Автореферат и диссертация по медицине (14.00.16) на тему:Оценка роли коннексинов в метастазировании меланомы В16 у мышей С57 В1
- Ученая степень
- кандидата медицинских наук
- ВАК РФ
- 14.00.16
Автореферат диссертации по медицине на тему Оценка роли коннексинов в метастазировании меланомы В16 у мышей С57 В1
На правах рукописи
Фёдоров Евгений Сергеевич
ОЦЕНКА РОЛИ КОННЕКСИНОВ В МЕТАСТАЗИРОВАНИИ МЕЛАНОМЫ В16 У МЫШЕЙ С57В1
14.00.16 - патологическая физиология 14.00.14 - онкология
Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук
Санкт-Петербург 2009
Работа выполнена на кафедре патофизиологии Государственного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Санкт-Петербургский государственный медицинский университет им. акад. И.П.Павлова Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию».
Научные руководители:
член-корр. РАН, доктор медицинских наук Дубина Михаил Владимирович доктор медицинских наук, профессор Манихас Георгий Моисеевич
Официальные оппоненты:
доктор медицинских наук, профессор Зайчик Альберт Михайлович доктор медицинских наук, профессор Орлова Рашида Вахидовна
Ведущая организация:
Военно-медицинская академия им. С.М. Кирова.
Защита состоится «__»_200_ г. в часов на заседании
Диссертационного Совета № Д 208.090.03
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО СПбГМУ им. акад. И.П.Павлова Росздрава.
Автореферат разослан «_»
Ученый секретарь Диссертационного Совета доктор медицинских наук, профессор
2009 г.
Митрейкин В.Ф.
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность темы.
Проблема метастазирования злокачественных опухолей всегда привлекала к себе неослабевающее внимание исследователей и клиницистов. Актуальность вопроса о поиске мер, предотвращающих возникновение и развитие метастазов трудно переоценить. При этом важнейшие данные о механизмах, лежащих в основе данного явления, могут быть получены преимущественно при анализе результатов экспериментальных исследований (Stracke M.L., Liotta L.A., 1992).
Меланома - злокачественная опухоль кожи с высоким метастатическим потенциалом. Каждый год во всем мире регистрируется 160000 новых случаев заболевания меланомой (Ries L.A.G. и соавт., 2003), Наиболее часто она диагностируется у мужчин европеоидной расы в популяциях, проживающих в солнечном климате (Markovic S.N. и соавт., 2007). По данным Всемирной организации здравоохранения ежегодно регистрируется около 48000 смертей от меланомы (Lucas R. и соавт., 2006). Большинство смертей обусловлено метастатическим поражением удаленных органов (Miller A.J., Mihm М.С. Jr., 2006).
Формирование метастазов меланомы является многокомпонентным процессом, который включает генетические изменения, нарушение взаимодействия эпидермальных меланоцитов с кератиноцитами, эндотелиоцитами, изменения ангиогенеза (Chin L., 2003; Haass N.K. и соавт., 2005). Метастазирование опухолей проходит через серию последовательных и перекрывающихся этапов, каждый из которых является лимитирующим (Chambers A.F. и соавт., 2002). Эти этапы включают: 1) инвазию опухолевых клеток в лимфатические или кровеносные сосуды с переносом их в лимфоузлы и отдаленные органы; 2) экстравазацию клеток в паренхиму органа; 3) пролиферацию клеток с формированием вторичных очагов; 4) формирование новых кровеносных сосудов для поддержания продолженного роста.
Обязательным этапом образования метастатического очага является проникновение клеток первичной опухоли из клеточного эмбола через стенку сосудов в окружающие нормальные ткани с последующим формированием вторичных опухолевых узлов. Одним из ключевых моментов данного процесса является формирование межклеточных контактов опухолевых клеток с эндотелиоцитами (Pollmann М.А. и соавт., 2005).
В создании информационных связей между клетками важнейшая и не всегда однозначная роль принадлежит коннексинам. Коннексины представляют собой семейство, по крайней мере, 12 белков, формирующих каналы щелевых контактов. Полуканалы щелевых контактов, именуемые коннексонами, построены из гомомерных или гетеромерных гексамеров коннексинов и обеспечивают путь для прямого пассажа ионов и низкомолекулярных молекул, включая вторичные посредники, между образующими этот тип связи клетками (Kumar N.M., Gilula N.B., 1996; Simon A.M., 1999). Данный тип межклеточных коммуникаций является обязательным в прямом, основанном на контактах, контроле роста клетки и важным для таких процессов, как дифференцировка клеток, регулирование объема клетки (Quist А.Р. и соавт., 2000), клеточный рост (Moorby С., Patel M., 2001).
В ряде работ показано, что межклеточное взаимодействие посредством щелевых контактов нарушается при канцерогенезе (Jamieson S. с соавт., 1998; Holden P.R. и соавт., 1997). С другой стороны, роль коннексинов в приобретении метастатического потенциала недостаточно изучена, и имеющиеся по этому вопросу данные противоречивы.
Олеамид - вещество, выделенное из спинно-мозговой жидкости кошек, находящихся в состоянии сонной депривации. Этот препарат неспецифически и обратимо блокирует межклеточную коммуникацию, опосредованную щелевыми контактами (Xiaojun G. и соавт., 1997). Известно об антипролиферативном (Bisogno Т. и соавт., 1998; Langstein J. с соавт., 1996) и вазорелаксирующем эффектах олеамида (Hoi P.M., Hiley C.R., 2006).
Таким образом, изучение механизмов возможного влияния на функциональные свойства межклеточных контактов является перспективным в решении проблемы предупреждения метастазирования.
Цель исследования.
Изучение роли межклеточных щелевых контактов в метастазировании меланомы В16 у мышей С57В1.
Задачи исследования.
1. Оценить влияние олеамида как неспецифического ингибитора межклеточной коммуникации, опосредованной межклеточными щелевыми контактами, на метастазирование меланомы В16 у мышей С57В1.
2. Исследовать дозозависимость эффекта олеамида на межклеточную коммуникацию в метастазах меланомы В16 у мышей С57В1.
3. Исследовать влияние режима введения олеамида до и после операции на межклеточную коммуникацию в метастазах меланомы В16 у мышей С57В1.
4. Выявить зависимость изменений пролиферативной активности клеток меланомы В16 в метастазах от функциональной активности межклеточных щелевых контактов.
Научная новизна.
Впервые исследовано влияние неспецифического блокирования межклеточной коммуникации, опосредованной межклеточными щелевыми контактами, на метастазирование in vivo.
Доказано влияние блокирования межклеточных щелевых контактов олеамидом на площадь и число формирующихся метастазов.
Получены новые данные об изменении пролиферативной активности клеток меланомы в метастазах на фоне блокирования межклеточной коммуникации.
Научно-практическая значимость.
Полученные данные о влиянии функционального состояния межклеточных щелевых контактов на процесс метастазирования меланомы В16 расширяют представления о молекулярных механизмах прогрессирования злокачественных опухолей. Показано, что неспецифическое ингибирование функции межклеточных щелевых контактов приводит к прогрессированию злокачественного процесса и влияет на все стадии развития меланомы В16 in vivo.
Результаты исследования могут быть рекомендованы для внедрения в учебный процесс на кафедрах патофизиологии и онкологии медицинских вузов при рассмотрении опухолевого процесса.
Новые данные являются перспективными для разработки мер по профилактике, диагностике и лечению метастазов меланомы в клинической практике.
Основные положения, выносимые на защиту
1. Ингибирование функции межклеточных щелевых контактов оказывает влияние на формирование и рост метастазов меланомы мышей.
2. Эффекты олеамида на развитие метастазов меланомы определяются дозой и режимами введения препарата.
3. Функциональное состояние межклеточной коммуникации в клетках метастазов меланомы определяет уровень пролиферативной активности и общую площадь метастазов.
Личный вклад автора в проведенное исследование заключается в осуществлении аналитического обзора данных зарубежной и отечественной литературы по изучаемой проблеме, а также составлении программы исследования (доля участия 85%). Автор непосредственно участвовал в проведении экспериментов in vivo, в сборе материала, проведении морфологических исследований, а также полностью выполнил
статистическое исследование полученного материала в рамках описательной статистики и многофакторной статистической обработки. В целом вклад автора в исследование превысил 90%.
Реализация работы
По материалам диссертации опубликовано 3 печатные работы, в том числе 2 в центральном научном журнале.
Структура и объем диссертации
Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, изложения результатов собственных исследований и их обсуждения, выводов и списка литературы. Работа изложена на 101 странице, иллюстрирована 1 таблицей, 3 фотографиями и 8 рисунками. Библиографический указатель включает в себя 310 источников, в том числе 307 на иностранных языках.
КРАТКОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ
Животные. Исследования проводили на мышах-самцах С57В1 (питомник «Рапполово» РАМН, Санкт-Петербург) 3-4-х недельного возраста. Животные (п=204) получали стандартный комбикорм и питьевую воду без ограничений. Животных содержали в полипропиленовых клетках при температуре 22±2 °С. Для устранения влияния естественного освещения на опухолевый процесс (Анисимов В.Н., Жукова О.В., 1994; Bartsch С. с соавт., 2001) в виварии был обеспечен искусственный режим с 12-ти часовой сменой света и темноты. Все животные проходили двухнедельный период адаптации перед началом экспериментов.
Экспериментальная модель. В качестве экспериментальной была использована модель метастазирования меланомы В16 у мышей С57В1, разработанная G. Poste и соавт. (1980). В работе использовали культуру клеток меланомы В16, поддерживаемую в НИИ онкологии им. H.H. Петрова.
С целью усиления злокачественного фенотипа и увеличения количества клеток меланомы перед проведением исследований проводили две последовательные трансплатации опухолевых клеток под кожу аксиллярной области мышам линии С57В1. При достижении опухолью размеров 1,0-1,5 см ее резецировали и диспергировали в растворе натрия хлорида 0,9%. Полученные клетки меланомы в количестве 2*10б вводили подкожно в подошву правой задней лапы мыши экспериментальной группы. Период времени от момента перевивки клеток меланомы до формирования на лапе у животных опухоли размером 8-10 мм составлял 3 недели.
На 21-22 день всем животным, у которых развились опухоли, выполняли ампутацию голени по методике, использованной Ito А. и соавт. (2004). Для наркоза во время операции использовали тиопентал натрия (Ферейн, Россия) в дозе 50 мг/кг подкожно. Ампутированные конечности с опухолями помещали в жидкий азот для последующего морфологического исследования. Через 28 дней после операции всех животных умерщвляли в парах эфира и выполняли аутопсию. Препараты легких помещали между двумя предметными стеклами (расстояние между стеклами - 0,5 мм) и сканировали аппаратом (Epson Perfection 2480, Япония) для получения цифрового изображения (фото 1). Затем препараты замораживали в жидком азоте для последующего гистологического исследования.
Фото 1. Легкие с метастазами меланомы В16 между предметными стеклами.
Общая продолжительность эксперимента от перевивки опухоли до аутопсии составляла 7 недель.
В результате эксперимента было получено 53 препарата первичных опухолей и 24 препарата легких с метастазами меланомы. Данные о животных, погибших ранее 7-ми недельного срока, в настоящей работе не представлены. Схема эксперимента представлена на рис. 1.
2 недели адаптации
2 недели
2 недели
3 недели
4 недели
Л
Рис. 1. Схема эксперимента.
Первая трансплантация меланомы под кожу аксиллярной области
Вторая трансплантация меланомы под кожу аксиллярной области
Трансплантация меланомы под кожу подошвы правой задней лапы
Ампутация голени с опухолью
Аутопсия
Воздействие олеамидом. Для неспецифического блокирования функции щелевых контактов использовали олеамид (Oleamide, Sigma, США). При выборе дозы препарата принимали во внимание ранее описанные дозозависимые физиологические эффекты, возникающие при его внутрибрюшинном введении животным (Huitron-Resendiz S. и соавт., 2001). Олеамид растворяли в диметилсульфоксиде (ДМСО, Розфарм, Украина). Препарат вводили подкожно в объеме 50 мкл раствора ДМСО 5 раз в неделю.
Группы животных. Экспериментальные животные были разделены на 7 групп. Всем животным (п=204) была перевита меланома В16. Формирование групп осуществлялось в соответствие с дозами и режимом введения олеамида (Табл. 1).
