Автореферат и диссертация по медицине (14.03.02) на тему:Особенности морфогенеза предрака (папилломавирусная инфекция) и рака шейки матки с позиций паренхиматозно-стромальных взаимоотношений

На правах рукописи

Бехтерева Ирина Анатольевна

Особенности морфогенеза предрака (папилломавирусная инфекция) и рака шейки матки с позиций паренхиматозно-стромальных взаимоотношений

(морфометрическое и иммуногистохимическое исследования)

14.03.02 — патологическая анатомия

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук

г окт 2014

Саратов 2014

005553039

005553039

Работа выполнена в Государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Смоленская государственная медицинская академия» Министерства здравоохранения Российской Федерации; Областном государственном бюджетном учреждении здравоохранения «Смоленский областной институт патологии».

Научный консультант:

Доросевич Александр Евдокимович, доктор медицинских наук, профессор Официальные оппоненты:

Коваленко Владимир Леонтьевич, член-корреспондент РАМН, доктор медицинских наук, профессор; ГБОУ ВПО «Южно-Уральский государственный медицинский университет» Минздрава России; кафедра патологической анатомии; профессор кафедры

Петров Семен Венедиктович, доктор медицинских наук, профессор; ГБОУ ВПО «Казанский государственный медицинский университет» Минздрава России; кафедра патологической анатомии; профессор кафедры

Должиков Александр Анатольевич, доктор медицинских наук, профессор; медицинский институт ФГАОУ ВПО «Белгородский государственный национальный исследовательский университет» Министерства образования и науки РФ; кафедра анатомии и гистологии человека; заведующий кафедрой; ОГКУЗ особого типа «Белгородское патологоанатомическое бюро»; отделение онкомор-фологии; заведующий отделением

Ведущая организация: Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Первый Московский государственный медицинский университет имени И. М. Сеченова» Министерства здравоохранения Российской Федерации

Защита диссертации состоится^ б //У^У^ОЫ г. в ^/ часов на заседании диссертационного совета Д 208.094.01 при ГБОУ ВПО Саратовский ГМУ им. В.И. Разумовского Минздрава России по адресу 410012, Саратов, ГСП, ул. Большая Казачья, 112.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГБОУ ВПО Саратовский ГМУ им. В. И. Разумовского Минздрава России и на сайте организации: www.sgmu.ru

Автореферат разослан <(с)л) » М-К^п 2014 г.

Ученый секретарь диссертационного совета доктор медицинских наук, профессор

Маслякова Г.Н.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы

По данным ВОЗ после 1985 г. в мире ежегодно выявляется более полумиллиона больных РШМ. В России в последние годы заболеваемость этим видом опухоли держится на уровне 10,8 на 100000 женского населения с летальностью 5 на 10000 женщин (Чиссов В. И., Старинский В. В., Петрова Г. В., 2005). Кроме того, в России отмечается рост заболеваемости раком шейки матки у женщин репродуктивного возраста, особенно в группе женщин моложе 29 лет. Несмотря на то, что диагностика различных патологических состояний шейки матки относительно легка благодаря доступности шейки матки для скринингового обследования и взятия биопсийного материала, рак шейки матки выявляется довольно часто в запущенных стадиях заболевания.

Роль вируса папилломы человека (ВПЧ) в становлении и развитии РШМ в настоящее время не вызывает сомнений. По данным ряда авторов (Минкина Т.Н., Манухин И.Б., Франк Г. А., 2001; Хансон К.П., Имянитов E.H., 2002; Плотникова H.A., Кемайкин С. П., Харитонова Т. В., 2006) в 90-95% и даже в 100% случаев в карциномах шейки матки присутствуют 16-й, 18-й, либо 31-й, 33-й типы вируса папилломы человека, поэтому своевременная диагностика и адекватное лечение данной патологии способствуют снижению заболеваемости РШМ. До настоящего времени одной из главных проблем в диагностике дисплазии эпителия и микроинвазивного РШМ является отсутствие достоверных критериев, позволяющих объективизировать полученные патоморфологические данные.

При патологии шеики матки, обусловленной вирусом папилломы человека, наблюдается нарушение иммунной, нервной и эндокринной регуляций, что приводит к нарушениям гомеостаза. Интимные механизмы, определяющие возможные морфогенетические потенции патологического процесса, можно раскрыть путем изучения межклеточных взаимодействий, поддерживающих структуру и функцию любой ткани, включая и опухолевую, так как известно, что изменения эпителиального и стромального компонентов происходят синхронно. Эта мысль высказывалась В. Г. Гаршиным еще в 1939 году (Гаршин В.Г., 1939).

Степень разработанности темы исследования

Углубленное исследование структурно-функциональных характеристик тканевых процессов в бассейне микроциркуляторного русла показывает взаимосвязь иммунного инфильтрата и сосудов микроциркуляторного русла в тканях опухоли (Голубев O.A., 2001; Бехтерева И.А., 2004).

В последние годы получены новые данные, касающиеся критериев диагностики, морфогенеза, прогноза опухолей шейки матки (Kamura Т., Tsukamoto N.,

Tsuruchi N. et. al., 1992), желудка, яичников и новообразований других локализаций, а также предопухолевых процессов (Аничков Н.М., 1990). Показано значение пролиферативной активности (по Ki67) при патологии женской репродуктивной системы (Зайратьянц О. В., Мовтаева X. Р., АдамянЛ.В. и соавт., 2007) и митотического индекса при различных формах лейкоплакий шейки матки, обусловленных папилломавирусной инфекцией (Харитонова Л. И., Бехтерева И. А., Мелехова Н. Ю., 2006). Прогноз опухолей различной локализации зависит от ряда морфологических признаков: степень злокачественности, тип гистологического строения, глубина прорастания и распространения по кровеносным и лимфатическим сосудам (Яворский В. В., Аризи В.Н., Пирогова H.A., 1987; Косников А.Г., ЧепикО.Ф., Максимов С.Я., 1998; Карселадзе А.И., Во-лощук И.Н., 2005; Петровичев H.H., Мазуренко H.H., Козаченко A.B., 2006).

Благодаря иммуногистохимическим методам исследования открылись новые возможности для дифференциальной диагностики злокачественных новообразований: доказано диагностическое и прогностическое значение р53, Ki-67 при опухолях молочной железы (Пожарисский К. М., Семиглазов В. Ф., Упоров А. В., 1999), р 16™^ при цервикальных интраэпителиальных неоплазиях и неинвазивных карциномах шейки матки (Волгарева Г. М., Завалишина Л. Э., Франк Г. А., Андреева Ю.Ю. и соавт., 2002; Козаченко A.B., 2006).

Обобщение и творческое осмысление известных положений, касающихся морфометрических и иммуногистохимических маркеров прогрессии РШМ, сегодня невозможно без учета изменений стромального компонента опухоли и, прежде всего, коммуникационных систем (КС).

Коммуникационные системы — это открытые системы, состоящие из совокупности структурно-функциональных единиц: сосуды микроциркуляторного русла, нервные терминали, непосредственное клеточное окружение указанных структур, находящихся в гистофизиологических взаимоотношениях, обеспечивающих структурные основы гомеостаза (Доросевич А.Е., Голубев O.A., Абросимов С. Ю. и др., 1998; Доросевич А. Е., 2007). В осуществлении межклеточных взаимодействий значительная роль принадлежит так называемым внутриклеточным регуляторам (Пальцев М.А., Иванов A.A., Северин С.Е., 2003).

Комплексное исследование взаимоотношений эпителиальных и стромальных элементов различного происхождения невозможно без синхронного изучения различных клеточных регуляторов, таких как р53 (он контролирует активность генов, продукты которых вызывают как остановку клеточного цикла в различных его фазах — Gl, G2, так и апоптоз); р16ЮК4а (продукт гена INK4a), который обладает супрессорной функцией на р53 (следует отметить, что уровень экспрессии pl6L4K4a при дисплазиях шейки матки и РШМ очень вариабелен); Ki-67, отражающий пролиферативную активность клеток как эпителиального, так и мезенхи-мального происхождения.

Путем уточнения их взаимодействия со специфическими рецепторами на клетках-мишенях в периваскулярных зонах рака шейки матки можно раскрыть вероятную роль таких взаимоотношений в стартовых процессах инвазии РШМ. Анализ механизмов, обеспечивающих прогрессию РШМ, необходим для выявления дополнительных объективных критериев оценки биологических свойств карцином ШМ и возможного построения индивидуального прогноза.

С данных позиций представляется важным рассмотреть роль сосудистого компонента коммуникационных систем в процессах становления и прогрессии рака шейки матки и уточнить возможное значение взаимоотношений сосудистого русла и его клеточного микроокружения в прогнозе карцином шейки матки.

Цель исследования

Выявление особенностей взаимоотношений сосудистого компонента коммуникационных систем и внутриклеточных регуляторов как морфогенетически значимого звена прогрессии и прогноза рака шейки матки.

Задачи исследования

1. Изучить гистотопографические особенности артериол, капилляров и венул в интактной шейке матки, в ткани шейки матки, пораженной вирусом папилломы человека и вне зоны поражения, в ткани рака шейки матки и контрлатеральной зоне (вне опухолевого очага).

2. Провести количественное определение непосредственного клеточного микроокружения вокруг артериол, капилляров и венул в интактной шейке матки, в ткани шейки матки, пораженной вирусом папилломы человека и вне зоны поражения, в ткани рака шейки матки и контрлатеральной зоне (вне опухолевого очага).

3. Иммуногистохимическим методом изучить характер распределения р53, Ki-67, bcl-2, NK1, CD4, CD8, CD79a, CD 13 8, CD68, CD34, NGFR как в строме, так и в эпителиальном компоненте в интактной шейке матки, в ткани шейки матки, пораженной вирусом папилломы человека и вне зоны поражения, в ткани рака шейки матки и контрлатеральной зоне (вне опухолевого очага).

4. Провести математико-статистическую обработку полученных данных, отмеченных в сосудистом компоненте коммуникационных систем в интактной шейке матки, в ткани шейки матки, пораженной вирусом папилломы человека и вне зоны поражения, в ткани рака шейки матки и контрлатеральной зоне (вне опухолевого очага).

5. Оценить результаты интеграционного анализа морфологических и клинических данных и на их основе разработать критерии, способствующие более полному пониманию вопросов диагностики, морфогенеза и прогноза пред- раковых процессов и рака шейки матки.

Научная новизна исследования

1. Впервые проведено сравнительное комплексное морфологическое исследование коммуникационных систем при различной патологии шейки матки (ВПЧ инфекция и рак шейки матки), а также в интактной ШМ.

2. Впервые изучены гистотопографические особенности сосудов МЦР и их клеточное окружение в различных зонах ШМ при ВПЧ инфекции, раке шейки матки, а также в интактной ШМ.

3. Впервые изучение коммуникационных систем в тканях интактной ШМ, в шейке матки при ВПЧ инфекции и РШМ проведено с использованием комплекса методов: морфологического, иммуногистохимического и морфометрического. Изучены гистоархитектоника сосудов МЦР, качественные и количественные показатели клеточных популяций вокруг различных звеньев МЦР.

4. Впервые проведена иммуногистохимическая идентификация клеточных популяций (NK1, CD4, CD8, CD79a, CD138, CD68) в различных зонах при РШМ, ВПЧ инфекции и в интактной ШМ, что позволяет проследить морфологические изменения, наблюдаемые на различных этапах становления и развития РШМ.

5. Впервые изучен характер распределения внутриклеточных регуляторов (р53, Ki-67, bcl-2) как в строме, так и в эпителиальном компоненте в различных зонах ШМ при ВПЧ инфекции, РШМ и в ткани интактной ШМ и определены площадь сосудистого русла (СД34) и количество NGFR-позитивных структур. Выявленные изменения межклеточных взаимодействий структурных элементов стромы и внутриклеточных регуляторов позволили выделить морфологически значимые факторы для становления и развития предрака и рака шейки матки.

Теоретическая и практическая значимость исследования

Комплексная морфологическая, морфометрическая и иммуногистохимическая оценка особенностей гистоархитектоники и гистотопографии сосудов МЦР и их клеточного окружения позволили конкретизировать диагностику предрака и рака шейки матки.

Впервые доказано, что:

Сочетание морфометрических и иммуногистохимических методов исследования с последующей оценкой состояния сосудистого компонента коммуникационных систем при предраковых и раковых процессах шейки матки необходимо использовать в клинической практике как один из возможных критериев индивидуального прогноза и тактики лечения.

При патологоанатомической диагностике предраковых и раковых процессов шейки матки необходимо учитывать особенности состояния стромообразующего,

дезинтегрирующего и пролиферирующего факторов шейки матки, стабильность которых зависит от состава клеточных популяций, их количества и внутриклеточных регуляторов.

Морфологические, морфометрические и иммуногистохимические изменения в тканях вне зоны поражения ВПЧ и контрлатеральной зоне от РШМ позволяют утверждать, что данные зоны ШМ должны быть исследованы в клинической и патологоанатомической практике для исключения поражений предопухолевы-ми и опухолевыми процессами. Это позволит дать рекомендации по тактике лечения и разработать критерии индивидуального прогноза.

Методология и методы исследования

В основу методологии настоящего исследования положен системный подход к анализу и оценке морфологических изменений при предраковых состояниях и раке шейки матки с позиции всестороннего исследования коммуникационных систем. Данный подход позволяет подробно рассмотреть роль сосудистого компонента коммуникационных систем в процессах становления и прогрессии рака шейки матки и уточнить его возможное значение в прогнозе карцином шейки матки. Для достижения поставленной цели и решения задач исследования в работе использован комплекс методов: информационно-аналитический, макроскопический, гистологический, микроморфометрический, иммуногистохимический и математико-статистической обработки полученных данных.

Положения, выносимые на защиту

1. Целостное представление о морфогенезе рака шейки матки возможно только при комплексном изучении стромального и эпителиального компонентов путем уточнения состояния сосудистого компонента коммуникационных систем с последующей иммуногистохимической индентификацией клеточных популяций.

2. Комплексная морфологическая оценка взаимоотношений сосудистого компонента коммуникационных систем с внутриклеточными регуляторами (р53, Ьс1-2, Кд-67) при предраковых и раковых процессах шейки матки позволяет значительно увеличить информативность морфометрического исследования.

3. Морфометрическая и иммуногистохимическая характеристики клеточных популяций в интактной ШМ, в тканях шейки матки при поражениях ВПЧ и в тканях рака шейки матки позволяют проследить отдельные этапы дезинтеграции паренхиматозно-стромальных взаимоотношений, наблюдаемые при предраковых и раковых процессах шейки матки, и выявить новые морфологические маркеры развития рака на фоне предраковых заболеваний данной локализации.

