Особенности патогенеза идиопатической патозооспермии при мужской инфертильности

Громенко, Дмитрий Сергеевич

Диссертации по медицине → Патологическая физиология

Автореферат и диссертация по медицине (14.00.16) на тему:Особенности патогенеза идиопатической патозооспермии при мужской инфертильности

ДИССЕРТАЦИЯ

АВТОРЕФЕРАТ

Громенко, Дмитрий Сергеевич Санкт-Петербург 2009 г.

Ученая степень: доктора медицинских наук

ВАК РФ: 14.00.16

Автореферат диссертации по медицине на тему Особенности патогенеза идиопатической патозооспермии при мужской инфертильности

На правах рукописи

ГРОМЕНКО Дмитрий Сергеевич

ОСОБЕННОСТИ ПАТОГЕНЕЗА ИДИОПАТИЧЕСКОЙ ПАТОЗООСПЕРМИИ ПРИ МУЖСКОЙ ИНФЕРТИЛЬНОСТИ

14.00.16 - Патологическая физиология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук

°9АП?2ХЭ

Санкт-Петербург 2009

003466456

Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Башкирский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»

Научные консультанты:

доктор медицинских наук профессор Фархутдинов Рафагат Равильевич доктор медицинских наук профессор Галимов Шамиль Нариманович

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук профессор Тюкавин Александр Иванович доктор медицинских наук профессор Николаев Валентин Иванович доктор медицинских наук профессор Митрейкин Владимир Филиппович

Ведущая организация - ГОУ ВПО «Военно-медицинская академия им. С.М.Кирова»

^ ^ к

Защита диссертации состоится _» — 2009 года в_часов на заседании диссертационного совета Д 208.089.02 при Государственном образовательном учреждении дополнительного профессионального образования «Санкт-Петербургская медицинская академия последипломного образования Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию» (191015, Санкт-Петербург, ул. Кирочная, д.41).

С диссертацией можно ознакомиться в фундаментальной библиотеке Академии (195196, Санкт-Петербург, Заневский пр., д. 1/82).

Автореферат разослан «'^ч^Г"»_№_2009 года.

Ученый секретарь диссертационного совета доктор медицинских наук, доцент

Г.Н. Горбунов

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы

Около 15% супружеских пар во всем мире имеют проблемы с естественным наступлением беременности (Тиктинский О.Л., Михайличенко В.В., 1999). Удельный вес мужского фактора в бесплодном браке составляет не менее 40% (Кирпатовский И.Д., 1995; Healy D.L., Trounson А.О., Andersen A.N., 1994). В последние десятилетия отмечается снижение активности сперматогенеза у мужчин в различных странах (Purvis К., 1992; Farrow S., 1994; Irvine S., 1996; De Kretser D.M., 1998). Большинство авторов связывают ухудшение показателей репродуктивного здоровья мужчин с антропогенным загрязнением окружающей среды (Никитин А.И., 2005).

Выбор конкретных методов лечения мужского бесплодия затруднителен на сегодняшний день по нескольким причинам (Артифексов С.Б. и др., 2006):

1. Наличие большого числа фармакологических средств, рекомендуемых для коррекции мужской инфертильности.

2. Отсутствие патогенетических показаний к применению того или иного метода лечения, поскольку основанием для применения фармакологических средств является патоспермия, но не вызвавшие ей причины.

3. Недостаточная изученность особенностей этиологии и патогенеза мужской инфертильности и наличие нескольких возможных причин патоспермии у одного мужчины.

Главной задачей андрологии является не поиск новых фармакологических препаратов, а углубленный анализ причин формирования инфертильности у мужчин в каждом конкретном случае в целях подбора патогенетически оправданной терапии (Артифексов С.Б. и др., 2006).

В последние годы особое внимание уделяется влиянию свободноради-кального окисления (СРО) на мужскую половую функцию. С одной стороны избыток свободных радикалов и вызванный ими окислительный стресс может отрицательно влиять на сперматогенез, а с другой - нормальное функционирование сперматозоидов требует присутствия физиологических количеств активных форм кислорода (АФК) (Aitken R.J., Fisher Н., 1994; Aitken R.J., 1995). В норме сперматозоиды защищены от окислительного стресса ферментами анти-оксидантной системы, регулирующей концентрацию АФК. АФК в избыточном количестве могут инициировать нарушения в сперматозоидах путем индукции оксидативного повреждения клеточных липидов, протеинов и ДНК, что является одним из механизмов патогенеза мужского бесплодия (Griveau J.F., Le Lannou D., 1997; Kemal Duru N., Morshedi M., Oehninger S., 2000). Наблюдается корреляция между генерацией АФК и антиоксидантной активностью спермо-плазмы и сочетанием нарушения данных показателей с мужским бесплодием (Sharma R.K., Pasquaiotto F.F., Nelson D.R. et al., 1999). Идеальным способом, позволяющим получить представление о процессах СРО, непосредственно обнаруживая свободные радикалы, является регистрация хемилюминесценции (ХЛ), возникающей при рекомбинации радикалов (Фархутдинов Р. Р.,1988; Фархутдинов P.P., Лиховских В.А., 1995). Исследуя ХЛ биосубстратов, можно судить о СРО в органах и тканях.

Расшифровка соответствующих патогенетических механизмов мужского бесплодия и, в конечном итоге, выработка рациональной терапии - одна из наиболее актуальных задач современной андрологии.

Цель исследования

Определить особенности патогенеза идиопатической патозооспермии и их взаимосвязь с процессами свободнорадикального окисления в условиях экзогенных воздействий токсических факторов.

Задачи исследования

1. Определить частоту встречаемости патоспермии в структуре бесплодного брака на территории Республики Башкортостан.

2. С учетом особенностей экологической обстановки в регионе оценить влияние техногенной нагрузки и уровня репротоксикантов в биологических жидкостях на развитие патоспермии.

3. Изучить процессы свободнорадикального окисления в сперме мужчин, состоящих в бесплодном браке.

4. Сравнить активность процессов свободнорадикального окисления и содержание репротоксикантов класса диоксинов и диоксиноподобных соединений в сперме инфертильных мужчин.

5. Изучить связи между развитием патоспермии и уровнем свободнорадикального окисления в гонадах и сперме лабораторных животных при хроническом воздействии репротоксикантов класса полихлорированных бифенилов (совтол).

6. В эксперименте на животных оценить возможность использования природных антиоксидантов для предупреждения развития патоспермии, вызванной нарушением свободнорадикального окисления в репродуктивных органах.

7. Определить влияние криоконсервации, применяемой для создания банка половых клеток, на процессы свободнорадикального окисления в сперме животных.

8. На основе полученных данных разработать комплекс диагностических и организационно-профилактических мероприятий для внедрения в практическое здравоохранение с целью охраны мужского репродуктивного здоровья.

Научная новизна исследования

Выявлены особенности этиологии и патогенеза мужской инфертильности при идиопатических формах бесплодия. Установлено, что при мужской инфертильности, развившейся на фоне действия стойких органических загрязнителей, происходит снижение антиокислительной активности спермоплазмы при незначительном увеличении генерации активных форм кислорода морфологически или функционально неполноценными сперматозоидами.

Определено содержание диоксинов и диоксиноподобных соединений в пересчете на токсические эквиваленты (ТЭ/ТЕ(3 ВОЗ) в суммарных пробах спермы мужчин, проживающих в индустриальных городах Республики Башкортостан. Выявлена прямая зависимость между содержанием диоксинов и диоксиноподобных соединений в сперме и развитием патозооспермии. На экспериментальных моделях выявлено влияние репротоксикантов класса ПХБ на сперматогенез и предложена схема развития патологического процесса. Впервые изучены процессы свободнорадикального окисления при криоконсервации спермы. Определены новые подходы к патогенетическому лечению мужского бесплодия с учетом роли свободнорадикального окисления, заключающиеся в проведении рациональной антиоксидантной терапии, коррекции интенсивности генерации активных форм кислорода. В эксперименте на животных обосновано применение лечебных мероприятий при нарушении фертильности в условиях хронического оксидантного стресса.

Практическая значимость работы

Разработаны критерии для выделения групп повышенного риска по развитию мужской инфертильности. В результате проведенных исследований внедрен в практику экспресс-метод оценки состояния свободнорадикального окисления в эякуляте, заключающийся в определении интегральных показателей суммарной антиокислительной активности спермоплазмы в модельной системе, генерирующей активные формы кислорода, и спонтанного люминолзави-симого свечения эякулята.

Разработаны патогенетически обоснованные показания к применению антиоксидантной терапии мужского бесплодия с учетом причин, приведших к развитию патоспермии. Результаты проведенных исследований по уровню па-тоспермии в регионах Республики Башкортостан способны оказать содействие практическому здравоохранению в планировании медицинской помощи по охране репродуктивного здоровья мужчин.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Частота патоспермии в структуре бесплодного брака на территории Республики Башкортостан составляет 70,25%.

2. В структуре мужского бесплодия идиопатические формы встречаются с частотой 45,3%.

3. Хемилюминесцентные методы исследования позволяют выявить нарушения равновесия между продукцией активных форм кислорода и системой антиокислительной защиты в сперме мужчин.

4. При идиопатической форме патозооспермии в регионах с повышенным риском экзогенного воздействия токсических факторов наблюдается уменьшение защитных свойств спермоплазмы в виде снижения уровня суммарной антиокислительной активности наряду с повышением образования АФК морфологически или функционально неполноценными сперматозоидами.

5. Содержание диоксинов и диоксиноподобных соединений в пересчете на токсические эквиваленты (ТЭ/ТЕО ВОЗ) в суммарных пробах спермы мужчин, проживающих в индустриальных городах Республики Башкортостан, превышает соответствующие уровни в крови у тех же мужчин.

6. Одним из механизмов, приводящих к развитию патоспермии при действии стойких органических загрязнителей, является нарушение процессов сво-боднорадикального окисления. Данные изменения проявляются в виде снижения уровня суммарной антиокислительной активности в тестикулярной ткани, что приводит к ранней активации и незрелости сперматозоидов, и, как следст-

вие, морфологическим изменениям половых клеток и снижению их функциональных характеристик.

7. Выявление патогенетических механизмов бесплодия, связанных с нарушением равновесия процессов свободнорадикального окисления в сперме и приведших к развитию идиопатической патозооспермии, позволяет обосновать тактику лечения, направленную на коррекцию патологического процесса.

Вклад автора в проведенное исследование

Автору принадлежит идея оценки состояния свободнорадикального окисления семенной жидкости для оценки мужской инфертильности, им разработаны и внедрены в практику методы исследования спермы, основанные на регистрации хемилюминесценции. Автором лично осуществлено ведение большинства пациентов и проведена экспериментальная часть исследования, проведена статистическая обработка и анализ материала.

Апробация работы

Материалы диссертации доложены на всероссийской конференции «Научные аспекты экологических проблем России» (Санкт-Петербург, 2001г.),VII и VIII конференциях Российской ассоциации репродукции человека (Саратов, 2001г.; Екатеринбург, 2002г.), международном к конгрессе «Новые медицинские технологии», г. Санкт-Петербург, 2001г., секционном заседании «Репродуктивное здоровье мужского населения РБ» съезда врачей акушеров-гинекологов и педиатров Республики Башкортостан, г.Уфа, 2001г., I Всероссийской научной конференции с международным участием «Влияние загрязнения окружающей среды на здоровье человека» (Новосибирск, 2002г.), XII Международной конференции «Репродуктивные технологии сегодня и завтра» (Санкт-Петербург, 2003г.), I, II, III и IV Российских научных форумах «Мужское здоровье и долголетие» (Москва, 2003-2006гг.), заседании общества урологов Республики Башкортостан (Уфа, 2004-2005гг.), научно-практической конференции «Активные формы кислорода, оксид азота, антиоксиданты и здо-

ровье человека», г. Смоленск, 2005г., II конгрессе Профессиональной Ассоциации андрологов России (Сочи, 2006г.).

Внедрение результатов исследования в практику

Экспресс-метод оценки состояния свободнорадикального окисления в эякуляте внедрен в практику Республиканской клинической больницы им. Г.Г.Куватова. Разработанный метод используется для диагностики и определения тактики лечения мужского бесплодия в Республиканской клинической больнице им. Г.Г.Куватова и Республиканском перинатальном центре. Материалы, полученные в диссертации, введены в учебную программу и включены в курс лекций для студентов и курсантов института последипломного образования Башкирского государственного медицинского университета. Результаты исследования послужили основой экспертных материалов для разработки Закона Республики Башкортостан «О внесении изменений в Закон Республики Башкортостан «Об охране семьи, материнства, отцовства и детства в Республике Башкортостан».

Публикации

По теме диссертации опубликовано 45 печатных работы, наиболее значительные из них приведены в автореферате, получено 2 патента РФ на изобретения.

Объём и структура диссертации

Работа изложена на 247 страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, результатов собственных исследований, заключения, выводов, практических рекомендаций, списка литературы. Диссертация иллюстрирована 27 таблицами, 42 рисунками. В библиографический указатель включено 499 источников литературы, из которых 178 - отечественных и 321 - зарубежных.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материалы и методы исследования

В данной работе, в соответствии с поставленной целью и задачами, были выделены следующие основные этапы исследования (табл. 1).

Таблица 1

Общая характеристика и объем проведенного исследования

№ Этапы и задачи исследования Объект и объем исследования Методы исследования 1

Клинический раздел работы

1 Анализ показателей семенной жидкости мужчин, состоящих в бесплодном браке и проживающих в РБ Семенная жидкость 4000 мужчин Стандартный лабораторный анализ семенной жидкости

2 Сравнительная оценка патоспермии с уровнем удельного выброса загрязняющих веществ Семенная жидкость 2810 мужчин с патоспермией Статистическая обработка полученных данных (параметрическая корреляция Пирсона)

3 Определение уровня диоксинов и диокси-ноподобных веществ в семенной жидкости мужчин в промышленных городах РБ Семенная жидкость 565 жителей промышленных городов РБ Стандартный лабораторный анализ семенной жидкости. Комбинированный метод, включающий высокоэффективную газовую хроматографию с хроматомасс-спектрометрией высокого разрешения

4 Клинико-лабораторное обследование мужчин с нормозооспермией и идиопатической пато-зооспермией, состоящих в бесплодном браке 4 группы пациентов по 30 человек в каждой, сформированных с учетом уровней репротоксикантов в эякуляте, полученных на предыдущем этапе, и показателей спер-мограммы Физикальное и общеклиническое обследование пациентов. Стандартный лабораторный анализ семенной жидкости. Исследование хемилюми-несценции (ХЛ) семенной жидкости. Статистическая обработка полученных данных

Продолжение табл. 1

№ Этапы и задачи исследования Объект и объем исследования Методы исследования

Лабораторный раздел работы

1 Экспериментальное моделирование воздействия ПХБ на сперматогенез и процессы СРО в семенниках лабораторных животных; изучение действия препарата, влияющего на СРО и функциональную активность половых клеток, при хроническом оксидативном стрессе 90 белых (30 самцов, 60 самок) беспородных крыс, разделенных на три группы с учетом поставленных задач Оценка плодовитости затравленных животных. Изучение морфологии сперматозоидов при помощи дифференциальной окраски клеток; гистологические изучение семенников исследуемых животных. Исследование люминолзави-симой и Ре2+индуцированной ХЛ гомогенатов тестикул и придатков, лекарственного препарата и отравляющего вещества

2 Изучение влияния криоконсервации на процессы СРО в семенной жидкости Семенная' жидкость, полученная от 8 племенных быков Регистрация люминолзависи-мой ХЛ, Ре2+нндуцированной ХЛ семенной жидкости, клеток и спермоплазмы

3 Анализ результатов, для оценки фертилъно-сти 90 белых беспородных крыс; семенная жидкость, полученная от 8 племенных быков Статистическая обработка данных с использованием Ь критерия Стьюдента, сравнение показателей ХЛ и морфологических характеристик семенников, семенной жидкости исследуемых животных

С целью выявления патогенетических механизмов в условиях экзогенных воздействий было проведено изучение параметров СРО в семенной жидкости. Предварительно обследовано 4000 мужчин с 2002 по 2005 годы включительно, обратившихся в Республиканскую клиническую больницу им. Г.Г.Куватова и Республиканский перинатальный центр по проблеме бесплодия в браке. Проведено сопоставление уровней патозооспермии и удельного выброса загрязняющих веществ, приходящегося на единицу площади (по данным Государственно-

го доклада «О состоянии окружающей природной среды Республики Башкортостан в 2000 году»).

Для определения в сперме уровня диоксинов исследована группа из 565 человек в возрасте 26-40 лет, проживающих в промышленных городах Башкирии (Уфа, Стерлитамак, Салават, Туймазы, Ишимбай, Октябрьский). Анализ суперэкотоксикантов производился с помощью комбинированного метода, сочетающего высокоэффективную газовую хроматографию с хроматомасс-спектрометрией высокого разрешения. Система измерения HRGC/HRMS состояла из хроматографа «Carlo Erba 8035» (Италия), хроматомасс-спектрометра «Autospec-Vlt¡та VG» (Великобритания) и колонки DB-5 MS 60 м («J&W Scientific»), Контроль степени извлечения, уровня очистки и калибровки системы измерения был выполнен в соответствии с методикой Агентства США по охране окружающей среды (USEPA 1613) (EPA Method 1613. Tetra-through octa-chlorinated dioxins and furans by isotope dilution HRGC/HRMC., 1994). Поскольку суперэкотоксиканты в наибольшей степени накапливаются в липофильных матрицах, все результаты даны в пересчете на содержание липидов в образцах эякулята. Были сформированы 4 группы наблюдения. Каждая группа включала 30 человек, удовлетворяющих критериям отбора и исключения. Состав всех групп был однороден по возрасту, материально-бытовым условиям, обеспеченности квалифицированной медицинской помощью, продолжительности проживания в данном районе, а также здоровью и социальному положению.

Возраст пациентов колебался от 20 до 45 лет. Средний возраст мужчин в I группе составил 31,2±0,8 лет, во II группе - 30,3±0,8 лет, в III группе - 30,7±1,0 лет, в IV группе - 31,8±1,0 лет. Все обследованные мужчины состояли в бесплодном браке от 1 года до 10 лет. Первичное бесплодие было у 105 пациентов (87,5%), вторичное бесплодие выявлялось у 15 (12,5%) мужчин.

Всем пациентам проведено комплексное клинико-лабораторное обследование с применением инфекционного скрининга (путем полимеразной цепной реакции), гормональных методов диагностики (определение фолликулостиму-лирующего гормона, тестостерона, пролактина), трансректального ультразву-

кового исследования предстательной железы и семенных пузырьков, допплеро-графии сосудов мошонки. Всем пациентам проводились общеклинические исследования эякулята, включающие оценку семенной жидкости, полученную после периода полового покоя.

Изучение процессов генерации АФК спермы при нормо- и патозооспер-мии было выполнено у всех пациентов исследуемых групп по разработанной методике комплексного исследования состояния генерации АФК в сперме (патенты на изобретения № 2278382 от 20.06.2006г. и № 2272291 от 20.03.2006г„ соавт.: Фархутдинов Р.Р., Галимов Ш.Н., Шемагонов Д.В.).

С целью изучения интенсивности свободнорадикальных процессов и антиокислительной активности проводился хемилюминесцентный анализ спермы. Регистрацию XJI эякулята проводили на аппарате «Хемилюминомер - 003» с компьютерным обеспечением. Об интенсивности люминолзависимой XJ1 судили по ряду параметров, в первую очередь, по светосумме и максимальной амплитуде свечения, которые соответствовали скорости образования АФК. Перед измерением свечения определенный исследуемый объем спермы смешивали с 2 мл физиологического раствора, содержащего люминол (5-амино-2,3-дигидро-1,4-фталазиндион) в конечной концентрации 10"5 М, и помещали в светоизоли-рованную камеру прибора. Тщательно перемешивали и вели запись XJ1 при 37 °С в течение 5 мин.

Для оценки антиокислительной активности 0,1 мл спермоплазмы добавляли к модельной системе. В качестве модельной системы использовали 20 мл фосфатного буфера (КН2Р04 - 20 mM, КС1 - 105 тМ, рН 7,45) с цитратом (50 тМ) и люминолом (10 5 М). В течение 10 секунд записывали темновой ток, после чего вносили инициатор образования АФК - 1 мл 50 шМ раствора сернокислого железа (FeS04x7H20). Конечная концентрация FeS04 в среде инкубации составляла 2,5 шМ. Запись свечения проводили в течение 5 минут при постоянном перемешивании. При оценке Fe2'-индуцированной XJ1 определяли величину спонтанного свечения, продолжительности латентного периода от

момента введения ионов железа до начала развития медленной вспышки. Также оценивали амплитуды быстрой и медленной вспышек.

С целью определения источника АФК в эякуляте проводили разделение клеток спермы в градиенте плотности.

Опыты выполнены на 90 белых беспородных крысах репродуктивного возраста массой 200-260 г (30 самцов и 60 самок). Моделью отравления было выбрано пероральное введение полихлорированных бифенилов (ПХБ) - раствора «Совтол». Хроническая интоксикация подопытных животных первой группы (10 самцов) моделировалась введением раствора «Совтол» в течение 3 месяцев в суммарной дозе 0,3 г/кг (0,05 LD50).

Вторую группу составили животные (10 самцов), которым на фоне проведения затравки в дозировке, аналогичной с первой группой, дополнительно в желудок вводили комплекс биофлавоноидов прополиса в виде биологически активной добавки «ПропоФлан» (Свидетельство о государственной регистрации № 77.99.23.3.У.5621.11.04. от 10.11.2004; ТУ 9354-002-55832354-04), изготовленной в ЗАО «Фармацевтическая компания «БИОНОРМ», Россия, в дозировке 30 мг/кг. Препарат разработан с целью патогенетической коррекции нарушений мужской репродуктивной функции (Галимов Ш.Н., Мухамедзянов P.M., 2005). Антиокислительную активность препарата оценивали в модельных системах, генерирующих АФК и ПОЛ, при добавлении «ПропоФлана» к липи-дам, полученным из куриного желтка, содержащего липопротеиновые комплексы, сходные с липидами крови (Фархутдинов P.P., Тевдорадзе С.И., 2005).

Контрольной группе животных (10 самцов) вводили в желудок взамен «Совтола» физиологический раствор (0,9% раствор хлорида натрия).

Проводили оценку оплодотворяющей способности самцов крыс, для чего их подсаживали к интактным самкам (по 2 самки на самца). Вычисляли 3 основных показателя, дающих количественную характеристику гонадотропных эффектов токсиканта: индекс фертильности = (число беременных самок/общее число самок) хЮО; индекс гестации = (число родивших самок/число беремен-

ных самок) хЮО; индекс плодовитости = число родившихся крысят/число родивших самок (Куценко С.А., 2004).

Оценивали состояние сперматогенеза, жизнеспособность сперматозоидов, интенсивность свободнорадикальных процессов и антиокислительной активности. Выполнялась дифференциальная окраска сперматозоидов с последующей оценкой строгой морфологии, исследовалось содержание ТБК-активных продуктов в семенниках животных (Владимиров Ю.А., 1972).

Исследование процессов свободнорадикального окисления до и после криоконсервации спермы было проведено на материале, полученном от племенных быков-производителей Уфимского племенного хозяйства. Исследовали люминолзависимую и Ре2+-индуцированную хемилюминесценцию по Владимирову Ю. А. (1989).