Группа 1 (п=29) - контрольная группа животных с перевитой меланомой В16.
Группа 2 (п=29) - группа животных, которым со 2-х суток после перевивки клеток меланомы до аутопсии подкожно вводили ДМСО в объеме 50 мкл.
Группа 3 (п=29) - группа животных, которым со 2-х суток после перевивки клеток меланомы до аутопсии подкожно вводили раствор натрия хлорида 0,9% в объеме 50 мкл.
Группа 4 (п=21) - животным со 2-х суток после перевивки клеток меланомы в течение 3-х недель до операции вводили раствор олеамида в дозе 1 мг/кг.
Группа 5 (п=23) - животным со 2-х суток после перевивки клеток меланомы до аутопсии вводили раствор олеамида в дозе 1 мг/кг.
Группа 6 (п=36) - животным со 2-х суток после перевивки клеток меланомы в течение 3-х недель до операции вводили раствор олеамида в дозе 10 мг/кг.
Группа 7 (п=37) - животным со 2-х суток после перевивки клеток меланомы до аутопсии вводили раствор олеамида в дозе 10 мг/кг.
и
№ Режим введения препарата Количество животных, п
Исходно Развалясь опухоль п выполнена ампутация голенв (отношение к исходному числу животных, */•) На момент аутопсии Животные с метастазами
1 - 29 9(31%) 8 2
2 ДМСО. с 2-х суток после перевивки опухоли до аутопсии 29 11(37,9%) И 4
3 Раствор ИаС!. 0.9%, с 2-х суток после перевивки опухоли до аутопсии 29 14 (48,3%) 7 3
4 Олеамид 1 мг/кг. с 2-х суток после перевивки опухоли в течение 3-х недель до операции 21 7 (33,3%) 7 5
5 Олеамид 1 мг/кг. с 2-х суток после перевивки опухоли до аутопсии 23 8 (34,8%) 6 5
6 Олеамид 10 мг/кг. с 2-х суток после перевивки опухоли в течение 3-х недель до операции 36 11 (30,55%) 4 1
7 Олеамид 10 мг/кг, с 2-х суток после перевивки опухоли до аутопсии 37 12 (32,4%) 10 4
Морфологическая оценка. В ходе эксперимента регистрировали число животных, у которых развилась опухоль; число животных, доживших до аутопсии; число животных с метастазами меланомы в легких.
При обработке цифровых фотографий макропрепаратов определяли общую площадь макропрепарата (мм2), площадь (мм2) и количество метастазов меланомы.
Для гистологического исследования кусочки тканей фиксировали в 10% нейтральном формалине (рН=7,2) и после обезвоживания проводили заливку кусочков ткани в парафин. Из парафиновых блоков готовили срезы толщиной 5 мкм. Обзорную окраску проводили гематоксилином-эозином.
Для иммуногистохимического окрашивания коннексинов в метастазах меланомы в легких мышей использовали поликлональные кроличьи антимышиные антитела к коннексину-26 в разведении 1:1000 (ШВю^юа!, С7853-01А, США). Для оценки пролиферативной активности клеток меланомы использовали иммуногистохимическое окрашивание моноклональными крысиными антимышиными антителами к белку Кл67 в разведении 1:500 (Бако, М7249, США). Инкубацию с первичными антителами проводили в течение 18 часов при температуре 6°С. В качестве вторых антител использовали универсальные наборы Еп\^боп (Бако, К4065, США): антикроличьи для антител к коннексину-26 и антикрысиные для антител к белку ¥лв1. Инкубацию со вторичными антителами проводили в течение 30 минут при температуре 37°С. Для проявления пероксидазы хрена применяли диаминобензидин (Бако, К3468, США) в течение 3-5 минут при комнатной температуре под контролем микроскопа. Для облегчения визуализации ядер при иммуногистохимическом окрашивании проводили докрашивание ядер гематоксилином в течение 2 минут под контролем микроскопа.
Для оценки результатов гистологических и иммуногистохимических исследований использовали систему компьютерного анализа микроскопических изображений, включающую световой оптический
микроскоп Nikon Eclipse E400, цифровую камеру Nikon DXM 1200, компьютер Intel Pentium 4 и программное обеспечение «Видеотест-Морфология 4.0» (Санкт-Петербург, «ООО Видео-Тест»; 2002).
Подсчеты проводили в 10 рандомизированных полях зрения при увеличении х200. При оценке количества коннексина-26 определяли отношение площади окрашенной цитоплазмы к общей площади цитоплазмы клеток в поле зрения. При оценке количества белка KÍ67 определяли отношение площади иммунопозитивных ядер к общей площади ядер.
Статистическая обработка результатов. Компьютерную обработку материалов, полученных в результате проведенных исследований, производили с помощью IBM-совместимого персонального компьютера с операционной системой Windows ХР («Microsoft Corp.», США), программы VideoTest Динамика 4.0 («ISTA Ltd.», Санкт-Петрбург), позволявшей проводить количественный анализ цифрового изображения.
Статистическая обработка результатов была выполнена при использовании стандартного программного обеспечения MS Excel 2002 с расчетом непарного критерия достоверности Стьюдента для малых выборок (t-test) для определения значимости межгрупповых отличий.
Результаты собственных исследований.
Влияние олеамида на развитие первичных опухолей и метастазов меланомы. Учитывая имеющиеся данные о роли МЩК в опухолевом процессе, была сделано предположение о возможном влиянии их неспецифического обратимого блокирования на развитие первичных опухолей и метастазов меланомы.
В результате перевивки клеток меланомы В16 наибольшее количество опухолей развилось в группе 3 (введение раствора натрия хлорида 0,9%) - у 48,3% животных, наименьшее число (30,1%) в группе 6 (введение олеамида в дозе 10 мг/кг в течение 3-х недель до операции). Обращает внимание, что в этих же группах была наиболее высокая послеоперационная летальность: 4-х
недельная выживаемость после операции в этих группах составила 50,0% и 36,4% животных, соответственно (р<0,05).
В ходе макроскопической оценки у животных в группах 4 и 5, получавших 1 мг/кг олеамида, метастазы в легких обнаружили у 71,4% и 83,3%, соответственно. При введении 10 мг/кг олеамида до операции индукция формирования метастазов не отличалась от таковой в группе контроля и составила 25%. Однако после введения такой же дозы препарата после операции метастазы обнаружены у 40% животных.
Общее количество метастазов в легких (рис. 3) незначительно отличалось от показателя контрольной группы (N=20) в группах животных 2 и 3, и превышало данный показатель у животных групп 4 и 5, получавших 1 мг/кг олеамида. Наименьшим оно было у животных при введении 10 мг/кг
препарата
30
о ; 25 6 Е20
с 15
1 10 в-
1 5
Контроль ДМСО ФР 1мг до 1мг до и 10 мг до 10 мг до и
после после
Рис. 3. Общее количество метастазов в легких.
Средняя площадь метастазов в легких (рис. 4) была наименьшей в контрольной группе животных. В группе животных 4 на фоне введения 1 мг/кг олеамида до операции наблюдалось достоверное увеличение средней площади метастазов в 18 раз по сравнению с контролем (р<0,01); при продолженном введении животным олеамида в дозе 1 мг/кг после операции отмечается снижение площади на 75,7% по сравнению с животными группы 4 (р<0,01). У животных группы 5 при введении препарата в дозе 10 мг/кг до операции отмечено увеличение площади метастазов по сравнению с
контролем на 650% (р<0,01). На фоне воздействия олеамида после удаления опухоли у животных группы 7 была отмечена тенденция к увеличению средней площади метастазов по сравнению с животными группы 6 на 107,7%. Общая тенденция изменений общей площади метастазов в экспериментальных группах соответствует изменениям средней площади.
8 45
и 40
м 35
б 30
§ 25
Ё 20 -
I 15 "
I 10"
I о '
1,777
4042
*
32^92
+
12518
27,702
* Ш37 8,253
- У ^ ^ У У
* * А* **
Рис. 4. Средняя площадь метастазов в легких (* - р<0,01).
Исследование влияния блокирования МШК на распределение коннексина-26 в клетках меланомы. Для исследования определяли долю площади окрашенной цитоплазмы в общей площади поля зрения. Все опухоли в легких были гистологически верифицированы как меланомы (фото 2, фото 3).
В группах животных с введением ДМСО и раствора хлорида натрия 0,9% отмечено достоверное снижение содержания Сх26 по сравнению с контролем (р<0,05 в обеих группах) (рисунок 5). В группе животных 4 на фоне введения 1 мг/кг олеамида до операции отмечена тенденция к
Фото 2. Метастаз меланомы в легком (гематоксилин-эозин, *20).
Фото 3. Метастаз меланомы в легком (гематоксилин-эозин, *40).
увеличению площади окраски цитоплазмы. На фоне продолженного после операции введения олеамида в дозе 1 мг/кг у животных группы 5 отмечали достоверное при сравнении с группой 4 снижение содержания Сх26 (р<0,01). В группах животных с введением 10 мг/кг олеамида наблюдали увеличение площади окрашивания цитоплазмы по сравнению с контролем (р<0,05 в группе 6; р<0,01 в группе 7). На фоне продолженного введения олеамида в дозе 10 мг/кг в группе 7 была отмечена тенденция к увеличению площади окрашивания цитоплазмы по сравнению с группой 6.
40 ч 35 ■ 30 -25 ■ % 20 -15 -10 -5 -
** 35,1
21,8
30
1*1
*
15,1
1(|,5
+* 1&.8
',2
Контроль ДМ СО
ФР 1 мгдо 1 мгдо и Юнг до 10 мг до и после после
Рис. 5. Площадь окраски цитоплазмы, Сх, % (* - р<0,05; ** - р<0,01).
Пролиферативная активность клеток меланомы. Была выявлена тенденция к снижению пролиферативной активности клеток меланомы в группе животных, получавших ДМСО (рисунок 6). В группе животных 3 наблюдали увеличение площади окрашивания ядер (р<0,01). В группе животных 4 с введением 1 мг/кг олеамида до операции отмечено увеличение количества пролиферирующих клеток (р<0,05), на фоне продолженного введения олеамида в группе животных 5 отмечено снижение пролиферативной активности по сравнению с группой 4 (р<0,05). В группах животных с введением 10 мг/кг олеамида наблюдали значительное
увеличение количества делящихся клеток по сравнению с контролем (р<0,01 и р<0,001 для групп 6 и 7, соответственно).
%
100 Р -1 80 Р -60р -40 р -20 р -
0Р
12
0,5
*** 832
XX
4,1
А
2,1
**
Контроль ДМСО № 1 мгдо 1 мгдои 10 мгдо 10 мгдо и
после после
Рис. 6. Площадь окраски ядер клеток на Кл67, % (* - р<0,05; ** - р<0,01; ***-р<0,001).
Анализируя полученные данные, можно предположить, что введение олеамида в использованных нами режимах и дозах, не оказывает выраженного влияния на развитие первичной опухоли. Ингибирование функции щелевых контактов становится заметным и значимым при метастазировании, после того как клетки опухоли преодолевают тканевые барьеры, формируя информационные каналы с различными типами клеток хозяина. Мы выявили дозозависимый эффект олеамида на развитие метастазов меланомы. В группах животных, получавших олеамид до операции, отмечено увеличение содержания Сх26 в цитоплазме. Данное явление можно связать с включением механизма обратной связи -увеличением синтеза коннексинов в ответ на блокирование работы МЩК. Во всех группах, получавших олеамид, мы наблюдали повышение уровня пролиферации клеток в метастазах, особенно значительное при введении олеамида в дозе 10 мг/кг. При блокированных МЩК данный эффект можно объяснить нарушением приема клеткой контролирующих деление сигналов.
Результаты собственных исследований позволяют сделать вывод о том, что функциональное состояние межклеточной коммуникации, опосредованной щелевыми контактами, оказывает влияние на уровень пролиферации в метастазах меланомы и общую площадь метастазов.
ВЫВОДЫ.
1. Ингибирование функции межклеточных щелевых контактов олеамидом влияет на процесс метастазирования меланомы мышей.