4. Морфометрический анализ демонстрирует значимые различия в распределении клеточных популяций вокруг артериол, капилляров и венул при фоновых заболеваниях и плоскоклеточном раке шейки матки.

5. Частный корреляционный факторный анализ морфометрических данных, полученных при изучении непосредственного клеточного окружения вокруг сосудов МЦР, дает возможность выделить три основных фактора (стромо-образующий, дезинтегрирующий и пролиферирующий), которые необходимы для стабильности паренхиматозно-стромальных взаимоотношений в ткани шейки матки, а также определить основные моменты, которые влияют на становление и развитие плоскоклеточного рака шейки матки на фоне предраковых процессов в ней.

Степень достоверности и апробация результатов

Степень достоверности полученных результатов определяется достаточной базой данных, репрезентативностью выборки, включенных в статистический анализ изученных показателей, а также адекватно подобранным иллюстративным материалом, который четко документирует проведенные гистологическое, имму-ногистохимическое, морфометрическое и статистическое исследования.

Диссертация прошла апробацию на совместном заседании ГБОУ ВПО «Смоленская государственная медицинская академия», ОГБУЗ «Смоленский областной институт патологии» и ОГБУЗ «Смоленский областной онкологический клинический диспансер».

Материалы диссертации широко отражены и доложены на различных конгрессах, съездах, конференциях, научных форумах, обществах патологоанатомов, в том числе HaVII Российском форуме «Мать и дитя» (Москва, 2005); Всероссийской конференции, посвященной памяти профессора О. К. Хмельницкого (Санкт-Петербург, 2006); VIII Российском форуме «Мать и дитя» (Москва, 2006); Международном конгрессе «Практическая гинекология: от новых возможностей к новой стратегии» (Москва, 2006); Республиканской научно-практической конференции «Актуальные проблемы патологической анатомии» (Республика Беларусь, Гродно, 2010); на II съезде патологоанатомов Республики Беларусь «Проблемы пагоморфологической диагностики современных инфекций и других заболеваний» (Гомель, 2011).

Внедрение результатов исследования в практику

Материалы диссертационной работы излагаются при проведении практических занятий и чтении лекций на кафедрах патологической анатомии, акушерства и гинекологии с курсом пренатальной диагностики, акушерства и гинекологии педиатрического и стоматологического факультетов, акушерства и гинекологии

ФПК и ППС, онкологии ГБОУ ВПО «Смоленская государственная медицинская академия» Министерства здравоохранения Российской Федерации; на кафедре патологической анатомии, УО «Гомельский государственный медицинский университет», УО «Витебский государственный ордена Дружбы народов медицинский университет». Внедрение результатов работы в практику подтверждено соответствующими актами.

Результаты исследования используются для дифференциальной диагностики различных форм папилломавирусных поражений шейки матки и рака шейки матки в отделениях клинической патологии № 1,2,3 ОГБУЗ «Смоленский областной институт патологии»; патологоанатомическом отделении ОГБУЗ «Смоленский областной онкологический клинический диспансер»; научно-исследовательском центре ГБОУ ВПО «Смоленская государственная медицинская академия»; патологоанатомическом отделении ГБУ Рязанской области «Бюро судебно-медицинской экспертизы»; патологоанатомическом отделении ГБОУ Рязанской области «Областной онкологический диспансер»; патологоанатомическом отделении Национального медико-хирургического центра имени Н. И. Пирогова, г. Москва; клинико-диагностической лаборатории ГУ «Республиканский научно-практический центр радиационной медицины и экологии человека», г. Гомель.

Личный вклад автора в проведенное исследование

Автор принимал непосредственное участие во всех разделах диссертационной работы. Ему принадлежит ведущая роль в выборе концепции исследования, определении цели и задач, основных направлений и программы исследования. Им разработаны алгоритм забора операционного материала для морфологического исследования и методика оценки иммуногистохимических результатов с помощью программы «ВидеоТест 4.0».

Автор лично осуществлял поэтапное рассмотрение результатов работы, анализировал и оценивал достоверность полученных результатов. Им сформулированы положения, выносимые на защиту, выводы и практические рекомендации по материалам исследования. Автору принадлежит определяющая роль во внедрении результатов исследования, в научных публикациях и докладах по материалам диссертации. Доля участия автора в организации сбора и накопления информационных данных составляет 100%; обработка, анализ и обобщение — 85%.

Публикации

По теме диссертации опубликовано: 25 работ, в том числе 11 статей в научных рецензируемых изданиях; 3 — за рубежом.

Структура и объем диссертации

Диссертация построена традиционно и состоит из введения и 6 глав: обзора литературы, материалов и методов исследования, общей характеристики обследованных женщин, результатов собственных исследований и обсуждения полученных результатов, выводов, практических рекомендаций, списка использованной литературы. Работа изложена на 276 страницах компьютерного текста, содержит 53 таблицы, 174 рисунка. Список литературы состоит из 327 источников, из них 189 — на русском и 138 — на иностранных языках.

Диссертационная работа выполнена по плану научной работы Смоленской государственной медицинской академии и связана с республиканской проблемой «Морфология опухолей». Номер государственной регистрации 01200803427.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материалы и методы исследования

В работе использовали операционный и аутопсийный материал от 90 женщин, было получено 180 парафиновых блоков, из которых изготовлено 3006 гистологических препаратов. Весь исследуемый материал был разделен на три группы. Возраст больных — от 18 до 55 лет.

Первая группа представлена тканью интактной шейки матки: передняя губа— 30 случаев и задняя губа — 30 случаев; материал забирали у женщин, скончавшихся от травм и острых отравлений. Вторая группа — ткань шейки матки после электроконизации, производившейся пациенткам в виде расширенной биопсии или лечебной эксцизии по поводу ВПЧ поражения шейки маки или ЦИН различной степени. Забирали ткань ШМ с признаками поражения вирусом папилломы человека — 30 случаев; контрлатеральная зона ткани шейки матки вне зоны поражения — 30 случаев. Третья группа — ткань рака шейки матки — 30 случаев, контрлатеральная зона (вне опухолевого роста) — 30 случаев. Данный материал забирали после проведения оперативного лечения (операция Вертгейма). Распределение по возрастам представлено в таблице 1.

Фиксация материала осуществлялась в 10%-м нейтральном забуференном формалине. Затем кусочки подвергали стандартной проводке с последующей заливкой в парафин. Из полученных блоков готовили срезы толщиной 5-7 мкм, окрашивали гематоксилином и эозином. Для идентификации и уточнения локализации сосудистых структур в препаратах срезы окрашивали пикрофуксином по ван Гизону, Габу-Дыбану (Меркулов Г. А., 1969).

Иммуногистохимическое исследование проводили на парафиновых срезах. Использовались стрептавидин-биотиновый метод окрашивания и следующая панель моноклональных антител: р53 (cloneDO-7), Ki-67 (cloneMib-1), Bcl-2 (clonel24), NK1-клетки (cloneNKl), CD34 classll (cloneQBEnd-10), CD4 (cloneRIV7), CD8 (cloneC8/144B), CD79a (cloneJCB117), CD138 (клон MI15), CD68 (клон PG-M1), NGFR, p75 NGFR (cloneNGFR5). Все используемые антитела были фирмы DAKO (Дания).

При стандартизации использовали отрицательные контроли из стандартного набора. Оценивали гистологические структуры, которые экспрессировали то или иное антитело. Площадь сосудистого русла (по CD34), NGFR, CD4, CD8, CD79a, NKl-клетки определяли с помощью программы «ВидеоТест 4.0».

Обзорный морфологический анализ и исследования микропрепаратов, окрашенных стрептавидин-биотиновым методом различными антителами, выполняли на микроскопе «Axiostar plus» (CarlZeiss, Германия), совмещенном с видеокамерой «Progrès СЮ Plus» (JenoptikJena, Германия).

Таблица 1 — Количественное распределение больных по возрасту и нозологическим группам

Группы наблюдения Возраст Итого

18-25 26-35 36-45 46-55

Нормальная ЩМ 5 9 9 7 30

ШМ при ВПЧ инфекции 9 8 7 6 30

Ткань РШМ 4 8 9 9 30

Итого 18 25 25 22 90

Документирование результатов осуществляли при помощи компьютерной программы «ВидеоТест 4.0. Морфология», в которой были созданы методики для дифференцировки клеточных элементов и тканевых структур микропрепаратов, измерения их количества, морфологических (общая и внутренняя площадь, периметр, параметры формы и размеров) и оптических параметров (яркостные и цветовые составляющие, оптические плотности) с последующим статистическим анализом данных.

Методы статистической обработки

Задача статистического анализа результатов морфометрических исследований заключалась в проверке статистической гипотезы, которая выражается в том, что статистические распределения изучаемых клеточных элементов в зоне опухоли и вне зоны опухоли не имеют значимых различий. Альтернативная статистическая гипотеза состояла в том, что имеют место значимые различия между статистическими распределениями изучаемых клеточных элементов в различных зонах во всех трех группах наблюдений.

Проверку гипотезы о нормальности распределения осуществляли по критерию х2 (Пирсона) (Медик В. А., Токмачев М.С., Фишман Б. Б., 2000) на уровне значимости а = 0,05. Для проверки статистической гипотезы об отсутствии значимых различий между типичными уровнями анализируемых распределений использовали непараметрический критерий Манна—Уитни (ГланцС., 1998; Кобзарь А. И., 2006; Герасимов А. Н., 2007).

Корреляционый анализ проводился с целью повышения точности и глубины познания сложных явлений или процессов, когда возникает необходимость в увеличении общего числа признаков (морфологических элементов), используемых для их описания. При большом числе признаков возникает необходимость в «ежа-

тии» (редукции) имеющейся информации. Использовали метод главных компонент, который называют также компонентным анализом. Исходными данными для компонентного анализа являлись коэффициенты парных частных корреляций. Частные коэффициенты корреляции количественно выражают тесноту статистической связи между двумя переменными, исключая влияние остальных переменных. Из матрицы парных корреляций вычислялись собственные значения главных компонент. На начальном этапе анализа число главных компонент равно числу исходных переменных. Собственное значение главной компоненты (фактора) — это показатель, который характеризует вес (вклад), значимость каждого фактора в найденном факторном решении. Собственные значения главных компонент позволяют оценить их информативность. Информативность — это процент объясняемой дисперсии исходных переменных, содержащейся в корреляционной матрице. Собственные значения главных компонент, их индивидуальная и накопленная информативность представлены в таблицах. Главные компоненты расположены в таблице по убыванию собственных значений главных компонент. Информативность главных компонент связана с величиной их собственных значений. Исходя из того, что исходные анализируемые выборочные значения, полученные в результате морфометрического исследования, являются, по сути, случайными величинами, выборочные коэффициенты корреляции и вычисленные на их основе собственные значения главных компонент также являются случайными величинами. В связи с этим нулевая статистическая гипотеза может быть сформулирована как предположение об отсутствии значимых различий между собственными значениями главных компонент, а наблюдаемые различия являются результатом ошибки, которая всегда имеет место при выборочном статистическом исследовании (ошибка выборки). При истинной нулевой гипотезе главные компоненты неинформативны. Альтернативная гипотеза может быть сформулирована как предположение о том, что не все собственные значения равны между собой. Для проверки нулевой гипотезы использовалась статистика (Болч Б., Хуань К. Дж., 1979).

С целью установления значимости выявленных главных компонент сформулировали следующие статистические гипотезы:

— гипотеза НО: собственные значения главных компонент равны между собой и равны единице, вычисленные главные компоненты не обладают выраженной информативностью;

— гипотеза Н1: не все собственные значения равны между собой, вычисленные главные компоненты обладают выраженной информативностью.

Нулевую гипотезу проверяли на уровне значимости а = 0,05. Для проверки гипотезы НО можно использовать статистику X2 (1):

ЗСв =~(п-1)-1п|я|, где — определитель корреляционной матрицы; п — объем выборки.

Статистика имеет ^-распределение с числом степеней свободы где т — число главных компонент. Для нашего случая т = 7 и, следовательно,

Х2кр (а = 0,05; #=21) = 32,67.

%2р = -(п-1)1п|Щ = 325,54.

Так как Х2Р = 325,54 > Х2щ,= 32,67, то имеются основания отклонить нулевую гипотезу и принять альтернативную. Главные компоненты обладают выраженной информативностью.

Для определения числа факторов использовали критерий Кайзера: число факторов равно числу главных компонент, собственные значения которых больше единицы. Из анализа табличных данных можно сделать вывод о том, что для дальнейшего анализа можно использовать первых три главных компоненты. Факторная структура и факторные (компонентные) нагрузки представлены в таблицах соответствующих глав. Факторные (компонентные) нагрузки, по сути, являются коэффициентом корреляции анализируемой переменной с главной компонентой (фактором). Для анализа и интерпретации выявленной факторной структуры были использованы факторные нагрузки, значение которых больше или равно 0,3 (в таблице они выделены значком*).

Особенности сосудистого компонента коммуникационных систем в интактной шейке матки

Кровеносные сосуды МЦР в тканях интактной ШМ представлены артериола-ми, капиллярами и венулами. Гистотопографически к многослойному плоскому эпителию ближе располагались капилляры, венулы залегали на отдалении от эпителия. Наиболее отдаленно располагались артериолы. Артериолы имели диаметр 30—40 мкм и типичное трехслойное строение. Относительно крупные артериолы имеют интиму, состоящую из эндотелия; базальную мембрану, среднюю оболочку, содержащую гладкомышечные клетки (до 3 слоев) и наружную оболочку, представленную коллагеновыми и эластическими волокнами. Капилляры имели извилистый ход, различный диаметр. Венулы, как правило, имели диаметр около 30 мкм, отличались от капилляров более крупным диаметром и количеством перицитов.

Вокруг сосудов МЦР клеточный инфильтрат стромы в интактной ШМ как в передней, так и в задней губе был крайне скудным. Клетки стромы были представлены фиброцитами, фибробластами, макрофагами, единичными лимфоци-

тами, плазмоцитами и единичными полиморфноядерными лейкоцитами. Количественный их состав вокруг артериол, венул и капилляров представлен в таблицах 2- 4.

