Автореферат и диссертация по медицине (14.00.36) на тему:Особенности сенсибилизации к пыльцевым и пищевым аллергенам растительного происхождения у больных поллинозом

На правах рукописи

СЕРГЕЕВ АНДРЕЙ ВИКТОРОВИЧ

Особенности сенсибилизации к пыльцевым и пищевым аллергенам растительного происхождения у больных поллинозом

14.00.36 - аллергология и иммунология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Москва - 2004

Работа выполнена в ГУ Научно-исследовательский институт вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова РАМН

НАУЧНЫЙ РУКОВОДИТЕЛЬ: доктор медицинских наук

М.А. Мокроносова

ОФИЦИАЛЬНЫЕ ОППОНЕНТЫ:

доктор медицинских наук, чл.-корр. РАМН, профессор И.И. Балаболкин доктор медицинских наук, профессор Н.Б. Егорова

ВЕДУЩЕЕ УЧРЕЖДЕНИЕ: ГНЦ Институт иммунологии Федерального

Управления медико-биологических и экстремальных проблем при МЗ РФ

Защита состоится << » С'С^И^Н/СуС^ 2004 года в 14 часов на заседании специализированного совета Д 001. 38 . 01 при ГУ НИИ вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова РАМН по адресу: 105064, г. Москва, Малый Казенный пер., 5а.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГУ НИИ вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова РАМН.

Автореферат разослан << » и^^.У^} 2004 г.

Ученый секретарь специализированного совета, кандидат биологических наук

И. В. Яковлева

Общая характеристика работы Актуальность проблемы

В последние десятилетия отмечается неуклонный рост числа аллергических заболеваний. (Адо В.А., 1991; Ильина Н.И., 1996; Wuthrich В., 1995; Asher M., 1998). В структуре аллергической патологии заболевания, обусловленные сенсибилизацией к пыльцевым аллергенам, составляют до 26% (Балаболкин И.И.; 1996, Остроумов А.И., 1980). Наиболее часто поллино-зом страдают дети и лица молодого возраста, что представляет собой серьезную проблему современного здравоохранения.

У 40-70% больных поллинозом выявляются аллергические реакции на пищевые продукты растительного происхождения. В иммунопатологической основе этого феномена лежит перекрестная реактивность между пыльцевыми и растительными пищевыми аллергенами (Amlot Р., 1987; Valenta R., 1991). Это приводит к резкому ограничению рациона питания больных, преимущественно, за счет исключения из него растительной пищи.

В литературе регулярно появляются описания случаев тяжелых анафилактических реакций на овощи, фрукты и орехи (Cantani A., 1998; Asero R., 2001; Anibarro В., 1994; Escribano М., 1996; Fiocchi А., 2003; Gandol-fo M., 2001; и др.). В последние десятилетия диета жителей средней полосы России претерпела значительные изменения: выросло употребление экзотических фруктов и овощей, сои, арахиса и содержащих их продуктов.

Диагностика реакций на пищевые аллергены растительного происхождения затруднена вследствие наличия ложноотрицательных тестов, обусловленных использованием нестандартизованных и нестабильных коммерческих аллергенных экстрактов, и ложноположительных реакций, связанных с явлением перекрестной реактивности.

В связи с вышесказанным, актуальным является проблема иссдедова-.«

. . . ^ .

ния спектра наиболее важных растительных аллергенов, в

сибилизацию у больных поллинозом, а также совершенствование методов диагностики пищевой аллергии и внедрение в практику новых легко воспроизводимых и клинически значимых тестов.

Большой интерес представляет проблема взаимосвязи между концентрацией пыльцы в воздухе и клинико-иммунологическими показателями аллергии. Проводимый в Москве в последние годы мониторинг концентрации пыльцевых зерен в атмосферном воздухе позволяет осуществить такое исследование.

Объективными признаками воспаления слизистой оболочки дыхательных путей служат повышение количества эозинофилов в назальном секрете и увеличение концентрации оксида азота в выдыхаемом воздухе (Martin U., 1996, Satouchi M., 1996; Wrnther L., 1999). Изучение динамики колебаний значений этих показателей при аллергических процессах позволяет получить дополнительные данные для объективной оценки иммунологической реактивности больных и тяжести течения заболевания.

Цель исследования Определить структуру сенсибилизации больных поллинозом, выявить клинические особенности реакций на аллергены растительного происхождения и оценить влияние концентрации пыльцевых аллергенов в атмосфере на выраженность проявлений поллиноза.

Задачи исследования»

1. Выявить спектр пыльцевых и пищевых аллергенов растений, вызывающих сенсибилизацию у больных поллинозом, и оценить клинические особенности проявления этой патологии.

2. Дать сравнительную характеристику диагностической информативности различных методов кожного тестирования и определения IgE-антител (IgE-AT) в сыворотке, используемых для выявления сенсибилизации к пищевым аллергенам растительного происхождения у больных поллинозом.

3. Исследовать влияние экспозиции пыльцы деревьев на клинические проявления поллиноза, содержание эозинофилов в назальном секрете и суммарную концентрацию нитратов и нитритов в конденсате выды-

хаемого воздуха (КВВ).