Статистическая обработка полученных результатов проводилась на персональном компьютере с применением программного обеспечения Microsoft Excel (Microsoft corp., 2003), Statistica Inc Ver. 7 (StatSoft, STATISTICA for Windows). Степень взаимосвязи между признаками оценивали по Пирсону. В качестве описательных статистик использованы средняя (М) и ошибка средней (т). Исследуемые группы сравнивались при помощи t-критерия Стьюдента для независимых переменных после выполнения следующих условий: нормальность распределения (тест Лильефорса) и равенства дисперсий обеих выборок.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Анализ параметров семенной жидкости у мужчин с бесплодием

В предварительном исследовании были представлены жители всех 54 районов Республики Башкортостан. За 2002 год были проанализированы данные 1341 мужчины, что составило 33,5% от общего количества обследованных пациентов в данном исследовании, за 2003 год - 977 (24,4%), за 2004 год - 1269 (31,7%), за 2005 год - 413 (10,3%). Основные показатели спермограмм по годам наблюдений представлены в таблице 2.

Таблица 2

Параметры семенной жидкости у мужчин за 2002-2005 годы (п=4000)

Показатели эякулята Год (число наблюдений)

2002 (п=1341) 2003 (п=977) 2004 (п=1269) 2005 (п=413)

Объем эякулята, мл 3,310,04 3,210,05* 3,310,04 3,3й,08

рН 7,610,01 7,7±0,01*** 7,2Ю,01*** 7,410,01 ***

Концентрация сперматозоидов, млн/мл 32,7^0,80 28,510,83*** 58,811,57*** 63,912,83

Подвижность сперматозоидов, % категории «А» 29,310,53 22,4±0,48*** 27,710,57*** 26,810,92

категории «В» 12,810,29 14,4±0,31*** 9,910,18*** 10,510,29

категории «С» 14,4Ю,35 21,6±0,41*** 18,510,36*** 21,5±0,65***

категории «Б» 36,310,55 31,610,55*** 36,310,47*** 33,210,79***

Морфологически полноценные формы, % 40,8Ю,5] 52,2Ю,73*** 50,9Ю,60 40,8±1,73***

Клетки сперматогенеза, млн/мл 0,ЗЗЮ,01 . 0,610,03*** 0,110,01*** 0,1510,03

Лейкоциты, млн/мл 0,210,01 0,2±0,02** 0,2±0,02 о,зю,оз

Примечание: здесь и далее * - р<0,05; ** - р<0,01; ***- р<0,001 в сравнении с предыдущим годом

При анализе данных о количестве, морфологии и подвижности мужских половых клеток за 2002-2005 годы в Республике Башкортостан у пациентов, состоящих в бесплодном браке, было отмечено возрастание концентрации сперматозоидов при ухудшении подвижности (за счет уменьшения фракции «В»). Из 4000 обследованных мужчин с бесплодием у 2810 человек была выявлена патозооспермия, что составило 70,25% (рис.1). Примечательным является тот факт, что выявляемый уровень азооспермии в среднем составляет 8%, это соответствует литературным данным.

Прирост патозооспермии обусловлен, прежде всего, увеличением количества субфертильных эякулятов, отклонения в которых близки к нормативным значениям, о чем свидетельствуют уровни подвижности и морфологических

характеристик сперматозоидов. Это наводит на мысль о возможной обратимости данных изменений.

2002 2003 2004 2005

(П=1341) (п-977) (п=1269) (п=413) год (число наблюдений)

• азооспермия ■ латозооспермия

Рис. 1. Уровни общей латоспермии и азооспермии за период наблюдения ^ Для определения характера распределения патоспермии по районам Рес-

публики Башкортостан проведен подробный анализ всех случаев. С целью выявления причин патозооспермии были проанализированы заключительные диагнозы по данным амбулаторных карт (рис.2),

■ Иммунологический

7 0.8 6.3 ,

фактор

¿^ШшшШШ- 10 5 □ Эндокринный фактор

■ Воспалительные заболевания 11,4 ШЭ Азооспермия

Я Варикоцеле

® Идиопатические формы

Врожденные аномалии

Ш Другие причины

Рис. 2. Причины бесплодия по заключительным диагнозам Из представленных данных обращает на себя очень высокий процент идиопатического бесплодия (идиопатическая олигозооспермия, астенозооспер-мия, тератозооспермия - 45,3%) у мужчин с патоспермией, что можно объяс-

нить или несовершенством диагностического поиска, или имеющимися экзогенными воздействиями, вызывающими изолированную патоспермию. Исходя из этого, проведена оценка взаимосвязи развития патологии детородной функции у мужчин с экологической обстановкой в районах Республики Башкортостан.

В конце 80-х годов прошлого века Башкортостан входил в пятерку регионов России, лидирующих по выбросам загрязняющих веществ в атмосферу и в десятку - по сбросам загрязненных стоков. Сегодня республика по выбросам в атмосферу и сбросам загрязняющих веществ находится во втором десятке среди субъектов Федерации. Все районы РБ были условно разделены на относительно «благополучные» (с удельным выбросом загрязняющих веществ, приходящимся на единицу площади от 0 до 2000 кг/га (удовлетворительный), 20004000 (напряженный)), и на относительно «неблагополучные» (где аналогичный показатель колеблется в диапазоне 4000-8000 кг/га (критический), 6000-8000 кг/га (экологически чрезвычайная ситуация), 8000 и более кг/га (экологическое бедствие)). Параметры приведены из Государственного доклада «О состоянии окружающей природной среды Республики Башкортостан в 2000 году», в последующих ежегодных докладах (2001-2004гг.) эти данные не анализировались.

По данным многих авторов обследование различных групп населения в регионах, подверженных и не подверженных воздействию токсинов и веществ, загрязняющих окружающую среду, выявило стойкую тенденцию к снижению концентрации сперматозоидов (Aitken R., Sawyer D., 2003). В табл. 3 представлены данные об удельном выбросе загрязняющих веществ по районам РБ наряду с уровнем патозооспермии. Большинство районов РБ относится к относительно «благополучной» зоне - 35 районов (64,8%). Сравнение показателей патологии репродуктивной функции мужчин с массой выбрасываемых загрязняющих веществ, приходящейся на единицу площади, не выявило корреляционной связи ни по уровню патозооспермии (R = - 0,0283, р = 0,84), ни по уровню астенозооспермии (R = - 0,0559, р = 0,69), ни по уровню олигозооспермии (R = 0,2699, р = 0,05), ни по уровню тератозооспермии (R = 0,0329, р = 0,81).

Таблица 3

Частота встречаемости патозооспермии и масса выбрасываемых загрязняющих веществ, приходящаяся на единицу площади, в Республике Башкортостан

(п=2810)

№ Районы РБ Уровень Удельный № Районы РБ Уровень Удельный

патозоо- выброс патозоо- выброс

спермии (кг/га) спермии (кг/га)

1 Абзелиловски 64,0 2000-4000 28 Ишимбайский 75,3 0-2000

2 Альшеевский 63,4 6000-8000 29 Каптасинский 54,5 4000-6000

3 Архангельский 80,0 0-2000 30 Караидельский 80,0 0-2000

4 Аскинский 77,3 0-2000 31 Кармаскалин- 66,0 8000 и >

5 Аургазинский 74,4 0-2000 32 Кигинский 77,8 0-2000

6 Баймакский 76,4 0-2000 33 Краснокамский 59,8 8000 и >

7 Бакалинский 78,1 4000-6000 34 Кугарчинский 72,2 0-2000

8 Балтачевский 53,8 2000-4000 35 Кушнаренков- 77,3 6000-8000

9 Белебеевский 75,3 2000-4000 36 Куюргазин- 76,9 8000 и >

10 Белокатайский 50,0 2000-4000 37 Мелеузовский 72,2 2000-4000

11 Белорецкий 61,9 0-2000 38 Мечетлинский 60,0 0-2000

12 Бнжбулякский 78,9 2000-4000 39 Мишкинский 64,7 0-2000

13 Бирский 67,3 4000-6000 40 Миякинский 74,3 0-2000

14 Благоварский 66,7 6000-8000 41 Нуриманов- 75,0 0-2000

15 Благовещен- 67,5 8000 и > 42 Салаватский 70,4 2000-4000

16 Буздякский 77,8 8000 и > 43 Стерлибашев 46,7 0-2000

17 Бураевский 65,0 0-2000 44 Стерлитамзк- 78,6 8000 и >

18 Бурзянский 89,5 0-2000 45 Татышлинский 75,0 0-2000

19 Гафурийский 72,0 2000-4000 46 Туймазинский 72,6 4000-6000

20 Давлеканов- 71,8 8000 и > 47 Уфимский 68,4 8000 и >

21 Дуванский 81,0 2000-4000 48 Учалинский 62,5 0-2000

22 Дюртюлин- 72,0 8000 и > 49 Федоровский 60,0 0-2000

23 Ермекеевский 91,7 0-2000 50 Хайбуллин- 61,1 0-2000

24 Зианчурин- 68,4 0-2000 51 Чекмагушев- 90,9 2000-4000

25 Зиланрский 80,0 0-2000 52 Чишминский 63,8 6000-8000

26 Иглинский 76,5 2000-4000 53 Шаранский 77,8 8000 и >

27 Илишевский 94,7 2000-4000 54 Янаульский 79,4 8000 и >

С целью определения возможных репротоксических воздействий на мужское население Башкортостана было проведено дальнейшее исследование (оценка влияния на сперматогенез стойких органических загрязнителей) с учетом особенностей региона. Содержание диоксинов и диоксиноподобных соединений в пересчете на токсические эквиваленты (ТЭ/ТЕС? ВОЗ) в суммарных пробах спермы мужчин, проживающих в индустриальных городах, находилось в пределах от 56,7 до 823,7 пг/г липидов и составило в среднем 262,4

пг/г(данные представлены в таблице 4), при соответствующих уровнях в крови тех же мужчин от 67 до 324 пг/г.

Таблица 4

Содержание ПХДД/ПХДФ в сперме жителей некоторых промышленных городов (пг ТЭ-ВОЗ/г липидов)

Город

Поллютант Уфа Стерли-тамак Салават Ишим-бай Туй-ма-зы Благовещенск Октябрьский

тхдд 9,7 9,2 14,9 0 0 0 0

ПнХДД 25,9 19,0 29,7 1,3 1,0 7,5 451,3

5ГкХДЦ 4,8 1,8 6,9 0,9 1,4 5,0 11,7

ГпХДД+ОХДД 1,0 1,0 1,0 0,6 0,1 3,8 4,3

ТХДФ+ 40,5 19,2 56,4 79,4 135,1 276,1 285,9

ПнХДФ

ЗГкХДФ 19,8 5,2 23,8 53,9 43,6 92,6 67,7

ГпХДФ+ 3,0 1,3 3,2 3,1 1,3 8,0 10,0

ОХДФ

Всего: 104,7 56,7 135,9 139,2 182,5 393,0 823,7

В среднем 262,4

ГкХДЦ- гексахлордибензо-п-диоксин

ГпХДЦ - гептахлордибензо-п-диоксин

ГкХДФ - гексахлордибензофуран ГпХДФ - гептахлордибензофуран ТХДЦ - тетрахлордибензо-п-диоксин

Результаты исследования состояния репродуктивной функции жителей промышленных городов приведены в табл. 5. Сравнительный анализ качественных и количественных характеристик эякулята выявил ряд важных особенностей показателей спермограмм жителей индустриальных городов. Фактиче-

ОХДЦ - октахлордибензо-п-диоксин

ОХДФ - октахлордибензофуран

ПнХДД - пентахлордибензо-п-диоксин ПнХДФ - пентахлордибензофуран

ски у двух третей мужчин, включенных в группу наблюдения, имелся тот или иной вид патологии спермограммы. Так, в среднем по выборке доля подвижных сперматозоидов составляла 47,8 %, что несколько ниже рекомендованных значений, а в целом у жителей четырех из шести обследованных городов величина этого показателя не соответствовала норме. Практически те же изменения - на нижней границе нормативных значений - были характерны для другого параметра качества сперматозоидов - доли морфологически измененных клеток.

Таблица 5

Показатели эякулята и уровень патозооспермии у обследованных мужчин -жителей промышленных городов (п=565)

Города РБ Показатели N. эякулята се -е>. Стерлитамак Сапават Ишимбай Туймазы Благовещенск Октябрьский

Число наблюдений 222 126 58 34 59 33 33

Объем, мл 3,1± 0,45 3,3± 0,58 3,6± 0,52 2,6+ 0,49 3,7+ 0,62 3,0± 0,45 3,0+ 0,51

Концентрация сперматозоидов, млн/мл 40,7± 5,2 38,8± 4,3 30,5± 5,6 45,2± 7,3 40,9+ 6,3 34,7± 4,2 33,8± 5,1

Подвижность категории «а»+«б», % 53,2± 4,6 49,9± 4,1 43,8± 6,0 52,4± 5,8 41,4+ 5,4 44,3± 3,6 45,9± 4,8

Морфологически измененные формы, % 40,5± 3,8 41,0+ 5,8 43,9+ 5,3 34,4+ 6,0 38,3+ 4,1 42,1± 3,2 40,5± 5,6

Патозооспер-мия,% 14,9 7,9 19,0 20,6 16,9 27,3 27,3

Далее был проведен анализ зависимости процента патозооспермии от поллютанта. Выявлена прямая зависимость между содержанием диоксинов и диоксиноподобных соединений в сперме и развитием патозооспермии (11=0,78, р=0,040).

Феномен загрязнения спермы диоксинами служит доказательством взаимосвязи между состоянием окружающей среды и изменениями репродуктивной функции и демонстрирует ценность данных маркеров как индикаторов влияния средовых и производственных факторов. Большая вариабельность показателей спермограммы у мужнин с бесплодием, наличие нормальных показателей спермограммы и в то же время неспособность мужчин к оплодотворению, заставляет искать дополнительные критерии для оценки качества сперматозоидов и спермоплазмы.

Влияние репротоксических факторов на процессы свободнорадикалыюго окисления в сперме мужчин с идиопатическим бесплодием

Для проведения исследования было сформировано 4 группы соматически здоровых, сексуально активных мужчин, состоящих в бесплодном браке:

I - Коренные жители районов с высоким уровнем содержания диоксинов и диоксиноподобных соединений в сперме с нормозооспермией на момент исследования;

II - Коренные жители районов с высоким уровнем содержания диоксинов и диоксиноподобных соединений в сперме с патозооспермией на момент исследования;

III - Коренные жители районов с низким уровнем содержания диоксинов и диоксиноподобных соединений в сперме с нормозооспермией на момент исследования;

IV - Коренные жители районов с низким уровнем содержания диоксинов и диоксиноподобных соединений в сперме с патозооспермией на момент исследования.

Патозооспермия, выявленная во второй и четвертой группах наблюдения, носила идиопатический характер. Достоверных различий по основным параметрам спермограммы между группами I и Ш (нормозооспермия в экологически неблагополучных и благополучных районах) и группами II и IV (патозоос-

пермия в экологически неблагополучных и благополучных районах) не было выявлено.

При исследовании люминолзависимой ХЛ семенной жидкости пациентов определяли уровень АФК, генерируемых половыми клетками (рис.3). Антиокислительные свойства спермоплазмы (Ре2+-индуцированная ХЛ)- оценивали в процентах от величины угнетения свечения модельной системы, при добавлении к последней 0,1мл спермоплазмы (рис. 4.)

, а

з.а 2.68 2«

toi

1/1 >0* Jiifr «

Ьг Щ& т Afjki^j

ш-пг 5

Рис. 3. Пример записи ЛЗХЛ эя-кулятов пациентов исследуемых групп. Нумерация кривых соответствует номеру группы (кривая 1-1У)

Рис. 4. Запись ХЛ модельной системы, генерирующей АФК (кривая М), и модельной системы, генерирующей АФК, с добавлением 0,1мл спермоплазмы пациентов 1, II, III, IV групп (кривая I-IV)

Достоверных различий по показателю светосуммы, спонтанной светимости, максимальной светимости между всеми группами не было выявлено. Показатели ЛЗХЛ по группам представлены в табл. 6. Обращает на себя внимание факт выявления низкой антиокислительной активности (29,1±1,96%) во второй группе наблюдения (группа с патозооспермией в регионе с неблагоприятной экологической обстановкой), причем наибольшая разница получена с группой III (38,3±2,43%), куда были включены пациенты с нормозооспермией, проживающие в относительно благополучных по экологической обстановке районах.

Таблица 6

Уровень ЛЗХЛ семенной жидкости в группах наблюдения (п=120)

Показатели ЛЗХЛ Группы обследованных пациентов

I группа II группа III группа IV группа

светосумма, отн.ед. 6,6±1,99 12,0±2,08 6,6±1,85 9,5±1,87

спонтанная светимость, отн.ед. 1,8±0,32 1,9±0,22 1,6±0,27 1,9±0,36

максимальная светимость, отн.ед. 2,7±0,43 3,4±0,37 2,5±0,50 3,1 ±0,39

Также получены достоверные различия между I (31,4±1,69%) и III (38,3±2,43%) группами. Данные различия свидетельствуют о том, что при идиопатической форме патозооспермии в регионе с повышенным риском экзогенного воздействия токсических факторов наблюдается снижение защитных свойств спермоплазмы в виде снижения уровня суммарной антиокислительной активности.

При сопоставлении данных, полученных при исследовании люминолза-висимой ХЛ и Ре2+-индуцированной ХЛ в группах наблюдения, особенно обращает на себя внимание тот факт, что во второй группе наблюдения уровень светосуммы в исследуемых образцах спермы имел наивысшее значение при уменьшении угнетения свечения модельной системы, генерирующей АФК. Причем снижение уровня антиокислительной активности спермоплазмы у этих пациентов было более выражено. Таким образом, можно выдвинуть гипотезу о влиянии экзогенных факторов на процессы свободнорадикального окисления в семенной жидкости, что проявляется в виде падения уровня суммарной антиокислительной активности спермоплазмы и повышенного образования АФК морфологически или функционально неполноценными клетками, которое сочетается с развитием идиопатической патозооспермии.

Экспериментальные модели повреждающего действия экзогенных факторов на сперматогенез. Оценка влияния хронической интоксикации на сперматогенез и процессы свободнорадикального окисления

Для подтверждения гипотезы о нарушении процессов свободнорадикального окисления при действии стойких органических загрязнителей на половые клетки была проведена экспериментальная оценка влияния хронической интоксикации на сперматогенез белых крыс. Животные были разделены на три группы (первая, вторая и контрольная).

Предварительно было проведено изучение влияния на СРО «ПропоФла-на» по изменению ХЛ при добавлении к модельной системе, генерирующей

АФК (рис.5.), и к модели, в которой протекают реакции ПОЛ, содержащей ли-Ч

пидно-белковые комплексы из гомогенизированного куриного желтка (рис.6.).

: ¡ 28 1

| 1« 3 1.Я

M \

/ \

s hi,*!! z .....I'"J.

1ЕН 14« 12 К II.» ID | 1« S i.O | t*

121

j 1.(1 J SN

Рис.6. Влияние «ПропоФлана» на хе-милюминесценцию желточных липо-протеидов: 1 - контороль; 2 - контроль с добавлением 0,4мл «ПропоФлана»

Рис.5. Антиокислительная активность «ПропоФлана»: 1 - запись ХЛ модельной системы, генерирующей АФК; 2 - запись ХЛ модельной системы, генерирующей АФК, с добавлением «ПропоФлана»

Полученные данные свидетельствуют о высокой антиокислительной активности «ПропоФлана», препарат способен взаимодействовать с АФК и по давлять ПОЛ in vitro.

При ежедневном введении «Совтола» в течение 3 месяцев в суммарной дозе 0,05 1^50 величины индексов фертильности, гестации и плодовитости составили 20, 75 и 4,3 соответственно, что в 5, 1,3 и 2,1 раза меньше, чем в контрольной группе. Наименьшие изменения претерпевал показатель индекса гестации, несущий информацию преимущественно о способности к вынашиванию беременности. Во второй группе животных уменьшалось как число беременных и родивших самок, так и количество рожденных крысят, что сопровождалось снижением величин индекса фертильности и плодовитости в 2 и 1,6 раза, соответственно. Индекс гестации не претерпевал изменений. Что касается соотношения полов крысят, то не удалось обнаружить значительных сдвигов величины этого параметра.

Таким образом, продолжительное введение стойких органических загрязнителей приводит к развитию у половозрелых самцов крыс нарушения фертильности. Параллельное введение антиоксиданта «ПропоФлана» нивелирует отрицательный эффект «Совтола», увеличивая индексы фертильности, гестации и плодовитости.

После окончания затравки животные забивались. Сперматозоиды извлекали из хвостовой части придатка яичка после продольного его разрезания, дозированным вымыванием физиологическим раствором натрия хлорида в течение 2 мин. Концентрацию клеток в образцах доводили до 10 млн/мл, после чего проводилась дифференциальная окраска сперматозоидов с последующей оценкой строгой морфологии. При оценке дифференциальной окраски сперматозоидов выявлялась достоверно большая частота патоспермии (патология головки -48,4±8,4%) в первой группе крыс по сравнению с группой контроля (патология головки - 21,3±2,4%)(данные представлены в табл. 7).

Во второй группе отмечалось относительное уменьшение патологических форм сперматозоидов по сравнению с первой группой, но различия не были достоверны ни с первой группой, ни с группой контроля.

Таблица 7

Уровень патоспермии в группах наблюдения

Показатели, % I группа II группа контрольная

Патологические формы сперматозоидов 66,1±5,7* 51,7±3,3 43,3±3,3

Патология головки 48,4±8,4* 29,7±3,3 21,3±2,4

Патология шейки 9,2±3,5 14,0±1,2 10,9±1,1

Патология хвоста 8,5±2,1 8,0±0,3 11,Ш,3

Примечание: * - р< 0,05 по сравнению с контрольной группой По уровню ТБК-АП не выявлено достоверной разницы при исследовании гомогенатов придатков яичек (I группа - 0,5±0,05 нМ/мг белка, II группа -0,4±0,02 нМ/мг белка, контрольная группа - 0,4±0,01 нМ/мг белка) (рис. 7).

В то же время достоверная разница получена при исследовании ТБК-АП в гомогенатах ткани яичек: I группа - 0,4±0,04 нМ/мг белка, II группа - 0,2±0,01 нМ/мг белка (р<0,001 по сравнению с I группой), контрольная группа - 0,3±0,03 нМ/мг белка (р<0,05 по сравнению с I группой) (рис. 8). Таким образом, происходит накопление продуктов ПОЛ в тестикулярной ткани самцов крыс после воздействия репротоксиканта.

Рис.7. Уровень ТБК-АП в ткани придат- Рис.8. Уровень ТБК-АП в ткани яичка ка яичка крысы крысы

Оценка люминолзависимой ХЛ гомогенатов семенников лабораторных животных не выявила разницы между исследуемыми группами. Образцы гомогенатов, полученные от интактных животных, отличались очень низкой скоро-

стью образования АФК. Получены статистически достоверные различия по уровню светосуммы между первой (1,8±0,28 отн.ед.) и контрольной (0,9±0,18 отн.ед.) группами (р<0,05), что говорит об увеличении образования АФК в тес-тикулах животных, подвергнутых хронической затравке. В то же время достоверных различий между второй (1,1±0,15 отн.ед.) и контрольной (0,9±0,18 отн.ед.), а также второй (1,1±0,15 отн.ед.) и первой (1,8±0,28 отн.ед.) группами получено не было, хотя отмечалась тенденция к снижению скорости окислительных реакций после добавления крысам в рацион «ПропоФлана».