2. Частота развития метастазов меланомы определяется дозой олеамида. Введение низких доз препарата (1 мг/кг) приводит к повышению частоты развития вторичных опухолей в легких мышей, высокие дозы (10 мг/кг) препарата вызывают уменьшение частоты метастазирования.
3. Экспрессия Сх26 в клетках метастазов меланомы на фоне ингибирования межклеточной коммуникации изменяется в зависимости от режима введения олеамида.
4. В механизме усиления метастатической активности меланомы играет роль повышение числа пролиферирующих клеток в метастазах и увеличение содержания Сх26 в цитоплазме.
СПИСОК РАБОТ. ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ
1. Дубина М.В., Петрищев H.H., Панченко A.B., Федоров Е.С., Анисимов В.Н. "Циркадианные особенности канцерогенеза толстой кишки, индуцированного 1,2-диметилгидразином у крыс", Вопросы онкологии, 2002, Т.48, №3,-с. 331-334.
2. Фёдоров Е.С., Манихас Г.М., Петрищев H.H., Дубина М.В. К вопросу о роли межклеточных щелевых контактов в метастазировании меланомы у мышей. // Вопросы онкологии. - 2006. - Т. 52(4). - С. 433-437.
3. М.В. Дубина, Г.М. Манихас, Е.С. Федоров. Макроскопическая оценка роли межклеточных щелевых контактов в метастазировании меланомы у мышей. // Актуальные вопросы клинической онкологии. Юбилейный сборник научных трудов, посвященный 60-летию Санкт-Петербургского государственного учреждения здравоохранения «Городской клинический онкологический диспансер». - 2006. - СПб.: Аграф +, - С. 133-135.
Отпечатано в типографии Микроматикс, Большой пр., В.О., д. 55, тел. 328-5263. Заказ № 0133, подписано в печать 20.03.2009, тираж ЮОэкз., формат 147x210
Оглавление диссертации Федоров, Евгений Сергеевич :: 2009 :: Санкт-Петербург
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ ВВЕДЕНИЕ
1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1. Меланома.
1.1.1. Эпидемиология, факторы риска развития меланомы.
1.1.2. Роль молекулярно-биологических факторов в развитии меланомы.
1.2. Метастазирование.
1.2.1. Экспериментальные модели метастазирования.
1.2.2. Этапы и механизмы развития метастазов.
1.3. Коннексины — белки межклеточных щелевых контактов.
1.3.1. Молекулярная структура межклеточных щелевых каналов.
1.3.2. Функциональная значимость межклеточных щелевых контактов.
1.3.3. Роль коннексинов в опухолевом процессе.
1.3.4. Олеамид и блокирование функции межклеточных щелевых контактов.
2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1. Введение
2.2. Животные
2.3. Экспериментальная модель
2.4. Воздействие олеамидом
2.5. Группы животных
2.6. Морфологическая оценка
2.7. Статистическая обработка результатов.
3. Результаты собственных исследований —
3.1. Влияние олеамида на развитие первичных — 54 опухолей и метастазов меланомы
3.2. Исследование влияния блокирования МЩК на — 56 распределение коннексина-26 в клетках меланомы
3.3. Пролиферативная активность клеток меланомы —
4. Обсуждение результатов собственных исследований —
5. ВЫВОДЫ j —
Введение диссертации по теме "Патологическая физиология", Федоров, Евгений Сергеевич, автореферат
Актуальность темы.
Проблема метастазирования злокачественных опухолей всегда привлекала к себе неослабевающее внимание исследователей и клиницистов. Актуальность вопроса о поиске мер, предотвращающих возникновение и развитие метастазов трудно переоценить. При этом важнейшие данные о механизмах, лежащих в основе данного явления, могут быть получены преимущественно при анализе результатов экспериментальных исследований (Stracke M.L., Liotta L.A., 1992).
Меланома - злокачественная опухоль кожи с высоким метастатическим потенциалом. Каждый год во всем мире регистрируется 160000 новых случаев заболевания меланомой (Ries L.A.G. и соавт., 2003). Наиболее часто она диагностируется у мужчин европеоидной расы в популяциях, проживающих в солнечном климате (Markovic S.N. и соавт., 2007). По данным Всемирной организации здравоохранения ежегодно регистрируется около 48000 смертей от меланомы (Lucas R. и соавт., 2006). Большинство смертей обусловлено метастатическим поражением удаленных органов (Miller A.J., Mihm М.С. Jr., 2006).
При стадировании меланомы критическим является вопрос наличия метастазов в другие органы и ткани. В случае нераспространенного заболевания важным критерием эффективности лечения является хирургическое удаление первичной опухоли до достижения меланомой толщины в 1 мм (Swanson N.A. и соавт., 2002). При метастазировании меланомы в лимфоузлы прогностическим фактором является количество лимфоузлов, пораженных опухолью (Homsi J. и соавт., 2005). Также должна учитываться степень распространения злокачественного процесса в пределах лимфоузла: в случае наличия микрометастазов прогноз лучше, чем при макрометастазах (Markovic S.N. и соавт., 2007). Однако, если меланома распространилась за пределы лимфоузлов в отдаленные органы, заболевание в большинстве случаев считается инкурабельным, и 5-ти летняя выживаемость составляет менее 10% (Vantyghem S.A. и соавт., 2003).
Формирование метастазов меланомы является многокомпонентным процессом, который включает генетические изменения, нарушение взаимодействия эпидермальных меланоцитов с кератиноцитами, эндотелиоцитами, изменения ангиогенеза (Chin L., 2003; Haass N.K. и соавт., 2005). Метастазирование опухолей проходит через серию последовательных и перекрывающихся этапов, каждый из которых является лимитирующим (Chambers A.F. и соавт., 2002). Эти этапы включают: 1) инвазию опухолевых клеток в лимфатические или кровеносные сосуды с переносом их в лимфоузлы и отдаленные органы; 2) экстравазацию клеток в паренхиму органа; 3) пролиферацию клеток с формированием вторичных очагов; 4) формирование новых кровеносных сосудов для поддержания продолженного роста.
Обязательным этапом образования метастатического очага является проникновение клеток первичной опухоли из клеточного эмбола через стенку сосудов в окружающие нормальные ткани с последующим формированием вторичных опухолевых узлов. Одним из ключевых моментов данного процесса является формирование межклеточных контактов опухолевых клеток с эндотелиоцитами (Pollmann М.А. и соавт., 2005).
В создании информационных связей между клетками важнейшая и не всегда однозначная роль принадлежит коннексинам. Коннексины представляют собой семейство, по крайней мере, 12 белков, формирующих каналы щелевых контактов. Полуканалы щелевых контактов, именуемые коннексонами, построены из гомомерных или гетеромерных гексамеров коннексинов и обеспечивают путь для прямого пассажа ионов и низкомолекулярных молекул, включая вторичные посредники, между образующими этот тип связи клетками (Kumar N.M., Gilula N.B., 1996; Simon A.M., 1999). Данный тип межклеточных коммуникаций является обязательным в прямом, основанном на контактах, контроле роста клетки и важным для таких процессов, как дифференцировка клеток, регулирование объема клетки (Quist А.Р. и соавт., 2000), клеточный рост (Moorby С., Patel М., 2001).
В ряде работ показано, что межклеточное взаимодействие посредством щелевых контактов нарушается при канцерогенезе (Jamieson S. с соавт., 1998; Holden P.R. и соавт., 1997). С другой стороны, роль коннексинов в приобретении метастатического потенциала недостаточно изучена, и имеющиеся по этому вопросу данные противоречивы.
Олеамид — вещество, выделенное из спинно-мозговой жидкости кошек, находящихся в состоянии сонной депривации. Этот препарат неспецифически и обратимо блокирует межклеточную коммуникацию, опосредованную щелевыми контактами (Xiaojun G. и соавт., 1997). Известно об антипролиферативном (Bisogno Т. и соавт., 1998; Langstein J. с соавт., 1996) и вазорелаксирующем эффектах олеамида (Hoi P.M., Hiley C.R., 2006).
Таким образом, изучение механизмов возможного влияния на функциональные свойства межклеточных контактов является перспективным в решении проблемы предупреждения метастазирования.
Цель исследования.
Изучение роли межклеточных щелевых контактов в метастазировании меланомы В16 у мышей С57В1.
Задачи исследования.
1. Оценить влияние олеамида как неспецифического ингибитора межклеточной коммуникации, опосредованной межклеточными щелевыми контактами, на метастазирование меланомы В16 у мышей С57В1. s
2. Исследовать дозозависимость эффекта олеамида на межклеточную коммуникацию в метастазах меланомы В16 у мышей С57В1.
3. Исследовать влияние режима введения олеамида до и после операции на межклеточную коммуникацию в метастазах меланомы В16 у мышей С57В1.
4. Выявить зависимость изменений пролиферативной активности клеток меланомы В16 в метастазах от функциональной активности межклеточных щелевых контактов.
Научная новизна.
Впервые исследовано влияние неспецифического блокирования межклеточной коммуникации, опосредованной межклеточными щелевыми контактами, на метастазирование in vivo.
Доказано влияние блокирования межклеточных щелевых контактов олеамидом на площадь и число формирующихся метастазов.
Получены новые данные об изменении пролиферативной активности клеток меланомы в метастазах на фоне блокирования межклеточной коммуникации.
Научно-практическая значимость.
Полученные данные о влиянии функционального состояния межклеточных щелевых контактов на процесс метастазирования меланомы В16 расширяют представления о молекулярных механизмах прогрессирования злокачественных опухолей. Показано, что неспецифическое ингибирование функции межклеточных щелевых контактов приводит к прогрессированию злокачественного процесса и влияет на все стадии развития меланомы В16 in vivo.
Результаты исследования могут быть рекомендованы для внедрения в учебный процесс на кафедрах патофизиологии и онкологии медицинских вузов при рассмотрении опухолевого процесса.
Новые данные являются перспективными для разработки мер по профилактике, диагностике и лечению метастазов меланомы в клинической практике.
Основные положения, выносимые на защиту
1. Ингибирование функции межклеточных щелевых контактов оказывает влияние на формирование и рост метастазов меланомы мышей.
2. Эффекты олеамида на развитие метастазов меланомы определяются дозой и режимами введения препарата.
3. Функциональное состояние межклеточной коммуникации в клетках метастазов меланомы определяет уровень пролиферативной активности и общую площадь метастазов.
Реализация работы
По материалам диссертации опубликовано 3 печатные работы, в том числе 2 в центральном научном журнале.
Структура и объем диссертации
Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, изложения результатов собственных исследований и их обсуждения, выводов и списка литературы. Работа изложена на 101 странице, иллюстрирована 1 таблицей, 3 фотографиями и 8 рисунками. Библиографический указатель включает в себя 310 источников, в том числе 307 на иностранных языках.
Заключение диссертационного исследования на тему "Оценка роли коннексинов в метастазировании меланомы В16 у мышей С57 В1"
5. ВЫВОДЫ.
1. Ингибирование функции межклеточных щелевых контактов олеамидом влияет на процесс метастазирования меланомы мышей.
2. Частота развития метастазов меланомы определяется дозой олеамида. Введение низких доз препарата (1 мг/кг) приводит к повышению частоты развития вторичных опухолей в легких мышей, высокие дозы (10 мг/кг) препарата вызывают уменьшение частоты метастазирования.
3. Экспрессия Сх26 в клетках метастазов меланомы на фоне ингибирования межклеточной коммуникации изменяется в зависимости от режима введения олеамида.
4. В механизме усиления метастатической активности меланомы играет роль повышение числа пролиферирующих клеток в метастазах и увеличение содержания Сх26 в цитоплазме.
6. ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ.
Повышение злокачественности фенотипа опухоли при обратимом блокировании функции межклеточных щелевых контактов должно учитываться в экспериментальной и клинической медицине с использованием препаратов, влияющих на межклеточную коммуникацию.
Список использованной литературы по медицине, диссертация 2009 года, Федоров, Евгений Сергеевич
1. Анисимов В.Н., Жукова О.В. Циркадианные вариации канцерогенеза, индуцируемого у крыс N-нитрозометилмочевиной // Экспер. онкол. - 1994. — Т. 16.-С. 123-127.