Статистические распределения изучаемых клеточных элементов в тканях передней губы и задней губы ШМ значимо отличаются от нормального распределения (р < 0,05). Проверка гипотезы о нормальности распределения осуществлялась по критерию х2 (Пирсона) на уровне значимости а = 0,05. Проверка статистической гипотезы об отсутствии статистически значимых различий между статистическими распределениями изучаемых клеточных элементов в тканях передней губы и задней губы ШМ сводилась к проверке статистической гипотезы НО об отсутствии значимых различий между типичными уровнями (значениями) анализируемых статистических распределений (типичным является тот факт, что в тканях передней губы и задней губы шейки матки наблюдаемое число клеточных элементов статистически одинаково). Альтернативная статистическая гипотеза Н1 — типичные уровни анализируемых статистических распределений значимо различаются (типичным является тот факт, что в тканях передней губы ШМ наблюдаемое число клеточных элементов больше (меньше), чем в тканях задней губы шейки матки.

Для анализа ввели понятие среднего ранга выборки: V!— выборка в передней губе, У2 — выборка в задней губе. При анализе клеточных популяций фиброцитов, фибробластов, лимфоцитов, плазмоцитов, макрофагов, гранулоцитарных лейкоцитов, клеток паренхимы вокруг артериол, венул и капилляров было сформулировано две гипотезы (гипотеза НО: в передней губе и в задней губе типичное наблюдаемое число клеточных элементов одинаково, и гипотеза Н1: типичным является тот факт, что в передней губе наблюдаемое число клеточных элементов значимо меньше, чем в задней губе); как видно из таблиц 2—4, по результатам

Таблица 2 — Распределение клеточных популяций вокруг артериол в ткани интактной шейки матки

Показатель Средний ранг выборки Статистика критерия

Передняя губа Задняя губа Критерий Манна — Уитни

V, V, XV Р

ФЦ 295,31 304,68 1212,50 0,283 >0,05

ФБ 300,05 299,95 15,00 0,497 >0,05

ЛФ 300,50 300,50 0,00 1 >0,05

ПЛ 300,50 300,50 0,00 1 >0,05

МФ 300,50 300,50 0,00 1 >0,05

ГРЛ 300,50 300,50 0,00 1 >0,05

ПАР 300,50 300,50 0,00 1 >0,05

Таблица 3 — Распределение клеточных популяций вокруг венул в ткани интактной шейки матки

Показатель Средний ранг выборки Статистика критерия

Передняя губа Задняя губа Критерий Манна—Уитни

V, V, V/ Р

ФЦ 299,79 300,21 62,00 0,488 >0,05

ФБ 310,91 289,06 3272,50 0,061 >0,05

ЛФ 300,50 300,50 0,00 1 >0,05

ПЛ 300,50 300,50 0,00 1 >0,05

МФ 300,50 300,50 0,00 1 >0,05

ГРЛ 302,05 289,95 464,00 0,193 >0,05

ПАР 305,41 294,57 1623,00 0,068 >0,05

Таблица 4 — Распределение клеточных популяций вокруг капилляров в ткани интактной шейки матки

Показатель Средний ранг выборки Статистика критерия

Передняя губа Задняя губа Критерий Манна — Уитни

V, У2 V/ Р

ФЦ 301,65 298,34 495,00 0,408 >0,05

ФБ 303,42 296,57 1026,50 0,314 >0,05

ЛФ 303,00 298,00 750,00 0,221 >0,05

ПЛ 300,50 300,50 0,00 1 >0,05

МФ 300,50 300,50 0,00 1 >0,05

ГРЛ 300,50 300,50 0,00 1 >0,05

ПАР 320,99 279,08 6276,50 0,161 >0,05

проверки гипотезы НО по критерию Манна — Уитни во всех наблюдениях нет оснований отклонить гипотезу НО.

Таким образом, в передней губе и в задней губе типичное наблюдаемое число клеточных элементов одинаково.

Иммуногистохимическое исследование. В первой группе на долю маркера супрессии апоптоза Ьс1-2 в эпителии приходится 98% в тканях передней губы, а задней — 96%. В строме позитивных клеток не выявлено. Второй по частоте экспрессии в эпителии был Кд-67, который выявлялся с одинаковой частотой в задней (54%) и передней (55%) губе в строме (13% и 6% соответственно). Наи-

меньшая доля встречаемости приходится на экспрессию р53, который выявлялся в эпителии передней губы (17%) и задней губы (14%). В клетках стромы данного маркера не выявлено. Однако достоверных различий в обеих зонах по данным маркерам не было выявлено (р > 0,05).

Как было отмечено выше, клеточный инфильтрат в нормальной шейке матки был крайне скудный и представлен следующими клеточными популяциями — фиброцитами, фибробластами, макрофагами, лимфоцитами, плазмоцитами, гранулоцитарными лейкоцитами. Уточнение иммунодетекции в клетках инфильтрата проводили с помощью следующих моноклональных антител: NK1, CD4, CD8, CD79ct, CD138, CD68.

Экспрессия CD68 выявлялась во всех исследуемых случаях без исключения как в передней, так и в задней губе шейки матки; их количество практически одинаково в обеих зонах (достоверных различий не выявлено — р > 0,05). На его долю приходилось 80% всех клеточных популяций.

В изучаемых зонах интактной ШМ иммунодетекция Т-клеточных маркеров была вариабельна. NKl-позитивные клетки составили 5%. На долю CD4+ пришлось 3%, CD8 — 5% всего клеточного инфильтрата. Достоверных различий по экспрессии CD8, CD4, NK-1 в передней и задней губе не выявлено (р > 0,05). При анализе экспрессии маркеров В-лимфоцитов (CD79a) обнаружено, что на долю данной популяции пришлось 5% всего клеточного инфильтрата, а на CD 138 — 2%. Достоверных различий по экспрессии CD 138 и CD79a в передней и задней губе не выявлено (р > 0,05). Данные клетки располагались преимущественно субэпителиально и дискретно, исключительно вокруг венул и капилляров, рядом с артериолами данные клетки не выявлены. Площадь сосудистого русла в передней и задней губе практически одинакова и отличается всего на 0,24% (р > 0,05).

Экспрессия NGFR (рецептор фактора роста нервов) в нервных структурах в тканях передней и задней губы интактной ШМ была выявлена во всех исследуемых случаях. При этом большинство нервных волокон располагалось в глубоких отделах стромы (на отдалении от покровного эпителия ШМ). Следует отметить, что данное антитело накапливалось в клетках базального слоя многослойного плоского эпителия. В ткани передней губь: шейки матки показатель экспрессии NGFR значимо выше (р < 0,05) -— на 10,11% по сравнению с задней губой шейки матки.

Частный корреляционный анализ позволил получить матрицы корреляций, которые и явились исходным материалом для проведения факторного анализа. Исходными данными для компонентного анализа были коэффициенты парных частных корреляций (таблицы 5, 8). В тканях интактной ШМ в передней и задней губе с помощью факторного анализа (объем выборки: п = 300 единиц наблюдения) было установлено, что наиболее активным в плане формирования клеточных корреляционных связей является венулярный отдел МЦР. Так, вокруг венул

в ткани передней губы ШМ были выявлены три главных компоненты, накопленная информативность которых составила 87,752% (таблица 6). В задней губе ШМ вокруг венул накопленная информативность трех главных компонент составила 94,213% (таблица 9). Вокруг капиллярного отдела МЦР передней губы ШМ накопленная информативность трех главных компонент составила 86,424% (таблица 12). Для анализа и интерпретации выявленной факторной структуры использовали факторные нагрузки, значение которых больше или равно 0,3 (в таблицах 7, 10, 13 они выделены значком *).

Как видно из таблиц, в интактной ШМ вокруг венул как в передней (таблица 7), так и в задней губе (таблица 10) с первым фактором наиболее тесно связаны клеточные элементы ФЦ и ФБ, имеющие наибольшее собственное значение 1,48 и информативность 37,001% (в передней губе), в задней губе собственное значение равнялось 1,65205 и информативность — 41,301%.

Таблица 5 — Значения коэффициентов парных частных корреляций вокруг венул в интактной ШМ (передняя губа)

ФЦ ФБ ПЯЛ ПАР

ФЦ 1 0,4757 0,1060 0,0438

ФБ 0,4757 1 -0,0438 -0,0511

ГРЛ 0,1060 -0,0438 1 -0,0559

ПАР 0,0438 —0,0511 -0,0559 1

Таблица 6 — Собственные значения главных компонент вокруг венул в интактной ШМ (передняя губа)

Главные компоненты Собственное значение Информативность (процент дисперсии) Накопленная информативность (процент дисперсии)

1 1,48 37,001 37,001

2 1,0547 26,366 63,367

3 0,97539 24,385 87,752

4 0,48993 12,248 100

Со вторым фактором, имеющим собственное значение 1,0547 и информативность 26,366%, наиболее тесно связаны клеточные элементы ГРЛ (передняя губа — таблица 7). В задней губе аналогичная ситуация: собственное значение 1,08351 и информативность 27,088% (таблица 10).

С третьим фактором в передней губе (таблица 7), имеющим собственное значение 0,97539 и информативность 24,385%, наиболее тесно связаны клеточные элементы ПАР, в задней губе (таблица 10) прослеживается та же тенденция, собственное значение — 1,03294 и информативность 25,824%.

Таблица 7 — Факторные нагрузки вокруг венул в интактной ШМ (передняя губа)

Факторные нагрузки

Фактор Фактор Фактор

1 2 3

ФЦ 0,853453* 0,170129 0,103184

ФБ 0,864161* -0,13666 -0,10463

ГРЛ 0,017723 0,9875* -0,03669

ПАР -0,00217 -0,0359 0,993777*

* — значимо различные показатели.

Таблица 8 — Значения коэффициентов парных частных корреляций вокруг венул в интактной ШМ (задняя губа)

ФЦ ФБ ПЯЛ ПАР

ФЦ 1 0.6476 -0,1435 -0,0906

ФБ 0,6476 1 0,2093 0,1272

ГРЛ -0,1435 0,2093 1 -0,0612

ПАР -0,0906 0,1272 -0,0612 1

Таблица 9 — Собственные значения главных компонент вокруг венул в интактной ШМ (задняя губа)

Главные компоненты Собственное значенне Информативность (процент дисперсии) Накопленная информативность (процент дисперсии)

1 1,65205 41,301 41,301

2 1,08351 27,088 68,389

3 1,03294 25,824 94,213

4 0,231492 5,787 100

Таблица 10 — Факторные нагрузки вокруг венул в интактной ШМ (задняя губа)

Факторные нагрузки

Фактор Фактор Фактор

1 2 3

ФЦ 0,916824* -0,21093 -0,13817

ФБ 0,897684* 0,256241 0,1629

ГРЛ 0,012974 0,987348* -0,04011

ПАР 0,008101 -0,03743 0,994096*

* — значимо различные показатели.

Таким образом, выделив три основных фактора, которые обеспечивают постоянство паренхиматозно-стромальных взаимоотношений в интактной ШМ, можно условно назвать первый фактор стромообразующим, т.к. основными клетками в системе корреляционных связей были установлены фибробласт и фиброцит; они являются основными элементами в процессе стромообразования.

Второй основной фактор имеет корреляционные связи с гранулоцитарными лейкоцитами, которые одними из первых реагируют на клеточные повреждения и запускают механизм клеточной дезинтеграции. Следовательно, данный фактор можно условно назвать дезинтегрирующим.

Третий основной фактор в данной ситуации имеет устойчивые корреляции с паренхимой органа. Как известно, паренхиматозные клетки (в нашей ситуации — это многослойный плоский эпителий) начинают активно реагировать на любое повреждение путем пролиферации и созревания резервных клеток. Таким образом, они запускают механизмы регенерации. Учитывая данный факт, нам представляется возможным назвать третий фактор пролиферирующим.

Выделение этих трех основных факторов в интактной шейке матки поможет нам в дальнейшем в проведении корреляционного анализа при различной патологии ШМ, а именно при ВПЧ инфекции и раке шейки матки.

Особенности сосудистого компонента коммуникационных систем в тканях шейки матки при папилломавирусных поражениях

Во всех исследованных случаях была проведена ПЦР диагностика для выявления различных типов ВПЧ (таблица 11).

Таблица 11 — ПЦР диагностика ВПЧ-поражений шейки матки

Тип ВПЧ Количество женщин в абсолютных значениях

6 3

11 3

16 15

18 10

31 11

33 7

Сочетание типов вируса 10

Как видно из данных таблицы, наиболее часто определялись высокоонкоген-ные типы вируса папилломы человека. Важно отметить, что у 10 пациенток отмечалась ассоциация ВПЧ 16/18 и 6/11, 31/33-го типов.

Ткань ШМвне зоны поражения ВПЧ. Микрососуды в данной зоне были представлены артериолами, капиллярами и венулами и сохраняли типичное гистологическое строение.

Ткань ШМ в зоне поражения ВПЧ. Наблюдались признаки папилломавирус-ного поражения с явлениями ЦИН. Сосуды МЦР представлены артериолами, венулами и капиллярами со структурными изменениями в соединительнотканном каркасе сосудов. По мере нарастания степени тяжести ЦИН отмечались изменения в строении сосудов. При ЦИН 2-й и 3-й степеней наблюдалось выраженное разволокнение и набухание коллагенового и эластического каркаса в венулах и капиллярах, а также в артериолах. При ЦИН 2 в строме имелись капилляры, которые подрастают к многослойному плоскому эпителию. Однако широкой анастомозирующей сети не формируется. При ЦИН 3-й степени ближе к эпителиальному компоненту отмечалось увеличение количества сосудов МЦР (особенно капилляров и венул), которые образовывали обширные анастомазирующие сети с формированием крупных фокусов между эпителиальными пластами.

Морфометрический анализ. Вокруг сосудов МЦР количественный состав клеточного инфильтрата стромы вне зоны поражения ВПЧ и в зоне поражения ВПЧ представлен в таблицах 12-14.

Для проверки статистической гипотезы об отсутствии значимых различий между типичными уровнями анализируемых распределений использовали непараметрический критерий Манна—Уитни (таблицы 12-14).

Для анализа введем понятие среднего ранга выборки: V, — зона ВПЧ, У2 — вне зоны ВПЧ. Морфометрическое исследование клеточных популяций показало, что вокруг артериол в тканях, пораженных ВПЧ, достоверно возрастает (р < 0,05)

Таблица 12 — Распределение клеточных популяций вокруг артериол в различных зонах ткани ШМ при ВПЧ поражении

Средний ранг выборки Статистика критерия

Зона ВПЧ Вне зоны ВПЧ Критерий Манна—Уитни

V, V, ЛУ Р

ФЦ 295,44 303,56 1212,50 0,283 >0,05

ФБ 299,56 299,44 17,50 0,479 >0,05

ЛФ 385,79 212,50 25864,00 0,000 <0,05*

ПЛ 384,00 215,00 25226,00 0,00 <0,05*

МФ 368,79 230,21 20718,00 0,00 <0,05*

ГРЛ 352,26 246,74 15775,00 0,00 <0,05*

. ПАР 323,20 275,80 7086,00 7,69Е-08 <0,05*

число лимфоцитов, плазматических клеток, макрофагов, гранулоцитарных лейкоцитов и клеток паренхимы по сравнению с зоной вне поражения ВПЧ. Таким образом, есть основание отклонить гипотезу НО и принять Н1. Типичным является тот факт, что вне зоны ВПЧ наблюдаемое число клеточных элементов меньше, чем в зоне ВПЧ.