Научная новизна

Проведена сравнительная характеристика диагностической значимости различных методов выявления сенсибилизации больных поллинозом к пищевым аллергенам растительного происхождения. Показано, что наиболее информативным являлся метод определения сывороточных прик-прик тест (ППТ) был значительно чувствительней прик-теста и не уступал ему по специфичности.

Впервые проведен мониторинг цитологии назального секрета у больных поллинозом и выявлено, что концентрация пыльцы деревьев в атмосфере коррелирует с тяжестью течения аллергического риноконъюнктиви-та и эозинофилией назального секрета.

Показано влияние экспозиции пыльцы деревьев на величину концентрации метаболитов оксода азота в выдыхаемом воздухе у больных полли-нозом.

Практическая значимость

1. Внедрен в практику метод ППТ со свежими фруктами и овощами для выявления сенсибилизации к пищевым аллергенам растительного происхождения на базе лаборатории клинической аллергологии ГУ НИИВС им. И.И. Мечникова РАМН.

2. Опубликовано пособие для врачей «Назальный провокационный тест в диагностике аллергических заболеваний верхних дыхательных путей», Москва. - 2002 г. - 12 с.

3. Опубликована научно-популярная статья «Мой проклятый полли-ноз» //Здоровье. - 2003. - №4. - С.42-45.

Основные положепия, выносимые на защиту

1. Тяжесть клинических проявлений поллиноза определяет синдром поливалентной сенсибилизации к пыльцевым и пищевым аллергенам растительного происхождения. Индукция IgE-AT к главным аллергенам березы Bet v 1 и Bet v2 лежит в основе феномена перекрестной реактивности пыльцевых и пищевых аллергенов.

2. Чувствительность ППТ с использованием свежих фруктов и овощей превышает показатели прик теста с коммерческими аллергенами и уступает методу определения IgE-AT.

3. Экспозиция пыльцевых аллергенов на слизистую . оболочку дыхательных путей больных поллинозом вызывает развитие эозинофилии в назальном секрете и увеличение концентрации, метаболитов оксида азота в КВВ.

4; . Концентрация пыльцы в атмосфере коррелирует со степенью клинических проявлений поллиноза.

Апробация материалов диссертации и публикации

Материалы диссертации доложены на ежегодных конференциях молодых ученых ГУ НИИВС им. И.И. Мечникова РАМИ (2001, 2002), на 4-ом и-5-ом Национальных конгрессах РААКИ (г. Москва 2001, 2002), на XXI и XXII конгрессах EAACI (г. Неаполь, Италия 2002, г. Париж, Франция 2003), на VI Всероссийской научной конференции с международным участием. «Дни иммунологии в Санкт-Петербурге» (г. Санкт-Петербург, 2002), на международном симпозиуме «Аллерговакцинация: новые стратегии и перспективы» (г. Сочи, 2002), на XIII Национальном конгрессе по болезням органов дыхания (г. Санкт-Петербург, 2003), на юбилейной конференции врачей Юга России с международным участием «Поллинозы» (г. Сочи, 2003).

Основные положения диссертации изложены в 12 печатных работах.

Апробация диссертации состоялась 16 января 2004 г. на заседании отдела аллергологии и неинфекционной иммунологии ГУ НИИВС им. И. И. Мечникова РАМН.

Объем и структура диссертации

Материалы диссертации изложены на 115 листах машинописного текста, иллюстрированы 21 таблицами 18 рисунками.

Диссертация состоит из введения, двух глав обзора литературы, двух глав собственных исследований, заключения и выводов. Список использованной литературы включает 157 источников, из них 18 на русском языке.

Содержание работы Материалы исследования

На базе лаборатории клинической аллергологии НИИВС им. И.И. Мечникова РАМН было обследовано 240 пациентов с поллинозом (81 взрослый и 159 детей в возрасте от 3 до 14 лет) В группу сравнения вошли 82 атопических больных с сенсибилизацией к аллергенам клещей домашней пыли, в группу контроля - 20 практически здоровых взрослых.

Материалами для исследования служили образцы сыворотки крови, образцы назального секрета, образцы КВВ. В работе использовали коммерческие биологические препараты: пыльцевые и пищевые аллергены производства ГУП «Аллерген» (г. Ставрополь), фирмы «Stallergenes» (Франция). Рекомбинантные аллергены пыльцы березы Bet v 1 и Bet v 2 были любезно предоставлены проф. R. Valenta (Австрия).

Методы исследования-

Сенсибилизацию к пыльцевым и пищевым аллергенам растительного происхождения выявляли на основании аллергологического анамнеза, клинического обследования больных и данных лабораторных тестов: положительных кожных проб с пыльцевыми аллергенами, повышенного

уровня общего IgE и IgE-AT, увеличения содержания эозинофилов в клиническом анализе периферической крови.

Сбор данных анамнеза проводили в ходе беседы с пациентами с использованием специально разработанной нами анкеты.

Прик тесты с коммерческим аллергенами были выполнены согласно стандартной методике.