При исследовании Ре2+-индуцированной ХЛ гомогенатов семенников исследуемых групп крыс отмечено наличие антиокислительной активности в тес-тикулярной ткани контрольной группы животных, и прооксидантной активности ткани придатка (рис. 9). В группах животных, подвергшихся затравке, теряется антиокислительная активность тестикулярной ткани (рис.10).

ж.»

ОН

«»

г»

I я»

I »»

I и.» 5 .1»

I >■•

г г»

4 и / :

■ / / / У \

> /V

!1 ' 11 "" ■" ЧУ $.1

ВролМш

Рис.9. Антиокислительная активность гомогенатов тканей семенника и придатка крысы группы контроля: 1 - запись ХЛ модельной системы, генерирующей АФК; 2 - запись ХЛ модельной системы, генерирующей АФК, с добавлением гомоге-ната тестикул; 3 - запись ХЛ модельной системы с добавлением гомогената придатка

«.« я.« ям им I ям

! в-«

А3 1

А л:

1 г 1 V

н //

1 / / 2.9 1 ».1 1 5.1

Рис. 10. Антиокислительная активность гомогенатов тканей семенника и придатка крысы первой группы: 1 - запись ХЛ модельной системы, генерирующей АФК; 2 - запись ХЛ модельной системы, генерирующей АФК, с добавлением гомогената тестикул; 3 - запись ХЛ модельной системы с добавлением гомогената придатка

Этот факт свидетельствует о том, что дозревание половых клеток в при-

датке здорового животного протекает при относительно высоком уровне продукции АФК и низкой суммарной антиокислительной активности, что, вероят-

но, является одним из факторов формирования нормальной функциональной активности зрелой половой клетки. ■'■>'•*' , . . . ; -

Антиокислительная активность, выявленная в ткани яичка, говорит о подавляющем действии данной системы на активность половых клеток, что позволяет полноценно сформировать еще незрелые сперматозоиды. В группе животных, подвергавшихся затравке, отмечена потеря антиокислительной активности томогенатами тестикул при неизменном уровне Ре2+-индуцированной ХЛ в гомогенатах придатков. Гомогенат, полученный из тестикул животного, повергавшегося затравке, теряет антиокислительную активность, а гомогенат придатка усиливает свечение модельной системы, генерирующей АФК. Достоверной разницы между первой и второй группами по уровню антиокислительной активности получено не было. Показатели Ре2+-индуцированной ХЛ в го-могенатах яичек и придатков яичек графически представлены на рис. 11.

Рис. 11. Антиокислительная активность гомогенатов тканей семенников и придатков крыс в группах наблюдения (I, II и контрольная). За горизонтальную ось с нулевым значением на данном рисунке принята светосумма модельной системы, генерирующей АФК

Таким образом, одним из механизмов, приводящих к развитию патоспер-мии при действии стойких органических загрязнителей, является нарушение процессов свободнорадикального окисления. Данные изменения проявляются в виде снижения уровня суммарной антиокислительной активности на уровне

тестикул, что приводит к ранней активации и незрелости сперматозоидов, и, как следствие, морфологическим изменениям половых клеток и снижению их функциональных характеристик. То есть, дисбаланс между реакциями свобод-норадикального окисления и антиокислительной ёмкостью клеток может быть ответственен за возникновение нарушений генеративной функции.

При исследовании морфологии семенников крыс срезы готовились отдельно из придатков и тестикулярной ткани. При оценке гистологических срезов полученных биоптатов учитывали диаметр канальцев, толщину собственной пластинки, высоту зародышевого эпителия. Наглядных различий по диаметру канальцев, толщине собственной пластинки, высоте зародышевого эпителия между всеми группами не было замечено. Отсутствие структурных отклонений со стороны зародышевого эпителия в исследуемых группах свидетельствует о возможной обратимости патологического процесса после удаления поллютанта из тестикулярной ткани, то есть изменения носили функциональный характер. При исследовании ткани придатков отмечено расширение просвета канальцев вследствие сгущения секрета внутри канальца, что приводит к уплощению канальцевого эпителия и потере его многорядности в первой и второй группах животных. Данные изменения были видны при сравнении срезов с группой контроля, где диаметр канальцев в некоторых случаях в два раза меньше, по сравнению с канальцами крыс первой группы. Также обращало на себя внимание уменьшение высоты канальцевого эпителия в группе затравленных крыс.

Таким образом, на фоне хронической затравки диоксиноподобным соединением отмечено увеличение количества морфологически неполноценных клеток, сочетающееся с повышением генерации АФК в тестикулярной ткани и снижением уровня антиокислительной активности тканей яичка. О высоком уровне процессов ПОЛ в яичке свидетельствует также увеличение уровня ТБК-активных продуктов, определяемого в тестикулярной ткани затравленных животных. Выявленные морфологические изменения не затрагивают клетки спер-

матогенного эпителия, что свидетельствует об обратимости наступивших изменений.

Сбалансированное соотношение уровня выработки АФК и антиокислительной активности на этапах развития половых клеток формирует полноценные сперматозоиды, обладающие способностью оплодотворять яйцеклетку. В яичке созревание сперматозоида происходит под антиоксидантной защитой. Затем сперматозоид проходит в придаток яичка, где антиоксидантная защита ослабевает и несомненную роль в дозревании клетки играет уровень АФК в придатке. Именно в придатке яичка сперматозоиды приобретают способность к самостоятельной генерации АФК, что играет важную роль в их оплодотворяющей способности (процесс капацитации и акросомальной реакции). А при снижении антиокислительной активности в яичке происходит раннее взаимодействие незрелых половых клеток со свободными радикалами, что приводит к преждевременному приобретению способности морфологически неполноценными клетками генерировать АФК.

Влияние криоконсервации на процессы свободнорадикалького окисления

С целью изучения процессов свободнорадикального окисления, протекающих в сперме при воздействии резких температурных перепадов, проведено изучение люминолзависимой ХЛ и Ре2+-индуцированной ХЛ. Материалом для исследования послужила сперма, полученная от восьми племенных быков, т.е. эякулят с доказанной фертильностью. Проведена оценка люминолзависимой ХЛ после добавления криопротектора до и после криоконсервации.

Проведенные исследования не выявили достоверных различий по показателям люминолзависимой ХЛ при технически правильно выполненной криоконсервации. Сперматозоиды отличаются низким уровнем значения светосум-мы и низкой амплитудой свечения, т.е. минимальной скоростью образования АФК как до, так и после криоконсервации. Из рис. 12 следует, что различий по

уровню светосуммы свечения как интегрального показателя генерации АФК в сперме быков до и после криоконсервации не наблюдается.

3.0 2.8

5 26 Ё 24 о 2.2

ж г.о £ 1.8

Средняя | I Ошибка средней 95сверит, и

Рис. 12. Изменение светосуммы свечения в сперме быков до и после криоконсервации

Криоконсервация не повлияла на способность спермоплазмы подавлять свечение модельной системы, генерирующей АФК: после размораживания уровень антиокислительной активности оставался практически неизменным - 38% (до заморозки - 38,5%).

Правомерно утверждать, что отличительной особенностью метаболизма в семенной жидкости, полученной от быков - производителей, являются уравновешенность прооксидантных и антиоксидантных систем вне зависимости от воздействия крайне низких температур при последовательной методике замораживания с криопротекгором. Данный факт позволяет рекомендовать крио-консервацию для более широкого использования в практической медицине.

С учетом вышеизложенного, разработан алгоритм диагностического поиска при бесплодии в браке, основанный на исследовании эякулята (рис.13). Таким образом, воздействие стойких органических загрязнителей играет важную роль в формировании мужской инфертильности. Одним из механизмов повреждающего действия является дисбаланс между прооксидантным и антиок-сидантным звеньями СРО. Разработанный экспресс-метод определения АФК в сперме, основанный на регистрации ХЛ, позволяет выявить изменения в эякуляте, вызванные оксидативным стрессом.

терапия терапия терапия

Рис. 13. Алгоритм диагностического поиска при бесплодии в браке

ВЫВОДЫ

1. Структура бесплодного брака в Республике Башкортостан характеризуется высоким удельным весом мужского фактора, о чем свидетельствует ретроспективный анализ параметров семенной жидкости 4000 мужчин, выявивший аномальную частоту встречаемости патоспермии (более 70%). В последние годы эякулят обследованных мужчин характеризуется ухудшением морфофунк-циональных свойств сперматозоидов, что нашло отражение в снижении их подвижности и увеличении доли морфологически неполноценных форм.

2. Региональной особенностью патозооспермии в Республике Башкортостан является высокий уровень случаев мужского бесплодия невыясненной этиологии (45,3% идиопатических форм), что может быть следствием недостаточной эффективности стандартных методов исследования и несовершенства системы оказания андрологической помощи.

3. Существует прямая зависимость между содержанием диоксинов и ди-оксиноподобных соединений в сперме и развитием патозооспермии. Уровень диоксинов и диоксиноподобных соединений в пересчете на токсические эквиваленты в суммарных пробах спермы мужчин, проживающих на территории Республики Башкортостан, колеблется в высоких пределах - от 56,7 до 823,7 пг/г липидов.

4. При идиопатической форме патозооспермии в регионах с повышенным уровнем экзогенного воздействия диоксинов и диоксиноподобных соединений у мужчин, состоящих в бесплодном браке, отмечается увеличение генерации активных форм кислорода морфологически и функционально неполноценными сперматозоидами, наряду с угнетением суммарной антиокислительной активности спермоплазмы, что является предпосылкой для снижения оплодотворяющей способности эякулята.

5. В эксперименте на животных при действии диоксиноподобных соединений класса ПХБ (совтол) у крыс снижаются индексы фертильности, гесгации и плодовитости, а также количество морфологически полноценных спермато-

зоидов, накапливаются продукты перекисного окисления липидов в тестику-лярной ткани.

6. Одним из механизмов, приводящих к развитию у лабораторных животных патоспермии при действии экополлютантов класса ПХБ, является нарушение процессов свободнорадикального окисления. Происходит снижение суммарной антиокислительной активности ткани тестикул, что сочетается с появлением в эпидидимисе морфологически и функционально неполноценных клеток, способных к генерации избыточного количества радикалов активных форм кислорода.

7. Применение комплекса природных биофлавоноидов с высокой антиокислительной активностью предупреждает нарушение процессов свободнорадикального окисления в репродуктивных органах лабораторных животных и сопровождается повышением индекса фертильности и плодовитости.

8. Хемилюминесцентные методы исследования семенной жидкости дают возможность оценить роль нарушения свободнорадикального окисления в возникновении инфертильности, и, наряду с традиционными способами диагностики, позволяют уточнить патогенез мужского бесплодия, что является предпосылкой для повышения эффективности коррекции патологии сперматогенеза, обусловленной оксидативным стрессом.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

Высокая частота выявления мужской инфертильности и продолжающаяся тенденция к увеличению удельного веса мужского фактора в структуре бесплодного брака требует повышения эффективности оказания андрологической помощи:

• в целях охраны репродуктивного здоровья и снижения уровня мужского бесплодия необходимо проведение обязательного регулярного уроандрологического обследования мальчиков, подростков и мужчин детородного возраста;

• при профилактических медицинских уроандрологических исследованиях, наряду с традиционными методами диагностики, рекомендуется использование хемилюминесцентного анализа семенной жидкости. Изменения показателей хемилюминесценции спермы при идиопатической патозооспермии свидетельствуют о возможном репротоксическом влиянии средовых и производственных факторов;

• при трудоустройстве необходимо предоставление полной и достоверной информации о возможном отрицательном влиянии на репродуктивное здоровье негативных факторов, связанных с условиями труда;

• мужчинам, контактирующим с репротоксическими факторами и не реализовавшим репродуктивную функцию, следует рекомендовать, по согласованию с работодателем, перевод в другие условия труда сроком не менее чем на три месяца для восстановления сперматогенеза;

• с целью сохранения собственного генофонда и его использования в последующем в репродуктивных целях необходимо гарантировать возможность криоконсервации спермы. Организовать банки для длительного хранения половых клеток в крупных промышленных центрах.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Туйгунов М.М. Гормональный статус мужчины и значение его исследования в урологической и андрологической практике / М.М.Туйгунов, А.Р.Мавзютов, В.З.Галимзянов, А.Г. Шмергельский, Д.С. Громенко // Сбор-

ник трудов Республиканской конференции, посвященной 65-летию кафедры общей хирургии,- Уфа, 2000. - С. 280-281.

2. Громенко Д.С. Опыт оперативного лечения больных с обструктивной формой бесплодия / Д.С. Громенко, Г.В. Коржавин // Сборник трудов Республиканской конференции, посвященной 65-летию кафедры общей хирургии.-Уфа, 2000. - С. 207-208.

3. Галимов Ш.Н. Методы оценки репродуктивной функции мужчин. Учебное пособие для студентов, практических врачей и курсантов ИПО / Ш.Н.Галимов, Д.С. Громенко, Ф.Х.Камилов, Э.Ф.Аглетдинов, P.P. Фархут-динов, Н.И.Симонова, В.И.Иваха- Уфа: Здравоохранение Башкортостана.-2001.-48 с.

4. Галимов Ш.Н. Экологические факторы и снижение риска репродуктивному здоровью в Республике Башкортостан: роль СМИ, перспективы сотрудничества / Ш.Н.Галимов, Э.Ф.Аглетдинов, Д.С.Громенко, Н.И.Симонова,

B.И.Иваха // Экология. Бизнес. СМИ.: Сборник материалов Башкирской республиканской конф.- Уфа: НИИБЖДРБ, 2001. - С. 38-42.

5. Громенко Д.С. Экспресс-метод определения состояния свободно-радикального окисления в сперме / Д.С.Громенко, Р.Р.Фархутдинов, Ш.Н.Галимов // Андрология и генитальная хирургия. - М.- 2001,- Прил-

C.72.

6. Галимов Ш.Н. Дефицит андрогенов у мужчин индустриальных городов Башкортостана: результаты обследования 2200 мужчин / Ш.Н.Галимов, Д.С.Громенко, Э.Ф.Аглетдинов, Э.Ф.Галимова, Ф.Х. Камилов // Андрология и генитальная хирургия - М.-2002. - №3.-Прил.- С. 128-129.

7. Галимов Ш.Н. Диоксины и репродуктивное здоровье мужчин в РБ / Ш.Н.Галимов, Ф.Х.Камилов, Э.Ф.Аглетдинов, Д.С.Громенко, Х.Г.Валеева, А.П.Голощапов, В.И.Иваха, Н.И.Симонова, Д.Ш. Хамзина // Национальный план действий по экологически обоснованному управлению диоксина-ми/фуранами и диоксиноподобными веществами: Материалы Российской конференции. - СПб., 2002. - С. 92-96.

8. Галимов Ш.Н. Идиопатические формы мужского бесплодия и свободнора-дикальные процессы / Ш.Н. Галимов, P.P. Фархутдинов, Д.С. Громенко // Актуальные вопросы педиатрии, перинатологии и репродуктологии: Сб. научных трудов,- Нижний Новгород, 2002. - С. 108-109.

9. Галимов Ш.Н. Chemiluminescent analysis of ejaculate as an informative screening test in reproductive toxicometry / Ш.Н. Галимов, P.P. Фархутдинов, Д.С. Громенко // Proceedings of Sixth International Nickel Conference. - Murmansk, 2002. - P. 94.

10.Галимов Ш.Н. Окружающая среда и репродуктивное здоровье мужчин, проживающих в индустриальных городах РБ / Ш.Н.Галимов, Ф.Х.Камилов, Э.Ф.Аглетдинов, Д.С. Громенко, Э.Ф. Галимова // Актуальные вопросы охраны репродуктивного здоровья в медицине труда: Материалы Всероссийской конференции. - Самара, 2002. - С. 39-42.

11.Галимов Ш.Н. Опыт оценки риска репродуктивному здоровью мужчин в Республике Башкортостан / Ш.Н.Галимов, Ф.Х.Камилов, Э.Ф.Аглетдинов, Д.С. Громенко, Э.Ф. Галимова // Влияние загрязнения окружающей среды на здоровье человека: Материалы 1-ой Всероссийской научной конф. с международным участием. - Новосибирск, 2002. - С. 173-174.

12.Галимов Ш.Н. Синдром андрогенной недостаточности как маркер техногенного загрязнения среды обитания / Ш.Н.Галимов, Ф.Х.Камилов, Э.Ф.Аглетдинов, Д.С. Громенко, Х.Г.Валеева, А.П.Голощапов, В.И.Иваха // Проблемы репродукции. - 2002. - Т.8, №1. - С.46-50.

13.Галимов Ш.Н. Стандартизация метода оценки хемилюминесценции эякулята. Новые возможности в диагностике мужского бесплодия / Ш.Н.Галимов, Э.Ф.Аглетдинов, Э.Ф.Галимова, Д.С. Громенко, P.P. Фархутдинов // Современные подходы к лечению бесплодия: Сб. научных трудов. - Екатеринбург, 2002.-С. 38.

14.Галимов Ш.Н. Влияние препарата пропофлан на фертильность эякулята при идиопатическом бесплодии / Ш.Н.Галимов, Д.С. Громенко,

Р.М.Мухамедзянов, О.В.Порядила, Э.Ф.Аглетдинов, Р.Р.Фархутдинов, Ф.Х. Камилов И Проблемы репродукции. - 2003. - №5. - С.37.

15.Галимов Ш.Н. Диоксины и диоксиноподобные соединения в сперме: реальная угроза? / Ш.Н.Галимов, Р.Р.Фархутдинов, З.К.Амирова, Э.Ф.Галимова, Д.С. Громенко // Материалы Всероссийской конференции по проблеме стойких органических загрязнителей, 28-29 октября 2002 г., Москва.- М.: Центр международных проектов, 2003. - С. 262-265.

16.Галимов Ш.Н. Исчезающий пол: мужчина в зеркале эволюции и экологии / Ш.Н.Галимов, Э.Ф.Аглетдинов, Д.С. Громенко, А.З.Абдуллина, Э.Ф. Гали-мова // Мужское здоровье и долголетие: материалы российского научного форума. - М., 2003. - С. 44-45.

П.Фархугдинов P.P. Мужская фертильность и генерация активных форм кислорода в семенной жидкости / Р.Р.Фархутдинов, В.Н.Павлов, Д.С. Громенко, Л.Г. Козлова // Материалы Всероссийской конференции «Мужское здоровье», 19-21 нояб. 2003 г., Москва. - М,- С.14-15.

18.Галимов Ш.Н. Среда обитания и репродуктивное здоровье мужчин// / Ш.Н.Галимов, Ф.Х.Камилов, Э.Ф.Аглетдинов, Д.С. Громенко // Влияние окружающей среды на формирование личности. Материалы Российской науч-но-практ. конф. - Уфа: Восточный университет, 2003. - С. 193-195.

19.Галимов Ш.Н. Лечение мужского бесплодия: новый взгляд на старую проблему / Ш.Н. Галимов, P.M. Мухамедзянов, Д.С. Громенко, Э.Ф.Галимова, Э.Ф.Аглетдинов, Ф.Х.Камилов // Материалы 2-го Российского научного форума «Мужское здоровье и долголетие», 17-19 февр. 2004, Москва- М.-С. 33-34.

20.Громенко Д.С. Способ определения суммарной антиокислительной активности спермоплазмы для оценки мужской фертильности / Д.С. Громенко, Р.Р.Фархутдинов, Ш.Н. Галимов, Д.В. Шемагонов // Бюллетень Изобретения. Полезные модели. - 2006. - №17. - С. 445-446.

21.Громенко Д.С. Способ регистрации активных форм кислорода в семенной жидкости для оценки фертильности / Д.С. Громенко, P.P. Фархутдинов,

Ш.Н. Галимов, Д.В. Шемагонов // Бюллетень Изобретения. Полезные модели,- 2006. - №8. - С.674-675.

22.Павлов В.Н. Терапия мужской инфертильности на аппаратном комплексе КАП-ЭЛМ-01 "Андро-Гии" / В.Н.Павлов, В.З.Галимзянов, Д.С.Громенко, Р.Р.Магадеев // Урология,- 2004,- № 6,- С. 34-37.

23.Павлов В.Н. Генерация активных форм кислорода сперматозоидами в патогенезе мужского бесплодия / В.Н.Павлов, Р.Р.Фархутдинов, Д.С. Громенко, P.P. Садыков II Здравоохранение Башкортостана.- Спец. выпуск №3 .- Уфа,-2005.-С.155-158.

24.Громенко Д.С. Использование метода регистрации хемилюминесценции эякулята для определения патоспермии / Д.С. Громенко, P.P. Фархутдинов // Сборник научных трудов 4-ой Национальной науч-лракт. конф. с междунар. участием «Активные формы кислорода, оксид азота, антиоксиданты и здоровье человека», 26-30 сент. 2005 г., Смоленск,- С. 321-323.

25.Павлов В.Н. Лечение мужского бесплодия у больных хроническим простатитом / В.Н.Павлов, В.З.Галимзянов, Д.С.Громенко, А.А.Измайлов, Л.М.Кутлияров // Здравоохранение Башкортостана. - Спец. выпуск №3 . -Уфа,-2005.-С. 149-152.

26.Павлов В.Н. Комплексное лечение урогенитальной инфекции у мужчин / В.Н.Павлов, В.З.Галимзянов, Д.С. Громенко, A.A. Казихинуров // Наука и практика. Лучшие медтехнологии России: Сб. ст.- М., 2005. - С. 69-72.

27.Павлов В.Н. Разновидность патоспермии при повышенной способности к генерации сперматозоидами активных форм кислорода / В.Н.Павлов, Р.Р.Фархутдинов, Д.С. Громенко, Ш.Н. Галимов // Врачебное сословие.- М,-2005. - №7. - С. 30-33.

28.Галимов Ш.Н. Репродуктивное здоровье и окружающая среда; новые подходы и технологии / Ш.Н.Галимов, Р.Р.Фархутдинов, Т.В.Викторова, З.К.Амирова, Д.С. Громенко, Э.Ф.Галимова, Г.М.Исхакова // Материалы 3-го Российского научного форума «Мужское здоровье и долголетие», 16-18 февр. 2005 г., Москва,- М.- С. 47-48.

29.Павлов В.Н. Терапия мужской инфертильности на комплексе аппаратом КАП ЭЛМ- 01 «Андро - Гин» / В.Н.Павлов, В.З.Галимзянов, Д.С. Громенко, Р.Р.Магадеев // Наука и практика. Лучшие медтехнологии России: Сб. ст-М., 2005.-С. 229-235.

30.Галимов О.В. Выявление активных форм кислорода в семенной жидкости при варикоцеле / О.В.Галимов, А.В.Кондратов, Р.Р.Фархутдинов, Д.С.Громенко, Е.Ю.Калашникова, С.Р.Туйсин // Роль природных факторов и туризма в формировании здоровья населения. Материалы IV Российской научной конференции. - Уфа, 2006. - С. 57-58.

31.Громенко Д.С. Генерация активных форм кислорода сперматозоидами в патогенезе мужского бесплодия / Д.С. Громенко, P.P. Фархутдинов, Ш.Н. Га-лимов // Эфферентная терапия. - 2006. - Т. 12, № 1. - С.28-32.

