицит (разница более чем 2 раза) КоС)ю, что приводит еще и к подавлению подвижности мужских половых клеток. Это, вероятно, обусловлено уменьшением интенсивности АТФ-генерирующих процессов, в которых немаловажную роль играет убихинон [137]. Промежуточное положение по степени нарушений перекиспого гомеостаза в сперматозоидах занимают лица с терато-зооспермией, а минимальные сдвиги характерны для пациентов с олиго- и олигозооспермией.

В семенной плазме регистрируется несколько иные сдвиги: максимальный дисбаланс в системе «ПОЛ - аитиоксидапты» регистрируется при полизоо-, олигозоо- и астенозооспермии с наличием воспаления, а минимальный - при сниженной подвижности половых клеток без воспалительных признаков. Следует отметить, что у больных со сниженным объемом эякулята нарушения перекисиого статуса в спермоплазме выглядят достаточно выраженными. Подобные изменения были обнаружены и рядом других авторов [103, 187]. Результаты, полученные О.Р.ГлНагги, Ь.Папо (2007), свидетельствуют о сильной корреляции уровня внеклеточной эндотели-альиой СОД (есБОО) с сосудистой функцией у мужчин, страдающих бесплодием. Кроме того, ими показана взаимосвязь между увеличением активности есБОО и улучшением фертильности после применения препаратов, содержащих Ко(Зю, причем этот эффект был более выражен у пациентов с низкими базальными значениями ес80Э [241].

Результаты нашего исследования еще раз подтверждают важную патогенетическую роль локального оксидативпого стресса при мужской ин-фертильности, причем степень нарушений в компонентах семенной жидкости зависит от характера патоспермии. Данный факт необходимо учитывать, при назначении соответствующей аитиоксидаптной терапии, эффективность которой при мужском бесплодии в настоящее время убедительно доказывается [287].

Особый интерес представляли результаты корреляционного анализа между изученными биохимическими параметрами и подвижностью половых клеток.

Исходя из полученных данных можно предположить, что у здоровых лиц в прогрессивно-активноподвижных сперматозоидах (пормокинезис) умеренная активация свободнорадкальпых процессов (накопление промежуточных продуктов ПОЛ) способствует изменению мехаподинамических свойств мембраны сперматозоидов вследствие окисления полиненасыщенпых липидов [197]. Это приводит, с одной стороны, к повышению скорости движения половых клеток, а с другой - модификации фосфолипидпого состава как последних (ФИ), так и семенной плазмы (ЛФХ, ФХ). При ги-покииезисе (категория подвижности клеток «В»), вероятно, большее значение в обеспечении прямолинейного движения приобретает уровень уби-хинона Ко(Зю и доля фосфагидилинозитола, о чем свидетельствуют высокие положительные коэффициенты корреляции. В случае, когда движение сперматозоидов становится непрямолинейным, замедляется, вплоть до шевеления на месте, уменьшается доля ЛФЭА, ФХ и увеличивается содержание сфипгомиелина в половых клетках. Параллельно с этим в спермоплаз-ме повышается доля ФИ на фоне падения фракции ФЭА, как и при нормо-кинезисе подвижность также зависит и от уровня пероксидации липидов.

В случае патозооспермии между скоростью движения сперматозоидов и изученными биохимическими показателями возникают многочисленные разнообразные корреляционные взаимоотношения, причем их характер определяется категорией подвижности клеток. Так, при нормокипе-зисе у пациентов с астено-, терато-, олигозооспермией, как и у здоровых лиц, подвижность спермиев напрямую определяется интенсивностью процессов липопероксидации, а при олигоспермии и полизооспермии эта связь приобретает противоположную направленность. Большее значение у больных с поли-, олиго- и тератозооспермией для прогрессивио-слабоподвижных сперматозоидов имеют изменения содержания убихино-на, дефицит которого приводит к подавлению скорости их движения. Для категории клеток «С» общих закономерностей в проявлении корреляционных зависимостей у обследуемых больных не наблюдается. Аналогичные по направлению и силе связи, как у контроля в соответствующей подгруппе, регистрируются по величинам ЛФЭА в сперматозоидах при тератозо-оспермии, ФЭА в семенной жидкости при полизооспермии и ФИ в плазме при астенозооспермии без признаков воспаления. Следует отметить, что в случае наличия воспалительного компонента при астенозооспермии число статистически значимых корреляций существенно уменьшается.

Резюмируя данные корреляционного анализа, можно констатировать, что изученные биохимические показатели как в половых клетках, так и в окружающей их среде существенно влияют на подвижность сперматозоидов, что, в конечном итоге, может приводить к бесплодию.

Таким образом, в нашем исследовании были раскрыты новые закономерности изменений фосфолипидного и перекисного статуса в сперматозоидах и семейной плазме, установлены корреляционные взаимоотношения между изучаемыми параметрами и подвижностью половых клеток, что позволило расширить представления о патогенезе мужской ипфер-тилыюсти. В последнее десятилетие, произошел феноменальный рост наших знаний о мужской фертильности, функциях сперматозоидов, развитии диагностических средств и методов лечения мужского бесплодия. На фоне этого понимание роли окислительного стресса (ОС) в патогенезе различных нарушений сперматогенеза дало толчок развитию новых подходов к терапии данного состояния. Тем не менее, интенсификация свободноради-кальиых процессов является лишь одной из причин инфертильности, поэтому антиоксидаитная терапия должна проводиться только в случае значительного дисбаланса в системе «ПОЛ - антиоксиданты» или установленных повреждений ДНК. В настоящее время оценка этого дисбаланса не является рутинной в клинической практике. В связи с этим необходимо разработать простые и адекватные методы изучения окислительного стресса в мужской репродуктивной системе для определения пороговых значений показателей ОС, при превышении которых должны быть использованы препараты антиоксидаитпого действия.