Кожное тестирование методом ППТ проводили по методике Dreborg S. (1983) в нашей модификации.

Количественное определение уровней IgE-AT к пыльцевым и пищевым аллергенам в сыворотках крови проводили с использованием кит набора «PolyCheck®» (Milenia Biotec GmbH, Германия) согласно инструкции по применению. Учет полученных результатов проводили на персональном компьютере с планшетным сканером с использованием программного обеспечения BioCheck Image Software v 1.2b, разработанного BioCheck GmbH.

Выявление сывороточных IgE-AT к рекомбинантным аллергенам березы Bet v 1 и Bet v 2 проводили методом дот-блота. В качестве твердой фазы использовали нитроцеллюлозу. Анализ проводили с применением реагентов из набора «PolyCheck®».

Цитологический анализ пазального секрета (ЦАНС) выполняли с помощью световой микроскопии окрашенных мазков содержимого полости носа.

Мониторинг ЦАНС проводили во время сезона палинации деревьев весной 2002г. и весной 2003г. Назальный секрет забирали 1 раз в 2 дня в период с 1 апреля по 30 мая. Были собраны образцы содержимого носовой полости от 8 больных с сенсибилизацией к пыльце деревьев, не получавших во время проведения исследования антигистаминных и гормональных препаратов.

Данные о количественном содержании пыльцы в атмосферном воздухе г. Москва, представленные сотрудниками биологического факультета МГУ им. М.В. Ломоносова, были получены с веб сайта ww.allergology.ru.

Для косвенного определения содержания N0 в выдыхаемом воздухе использовали выявление суммарной концентрации его метаболитов (нитратов и нитритов) по методу, разработанному в лаборатории экспериментальной биофизики НИИ пульмонологии МЗ РФ (Соодаева С.К. с соавт.). Содержащиеся в КВВ нитраты восстанавливали до нитритов с помощью кадмиевого редуктора. Для определения содержания нитритов к пробе добавляли 0,6 % раствор реактива Грисса, далее пробу фотометрировали относительно контрольного раствора при длине волны 540 им в кювете с длинной оптического пути 1 см. Оценку результатов проводили по калибровочному графику, построенному в диапазоне 1-50 мкМ нитритов.

Назальные провокационные тесты (НПТ) с пыльцевыми аллергенами были проведены согласно разработанной нами методике. Для учета результатов тестов использовали разработанную нами шкалу оценки клинических симптомов и ЦАНС. Назальный секрет для исследования забирали перед постановкой теста и спустя 20 мин. после введения раствора аллергена в полость носа.

Статистическую обработку количественных данных проводили с помощью статистических формул программы Microsoft® Excel 2002 (10.2705.2635) с использованием параметрических и непараметрических статистических величин.

Результаты исследования и их обсуждение

Нами было обследовано 240 больных, сенсибилизированных к пыльцевым аллергенам. Из них у 95,42% верифицировали диагноз аллергический ринит, у 34,58% - бронхиальную астму и у 2,92% - синдром атопиче-ской экземы/дерматита. Причем, бронхиальную астму выявляли в 2 раза

чаще у пациентов в возрасте старше 14 лет (р<0,01), что свидетельствовало об усугублении тяжести течения поллиноза с увеличением длительности заболевания.

На основании данных анкетирования, кожного тестирования и выявления IgE-AT в сыворотке крови, представленных в таблице 1, очевидно, что среди обследованных пациентов доминировала сенсибилизация к пыльце деревьев (от 85,83% до 97,50% по результатам различных методов). Гиперчувствительность к аллергенам пыльцы сложноцветных трав определяли в 3-4 раза реже, чем к аллергенам пыльцы деревьев и в 1,5-2 реже, чем к аллергенам пыльцы злаковых трав, что отражало региональные особенности флоры, характерные для средней полосы России (присутствие в атмосфере в большом количестве пыльцевых зерен лиственных деревьев и злаков).

Таблица 1.

Структура, сенсибилизации обследованных пациентов к пыльцевым аллергенам

Метод обследования Аллерген

Пыльца деревьев Пыльца, злаковых трав Пыльца сорных трав

пп %% пп %% пп %%

Анкетирование 206 85,83 116 48,33 51 21,25

Прик тест 198 82,50 107 44,58 72 30,00

Выявление IgE-AT 234 97,50 88 36,67 59 24,58

Симптомы аллергии, возникающие при употреблении различных фруктов' и овощей, были выявлены по данным анкетирования у 98 (61,63%) детей и 53 (65,43%) взрослых больных. Наиболее частыми клиническими проявлениями аллергических реакций на растительную пищу

являлись синдром оральной аллергии (СОА), отек Квинке и острая крапивница (табл. 2). С возрастом частота эпизодов аллергии и спектр реакто-генных продуктов растительного происхождения увеличивались.

Большинство пациентов после перенесенных острых аллергических реакций на какие-либо пищевые продукты растительного происхождения отмечали появление чувства страха, тревожности при употреблении их в пишу. В связи с этим сами больные необоснованно ограничивали пищевой рацион.

Таблица 2.