2. Вагнер Р.И., Анисимов В.В., Пахомов А.Г. Метастазы меланомы кожи в лимфатические узлы и внутренние органы без клинически определяемой первичной опухоли. // Вопр. Онкологии, -1982, № 9, с. 111-113.
3. Лемехов В.Г. Эпидемиология, факторы риска, скрининг меланомы кожи. // Практическая онкология, -2001, №4, с. 3-11.
4. Ai Z., Fischer A., Spray D.C. et al. Wnt-1 regulation of connexin43 in cardiac myocytes // The Journal of Clinical Investigation. 2000. - Vol.105. - №2. - P.161-171.
5. Albino A.P., Nanus D.M., Mentle I.R. et al. Analysis of ras oncogenes in malignant melanoma and precursor lesions: correlation of point mutations with differentiation phenotype. // Oncogene. 1989. - Vol. 4. - P. 1363-1374.
6. Albino A. P., Vidal M.J., McNutt N.S. et al. Mutation and expression of the p53 gene in human malignant melanoma // Melanoma Res. 1994. - Vol. 4. - P. 35-45.
7. Alonso S.R., Tracey L., Ortiz P. et al. A high-throughput study in melanoma identifies epithelial-mesenchymal transition as a major determinant of metastasis. // Cancer Res. 2007. - Vol. 67. - P. 3450-3460.
8. Atnip K. D., Carter L.M., Nicolson G.L., Dabbous M.K. Chemotactic responce of rat mammary adenocarcinoma cell clones to tumor-derived cytokines // Biochem. Biophys. Res. Comm. 1987. - Vol 146. - P. 996-1002.
9. Axelrod J. H., Reich R., Mishkin R. Expression of human recombinant plasminogen activators enhances invasion and experimental metastasis of H-ras-transformed N1H 3T3 cells // Mol. Cell Biol. 1989. - Vol. 9. - P 2133-2141.
10. Aznavorian S., Stracke M.L., Krutzsch H.C. et al. Signal transduction for chcmotaxis and haptotaxis by matrix molecules in tumor cells // J. Cell. Biol. -1990. Vol. 110. - P. 1427-1238.
11. Bahuau M., Vidaud D., Jenkins R.B. et al. Germ-line deletion involving the INK4 locus in familial proneness to melanoma and nervous system tumors // Cancer Res. 1998. - Vol. 58. - P. 2298-2303.
12. Balch C.M. Cutaneous melanoma: prognosis and treatment results worldwide. // Semin Surg Oncol. 1992. - Vol. 8. - P. 400-414.
13. Bartsch C., Bartsch H., BJask D.E. et al. The Pineal Gland and Cancer. Neuroimmunoendocrine Mechanisms in Malignancy. Berlin: Springer, 2001.- 578 P
14. Bastian B.C., Kashani-Sabet M., Hamm H. et al. Gene amplifications characterize acral melanoma and permit the detection of occult tumor cells in the surrounding skin. // Cancer Res. 2000. - Vol. 60. - P. 1968-1973.
15. Bastian В. C., LeBoit P., Hamm H. Chromosome gains and losses in primary cutaneous melanomas detected by comparative genomic hybridization // Cancer Res. 1998. - Vol. 58. - P. 2170.
16. Batlle E., Sancho E., Franci C. et al. The transcription factor Snail is a repressor of E-cadherin gene expression in epithelial tumour cells. // Nat. Cell. Biol. 2000. - Vol. 2. - P. 84-89.
17. Becker В., Roesch A., Hafner C. et al. Discrimination of melanocytic tumors by cDNA array hybridization of tissues prepared by laser pressure catapulting. // J Invest Dermatol. 2004. - Vol. 122. - P. 361-368.
18. Bennett M. V., Barrio L.C., Bargiello T.A. et al. Gap junctions: new tools, new answers, new questions // Neuron. 1991. - Vol. 6. - №3. - P. 305-320.
19. Bishop D. Т., Demenais F., Goldstein A.M. et al. Geographical variation in the penetrance of CDKN2A mutations for melanoma // J. Natl. Cancer Inst. 2002. -Vol. 94.-P. 894-903.
20. Boger D. L., Patterson J. E., Jin Q. Structural requirements for 5-HT2A and 5-HT1A serotonin receptor potentiation by the biologically active lipid oleamide // Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 1998. - Vol. 95. - P. 4102-4107.
21. Box N. F., Duffy D.L., Chen W.et al. MC1R genotype modifies risk of melanoma in families segregating CDKN2A mutations // Am. J. Hum. Genet. -2001. Vol. 69. -P. 765-773.
22. Brewerton T. D. Toward a unified theory of serotonin dysregulation in eating and related disorders // Psychoneuroendocrinology. 1995. - Vol. 20. - P. 561-590.
23. Brookes S., Rowe J., Ruas M. et al. INK4a-deficient human diploid fibroblasts are resistant to RAS-induced senescence // EMBO J. 2002. - Vol. 21. - P. 2936-2945.
24. Brossart P., Keilholz U., Willhauck M. et al. Hematogenous spread of malignant melanoma cells in different stages of disease // J. Invest. Dermatol. -1993. Vol. 101. - №6. - P. 887-889.
25. Cachia A. R., Indsto J.O., McLaren K.M. et al. CDKN2A mutation and deletion status in thin and thick primary melanoma // Clin. Cancer Res. 2000. -Vol. 6.-P. 3511-3515.
26. Casali В., Lampugnani M. G., Riganti M. et al. DMSO-induced changes in the procoagulant and fibrinolytic activity of B16 melanoma cells: influence on lung colony formation // Clin. Exp. Metastasis. 1988. - Vol. 6. - №5. - P. 377-385.
27. Castresana J. S., Rubio M.P., Vazquez J.J. et al. Lack of allelic deletion and point mutation as mechanisms of p53 activation in human malignant melanoma \\ Int. J. Cancer. 1993. - Vol. 55. - P. 562-565.
28. Cavallaro U., Christofori G. Cell adhesion and signalling by cadherins and Ig-CAMs in cancer. // Nat. Rev. Cancer. 2004. - Vol. 4. - P. 118-132.
29. Chambers A.F., Groom A.C., MacDonald I.C. Dissemination and growth of cancer cells in metastatic sites. // Nat Rev Cancer. 2002. - Vol. 2. - P. 563-572.
30. Chen S. C., Pelletier D.B., Ao P., Boynton A.L. Connexin43 reverses the phenotype of transformed cells and alters their expression of cyclin/cyclin-dependent kinases // Cell Growth Differ. 1995. - Vol. 6. - P. 681-690.
31. Chin L., Pomerantz J., Polsky D. et al. Cooperative effects of INK4a and ras in melanoma susceptibility in vivo // Genes Dev. (1997. - Vol. 11. - P. 28222834.
32. Chin L. The genetics of malignant melanoma: lessons from mouse and man // Nat. Rev. Cancer. 2003. - Vol. 3. - P. 559-570.
33. Chun K.H., Kosmeder J.W., Sun S. et al. Effects of deguelin on the phosphatidylinositol 3-kinase/Akt pathway and apoptosis in premalignant human bronchial epithelial cells // J. Natl.Cancer Inst. 2003. - Vol. 95. - P. 291-302.
34. Clark W.H. Jr., From L., Bernardino E.A., Mihm M.C. The histogenesis and biologic behavior of primary human malignant melanomas of the skin. // Cancer Res. 1969. - Vol. 29. - P. 705-727.
35. Collisson E. A., De A., Suzuki H. et al. Treatment of metastatic melanoma with an orally available inhibitor of the Ras-Raf-MAPK cascade // Cancer Res. -2003. Vol. 63. - P. 5669-5673.
36. Cravatt B. F., Prospero-Garcia O., Siuzdak G. et al. Chemical characterization of a family of brain lipids that induce sleep // Science. 1995. - Vol. 268. - P. 1506-1509.
37. Cravatt В. F., Giang D. K., Mayfield S. P. et al. Molecular characterization of an enzyme that degrades neuromodulatory fatty-acid amides // Nature 1996. -Vol. 384. - P. 83-87.
38. Daniotti M., Oggionni M., Ranzani T. et al. BRAF alterations are associated with complex mutational profiles in malignant melanoma // Oncogene. 2004. -Vol. 23. - P. 5968-5977.
39. Demunter A., Stas M., Degreef H. et al. Analysis of N- and K-ras mutations in the distinctive tumor progression phases of melanoma // J. Invest. Dermatol. -2001. Vol. 117. - P. 1483-1489.
40. Dewey M. M., Barr L. Intercellular connection between smooth muscle cells: the nexus // Science. -1962. Vol. 137. - P. 670-672.
41. Di Cristofano A., Pesce В., Cordon-Cardo C., Pandolfi P.P. Pten is essential for embryonic development and tumour suppression // Nat. Genet. 1998. - Vol. 19.-P. 348-355.
42. Dubin N., Moseson M., Pasternack B.S. Sun exposure and malignant melanoma among susceptible individuals // Environ. Health. Perspect. 1989. -Vol. 81.-P. 139.
43. Edwood J. M., Gallagher R.P. Site distribution of malignant melanoma // Can. Med. Assoc. J. 1983. - Vol. 128. - P. 1400.
44. Egan S. E., Wright J.A., Jarolim L. et al. Transformation by oncogenes encoding protein kinases induces the metastatic phenotype // Science. 1987. — Vol. 238.-P. 202-205.
45. Eghbali В., Kessler J.A., Reid L.M. et al. Involvement of gap junctions in tumorigenesis: Transfection of tumor cells with connexin 32 cDNA retards growth in vivo // Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 1991. - Vol. 88. - P. 10701-10705.
46. Elliott B.E., Hung W.L., Boag A.H., Tuck A.B. The role of hepatocyte growth factor (scatter factor) in epithelial-mesenchymal transition and breast cancer. // Can. J. Physiol. Pharmacol. 2002. - Vol. 80. - P. 91-102.
47. Evans W. H., Martin P.E. Lighting up gap junction channels in a flash // Bioessays. 2002. - Vol. 24. - P. 876-880.
48. Ezumi K., Yamamoto H., Murata K. et al. Aberrant Expression of Connexin 26 Is Associated with Lung Metastasis of Colorectal Cancer // Clin. Cancer. Res. -2008. Vol. 14. - P. 677-684.
49. Field J. K., Spandidos J.K. The role of ras amd myc oncogenes in human solid tumors and their relevance in diagnosis and prognosis // Anticancer Res. 1990. — Vol. 10. - P. 1-22.
50. Florell S. R., Meyer L.J., Boucher K.M. et al. Longitudinal assessment of the nevus phenotype in a melanoma kindred // J. Invest. Dermatol. 2004. - Vol. 124. - P. 576-582.
51. Flores J. F., Walker G.J., Glendening J.M. et al. Loss of the pl6INK4a and pl5INK4b genes, as well as neighboring 9p21 markers, in sporadic melanoma // Cancer Res. 1996. - Vol. 56. - P. 5023-5032.
52. Fluri G. S., Rudisuli A., Willi M. et al. Effects of arachidonic acid on the gap junctions of neonatal rat heart cells // Pflugers Arch. 1990. - Vol. 417. - P. 149156.
53. Fujimoto A., Morita R., Hatta N. Et al. pl6INK4a inactivation is not frequent in uncultured sporadic primary cutaneous melanoma // Oncogene. 1999. — Vol. 18. - P. 2527-2532.
54. Fujita S., Suzuki H., Kinoshita M., Hirohashi, S. Inhibition of cell attachment, invasion and metastasis of human carcinoma cells by anti-integrin bl subunit antibody // Jap. J. Cancer. Res. 1992. - Vol. 83. - P. 1317-1326.
55. Gabriel H.-D., Jung D., Butzler C.et al. Transplacental Uptake of Glucose Is Decreased in Embryonic Lethal Connexin26-deficient Mice // The Journal of Cell Biology. 1998. - Vol. 140. - №6. - P. 1453-1461.
56. Garbisa S., Pozzati R., Muschel R. et al. Secretion of type IV collagenolytic protease and metastatic phenotype: Induction by transfection with c-Ha-ras but not c-Ha-ras plus Ad2-Ela // Cancer Res. 1987. - Vol. 47. - P. 1523-1528.