Однако средние ранги выборок по фиброцитам и фибробластам показали, что в зоне ВПЧ и вне зоны поражения типичное наблюдаемое число клеточных элементов одинаково (р > 0,05) (таблица 12), следовательно, нет оснований отклонить гипотезу НО.

При статистической обработке морфометрических показателей клеточных популяций вокруг венул и капилляров в тканях ВПЧ достоверно возрастает (р < 0,05) число лимфоцитов, плазматических клеток, макрофагов и гранулоцитарных лейкоцитов по сравнению с тканями вне зоны ВПЧ.

При этом средние ранги выборок по фиброцитам, фибробластам и клеткам паренхимы в зоне ВПЧ и вне зоны поражения достоверно не отличались (р > 0,05), следовательно, нет оснований отклонить гипотезу НО, поэтому в зоне ВПЧ и вне зоны ВПЧ типичное наблюдаемое число клеточных элементов одинаково (таблицы 13, 14).

Таблица 13 — Распределение клеточных популяций вокруг венул в различных зонах ткани ШМ при ВПЧ-поражении

Средний ранг выборки Статистика критерия

Зона ВПЧ Вне зоны ВПЧ Критерий Манна—Уитни

V, V, \У Р

ФЦ 292,37 306,63 2133,00 0,0156 >0,05

ФБ 294,46 304,54 1506,50 0,238 >0,05

ЛФ 431,50 167,50 39468,00 0,0000 <0,05*

ПЛ 428,00 171,00 38422,00 0,00000 <0,05*

МФ 410,42 188,58 33165,00 0,0000 <0,05*

ГРЛ 410,00 189,00 33040,00 0,0000 <0,05*

ПАР 295,73 303,27 1126,00 0,28 >0,05

Возможно, при прогрессии патологических изменений в ШМ на фоне вирусного поражения сосудистое русло, как один из структурных элементов, входящих в коммуникационные системы, обеспечивает двухстороннюю связь «макроорганизм — опухолевая ткань» и совместно с окружающими его клеточными популяциями может выступать самостоятельным звеном или посредником в развитии самых различных процессов, в том числе и опухолевых.

Таблица 14 — Распределение клеточных популяций вокруг капилляров в различных зонах ткани ШМ при ВПЧ-поражешш

Средний ранг выборки Статистика критерия

Зона ВПЧ Вне зоны ВПЧ Критерий Манна — Уитнн

V, V, \У Р

ФЦ 284,03 295,36 1636,00 0,207 >0,05

ФБ 284,66 294,68 1446,50 0,235 >0,05

ЛФ 433,87 165,13 40178,00 0,000 <0,05*

пл 433,00 166,00 39917,00 0,000 <0,05*

МФ 368,68 170,93 30551,00 0,000 <0,05*

ГРЛ 414,00 185,00 34236,00 0,000 <0,05*

ПАР 283,82 295,58 1697,50 0,186 >0,05

Иммуногистохимическое исследование. В данной исследуемой группе выявлено, что наибольшая экспрессия в эпителии приходится на маркер пролифе-ративной активности Кл-67 (87%). За ним по частоте экспрессии стоит р53, на его долю приходится около 51%. Последнее место занимает маркер супрессии апо-птоза Ьс1-2. На его долю приходится менее 12,5%. В строме количественное распределение данных маркеров меняется, но лидирующая роль остается за Кл-67 (9%). Вторым по частоте экспресс™ в строме был супрессор апоптозаЬс1-2 (7%). Наименьшая доля приходится на экспрессию р53 (3%). Доля р53-позитивных клеток в эпителии в 1,45 раза, а в строме в 4 раза больше в тканях ШМ вне зоны поражения ВПЧ, чем в зоне поражения ВПЧ. Что касается Кл-67, то количество этих позитивных клеток в эпителии в 1,3 раза, а в строме — в 2 раза больше в зоне поражения ВПЧ, чем в тканях ШМ вне зоны поражения. При анализе экспрессии Ьс1-2-позитивных клеток выявлено, что в эпителии этих клеток в 2,85 раза больше в зоне поражения ВПЧ, чем вне зоны поражения. В строме картина противоположная: в зоне поражения количество Ьс1-2-позитивных клеток в 5 раз меньше, чем вне зоны поражения. При этом имелись достоверные различия (р < 0,05) в количественном распределении вышеуказанных маркеров между зоной вне поражения ВПЧ и зоной поражения ВПЧ шейки матки.

Ткань ШМвне зоны поражения ВПЧ. В данной зоне в клеточном инфильтрате преобладала экспрессия СБ68. На его долю приходилось 38% всех клеточных популяций, их количество практически одинаковое в обеих зонах (р > 0,05). ЫК1, С04-позитивные клетки составили по 3%, С08+ клетки — 5% всего клеточного инфильтрата. Ж1, СБ4, С08-позитивные клетки располагались дискретно, субэпителиально, рядом с сосудами венулярного и капиллярного типов. Вокруг артериол данные клетки не выявлены.

С079а-позитивные клетки обнаруживались во всех случаях. На долю данной популяции пришлось около 6% всего клеточного инфильтрата. Данная клеточная популяция обнаруживалась и в более глубоких отделах стромы, причем исключительно вокруг венулярного и капиллярного отделов МЦР. Экспрессия CD138 — на долю данных клеток пришлось 3%. Выраженная цитоплазматическая экспрессия CD138 также была обнаружена в клетках базального и шиповатого слоев многослойного плоского эпителия.

Экспрессия NGFR в нервных структурах в тканях LLIM вне зоны поражения ВПЧ и в зоне поражения ВПЧ была выявлена во всех исследуемых случаях. При этом большинство нервных волокон располагалось в глубоких отделах стромы. Следует отметить, что данное антитело накапливалось в клетках базального слоя многослойного плоского эпителия. При этом экспрессия была слабой, а в редких случаях умеренной. В ряде наблюдений отмечалась неравномерность экспрессии NGFR в клетках эпителия. На протяженности всего среза встречались участки с негативной реакцией.

Ткань ШМ в зоне поражения ВПЧ. В данной зоне поражения в клеточном инфильтрате преобладала экспрессия CD68 (85% всех клеточных популяций). При сравнении этих двух зон (вне поражения и зоны поражения ВПЧ) количество С068-позитивных клеток в 2,2 раза больше в зоне поражения, чем вне зоны поражения ВПЧ (р < 0,05). NK1-позитивных клеток в 3,3 раза больше в зоне поражения, чем вне зоны поражения ВПЧ (р < 0,05).

Экспрессия CD4. На долю этой популяции Т-клеток пришлось 7% от всего клеточного инфильтрата. Количество СБ4-позитивных клеток в 2,3 раза больше в зоне поражения, чем вне зоны поражения ВПЧ (р < 0,05). CD8 + Т-клетки составили 37%, их количество в 7,4 раза больше в зоне поражения, чем вне зоны поражения ВПЧ (р < 0,05).

На долю С079а-позитивных клеток пришлось 25% всего клеточного инфильтрата, их количество в 4,1 раза больше в зоне поражения, чем вне зоны поражения ВПЧ (р < 0,05).

Экспрессия CD138. Иммунодетекция была выраженной, мембранной или цитоплазматической, на долю данных клеток пришлось 10% всего клеточного инфильтрата. Следует отметить, что выраженная цитоплазматическая экспрессия CD 138 также была обнаружена в клетках базального и шиповатого слоев многослойного плоского эпителия, экспрессия зависела от степени ЦИН в МПЭ шейки матки. Иммунодетекция CD 138 в МПЭ усиливалась от ЦИН 1 к ЦИН 2 и ЦИН 3-й степени, и наиболее ярко была выражена в ЦИН 3, где экспрессия наблюдалась во всех слоях МПЭ. При сравнении зоны вне поражения и зоны поражения ВПЧ прослеживается, что количество СБ138-позитивных клеток в 3,3 раза больше в зоне поражения, чем вне зоны поражения ВПЧ (р < 0,05). Площадь сосудистого русла в зоне поражения ВПЧ на 21,92% больше, чем вне зоны поражения, при этом различия были значимы (р < 0,05).

Экспрессия МвРЯ в нервных структурах в тканях ШМ в зоне поражения ВПЧ была выявлена во всех исследуемых случаях. Обращает на себя внимание, что экспрессия данного маркера в клетках МПЭ зависела от степени ЦИН. Так, при ЦИН 1-й степени отмечалась выраженная, но неравномерная экспрессия ИСРК в клетках эпителия на протяженности всего среза, иногда встречались участки с негативной реакцией. При ЦИН 2-й степени экспрессия ЫОРЯ была равномерной и хорошо выраженной в базальтам и парабазальном слоях МПЭ. В нервных волокнах сохранялась умеренная экспрессия данного антитела. При ЦИН 3-й степени отмечалась яркая экспрессия данного маркера во всех слоях МПЭ, в нервных волокнах экспрессия была слабо или умеренно выраженная. Экспрессия данного антитела была обнаружена даже в клетках воспалительного инфильтрата (лимфоциты, макрофаги). В ткани ШМ в зоне поражения ВПЧ количество ЫбРЯ-позитивных элементов на 21,10% больше, чем вне зоны поражения, при этом различия были достоверны (р < 0,05).

Корреляционный анализ. Вне зоны поражения ВПЧ — вокруг венулярного отдела МЦР было выявлено 11 корреляционных связей, вокруг капиллярного отдела — 20, а вокруг артериол — 40. В зоне поражения ВПЧ количество корреляционных связей возрастает в десятки раз и выражается следующими показателями: вокруг венулярного отдела МЦР было обнаружено 376 корреляционных связей, вокруг капиллярного отдела — 449, а вокруг артериол — 405. Все представленные корреляционные взаимосвязи являлись статистически значимыми (коэффициент корреляции /г/ — от 0,3 до 0,5, р < 0,05), имели как положительные, так и отрицательные значения. Провести полноценный анализ полученных результатов (всего было выявлено 1230 корреляционных связей в зоне поражения ВПЧ и 71 вне зоны поражения ВПЧ) не представлялось возможным: во-первых, из-за огромного их количества, а во-вторых, они не дают полного представления о происходящих межклеточных взаимоотношениях и не исключают влияния иных клеточных элементов на выявленные корреляционные связи, поэтому был проведен частный корреляционный анализ. Исходными данными для компонентного анализа вне зоны поражения Я/7'/вокруг различных сосудов были коэффициенты парных частных корреляций (таблицы 15-17).

Таблица 15 — Значения коэффициентов парных частных корреляций в ткани ШМ вокруг артериол вне зоны поражения ВПЧ

ФЦ ФБ МФ ПЯЛ ПАР

ФЦ 1 -0,1172 -0,3798 0,1779 0,3089

ФБ -0,1172 1 -0,2142 0,0900 0,1128

МФ -0,3798 -0,2142 1 0,3843 0,5489

ГРЛ 0,1779 0,0900 0,3843 1 -0,2375

ПАР 0,3089 0,1128 0,5489 -0,2375 1

Таблица 16 — Значения коэффициентов парных частных корреляций в ткани ШМ вокруг венул вне зоны поражения ВПЧ

ФЦ ФБ МФ ПАР

ФЦ 1 0,1171 -0,0245 0,0534

ФБ 0,1171 1 -0,1535 -0,1287

МФ 0,1171 -0,1928 1 -0,1287

ПАР 0,0534 -0,1287 0,2326 1

Учитывая, что при парном корреляционном анализе вокруг артериол, венул и капилляров была обнаружена 71 достоверная связь (диапазон /г/ от -0,1172 до 0,5406, р < 0,05) между различными клеточными популяциями, в результате факторного анализа после редукции исходных данных количество достоверных частных корреляционных связей претерпело конкретные изменения, которые мы приводим ниже.

Таблица 17 — Значения коэффициентов парных частных корреляций в ткани ШМ вокруг капилляров вне зоны поражения ВПЧ

ФЦ ФБ ЛФ МФ ПАР

ФЦ 1 0,1463 -0,0362 -0,0616 -0,0230

ФБ 0,1463 1 -0,0472 -0,1624 -0,0471

ЛФ -0,0362 -0,0472 1 -0,0225 -0,0102

МФ -0,0616 -0,1624 -0,0225 1 0,3061

ПАР -0,0230 -0,0471 -0,0102 0,3061 1

В тканях ШМ вне зоны поражения ВПЧ вокруг различных звеньев МЦР с помощью факторного анализа (объем выборки для артериол и венул составил: п = 299 единиц наблюдения, а для капилляров п = 279) было установлено, что наиболее активным в плане формирования клеточных корреляционных связей является венулярный отдел МЦР. Так, вокруг венул в данной зоне были выявлены три главных компоненты с процентом дисперсии 81,153% (таблица 19). Вокруг артериол накопленная информативность трех главных компонент составила 79,287% (таблица 18). Вокруг капиллярного отдела МЦР в данной зоне накопленная информативность трех главных компонент составила 69,537% (таблица 20).

Для анализа и интерпретации выявленной факторной структуры использовали факторные нагрузки, значение которых больше или равно 0,3 (в таблицах 21-23 они выделены значком*).

Вокруг артериол в ткани ШМ в данной зоне (таблица 21) с первым фактором (который мы обозначили в главе 3 как стромообразующий), имеющим наибольшее собственное значение 1,59051 и информативность 31,089%, наиболее тесно связаны клеточные элементы ЛФ и ПАР.

Со вторым фактором, имеющим собственное значение 1,29708 и информативность 25,354%, наиболее тесно связаны клеточные элементы ЛФ и МФ. Данный фактор мы определили как дезинтегрирующий.