Выявление аллергических реакций на пищевые продукты раститель-

ного происхождения по данным анкетирования

Клинические проявления аллергии Частота встречаемости, %

До 14 лет Старше 14 лет

Синдром оральной аллергии 44,65 48,15

Отек Квинке 13,21 , 20,99

Острая крапивница 7,55* 17,28*

Заложенность носа и ринорея 3,14 3,70

Удушье 1,26 4,94

Конъюнктивит 1,26 1,23

Рвота идиарея > 3,77 2,47

Обострение синдрома атонической экзе- 2,52 1,23'

мы\дерматита

* р<0,05

Наиболее часто аллергические реакции возникали при употреблении в пищу яблок и лесных орехов (25%), реже - меда, грецких орехов, моркови, персика, киви ((10-12)%), картофеля, цитрусовых, арахиса (7%). Аллергию на банан, дыню, вишню, грушу, горох, абрикос, ананас регистрировали у (3-5)% обследованных.

Большинство больных указывали на несколько продуктов растительного происхождения, вызывающих аллергические реакции (один или два

пищевых, продукта называли 12,92% пациентов, три-четыре продукта -25,42%, более пяти - 24,58%).

При постановке прик тестов положительные реакции хотя бы с одним из стандартизованных пищевых аллергенов фирмы Stallergenes (Франция) наблюдали у 141 пациента с поллинозом, что составило 58,75% обследованных. Наиболее часто были выявлены положительные кожные реакции с аллергенами из арахиса (40,0%), сельдерея (32,08%), сои (29,58%), картофеля (24,17%) и моркови (21,67%). Прик тесты с аллергенами из лесного ореха, томата, киви, гороха, клубники и дыни были положительными приблизительно у (10-20)% больных; манго, абрикоса, грецкого ореха, персика и яблока - у (5-10)%. Из 38 пациентов группы сравнения без поллиноза и СОА у 5 (13,1%) были зафиксированы слабоположительные реакции с пищевыми растительными аллергенами.

Учитывая выявленное в 16,29% случаев несоответствие данных анамнеза результатам прик тестов, мы разработали модификацию ППТ с натив-ными овощами и фруктами. ППТ был проведен 51 пациенту с поллинозом с использованием банана, картофеля, киви, манго, моркови, персика и яблока.

Для оценки диагностической информативности ППТ, было проведено сравнение результатов анкетирования, кожного тестирования со стандартизованными аллергенами. фирмы Stallergenes и высокочувствительного стандартизованного в соответствии с международными требованиями к диагностикумам, метода «PolyCheck®» (Milenia Biotec GmbH, Германия) выявления IgE-AT.

IgE-AT к пищевым растительным аллергенам выявили у 130 пациентов с поллинозом (54,17% обследованных). Наиболее часто (37,9-32,1)% были определены IgE-AT к аллергенам яблока, моркови и арахиса.

Были вычислены показатели чувствительности (способности выявлять аллерген, вызывающий проявления реакций на пищевые продукты у боль-

ных) и специфичности (избирательности) методов с учетом совпадения данных кожных проб и выявления ]^Е-АТ с данными анамнеза (Кеглей 2002). Сравнительная характеристика методов представлена в таблице 3.

Таблица 3.

Сравнительная характеристика методов выявления сенсибилизации к пищевым аллергенам растительного происхождения

Метод Чувствительность, % Специфичность, %

1. Прик тест 39,67+0,72 87,53+0,49

2. Прик-прик тест 66,67+2,49 78,98+2,17

3. Выявление ]^Е-АТ 86,13+1,02 82,12+1,13

Показатель достоверности различий р Р12<0,01. Р13<0,01 р23<0,01

Специфичность всех трех методов исследования была высокой и колебалась в пределах (78,98-87,53)%. Чувствительность методик значительно варьировала: самое низкое значение отмечали для прик теста с коммерческими аллергенами (39,67±0,72)%, самое высокое - для определения IgE-AT (86,13+1,02)%.

Использованный нами ППТ оказался более чувствительным, чем прик тест, но уступал по этому показателю методу определения IgE-AT.

В настоящее время известно, что наиболее выраженной сенсибилизирующей активностью среди протеинов; содержащихся в пыльцевых зернах березы, обладают Bet v 1 и Bet v 2, охарактеризованные и полученные в виде рекомбинантных аллергенов. Большинство перекрестных реакций, возникающих между пищевыми и пыльцевыми растительными аллергена-

ми, связывают с индукцией AT к этим двум главным аллергенам пыльцы березы. В этой связи было проведено исследование наличия IgE-AT к ре-комбинантным аллергенам Bet v 1 и Bet v 2 у 50 больных поллинозом.

IgE-AT к Bet v 1 и Bet v 2 в сыворотках крови выявляли с одинаковой частотой - у 52,0% больных. В 61,54% случаев IgE-AT к Bet v 1 и в 65,38% - IgE-AT к Bet v 2 были определены у пациентов с синдромом поливалентной сенсибилизации: наличием клинических проявлений аллергии на многие фрукты и овощи, реакций гиперчувствительности на несколько видов пыльцевых аллергенов и присутствием в сыворотке крови IgE-AT к пищевым и пыльцевым растительным аллергенам. Значения критерия согласия х2 составили для Bet v 1 - 6,76, и для Bet v 2 - 10,01 (р<0,01). Индукция IgE-AT к главным аллергенам березы у обследованных больных поллино-зом, вероятно, представляет собой патогенетическую основу перекрестных, реакций на широкий спектр аллергенов растительного происхождения.