32.Громенко Д.С. Лечение идиопатического мужского бесплодия у пациентов с эректильными расстройствами / Д.С. Громенко, Ю.Ю. Громенко // Врачебное сословие.- М,- 2006. - №7. - С. 37-40.

33.Павлов В.Н. Лечение мужчин с уретрогенной инфекцией, осложненных половыми расстройствами / В.Н.Павлов, В.З.Галимзянов, А.А.Казихинуров, Д.С. Громенко, А.А.Измайлов, Г.Н.Чингизова, А.А.Загидуллин // Мужское здоровье и долголетие. Материалы 4-го Российского научного форума. - М., 2006. - С. 98-99.

34.Галимов Ш.Н. Медикаментозная терапия после ликвидации варикоцеле / Ш.Н.Галимов, Р.Р.Фархутдинов, Д.С. Громенко, З.Х.Хамзина // Мужское здоровье и долголетие. Материалы 4-го Российского научного форума.- М., 2006.-С. 31-32.

35.Громенко Д.С. Оценка токсического действия полихлорированных бифени-лов на репродуктивную функцию / Д.С.Громенко, Ш.Н.Галимов, Р.Р.Фархутдинов, Ю.Ю.Громенко // Роль природных факторов и туризма в формировании здоровья населения. Материалы IV Российской научной конференции,- Уфа, 2006. - С. 38-39.

36.Галимов Ш.Н. Патогенез патоспермии при поражении придатков яичек у инфертильных мужчин / Ш.Н. Галимов, P.P. Фархутдинов, Д.С. Громенко, З.Х. Хамзина // Мужское здоровье и долголетие. Материалы 4-го Российского научного форума. - М., 2006. - С. 32.

37.Громенко Д.С. Роль активных форм кислорода в формировании мужской инфертильности / Д.С. Громенко, Ш.Н. Галимов, Д.В. Шемагонов, P.P. Фархутдинов // Казанский медицинский журнал. - 2007. - Т.88, №4, Прил. - С. 23-24.

38.Громенко Д.С. Гонадотоксическое действие полихлорбифенилов / Д.С. Громенко, Ш.Н. Галимов, З.К. Амирова, А.З. Абдуллина, Ю.Ю. Громенко, Э.Ф. Галимова // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. - 2008.Т. 146,№7.-С. 76-79.

39.Галимов Ш.Н. Спермотоксические свойства приоритетных загрязнителей окружающей среды класса полихлорбифенилов / Ш.Н. Галимов, Д.С. Громенко, А.З. Абдуллина, Э.Ф. Галимова // Медицина труда и промышленная экология. - 2008. - №10,- С. 31-33.

40.Громенко Д.С. Воздействие биофлавоноидов прополиса на процессы липо-пероксидации в гонадах крыс при интоксикации хлорорганическими поллю-татнтами / Д.С. Громенко, Ю.Ю. Громенко, Ш.Н. Галимов, P.P. Фархутдинов, P.M. Мухаметзянов// Вопросы питания. - 2008. - №6. - С. 9-14.

41.Божедомов В.А. Причины оксидативного стресса сперматозоидов / В.А. Бо-жедомов, Д.С. Громенко, И.В. Ушакова, М.В. Торопцова, Ш.Н. Галимов, P.P. Фархутдинов, Ю.Ю. Громенко, Е.Л.Голубева, Л.А. Александрова, С.А. Кухаркин, Г.Т.Сухих // Проблемы репродукции. - 2008. - №6. - С. 67-73.

42.Громенко Д.С. Применение наукоемких технологий для оценки фертильно-сти мужчин / Д.С. Громенко // Вестник новых медицинских технологий. -2008. - Том XV, №4. - С. 118-120

ГРОМЕНКО ДМИТРИЙ СЕРГЕЕВИЧ

ОСОБЕННОСТИ ПАТОГЕНЕЗА ИДИОПАТИЧЕСКОЙ ПАТОЗООСПЕРМИИ ПРИ МУЖСКОЙ ИНФЕРТИЛЬНОСТИ

14.00.16 - Патологическая физиология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук

Формат 60x84 1/16. Бумага «Снегурочка». Печать офсетная. Тираж 100 экз. Заказ № 435.

Отпечатано в типографии ООО «Штайм» в полном соответствии с предоставленным оригиналом. 450005, Уфа, ул. 8 марта, 12/1. Тел. (347) 228-42-23

Оглавление диссертации Громенко, Дмитрий Сергеевич :: 2009 :: Санкт-Петербург

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

Глава 1. СОВРЕМЕННЫЕ ВЗГЛЯДЫ НА ПАТОГЕНЕТИЧЕСКИЕ МЕХАНИЗМЫ, МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ЛЕЧЕНИЯ МУЖСКОГО БЕСПЛОДИЯ (ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ)

1.1. Медико-социальные аспекты бесплодного брака

1.2. Этиологические факторы мужского бесплодия

1.3. Классические методы исследования эякулята

1.4. Генетическая природа нарушений фертильности

1.5.0ксидативный стресс как причина дефектной функции сперматозоидов

1.6. Методы исследования свободнорадикального окисления.

1.7. Возможности медикаментозной терапии при патозооспермии

1.8. Актуальность криоконсервации спермы (развитие криобиологии)

Введение диссертации по теме "Патологическая физиология", Громенко, Дмитрий Сергеевич, автореферат

АКТУАЛЬНОСТЬ ПРОБЛЕМЫ

Около 15% супружеских пар во всем мире имеют проблемы с естественным наступлением беременности (Тиктинский О.Л., Михайличенко В.В., 1999; Экстракорпоральное оплодотворение и его новые направления в лечении женского и мужского бесплодия (теоретические и практические подходы), 2000). Роль мужского фактора в бесплодном браке составляет не менее 40% (Кирпатовский И.Д., 1995; Урология, 2005; Healy D.L., Trounson А.О., Andersen A.N., 1994). В последние десятилетия снижается активность сперматогенеза у мужчин в различных странах (Purvis К., 1992; Farrow S., 1994; Irvine S., 1996; De Kretser D.M., 1998).

Решение проблемы мужского бесплодия (МБ) является одним из нереализованных резервов повышения рождаемости, что имеет большое социально-экономическое значение для современной России с ее крайне неблагоприятными демографическими показателями. Гипотетически, при условии ликвидации бесплодия и реализации бесплодными парами желаемого числа детей в семье, можно ожидать увеличения рождаемости на 10% (Коновалов О.Е., 1990). Как известно, в России вопросы здоровья будущих поколений традиционно рассматриваются в аспекте охраны здоровья матери и ребенка. Репродуктивное здоровье мужчины часто остается вне поля зрения врачей и организаторов здравоохранения.

Принципиальной биологической особенностью мужского организма являются более низкие компенсаторные возможности, нежели у женщин. Мужчина по сравнению с женщиной характеризуется в настоящее время более высокой заболеваемостью и смертностью и, соответственно, меньшей продолжительностью жизни. В экстремальных ситуациях организм мужчин менее приспособлен к резким колебаниям состояния внешней среды в целом, кроме того, для большинства ксенобиотиков было показано, что индуцируемая реактивность ферментативных систем их детоксикации у мужчин выражена значительно слабее, чем у женщин (Sierra-Santoyo A., Hernandez М., Albores А., Cebrian М.Е., 2000). Иными словами, адаптивные возможности мужского организма сравнительно невелики и истощаются быстрее. Большинство авторов связывают ухудшение показателей репродуктивного здоровья мужчин с антропогенным загрязнением окружающей среды (Никитин А.И., 2005).

Ряд исследований свидетельствует о том, что распространенность нарушений детородной функции среди мужского и женского населения в 1,5 раза выше в населенных пунктах с высокой техногенной нагрузкой (Бурденко Л.Г., 1996). Факты вмешательства ксенобиотиков в деятельность жизненно важных систем, включая репродуктивную, хорошо известны. Например, низкое качество семени в штате Миссури по сравнению с другими штатами США связывают с загрязнением пестицидами, широко применявшимися в этом сельскохозяйственном регионе (Swan S., Kruse R., Liu F. et al., 2003). Были* продемонстрированы также тесные ассоциации между уровнем контаминации другими экотоксикантами и репродуктивным статусом мужчин (Tas S., Lauwerys R., Lison D., 1996; Figa-Talamanca I., Traina M., Urbani E., 2001).

Нарушение гаметогенеза у мужчин, состоящих в бесплодном браке, несмотря на многообразие этиологических факторов, является звеном в патогенезе ограниченного числа типовых патологических процессов, которые клинически могут проявляться в виде различных заболеваний, что затрудняет выбор патогенетически обоснованной терапии и является причиной необоснованной полипрагмазии (Шупегин В.В., 2003). В современном мире довольно высок удельный вес категорий мужской инфертильности, отнесенных к идиопатическим формам. Это отражает реальную структуру бесплодия в современных условиях. Примерно у 25% бесплодных мужчин причину патологии не находят. Во многом это объясняется отсутствием стандартизованных методов исследования мужской половой сферы. Следует заметить, что при идиопатическом бесплодии ни один из препаратов априори не может доказать свою эффективность, поскольку группа пациентов с идиопатическим бесплодием заведомо-неоднородна. Именно поэтому главной задачей в андрологии является не поиск новых фармакологических препаратов, а углубленный анализ, патогенеза формирования инфертильности у мужчин в каждом конкретном случае в целях подбора патогенетически оправданной' терапии (Артифексов С.Б., Артифексова А.А., Седышева И.В., Овчинникова Е.В., 2006).

Выбор конкретных методов лечения МБ затруднителен на сегодняшний день по нескольким причинам (Артифексов С.Б., Артифексова А.А., Сергеев М.Ю., Седышева И.В., 2006):

1. Наличие большого числа фармакологических средств, рекомендуемых для коррекции мужской инфертильности

2. Отсутствие патогенетических показаний к применению того-или», иного метода лечения» или препарата, поскольку основанием- для применения фармакологических средств является патоспермия, но не вызвавшие её* причины.

3. Недостаточная изученность особенностей этиологии и патогенеза, мужской инфертильности и наличие' нескольких возможных причин патоспермии у одного мужчины.

В настоящий момент назрела необходимость разработки принципов этиотропной и патогенетической терапии, обеспечивающей возможность существенно облегчить оценку эффективности уже существующих и вновь предлагаемых препаратов за счет формирования однородных групп пациентов (Артифексов С.Б., Артифексова А.А., Сергеев М.Ю., Седышева И.В., 2006).

В последние годы особое внимание уделяется влиянию свободных радикалов (CP) на мужскую половую функцию. Хотя окислительный стресс может отрицательно влиять на сперматогенез, нормальное функционирование сперматозоидов, требует присутствия физиологических количеств активных форм кислорода (АФК) (Aitken R.J., Fisher Н., 1994; Aitken R.J:, 1995). Многие авторы отмечают, что АФК играет основную роль в процессах гиперактивации сперматозоидов, ведущей к капацитации и развитию акросомальной реакции (De Lamirande Е., Gagnon С., 1993; Aitken R.J., Harkiss, Knox W. et al., 1998; De Lamirande E., Harakat A., Gagnon C., 1998).

Наибольшей способностью к генерации^ АФК обладают незрелые сперматозоиды с неполноценной морфологической структурой (Gagnon С., Iwasaki A., Lamirande E.D., 1991; Zalata A., Hafez Т., Comhaire F. et al., 1995; Ollero M., Gil-Guzman E., Lopez M.C. et al., 2001). АФК в избыточном количестве могут инициировать нарушения в сперматозоидах путем индукции оксидативного повреждения клеточных липидов, протеинов и ДНК, что является одним из механизмов патогенеза МБ (Griveau J.F., Le LannouD", 1997; Kemal DuruN., Morshedi Mt, Oehninger S., 2000). Образование реактивных форм-кислорода в эякулятах мужчин с олигозооспермией было значительно выше, чем при нормозооспермии!(Henkel R., Ichikawa Т., Sanchez R., 1997; Gil-Guzmans E., Ollero M., Lopez M.C., et al., 2001; Wang X., Sharma R.K., Sikka S.C. et al., 2003). Содержание кислородных радикалов в сперме значительно выше у мужчин с варикоцеле, идиопатическим бесплодием, простатитом (Mazzilli F., Rossi Т., Marchesini М. et al., 1994; Sharma R.K., Pasqualotto F.F., Nelson D.R. et al., 1999).

В норме сперматозоиды защищены от окислительного стресса ферментами антиоксидантной системы, регулирующей концентрацию АФК. Эта система включает в себя такие ферменты, как супероксиддисмутаза, каталаза, глутатионпероксидаза, а также ряд эндогенных антиоксидантов (альбумин, глутатион, пируват, витамины Е и С) (Donnelly Е.Т., Mcclure N., Lewis Sh. E. M., 2000). Защитные способности семенной плазмы имеют значительные индивидуальные колебания (Kovalski N., de Lamirande Е., Gagnon С., 1992; Zalata A., Hafez Т., Mahmoud A. et al., 1995).

Наблюдается корреляция-между производством АФК и антиоксидантной способностью спермоплазмы и сочетанием данных показателей с МБ (Sharma

R.K., Pasqualotto F.F., Nelson: D.-R. et ah, 1999). Можно предположить, что; для нормального функционирования сперматозоидов необходимо соблюдение тонкого равновесия между продукцией АФК и системой, обеспечивающей их разрушение (De Lamirande Е., Jiang Н., Zini A. et al.,1997; Park N.C., Park H.J., Lee K.M., Shin D.G., 2003).

При идиопатическом бесплодии применялось и продолжает применяться множество способов медикаментозного лечения,, не имеющих рациональных патофизиологических предпосылок. Фармакотерапия идиопатического бесплодия у мужчин, к сожалению; не; дает обнадеживающих результатов (Андрология, 2005); Несмотря на успехи искусственного оплодотворения, большинство пациентов заинтересовано в этиотропной терапии своего недуга. Потребность в медикаментозном лечении связана и с тем, что оно обходится гораздо дешевле, чем искусственное оплодотворение. Расшифровка соответствующих патогенетических механизмов МБ и, в конечном итоге, выработка рациональной. терапии - одна из наиболее актуальных задач современной медицины.

ЦЕЛЬ ИССЛЕДОВАНИЯ .

ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ

1. Определить частоту встречаемости патоспермии в структуре бесплодного брака на территории Республики Башкортостан;

2. С учетом особенностей1 экологической обстановки в регионе оценить влияние техногенной нагрузки и уровня репротоксикантов в биологических жидкостях на развитие патоспермии.

3. Изучить процессы свободнорадикального окисления в сперме мужчин, состоящих в бесплодном браке.

6. В эксперименте на животных оценить возможность использования природных антиоксидантов для предупреждения развития патоспермии, вызванной" нарушением свободнорадикального окисления в репродуктивных органах.

8. На основе полученных данных разработать комплекс диагностических и '' организационно-профилактических мероприятий для внедрения в практическое здравоохранение с целью охраны мужского репродуктивного здоровья.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА

Определено содержание диоксинов и диоксиноподобных соединений' в^ пересчете на токсические эквиваленты (T3/TEQ ВОЗ) в суммарных пробах спермы мужчин, проживающих в индустриальных городах Республики Башкортостан. Выявлена прямая зависимость между содержанием диоксинов и диоксиноподобных соединений' Вг сперме и развитием патозооспермии. На экспериментальных моделях выявлено влияние репротоксикантов класса ПХБ на, сперматогенез и предложена схема развития патологического процесса. Впервые* изучены процессы свободнорадикального- окисления при криоконсервации* спермы. Определены новые подходы к патогенетическому лечению-мужского бесплодия- с учетом роли свободнорадикального окисления, заключающиеся в> проведении рациональной- антиоксидантной терапии; коррекции интенсивности генерации- активных форм кислорода. В*' эксперименте на животных обосновано применение лечебных мероприятий, при* нарушении фертильности в условиях хронического оксидантного стресса.

ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ

Разработаны критерии для выделения групп повышенного риска по-развитию мужской инфертильности. В результате проведенных исследований внедрен в практику экспресс-метод оценки состояния свободнорадикального окисления в эякуляте, заключающийся в определении интегральных показателей суммарной антиокислительной активности спермоплазмы в модельной системе, генерирующей активные формы кислорода, и спонтанного люминолзависимого свечения эякулята.

Разработаны, патогенетически обоснованные показания к применению антиоксидантной терапии мужского бесплодиях учетом причин, приведших к развитию I патоспермии. Результаты проведенных исследований по уровню патоспермии в регионах Республики Башкортостан способны оказать содействие практическому здравоохранению в планировании медицинской' помощи по охране репродуктивного здоровья мужчин.

АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ

ВНЕДРЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ В ПРАКТИКУ

Экспресс-метод оценки состояния свободнорадикального окисления в эякуляте внедрен в практику Республиканской клинической больницы им. Г.Г.Куватова. Разработанный метод используется для диагностики и определения тактики лечения мужского бесплодия в Республиканской клинической больнице им. Г.Г.Куватова и Республиканском перинатальном центре. Материалы, полученные в диссертации, введены в учебную программу и включены в курс лекций для студентов и курсантов института последипломного образования Башкирского государственного медицинского университета. Результаты исследования послужили основой экспертных материалов для разработки Закона Республики Башкортостан «О внесении изменений Bi Закон Республики Башкортостан «Об охране семьи, материнства, отцовства и-детства в Республике Башкортостан».

ОСНОВНЫЕ ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ:

1. Частота патоспермии в структуре бесплодного- брака на территории Республики Башкортостан составляет 70,25%.

2. В структуре мужского бесплодия идиопатические формы встречаются с частотой- 45,3%.

3. Хемилюминесцентные методьь исследования позволяют выявить нарушения равновесия между продукцией активных форм кислорода и системой антиокислительной!защиты в сперме мужчин.

4. При идиопатической форме1 патозооспермии в регионах с повышенным риском- экзогенного воздействия токсических факторов наблюдается уменьшение защитных свойств спермоплазмы, в виде снижения уровня суммарной антиокислительной!активности*наряду с повышением образования* АФК морфологически-или функционально неполноценными сперматозоидами:

5.Содержание диоксинов и диоксиноподобных соединений В'пересчете на токсические эквиваленты (T3/TEQ ВОЗ) в суммарных пробах спермы мужчин, проживающих в индустриальных* городах Республики Башкортостан; превышает соответствующие уровни в крови у тех же мужчин.

6: Одним из механизмов, приводящих к развитию патоспермии при действии стойких органических загрязнителей, является нарушение процессов свободнорадикального окисления. Данные изменения проявляются в виде снижения уровня суммарной антиокислительной активности в тестикулярной ткани, что приводит к ранней активации и незрелости сперматозоидов, и, как следствие, морфологичесюш изменениям половых клеток и снижению их функциональных характеристик.

7. Выявление патогенетических ' механизмов бесплодия, связанных с нарушением равновесия процессов свободнорадикального окисления, в сперме и приведших к развитию идиопатической- патозооспермии, позволяет обосновать тактику лечения, направленную на коррекцию патологического процесса.

ПУБЛИКАЦИИ

По теме диссертации опубликовано 45 печатных работ, получено 2 Патента РФ на изобретения.

ОБЪЁМ И СТРУКТУРА ДИССЕРТАЦИИ

Заключение диссертационного исследования на тему "Особенности патогенеза идиопатической патозооспермии при мужской инфертильности"

192 ВЫВОДЫ

1. Структура бесплодного брака в Республике Башкортостан характеризуется высоким удельным весом мужского фактора, о чем свидетельствует ретроспективный анализ параметров семенной жидкости 4000 мужчин, выявивший аномальную частоту встречаемости патоспермии (более 70%). В последние годы эякулят обследованных мужчин характеризуется ухудшением морфофункциональных свойств сперматозоидов, что нашло отражение в снижении их подвижности и увеличении доли морфологически неполноценных форм.

2. Региональной особенностью патозооспермии в Республике Башкортостан является высокий уровень случаев мужского бесплодия не выясненной этиологии (45,3% идиопатических форм), что может быть следствием недостаточной эффективности стандартных методов исследования и несовершенства системы оказания андрологической помощи.

3. Выявлена прямая зависимость между содержанием диоксинов и диоксиноподобных соединений в сперме и развитием патозооспермии. Уровень диоксинов и диоксиноподобных соединений в пересчете на токсические эквиваленты в суммарных пробах спермы мужчин, проживающих на территории Республики Башкортостан, колеблется в высоких пределах - от 56,7 до 823,7 пг/г липидов.

4. При идиопатической форме патозооспермии в регионах с повышенным уровнем экзогенного воздействия диоксинов и диоксиноподобных соединений у мужчин, состоящих в бесплодном браке, отмечается увеличение генерации активных форм кислорода морфологически и функционально неполноценными сперматозоидами, наряду с угнетением суммарной антиокислительной активности спермоплазмы, что может быть предпосылкой для снижения оплодотворяющей способности эякулята.

5. В эксперименте на животных при действии диоксиноподобных соединений класса ПХБ (совтол) у крыс снижаются индексы фертильности, гестации и плодовитости, а также количество морфологически полноценных сперматозоидов, накапливаются продукты перекисного окисления липидов в тестикулярной ткани.

8. Хемилюминесцентные методы исследования семенной жидкости дают возможность оценить роль нарушения свободнорадикального окисления в возникновении инфертильности, и, наряду с традиционными способами диагностики, позволяют уточнить патогенетические механизмы мужского бесплодия, что является предпосылкой для повышения эффективности коррекции патологии сперматогенеза, обусловленной оксидативным стрессом.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

• в целях охраны репродуктивного здоровья и снижения уровня мужского бесплодия необходимо проведение обязательного регулярного уроандрологического обследования мальчиков, подростков.и мужчин детородного возраста;

Список использованной литературы по медицине, диссертация 2009 года, Громенко, Дмитрий Сергеевич

1. Абдрашитова Н.Ф., Фархутдинов P.P., Загидуллин Ш.З. Влияние антибиотиков на процессы свободно-радикального окисления в модельных системах/Ддравоохранение Башкортостана.-1995.-№ 4-5.-С.34-38.

2. Авзалетдинова А.Р., Фазлыева P.M., Фархутдинов P.P. и др. Хемилюминесценция и мочи в дифференциальной диагностике геморрагической лихорадки с почечным синдромом// Клиническая лабораторная диагностика.-1995.-N5.-C.45-47.

3. Агаджанян Н.А. Этнос: гомеостаз, регуляция, репродукция// Хроноструктура и хроноэкология репродуктивной функции. — М.,2000. — С.4-9

4. Агаджанян Н.А., Родиш И.В., Краюшкин С.И. Хроноструктура репродуктивной функции. М.,1998. — С.11-91

5. Аккузина О.П., Зорина И.В., Смирнова Н.П. Организация медицинской помощи бесплодным парам в условиях центра планирования семьи//Лечение бесплодия: нерешенные проблемы. Сбор. науч. трудов. — Саратов, 2001.-С. 1.

6. Алиев Р.Т. Роль энзимов спермальной плазмы в патогенезе относительной формы мужского бесплодия: Автореф. дис. . канд. мед. наук. Новосибирск. -1998 - 22с.

7. Андрология. Мужское здоровье и дисфункция репродуктивной системы: Пер. с англ./ Под ред. Э.Нишлага, Г.М.Бере. ООО «МИА», 2005. - 554с.

8. Артифексов С.Б. Патогенез сосудистых форм мужской инфертильности: Автореф. дис. .д-ра мед. наук. Челябинск. — 1992. 37с.