57. Garcia-Castro I., Mato J.M., Vasanthakumar G. et al. Paradoxical effects of adenosine on neutrophil chemotaxis // J. Biol. Chem. 1983. — Vol. 258. - P. 43454349.
58. Geffrotin C., Crechet F., Le Roy P. et al. Identification of five chromosomal regions involved in predisposition to melanoma by genome-wide scan in the MeLiM swine model // Int. J. Cancer. 2004. - Vol. 110. - №1. - P. 39-50.
59. Giang D. K., Cravatt B. F. Molecular characterization of human and mouse fatty acid amide hydrolases // Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 1997. - Vol. 94. - P. 2238-2242.
60. Giepmans B. N., Moolenaar W.H. The gap junction protein connexin43 interacts with the second PDZ domain of the zona occludens-1 protein // Curr. Biol. 1998. - Vol. 8. - P. 931-934.
61. Gilleron J., Nebout M., Scarabelli L. et al. A potential novel mechanism involving connexin 43 gap junction for control of Sertoli cell proliferation by thyroid hormones // J. Cell Physiol. 2006. - Vol. 209. - №1. - P. 153-161.
62. Goldberg G. S., Lampe P.D., Nicholson B.J. Selective transfer of endogenous metabolites through gap junctions composed of different connexins // Nat. Cell. Biol. 1999. - Vol. 1. - P. 457-459.
63. Gong X., Li E., Klier G. et al. Disruption of alpha3 connexin gene leads to proteolysis and cataractogenesis in mice // Cell. 1997. - Vol. 91. — P. 833-843.
64. Gorden A., Osman I., Gai W. et al. Analysis of BRAF and N-RAS mutations in metastatic melanoma tissues // Cancer Res. 2003. - Vol. 63. - P. 3955-3957.
65. Greenberg A. H., Egen S.E., Wright J.A. Oncogenes and metastatic progression // Invasion Metastasis. 1989. - Vol. 9. - P. 360-378.
66. Greene M. H., Fraumeni J.F. Jr. (1979). The hereditary variant of malignant melanoma. Malignant melanoma. W. H. J. Clark, Goodman, L.I., Mastrangelo, M.J. New York, NY, Grune and Stratton: P. 139.
67. Greenlee R. Т., Hill-Harmon M.B., Murray Т., Thun M. Cancer statistics, 2001 // CA Cancer J. Clin. 2001. - Vol. 51. - P. 15-36.
68. Greenlee S. H., Murray Т., Bolden S., Wingo P.A. Cancer statistics // CA Cancer J. Clin. 2000. - Vol. 50. - P. 7.
69. Gruis N. A., van der Velden P.A., Sandkuijl L.A. et al. Homozygotes for CDKN2 (pi6) germline mutation in Dutch familial melanoma kindreds // Nat. Genet. 1995. - Vol. 10. - P. 351-353.
70. Guirguis R., Margulies I., Taraboletii G., Liotta L.A. Cytokine-induced pseudopodial protrusion is coupled to tumour cell migration // Nature 1987. -Vol. 329. - P. 261-263.
71. Haass N. K., Smalley K.S., Herlyn M. The role of altered cell-cell communication in melanoma progression // J. Mol. Histol. 2004. - Vol. 35. - P. 309-318.
72. Haass N. K., Smalley K., Li L., Herlyn M. Adhesion, migration and communication in melanocytes and melanoma // Pigment Cell Res. 2005. - Vol. 18.-P. 150-159.
73. Haass N. K., Wladykowski E., Kief S. et al. Differential induction of connexins 26 and 30 in skin tumors and their adjacent epidermis // J. Histochem. Cytochem. 2006. - Vol. 54. - P. 171-182.
74. Haddad F.F., Stall A., Messina J. et al. The progression of melanoma nodal metastasis is dependent on tumor thickness of the primary lesion. // Ann Surg Oncol. 1999. - Vol. 6. - P. 144-149.
75. Hamada J., Takeichi N., Kobayashi H. Metastatic capacity and intercellular communication between normal cells and metastatic cell clones derived from a rat mammary carcinoma // Cancer Res. 1988. - Vol. 48. - №18. - P. 5129-5132.
76. Hanahan D., Weinberg R.A. Hallmarks of cancer // Cell. 2000. - Vol. 100. -№1. - P. 57-70.
77. Haqq C., Nosrati M., Sudilovsky D. et al. The gene expression signatures of melanoma progression. // Proc Natl Acad Sci USA.- 2005. Vol. 102. - P. 6092-6097.
78. Harris S. R., Thorgeirsson U.P. Tumor angiogenesis: biology and therapeutic prospects // In vivo. 1998. - Vol. 12. - №6. - P. 563-570.
79. Hart I. R. The selection and characterization of an invasive variant of the B16 melanoma // Am. J. Pathol. 1979. - Vol. 97. - P. 587-600.
80. Hauschild W. Formation and metastasis of melanoblastoma // Arch. Geschwulstforsch. 1956. - Vol. 9. - №3-4ю - P. 289-293.
81. Hay ward N. K. Genetics of melanoma predisposition // Oncogene. 2003. -Vol. 22. - P. 3053-3062.
82. Herve J. C., Sarrouilhe D. Modulation of junctional communication by phosphorylation: protein phosphatases, the missing link in the chain // Biol. Cell.2002. Vol. 94. - P. 423-432.
83. Hill S. A., Wilson A., Chambers A.F. Clonal heterogenity, experimental metastatic ability, and p21 expression in H-ras-transformed N1H 3T3 cells // J. Natl. Cancer Inst. -1988. Vol. 80. - P. 484-490.
84. Hingorani S. R., Jacobetz M.A., Robertson G.P. et al. Suppression of BRAF(V599E) in human melanoma abrogates transformation // Cancer Res.2003. Vol. 63. - P. 5198-5202.
85. Hirschi К. K., Minnich B.N., Moore L.K., Burt J.M. Oleic acid differentially affects gap junction-mediated communication in heart and vascular smooth muscle cells // Am. J. Physiol. 1993. - Vol. 265. - P. 1517-1526.
86. Ноек К., Rimm D.L., Williams K.R. et al. Expression profiling reveals novel pathways in the transformation of melanocytes to melanomas. // Cancer Res.2004. Vol. 64. - P. 5270-5282.
87. Hoi P. M., Hiley C.R. Vasorelaxant effects of oleamide in rat small mesenteric artery indicate action at a novel cannabinoid receptor // Br. J. Pharmacol. 2006. - Vol. 147. - №5. - P. 560-568.
88. Holden P. R., McGuire В., Stoler A. et al. Changes in gap junctional intercellular communication in mouse skin carcinogenesis // Carcinogenesis. -1997.-Vol. 18.-P. 15-21.
89. Homsi J., Kashani-Sabet M., Messina J.L., Daud A. Cutaneous melanoma: prognostic factors. // Cancer Control. 2005. - Vol. 12. - P. 223-229.
90. Horn T. F. W., Cravatt B. J., Patterson J. E. et al. Effects of the sleep-inducing lipid oleamide on body temperature in rats // Soc. Neurosci. Abstr. 1998. - Vol. 24. - P. 696.
91. Hossain M. Z., Boynton A.L. Regulation of Cx43 gap junctions: the gatekeeper and the password // Sci STKE. 2000. - Vol. 2000. - №54. - P. 1.
92. Huang G. Y., Cooper E.S., Waldo K. et al. Gap Junction-mediated Cell-Cell Communication Modulates Mouse Neural Crest Migration // The Journal of Cell Biology. 1998. - Vol. 143. - №6. - P. 1725-1734.
93. Huber M.A., Kraut N., Beug H. Molecular requirements for epithelial-mesenchymal transition during tumor progression. // Curr. Opin. Cell. Biol.2005.-Vol. 17.-P. 548-558.
94. Huidobro-Toro J. P., Harris R. A. Brain lipids that induce sleep are novel modulators of 5-hydroxytryptamine receptors // Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. -1996. Vol. 93. - P. 8078-8082.
95. Huitron-Resendiz S., Patterson J. E., Griffin P. S. et al. Inhibitors of the enzyme oleamide hydrolase and hydrolysis resistant oleamide analogs alter sleep patterns in rats // Soc. Neurosci. Abstr. 1998. - Vol. 24. - P. 695.
96. Huitron-Resendiz S., Gombart L., Cravatt B.F., Henriksen S.J. Effect of oleamide on sleep and its relationship to blood pressure, body temperature, and locomotor activity in rats // Exp Neurol. 2001. - Vol. 172. - №1. - P. 235-43.
97. Humphries M. J., Olden K., Yamada K.M. A synthetic peptide from fibronectin inhibits experimental metastasis of murine melanoma cells // Science. -1986. Vol. 233. - P. 467-469.
98. Humphries M. J., Yamada K.M., Olden K. Investigation of the biological effects of anti-cell adhesive synthetic peptides that inhibit experimental metastasis of B16-F10 murine melanoma cells // J. Clin. Invest. 1988. - Vol. 81. - P. 782790.
99. Ito A., Katoh F., Kataoka T.R. et al. A role for heterologous gap junctions between melanoma and endothelial cells in metastasis // J. Clin. Invest. 2000. -Vol. 105.-P. 1189-1197.
100. Jamieson S., Going J.J., Arcy R.D., George W.D. Expression of gap junction proteins connexin 26 and connexin 43 in normal human breast and in breast tumors // Journal of Pathology. 1998. - Vol. 184. - P. 37-43.
101. Jensen E.H., Lewis J.M., McLoughlin J.M. et al. Down-regulation of pro-apoptotic genes is an early event in the progression of malignant melanoma. // Ann Surg Oncol. 2007. - Vol. 14. - P. 1416-1423.
102. Jhappan C., Noonan F.P., Merlino G. Ultraviolet radiation and cutaneous malignant melanoma // Oncogene. 2003. - Vol. 22. - P. 3099-3112.
103. Johnson J. P. Cell adhesion molecules in the development and progression of malignant melanoma // Cancer and Metastasis Reviews. 1999. - Vol. 8. - P. 345357.
104. Kahan B. W., Kramp D.C. Nerve growth factor stimulation of nouse embronal cell migration // Cancer Res. 1987. - Vol. 47. - P. 6324-6328.
105. Kamibayashi Y., Oyamada Y., Mori M., Oyamada M. Aberrant expression of gap junction proteins (connexins) is associated with tumor progression during multistage mouse skin carcinogenesis in vivo // Carcinogenesis 1995. - Vol. 16. -P. 1287-1297.
106. Kamijo Т., Zindy F., Roussel M.F. et al. Tumor suppression at the mouse INK4a locus mediated by the alternative reading frame product pl9ARF // Cell. -1997. Vol. 91. - P. 649-659.
107. Kamijo Т., Weber J.D., Zambetti G. et al. Functional and physical interactions of the ARF tumor suppressor with p53 and Mdm2 // Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 1998. - Vol. 95. - P. 8292-8297.
108. Kamijo Т., Bodner S., van de Kamp E. et al. Tumor spectrum in ARF-deficient mice // Cancer Res. 1999. - Vol. 59. - P. 2217-2222.
109. Kanczuga-Koda L., Sulkowski S., Koda M., Sulkowska M. Alterations in connexin26 expression during colorectal carcinogenesis // Oncology. 2005. — Vol. 68. - №2-3. - P. 217-222.
110. Karasarides M., Chiloeches A., Hayward R. et al. B-RAF is a therapeutic target in melanoma // Oncogene. 2004. - Vol. 23. - P. 6292-6298.
111. Kohn E. C., Francis E.A., Liotta L.A., Schiffmann E. Heterogenity of the motility responce in malignant tumor cells: a biological diversity and homing of metastatic cells // Int. J. Cancer. 1990. - Vol. 46. - P. 287-292.
112. Kojima Т., Mitaka Т., Mizuguchi Т., Mochizuki Y. Effects of oxygen radical scavengers on connexins 32 and 26 expression in primary cultures of adult rat hepatocytes // Carcinogenesis. 1996. - Vol. 17. - P. 537-544.
113. Kojima Т., Sawada N., Chiba H. et al. Induction of tight junctions in human connexin 32 (hCx32)-transfected mouse hepatocytes: connexin 32 interacts with occludin // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1999. - Vol. 266. - P. 222-229.