Таблица 18 — Собственные значения главных компонент в ткани ШМ вокруг артериол вне зоны поражения ВПЧ

Главные компоненты Собственное значение Информативность (процент дисперсии) Накопленная информативность (процент дисперсии)

1 1,59051 31,089 31,089

2 1,29708 25,354 56,443

3 1,16869 22,844 79,287

4 1,05966 20,713 100

5 0 0 100

Таблица 19 — Собственные значения главных компонент в ткани ШМ вокруг венул вне зоны поражения ВПЧ

Главные компоненты Собственное значение Информативность (процент дисперсии) Накопленная информативность (процент дисперсии)

1 1,35277 33,819 33,819

А 2 1,07331 26,833 60,652

3 0,820045 20,501 81,153

4 0,753872 18,847 100

Таблица 20 — Собственные значения главных компонент в ткани ШМ вокруг капилляров вне зоны поражения ВПЧ

Главные компоненты Собственное значение Информативность (процент дисперсии) Накопленная информативность (процент дисперсии)

1 1,40174 28,035 28,035

2 1,10638 22,128 50,162

3 0,968742 19,375 ' 69,537

4 0,853624 17,072 86,610

5 0,66952 13,390 100,000

С третьим фактором (пролиферирующим), имеющим собственное значение 1,16869 и информативность 22,844%, наиболее тесно связаны клеточные элементы ФЦ и ЛФ.

Вокруг венулярного звена МЦР (таблица 22) с первым (стромообразующим) фактором, имеющим наибольшее собственное значение 1,35277 и информативность 33,819%, наиболее тесно связаны клеточные элементы МФ и ПАР.

Таблица 21 — Факторные нагрузки в ткани ШМ вохруг артериол вне зоны поражения ВПЧ

Факторные нагрузки

Фактор Фактор Фактор

1 2 3

ФЦ 0,116596 0,0911754 0,996275*

ФБ -0,0929567 -0,146565 0,00045472

ЛФ 0,670292* 0,590302* -0,488822*

МФ -0,213713 0,958707* 0,112764

ПАР 0,978075* -0,0658272 0,191083

Таблица 22 — Факторные нагрузки в ткани ШМ вокруг венул вне зоны поражения ВПЧ

Факторные нагрузки

Фактор Фактор Фактор

1 2 3

ФЦ 0,0138 0,9698* 0,0718

ФБ -0,097 0,0705 0,9887*

МФ 0,8154* -0,169 -0,013

ПАР 0,746551* 0,202705 -0,12789

Таблица 23 — Факторные нагрузки в ткани ШМ вокруг капилляров вне зоны поражения ВПЧ

Факторные нагрузки

Фактор Фактор Фактор

1 2 3

ФЦ 0,0728831 0,786946* 0,0334351

ФБ -0,169816 0,708319* -0,0776742

ЛФ -0,0191816 -0,0365239 0,995675*

МФ 0,782765* -0,182474 -0,0428381

ПАР 0,817092* 0,0745367 0,0209556

Со вторым дезинтегрирующим фактором, который имел собственное значение 1,07331 и информативность 26,833%, наиболее тесно связаны клеточные элементы ФЦ.

С третьим (пролиферирующим) фактором, имеющим собственное значение 0,820045 и информативность 20,501%, наиболее статистически тесно связаны клеточные элементы ФБ.

Вокруг капиллярного звена МЦР в ткани ШМ вне зоны поражения ВПЧ с первым фактором (стромообразующим), имеющим наибольшее собственное значение

1,40174 и информативность 28,035%, наиболее тесно связаны клеточные элементы МФ и ПАР.

Со вторым фактором (дезинтегрирующим), имеющим собственное значение 1,10638 и информативность 22,128%, наиболее тесно связаны клеточные элементы ФЦ и ФБ.

С третьим фактором (пролиферирующим), имеющим собственное значение 0,968742 и информативность 19,375%, наиболее тесно связаны клеточные элементы ЛФ.

Таким образом, проведя факторный анализ в данной зоне, мы видим, что по сравнению с интактной ШМ в зоне вне ВПЧ-поражения имеются выраженные изменения в корреляционных взаимосвязях между клеточными популяциями вокруг всех звеньев сосудистого русла. При этом нарушения выявляются во всех трех факторах: стромообразующем, дезинтегрирующем и пролиферирующем, что позволяет предположить, что уже даже в данной зоне происходят изменения в межклеточных взаимодействиях, которые впоследствии могут привести к прогрессий ВПЧ-поражений и формированию типичных морфологических изменений, характерных для данной патологии.

Исходными данными для компонентного анализа в ткани ШМ в зоне поражения ВПЧ вокруг различных сосудов были коэффициенты парных корреляций (таблицы 24-26). При парном корреляционном анализе вокруг артериол, венул и капилляров было обнаружено 1230 достоверных связей между клеточными популяциями. Однако в результате факторного анализа произошла редукция исходных данных и частные корреляционные связи претерпели определенные изменения.

В тканях ШМ в зоне поражения ВПЧ вокруг различных звеньев сосудистого русла с помощью факторного анализа (объем выборки для венул и капилляров составил п = 299 единиц наблюдения, а для артериол — п = 298) было установлено, что наиболее активным в плане формирования клеточных корреляционных связей является капиллярный отдел МЦР. Так, вокруг капилляров в зоне ВПЧ-поражения были выявлены три главных компоненты с процентом дисперсии 64,376% (таблица 29). Вокруг венулярного звена накопленная информативность трех главных компонент составила 63,558% (таблица 28). Вокруг артериол в данной зоне накопленная информативность трех главных компонент составила 62,662% (таблица 27).

Однако следует отметить, что разница по накопленной информативности между этими тремя звеньями МЦР незначительная (таблицы 27-29). Данный факт позволяет предположить, что все три звена активно влияют на формирование корреляционных взаимосвязей в зоне поражения ВПЧ, что было подтверждено при дальнейшем факторном анализе. Далее для анализа и интерпретации выявленной факторной структуры были использованы факторные нагрузки, значение которых больше или равно 0,3 (в таблицах 30-32 они выделены значком*).

Таблица 24 — Значения коэффициентов парных корреляций в ткани ШМ вокруг артериол в зоне поражения ВПЧ

ФЦ ФБ ЛФ ПЛ МФ ПЯЛ ПАР

ФЦ 1 0,0318 0,1100 -0,0071 -0,2788 0,3581 0,0917

ФБ 0,0318 1 -0,0255 -0,0845 -0,1921 0,1199 0,0162

ЛФ 0,1100 -0,0255 1 0,2702 0,3178 0,1002 0,1733

ПЛ -0,0071 -0,0845 0,2702 1 0,4833 0,2610 -0,0016

МФ -0,2788 -0,1921 0,3178 0,4833 1 0,1905 0,0252

ГРЛ 0,3581 0,1199 0,1002 0,2610 0,1905 1 0,0687

ПАР 0,0917 0,0162 0,1733 -0,0016 0,0252 0,0687 1

В ткани ШМ в зоне ВПЧ поражения вокруг артериол с первым фактором (стромообразующим), имеющим наибольшее собственное значение 1,88301 и информативность 26,9%, наиболее тесно связаны клеточные элементы ЛФ, ПЛ, МФ, ГРЛ.

Со вторым фактором {дезинтегрирующим), имеющим собственное значение 1,4607 и информативность 20,867%, наиболее тесно связаны клеточные элемента ФЦ, ФБ и ГРЛ.

Таблица 25 — Значения коэффициентов парных корреляций в ткани ШМ вокруг венул в зоне поражения ВПЧ

ФЦ ФБ ЛФ ПЛ МФ ПЯЛ ПАР

ФЦ 1 0,3173 0,2509 0,1945 -0,1105 0,1710 0,0068

ФБ 0,3173 1 -0,0817 -0,1242 -0,2147 -0,0869 -0,0566

ЛФ 0,2509 -0,0817 1 0,4492 0,1591 -0,1179 -0,0027

ПЛ 0,1945 -0,1242 0,4492 1 0,4357 0,0217 0,0435

МФ -0,1105 -0,2147 0,1591 0,4357 1 0,1472 0,0429

ГРЛ 0,1710 -0,0869 -0,1179 0,0217 0,1472 1 -0,1517

ПАР 0,0068 -0,0566 -0,0027 0,0435 0,0429 -0,1517 1

С третьим фактором (пролиферирующим), имеющим собственное значение 1,04263 и информативность 14,895%, наиболее тесно связаны клеточные элементы ЛФ и ПАР.

В данной зоне вокруг венулярного отрезка МЦР с первым фактором (страчо-образующим), имеющим наибольшее собственное значение 1,80955 и информативность 25,851%, наиболее тесно связаны клеточные элементы ФЦ, ЛФ, ПЛ, МФ.

Таблица 26 — Значения коэффициентов парных корреляций в ткани ШМ вокруг капилляров в зоне поражения ВПЧ

ФЦ ФБ ЛФ ПЛ МФ ПЯЛ ПАР

ФЦ 1 0,3903 0,3175 0,0948 -0,0336 0,0280 0,1402

ФБ 0,3903 1 -0,1234 -0,1611 -0,1806 -0,2588 -0,1166

ЛФ 0,3175 -0,1234 1 0,2483 0,3353 0,1120 -0,0586

ПЛ 0,0948 -0,1611 0,2483 1 0,2733 0,2105 0,1683

МФ -0,0336 -0,1806 0,3353 0,2733 1 0,0727 0,0901

ГРЛ 0,0280 -0,2588 0,1120 0,2105 0,0727 1 -0,2299

ПАР 0,1402 -0,1166 -0,0586 0,1683 0,0901 -0,2299 1

Таблица 27 — Собственные значения главных компонент в ткани ШМ вокруг артериол в зоне поражения ВПЧ

Главные компоненты Собственное значение Информативность (процент дисперсии) Накопленная информативность (процент дисперсии)

1 1,88301 26,9 26,9

2 1,4607 20,867 47,767

3 1,04263 14,895 62,662

4 0,957317 13,676 76,338

5 0,766826 10,955 87,293

6 0,549745 7,853 95,146

7 0,339773 4,854 100

Со вторым фактором (дезинтегрирующим), имеющим собственное значение 1,43644 и информативность 20,521%, наиболее тесно связаны клеточные элементы ФЦ, ФБ и МФ.

С третьим фактором (пролиферирующгш), имеющим собственное значение 1,20305 и информативность 17,186%, наиболее тесно связаны клеточные элементы ГРЛ и ПАР.

В зоне поражения ВПЧ вокруг капиллярного звена МЦР с первым фактором (страмообразующим), имеющим наибольшее собственное значение 1,8089 и информативность 25,841%, наиболее тесно связаны клеточные элементы ФБ, ЛФ, ПЛ, МФ и ГРЛ.

Со вторым фактором (дезинтегрирующим), имеющим собственное значение 1,47679 и информативность 21,09%, наиболее тесно связаны клеточные элементы ФЦ, ФБ и ЛФ.

Таблица 28 — Собственные значения главных компонент в ткани ШМ вокруг венул в зоне поражения ВПЧ

Главные компоненты Собственное значение Информативность (процент дисперсии) Накопленная информативность (процент дисперсии)

1 1,80955 25,851 25,851

2 1,43644 20,521 46,371

3 1,20305 17,186 63,558

4 0,933866 13,341 76,899

5 0,759592 10,851 87,75

6 0,45486 6,498 94,248

7 0,402643 5,752 100

Таблица 29 — Собственные значения главных компонент в ткани И1М вокруг капилляров в зоне поражения ВПЧ

Главные компоненты Собственное значение Информативность (процент дисперсии) Накопленная информативность (процент дисперсии)

1 1,8089 25,841 25,841

2 1,47679 21,097 46,938

3 1,22064 17,438 64,376

4 0,896588 12,808 77,185

5 0,70502 10,072 87,256

6 0,59026 8,432 95,689

7 0,301796 4,311 100,000

С третьим фактором (пролиферирующгт), имеющим собственное значение 1,22064 и информативность 17,43%, наиболее тесно связаны клеточные элементы ГРЛ и ПАР.

Проведенный анализ показывает, что в тканях ШМ в зоне поражения ВПЧ по сравнению с зоной вне ВПЧ-поражения увеличивается количество клеточных популяций, которые формируют корреляционные связи. При этом изменения наблюдаются вокруг всех трех звеньев МЦР и касаются всех трех выделенных факторов (стромообразующего, дезинтегрирующего и пролиферирующего). Так, вокруг артериол, венул и капилляров вне зоны ВПЧ наблюдались только по одной или две клеточные популяции, которые были связаны с первым, вторым и третьим факторами, а в зоне поражения — с ними связано три, четыре или пять клеточных популяций. Таким образом, наблюдается увеличение количества разных клеточных популяций, участвующих в корреляционных связях, тем самым нарушая тканевой гомеостаз. Эти нарушения в последующем ведут к изменению стро-мально-паренхиматозных взаимоотношений в ткани ШМ при ВПЧ-инфекции и,

возможно, вызывают прогрессию процесса, способствуют опухолевой трансформации эпителия.

Таблица 30 — Факторные нагрузки в ткани ШМ вокруг артериол в зоне поражения ВПЧ

Факторные нагрузки

Фактор Фактор Фактор

1 2 3

ФЦ -0,11641 0,785387* 0,221987

ФБ -0,20503 0,414824* -0,11619

ЛФ 0,462243* 0,033322 0,571834*

ПЛ 0,811387* 0,082185 -0,00724

МФ 0,830808* -0,27069 0,066892

ГРЛ 0,429931* 0,739797* -0,01404

ПАР -0,0964 0,022632 0,872929*

Таблица 31 — Факторные нагрузки в ткани ШМ вокруг венул в зоне поражения ВПЧ

Факторные нагрузки

Фактор Фактор Фактор

1 2 3

ФЦ 0,385542* 0,748715* 0,213381

ФБ -0,14662 0,763555* -0,01952

ЛФ 0,751958* 0,160856 -0,19686

ПЛ 0,852568* -0,08785 0,007772

МФ 0,5625* -0,51238* 0,191847

ГРЛ 0,0501 -0,06233 0,860349*

ПАР 0,098 -0,08851 -0,58733*

Таблица 32 — Факторные нагрузки в ткани ШМ вокруг капилляров в зоне поражения ВПЧ

Факторные нагрузки

Фактор Фактор Фактор

1 2 3

ФЦ 0,247531 0,854442* 0,0434186

ФБ -0,381052* 0,759879* 0,0719087

ЛФ 0,681214* 0326543* -0,223424

ПЛ 0,701315* -0,0370181 0,0421888

МФ 0,671344* -0,135474 0,0620541

ГРЛ 0,313294* -0,161256 -0,704894*

ПАР 0,27594 -0,0527646 0,834782*

Особенности сосудистого компонента коммуникационных систем в тканях рака шейки матки

В ткани шейки матки контрлатеральной зоны от РШМ наблюдали признаки папилломавирусного поражения и явления цервикальной интраэпителиальной неоплазии различной степени выраженности. Следует отметить, что изменения, наблюдаемые в сосудах и в строме данной зоны, были близки к изменениям, которые отмечались в ткани ШМ зоны поражения ВПЧ. Сосуды МЦР на свето-оптическом уровне сохраняли типичное гистологическое строение. Коллагеновый и эластический каркасы во всех типах сосудов был сохранены, однако отмечались истончение и разволокнение коллагеновых и эластиновых волокон, особенно в зонах выраженного клеточного инфильтрата и ЦИН 2-3-й степеней. По мере нарастания дисплазии многослойного плоского эпителия отмечали перестройку сосудов МЦР. Так, при ЦИН 1-й степени в субэпителиальной зоне в строме обнаруживались немногочисленные капилляры со слабо выраженными признаками пролиферации эндотелия. Как правило, диаметр данных сосудов небольшой, и располагались они горизонтально по отношению к многослойному плоскому эпителию. В тканях шейки матки с ЦИН 2-й степени наблюдались изменения гистоархитектоники сосудов. Венулы и капилляры имели вертикальное расположение и нередко подрастали к многослойному плоскому эпителию. При ЦИН 3-й степени в тканях ШМ наблюдали перестройку сосудистого русла, увеличивалось количество капилляров и венул в субэпителиальной зоне, выявляли увеличение венул и капилляров, подрастающих вплотную к базальной мембране. В отдельных случаях отмечали врастание сосудов в многослойный плоский эпителий. Также имел место обильный лимфоцитарный, плазмоцитарный и ги-стиоцитарный инфильтрат, который располагался периваскулярно в субэпителиальной зоне.