9. Артифексов С.Б., Артифексова А.А., Потемина Т.Е. Влияние окклюзии левой яичковой вены на гаметогенез (статья). В кн.: Вопросы клинической; экспериментальной хирургии и прикладной анатомии. — Санкт-Петербург: ГМУ, 1998; 43-46.

10. Артифексов С.Б., Артифексова А.А., Седышева И.В., Овчинникова Е.В. Особенности патогенетической терапии в андрологии/ТВспомогательные репродуктивные технологии сегодня и завтра. Тез. XVI межд. конф. РАРЧ. Ростов-на-Дону, 2006. - С.45

11. Артифексов С.Б., Артифексова А.А., Сергеев М.Ю., Седышева И.В. Андрологические проблемы в- репродуктологии//Вспомогательные репродуктивные технологии сегодня и завтра. Тез. XVI межд. конф. РАРЧ. Ростов-на-Дону, 2006. - С.44

12. Артифексов С.Б., Артифексова А.А., Щетинина JI.B. Эффективность лекарственной терапии заболеваний, передаваемых половым путем. Тез. межд. конф. «Человек и лекарство». — М., 2000; 186.

13. Артифексова А.А. Патогенетические аспекты мужской субфебрильности как причины репродуктивных потерь//Пробл. репродукции. 1999. -Т.5,№6. - С.37-41.

14. Артифексова А.А. Этиология и патогенез репродуктивных потерь при нарушении гаметогенеза у мужчин: Автореф. дис. д-ра мед. наук. — Казань, 2000; 40.

15. Афонин Г.Б., Мойданник В.К. Клинические аспекты применения хемилюминесцентного анализа//Врачебное дело. 1990. - № 9. — С. 7376.

16. Ахмадеев Р.И. Раннее выявление детей с урологической патологией методом регистрации хемилюминесценции мочи: Автореф. дис. . канд. мед. наук. М., 1991. - 22 с.

17. Божедомов В.А. Мужское иммунологическое бесплодие (этиология, патогенез, диагностика, лечение): Автореф. дис. . докт. мед. наук. -Москва.-2001-60 с.

18. Божедомов В.А., Короткова И.В., Голубева E.JI. и др. Генерация свободных радикалов кислорода является одной из причин мужского бесплодия// Прил. к журналу «Андрология и генитальная хирургия». -2002/3.-с.29-30

19. Болевич С. Аутофагоцитарные свободно-радикальные болезни легких. //Свободные радикалы и болезни человека: Научно-практ. конференция. -Смоленск., 1999. С.113-115.

20. Болевич С. Свободно-радикальные процессы и заболевания легких. — М., 1998,- 76 с.

21. Бондарев Д.А., Гоголевский П.А., Гоголевская И.А. и др. AZF-микроделеции и мужское бесплодие// Прил. к журналу «Андрология и генитальная хирургия». 2002/3. - с. 16-17

22. Бордичевский Б.А., Леонтьев И.Г., Журавлева Т.Д., Киянюк Н.С. Исследование процессов перекисного окисления липидов у больных хроническим простатитом. — Науч. вест. Тюмен. мед. акад. 2001. — № 2.- с.13-15.

23. Брагина Е.Е. Закономерности нарушений сперматогенеза человека при некоторых генетических и инфекционных заболеваниях: Автореф. дис. . докт. биол. наук. Москва. - 2001- 53 с.

24. Брагина Е.Е., Абдумаликов Р.А., Курило Л.Ф., Шилейко Л.В. Электронно-микроскопическое изучение сперматозоидов человека и его роль в диагностике мужского бесплодия//Пробл. репродукции. 2000. -№6.-С. 62-71.

25. Бурденко Л.Г. Репродуктивное здоровье женщин, проживающих в экологически неблагоприятном районе: Автореф. дис. . канд. мед. наук.- Москва. 1996-21 с.

26. Быков B.JI. Сперматогенез у мужчин в конце XX века (обзор литературы// Пробл. репродукции. 2000. -6. - № 1. — С. 6-13.

27. Витязева И.И. Течение, ведения и исход беременностей после лечения бесплодия методами вспомогательной репродукции: Автореф. дис. . канд. мед. наук. Москва. - 1999- 26 с.

28. Владимиров Ю.А. Свободные радикалы в живых системах//Итоги науки и техники. Биофизика. 1991. - Т.29. - С.252.

29. Владимиров Ю.А., Азизова О.А., Деев А.И. и др. Свободные радикалы в живых системах.//Итоги науки и техники. Биофизика. 1991. - Т.29 -С. 249.

30. Владимиров Ю.А., Арчаков А.И. Перекисное окисление липидов в биологических мембранах. М.,1972.- 252 с.

31. Владимиров Ю.А, Шерстнев М.П. Азимбаев Т.К. Оценка антиокислительной и антирадикальной активности веществ- и биологических объектов с помощью железоиндуцированной хемилюминесценции //Биофизика.-1992.-Т.37,вып.6.-С.1041-1047.

32. Владимиров Ю.А., Шерстнев М.П. Хемилюминесценция клеток животных//Итоги науки и техники. Биофизика/ВИНИТИ. М.,1989. - Т. 24. -С. 176.

33. Воронцов Д.М. Репродуктивное здоровье мужчин и женщин в супружеских парах с внематочной беременностью в анамнезе: Автореф. дис. . канд. мед. наук. Иваново. - 2002- 22 с.

34. Газымов М.М., Быкел В.М., Самойлова А.В. и др. Мужское бесплодие -результаты комплексного лечения//Андрология и генитальная хирургия. —2000. -№1.- С. 38-39.

35. Галимов Ш.Н., Камилов Ф.Х. Гонадотропные эффекты феноксигербицидов в мужском организме. Уфа: ДизайнПолиграфСервис,2001.- 184 с.

36. Галимов Ш.Н., Мухамедзянов P.M. Биофлавоноиды прополиса в терапии нарушений репродуктивной функции у мужчин: молекулярные иклеточные механизмы// Мужское здоровье и долголетие: Материалы Российского научного форума*. — Москва, 2005. — С. 93-95.

37. Гаспаров А.С., Назаренко Т.А. Репродуктивное здоровье. Бесплодие как медико-социальная проблема: Практ. руководство. М., 2000. - 56с.

38. Голубева E.JI; Аутоантитела при бесплодии и их влияние на функции сперматозоидов: Автореф. дис. . канд. мед. наук. Москва. - 2000- 24 с.

39. Горшнченко ItL, Бойко M.I., Свенсон Р.Д.,- и соавт.// Свободнорадикальные процессы в сперме мужчин, проживающих в районах различной удаленности от Чернобыльской АЭС. Уролопя — 2000.-4, №3.-С. 62-67

40. Горюнов В.Г., Жибореев* Б.Н., Евдокимов» В:В. Причины и признаки* мужского бесплодия. Рязань, 1993:

41. Государственный доклад* "О-состоянии здоровья- населения в Российской Федерации в 2002 году". М., 2003. - 58 с.

42. Государственный доклад «О состоянии» окружающей природной среды Республики "Башкортостан в2000'году». Уфа, 2001. - 256с.

43. Государственный доклад «О состоянии' окружающей природной среды Республики Башкортостан в 2004 году». Уфа, 2005. - 219с.

44. Гришина Е.М. Характеристика сперматогенеза при некоторых генетически обусловленных и приобретенных нарушениях репродуктивной функции у мужчин: Автореф. дис. .канд. мед. наук. -Москва. 2004. - 31 с.

45. Грищенко В.И., Дунаевская А.В., Калугин Ю.В. Влияние быстрых и сверхбыстрых скоростей замораживания на сохранность спермиев человека. Проблемы криобиологии,- 2000. - №2. — с.52-57.

46. Гусева О.Н. Выраженность воспалительных процессов и состояние гуморального звена иммунной системы при хроническом простатите у мужчин с нарушениями репродуктивной функции: Автореф. дис. . канд. мед. наук. Новосибирск. -17 с.

47. Демченко А.Н. Дисфункциональная гипофертильность у мужчин, новейшие подходы к ее классификации, диагностике и терапии//Новости медицины и фармации. 2004 - №13. - 153

48. Джарбусынов Б.У. Мужское бесплодие: Автореф. дис. . докт. мед. наук.- Москва. 1983- 49 с.

49. Долгов В.В., Луговская С.А., Фанченко Н.Д. и др. Лабораторная диагностика мужского бесплодия. М. - Тверь: ООО «Издательство «Триада», 2006. - 145 с.

50. Доценко Е.В. Онтогенетические аспекты патогенеза мужской инфертильности: Автореф. дис. .канд.мед.наук. Н.Новгород. —2003 -24 с.

51. Евдокимов В.В. Системное исследование эякулята при заболеваниях мужских репродуктивных органах: Автореф. дис. . докт. мед. наук. -Москва. 1999- 55 с.

52. Евдокимов В.В., Ерасова В.И., Марчук Н.В. и др. Сперматогенез при хроническом абактериальном простатите//Андрология и генитальная хирургия. 2004. - №3. - с.25-27

53. Евдокимов В.В., Ерасова В.И., Минаков Н.А. Коррекция нарушения фертильности при заболеваниях мужских репродуктивных органах// Вопросы андрологии в урологии. М.,2000. — T.XI. - С. 150-160

54. Ерохин А.П. Варикоцеле как причина бесплодия// Прил. к журналу «Андрология и генитальная хирургия». 2001/1. — 90'

55. Жабин С.Г., Маркдорф А.Г., Горин B.C. и др. Использование теста на выживаемость активированных сперматозоидов для-оценки фертильности спермы //Лечение бесплодия: нерешенные проблемы: Сбор. науч. трудов.- Саратов, 2001г. С. 27-28.

56. Журавлев А.И. Теоретические и методические основы биохемилюминесценции. М.,1986. - 310 с.

57. Журавлев А.К., Шерстнев М.П. Метод регистрации перекисной хемилюминесценции плазмы крови//Лаб. дело. 1985. - № 10. - С. 586587.

58. Занавескин Л.Н., Аверьянов В.А. // Успехи химии. — 1998. 67 (8). - С. 788-800.

59. Зачепило А.В. Особенности этиологии и патогенеза нарушений функции мужской репродуктивной системы, обусловленных экологическими факторами: Автореф. дис. . канд. мед. наук. — Н.Новгород. — 2003. 20 с.

60. Здановский В.М. Современные подходы к лечению бесплодного брака: Автореф. дис. . докт. мед. наук. Москва. — 2000. - 76 с.

61. Зенков Н.К., Меныцикова Е.Б. Активированные кислородные метаболиты в биологических системах//Успехи современной биологии.-1993.-Т. 113.-№3.-С.286-296.

62. Зенков Н.К., Меныцикова Е.Б., Шергин С.М. Окислительный стресс. Диагностика, терапия, профилактика. Новосибирск, 1993. - 181 с.

63. Казанская И.В., Окулов А.Б., Ахмина Н.И. и др. Организация (концепция) помощи детям с мочеполовой патологией//Андрология и генитальная хирургия. 2004. - №3. - с.65-68

64. Капрельянц А.А., Мигунова Р.К., Капрельянц А.С.// Криомикроскопическое исследование процесса формирования кристаллов льда вокруг криохирургического зонда Пробл. криобиол.-1999, №2.- С. 70-71.

65. Кирпатовский И.Д. Клиническая андрологии как новая медицинская дисциплина. Актовая речь. М., изд. РУДН, 1995, 35с.

66. Клюев Н.А., Бродский Е.С. Определение полихлорированных бифенилов в окружающей среде и биоте. Полихлорированные бифенилы. Супертоксиканты XXI века. Инф. выпуск № 5 ВИНИТИ, Москва, 2000, с. 31-63.

67. Клюев Н.А., Курляндский Б.А., Ревич Б.А., Филатов Б.Н. Диоксины в России. М: ЮНЕП; 2001.

68. Кожуховская Т.Ю. Медико-социальное исследование репродуктивного здоровья мальчиков: Автореф. дис. . канд. мед. наук. — Санкт-Петербург. 2000. - 18 с.

69. Козлов А.В., Мещанов Ф.Ю., Николаева И.Г. и др. Сравнительное изучение антиокислительных свойств полигидроксамовых кислот, десферала и других хелаторов железа//Биофизика.-1993.-Т.38,вып.4.-С.708-713.

70. Козляткин А.Ю. Метаболические предпосылки мужской инфертильности: Автореф. дис. . канд. мед. наук. Уфа. -2000. - 24 с.

71. Колесова О.Е., Маркин А.А., Федорова Т.Н. Перекисное окисление липидов и методы определения продуктов липопероксидации в биологических средах//Лаб. дело.-1988.-№8.-С.540-546.

72. Колчин А.В. Психологические аспекты репродукции человека.// Пробл. репрод. 1995. - №1. - С.33-40

73. Комарова М.В. Характеристика эякулята в оценке репродуктивных возможностей человека: Автореф. дис. . канд. биол. наук.- Уфа. 2000-28с.

74. Кон И.С. Введение в сексологию. М.,1988. - С.12-16

75. Коновалов О.Е. Бесплодие как медико-демографическая проблема: Автореф. дис. . канд. мед. наук. Москва. - 1990- 23 с.

76. Коновалов О.Е. Социально-гигиеническая характеристика бесплодных браков// Здравоохранение Рос.Федерации. 1987. - №12.

77. Коптева А.В., Дзенис И.Г., Бахарев В.А. Генетические нарушения гипоталамо-гипофизарной регуляции репродуктивной системы// Пробл. репрод. 2000. - 3. - 28-35.

78. Кореньков Д.Г., Александров В.П., Марусанов В.Н. и др. Влияние гипербарической оксигенации (ГБО) на репродуктивную и копулятивнуюфункции у мужчин//Андрология и генитальная хирургия. — 2000. №1. — С.37.

79. Корнеева И.Е. Эффективность лечения бесплодия в амбулаторных условиях. Акуш. и гинекол. - 2002. - №2. — с.13-17.

80. Корсак B.C. Мониторинг ВРТ, 2003 год// Пробл. репрод. 2005. - №5. -с. 19-22

81. Корякин М.В., Акопян А.С. Анализ причин мужского бесплодия. — Пробл.репрод. 2001. - 30. - №2. - с.80-82.

82. Кузьмин М.Д. Роль условно-патогенной бактериальной1 микрофлоры в патогенезе мужского бесплодия): Автореф. дис. . докт. мед. наук. -Оренбург. 2002- 42 с.

83. Кузьмин М.Д., Бухарин О.В., Иванов Ю.Б.// Роль микробного фактора в патогенезе мужского бесплодия Ж. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол.- 2000, № 2.- С. 106-110.

84. Курило Л.Ф. Подходы к тестированию гонадо- и гаметотоксического эффекта экзогенных факторов.//Тез. докл. междун. конф. по биоэтике, Пущино, ИБФМ РАН. 1998. - С. 83-84.

85. Курило Л.Ф., Гришина Е.М., Сорокина Т.М. и др. Полизооспермия как одна из причин снижения мужской фертильности// Андрология и генитальная хирургия. 2004. - №3. - С.32-35

86. Курило Л.Ф., Черных В.Б. Генетический контроль дифференцировки пола у человека// Тез. докл. II (IV) съезда Росс.общества мед.гнетиков. Курск,2000.- 1.-64.

87. Курило Л.Ф., Шилейко Л.В., Сорокина Т.М., Гришина Е.М. Структура наследственных нарушений репродуктивной системы. — Вестн. РАМН. — 2000. -№5.-с.32-36.

88. Курносова Т.Р., Бондарев Д.А., Скорова Н.Е. Диагностическая программа в коррекции мужского бесплодия //Андрология и генитальная хирургия. — 2000.-№1.-С.32-33.

89. Куценко С.А. Основы токсикологии. — СПб., 2004. 720с.

90. Леонов Б.В. Одиночество вдвоем. Москва, 1991. - 28с.

91. Леонов Б.В., Кузьмичев Л.Н., Беляева А.А., Кулаков В.И. Наш опыт применения метода интрацитоплазматической инъекции сперматозоида (ИКСИ) в программе экстракорпорального оплодотворения и переноса эмбрионов//Акуш. и гинек. 1999. - №4. - С. 35-37.

92. Леонтьева О.А., Воробьева О.В., Козлов В.В. Прогностическое значение показателей спермограммы в программе оплодотворения ооцитов человека в культуре//Пробл. репродукции. 2000. - № 5. - С. 39-49.

93. Лечение женского и мужского бесплодия. Вспомогательные репродуктивные технологии//Под ред. В.И.Кулакова, Б.В. Леонова, Л.Н. Кузьмичева- М.: Медицинское информационное агентство, 2005. 592 с.

94. Лоран О.Б., Божедомов В.А. Проблемы разработки стандартов оказания медицинской помощи парам с мужским фактором субфертильности// Андрология и генитальная хирургия. Прил.: Тез. науч. тр. 2001. - С.65-66.

95. Луцкий Д.Л. Иммунохимическая и биохимическая характеристика спермоплазмы субфертильных мужчин): Автореф. дис. . канд. мед. наук. Астрахань. - 2000- 24 с.

96. Маянский А.Н. Хроническое воспаление. М., 1991. - 272 с.

97. Маянский А.Н., Пикуза О.И. Клинические аспекты фагоцитоза. Казань, 1993.-192с.

98. Маянский А.Н. Невмятуллин А.Л., Чеботарь И.В. Реактивная хемилюминесценция в системе фагоцитоза//Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунологии.-1987.-№7.-С.109-115.

99. Медицинские лабораторные технологии и диагностика: Справочник./Под ред. А.И. Карпищенко. СПб, 1998. - 408 с.

100. Мелещенко А.Б. Эффективность использования методов проточной цитофлюориметрии, хемилюминесценции и клеточного электрофореза сперматозоидов для тестирования мужского бесплодия: Автореф. дис. . канд. мед. наук. Саратов, 1993. - 19 с.

101. Меныцикова Е.Б., Зенков Н.К. Антиоксиданты и ингибиторы радикальных окислительных процессов//Успехи совр. биологии. 1993. -Т. 113, вып. 4.-С. 442-455.

102. Меныцикова Е.Б., Зенков Н.К., Шергин С.М. Биохимия окислительного стресса. Оксиданты и антиоксиданты. Новосибирск, 1994. - 203с.

103. Миронова И.И., Романова JI.A., Долгов В.В. Общеклинические исследования: моча, кал, ликвор, эякулят. — М. — Тверь :000 «Изд-во «Триада», 2005. 206с.

104. Мирошников В.М., Полунин А.И. Субфертильность при хроническом неспецифическом простатите// Материалы X Росс, съезда урологов. Москва, 2002. с.300 -301

105. Назаренко Т.А. Женское бесплодие, обусловленное нарушением процесса овуляции (клиника, диагностика, лечение): Автореф. дис. . докт. мед. наук. Москва. - 1998- 45 с.

106. Никитин А.И. Вредные факторы среды и репродуктивная система человека (ответственность перед будущими поколениями). — СПб.: «ЭЛБИ-СПб.», 2005. - 216с.

107. Никитин А.И. Факторы среды и репродуктивные системы человека// Морфология. 1998. - №6. - С.7-9

108. Николов Н., Папазов Бр. Бесплодие в семье: пер. с болг. — София, 1971. — С.115-123.

109. Оксенгендлер Г.И. Яды и организм. С.-Пб: Наука, 1991. - 320 с.

110. Осипов А.Н., Азизова О.А., Владимиров Ю.А. Активированные формы кислорода и их роль в организме//Успехи биол. химии. 1990. - Т. 31. - С. 180-208.

111. Пенжоян Г.А., Маркова Л.М., Гришапов К.В. Значение этиологических факторов нарушения репродуктивной системы мужчин в лечении мужского бесплодия. Пробл. репрод. - 2000. - 6. - №6. - с. 60-61.

112. Петрищев B.C., Казаков Д.А. Анализ эякулята: клиническое значение спермальной морфологии. Оценка спермальной морфологии согласно «строгим критериям» //Лечение бесплодия: нерешенные проблемы: Сбор, науч. трудов. Саратов, 2001г. - С. 115-116.

113. Пикуза О.И., Адо Е.И., Делян В.Ю. Клинические аспекты применения хемилюминесцентного анализа//Казан. мед. журнал.-1996.-№4.-С.298-300.

114. Пинкус Ю.М. Характеристика спермальной плазмы при различных формах бесплодия: Автореф. дис. . канд. мед. наук. Уфа. - 2002- 21 с.

115. Поляков В.М., Бойко И.К., Маголина Ю.В., Алексеева Л.В. Ультразвуковое исследование органов мошонки у мужчин, состоящих в бесплодном браке. Сиб.мед.ж. - 1998. - №3. - с.49-50.

116. Практическая гинекология (клинические лекции)/Под ред. акад. РАМН В.И.Кулакова и В.Н.Прилепской. М., 2001. - 720с.

117. Прибыш И.А. Медико-социальное исследование женского бесплодия и организация стационарной помощи этим больным: Автореф. дис. . канд. мед. наук. Санкт-Петербург. - 2001- 15 с.

118. Программа действий. Встреча на высшем уровне «Планета Земля». Повестка дня на XXI век и другие документы конф. ООН по окружающей среде и развитию (Рио-де-Жанейро, 1992). — Женева: Кундиг, 1993. — 70 с.

119. Проект стандартов диагностики и лечения мужского бесплодия//Андрология и генитальная хирургия. 2000. - №1. — С. 18-26.

120. Пшеничникова Т.Я. Бесплодие: причины, меры предупреждения. — М.,1988. 126с.

121. Рабинович JL, Кислев Э. Экспресс-исследование спермы, с помощью автоматического анализатора- SQA //Лечение бесплодия: нерешенные проблемы: Сбор. науч. трудов. Саратов; 2001г. — С. 130-131'.

122. Райцина С.С. Сперматогенез' и структурные основы его регуляции. — Москва, 1985. — 206с.

123. Репродуктивная эндокринология. В 2 томах. Том 2./Под ред. С.С.К.Иена, Р.Б.Джаффе. — М., 1998. -432с.

124. Романов А.Б. Влияние перинатальных г факторов на» репродуктивное здоровье подростков: Автореф. дис. . канд. мед. наук. — Санкт-Петербург. 2003- 23 с.

125. Руководство по клинической, урологии: Пер. с англ./ Под ред. Ф;М. Ханно, С.Б. Малковича, А.Дж. Вейна. 3-е изд. - М.: 000«Медицинское инфррмационное агентство», 2006. - 544 с.

126. Руководство ВОЗ по лабораторному исследованию эякулята человека и взаимодействия сперматозоидов с цервикальной слизью, 4-я ред. (1999). -М.: Медицина. -2001. 143 с.

127. Руководство по охране репродуктивного здоровья. — М:, 2001. — 568с.

128. Румак B.C. Медико-биологические основы отдалённых медицинских последствий применения в военных целях фитотоксикантов, содержащих 2,3,7,8-ТХДД: Автореф. дис. . докт. мед. наук.- СПб., 1993. 50 с.

129. Рыжаков Д.И. Мужское бесплодие: реальность и перспективы. -Н.Новгород. 2003. - 22с.

130. Савельева А.П. Структура хромосомной патологии среди пациентов с мужским бесплодием и патозооспермией: Автореф. дис. . канд; биол. наук. Москва. - 2002- 31' с.

131. Савельева И.С. Репродуктивное здоровье и репродуктивное поведение современной молодежи: перспективы и пути оптимизации: Автореф. дис. . докт. мед. наук. Москва. - 2004- 44 с.