114. Krimpenfort P., Quon K.C., Mooi WJ. et al. Loss of pl6Ink4a confers susceptibility to metastatic melanoma in mice // Nature. 2001. — Vol. 413. — P. 83-86.
115. Krutovskikh V., Mironov N., Yamasaki H. Human connexin 37 is polymorphic but not mutated in tumours // Carcinogenesis. 1996. - Vol. 17. - P. 1761-1763.
116. Krutovskikh V. A., Oyamada M., Yamasaki H. Sequential changes of gap-junctional intercellular communications during multistage rat liver carcinogenesis: direct measurement of communication in vivo // Carcinogenesis. 1991. — Vol. 12. -P. 1701-1706.
117. Krutovskikh V. A., Piccoli C., Yamasaki H. Gap junction intercellular communication propagates cell death in cancerous cells // Oncogene. 2002. -Vol. 21. - №13. p. 1989-1999.
118. Kumagai H., Tajima M., Ueno Y. et al. Effect of cyclic RGD peptide on cell adhesion and tumor metastasis // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1991. - Vol. 177. - P. 74-82.
119. Kumar N. M., Gilula N.B. The gap junction communication channel // Cell. -1996. Vol. 84. - P. 381-388.
120. Kumar R., Smeds J., Lundh Rozell В., Hemminki K. Loss of heterozygosity at chromosome 9p21 (INK4-pl4ARF locus): homozygous deletions and mutations in the pl6 and pl4ARF genes in sporadic primary melanomas // Melanoma Res. -1999.-Vol. 9.-P. 138-147.
121. Laennec, R. Sur les melanoses // Bulletin de Faculte de Medecine Paris. -1806.-Vol. l.-P. 24.
122. Langstein J., Hofstadter F., Schwarz H. Cis-9,10-octadecenoamide, an endogenous sleep-inducing CNS compound, inhibits lymphocyte proliferation // Res. Immunol. 1996. - Vol. 147. - P. 389-396.
123. Lecanda F., Towler D.A., Ziambaras K. et al. Gap Junctional Communication Modulates Gene Expression in Osteoblastic Cells // Molecular Biology of the Cell. 1998. - Vol. 9. - P. 2249-2258.
124. Lee JA. The causation of melanoma. In: Balch CM, Milton GW, editors. Cutaneous melanoma. Clinical management and treatment results worldwide. Philadelphia: Lippincott; 1985. P. 303.
125. Leonard, В. E. Serotonin receptors and their function in sleep, anxiety disorders and depression // Psychother. Psychosom. 1996. - Vol. 65. - P. 66-75.
126. Lerner R. A., Siuzdak G., Prospero-Garcia O. et al. Cerebrodiene: a brain lipid isolated from sleep-deprived cats // Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 1994. - Vol. 91.-P. 9505- 9508.
127. Liotta L. A., Kleinerman J., Saidel G. Quantitative relationships of intravascular tumor cells, tumor vessels and pulmonary metastases following tumor implantation // Cancer Res. 1974. - Vol. 34. - P. 997-1004.
128. Liotta L. A., Abe S., Robey P., Martin G. Preferential digestion of basement membrane collagen by an enzyme derived from a metastatic murine tumor // Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 1979. - Vol. 76. - P. 2268-2272
129. Liotta L. A., Tryggvason K., Garbisa S. et al. Metastatic potential correlates with enzymatic degradation of basement membrane collagen // Nature. 1980. — Vol. 284. - P. 67-68.
130. Liotta L. A., Mandler R., Murano G. et al. Tumor cell autocrine motility factor // Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 1986. - Vol. 83. - P. 3302-3306.
131. Liotta L. A. Cancer cell invasion and metastasis. // Scientific American. -1992. Vol.266. - №2. - P.54-59, 62-63.
132. Loewenstein W. R., Kanno Y. Intercellular communication and the control of tissue growth: lack of communication between cancer cells // Nature. 1966. -Vol. 209.-P. 1248-1249.
133. Loewenstein W. R. The cell-to-cell channel of gap junctions // Cell. 1987. -Vol. 48.-P. 725-726.
134. Longstreth J. Cutaneous malignant melanoma and ultraviolet radiation: a review // Cancer Metastasis Rev. 1988. - Vol. 7. - P. 321.
135. Lubbe J., Reichel M., Burg G., Kleihues P. Absence of p53 gene mutations in cutaneous melanoma // J. Invest. Dermatol. 1994. - Vol. 102. - P. 819-821.
136. Lucas R., McMichael Т., Smith W., Armstrong B. Solar ultraviolet radiation: global burden of disease from solar ultraviolet radiation. Environmental Burden of Disease Series. 2006. - No. 13. - Geneva. - Switzerland World Health Organization.
137. Lynch H. Т., Shaw T.G., Lynch J.F. Predisposition to cancer: a historical overview // Am. J. Med. Genet. C. Semin. Med. Genet. 2004. - Vol. 129. - №1. -P. 5-22.
138. MacKie R. M., Freudenberger Т., Aitchison T.C. Personal risk-factor chart for cutaneous melanoma // Lancet. 1989. - Vol. 2. - P. 487-490.
139. Maldonado J.L., Fridlyand J., Patel H. et. al. Determinants of BRAF mutations in primary melanomas. // J Natl Cancer Inst. 2003. — Vol. 95. - P. 1878-1890.
140. Markovic S.N., Erickson L.A., Rao R.D. et al. Malignant melanoma in the 21st century, part 1: epidemiology, risk factors, screening, prevention, and diagnosis. // Mayo Clin Proc. 2007. - Vol. 82. - P. 364-380.
141. Markovic S.N., Erickson L.A., Rao R.D. et al. Malignant melanoma in the 21st century, part 2: staging, prognosis, and treatment. // Mayo Clin Proc. — 2007. -Vol. 82.-P. 490-513.
142. Martin P. E., Blundell G., Ahmad S. et al. Multiple pathways in the trafficking and assembly of connexin 26, 32 and 43 into gap junction intercellular communication channels // Journal of Cell Science. 2001. — Vol. 114. - P. 38453855.
143. Maslow D. E. Tabulation of results on the heterogeneity of cellular characteristics among cells from B16 mouse melanoma cell lines with different colonization potentials // Invas. Metast. 1989. - Vol. 9. - P. 182-191.
144. McCarthy J. В., Furcht L.T. Laminin and fibronectin promote the haptotactic migration of B16 melanoma cell in vitro // J. Cell. Biol. 1984. - Vol. 98. - P. 1474-1480.
145. McGovern V.J., Mihm M.C. Jr., Bailly C. The classification of malignant melanoma and its histologic reporting. // Cancer. 1973. - Vol. 32. P. 1446-1457.
146. Meehan W.J., Welch D.R. Breast cancer metastasis suppressor 1: update // Clin. Exp. Metastasis. 2003. - Vol. 20. - P. 45-50.
147. Mesnil M., Montesano R., Yamasaki H. Intercellular communication of transformed and non-transformed rat liver epithelial cells. Modulation by TPA // Exp. Cell. Res. 1986. - Vol. 165. - P. 391-402.
148. Mesnil M., Krutovskikh V., Piccoli C. et al. Negative growth control of HeLa cells by connexin genes: connexin species specificity // Cancer Res. 1995. - Vol. 55.-P. 629-639.
149. Mignatti P., Robbins E., Rifkin D.B. Tumor invasion through the human amniotic membrane: Requirement for a proteinase cascade // Cell. 1986. - Vol. 47/ - P. 487-498.
150. Miller A.J., Mihm M.C. Jr. Melanoma. // N Engl J Med. 2006. - Vol. 355. -P. 51-65.
151. Mironov N. M., Aguelon M.A., Potapova G.I. et al. Alterations of (CA)n DNA repeats and tumor suppressor genes in human gastric cancer // Cancer Res. -1994.-Vol. 54.-P. 41-44.
152. Mischiati C., Natali P.G., Sereni A. et al. cDNA-array profiling of melanomas and paired melanocyte cultures. // J Cell Physiol. 2006. - Vol. 207. - P. 697-705.
153. Moorby C., Patel M. Dual functions for connexins: Cx43 regulates growth independently of gap junction formation // Exp. Cell. Res. 2001. - Vol. 271. -№2. - P. 238-248.
154. Munari-Silem Y., Audebet C., Rousset B. Hormonal control of cell to cell communication: regulation by thyrotropin of the gap junction-mediated dye transfer between thyroid cells // Endocrinology. 1991. - Vol. 128. - P. 32993309.
155. Muramatsu A., Iwai M., Morikawa T. et al. Influence of transfection with connexin 26 gene on malignant potential of human hepatoma cells // Carcinogenesis. 2002. - Vol. 23. - №2. - P. 351-358.
156. Murata J., Saiki I., Nishimura S. et al. Inhibitory effect of chitin heparinoids on the lung metastasis of B16-BL6 melanoma // Jap. J. Cancer Res. 1989. - Vol. 80. - P. 866-872.
157. Muschel R. J., Williams J.E., Lowy D.R., Liotta L.A. Harvey ras induction of metastatic potential depends upon oncogene activation and the type of recipient cell // Am. J. Pathol. 1985. - Vol. 121. - P. 1-8.
158. Nakajima M., Morikawa K., Fabra A. et al. Influence of organ environment on extracellular matrix degradative activity and metastasis of human colon carcinoma cells // J. Natl. Cancer Inst. 1990. - Vol. 82. - P. 1890-1898.
159. Naora H., Monlell D.J. Ovarian cancer metastasis: integrating insights from disparate model organisms. // Nat. Rev. Cancer. 2005. - Vol. 5. - P. 355-366.
160. Natali P.G., Hamby C.V., Felding-Habermann B. et al. Clinical significance of a(v)h3 integrin and intercellular adhesion molecule-lexpression in cutaneous malignant melanoma lesions // Cancer Res. 1997. - Vol. 57. - P. 1554-1560.
161. Naus С. C. Gap junctions and tumour progression // Can. J. Physiol. Pharmacol. 2002. - Vol. 80. - P. 136-141.
162. Nelson J., Bagnato A., Battistini В., Nisen P. The endothelin axis: emerging role in cancer. // Nat. Rev. Cancer. 2003. - Vol. 3. - P. 110-116.
163. Nestle M., Carol H. 2003. Melanoma. In Dermatology. J. Bolognia, J. Jorizzo, and R. Rapini, editors. Mosby. New York, New York, USA. P. 1789-1815.
164. Nguyen N.Q., Cornet A., Blacher S. et al. Inhibition of tumor growth and metastasis establishment by adenovirus-mediated gene transfer delivery of the antiangiogenic factor 16K hPRL // Mol. Ther. 2007. - Vol. 15. - P. 2094-2100.
165. Nicolson G. L. Tumor cell instability, diversification, and progression to th metastatic phenotype: from oncogene to oncofetal expression // Cancer Res. -1987. Vol. 47. - P. 1473-1487.
166. Nicolson G. L. Breast cancer metastasis-associated genes: role in tumour progression to the metastatic state // Biochem. Soc. Symp. 1998. - Vol. 63. - P. 231-243.
167. Nomizu M., Yamamura K., Kleinman H.K., Yamada Y. Multimeric forms of Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg (YIGSR) peptide enhance the inhibition of tumor growth and metastasis // Cancer Res. 1993. - Vol. 53. - P. 3459-3461.
168. Omori Y., Yamasaki H. Mutated connexin43 proteins inhibit rat glioma cell growth suppression mediated by wild-type connexin43 in a dominant-negative manner // Int. J. Cancer. 1998. - Vol. 78. - P. 446-453.
169. Omori Y., Li Q., Nishikawa Y. et al. Pathological significance of intracytoplasmic connexin proteins: implication in tumor progression // J. Membr. Biol. 2007. - Vol. 218. - №1-3. - P. 73-77.
170. Ostrovski L. E., Rinch J., Krieg P., Matrisian L. Expression pattern of a gene for a secreted metalloproteinase during late stages of tumor progression // Mol. Carcinogenesis. 1988. - Vol. 1. - P. 13-19.
171. Papp Т., Jafari M., Schiffmann D. Lack of p53 mutations and loss of heterozygosity in non-cultured human melanocytic lesions // J. Cancer Res. Clin. Oncol. 1996. - Vol. 122. - P. 541-548.