Ткань плоскоклеточного РШМ (зона опухши). Микрососуды были представлены артериолами, капиллярами и венулами и имели классическое строение. Однако присутствовали псевдососуды по типу примитивных тканевых каналов и щелей, ограниченных опухолевыми клетками. Следует отметить нарушение в гистотопографии сосудов микроциркуляторного русла. Рядом с раковыми комплексами находились преимущественно сосуды венозного и капиллярного типов. Они образовывали густую сосудистую сеть. Эластический и коллагеновый каркас сосудов имел признаки выраженной дезорганизации, на отдельных участках полностью разрушен опухолевыми клетками. Также отмечались опухолевая инвазия и опухолевые эмболы в сосудах. В сосудах капиллярного типа встречались явления пролиферации эндотелия. Вокруг сосудов венулярного и капиллярного типов наблюдалась выраженная лимфо-плазмоцитарная и гистиоцитарная инфильтрация.

Морфометрический анализ. Вокруг сосудов МЦР количественный состав клеточного инфильтрата стромы вне зоны поражения ВПЧ и в зоне поражения ВПЧ представлен в таблицах 33-35.

Таблица 33 — Распределение клеточных популяций вокруг артериол в ткани РШМ и контрлатеральной зоне

Средний ранг выборки Статистика критерия

Зона опухоли Контрлатеральная зона от РМШ Критерий Манна—Уитни

V, V, \У Р

ФЦ 305,5 . 314,49 1392 0,266* >0,05

ФБ 331,78 288,29 6730 0,0012 <0,05*

ЛФ 346,05 270,95 11566 6.5Е-08 <0,05*

ПЛ 331,23 286,98 6826 0,00069 <0,05

МФ 307,88 312,12 656,5 0,383 >0,05

ГРЛ 322,97 298 3866 0,035 <0,05*

ПАР 310,69 310,31 57,5 0,489 >0,05

Для анализа введем понятие среднего ранга выборки, V! — выборка в зоне опухоли, У2 — выборка вне зоны опухоли. Морфометрическое исследование клеточных популяций показало, что вокруг артериол в тканях РШМ достоверно возрастает (р < 0,05) число фибробластов, лимфоцитов, плазматических клеток и гранулоцитарных лейкоцитов по сравнению с контрлатеральной стороной от РШМ. Однако средний ранг выборки по фиброцитам, макрофагам и клеткам паренхимы показал, что в зоне опухоли и вне зоны опухоли типичное наблюдаемое число клеточных элементов одинаково (р > 0,05) (таблица 33).

При статистической обработке морфометрических показателей клеточных популяций вокруг венул и капилляров в тканях РШМ достоверно возрастает (р < 0,05) число ЛФ, ПЛ и ГРЛ по сравнению с контрлатеральной стороной от РШМ.

При этом средние ранги выборки по ФЦ, ФБ, МФ и клеткам ПАР в зоне опухоли и вне зоны опухоли достоверно не отличались (р > 0,05), следовательно, типичное наблюдаемое число клеточных элементов одинаково (таблицы 34, 35).

Морфометрическое исследование клеточных популяций выявило достоверное увеличение лимфоцитов, плазматических клеток, макрофагов вокруг артериол, капилляров, венул в тканях РШМ по сравнению с контрлатеральной стороной от РШМ. Указанные морфометрические изменения в тканях контрлатеральной стороны от РШМ позволяют утверждать, что данная зона ШМ должна исследоваться в практике для исключения поражений предопухолевыми и опухолевыми процессами и может являться одним из критериев индивидуального прогноза.

Таблица 34 — Распределение клеточных популяций вокруг венул в ткани РШМ и контрлатеральной зоне

Средний ранг выборки Статистика критерия

Зона опухоли Контрлатеральная зона от РМШ Критерий Манна—Уитни

V, V, Р

ФЦ 303,24 317,76 2252 0,156 >0,05

ФБ 317,8 303,2 2262,5 0,155 >0,05

ЛФ 341,75 279,25 9688 0,0000054 <0,05*

ПЛ 342,31 277,8 9982,5 0,0000013 <0,05*

МФ 324,24 296,76 4259,5 0,027 <0,05*

ГРЛ 325,88 295,12 4766,5 0,011 <0,05*

ПАР 302,46 318,54 2491,5 0,126 >0,05

Таблица 35 — Распределение клеточных популяций вокруг капилляров в ткани РШМ и контрлатеральной зоне

Средний ранг выборки Статистика критерия

Зона опухоли Контрлатеральная зона от РМШ Критерий Манна—Уитни

V, V, \У Р

ФЦ 311,45 309,55 295 0,447 >0,05

ФБ 319,11 301,89 2668 0,1158 >0,05

ЛФ 356,11 262,05 14509 2,19Е-11 <0,05*

ПЛ 345,1 266,52 12003 7,9Е-09 <0,05*

МФ 330,2 289,73 6262 0,0024 <0,05*

ГРЛ 330,37 290,63 6160 0,0021 <0,05*

ПАР 314,38 306,62 1202,5 0,293 >0,05

Иммуногистохимическое исследование. Третья группа наблюдений характеризовалась тем, что наибольшая экспрессия в эпителии приходилась на маркер пролиферативной активности Кл-67 (86%). За ним по частоте экспрессии стоит р53. На его долю приходится около 54%. Последнее место занимает маркер супрессии апоптоза Ьс1-2. На его долю приходится около 40%. В строме количественное распределение данных маркеров меняется. В строме доля позитивных клеток по Кл-67 снижается до 18%. Второй по частоте экспрессии в строме остается р53, однако его доля резко снижается и составляет всего около 10%. На последнем месте был супрессор апоптоза Ьс1-2. Однако его доля резко снижается до 6%. Доля р53-позитивных клеток в эпителии в 1,8 раза, а в строме в 3,5

раза больше в тканях зоны опухоли, чем в контрлатеральной зоне от РШМ. Что касается Ki-67, то количество этих позитивных клеток в эпителии в 1,2 раза, а в строме в 1,8 раза больше в зоне опухоли, чем в контрлатеральной зоне от РШМ. При анализе экспрессии bcl-2-позитивных клеток выявлено, что в эпителии этих клеток в 1,92 раза больше в зоне опухоли, чем в контрлатеральной зоне от РШМ. В строме картина противоположная — в зоне опухоли количество bcl-2-позитивных клеток в 1,3 раз меньше, чем в KJI3 от РШМ. При этом имелись значимые различия (р < 0,05) в количественном распределении вышеуказанных маркеров между КЛЗ от РШМ и зоной опухоли.

В ткани шейки матки контрлатеральной зоны от РШМ. В данной зоне в клеточном инфильтрате преобладала экспрессия CD68. На его долю приходилось 42% всех клеточных популяций. NK1, CD4, CD8 позитивные клетки составили по 9% на каждую популяцию. С079а-гтозитивные клетки составили 9%. В отдельных случаях С079а-позитивные клетки вообще не обнаруживались. Это наблюдалось в тех случаях, когда поражения МПЭ были минимальными, без явления ЦИН. На долю клеток, экспрессирующих CD138, пришлось 5% от всего клеточного инфильтрата.

Следует отметить, что выраженная цитоплазматическая экспрессия CD138 также была обнаружена в клетках базального и шиповатого слоев многослойного плоского эпителия. Экспрессия зависела от степени ЦИН в МПЭ шейки матки. Иммунодетекция CD 138 в МПЭ усиливалась от ЦИН 1 к ЦИН 2 и ЦИН 3-й степени и наиболее ярко была выражена в ЦИН 3, где экспрессия наблюдалась во всех слоях МПЭ.

Экспрессия NGFR в нервных структурах в тканях контрлатеральной зоны от РШМ была выявлена во всех исследуемых случаях. При этом нервные волокна располагались как в глубоких отделах стромы, так и субэпителиально. В ряде случаев клетки инфильтрата окружали NGFR-позитивные нервные волокна. Данное антитело накапливалось в клетках базального слоя многослойного плоского эпителия. Экспрессия данного маркера в клетках МПЭ зависела от степени ЦИН. Так, при ЦИН 1-й степени отмечалась выраженная, но неравномерная экспрессия NGFR в клетках эпителия на протяженности всего среза. Иногда встречались участки с негативной реакцией. При ЦИН 2-й степени экспрессия NGFR была равномерной и хорошо выраженной в базальном и парабазальном слоях МПЭ. В нервных волокнах сохранялась умеренная экспрессия данного антитела. При ЦИН 3-й степени отмечалась яркая экспрессия данного маркера во всех слоях МПЭ.

Ткань плоскоклеточного РШМ (зона опухоли). В клеточном инфильтрате преобладала экспрессия CD68. На его долю приходилось 92% всех клеточных популяций. При сравнении этих двух зон (контрлатеральной зоны от РШМ и зоны опухоли) количество С068-позитивных клеток в 2,3 раза больше в зоне опухоли, чем в контрлатеральной зоне от РШМ (р < 0,05).

ИК1 -позитивные клетки составили 25% в клеточном инфильтрате. При сравнении этих двух зон (контрлатеральной зоны от РШМ и зоны опухоли) количество №С1-позитивных клеток в 7,5 раза больше в зоне опухоли, чем в контрлатеральной зоне от РШМ (р < 0,05). На СБ4 + пришлось 14% от всего клеточного инфильтрата. Количество С04-позитивных клеток в 2 раза больше в зоне опухоли, чем в контрлатеральной зоне от РШМ (р < 0,05). СБ8-позитивные клетки составили 22% всего клеточного инфильтрата, их количество в 3,8 раза больше в зоне опухоли, чем в контрлатеральной зоне от РШМ (р < 0,05). С079а-положительные клетки составили 42%, их количество в 6 раз больше в зоне опухоли, чем в контрлатеральной зоне от РШМ (р < 0,05).

Экспрессия С0138 (маркера плазматических клеток) выявлена во всех случаях. Иммунодетекция была слабой, цитоплазматической. На долю данных клеток пришлось 14% всего клеточного инфильтрата. Плазматические клетки располагались преимущественно субэпителиально и дискретно и исключительно вокруг венул и капилляров. Следует обратить внимание, что при сравнении контрлатеральной зоны от РШМ и зоны опухоли видно, что количество СБ 13 8-позитивных клеток в 2 раза больше в зоне опухоли, чем в контрлатеральной зоне от РШМ. При этом имелись значимые различия (р < 0,05) по данным показателям.

При сравнении площади сосудистого русла контрлатеральной зоны от РШМ и зоны опухоли видно, что площадь сосудистого русла в зоне опухоли на 17,86% больше, чем контрлатеральной зоны от РШМ. При этом различия были значимы (Р < 0,05).

Экспрессия N0?!?. в нервных структурах в тканях контрлатеральной зоны от РШМ и в зоне опухоли была выявлена во всех исследуемых случаях. Отмечалась выраженная иммунодетекция в нервных волокнах в данной зоне. При этом большинство нервных волокон располагались в строме между опухолевыми клетками. На отдельных участках нервные структуры находились в непосредственной близости от раковых клеток. Следует отметить, что данное антитело накапливалось в клетках сохраненных участков базального слоя многослойного плоского эпителия. При этом экспрессия была слабой или умеренной. В опухолевых клетках раковых комплексов данное тело не экспрессировалось.

В ткани РШМ в зоне опухоли количество КОБЯ-позитивных элементов на 48,3% больше, чем в контрлатералыюй зоне от РШМ. При этом различия были значимы (р < 0,05).

Корреляционный анализ. В контрлатеральной зоне от РШМ вокруг венуляр-нош отдела МЦР были выявлены 382 корреляционные связи, вокруг капиллярного отдела — 276, а вокруг артериол — 350. В зоне опухоли количество корреляционных связей резко возрастает и выражается следующими показателями: вокруг венулярного отдела МЦР было обнаружено 540 корреляционных связей, вокруг капиллярного отдела — 590, а вокруг артериол — 420. Все представленные корреляционные взаимосвязи являлись средними или сильными, высоко-

значимыми (коэффициент корреляции /г/ — от 0,3 до 1,0, р < 0,05). Они были как с положительными, так и с отрицательными значениями. Таким образом, провести полноценный анализ полученных результатов (всего было выявлено 1008 корреляционных связей в контрлатеральной зоне от РМШ и 2700 в зоне опухоли) не представлялось возможным.

Исходными данными для компонентного анализа в контрлатеральной зоне от РМШ вокруг артериол, венул и капилляров сосудов были коэффициенты парных корреляций (таблицы 36-38).