132. Саноцкий И.В., Фоменко В.Н., Сальникова JI.C. и> др. Методы экспериментального исследования по установлению порогов действия промышленных ядов на генеративную функцию. — М.: МЗ СССР, 1978. — 34 с.

133. Сатыбалдыев Ш.Р. Медицинская реабилитация больных хроническим простатитом и репродуктивной дисфункцией: Автореф. дис. . канд. мед. наук. Москва. - 2000- 21 с.

134. Сегал А.С., Дунаевский Я.Д., Вишневский А.Е. и др. Гипербарическая оксигенация в терапии секреторных форм мужского» бесплодия //Андрология и генитальная хирургия. — 2000. №1. - С. 37-38.

135. Селезнева И.Ю. Бесплодный^ брак: Эпидемиологическое исследование: Автореф. дис. . канд. мед. наук. Москва. - 1999- 20 с.

136. Сергеев П. В. , Белых А. Г. , Чукаев С. А. , Гукасов В. М. Влияние антиоксидантов на быструю вспышку железо индуцированной хемилюминесценции//Эксперим. и клин, фармакология. - 1992 — Т. 55, № 2. - С. 60-62.

137. Серегин С.П. Значение определения показателей антиокислительной активности в диагностике хронического простатита// Клиническая лабораторная диагностика. — 1997. №7. — с.52-53

138. Серегин С.П., Долженков С.Я., Пахомов В.В. и др. К вопросу о патогенезе хронического простатита //Андрология и генитальная хирургия. 2000. - № 1. - С. 104-105.

139. Тарусин Д.И., Румянцев А.Г., Гаврилова JI.B. Охрана репродуктивного здоровья мальчиков и юношей-подростков. Информационное письмо. — М., 1999.- 49 с.

140. Тарусин Д.И., Румянцев А.Г., Есилевский Ю.М. и др. Дифференцированная тактика лечения варикоцеле у детей и подростков// Прил. к журналу «Андрология и генитальная хирургия». 2001/1. — 90-91

141. Тер-Аванесов Г.В. Андрологические аспекты бесплодного брака: Автореф. дис. . докт. мед. наук. Москва. - 2002- 45 с.

142. Тер-Аванесов Г.В. Диагностика и возможности терапии мужского бесплодия: Автореф. дис. . канд. мед. наук. Москва. — 1996 - 24 с.

143. Тер-Аванесов Г.В., Назаренко Т.А., Кулаков В.И. Фертильность мужчин в XXI веке //Андрология и генитальная хирургия. 2000. - №1. - С. 32.

144. Тер-Аванесов Г.В., Овсянникова Т.В., Кулаков В.И. Эндокринное бесплодие у мужчин // Пробл. репродукции. — 1997. № 4. - С. 30-37.

145. Тиктинский О. Л., Михайличенко В.В. Андрология. Спб.,1999. - 464с.

146. Тирси К.А. Типы венозной гемодинамики при левостороннем варикоцеле в развитии секреторного бесплодия: биологические аспекты, диагностика и лечение: Автореф. дис. . канд. мед. наук. Москва. - 2000 - 26 с.

147. Ткачев А.В., Илыохин Ю.А. и др. Качество эякулята при хроническом простатите// Материалы X Росс, съезда урологов. Москва, 2002, с.301-302.

148. Токсикометрия химических веществ, загрязняющих окружающую среду/ Под ред. А.А.Каспарова и И.В.Саноцкого. М., 1986. - 428 с.

149. Трудный диагноз в урологии/Под ред. Д.Л. Мак-Каллаха. М.: Медицина, 1997. -440с.

150. Тутельян В.А., Лашнева Л.В., Гаджиева З.М. Эффективность лигнина как защитного фактора при воздействии ПХБ // Вопр. мед. химии. 1995. — №2. - С.25-28.

151. Урология по Дональду Смиту. Под ред. Э.Танахо, Дж.Маканинча. Пер. с англ. М.,Практика, 2005. - 819с.

152. Фархутдинов P.P. Клинические аспекты применения метода регистрации хемилюминесценции крови//Тер. архив. — 1984. — Т. 56, № 8.-С. 150-153.

153. Фархутдинов Р. Р. Хемилюминесценция крови и мочи при типовых патологических процессах: Автореф. дис. . докт. мед. наук. Казань. -1988- 44 с.

154. Фархутдинов Р. Р., Бикмухаметова X. С., Фатихов Р. Г. Метод регистрации хемилюминесценции в клинической практике//Сов. медицина. -1986. №3. - С. 86- 89.

155. Фархутдинов P.P., Лиховских В.А. Хемилюминесцентные методы исследования свободно-радикального окисления в биологии и медицине.-Уфа, 1995.-92 с.

156. Фёдоров Л.А., Яблоков А.В. Пестициды токсический удар по биосфере.- М., Наука. 1999. - 461с.

157. Филиппов О.С. Бесплодный брак в Западной Сибири: Автореф. дис. . докт. мед. наук. Москва. - 1999- 34 с.

158. Хемилюминесцентные методы оценки функционального состояния животных: Методические рекомендации. — М.: Издательская группа «БДЦ-пресс», 2005. 40 с.

159. Хрипач Л.В. Оксидантный статус организма и его роль в чувствительности генома к повреждающим факторам окружающей среды: Автореф. дис. . докт. биол. наук. Москва. - 2003- 51 с.

160. Целух Ю.С. Научное обоснование медико-экономических стандартов и организационно-функциональной структуры оказания медицинской помощи пациентам с мужским бесплодием в условиях крупного города: Автореф. дис. . канд. мед. наук. Санкт-Петербург. - 24 с.

161. Чевари С., Андял Т., Панцел А. Инициирование перекисного окисления липидов в сыворотке крови in укго//Клин. лаб. диагностика. 1992. - № 11-12. - С. 34-37.

162. Черных В.Б., Курило Л.Ф., Полков В.A. Y хромосома, AZF-микроделеции и идиопатическое бесплодие у мужчин (обзор литературы). Пробл. репрод. - 2001. — 7. - 5. - с.47-58.

163. Шейко Л.Д., Мамина В.П., Балезин С.Л. Возможность использования бета-каротина в качестве лечебно-профилактического средства в репродуктивной токсикологии.//Пробл. репрод. 2001. - 6. - 7. - с.37-41

164. Шильман А.И. Влияние фторхинолонов на систему перекисного окисления липидов //Лечение бесплодия: нерешенные проблемы: Сбор, науч. трудов. Саратов, 2001г. - С. 151-152.

165. Шильман А.И., Блюмберг Б.И., Усатенко А.С. Фторхинолоны при лечении хронического уретрогенного простатита// Андрология и генитальная хирургия. Прил.: Тез. науч. тр. 2001. - С.115-116.

166. Шупегин В.В. Патогенетическое обоснование некоторых методов терапии мужской инфертильности: Автореф. дис. . канд. мед. наук. -Н.Новгород. 2003- 23 с.

167. Экстракорпоральное оплодотворение и его новые направления в лечении женского и мужского бесплодия (теоретические и практическиеподходы): Руководство для врачей//Под ред. В.И.Кулакова, Б.В.Леонова. -М., 2000.-782 с.

168. Юрченко Г.Г., Дунаевсая А.В., Крамар Ш.И. Влияние метода выделения подвижной фракции гамет из эякулята человека на их морфофункциональную сохранность поле криоконсервирования. — Проблемы криобиологии. — 2001. №2. - с.30-35.

169. Юфит С.С. Яды вокруг нас. Цикл лекций. Москва: Джеймс, 2001.

170. Яценко O.K. Патогенез хронического простатита в аспекте нарушения репродуктивной функции у мужчин: Автореф. дис. . докт. мед. наук. -Новосибирск. 1999- 51 с.

171. Acosta A.A., Khalifa Е., Oehninger S. Pure human follicle stimulating hormone has a role in the treatment of severe male factor infertility by assisted reproduction: Norfold's total experience//Hum. Reprod. 1992. - Vol. 7. — P. 1067-1072.

172. Adachi J., Mori Y., Matsui S. et al. Indirubin and Indigo Are Potent Aryl Hydrocarbon Receptor Ligands Present in Human Urine // J. Biol. Chem. -2001.-V. 276.-P. 31475-31478.

173. Agarwal A., Ikemoto I., Loughlin K.R. Effect of sperm washing on levels of reactive oxygen species in semen//Arch.Androl. 1994. - Vol.33, № 3. -P.157-162.

174. Agarwal A., Ikemoto I., Loughlin K.R. Relationship of sperm parameters with levels of reactive oxygen species in semen specimens/Л. Urol. 1994. -Vol.152, № 1 - P. 107-110.

175. Agarwal A., Ranganathan P., Kattal N. et al. Fertility after cancer: a prospective review of assisted reproductive outcome with banked semen specimens//Fertil. Steril. 2004. - Vol. 81 (2). - P. 342-8.

176. Aitken R.J. A free radical theory of mole infertility//Reprod. Fertil. 1994. -№6.-P. 19-23.

177. Aitken R.J. Free radicals, lipid peroxidation and sperm function// Reprod. Fertil. 1995. - Vol. 7. - P. 659-668.

178. Aitken R.J. The Amorous lecture: the human spermatozoon — a cell in crisis?//Reprod. Fertil. 1999. - Vol.115, № 1. - P.l-7.

179. Aitken R.J., Fisher H. Reactive oxygen species generation and human spermatozoa: the balance of benefit and risk//BioEssays. 1994. — Vol. 16. -P. 259-267.

180. Aitken R.J., Harkiss, Knox W. et al. A novel signal transduction cascade in capacitating human spermatozoa characterised by a redox-regulated, cAMP-mediated induction of tyrosine phosphorylation/Л. Cell. Sci. 1998. - Vol. Ill (Pt 5). - P. 645-656.

181. Aitken R.J., Irvine D.S., Wu F.C. Prospective analysis of sperm-oocyte fusion and reactive oxygen species generation as criteria for the diagnosis of infertility//Am. J. Obstet. Gynecol. 1991. - Vol.164, № 2. - P.542-551.

182. Aitken R.J., Sawyer D. The human spermatozoon not waving but drowning// Adv. Exp. Med. Biol.-2003.-Vol. 518.-P. 85-98.

183. Aitken R.J., West K.M. Analysis of the relationship between reactive oxygen species production and leukocyte infiltration in fractions of human semen separated on Percoll gradients//International J. Androl. 1990. - Vol.13 - P. 433-451.

184. Aitken R.J., West K.M., Buckingham D. Leucocytes infiltration into the human ejaculate and its association with semen quality, oxidative stress and sperm function //J. Androl. 1994. - Vol.15 - P. 343-352.

185. Акте O., Cnattingius S., Bergstrom R., Kvist U. Human fertility does not decline: evidence from Sweden/ZFertil. Steril. 1999. - Vol. 71. - P. 10661069

186. Alvarez J.G., Storey B.T. Evidence that membrane stress contributes more than lipid peroxidation to sublethal cryo-damage in cryopreserved human sperm: glycerol and other polyols as sole cryoprotectant//J. Androl. 1993. - Vol. 14. - P. 199-208

187. Andersen A'., Jensen Т., Carlsen E. High Frequency of Sub-optimal Semen Quality in an Unselected Population of Young Men //Hum. Reprod. 2000. -Vol. 15. - P. 366-372.

188. Anger J.T., Gilbert B.R., Goldstein M. Cryopreservation of sperm: indications, methods and results// J. Urol. 2003. - Vol. 170 (4 Pt 1) - P. 1079-1084.

189. Arienti G., Carlini E., Saccardi C. et al. Interaction between prostasomes and leucocytes//Biochim. Biophys. Acta. 1998. - № 16. - P. 36-40.

190. Ashida S., Okazaki S. et al. Chemiluminescent method for the evaluation of antioxidant activity using lipid hydroperoxideluminol//Anal. Sci. 1991. -Vol.7, N l.-P. 93-96.

191. Auger J., Eustache F., Ducot B. et al. Quality control for the evaluation of inter and intraindividual variability in routine semen analysis: results of an international work-shop//Hum. Reprod. — 1999. — Vol.14, № 1. P.64.

192. Auger J., Kunstmann J.M., Czyglik F. et al. Decline in semen quality among fertile men in Paris during the past 20 years//N. Engl. J. Med. 1995. - Vol. 332.-P. 281-285.

193. Baker H.W., Burger H.G., de Kretser D.M. et al. Testicular vein ligation and' fertility in men with>varicoceles//B.M.J. 1985. - Vol. 291. - P. 1678-1680.

194. Barratt C.L.R., Cooke I.D. Sperm loss in the urine of sexually rested men// Int f Androl. 1988. - Vol. 11.- P.201-207.

195. Barratt C.L.R., Tomlinson M.J., Cooke I.D. Prognostic significance of computerized motility analysis for in vivo fertility//Fertil. Steril. 1993. — Vol. 60. - P. 520-525

196. Barroso G., Morshedi M.,, Oehninger S. Analysis of DNA fragmentation, plasma membrane translocation of phosphatidylserine and oxidative stress in human spermatozoa//Hum. Reprod. 2000. - Vol. 15, № 6 - P. 1338-1344.

197. Bast A., Haenen G., Doelman C.J.A. Oxidants and antioxidants: State of the art//Amer. J.Med. 1991. - Vol. 91. - Suppl. 3. - P.2-13.

198. Bedford J.M. Sperm capacitation and fertilization in mammals//Biol. Reprod. -1970.-Vol. 2.-P. 128-158.

199. Belen-Herrero M., Chatterjee S., Lefievre L. et al. Nitric oxide interacts with the cAMP pathway to modulate capacitation of human spermatozoa// Free Radic. Biol. Med. 2000. - Vol. 29(6). - P. 522-536.

200. Belker A.M., Thomas A.J., Fuchs E.F. Results of 1469 microsurgical vasectomy reversals by the Vasovasostomy Study Group// J. Urol. 1991. — Vol. 145.-P. 505-511.

201. Benoff S., Cooper G.W., Paine T. et al. Numerical dose-compensated in vitro fertilization inseminations yield high fertilization and pregnancy rates// Fertil.Steril. 1999. -Vol. 71. - P. 1019-102.

202. Ben-Yosef D., Yogel L., Hauser R. et al. Testicular sperm retrieval and cryopreservation prior to initiating ovarian stimulation as the first line approach in patients with non-obstructive azoospermia//Hum. Reprod. — 1999. -Vol. 14.-P. 1794—1801.

203. Berthon G. Is copper pro- or anti-inflammatory? A reconciling view and a novel approach for the use of copper in the control of inflammation//Agents and Actions. 1993. - Vol.39. - P.210-217.

204. Bofinger M.K., Needham D.F., Saldana L.R. et al. 45,X/46,X,r(Y) karyotype transmitted by father to son after intracytoplasmic sperm injection for oligospermia: A case report// J. Reprod. Med 1999. - Vol.44, № 7 - P. 645648.

205. Bonde J., Storgaard L. How work-place conditions, environmental toxicants and lifestyle affect male reproductive function// Int. J. Androl. 2002. - 25. — P.262-268.

206. Bonde J.P.E., Ernst E., Jensen Т.К. et al. Relation between semen quality and fertility: a population-based study of 430 first-pregnancy planners//Lancet. -1998.-Vol. 352.-P. 1172-1177.

207. Bonnestaourel D., Guerrin M.C., Torreilles J. Is malonaldehyde a valuable indicator of lipid peroxidation/ZBiochem. Pharma. 1992. - Vol. 44. - P.985-988.

208. Borini A., Sereni E., Bonu, Flamigni C. Freezing a few testicular spermatozoa retrieved by TESA//Mol. Cell. Endocrinol. 2000. - Vol. 169 (1-2). - P. 27-32.

209. Bouamama N., Briot P., Testart J. Comparison of two methods of cryoconservation of sperm when in very small numbers//Gynecol. Obstet. Fertil.-2003. Vol. 31 (2).- P. 132-135.

210. Bourne H., Liu O., Clarke G.N., Baker G.H.W. Normal fertilization and embryo development by intracytoplasmic sperm injection of round-headed acrosomeless sperm//Fertil. Steril. 1995. - Vol. 63. - P. 1329-1332.

211. Brake A., Krause W. Decreasing quality of semen// Br. Med. J. 1992. - Vol. 305.-P. 1498.

212. Bredkjaer H.E., Grudzinskas J.G. Cryobiology in human assisted reproductive technology. Would Hippocrates approve?// Early Pregnancy. 2001. — Vol. 5.(3).-P. 211-213.

213. Bruckert E. How frequent is unintentional childlessness in Germany?// J. AndroL- 1991.-Vol. 23. P. 245-250.

214. Buhr M.M., Fiser P., Bailey J.L., Curtis E.F. Cryopreservation in different concentrations of glycerol alters boar sperm and their membranes//J. Androl. — 2001. Vol. 22. - 6. - P. 961-969.

215. Bujan L., Mansat A., Pontonnier F., Mieusset R. Time series analysis of sperm concentration in fertile men in Toulouse, France between 1977 and 1992// Br. Med. J. 1996. - Vol. 312. - P. 471 -472.

216. Byrd W, Bradshaw K, Carr B. et al. A prospective randomized study of pregnancy rates following intrauterine and intracervical insemination using frozen donor sperm//Fertil. Steril. 1990. - Vol. 53. - P. 521-527.

217. Cakan M., Altug U. Indication of spermatogenesis by inguinal varicocele repair in azoospermic men// Arch. Androl. 2004. — Vol. 503. - P. 145-150.

218. Cao G., Alessio H.M., Culter R.G. Oxygen-radical absorbance capacity assay for antioxidants//Free Radical Biol, and Med. 1993. - Vol. 14. - P.303-311.

219. Carani С. Granata A.R., De Rosa M. et al. The effect of chronic treatment with GH on gonadal function in men with isolated GH deficiency//Eur. J. Endocrinol. 1999. - Vol. 140. - P. 224-230.

220. Carlsen E., Giwermann A., Keiding N. et al. Evidence of decreasing quality of semen during the past 50 years//Br. Med. J: 1992. - Vol. 305. - P.609-613.

221. Carlsen E., Giwermann A., Skakkabaek N.E. et al. Decreasing quality of semen//Br. Med. J. 1993. - Vol. 306. - P.461.

222. Casper R.F., Meriano J.S., Jarvi K.A. et al. The hypoosmotic swelling test for selection of viable sperm for intracytoplasmic sperm injection in men with complete asthenozoospermia/ZFertil. Steril. 1996. - Vol. 65. - P. 972-976.

223. Catt J.W., Ryan J.P., Pike I.L. et al. Successful pregnancy after fertilization using intracytoplasmic sperm injection of sperm lacking acrosomes// Aust. NZ J. Obstet. Gynecol. 1996. - Vol. 36. - P. 61-62.

224. Chatterjee S., de Lamirande E., Gagnon C. Cryopreservation alters membrane sulfhydryl status of bull spermatozoa: protection by oxidized glutathione//Mol. Reprod. Dev. 2001. - Vol. 60 (4). - P. 498-506.

225. Chehval M.J., Purcel R.N. Deterioration of semen parameters over time in men with untreated varicocele: evidence of progressive testicular damage// Fertil. Steril. 1992. - Vol. 57. - P. 174.

226. Chen C.H., Lee S.S., Chen D.S. et al. Apoptosis and kinematics of ejaculated spermatozoa in patients with varicocele// J. Androl. — 2004. Vol. 253. - P. 348-353.

227. Clark R., Sherins R.J. Treatment of men with idiopathic oligozoospermic infertility using the aromatase inhibitor testolactone. Results of a double-blinded, randomized, placebo-controlled trial with crossover//J. Androl. — 1989.-Vol. 10.-P. 240-347.

228. Clements S., Cooke I.D., Barratt C.L.R. Implementing comprehensive quality control in the andrology laboratory// Hum. Reprod. 1995. - Vol. 10. - P. 2096-2106.

229. Colborn Т., Dumanoski D., Myers J. Our Stolen Future: Are We Threatening Our Fertility, Intelligence, and Survival? A Scientific Detective Story. NY: Dutton; 1996.

230. Collins J.A. Wrixon W., Janes L.B. et al. Treatment-independent pregnancy among infertile couples//N. Engl. J. Med. 1983. - Vol. 309. - P. 1201-1206.

231. Collins J.A., Burrows E.A., Willian A.R. The prognosis for live birth among untreated infertile couples// Fertil. Steril. 1995. - Vol. 64. - P. 22-28.

232. Comhaire F., Van Waeleghem K., De Clercq N. et al. Declining sperm quality in European men//Andrologia. 1996. - Vol. 28. - P.300-301.

233. Comhaire F.H., Dhooge W., Mahmoud A., Depuydt C. Een strategie voor de preventie van mannelijke infertiliteit// Verh. Kon. acad. geneesc. Belg. 1999. - Vol. 61. - №3. - P. 441 -452.

234. Conte G., Milardi D., Demartinis L., Mancini A. Reactive oxygen species in male infertility: Review of literature and personal observations// Panminerva med.- 1999. -Vol. 41.-№>1.-P. 45-53.

235. Crha I., Ventruba P., Petrenko M. et al. Cryopreservation of sperm before neoplasm therapy~7 years' experience//Ceska Gynekol. — 2002. Vol. 67 (6). -P. 324-328.

236. Crosignani P.G., Walters P.E., Soliani A. The ESHRE multi-centre trial on the treatment of unexplained infertility: a preliminary report// Hum. Reprod. — 1991.- Vol. 6. P. 953-958.

237. Cooper T.G. The human epididymis is it necessary?// Int. J. Androl. — 1993. -Vol. 16. - P.245-250.

238. Cooper T.G. Functions of the human epididymis. In: Hamamah S., Mieusset R., Dacheux J.L. (eds) Frontiers in Endocrinology. Epididymis: role and importance in male infertility treatment. Ares Serono Symposia, Rome, 1995. P. 1-12.

239. Cooper T.G., Atkinson A.D., Nieschlag E. Experience with external quality control in spermatology// Hum. Reprod. 1999. - Vol. 14. - P. 765-769.

240. Cooper T.G., Neuwinger J., Bahrs S., Nieschlag E. Internal quality control of semen analysis// Fertil. Steril. 1992. - Vol. 58. - P. 172-178.

241. Dawson E.B., Harris W.A., Rankin W.E. et al. Effect of ascorbic acid on male fertility// Ann. NY Acad. Sei. 1987. - Vol. 498. - P. 312-323.

242. Dawson E.B., Harris W.A., Teter M.C., Powell L.C. Effect of ascorbic acid supplementation on the sperm quality of smokers//Fertil. Steril. 1992 - Vol. 58. - P. 1034-1039.

243. De Kretser D.M. Are sperm counts really falling?//Reprod. Fertil. Dev. 1998. -Vol. 10.-P. 93-95.

244. De Kretser D.M., Huidobro C., Southwick G.J., Temple-Smith P.D. The role of the epididymis in human infertility// J. Reprod. Fertil. 1998. - Vol.53. -P.271-275.

245. De Lamirande E., Gagnon C. A positive role for the superoxide anion in triggering hyperactivation and capacitation of human spermatozoa// Int. J. Androl. 1993. - Vol. 16(1) - P. 21-25.

246. De Lamirande E., Gagnon C. Impact of reactive oxygen species on spermatozoa: a balancing act between beneficial and detrimental effects//Hum. Reprod.-1995.-Vol. 10, № l.-P. 15-21.