172. Petronzelli F., Sollima D., Coppola G. et al. CDKN2A germline splicing mutation affecting both pl6(ink4) and pl4(arf) RNA processing in a melanoma/neurofibroma kindred // Genes Chromosomes Cancer. 2001. — Vol. 31.-P. 398-401.
173. Podsypanina K., Ellenson L.H., Nemes A. et al. Mutation of Pten/Mmacl in mice causes neoplasia in multiple organ systems // Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. -1999. Vol. 96. - P. 1563-1568.
174. Pohl S. J., Goldfinger N., Rader-Pohl A. et al. p53 increases experimental metastatic capacity of murine carcinoma cells // Mol. Cell Biol. 1988. - Vol. 8. -P. 2078-2081.
175. Pollmann M. A., Shao Q., Laird D.W., Sandig M. Connexin 43 mediated gap junctional communication enhances breast tumor cell diapedesis in culture // Breast Cancer Res. 2005. - Vol. 7. - №4. - P. 522-534.
176. Pollock P. M., Harper U.L., Hansen K.S. et al. High frequency of BRAF mutations in nevi // Nat. Genet. 2003. - Vol. 33. - P. 19-20.
177. Pomerantz J., Schreiber-Agus N., Liegeois N.J. et al. The Ink4a tumor suppressor gene product, pl9Arf, interacts with MDM2 and neutralizes MDM2's inhibition of p53 // Cell. 1998. - Vol. 92. - P. 713-723.
178. Poste G., Doll J., Hart I.R., Fidler I.J. In vitro selection of murine B16 melanoma variants with enhanced tissue-invasive properties // Cancer Res. 1980. - Vol. 40. - №5. - P. 1636-44.
179. Poste G., Fidler I.J. The pathogenesis of cancer metastasis // Nature. 1980. -Vol. 283. - P. 139-146.
180. Pozzati R., Muschel R., Williams J. et al. Primary rat emdryo cells transformed by one of two oncogenes show different metastatic potentials // Science. 1986. - Vol. 232. - P. 223-227.
181. Quelle D. E., Zindy F., Ashmun R.A., Sherr C.J. Alternative reading frames of the INK4a tumor suppressor gene encode two unrelated proteins capable of inducing cell cycle arrest // Cell. 1995. - Vol. 83. - P. 993-1000.
182. Quist A. P., Rhee S.K., Lin H., Lai R. Physiological role of gap-junctional hemichannels. Extracellular calcium-dependent isosmotic volume regulation // J. Cell Biol. 2000. - Vol. 148. - №5. - P. 1063-1074.
183. Rami A., Volkmann Т., Winckler J. Effective reduction of neuronal death by inhibiting gap junctional intercellular communication in a rodent model of global transient cerebral ischemia // Exp Neurol. 2001. - Vol. 170. - №2. - P. 297-304.
184. Randerson-Moor J. A., Harland M., Williams S. et al. A germline deletion of pl4(ARF) but not CDKN2A in a melanoma- neural system tumour syndrome family // Hum. Mol. Genet. 2001. - Vol. 10. - P. 55-62.
185. Recklies A. D., Poole A.R., Mort J.S. A cysteine proteinase secreted from human breast tumors is immunologically related to cathepsin В // Biochem. J. -1982. Vol. 207. - P. 633-636.
186. Reich R., Thompson E., Iwamoto Y. et al. Effects of inhibitors of plasminogen activator, serine proteinases, and collagenase IV on the invasion ofbasement membranes by metastatic cells // Cancer Res. 1988. — Vol. 48. - P. 3307-3312.
187. Ren J., Hamada J., Takeichi N. et al. Ultrastructural differences in junctional intercellular communication between highly and weakly metastatic clones derived from rat mammary carcinoma // Cancer Res. 1990. - Vol. 50. - №2. - P. 358-362.
188. Revel J. P., Karnovsky MJ. Hexagonal array of subunits in intercellular junctions of the mouse heart and liver // J. Cell Biol. 1967. — Vol. 33. - №3. - P. 7-12.
189. Ries L.A.G., Eisner M.P., Kosary C.L. et al. SEER Cancer Statistics Review, 1975-2000. // Bethesda, MD National Cancer Institute. 2003. - Tables XVI-1-9.
190. Rivera J., Megias D., Bravo J. Proteomics-based strategy to delineate the molecular mechanisms of the metastasis suppressor gene BRMS1 // J. Proteome Res. 2007. - Vol. 6. - P. 4006-4018.
191. Rivers J.K. Is there more than one road to melanoma? // Lancet. 2004. -Vol. 363. - P. 728-730.
192. Rizos H., Puig S., Badenas C. et al. A melanoma-associated germline mutation in exon lbeta inactivates pl4ARF // Oncogene. 2001. — Vol. 20. - P. 5543-5547.
193. Robertson G. P., Furnari F.B., Miele M.E. et al. In vitro loss of heterozygosity targets the PTEN/MMAC1 gene in melanoma // Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. -1998. Vol. 95. - P. 9418-9423.
194. Rodeck U., Herlyn M., Menssen H.D. et al. Metastatic but not primary melanoma cell lines grow in vitro independently of exogenous growth factors // Int. J. Cancer. 1987. - Vol. 40. - P. 687-690.
195. Rosano L., Spinella F., Di Castro V. et al. Endothelin-1 is required during epithelial to mesenchymal transition in ovarian cancer progression. // Exp. Biol. Med. 2006 - Vol. 231. - P. 1128-1131.
196. Rose В., Mehta P.P., Loewenstein W.R. Gap-junction protein gene suppresses tumorigenicity // Carcinogenesis. 1993. - Vol. 14. - P. 1073-1075.
197. Rosen E. M., Meromisky L., Setter E. et al. Purified scatter factor stimulates epithelial and vascular endothelial cell migration // Proc. Soc. Exp. Biol. Med. -1990.-Vol. 195.-P. 34-43.
198. Rosette C., Roth R.B., Oeth P. et al. Role of ICAM-1 in invasion of human breast cancer cells // Carcinogenesis. 2005. - Vol. 26. - P. 943-950.
199. Rouach N., Avignone E., Meme W. et al. Gap junctions and connexin expression in the normal and pathological central nervous system // Biol. Cell. -2002. Vol. 94. - P. 457-475.
200. Ruff M., Schiffmann E., Terranova V., Pert C.B. Neuropeptides are chemoattractants for human tumor cells and monocytes: A possible mechanism for metastasis // Clin. Immunol. Immunopath. 1987. - Vol. 37. - P. 387-396.
201. Sai K., Upham B.L., Kang K.S. et al. Inhibitory effect of pentachlorophenol on gap junctional intercellular communication in rat liver epithelial cells in vitro // Cancer Lett. 1998. - Vol. 130. - P. 9-17.
202. Saiki I., Iida J., Murata J. Inhibition of the metastasis of murine malignant melanoma by synthetic polymeric peptides containing core sequences of cell-adhesive molecules // Cancer Res. 1989. - Vol. 49. - P. 3815-3822.
203. Saiki I., Murata J., Nakajima M. et al. Inhibition by sulfated chitin derivatives of invasion through extracellular matrix and enzymatic degradation by metastatic melanoma cells // Cancer Res. 1990. - Vol. 50. - P 3631-3637.
204. Saito Т., Krutovskikh V., Marion M.J. et al. Human hemangiosarcomas have a common polymorphism but no mutations in the connexin37 gene // Int. J. Cancer 2000. - Vol. 86. - P. 67-70.
205. Saito Т., Nishimura M., Kudo R., Yamasaki H. Suppressed gap junctional intercellular communication in carcinogenesis of endometrium // Int. J. Cancer -2001. Vol. 93. - №3. - P. 317-323.
206. Saitoh M., Oyamada M., Oyamada Y. et al. Changes in the expression of gap junction proteins (connexins) in hamster tongue epithelium during healing and carcinogenesis // Carcinogenesis. 1997. - Vol. 18. - P. 1319-1328.
207. Sakamoto H., Oyamada M., Enomoto К., Mori M. Differential changes in expression of gap junction proteins connexin 26 and 32 during hepatocarcinogenesis in rats // Jpn. J. Cancer Res. 1992. - Vol. 83. - P. 12101215.
208. Salon C., Moro D., Lantuejoul S. et al. E-cadherin-beta-catenin adhesion complex in neuroendocrine tumors of the lung: a suggested role upon local invasion and metastasis. // Hum Pathol. 2004. - Vol. 35. - P. 1148-1155.
209. Sato K., Gratas C., Lampe J. et al. Reduced expression of the P2 form of the gap junction protein connexin43 in malignant meningiomas // J. Neuropathol. Exp. Neurol. 1997. - Vol. 56. - P. 835-839.
210. Savagner P. Leaving the neighborhood: molecular mechanisms involved during epithelial-mesenchymal transitions. // BioEssays. 2001. - Vol. 23. - P. 912-923.
211. Schlingensiepen K.H., Fischer-Blass В., Schmaus S., Ludwig S. Antisense therapeutics for tumor treatment: the TGF-beta2 inhibitor AP 12009 in clinical development against malignant tumors // Recent Results Cancer Res. 2008. -Vol. 177.-P. 137-150
212. Seiki M., Sato H., Liotta L.A., Schiffmann E. Comparison of autocrine mechanisms promoting motility in two metastatic cell lines: human melanima and ras-transfected N1H3T3 cells // Int. J. Cancer. -1991. Vol. 49. - P. 717-720.
213. Serrano M., Hannon G.J., Beach D A new regulatory motif in cell-cycle control causing specific inhibition of cyclin D/CDK4 // Nature. 1993. - Vol. 366. - P. 704-707.
214. Serrano M., Lee H., Chin L. et al. Role of the INK4a locus in tumor suppression and cell mortality // Cell. 1996. - Vol. 85. - P. 27-37.
215. Sharpless N. E., Bardeesy N., Lee K.H. et al. Loss of pl6Ink4a with retention of pl9Arf predisposes mice to tumorigenesis // Nature. 2001. - Vol. 413. — P. 8691.
216. Sharpless N. E., Kannan K., Xu J. et al. Both products of the mouse Ink4a/Arf locus suppress melanoma formation in vivo // Oncogene. 2003. - Vol. 22. - P. 5055-5059.
217. Shibata Y., Kumai M., Nishii K., Nakamura K. Diversity and molecular anatomy of gap junctions // Med. Electron. Microsc. 2001. - Vol. 34. - P. 153159.
218. Siletti S., Watanabe H., Hogan V. et al. Purification of B16-F1 melanoma autocrine motility factor and its receptor // Cancer Res. 1991. - Vol. 51. - P. 3507-3511.
219. Simon A. M. Gap junctions: more roles and new structural data // Trends Cell Biol. 1999. - Vol. 9. - P. 169-170.
220. Simon A. M., McWhorter A.R. Vascular abnormalities in mice lacking the endothelial gap junction proteins connexin37 and connexin40 // Developmental Biology. 2002. - Vol. 251. - P. 206-220.
221. Soufir N., Avril M.-F., Chompret A. et al. Prevalence of pl6 and CDK4 germline mutations in 48 melanoma-prone families in France. The French Familial Melanoma Study Group // Hum. Mol. Genet. 1998. - Vol. 7. - P. 209-216.
222. Sparrow L. E., Soong R., Dawkins H.J. et al. p53 gene mutation and expression in naevi and melanomas // Melanoma Res. 1995. - Vol. 5. - P. 93100.
223. Springer T.A. Adhesion receptors of the immune system // Nature. 1990. -Vol. 346. - P. 425-434.
224. Stahl J. M., Cheung M., Sharma A. et al. Loss of PTEN promotes tumor development in malignant melanoma // Cancer Res. 2003. - Vol. 63. - P. 28812890.
225. Stahl J. M., Sharma A., Cheung M. et al. Deregulated Akt3 activity promotes development of malignant melanoma // Cancer Res. 2004. - Vol. 64. - P. 70027010.
226. Stott F. J., Bates S., James M.C. et al. The alternative product from the human CDKN2A locus, pl4(ARF), participates in a regulatory feedback loop with p53 and MDM2 // EMBO J. 1998. - Vol. 17. - P. 5001-5014.