Отличительной чертой сенсибилизации к пыльцевым аллергенам является выраженная сезонность клинических проявлений, связанная с появлением в атмосфере большого количества пыльцевых зерен.

100 90 80 70 60 — » 50 40 30 20 10 0

Период высокой концентрации пыльцы в воздухе -

о о 'о ч

о» 'О. ' о

» Kft"---Q

4^2 <>8 QK

°0г <)

........ ^ • Ч , Q

Рисунок 1. Содержание эозинофилов (в процентах) в назальном секрете больных поллинозом, обследованных в апреле и мае 2002 г. (п=51)

Рисунок 2. Содержание эозинофилов (в процентах) в назальном секрете больных поллинозом, обследованных в апреле и мае 2003 г.(п=78).

Для изучения влияния концентрации пыльцы на уровень эозинофилов в назальном секрете был поведен ЦАНС 51 больному поллинозом в период с 1 апреля по 30 мая 2002 г. и 78-ми пациентам - в мае и апреле 2003 г. На рис. 1 и рис. 2 представлены результаты обследования больных в сезоны пыления деревьев в 2002 и 2003 гг.

Было выявлено достоверно большее содержание эозинофилов в ЦАНС, выполненным пациентам во время сезона палинации, по сравнению с эозинофилией назального секрета вне сезона палинации (р<0,01).

До сезона цветения деревьев 2002 г. средний уровень эозинофилов составил (6,54±7,130)%, в период активной палинации (48,92%±10,0)%.

В 2003 г. этот показатель был (6,02±3,33)% и (53,14±13,84)%, соответственно. При проведении данного исследования оказалось, что существует индивидуальная реактивность больных на экспозицию пыльцевых зерен.

Для того чтобы проследить динамику эозинофильной инфильтрации назального секрета, был проведен мониторинг ЦАНС восьми пациентам в условиях различной концентрации пыльцы деревьев в атмосферном возду-

хе. У 5 из 8 обследованных больных была выявлена корреляция между содержанием эозинофилов в назальном секрете и концентрацией пыльцевых зерен в атмосферном воздухе. Тяжесть течения аллергического риноконъ-юнктивита, выраженная в баллах, у 6 больных совпадала с эозинофилией

Таблица 4.

Связь между клиническими проявлениями поллиноза, эозинофилией назального секрета и концентрацией пыльцевых зерен деревьев в воздухе.

Пациент Коэффициент корреляции (г)

Эозинофилия назального секрета; и концентрация пыльцы Эозинофилия назального секрета и выраженность симптомов Выраженность симптомов и концентрация пыльцы

П.П. 0,648** 0,947** 0,804**

ГЛ. 0,076 0,708** 0,459

А.Н. 0,568* 0,757** 0,559*

Л.О. 0,832** 0,665** 0,310

Н.Е. 0,849** 0,351 0,303

П.Р. 0,863** 0,793** 0,511

А.Е. -0,295 -0,412 0,785**

С.Н. 0,317 0,607* 0,637**

*-р<0,1 **-р<0,05

назального секрета. Результаты изучения корреляционных связей между эозинофилией в назальпом секрете, концентрацией пыльцы и выраженностью клинических проявлений поллиноза отражены в таблице 4.

Выявленное у 2 больных несоответствие выраженности симптомов с уровнем эозинофилов в назальном секрете свидетельствует о наличии индивидуальной иммунологической реактивности.

С целью подтверждения сенсибилизации к пыльцевым аллергенам вне сезона пыления, был проведен НПТ. Динамика изменений клеточного состава назального секрета показала достоверное увеличение содержания эо-зинофилов спустя 20 минут после введения разведения аллергена у всех пациентов (г = 0,84; р<0,05). Средний уровень эозинофилов до проведения теста составлял (7,46±3,54)%, после - (24,89±5,83)% (рис. 3).

35

30

До введения разведения После введения разведения

аллергена аллергена

Рисунок 3. Среднее содержание эозинофилов в назальном секрете до и после постановки провокационных тестов с пыльцевыми аллергенами.

Таким образом, экспозиция пыльцевых аллергенов деревьев в условиях эксперимента, вызывала изменения в содержании эозинофилов в назальном секрете, подобные тем, которые были выявлены у пациентов в естественных условиях под воздействием пыльцевых зерен деревьев.