247. De Lamirande E., Harakat A., Gagnon C. Human sperm capacitation induced by biological fluids and progesterone, but not by NADH or NADPH, isassociated with the production of superoxide anion// J Androl. — 1998. Vol. 19(2).-P. 215-225.

248. De Lamirande E., Jiang H., Zini A. et al. Reactive oxygen species and sperm physiology//Rev Reprod. 1997. - Vol. 2(1). - P. 48-54.

249. De Lamirande E., Gagnon C. The dark and bright sides of reactive oxygen species on sperm function. In: Gagnon C. (ed) The male gamete: from basic science to clinical application. Cache River Press, Vienna, 1999. P. 455-467

250. Dirnfeld M., Bider D., Koifman M. et al. Shortened exposure of oocytes to spermatozoa improves in-vitro fertilization outcome: aprospective, randomized, controlled study// Hum. Reprod. 1999. - Vol. 14. - P. 25622564.

251. Dodds L., Marrett L.D., Tomkins O.J. et al. Case-control study of congenital anomalies in children of cancer patients//Br. Med. J. 1993. - Vol. 307. - P. 164-168.

252. Dohle G.R. Indications for scrotal ultrasound in infertile men//Andrologia. — 2001. Vol. 33. - № 5. - P. 313-314.

253. Dohle G.R. Inflammatory associated obstructions of the male reproductive tract// Andrologia. - 2003. - Vol. 35. - № 5. - P. 321-324.

254. Donnelly E.T., Mcclure N., Lewis Sh. E. M. Glutathione and hypotaurine in vitro: effects on human sperm motility, DNA integrity and production of reactive oxygen species// Mutagenesis. 2000. - Vol. 15, №1. - P. 61-68.

255. Donnelly E.T., Mcclure N., Lewis Sh. E. M. The effect of ascorbate and -tocopherol supplementation in vitro on DNA integrity and hydrogen peroxide-induced DNA damage in human spermatozoa// Mutagenesis. 1999. - Vol. 14, №5.-P. 505-512.

256. Dougherty R.C., Whitaker M.J., Tang S.Y. et al. In.: Environ. Health chemistry the chemistry of Environ, agents as potential human hazards. Ed. Mc Kinney. J.D. Ann. Arbor. Science Publish. 1980, p. 263-278.

257. Draper N.N., Squires E.J., Mahmoodi H. et al. A comparative evalution of thiobarbituric acid for the determination of malondialdehyde in biological materials//Free Radical Biol, and Med. 1993. - Vol.15. - P.353-364.

258. De Geyter Ch., De Geyter M., Schneider H., Nieschlag E. Interdependent influence of follicular fluid oestradiol concentration and motility characteristics of spermatozoa on in-vitro fertilization results//Hum. Reprod. 1992. - Vol. 7. - P. 664-670.

259. Devroey P:, Liu J., Tournaye H. et al. Normal fertilization of human oocytes after testicular sperm extraction and intracytoplasmic sperm injection//Fertil. Steril. 1994. - Vol. 62. - P. 639-641.

260. Edwards R.G. Test-tube babies, 1981// Nature. 1981. - Vol. 293. - P. 253256.

261. Eggert-Kruse W., Schwarz H., Rohr G. et al. Sperm morphology assessment using strict criteria and male fertility under in-vivo conditions of conception// Hum.Reprod.-1996.-Vol. 11.- P. 139-146.

262. Eliasson R., Hellinga F., Lubcke F. et al. Empfehlungen zur Nomenklatur in der Andrologie// Androl. 1970. - 2. - 1257.

263. El-Segini Y., Schill W.B., Kohn F.M. et al. Assessment of sperm functions in infertile patients with varicoceles// Andrologia, 2002. Vol. 345. - P. 291295.

264. EPA Method 1613. Tetra-through octa-chlorinated dioxins and furans by isotope dilution HRGC/HRMC. 1994.

265. Esfandiari N., Rouzrokh A., Saremi A.T. Effects of cryopreservation on penetration ability of human spermatozoa into bovine cervical mucus//Arch. Androl. 2000. - Vol. 45 (3). - P. 233-238.

266. Evangelista-de-Duffand A., Fabra-de-Perrety A., Castro M. et al. Effects of 2,4-dichlorophenoxyacetic acid butil ester on chick liver / / Arch. Environ. Contam. Toxicol. 1993. - V.25, N 2. - P. 204-211.

267. Ezech U.I.O. et al. Beyond the clinical classification of azoospermia// Hum.Reprod. 2000. - Vol. 15 (11). - P. 2356-2359.

268. Falasca G.F., Ramachandrula A., Kelley K.A. et al. Superoxide anion production and phagocytosis of crystals by cultured endothelial cells//Arthritis and Rheum.-1993. Vol.36. - P. 105-116.

269. Farrow S. Falling sperm quality: fact or fiction?//Br. Med. J. 1994. - Vol. 309. - P. 1-2.

270. Felberbaum R., Diedrich K. Rationelle Therapie bei unterfulltem Kinderwunsch aus gynekologischer Sicht// Focus MUL. 1998. - Vol. 15. -№4.-P. 232-236.

271. Figa-Talamanca I., Traina M., Urbani E. Occupational, exposures to metals, solvents and pesticides: recent evidence on male reproductive effects and biological markers// Occup. Med. -2001. 51. -P.174-188.

272. Fisch H., Goluboff E.T. Geographie variations in sperm counts: a potential cause of bias in studies of semen quality//Fertil. Steril. 1996. - Vol. 65. - P. Ю44-1046.

273. Fisch H., Goluboff E.T., Olson J.H. et al. Semen analyses in 1283 men from the United States over a 25-year period: no decline inequality// Fertil. Steril. -1996. Vol. 65. - P. 1009-1014.

274. Fischer R., Baukloh V., Naether O.G.J. et al. Pregnancy after intracytoplasmic sperm injection of spermatozoa extracted from frozen-thawed testicular biopsy// Hum. Reprod. 1996. - Vol. 11. - P. 2197-2199.

275. Fishel S., Green S., Bishop M. et al. Pregnancy after intracytoplasmic injection of spermatid//Lancet. 1995. - Vol. 345. - P. 1641-1642.

276. Ford W.C. Male infertility: tales of progress and frustration// Hum. Fertil. (Camb). 2002. - Vol. 5(Suppl 1). - P. 53-60.

277. Foresta С., Moro E., Ferlin A. et al. Prognostic value of Y deletion analysis// Hum.Rep.-2001.-Vol. 16.-8.-P. 1543-1547.

278. Fraga C.G., Motchnik P.A., Shigenaga M.K. et al. Ascorbic acid protects against endogenous > oxidative DNA damage in human sperm//Proc. Natl. Acad. Sei USA.-1991.-Vol. 88.-P. 11003-11006.

279. Fraga C.G., Motchnik P.A., Wyrobek A.J. et al. Smoking and low antioxidant levels increase oxidative damage to sperm DNA//Mutat. Res. 1996. — Vol. 351.-P. 199-203.

280. Fraser L.R., Harison A.P., Herod I.E. Characterization of the decapacitation factor assouciated with epididymal mouse spermatozoa//J. Reprod. Fert. -1990. Vol. 89(1). - P. 135-148.

281. Gagnon C., Iwasaki A., Lamirande E.D. Reactive oxygen species and human spermatozoa//Annals of the New York Academy of Sciences. 1991. — Vol. 637.-P. 436-444.

282. Gavella M., Lipovac V. In vitro effect of zinc on oxidative changes in human semen//J. Androl. 1998. - Vol.30, № 6. - P.317-323.

283. Gerris J., Van Roy en E., Mangel-Schots K. et al. Pregnancy after * intracytoplasmic sperm injection of metaphase II oocytes with spermatozoafrom a men with complete retrograde ejaculation. Hum. Reprod. 1994. -Vol. 9.-P. 1293-1296.

284. Gil-Guzman E., Ollero M., Lopez M.C., et al. Differential production of reactive oxygen species by subsets of human spermatozoa at different stages of maturation// Hum. Reprod. 2001. - Vol. 16, № 9. - P. 1922-1930.

285. Glazier D.B., Marmar J.L., Mayer E. et al. The fate of cryopreserved sperm acquired during vasectomy reversals// J. Urol. 1999. - Vol. 161 (2). - P. 463466.

286. Glezerman M., Bernstein Zakut C. et al. Polyzoospermia: a definite pathologic entity// Fertil. Steril. 1982. - Vol. 38. - P. 605-608.

287. Glockner D., Gaevert K., Kleinstein J. Declining sperm quality in men of childless couples//J. Androl. 1998. - Vol.30, № 1. - P.55.

288. Gorga F., Galdiero M., Buommino E., Galdiero E. Porins and lipopolysaccharide induce apoptosis in human spermatozoa// Clin, and Diagn. Lab. Immunol.-2001.-Vol. 8, № l.-P. 206-208.

289. Griveau J.F., Le Lannou D. Reactive oxygen species and human spermatozoa: physiology and pathology//International J. of Androl. — 1997. Vol.20 - P. 6169.

290. Hacker-Klom U.B., Gohde W., Nieschlag E., Behre H.M. DNA flow cytometry of human semen// Hum. Reprod. 1999. - Vol. 14. - P. 2506-2512.

291. Hallak J., Kolettis P.N., Sekhon V.S. et al. Sperm cryopreservation in patients with testicular cancer// Urology. 1999. - Vol. 54 (5). - P. 894-899.

292. Hallak J., Kolettis PN., Sekhon VS., et al. Cryopreservation of sperm from patients with leukemia: is it worth the effort?//Cancer. 1999. - Vol. 85 (9). -P. 1973-1978.

293. Hammaden M.E., Ascari A., Rosenbaum P., Schmidt W. The detrimental effect of a freeze-thawing procedure on chromatin structure stability, morphology and membrane integrity of human spermatozoa// Reprod. Domest. Anim.- 1999.-Vol. 34.-№l.-P. 26.

294. Hammerstedt R.H., Graham J.K., Nolan J.P. Cryopreservation of mammalian sperm: what we ask them to survive//J. Androl. 1990. - Vol. 11. - P. 73-88.

295. Handelsman D.J. Sperm output of healthy men in Australia: magnitude of bias due to self-selected volunteers//Hum. Reprod. 1997. - Vol. 12. - P. 27012705.

296. Healy D.L., Trounson A.O., Andersen A.N. Female Infertility: causes and treatment. Lancet. 1994. - Vol. 343. - P. 1539-1544.

297. Henkel R., Hanschke A., Miska W. et al. Impairment of sperm motilty by inflammatory parameters// Reprod. Domest. Anim. 1999. - Vol.34, № 1. -P.26.

298. Henkel R., Ichikawa Т., Sanchez R. Differentiation of ejaculates showing reactive oxygen species production by spermatozoa or leukocytes//Andrologia.- 1997. Vol.29, № 6. - P.295 - 301.

299. Herrmann Т., Thiede G., Trott K.R., Voigtmann L. Offsprings of preconceptionally irradiated parents. Final report of a longitudinal study 19761994 and recommendations for patients' advisory//Strahlenther Onkol. 2004.- Vol. 180(1).-P. 21-30.

300. Hirsch A.V., Dean N.L., Mohan P.J. et al. Natural spermatocoeles in irreversible obstructive azoospermia-reservoirs of viable spermatozoa for assisted conception// Hum. Reprod. 1996. - Vol. 11. - P. 1919-1922.

301. Hirsh A., Montgomery J., Mohan P. et al. Reproduction by testicular sperm with standard IVF techniques//Lancet. 1993. - Vol. 2. - P. 1237-1238.

302. Hoegberg W., Akerman Sane. Reproductive pattern among women in 19-th century Sweden//J. Biosoc. SCI 1990. - Vol.22, №1. - P.l3-18.

303. Hoffman N., Hilscher B. Use of aniline blue to assess chromatin condensation in morphologically normal spermatozoa in normal and infertile men//Hum. Reprod. 1991. - Vol. 6. - P. 979-982.

304. Holmes R.P., Goodman H.O., Shihabi Z.K. et al. The taurine and hypotaurine content of human semen//J. Androl. 1992. - Vol.13, № 3. -P.289-292.

305. Hovatta O., Venalainen E.R., Kuusimaki L. et al. Aluminium, lead and cadmium concentrations in seminal plasma and spermatozoa, and semen quality in Finnish men// Hum. Reprod. 1998. - Vol. 13(1). - P. 115-119.

306. Hsieh Y.Y., Tsai H.D., Chang C.C., Lo H.Y. Sperm cryopreservation with empty human or mouse zona pellucidae. A comparison//!. Reprod. Med. — 2000. Vol. 45 (5). - P. 383-386.

307. Hull M.G. Infertility treatment: relative effectiveness of conventional and assisted conception methods// Hum. Reprod. 1992. - Vol. 7. - P. 785-796.

308. Hull M.G., Glazener C.M., Kelly N.J. et.al. Population study of causes, treatment and outcome of infertility// Br.Med.J. 1985. - Vol. 291. - P. 16931697.

309. Herrero M.B., de Lamirande E., Gagnon C. Nitric oxide regulates human sperm capacitation and protein-tyrosine phosphorylation in vitro// Biol. Reprod. -1999. Vol. 61 (3). - P. 575-581.

310. Imai H., Suzuki K., Ishizaka K. et al. Failure of the Expression of Phospholipid Hydroperoxide Glutathione Peroxidase in the Spermatozoa of Human Infertile Males// Biology of Reproduction 2001. - Vol.64 - P.674-683.

311. Irvine S. Is human testis still an organ at risk?//Br. Med. J. 1996. - Vol. 312.- P.1557-1558.

312. Irvine S., Cawood E., Richardson D. et al. Evidence of deteriorating semen quality in the United Kingdom: birth cohort study in Scotland over 11 years//Br. Med. J. 1996. - Vol. 312. - P.467-470.

313. Iwasaki A., Gagnon C. Formation of reactive oxygen species in spermatozoa of infertile patients/ZFertil. and Steril. 1992. - Vol. 2. - P. 409-416.

314. James W. The sex ratio of offspring sired by men exposed to wood preservatives contaminated by dioxin// Scand. J. Work, Environm. and Health.- 1997. V23,N l.-P. 69.

315. Jequier A.M., Holmes R.P. Primary testicular diseas presenting as azoospermia or oligospermia in an infertility clinic//Br.J.Urol. 1993. - Vol. 56. - P. 422428.

316. Ji B.T. Shu X.O., Linet M.S. et al. Paternal cigarette smoking and the risk of childhood cancer among offspring of nonsmoking mothers// J. Natl. Cancer. Inst. 1997. - Vol. 89. - P. 238-244.

317. Johnsen N., Johnsen I., Tauber R. Semen analysis after treatment of varicocele by antegrade scrotal sclerotherapy//Int. J. Androl. 1997. - Vol.20. - 1. -P.96.

318. Jones H.W., Toner J.P. The infertile couple// N. Engl. J. Med. 1993. - Vol. 329.-P. 1710-1715.

319. Jozwik M., Jozwik M., Kuczynski W. et al. Nonenzymatic antioxidant activity of human seminal plasma//Fertil. Steril. 1997.-Vol.68, № 1. -P.154-157.

320. Kamischke A., Nieschlag E. Analysis of medical treatment of male infertility//Hum. Reprod. 1999. - Vol. 14. - Suppl 1. - P. 1-23.

321. Katkov Igor I., Lulat Ayub G.M.I. Do conventional CASA-parameters reflect recovery of kinematics after freezing?: "CASA paradox" in the analysis of recovery of spermatozoa after cryopreservation // Cryo-Lett 2000 - Vol. 21, № 3.-P. 141-148.

322. Keiding N., Giwermann A., Carlsen E. et al. Falling sperm quality// Br. Med. J. 1994.-Vol. 309. -P.131.

323. Kemal Duru N., Morshedi M., Oehninger S. Effects of hydrogen peroxide on DNA and plasma membrane integrity of human spermatozoa//Fertil Steril. — 2000. Vol. 74(6). - P. 1200-1207.

324. Kent-First M.G., Kol S., Muallem A. et al. The incidence and possible relevence of Y-linked microdeletions in babies born after ICSI and their infertile father// Mol.Hum.Reprod. 1996. - Vol. 12. - P. 943-950.

325. Kessopoulou E., Powers H.J., Sharma K.K. et al. A double blind randomized placebo cross-over controlled trial using the antioxidant vitamin E to treat reactive oxygen species associated male infertility/ZFertil. Steril. 1995. — Vol. 64.-P. 825-831.

326. Kim J.G., Parthasarathy S. Oxidation and the spermatozoa. Seminars in Reproductive Endocrinology. 1998. - Vol. 16(4). - P. 235-239.

327. Kirchhoff C. (1995) Molecular biology of sperm maturation in the human epididymis//Reprod. Med. Rev. 1995. - Vol. 4. - P. 121-139.

328. Kirchhoff C. Gene expression in the epididymis// Int. Rev. Cytol. 1999. -Vol. 188. - P.133-202.

329. Kopeika J., Kopeika E., Zhang T. et al. Detrimental effects of cryopreservation of loach (Misgurnus fossilis) sperm on subsequent embryo development are reversed by incubating fertilised eggs in caffeine// Cryobiology. 2003. - Vol. 46(1). - P. 43-52.

330. Kostiner D.R., Turek P.J., Reijo R.A. Male infertility: analysis of the markers and genes on the human Ychromosome// Hum. Reprod. 1998. - Vol. 13. - P. 3032-3038.

331. Kovalski N., de Lamirande E., Gagnon C. Reactive oxigene species generated by human neutrophils inhibit sperm motility: protective effect of seminal plasma scavengers//Fertil. Steril. 1992. - Vol.31. -P.809-816.

332. Kriska L.J. Chemiluminescence and bioluminescence//Anal. Chem. 1993. -Vol.65. - P.460-462.

333. Kruger T.F., Acosta A.A., Simmons K.F. et al. Predictive value of abnormal sperm morphology in in vitro fertilization. //Fertil. Steril. 1988. - Vol. 49. -P. 112-117.

334. Kruger T.F., Dutoit T.C., Franken D.R. et al. Sperm morphology: assessing the agreement between the manual method (strict criteria) and the sperm morphology analyzer IVOS//Fertil. Steril. 1995. - Vol. 63. - P. 134-141.

335. Kuznlar J., Sajewics W., Kopec W. et al. Chemiluminescence of neutrophils in patients with glomerulonephritis treated with methylprednisolone// Int.Urol.Nephrol. 1991. - Vol.23. - № 5. - P. 527-534.

336. Labbe C., Martoriati A., Devaux A., Maisse G. Effect of sperm cryopreservation on sperm DNA stability and progeny development in rainbow trout//Mol. Reprod. Dev. 2001. - Vol. 60 (3). - P. 397-404.

337. Lahdetie J. Occupation- and exposure-related studies on human sperm//J. Occupat. Environ. Med. 1995. - Vol. 37. - P. 922-930.

338. Lahn B.T., Page D. Functional coherence of the human Y chromosome// Science. 1998. - Vol. 278. - P. 675-680.

339. Lamb J.C., Chapin R.E. Testicular and germ cell toxicity: in vitro approaches//Reprod. Toxicol. 1993. - Vol. 7, № 1. - P. 17-22.

340. Lanzendorf S., Oehninger S., Scott R. et al. Penetration of human spermatozoa through the zona pellucida of nonviable human oocytes//J. Soc. Gynecol. Invest. 1994. -№ 1. - P. 69-73.1. О I

341. Ledda A. Vascular Andrology. — Berlin, Springer-Verlag, Heidelberg, New-York, 1996.- 149p.

342. Leeuwen R., Younes M. WHO revises the tolerable daily intake for dioxins //Organohal. сотр. 1998. - V. 38. - P. 295-298.

343. Lenzi A., Culasso F., Gandini L. et al. Placebo-controlled, double-blind, crossover trial of glutathione therapy in male infertility//Hum. Reprod. 1993 — Vol. 8.-P. 1657-1662.

344. Lerchl A., Keck C., Spiteri-Grech J., Nieschlag E. Diurnal variations in scrotal temperature of normal men and patients with varicocele before and after treatment// Int. J. Androl. 1993. - Vol. 16. - P. 195-200.

345. Lerchl A., Nieschlag E. Decreasing sperm counts? A critical (re)view// Exp. Clin. Endocrinol. Diabetes. 1996. - Vol. 104. - P. 301-307.

346. Leridon H., Spira A. Problems in measuring the effectiveness of infertility therapy// Fertil. Steril. 1984. - Vol. 41. - P. 580-586.

347. Lewis S., Boyle P., McKinney K. et al. Total antioxidant capacity of seminal plasma is different in fertile and infertile men// Fertil. Steril. 1995. - Vol.64, -P.868-870.

348. Lewis S.E., Sterling E.S., Young I.S. et al. Comparison of individual antioxidants of sperm and seminal plasma in fertile and infertile men//Fertil. Steril. 1997.-Vol.67, № 1.-P. 142-147.

349. Lin Y.M., Huang W.J., Lin J.S., Kuo P.L. Progressive depletion of germ cells in a man with nonmosaic Klinefelter's syndrome: optimal time for sperm recovery// Urology. 2004. - Vol. 63 (2). - P. 380-381.

350. Lindsay В., Medes G. Histological changes in the testis of the guinea-pig during scurvy and inanition//Am. J. Anat. 1926. - Vol. 37. - P. 213-230.

351. Liu D., Baker H.W.G. Defective sperm-zona> pellucida interaction: a major cause of failure of fertilization in clinical in-vitro fertilization//Hum. Reprod. — 2000. Vol. 15, № 3. - P. 702-708.

352. Liu D., Baker H.W.G. Tests of human sperm function and fertilisation in vitro//Fertil. Steril. 1992. - Vol. 58. -P.465-483.

353. Liu J., Nagy Z., Tounaye H. et al. Successful fertilization and establishment of pregnancies after intracytoplasmic sperm injection in patients with globozoospermia// Hum. Reprod. 1995. -Vol. 10. -P. 626-629.

354. Liu J., Tsai Y-L., Katz E. et al. High fertilization rate obtained after intracytoplasmic sperm injection with 100% nonmotile spermatozoa selected by using a simple modified hypo-osmotic swelling test// Fertil. Steril. — 1997. -Vol. 68.-P. 373-375.

355. Lundin K., Sjogren A., Nilsson L., Hamberger L. Fertilization and pregnancy after intracytoplasmic microinjection of acrosomeless spermatozoa// Fertil. Steril. 1994. -Vol. 62. - P. 1266-1267.

356. Macomber D., Sanders B. The spermatozoa count. Its value in the diagnosis, prognosis, and treatment of sterility//N. Engl. J.Med. 1929. -Vol. 200. - P. 981-990.

357. Madgar L, Weissenberg R., Lunenfeld B. et al. Controlled trial of high spermatic vein ligation for varicocele in infertile men// Fertil. Steril. — 1995. — Vol. 63.-P. 120-124.

358. Man'kovska I.M., Serebrovs'ka Z.O. The role of oxygen radicals in the physiology and pathology of human sperm// Fiziol. Zhrn. 1998. - Vol. 44(5-6). - P. 118-125.

359. Marquardt J., Heymer J., Heinz H. et al. Monitoring of effects induced by recombinant equine interferon-beta 1 in whole blood and separated fractions of peripheral blood of horses//Zentralbl. Veterinarmed. B. 1992. - Vol.5. -P.327-336.