Таблица 36 — Значения коэффициентов парных частных корреляций вокруг артериол в ткани контрлатеральной зоны от РШМ

ФЦ ФБ ЛФ ПЛ МФ ПЯЛ ПАР

ФЦ 1 0,5971 0,0513 -0,1294 0,1598 0,0817 0,0646

ФБ 0,5971 1 0,1025 0,0587 0,2592 0,0725 -0,033

ЛФ 0,0513 0,1025 1 0,5558 0,1427 0,0145 0,03

ПЛ -0,1294 0,0587 0,5558 1 0,0864 0,0984 -0,1121

МФ 0,1598 0,2592 0,1427 0,0864 1 0,0609 0,123

ГРЛ 0,0817 0,0725 0,0145 0,0984 0,0609 1 0,1068

ПАР 0,0646 -0,033 0,03 -0,1121 0,123 0,1068 1

Подобные изменения наблюдались в тканях ШМ в зоне поражения ВПЧ. Так, вокруг капилляров в контрлатеральной зоне от РШМ были выявлены три главных компоненты с процентом дисперсии 65,031% (таблица 41).

Вокруг венулярного звена накопленная информативность трех главных компонент составила 60,933% (таблица 40). Вокруг артериол в данной зоне накопленная информативность трех главных компонент составила 64,02% (таблица 39).

Таблица 37 — Значения коэффициентов парных частных корреляций вокруг венул в ткани контрлатеральной зоны от РШМ

ФЦ ФБ ЛФ ПЛ МФ ПЯЛ ПАР

ФЦ 1 0,6226 -0,0148 -0,0673 0,0443 0,1646 -0,0221

ФБ 0,6226 1 -0,0264 0,0373 0,1829 -0,1463 0,0493

ЛФ -0,0148 -0,0264 1 0,3637 0,0747 0,0749 0,0569

ПЛ -0,0673 0,0373 0,3637 1 0,0737 0,1297 0,0604

МФ 0,0443 0,1829 0,0747 0,0737 1 0,0854 0,1633

ГРЛ 0,1646 -0,1463 0,0749 0,1297 0,0854 1 0,1214

ПАР -0,0221 0,0493 0,0569 0,0604 0,1633 0,1214 1

Следует отметить, что разница по накопленной информативности между этими тремя звеньями МЦР была значительной (таблицы 39—41). Исходя из данного факта, можно предположить, что все три звена сосудистого русла участвуют в формировании корреляционных взаимосвязей в контрлатеральной зоне от РШМ. Далее для анализа и интерпретации выявленной факторной структуры были использованы факторные нагрузки, значение которых больше или равно 0,3 (в таблицах 42-^4 они выделены значком*).

Таблица 38 — Значения коэффициентов парных частных корреляций вокруг капилляров в ткани контрлатеральной зоны от РШМ

ФЦ ФБ ЛФ ПЛ МФ ПЯЛ ПАР

ФЦ 1 0,6941 -0,0757 0,0349 0,1922 0,0801 0,1376

ФБ 0,6941 1 -0,0391 -0,0759 0,2377 0,0077 -0,0923

ЛФ -0,0757 -0,0391 1 0,4992 0,0686 0,0977 0,0387

ПЛ 0,0349 -0,0759 0,4992 1 0,0298 0,0588 -0,0877

МФ 0,1922 0,2377 0,0686 0,0298 1 0,1508 0,2116

ГРЛ 0,0801 0,0077 0,0977 0,0588 0,1508 1 0,0095

ПАР 0,1376 -0,0923 0,0387 -0,0877 0,2116 0,0095 1

Таблица 39 — Собственные значения главных компонент вокруг артериол в ткани контрлатеральной зоны от РШМ

Главные компоненты Собственное значение Информативность (процент дисперсии) Накопленная информативность (процент дисперсии)

1 1,813 25,90 25,9

2 1,554 22,20 48,1

3 1,114 15,92 64,02

4 0,944 13,49 77,51

5 0,799 11,41 88,92

6 0,444 6,34 95,26

7 0,332 4,74 100

В тканях TUM в контрлатеральной зоне от РШМ вокруг артериол с первым фактором (стромообразующим), имеющим наибольшее собственное значение 1,813 и информативность 25,9%, наиболее тесно связаны клеточные элементы ФЦ, ФБ и МФ.

Таблица 40 —- Собственные значения главных компонент вокруг венул в ткани контрлатеральной зоны от РШМ

Главные компоненты Собственное значение Информативность (процент дисперсии) Накопленная информативность (процент дисперсии)

1 1,67102 23,872 23,872

2 1,49938 21,420 45,291

3 1,0949 15,641 60.933

4 0,9944 14,349 75,281

5 0,816802 11,669 86,950

6 0,647447 9,249 96,199

7 0,266054 3,801 100,000

При парном корреляционном анализе в данной зоне вокруг артериол, венул и капилляров было обнаружено 1008 достоверных связей между клеточными популяциями. Однако в результате факторного анализа произошла редукция исходных данных и частные корреляционные связи претерпели определенные изменения.

В тканях ШМ контрлатеральной зоны от РШМ вокруг различных звеньев МЦР с помощью факторного анализа (объем выборки для артериол и венул составил: п = 310, а для капилляров — п = 305 единиц наблюдения) было установлено, что наиболее активным в плане формирования клеточных корреляционных связей является капиллярный отдел МЦР.

Таблица 41 — Собственные значения главных компонент вокруг капилляров в ткани контрлатеральной зоны от РШМ

Главные компоненты Собственное значение Информативность (процент дисперсии) Накопленная информативность (процент дисперсии)

1 1,84183 26,312 26,312

2 1,54397 22,057 48,369

3 1,16637 16,662 65,031

4 0,965053 13,786 78,818

5 0,741183 10,588 89,406

6 0,518571 7,408 96,814

7 0,223016 3,186 100,000

Со вторым фактором (дезинтегрирующим), имеющим собственное значение 1,554 и информативность 22,20%, наиболее тесно связаны клеточные элементы ЛФ и ПЛ.

С третьим фактором (пролиферирующим), имеющим собственное значение 1,114 и информативность 15,92%, наиболее тесно связаны клеточные элементы МФ, ГРЛ и ПАР.

В тканях ШМ в контрлатеральной зоне от РШМ вокруг венул с первым фактором (страмообразующим), имеющим наибольшее собственное значение 1,67102 и информативность 23,872%, наиболее тесно связаны клеточные элементы ФЦ и ФБ.

Со вторым фактором (дезинтегрирующим), имеющим собственное значение 1,49938 и информативность 21,420%, наиболее тесно связаны клеточные элементы ЛФ и ПЛ.

С третьим фактором (пролиферирующим), имеющим собственное значение 1,0949 и информативность 15,641%, наиболее тесно связаны клеточные элементы МФ, ГРЛ и ПАР.

В тканях ШМв контрлатералъной зоне от РШМ вокруг капилляров с первым фактором (стромообразующим), имеющим наибольшее собственное значение 1,84183 и информативность 26,312%, наиболее тесно связаны клеточные элементы ФЦ и ФБ.

Со вторым фактором (дезинтегрирующим), имеющим собственное значение 1,54397 и информативность 22,057%, наиболее тесно связаны клеточные элементы ЛФ и ПЛ.

С третьим фактором (пролиферирующим), имеющим собственное значение 1,16637 и информативность 16,662%, наиболее тесно связаны клеточные элементы МФ, ГРЛ и ПАР.

Как видно из таблиц 42,43 и 44, прослеживается однотипность корреляционных взаимосвязей вокруг различных звеньев сосудистого русла в контрлатеральной зоне от РШМ.

Таблица 42 — Факторные нагрузки вокруг артериол в ткани контрлатеральной зоны от РШМ

Факторные нагрузки

Фактор Фактор Фактор

1 2 3

ФЦ 0,86* -0,12 0,05

ФБ 0,89* 0,09 -0,03

ЛФ 0,09 0,85* 0,07

ПЛ -0,06 0,89* -0,03

МФ 0,40* 0,22 0,38*

ГРЛ 0,05 0,1 0,58*

ПАР -0,05 -0,14 0,82*

Так, вокруг артериол, венул и капилляров в данной зоне с первым фактором (изначально мы его определили как стромообразующий) тесно коррелировали фибробласты и фиброциты (исключение составил артериолярный отрезок, вокруг которого отмечалась зависимость и от макрофагов). Второй фактор, который был обозначен как дезинтегрирующий, наиболее тесно связан с популяциями лимфоцитов и плазмоцитов. Третий фактор — пролиферирующий — наиболее тесно коррелировал с макрофагами, полиморфноядерными лейкоцитами и паренхимой. Такое распределение корреляционных взаимосвязей можно объяснить тем, что в данной зоне морфологически были выявлены признаки ВПЧ-поражения ШМ. Имеющиеся признаки ЦИН различной степени выраженности укладываются в картину прогрессии и нарастания пролиферативных процессов в многослойном плоском эпителии.

Таблица 43 — Факторные нагрузки вокруг венул в ткани контрлатеральной зоны от РШМ

Факторные нагрузки

Фактор Фактор Фактор

1 2 3

ФЦ 0,873663* -0,0397784 0,0584764

ФБ 0,912878* 0,012858 0,00207742

ЛФ -0,0129177 0,819022* 0,0438434

ПЛ -0,009287 0,820225* 0,0927618

МФ 0,20317 0,0587592 0,595788*

ГРЛ -0,0571667 0,13161 0,57931*

ПАР -0,0455422 -0,0458669 0,741003*

Таблица 44 — Факторные нагрузки вокруг капилляров в ткани контрлатеральной зоны от РМШ

Факторные нагрузки

Фактор Фактор Фактор

1 2 3

ФЦ 0,877492* -0,021468 0,166438

ФБ 0,930697* -0,0409872 -0,017682

ЛФ -0,0789828 0,835983* 0,13472

ПЛ 0,00944361 0,861854* -0,0503239

МФ 0,287801 0,0733364 0,677123*

ГРЛ 0,0533291 0,222702 0,37694*

ПАР -0,132518 -0,165567 0,794331*

Исходными данными для компонентного анализа в зоне опухоли (РШМ) вокруг артериол, венул и капилляров сосудов были коэффициенты парных корреляций (таблицы 45-47).

Таблица 45 — Значения коэффициентов парных корреляций вокруг артериол в зоне опухоли (РШМ)

ФЦ ФБ ЛФ ПЛ МФ ПЯЛ ПАР

ФЦ 1 0,5467 -0,1657 -0,1808 0,1929 0,0702 0,1874

ФБ 0,5467 1 -0,0515 0,1674 0,1734 -0,0411 -0,1638

ЛФ -0,1657 -0,0515 1 0,3912 -0,0535 0,0879 0,1583

ПЛ -0,1808 0,1674 0,3912 1 0,1504 0,207 -0,0143

МФ 0,1929 0,1734 -0,0535 0,1504 1 0,1109 0,052

ГРЛ 0,0702 -0,0411 0,0879 0,207 0,1109 1 -0,0514

ПАР 0,1874 -0,1638 0,1583 -0,0143 0,052 -0,0514 1

Таблица 46 — Значения коэффициентов парных корреляций вокруг венул в зоне опухоли (РШМ)

ФЦ ФБ ЛФ ПЛ МФ ПЯЛ ПАР

ФЦ 1 0,5478 -0,1243 -0,1066 0,1012 0,0327 -0,0413

ФБ 0,5478 1 0,1124 0,0515 0,3360 0,1713 -0,0486

ЛФ -0,1243 0,1124 1 0,5840 0,3830 0,2897 0,1455

ПЛ -0,1066 0,0515 0,5840 1 0,3333 0,3095 0,2376

МФ 0,1012 0,3360 0,3830 0,3333 1 0,1246 0,1767

ГРЛ 0,0327 0,1713 0,2897 0,3095 0,1246 1 0,0451

ПАР -0,0413 -0,0486 0,1455 0,2376 0,1767 0,0451 1

Таблица 47 — Значения коэффициентов парных корреляций вокруг капилляров в зоне опухоли (РШМ)

ФЦ ФБ ЛФ ПЛ МФ ПЯЛ ПАР

ФЦ 1 0,6476 -0,0623 -0,1462 0,1437 -0,0494 0,1074

ФБ 0,6476 1 -0,2270 0,0650 0,0805 -0,0126 -0,0413

ЛФ -0,0623 -0,2270 1 0,5525 0,0400 -0,0336 0,0466

ПЛ -0,1462 0,0650 0,5525 1 0,0356 0,1756 -0,0827

МФ 0,1437 0,0805 0,0400 0,0356 1 0,1428 -0,0202

ГРЛ -0,0494 -0,0126 -0,0336 0,1756 0,1428 1 -0,0203

ПАР 0,1074 -0,0413 0,0466 -0,0827 -0,0202 -0,0203 1

Таблица 48 — Собственные значения главных компонент вокруг артериол в зоне опухоли (РШМ)

Главные компоненты Собственное значение Информативность (процент дисперсии) Накопленная информативность (процент дисперсии)

1 1,69517 24,217 24,217

2 1,5364 21,949 46,165

3 1,14882 16,412 62,577

4 0,985493 14,078 76,655

5 0,851936 12,171 88,826

6 0,529476 7,564 96,390

7 0,25271 3,610 100,000

При парном корреляционном анализе в данной зоне вокруг артериол, венул и капилляров было обнаружено 2700 достоверных связей между клеточными популяциями, после проведения факторного анализа произошла редукция исходных данных и упрощение частных корреляционных связей.

В тканях ШМ в зоне РШМ вокруг различных звеньев МЦР с помощью факторного анализа (объем выборки для артериол и капилляров составил п = 310, а для венул — п = 309 единиц наблюдения) было установлено, что наиболее активным в плане формирования клеточных корреляционных связей является венулярный отдел МЦР. Подобные изменения наблюдались в тканях ШМ вне зоны поражения ВПЧ. Так, вокруг венул в данной зоне были выявлены три главных компоненты, при этом накопленная информативность составила 68,802% (таблица 49).

Таблица 49 — Собственные значения главных компонент вокруг венул в зоне опухоли (РШМ)

Главные компоненты Собственное значение Информативность (процент дисперсии) Накопленная информативность (процент дисперсии)

1 2,21288 31,613 31,613

2 1,62275 23,182 54,795

3 1,080492 14,007 68,802

4 0,721361 11,734 80,535

5 0,57929 8,276 88,811

6 0,414646 5,924 94,735

7 0,36858 5,265 100,000

Следующим звеном по активности формирования корреляционных связей был капиллярный отдел МЦР, где накопленная информативность трех главных компонент составила 63,072% (таблица 50). Наименьшую активность по формиро-

ванию корреляционных связей в данной зоне имели артериолы, где накопленная информативность трех главных компонент составила 62,577% (таблица 48).

Следует отметить, что разница по накопленной информативности между этими тремя звеньями МЦР была значительная (таблицы 48-50). Исходя из данного факта, можно предположить, что все три звена сосудистого русла участвуют в формировании корреляционных взаимосвязей в зоне РШМ. Далее для анализа и интерпретации выявленной факторной структуры были использованы факторные нагрузки, значение которых больше или равно 0,3 (в таблицах 51-53 они выделены значком*).