Кроме того, учитывая данные об усугублении тяжести течения полли-ноза с развитием бронхиальной астмы, выявленной у половины обслсдо-

ванных больных, мы провели исследование влияния экспозиции пыльцевых зерен на величину суммарной концентрации метаболитов N0 - нитратов и нитритов в КВВ. Было проведено определение ЕЪТЫ в образцах КВВ, полученных от 22 взрослых больных поллинозом с сенсибилизацией к аллергенам пыльцы деревьев с клиническими проявлениями ринита и бронхиальной астмы. Забор проб КВВ от каждого обследуемого проводился в зимние месяцы (январь и февраль), второй раз в период активной палина-ции деревьев и высокой концентрации пыльцы в воздухе (апрель и май).

25 -

До экспозиции Во время экспозиции

□ Аллергический ринит ■ Аллергический ринит и бронхиальная астма ■ Здоровые

Рисунок 4. Суммарная концентрация нитратов и нитритов в конденсате выдыхаемого воздуха до и во время экспозиции пыльцы деревьев.

Данные о величинах ЕЫМ, полученные в ходе исследования, приведены на рис. 4.

В группе больных ринитом отмечено достоверное увеличение после экспозиции аллергенов с (4,4±1,3)мкМ/мл до- (10,1±1,4)мкМ/мл (р<0,05). В группе больных бронхиальной астмой так же было выявлено

достоверное увеличение: ZNN с (7,5+2,8)мкМ/мл до (19,7+2,4)мкМ/мл (р<0,01); В ходе исследования не было выявлено изменения ENN до и во время экспозиции пыльцы деревьев в группе здоровых.

Таким образом, увеличение ENN в КВВ, выявленное у больных пол-линозом во время активного пыления деревьев, свидетельствовало о наличии у них воспаления слизистой не только верхних, но и нижних дыхательных путей, возникшего в ответ на воздействие пыльцевых аллергенов.

Выводы.

1. У обследованных больных поллинозом особенностью структуры сенсибилизации является доминирующая роль аллергенов пыльцы деревьев (в (82,5- 97,50)% по данным различных методов диагностики).

2. Клиническими особенностями поллиноза являются:

-наличие имптомов пищевой аллергии на продукты растительного происхождения у 62,92% больных; -наличие поливалентной сенсибилизации;

-наличие симптомов бронхиальной астмы у 51,85% взрослых и 25,79%детей(р<0,01);

-наличие симптомов пищевой аллергии на продукты растительного происхождения у 61,63% детей и 65,43% взрослых больных; (наиболее часто при употреблении в пищу яблок, орехов, меда, моркови, персиков, киви).

3. Чувствительность разработанной модификации ПИТ с нативными пищевыми продуктами, превышает чувствительность прик теста с коммерческими аллергенами (66,67% и 39,67%, соответственно), и существенно не уступает по этому показателю стандартному методу выявления IgE-AT.

4. IgE-AT к аллергенам Bet v 1 и Bet v 2 выявляются в сыворотках 64,0% больных поллинозом с клиническими проявлениями аллергии на пыльцу березы. Наличие IgE-AT к Bet v 1 и Bet v 2 коррелирует с признаками поливалентной сенсибилизации (р<0,01).

5. Содержание эозинофилов в назальном секрете больных поллинозом и выраженность клинических проявлений риноконъюнктивита' в 62,5% случаев коррелирует с величиной концентрации пыльцы в воздухе.

6. Провокация раствором пыльцевых аллергенов при проведении НПТ пациентам с поллинозом вне сезона пыления вызывает достоверное повышение содержания эозинофилов в назальном секрете с (7,46±3,54)%, до (29,89±5,83)%.

7. Величина ЕЫК в КВВ у пациентов с поллинозом в период высокой концентрации пыльцевых аллергенов в воздухе существенно увеличивается по сравнению с в КВВ вне сезона активной палинации: у больных с клиникой аллергического риноконъюнктивита с (4,4±1,3)мкМ/мл до (10,1±1,4)мкМ/мл, и у больных с бронхиальной астмой с (7,5±2,8)мкМ/мл до(19,7±2,4)мкМ/мл.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1.Сергеев А.В., Мокроносова М.А., Бабахин А.А. Сенсибилизация к аллергенам растительного происхождения у больных поллинозом. //Сборник трудов 4-го Конгресса РААКИ «Современные проблемы аллергологии, иммунологии и иммунофармакотерапии». - г. Москва. - 29-31 мая 2001 г. Т.2.-С.471.

2.Сергеев А.В., Мокроносова М.А. Аллергия к пищевым аллергенам растительного происхождения у больных поллинозом.// Аллергология. - 2002 г. -№1.-С.51-55.

3.Сергеев А.В., Мокроносова М.А. Аллергия к фруктам и овощам у больных поллинозом в г. Москве. // Аллергология и иммунология. - 2002 г. - Том 3 №1.-С.188-191.

4.Тарасова Г.Д., Мокроносова М.А., Кочетова Ю.И., Фошина Е.П., Сергеев А.В. Назальный провокационный тест в диагностике аллергических забо-

леваний верхних дыхательных путей. Пособие для врачей. // Москва. -2002 г.-12 с.

5.Сергеев А.В., Мокроносова М.А. Выявление аллергенспецифических IgE-антител в сыворотке крови у детей с аллергическими заболеваниями с использованием набора PolyCheck®. // Сборник трудов VI Всероссийской научной конференции «Молекулярные основы иммунорегуляции, иммунодиагностики и иммунотерапии».- г. Санкт Петербург. - 20-23 мая 2002 г.-С. 182.