227. Stracke M. L., Guirguis L., Liotta L.A., Schiffmann E. Pertussis toxin inhibits stimulated motility independently of the adenylate cyclase pathway in human melanoma cells // Biochem. Biophys. Res. Comm. 1987. - Vol. 146. - P. 339345.
228. Stracke M. L., Kohn E.C., Aznavoorian S. et al. Insulin-like growth factors stimulate chemotaxis in human melanima cells // Biochem. Biophys. Res. Comm.1988. Vol. 153. - P. 1076-1083.
229. Stracke M. L., Engel I.D., Wilson L.L. et al. The type I insulin-like growth factor receptor is a motility receptor in human melanoma cells // J. Biol. Chem.1989. Vol. 264. - P. 21554-21549.
230. Stracke M. L., Liotta L.A. Multi-step Cascade of Tumor Cell Metastasis // In vivo. 1992. - Vol. 6. - P. 309-316.
231. Stracke M. L., Krutzsch H.C., Unsworth E.J. et al. Identification, purification, and partial sequence analysis of Autotaxin, a novel motility-stimulating protein // J. Biol. Chem. 1992. - Vol. 267. - P. 2524-2529.
232. Sugiura N., Sakurai K., Hori Y. et al. Preparation of lipid-derivatized glycosaminoglycans to probe a regulatory function of the carbohydrate moieties of proteoglycans in cell-matrix interaction // J. Biol. Chem. 1993. - Vol. 268. - P. 15779-15787.
233. Swanson N.A., Lee K.K., Gorman A., Lee H.N. Biopsy techniques. Diagnosis of melanoma. // Dermatol Clin. 2002.- Vol. 20. - P. 677-680.
234. Talantov D., Mazumder A., Yu J.X. et al. Novel genes associated with malignant melanoma but not benign melanocytic lesions. // Clin Cancer Res. — 2005. Vol. 11. - Vol. 7234-7242.
235. Tamm I., Cardinale I., Krueger J. et al. Interleukin 6 decreases cell-cell association and increases motility of ductal breast carcinoma cells // J. Exp. Med. -1989. Vol. 170. - P. 1649-1669.
236. Taraboletti G., Roberts D.D., Liotta L.A. Thrombospondin-induced tumor cell migration: haptotaxis and chemotaxis are mediated by different domains // J. Cell. Biol. 1987. - Vol. 105. - P. 2409-2415.
237. Templeton N. Т., Brown P.D., Levy A.T. et al. Cloning and characterization of human tumor cell interstitial collagenaes // Cancer Res. 1990. - Vol. 50. - P. 5431-5437.
238. Terranova V. P., Liotta L.A., Russo R.G., Martin G.R. Role of laminin in the attachment and metastasis of murine tumor cells // Cancer Res. 1982. - Vol. 42. -P. 2265-2269.
239. Terranova V. P., Williams J.E., Liotta L.A., Martin G.R. Modulation of the metastatic activity of melanoma cells by laminin and fibronectin // Science. 1984. - Vol. 226. - P. 982-985.
240. Theodorescu D., Cornil I., Fernandez В., Kerbel R.S. Overexpression of normal and mutated forms of c-Ha-ras induce orthotopic bladder invasion in a human transitional cell carcinoma // Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 1990. - Vol. 87. - P. 9047-9051.
241. Thiery J.P. Epithelial-mesenchymal transitions in tumour progression. // Nat. Rev. Cancer. 2002. - Vol. 2. - P. 442-454.
242. Thomas E. A., Carson M. J., Neal M. J., Sutcliffe J. G. Unique allosteric regulation of 5HT-mediated signalling by oleamide // Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 1997. - Vol. 94. - P. 14115-14119.
243. Thomas E. A., Cravatt B.F., Sutcliffe J.G. The Endogenous Lipid Oleamide Activates Serotonin 5-HT7 Neurons in Mouse Thalamus and Hypothalamus // J. Neurochem. 1999. - Vol. 72. - P. 2370-2378.
244. Thorgeirsson U. P., Liotta L.A., Kalebie T. et al. Effect of the natural protease inhibitors and a chemoattractant on tumor invasion in vitro // J. Natl. Cancer Inst. -1982. Vol. 69. - P. 1049-1054.
245. Todaro G. J., Fryling C., DeLarco J.E. Transforming growth factors produced by certain human tumor cells: polypeptides that interact with epidermal growth factor receptors // Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 1980. - Vol. 77. - P. 52585262.
246. Trimpe K. L., Zwilling B.S. Modulation of B16 Melanoma Antigen Expression by Lymphokines and Dimethyl Sulfoxide // Cancer Res. 1986. - Vol. 46. - P. 4953-4959.
247. Trosko J. E., Goodman J.I. Intercellular communication may facilitate apoptosis: implications for tumor promotion // Mol. Carcinogenesis. 1994. - Vol. 11.-P. 8-12.
248. Trosko J. E. The role of stem cells and gap junctional intercellular communication in carcinogenesis // J. Biochem. Mol. Biol. 2003. — Vol. 36. - P. 43-48.
249. Tsao H., Benoit E., Sober A.J. et al. Novel mutations in the pl6/CDKN2A binding region of the cyclin-dependent kinase-4 gene // Cancer Res. 1998. - Vol. 58.-P. 109-113.
250. Tuck А. В., Wilson S.M., Chambers A.F. Ras transfection and expression does not induce progression from tumorigenicity to metastatic ability in mouse LTA cells // Clin. Exp. Metastasis. 1990. - Vol. 8. - P. 417-431.
251. Tuszynski G. P., Rothman V.L., Deutch A.H. et al. Biological activities of peptides and peptide analogues derived from common sequences present in thrombospondin, properdin, and malarial proteins // J. Cell. Biol. 1992. - Vol. 116.-P. 209-17.
252. Tuveson D. A., Weber B.L., Herlyn M. BRAF as a potential therapeutic target in melanoma and other malignancies // Cancer Cell. 2003. - Vol. 4. - P. 95-98.
253. Urteaga O., Pack G.T. On the antiquity of melanoma // Cancer. 1966. - Vol. 19.-P. 607-610.
254. Vantyghem S.A., Postenka C.O., Chambers A.F. Estrous cycle influences organ-specific metastasis of B16F10 melanoma cells. // Cancer Res. 2003. - Vol. 63.-P. 4763-4765.
255. Villa P., Arioli P., Guaitani A. Mechanism of maintenance of liver-specific functions by DMSO in cultured rat hepatocytes // Exp. Cell. Res. 1991. - Vol. 194.-P. 157-160.
256. Vlodavsky I., Gospodarowicz D. Respective roles of laminin and fibronectin in adhesion of human carcinoma and sarcoma cells // Nature. 1981. - Vol. 289. -P. 304-306.
257. Vogelstein В., Fearon E.R., Hamilton S.R. et al. Genetic alterations during colorectal-tumor development // N. Engl. J. Med. 1988. - Vol. 319. - №9. - P. 525-532.
258. Wang B. S., McLoughlin G.S., Richie J.P., Mannick J.A. Correlation of the production of plasminogen activator with tumor metastasis in B16 mouse melanoma cell lines // Cancer Res. 1980. - Vol. 40. - P. 288-292.
259. Wang J. M., Taraboletti G., Matsushima K. et al. Induction of haptotactic migration of melanoma cells by neutrophil activating protein/interleukin-8 // Biochem. Biophys. Res. Comm. 1990. - Vol. 169. - P. 165-170.
260. Wang M., Stearns M.E. Blocking of collagenase secretion by estamustine during in vitro tumor cell invasion // Cancer Res. 1988. - Vol. 48. - P. 62626271.
261. Warner A. E., Guthrie S.C., Gilula N.B. Antibodies to gap-junctional protein selectively disrupt junctional communication in the early amphibian embryo // Nature. 1984. - Vol. 311. - P. 127-131.
262. Wasil M, H. В., Grootveld M., Moorhouse C.P. et al. The specificity of thiourea, dimethylthiourea and dimethylsulphoxide as scavengers of hydroxyl radicals // Biochem. J. 1987. - Vol. 243. - P. 867-870.
263. Watanabe H., Nabi I.R., Raz A. The relationship between motility factor receptor internalization and the lung colonization of murine melanoma cells // Cancer Res. 1991. - Vol. 51. - P. 2699-2705.
264. Weidner К. M., Behrens J., Vandekerckhove J., Birchmeier W. Scatter factor: Molecular characteristics and effect on the invasiveness of epithelial cells // J. Cell. Biol. 1990. - Vol. 111. - P. 2097-2108.
265. Weinstock, M. A. Epidemiology, etiology, and control of melanoma // Med. Health R. I. 2001. - Vol. 84. - P. 234-236.
266. Wellbrock C., Ogilvie L., Hedley D. ct al. V599EB-RAF is an oncogene in melanocytes // Cancer Res. 2004. - Vol. 64. - P. 2338-2342.
267. Whiteman D.C., Watt P., Purdie D.M. et al. Melanocytic nevi, solar keratoses, and divergent pathways to cutaneous melanoma. // J Natl Cancer Inst. 2003. -Vol. 95.-P. 806-812.
268. Wolfel Т., Hauer M., Schneider J. et al. A pl6INK4a-insensitive CDK4 mutant targeted by cytolytic T lymphocytes in a human melanoma // Science. -1995. Vol. 269. - P. 1281-1284.
269. Xiaojun G., Cravatt B.F., Ehring G.R. et al. The Sleep-inducing Lipid Oleamide Deconvolutes Gap Junction Communication and Calcium Wave Transmission in Glial Cells // The Journal of Cell Biology. 1997. - Vol. 139. -№7. - P. 1785-1792.
270. Yamagata M., Suzuki S., Akiyama S.K. et al. Regulation of cell-substrate adhesion by proteoglycans immobilized on extracellular substrates // J. Biol. Chem. 1989. - Vol. 264. - P. 8012-8018.
271. Yamagata M., Saga S., Kato M. et al. Selective distributions of proteoglycans and their ligands in pericellular matrix of cultured fibroblasts: Implications for their roles in cell-substratum adhesion // J. Cell. Sci. 1993. - Vol. 106. - P. 5565.
272. Yamagata M., Kimata K. Repression of a malignant cell-substratum adhesion phenotype by inhibiting the production of the anti-adhesive proteoglycan, PG-M/versican // J. Cell. Sci. 1994. - Vol. 107. - P. 2581-2590.
273. Yamasaki H. Gap junctional intercellular communication and carcinogenesis // Carcinogenesis. 1990. - Vol. 11. - P. 1051-1058.
274. Yamasaki H., Mesnil M., Omori Y. et al. Intercellular communication and carcinogenesis // Mutat. Res. 1995. - Vol. 333. - P. 181-188.
275. Yamasaki H., Omori Y., Zaidan-Dagli M.L. et al. Genetic and epigenetic changes of intercellular communication genes during multistage carcinogenesis // Cancer Detect. Prev. 1999. - Vol. 23. - P. 273-279.
276. Yang A.D., Fan. F., Camp. E.R. et al. Chronic oxaliplatin resistance induces epithelial-to-mesenchymal transition in colorectal cancer cell lines. // Clin Cancer Res. 2006. - Vol. 12. - P. 4147-4153.
277. You M. J., Castrillon B.H., Bastian B.C. et al. Genetic analysis of Pten and Ink4a/Arf interactions in the suppression of tumorigenesis in mice // Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 2002. - Vol. 99. - P. 1455-1460.
278. Zerp S. F., van Elsas A., Peltenburg L.T., Schrier P.I. p53 mutations in human cutaneous melanoma correlate with sun exposure but are not always involved in melanomagenesis // Br. J. Cancer. 1999. - Vol. 79. - P. 921-926.
279. Zhang Y., Xiong Y., Yarbrough W.G. ARF promotes MDM2 degradation and stabilizes p53: ARF-INK4a locus deletion impairs both the Rb and p53 tumor suppression pathways // Cell. 1998. - Vol. 92. - P. 725-734.
280. Zhu D., Kidder G.M., Caveney S., Naus C.C. Growth retardation in glioma cells cocultured with cells overexpressing a gap junction protein // Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 1992. - Vol. 89. - P. 10218-10221.
281. Zuo L., Weger J., Yang Q. et al. Germline mutations in the pl6INK4a binding domain of CDK4 in familial melanoma // Nat. Genet. 1996. - Vol. 12. - P. 97-99.