360. Marshburn P.B., Sloan C.S., Hammond M.G. Semen quality and association with coffee drinking, cigarette smoking, and ethanol consumption// Fertil. Steril. 1989.-Vol. 52.-P. 162-165.

361. Mathers C., Sadana R., Salomon J. et al. Healthy Life Expectancy in 191 Countries //Lancet. 2001. - Vol. 357. - P. 1685-1697.

362. Matson P.L. External quality control assessment for semen analysis and sperm antibody detection: results of a pilot scheme//Hum. Reprod. — 1995. Vol. 10.- P. 620-625.

363. Maystrenko V., Kruglov E., Amirova Z., Khamitov R. Polychlorinated dioxin and dibenzofuran levels in the environment and food the republic of Bashkortostan, Russia // Chemosphere. 1998. - V. 37, Nos 9-12. - P. 16991708.

364. Mazzilli F., Rossi Т., Marchesini M. et al. Superoxide anion in human semen related to seminal parameters and clinical aspects// Fertil. Steril. 1994. -Vol.62. -P.862-868.

365. McElreavey K., Krausz C. Male infertility and the Y chromosome// Am. J. Hum. Genet. 1999. - Vol. 64. -P. 928-933.

366. Meryn S., Jadad A. The Future of Men and their Health // Brit. Med. J. 2001. -Vol. 323.-P. 1013-1014.

367. Mieusset R., Bujan L. The potential of mild testicular heating as a safe, effective and reversible contraceptive'method for men// Int. J. Androl. 1994.- Vol. 17. P. 186-191.

368. Miska W., Sanchez R., Miska G. et al. Differentiation of reactive oxygen species generated in spermatozoa or leukocytes/ZReprod. Domest. Anim. -1999.-Vol. 34, N 1. P. 42.

369. Moilanen J.M., Carpen O., Hovatta O. Flow cytometric analysis of semen preraration, and assessment of acrosome reaction, reactive oxygen species production anal leucocyte contamination in subfertile menII Andrologie. — 1999.-Vol. 31.- №5.-P. 269-276.

370. Mordel N., Mor-Yosef S., Margalioth E.J. et al. Spermatic vein ligation as treatment for male infertility//J. Reprod. Med. 1990. - Vol. 35. - P. 123-127.

371. Morris G.J. A new development in the cryopreservation of sperm// Hum. Fertil. 2002. -Vol. 5 (1). - P. 23-29.

372. Morris G.J., Acton E., Avery S. A novel approach to sperm cryopreservation//Hum. Reprod. 1999. -Vol. 14. - P. 1013-1021.

373. Mosher W.D. Reproductive impairements in tKe United States, 1965-1982// Demography, 1985. -Vol. 22. P. 415-430.

374. Nagao R.R., Plymate S.R., Berger R.E. et al. Comparison of gonadal function between fertile and infertile men with varicoceles// Fertil. Steril. 1986. - Vol. 46.-P. 930-933.

375. Neuwinger J., Behre H., Nieschlag E. Extremal quality control in the andrology laboratory: an experimental multicenter trial//Fertil. Steril. — 1990. — Vol.54.-P. 308-314.

376. Nieschlag E., Hertle L., Fischedick A. et al. Update on treatment of varicocele: counseling as effective as occlusion of the vena spermatica// Hum. Reprod. — 1998. Vol. 138. —P. 2147-2150.

377. Nijs M., Vanderzwalmen P., Vandamme B. et al. Fertilizing ability of immotile spermatozoa after intracytoplasmic sperm injection// Hum. Reprod. — 1996. — Vol. 11.-P. 2180-2185. r

378. Nilsson S., Edvinsson A., Nilsson B. Improvement of semen and pregnancy rate after ligation and division of the internal spermatic vein: fact or fiction? // Br. J.Urol. 1979.-Vol. 51.-P. 591.

379. Ochsendorf F.R. Infection and reactive oxygen species//Andrologia. 1998. -Vol. 30.-P. 81-86.

380. Ochsendorf F.R. Infections in the male genital tract and reactive oxygen species//Hum. Reprod. 1999. - Vol. 5. - P. 399-420.

381. O'Connell M., McClure N., Lewis S.E. The effects of cryopreservation on sperm morphology, motility and mitochondrial function//Hum. Reprod. — 2002. Vol. 17. - 3. - P. 704-709.

382. Oehninger S., Blackmore P., Mahony M., Hodgen G. Effects of hydrogen peroxide on human spermatozoa//J. Assist. Reprod. Genet. 1995. - Vol. 12(1)-P. 41-47.

383. Oehninger S., Goddington C., Scott R. et al. Hemizona assay: assessment of sperm dysfunction and prediction of in vitro fertilization outcome// Fertil. Steril. 1989.-Vol.51. -P.665-670.

384. Ollero M., Gil-Guzman E., Lopez M.C. et al. Characterization of subsets of human spermatozoa at different stages of maturation: implications in the diagnosis and treatment of male infertility//Hum. Reprod. — 2001. Vol. 16, № 9 — P.1912-1921.

385. Olsen G.W., Bodner K.M., Ramlow J.M. et al. Have sperm counts been reduced 50 percent in 50 years? A statistical model revisited// Fertil. Steril. -1995. Vol. 63(4). - P. 887-893.

386. Omu A.E., Fatinikun Т., Mannazhath N., Abraham S. Significance of simultaneous determination of serum and seminal plasma □-tocopherol and retinol in infertile men by high-performance liquid chromatography// Andrologia- 1999.-Vol. 31, № 6.-P. 347-354.

387. Onozawa M., Endo F., Suetomi T. et al. Clinical study of varicocele: statistical analysis and results of long-term follow-up// Int. J. Urol. 2002. -Vol. 9. - P. 455-461.

388. Overstreet I.W. Male infertility. W. Saunders Company, Philad.- 1992. -P.229

389. Oztezcan S., Tiirkoglu U. M., Kervancioglu E. et al. In vitro effects of peroxynitrite on human spermatozoa// Andrologia. 1999. -Vol. 31. - №4. -P. 195-198.

390. Palermo G., Joris H., Devroey P., Van Steirteghem A.S. Pregnancies after intracytoplasmic injection of single spermatozoon intro an oocyte// Lancet. -1992.-Vol. 340.-P. 17-18.

391. Palermo G., Joris H., Derde M.P. et al. Sperm characteristics and outcome of human assisted fertilization by subzonal insemination and intracytoplasmic sperm injection/ZFertil. Steril. 1993. - Vol. 59. - P. 826-835.

392. Park N.C., Park H.J., Lee K.M., Shin D.G. Free radical scavenger effect of rebamipide in sperm processing and cryopreservation// Asian. J. Androl. — 2003. Vol. 5 (3). - P. 195-201.

393. Payne M.A., Lamb E.J. Use of frozen semen to avoid human immunodeficiency virus type 1 transmission by donor insemination: a cost-effectiveness analysis// Fertil. Steril. 2004. -Vol. 81(1). - P. 80-92.

394. Perez-Sanchez F., Cooper T.G., Yeung C.H., Nieschlag E. Improvement in quality of cryopreserved human spermatozoa by swim-up before freezing//Int. J. Androl.-1994.-Vol. 17. P. 115-119.

395. Politoff L., Birkhauser M., Almendral A., Zom A. New data confirming a circannual rhythm in spermatogentsis// Fertil. Steril. 1989. - Vol. 52. - P. 486-489.

396. Potts R.J., Newbury C.J., Smith G. et al. Sperm chromatin damage associated with male smoking/ZMutat. Res. 1999. - Vol. 423. - P.l03-111.

397. Prins G.S., Dolgina R., Studney P. et al. Quality of cryopreserved testicular sperm in patients with obstructive and nonobstructive azoospermia// J. Urol. -1999. Vol. 161(5). - P. 1504-1508.

398. Purvis K., Christiansen E. Male infertility: current concepts//Ann. Med. — 1992. Vol.24. - P.259 - 272.

399. Puscheck E., Philip P.A., Jeyendran R.S. Male fertility preservation and cancer treatment//Cancer treatment reviews. 2004. - Vol. 30(2). - P. 173-180.

400. Ramsewak S.S. Are factors that influence oocyte fertilization also predictive? An assessment of 148 cycles of in vitro fertilization without gonadotropin stimulation/ZFertil. Steril. 1990. -Vol. 54. -P. 470-474.

401. Rao B.B., Soufir J.C., Martin M. et al. Lipid peroxidation in human spermatozoa as related to midpiece abnormalities and motility//Gamete Research. 1989. - Vol.24 - P. 127-134.

402. Rodriguez-Rigau L., Smith K., Steinberger E. Relationship of varicocele to sperm output and fertility of male partners in infertile couples// J. Urol. — 1978. -Vol. 120.-P. 691-694.

403. Rolf C., Behre H.M., Nieschlag E. Tamoxifen bei mannlicher Infertilitat. Analyse einer fragwiirdigen Therapie// Dtsch. Med. Wochenschr. 1996. — Vol. 121.-P. 33-39.

404. Rubes J., Lowe X., Moore D. et al. Smoking cigarettes is associated with increased sperm disomy in teenage men//Fertil. Steril. -1998. -Vol.70 -P.715-723.

405. Rufat P., Olivennes F., de Mouzon J. et al. Task force report on the outcome of pregnancies and children conceived by in vitro fertilization (France: 1987 to 1989)//Fertil. Steril. 1994. - Vol. 61. - P. 324-330.

406. Saaranen M., Suistomaa U., Kantola M. et al. Lead, magnesium, selenium and zinc in human seminal fluid: comparison with semen parameters and fertility// Hum. Reprod. 1987. - Vol. 2. - P. 475-479.

407. Saez F., Motta C., Boucher D. et al. Antioxidant capacity of in human semen// Molec. Hum. Reprod. 1998. - Vol. 4. - P.667-672.

408. Sanger W.G., Olson J.H., Sherman J.K. Semen cryobanking for men with, cancer criteria change//Fertil. Steril. - 1992. - Vol. 58. - P. 1024-1027.

409. Schecter A., McGee H., Stanley J. Dioxins and dioxin-like chemicals in blood and semen of American Vietnam veterans from the state of Michigan// Am. J. Ind. Med. 1996. - 30. - P. 647-654.

410. Schenker J.G., Ezra Y. Complications of assisted reproductive techniques//Fertil. Steril. 1994. - Vol. 61. - P. 411-422.

411. Schlegel P.N., Goldstein M. Microsurgical vasoepididymostomy: refinements and results// J. Urol. 1993. - Vol. 150. - P. 1165-1168.

412. Schmidt L., Munster K. Infertility, involuntary infecundity, and the seeking of medical advice in industrialized countries 1970-1992: a review of concepts, measurements and results//Hum. Reprod. 1995. - Vol. 10. - P. 1407-1418.

413. Schuhler P.H. Fertilite masculine: L'environnement mis en cause//Concnurs med. 1997. - Vol.119, № 32. - P.24-25.

414. Setchell B.P. Sperm counts in semen of farm animals 1932-1995// Int. J. Androl. 1997. - Vol. 20. - P. 209-214.

415. Sharma R.K., Pasqualotto F.F., Nelson D.R. et al. The reactive oxygen species—total antioxidant capacity score is a new measure of oxidative stress to predict male infertility// Hum. Reprod. 1999. - Vol. 14, №11. - P.2801-2807.

416. Sharpe R.M. On the importance of being earnest. Decline in semen quality among fertile men in Paris during the past 20 years//Hum. Experim. Toxicol. — 1995.-Vol. 14. P.463-464.

417. Sharpe R.M., Skakkebaek N.E. Are oestrogens involved in falling sperm counts and disorders of the male reproductive tract?// Lancet. 1993. - Vol. 341.-P. 1392-1395.

418. Shchepancky V.O., Davletov E.G. Biochemical criteria of toxical influence evaluation of 2,4-dichlorophenoxyacetic acid (2,4-D)// ■ Intern. J. Immunorehabilitation. 1995. - N 1. - P. 97.

419. Sierra-Santoyo A., Hernandez M., Albores A., Cebrian M.E. Sex-Dependent Regulation of Hepatic Cytochrome P-450 // Toxicol. Sci. 2000. - Vol. 54. - P. 81-87.

420. Silber S.J., Van Steirteghem A.C., Liu J. et al. High fertilization and pregnancy rate after intracytoplasmic sperm injection with spermatozoa obtained from testicle biopsy// Hum. Reprod. 1995. -Vol. 10. - P. 148-152.

421. Simoni M., Gromoll J., Huppner W. et al. Screening for deletions of the Y chromosome involving the DAZ (Deleted in Azoospermia) gene in azoospermia and severe oligozoospermia// Fertil. Steril. 1997. — Vol. 67. - P. 542-547.

422. Skakkebaek N.E., Giwercman A., de Kretser D. Pathogenesis and management of male infertility//Lancet. 1994. -Vol. 343. -P. 1473-1479.

423. Skakkebaek N.E., Rajpert-De Meyts E., Jorgensen N. et al. Germ cell cancer and disorders of spermatogenesis: an environmental connection?// APMIS. -1998.-Vol. 106(1).-P. 3-11.

424. Smith K.D., Steinberger E. Survival of spermatozoa in a human sperm bank// J. Am. Med. Assoc. 1973. - Vol. 223. - P. 774.

425. Smith R., Vantman D., Ponce J. et al. Total antioxidant capacity of human seminal plasma//Hum. Reprod. 1996. -Vol.11. - P. 1655-1660.

426. Snick H., Snick T.S., Evers J., Collins J.A. The spontaneous pregnancy prognosis in untreated subfertile couples: the Walcheren primary care study// Hum. Reprod.- 1997.-Vol. 12.-P. 1582-1588 .

427. Sofikitis N., Mantzavinos Т., Loutradis D. et al. Ooplasmic injections of secondary spermatocytes for non-obstructive azoospermia/ZLancet. — 1998. — Vol. 351.-P. 1177-1178 .

428. Sofikitis N., Miyagawa I., Dimitriadis D. et al. Effects of smoking on testicular function, semen quality and sperm fertilizing capacity//J. Urol. 1995. — Vol.154-P. 1030-1034.

429. Sohoni P., Sumpter J.P. Several environmental oestrogens are also antiandrogens//J. Endocrinol. 1998. - Vol. 158. - P. 327-339 .

430. Soliman S., Daya S., Collins J., Jarrell. A randomized trial, of in vitro fertilization versus conventional treatment for infertility// Fertil. Steril. — 1993. -Vol. 59.-P. 1239-1244 .

431. Sorahan Т., Lancashire R.J., Kulten M.A. et al. Childhood cancer and parental use of tobacco: deaths from 1953 to 1955//Br. J. Cancer. 1997. - Vol. 75. - P.i134.138 .

432. Sorahan Т., Prior P., Lancashire R.J. et al. Childhood cancer and parental use of tobacco: deaths from 1971 to 1976//Br. J. Cancer. 1997. - Vol. 76. - P. 1525-1531 .

433. Spira A. Epidemiology of human reproduction// Hum. Reprod. -1986. Vol. 1. -P. 111-115.

434. Stanic P., Sonicki Z., Suchanek E. Effect of pentoxifylline on motility and membrane integrity of cryopreserved human spermatozoa// Int. J. Androl. — 2002. Vol. 25 (3). - P. 186-190.

435. StatSoft, STATISTICA for Windows (Computer Program Manual), Tulsa, OK: StatSoft, 2004; http://www.statsoft.com.

436. Stene J., Stene E., Stengel-Rutkowski S., Murken J.D. Paternal age affect in Down's syndrome// Ann. Hum. Genet. 1977. - Vol. 40. - P. 299-306.

437. Suleiman S.A., ElaminAli M., Zakin Z.M.S. et al. Lipid peroxidation and human sperm motility: protective role of vitamin E// J. Androl. 1996. - Vol. 17.-P. 530-537.

438. Swan S., Kruse R., Liu F. et al. Semen quality in relation to biomarkers of pesticide exposure// Environ Health Perspect. 2003. - 111. - P. 1478-1484.

439. Takihara H., Sakatoku J., Cockett A.T.K. The pathophysiology of varicocele male infertility// Fertil. Steril. 1991. - Vol. 55. - P. 861-868.

440. Tas S., Lauwerys R., Lison D. Occupational hazards for the male reproductive system// Crit. Rev. Toxicol. 1996. - 26. - P. 261-307.

441. Temple-Smith P.O., Soutwick G.J., Yates C.A.et al. Human pregnancy by in vitro fertilization (IVF) using sperm aspirated from the epididymis//.!. In Vitro Fert. Embryo Transfer. 1985. - Vol. 2. - P. 119-122.

442. Temple-Smith P.D., Zheng S.S., Kadioglu Т., Southwick GJ.' Development and use of surgical procedures to bypass selected regions of the mammalian epididymis: effects on sperm maturation// Reprod. Fertil. 1998. - Vol. 53. -P. 183-195.

443. Templeton A. The epidemiology of infertility. In: Templeton AA, Drife JO (eds) Infertility. Spnnger, London, 1992. P. 23-32.

444. Templeton A., Cooke I., Shaugh O'Brien P.M. (eds) Evidence-based fertility treatment. Royal College of Obstetricians and Gynecologists Press, London. -1998.-P. 399.

445. The American Fertility Society and Society for Assisted Reproductive Technology. Clinic-Specific Outcome Assessment for the Year 1992. Birmingham, Alabama: The American Fertility Society, 1994.

446. The ESHRE CARPI Workshop Group. Male sterility and subfertility: guidelines for management// Hum. Reprod. 1994. - Vol. 9. - P. 1260-1264.

447. Therond P., Auger J., Legrand A. et al:. alpha-Tocopherol in human spermatozoa and seminal plasma:: relationships with' motility, antioxidant enzymes and leukocytes// Molec.Hum:Reprod. -1996. Vol: 2, № 10. - P.739-744.

448. Tournaye H., Staessen C., Gamus M. et al. No evidence for a decreased fertilizing potential after in vitro fertilization using spermatozoa from polyzoospermic men//Hum. Reprod. 1997. - Vol. 12. - 10. - P. 2183-2185.

449. Tsirigotis M., Yang D., Redgment G. et al. Assisted fertilization with intracytoplasmic sperm injection// Fertil. Steril. — 1994. Vol. 62. - P. 781785.

450. Tucker MJ. Micromanipulative and conventional insemination strategies for assisted reproductive technology//Am. J: Obstet. Gynecol. 1995. - Vol. 172. -P. 773-778.

451. Twigg J., Irvine D.S., Houston P. Iatrogenic DNA damage induced in human spermatozoa during sperm preparation: protective significance of seminal plasma// Molec.Hum.Reprod. -1998. Vol. 4. - P.439-445.

452. Tan S.L., Royston R.G., Campbell S. et al. Cumulative conception and livebirth rates after in-vitro fertilization// Lancet. 1992. - Vol. 1. - P. 13901394.

453. Tournaye H., Devroey P., Camus M. et al. Comparison of in-vitro fertilization in male and tubal infertility: a 3 year survey// Hum. Reprod. 1992. - Vol. 7. -P. 218-222.

454. Van Steirteghem A.C., Liu J., Joris H. et al. Higher sucess rate by intracytoplasmic sperm injection than by subzonal insemination. Report of a second series of 300 consecutive treatment cycles// Hum. Reprod. — 1993. — Vol. 8.-P. 1055-1060!

455. Van Steirteghem A.C., Nagy Z., Joris H. et al. High fertilization and implantation rates after intracytoplasmic sperm injection// Hum. Reprod. — 1993. Vol. 8. - P. 1061-1066.

456. Van Waeleghem K., De Clerck N., Vermeulen L. et al. Deterioration of sperm quality in young healthy Belgian men//Hum. Reprod. 1996. - Vol. 11. -P.325-329.

457. Vermeulen A., Vandeweghe M., Deslypere J.P. Prognosis of subfertility in men with corrected or uncorrected varicocele// J. Androl. — 1986. Vol. 7. - P. 147-155.

458. Vierula M., Niemi M., Keiski A. et al. High and unchanged'sperm counts of Finnish men// Int. J. Androl. 1996. - Vol. 19. - P. 11-17 .

459. Vine M.F. Smoking and male reproduction//Int. J. Androl. 1996. - Vol.19 -P.323-337.

460. Vogt P.H., Edelmann A., Kirsch S. et al. Human Y chromosome azoospermia factors (AZF) mapped to different subregions in Yqn// Hum. Mol. Genet. — 1996. Vol. 5. - P. 933-943.

461. Wang R., Sikka S.C., Veeraragavan K. et al. Platelet activating factor and pentoxifylline as human sperm cryoprotectants//Fertil. Steril. 1993. - Vol. 60.-P. 711-715.

462. Wang X., Sharma R.K., Sikka S.C. et al. Oxidative stress is associated with increased apoptosis leading to spermatozoa DNA damage in patients with male factor infertility//Fertil. Steril. 2003. - Vol. 80. - 3. - P. 531-535.

463. Watson P.F., Critser J.K., Mazur P. Sperm preservation: fundamental cryobiology and practical implications. In: Templeton A.A., Drife J.O. (eds) Infertility. Springer, Berlin Heidelberg New York, 1992. P. 101-114.

464. Whittington K., Ford W.C. The effect of incubation periods under 95% oxygen on the stimulated acrosome reaction and motility of human spermatozoa/ZMolec. Hum.Reprod. 1998. - Vol. 4. - P.1053-1057.

465. WHO Scientific Group. The epidimiology of infertility// World Health Organization Chronicle, 1976. Vol.30 -P.229

466. Williamson K., Frayne J., McLaughlin E.A., Hall L. Expression of extracellular Superoxide dismutase in the human male reproductive tract, detected using antisera raised against a recombinant protein// Mol. Hum. Reprod. 1998. - Vol.4. - P.235-242

467. World Health Organization. A double-blind trial of clomiphene citrate for the treatment of idiopathic male infertility// Int. J. Androl. 1992. - Vol. 7. - P. 1067-1072.

468. World Health Organization. The influence of varicocele on paramrters of fertility in a large group of men presenting to infertility clinics// Fertil. Steril. -1992. Vol. 57. - P. 1289-1293.

469. Yeung C.H., Cooper T.G., De Geyter M. et al. Studies on the origin of redox enzymes in seminal plasma and their relationship with results of in-vitro fertilization//Mol. Hum. Reprod. 1998. - № 4. - P. 835-839.

470. Yeung C.H., De Geyter C., De Geyter M., Nieschlag E. Production of reactive oxygen species by and hydrogen peroxide scavenging activity of spermatoza in and IVF program// J. Assist. Reprod. Genet. 1996. - Vol. 13. - P. 495-500.

471. Zalata A., Hafez Т., Comhaire F. et al. Evaluation of the role of reactive oxygen species in male infertility// Hum. Reprod. —1995. Vol. 10, № 6. -P.1444-1451.

472. Zalata A., Hafez Т., Mahmoud A. et al. Relationship between resazurin reduction test, reactive oxygen species generation, and gamma-glutamytransferase// Hum. Reprod. -1995. Vol. 10. - P. 1136-1140.

473. Место жительства (последние 5 лет)

474. Продолжительность бесплодия

475. Наличие беременностей у жены в настоящем браке да/ нет

476. Наличие детей в предыдущих бракахда/ нет1. Место работы/ профессия/1. Проф. вредности (анамнез)

477. Привычные интоксикации (курение, алкоголь, наркотическиепрепараты, прием лекарственных средств)1. Телосложение1. Яички: D-см. S -см.1. Придатки1. Per rectum

478. Данные гормонального исследования