6.Sergeyev A., Mokronosova M. Allergy to plant origin food in the patients with hay fever living in Moscow. // EAACI. XXI Congress. Syllabus. - Naples. Italy. -June 1-5,2002.-P. 93.

7.Сергеев А.В., Мокроносова М.А. Аллергия к арахису у больных поллинозом г. Москвы. // Сборник трудов 5-го Конгресса РААКИ. «Современные проблемы аллергологии, иммунологии и иммунофармакотерапии». - г. Москва. - 12-14 ноября 2002 г. - С. 471.

8.Сергеев А. В., Мокроносова М.А. Сенсибилизация к аллергенам растительного происхождения у больных поллинозом в городе Москве. // Сборник трудов международного симпозиума «Аллерговакцинация: новые стратегии и перспективы». - г. Сочи. - 24 - 27 ноября 2002 г. - С. 14-20.

9.Мокроносова М.А., Сергеев А.В., Кочетова Ю.И. Определение IgE-антител к различным аллергенам в крови детей от родителей, болеющих поллинозом. // Медицинская иммунология. - 2003 г. - Том 5. - № 1-2. - С. 113-116.

lO.Sergeyev A., M. Mokronosova M. Influence of pollen allergens on eosinophils' count in nasal secret, in patients with hay fever. // EAACI. XXII Congress. Syllabus. -Paris. France. - June 7-11,2003. - P. 93.

11.Мокроносова М.А., Сергеев А.В., Кочетова Ю.И. Влияние экспозиции аллергенов пыльцы деревьев на содержание эозинофилов в назальном секрете больных поллинозом. // Успехи современного естествознания. - 2003.-4.-С.26.

12.Соодаева С.К., Климанов И.А., Сергеев А.В., Запрудникова Е.А., Чучалин А.Г. Изменение метаболизма оксида азота при атопии. // Сборник трудов XIII Национального конгресса по болезням органов дыхания - г. Санкт-Петербург. - 2003 .-С.84.

Подписано в печать 30.04.2004 г. Формат 60x90,1/16. Объем 1,5 п.л. Тираж 100 экз. Заказ № 140

Отпечатано в ООО "Фирма Блок" 107140, г. Москва, ул. Русаковская, д.1. т. 264-30-73 www.blok01 centre.narod.ru Изготовление брошюр, авторефератов, переплет диссертаций.

В последние десятилетия отмечается неуклонный рост числа аллергических заболеваний. (9, 28, 154). В структуре аллергической патологии заболевания, обусловленные сенсибилизацией к пыльцевым аллергенам, составляют до 26% (6, 3,4). Наиболее часто поллинозом страдают дети и лица молодого возраста, что представляет собой серьезную проблему современного здравоохранения (5, 46).

У 40-70% больных поллинозом выявляются аллергические реакции на пищевые продукты растительного происхождения. В иммунопатологической основе этого феномена лежит перекрестная реактивность между пыльцевыми и растительными пищевыми аллергенами (24, 142). Это приводит к резкому ограничению рациона питания больных, преимущественно, за счет исключения из него растительной пищи.

В литературе регулярно появляются описания случаев тяжелых анафилактических реакций на овощи, фрукты и орехи (25, 27, 42, 57, 64 и др.). В последние десятилетия диета жителей средней полосы России претерпела значительные изменения: выросло употребление экзотических фруктов и овощей, сои, арахиса и содержащих их продуктов.

Диагностика реакций на пищевые аллергены растительного происхождения затруднена вследствие наличия ложноотрицательных тестов, обусловленных использованием нестандартизованных и нестабильных коммерческих аллергенных экстрактов, и ложноположительных, связанных с явлением перекрестной реактивности.

В связи с вышесказанным, актуальными являются исследование спектра наиболее важных растительных аллергенов, вызывающих сенсибилизацию у больных поллинозом, а также совершенствование методов диагностики пищевой аллергии и внедрение в практику новых легко воспроизводимых и клинически значимых тестов.

Большой интерес представляет проблема взаимосвязи между концентрацией пыльцы в воздухе и клинико-иммунологическими показателями аллергии. Проводимый в Москве в последние годы мониторинг концентрации пыльцевых зерен в атмосферном воздухе позволяет осуществить такое исследование.

Объективными признаками воспаления слизистой оболочки дыхательных путей служат повышение количества эозинофилов в назальном секрете и увеличение концентрации оксида азота в выдыхаемом воздухе (85, 119, 153). Изучение динамики колебаний значений этих показателей при аллергических процессах позволяет получить дополнительные данные для объективной оценки иммунологической реактивности больных и тяжести течения заболевания.

ЦЕЛЬ ИССЛЕДОВАНИЯ:

Определить структуру сенсибилизации больных поллинозом, выявить клинические особенности реакций на аллергены растительного происхождения и оценить влияние концентрации пыльцевых аллергенов в атмосфере на выраженность проявлений поллиноза.

ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ:

1. Выявить спектр пыльцевых и пищевых аллергенов растений, вызывающих сенсибилизацию у больных поллинозом, и оценить клинические особенности проявления этой патологии.

2. Дать сравнительную характеристику диагностической информативности различных методов кожного тестирования и определения ^Е-антител (1§Е-АТ) в сыворотке, используемых для выявления сенсибилизации к пищевым аллергенам растительного происхождения у больных поллинозом.

3. Исследовать влияние экспозиции пыльцы деревьев на клинические проявления поллиноза, содержание эозинофилов в назальном секрете и суммарную концентрацию нитратов и нитритов (ЕЫК) в конденсате выдыхаемого воздуха (КВВ).

НАУЧНАЯ НОВИЗНА ИССЛЕДОВАНИЯ:

Проведена сравнительная характеристика диагностической значимости различных методов выявления сенсибилизации больных поллино-зом к пищевым аллергенам растительного происхождения. Показано, что наиболее информативным являлся метод определения сывороточных ^Е-АТ; прик-прик тест (ППТ) был значительно чувствительней прик-теста и не уступал ему по специфичности.

Впервые проведен мониторинг цитологии назального секрета у больных поллинозом и выявлено, что концентрация пыльцы деревьев в атмосфере коррелирует с тяжестью течения аллергического риноконъ-юнктивита и эозинофилией назального секрета.

Показано влияние экспозиции пыльцы деревьев на величину концентрации метаболитов оксида азота в выдыхаемом воздухе у больных поллинозом.

ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ:

1. Внедрен в практику метод ППТ со свежими фруктами и овощами для выявления сенсибилизации к пищевым аллергенам растительного происхождения на базе лаборатории клинической аллергологии ГУ НИ-ИВС им. И.И. Мечникова РАМН.

2. Опубликовано пособие для врачей «Назальный провокационный тест в диагностике аллергических заболеваний верхних дыхательных путей», Москва. - 2002 г. - 12 с.

3. Опубликована научно-популярная статья «Мой проклятый полли-ноз» //Здоровье. - 2003. - №4. - С.42-45.

ОСНОВНЫЕ ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ:

1. Тяжесть клинических проявлений поллиноза определяет синдром поливалентной сенсибилизации к пыльцевым и пищевым аллергенам растительного происхождения. Индукция IgE-AT к главным аллергенам березы Bet v 1 и Bet v 2 лежит в основе феномена перекрестной реактивности пыльцевых и пищевых аллергенов.

2. Чувствительность ППТ с использованием свежих фруктов и овощей превышает показатели прик теста с коммерческими аллергенами и уступает методу определения IgE-AT.

3. Экспозиция пыльцевых аллергенов на слизистую оболочку дыхательных путей больных поллинозом вызывает развитие эозинофилии в назальном секрете и увеличение концентрации метаболитов оксида азота в КВВ.

4. Концентрация пыльцы в атмосфере коррелирует со степенью клинических проявлений поллиноза.

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

ВЫВОДЫ

1. У обследованных больных поллинозом особенностью структуры сенсибилизации является доминирующая роль аллергенов пыльцы деревьев (в (82,5- 97,50)% по данным различных методов диагностики).

2. Клиническими особенностями поллиноза являются:

-наличие симптомов пищевой аллергии на продукты растительного происхождения у 61,63% детей и 65,43% взрослых больных; (наиболее часто при употреблении в пищу яблок, орехов, меда, моркови, персиков, киви); -наличие поливалентной сенсибилизации;

-наличие симптомов бронхиальной астмы у 51,85% взрослых и 25,79%детей (р<0,01);

3. Чувствительность разработанной модификации ППТ с нативными пищевыми продуктами, превышает чувствительность прик теста с коммерческими аллергенами (66,67% и 39,67%, соответственно), и существенно не уступает по этому показателю стандартному методу выявления IgE-AT.

4. IgE-AT к аллергенам Bet v 1 и Bet v 2 выявляются в сыворотках 64,0% больных поллинозом с клиническими проявлениями аллергии на пыльцу березы. Наличие IgE-AT к Bet v 1 и Bet v 2 коррелирует с признаками поливалентной сенсибилизации (р<0,01)

5. Содержание эозинофилов в назальном секрете больных поллинозом и выраженность клинических проявлений риноконъюнктивита в 62,5% случаев коррелирует с величиной концентрации пыльцы в воздухе.

6. Провокация раствором пыльцевых аллергенов при проведении НПТ пациентам с поллинозом вне сезона пыления вызывает достоверное повышение содержания эозинофилов в назальном секрете с (7,46±3,54)%, до (29,89±5,83)%.

7. Величина £1МЫ в КВВ у пациентов с поллинозом в период высокой концентрации пыльцевых аллергенов в воздухе существенно увеличивается по сравнению с БЫЛ в КВВ вне сезона активной палинации: у больных с клиникой аллергического риноконъюнктивита с (4,4±1,3)мкМ/мл до (10,1±1,4)мкМ/мл, и у больных с бронхиальной астмой с (7,5±2,8)мкМ/мл до (19,7±2,4)мкМ/мл.