В тканях ШМ в зоне РМШ вокруг артериол с первым фактором (стромо-образующим), имеющим наибольшее собственное значение 1,69517 и информативность 24,217%, наиболее тесно связаны клеточные элементы ФЦ, ФБ и МФ.

Со вторым фактором (дезинтегрирующим), имеющим собственное значение 1,5364 и информативность 21,949%, наиболее тесно связаны клеточные элементы ЛФ, ПЛ и ПЯЛ.

С третьим фактором (пролиферирующим), имеющим собственное значение 1,14882 и информативность 16,412%, наиболее тесно связаны клеточные элементы ЛФ и ПАР.

В тканях ШМ в зоне РМШ вокруг венул с первым фактором {стромообразующим), имеющим наибольшее собственное значение 2,21288 и информативность 31,613%, наиболее тесно связаны клеточные элементы ЛФ, ПЛ, МФ и ГРЛ.

Со вторым фактором (дезинтегрирующим), имеющим собственное значение 1,62275 и информативность 23,182%, наиболее тесно связаны клеточные элементы ФЦ, ФБ и МФ.

С третьим фактором (пролиферирующим), имеющим собственное значение 1,080492 и информативность 14,007%, наиболее тесно связаны клеточные элементы МФ, ГРЛ и ПАР.

В тканях ШМ в зоне РМШ вокруг капилляров с первым фактором (стромо-образующим), имеющим наибольшее собственное значение 1,81664 и информативность 25,952%, наиболее тесно связаны клеточные элементы ФЦ, ФБ и МФ.

Таблица 50 — Собственные значения главных компонент вокруг капилляров в зоне опухоли (РШМ)

Главные компоненты Собственное значение Информативность (процент дисперсии) Накопленная информативность (процент дисперсии)

1 1,81664 25,952 25,952

2 1,47918 21,131 47,083

3 1,11921 15,989 63,072

4 1,01921 14,560 77,632

5 0,872849 12,469 90,101

6 0,497823 7,112 97,213

7 0,195079 2,787 100,000

Таблица 51 — Факторные нагрузки вокруг артериол в зоне опухоли (РШМ)

Факторные нагрузки

Фактор Фактор Фактор

1 г 3

ФЦ 0,842374* -0,242402 0,211161

ФБ 0,807536* 0,0793851 -0.243799

ЛФ -0,189841 0,684923* 0,351601*

ПЛ 0,0622993 0,854995* м0,0602145

МФ 0,511399* 0,232419 0,0569773

ГРЛ 0,13272 0,470432* -0,117053

ПАР 0,0537656 -0,0315022 0,952356*

Таблица 52 — Факторные нагрузки вокруг венул в зоне опухоли (РШМ)

Факторные нагрузки

Фактор Фактор Фактор

1 2 3

ФЦ -0,166877 0,84822* -0,0323304

ФБ 0,160977 0,87665* -0,0220328

ЛФ 0,808889* -0,0260418 0,188856

ПЛ 0,783715* -0,0728181 0,27049

МФ 0,451897* 0,395376* 0,458443*

ГРЛ 0,680325* 0,117777 -0,339012*

ПАР 0,0790659 -0,0697293 0,846202*

Таблица 53 — Факторные нагрузки вокруг капилляров в зоне опухоли (РШМ)

Факторные нагрузки

Фактор Фактор Фактор

1 2 3

ФЦ 0,902122* -0,0605467 -0,0923589

ФБ 0,885853* -0,0561334 0,0590251

ЛФ -0,110232 0,886857* -0,140257

ПЛ 0,00195038 0,866231* 0,191862

МФ 0,257932 0,0778757 0,559502*

ГРЛ -0,0504097 0,0706611 0,763739*

ПАР 0,114331 0,0606031 -0,446013*

Со вторым фактором (дезинтегрирующим), имеющим собственное значение 1,47918 и информативность 21,131%, наиболее тесно связаны клеточные элементы ЛФ и ПЛ.

С третьим фактором (прачиферирующим), имеющим собственное значение 1,11921 и информативность 15,989%, наиболее тесно связаны клеточные элементы МФ, ГРЛ и ПАР.

При сравнении этих двух зон (контрлатеральной зоны от РШМ и зоны опухоли) обращает на себя внимание, что вокруг различных звеньев МЦР идет смена клеточных популяций, которые коррелировали со стромообразующим, дезинтегрирующим и пролиферирующим факторами. Наиболее стабильными вокруг артериол были корреляции между первым фактором (стромообразующим) и ФЦ, ФБ и МФ, данная зависимость сохранялась в обеих зонах. Следующим по стабильности был второй фактор (дезинтегрирующий), который сохранил зависимость от ЛФ и ПЛ, однако в зоне РШМ он стал зависим от ГРЛ. Самым нестабильным оказался третий фактор (пролиферирующий), который кардинально поменял корреляционную зависимость от клеточных популяций. Если в контрлатеральной зоне от РШМ третий фактор зависел от МФ, ГРЛ и ПАР, то в зоне опухоли данный фактор зависел от популяции ЛФ и ПАР. Стабильность ПАР легко объяснима: если была бы утеряна данная корреляция, то ни о каком опухолевом росте, возможно, не могла бы идти речь, так как пролиферация и следующая за ней клеточная атипия МПЭ являются основными признаками прогрессии злокачественного процесса.

ВЫВОДЫ

1. В тканях интактной шейки матки и в зоне вне поражения ВПЧ имеются типичные по гистологическому строению сосуды МЦР, но при этом выявлены гистотопографические особенности расположения сосудов микроциркулятор-ного русла по отношению к многослойному плоскому эпителию (ближе всего к эпителию расположены капилляры и венулы, а артериолы залегают в более глубоких отделах стромы), что свидетельствует о начальных процессах перестройки сосудов МЦР даже в зоне вне поражения ВПЧ.

2. В тканях ШМ как в зоне поражения ВПЧ, так и в тканях контрлатеральной зоны от РШМ по мере нарастания ЦИН в ткани шейки матки идет перестройка сосудов МЦР, которая сопровождается изменением гистоархитектоники и гистотопографии сосудов МЦР и характеризуется формированием сосудисто-эпителиальных ассоциаций, которые представлены венулами или капиллярами, окруженными комплексами эпителиальных клеток. Количество сосудисто-эпителиальных ассоциаций увеличивается по мере прогрессирования ЦИН и перехода в рак шейки матки.

3. В тканях зоны «рак шейки матки» имеются гистотопографические особенности сосудов МЦР, которые проявляются хаотичным расположением капилляров, венул и артериол, а также гиперплазированной сосудистой сетью рядом с атипичным эпителием.

4. В тканях интактной шейки матки, шейки матки при поражении ВПЧ и рака шейки матки по мере нарастания ЦИН и трансформации в раковый процесс значимо увеличиваются не только площадь сосудистого русла, но и количество

NGFR-позитивных структур, что подтверждает значимую роль коммуникационных систем в становлении, развитии и прогрессии рака шейки матки.

5. В тканях интактной ШМ и в зоне вне поражения ВПЧ при морфометрическом исследовании обнаружена слабовыраженная клеточная инфильтрация, которая была представлена различными клеточными популяциями (фиброцитами, фибробластами, макрофагами, единичными лимфоцитами, плазмоцитами и полиморфноядерными лейкоцитами). При этом в зоне вне поражения ВПЧ количественный состав данных клеток был значимо выше, чем в интактной шейке матки, что позволяет считать зону вне поражения ВПЧ потенциально опасной с точки зрения дальнейшей прогрессии предракового процесса в рак.

6. Проведенное морфометрическое исследование показало гетерогенность в распределении клеточных популяций вокруг артериол, венул и капилляров в тканях шейки матки в зоне поражения ВПЧ. Имелось значимое возрастание числа лимфоцитов, плазматических клеток, макрофагов, полиморфноядерных лейкоцитов и клеток паренхимы по сравнению с зоной вне поражения ВПЧ. Наиболее стабильными были популяции фиброцитов и фибробластов.

7. Клеточные популяции вокруг артериол в тканях РШМ достоверно возрастали: число фибробластов, лимфоцитов, плазматических клеток и полиморфноядерных лейкоцитов по сравнению с KJI3 от РШМ. Вокруг венул и капилляров в зоне опухоли достоверно возрастало число лимфоцитов, плазматических клеток и гранулоцитарных лейкоцитов по сравнению с KJI3 от РШМ. Наиболее стабильными были популяции фиброцитов, макрофагов и клетки паренхимы.

8. Иммуногистохимическая идентификация клеточных элементов показала, что в тканях интактной шейки матки при поражении ВПЧ и рака шейки матки имеются NK1, CD4, CD8, CD79a, CD 13 8, С068-позитивные клеточные популяции, распределение которых было крайне вариабельно вокруг сосудов МЦР, но имелось значимое увеличение данных клеток в строме по мере нарастания ЦИН в эпителии шейки матки и при переходе в рак ШМ.

9. Иммуногистохимическое исследование экспрессии маркера апоптоза р53, супрессора апоптоза bcl-2 и маркера пролиферации Ki-67 выявило, что данные маркеры определяются в многослойном плоском эпителии интактной ШМ, в тканях шейки матки при поражениях ВПЧ и в тканях рака шейки матки. Однако в интактной ШМ нет статистически значимых различий в экспрессии вышеперечисленных маркеров. Статистически значимые различия в экспрессии р53, bcl-2 и Ki-67 выявлены как в тканях ШМ при поражении ВПЧ, так и тканях рака шейки матки.

10. Проведенный факторный анализ показал, что наиболее активным в плане формирования клеточных корреляционных связей в интактной шейке матки является венулярный отдел МЦР. Вокруг венулярного и капиллярного звеньев КС в ткани интактной шейки матки были выявлены три главных компоненты,

накопленная информативность которых была значимой. Это позволило выделить три основных фактора, которые обеспечивают постоянство паренхи-матозно-стромальных взаимоотношений в интактной шейке матки: стромо-образующий, дезинтегрирующий, пролиферирующий.

11. Проведенный корреляционный факторный анализ показал, что по сравнению с интактной шейкой матки в зоне вне ВПЧ-поражения имеются выраженные изменения в корреляционных взаимосвязях между клеточными популяциями вокруг всех звеньев сосудистого русла. При этом нарушения выявляются во всех трех факторах: стромообразующем, дезинтегрирующем и пролифери-рующем, что позволяет предположить, что даже в данной зоне идут изменения в межклеточных взаимодействиях, которые могут привести к прогрессии ВПЧ-поражений и формированию типичных морфологических изменений, характерных для данной патологии.

12. Проведенный корреляционный факторный анализ в контрлатеральной зоне от РШМ и в зоне РШМ показал, что вокруг различных звеньев МЦР идет смена клеточных популяций, которые коррелировали с стромообразующим, дезинтегрирующим и пролиферирующим факторами. Наиболее стабильным был стромообразующий фактор. Вторым по стабильности был дезинтегрирующий фактор. Самым нестабильным оказался пролиферирующий фактор, который кардинально изменил корреляционную зависимость от клеточных популяций.

Практические рекомендации

1. Для дифференциальной диагностики предрака и рака шейки матки необходимо учитывать особенности гистоархитектоники и гистотопографии сосудов МЦР. При наличии «сосудисто-эпителиальных ассоциаций» в биоптате ткани шейки матки следует рекомендовать мультифокальную биопсию шейки матки.

2. При проведении патогистологического исследования предраковых и раковых процессов шейки матки необходимо учитывать морфологические особенности строения сосудистого компонента коммуникационных систем и их взаимосвязь с внутриклеточными регуляторами, что увеличивает информативность мор-фометрического исследования, позволяет прогнозировать течение патологического процесса в шейке матки.

3. При выборе тактики лечения при предраковых и раковых процессах шейки матки и определения критериев индивидуального прогноза в клинической практике рекомендуется учитывать данные морфометрического и иммуноги-стохимического исследования с оценкой состояния сосудистого компонента коммуникационных систем.

4. При патологоанатомической диагностике предраковых и раковых процессов шейки матки рекомендуется проводить иммуногистохимическую верификацию клеточных популяций, их количества, что позволяет выявить нарушения

в стромообразующем, дезинтегрирующем и иролиферирующем факторах шейки матки и выявить случаи с неблагоприятным течением патологических процессов и рекомендовать врачу гинекологу пристальное динамическое наблюдение за пациентками с вышеуказанными изменениями. 5. Учитывая морфологические, морфометрические и иммуногистохимические изменения в тканях вне зоны поражения ВПЧ и контрлатеральной зоне от РШМ, рекомендуется исследовать данные зоны ШМ в клинической практике (с последующим взятием биопсии) для исключения поражений предопу-холевыми и опухолевыми процессами.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Лейкоплакия шейки матки как ВПЧ-ассоциированное заболевание / Л. И. Харитонова, Н.Ю. Мелехова, А.Н. Иванян, И. А. Бехтерева // Мать и дитя: материалы VII Российского форума.— М.: МЕДИ Экспо. — 2005.— С. 533.

2. Бехтерева, И. А. Нервный компонент коммуникационных систем в тканях плоскоклеточного рака шейки матки (СД-версия) / И. А. Бехтерева, А.Е. Доросевич,

B. В. Судиловская // Новые методы и разработки в онкоморфологии: материалы IV конференции российских патологоанатомов. СД-версия: MedMcorp 2005 —

C. 13-14.

3. Бехтерева, И. А. Особенности гистоархитектоники вегетативных нервных терминалей и их клеточного окружения в тканях рака влагалищной порции шейки матки / И. А. Бехтерева, А.Е. Доросевич, В. В. Судиловская//Современные проблемы клинической патоморфологии: Материалы Всероссийской конференции, посвященной памяти профессора О. К. Хмельницкого.— СПб., 2006.— С. 25-27.

4. Клинико-морфологические аспекты лейкоплакии шейки матки / Н. Ю. Мелехова, Л. И. Харитонова, И. А. Бехтерева, О. В. Благодыр //Практическая гинекология: от новых возможностей к новой стратегии: материалы Международного конгресса.— М., 2006.— С.118.

5. Морфологические маркеры в диагностике веррукозной лейкоплакии шейки матки / Н.Ю. Мелехова, А.Н. Иванян, И. А. Бехтерева, Л.И. Харитонова //Математическая морфология. Электронный математический и медико-биологический журнал. — 2006.— Т. 5.— Вып. 4.—http://\vw.smolensk/ru/user/sgma/MMORPHI/ TTTLHTM.

6. Морфологические маркеры пролиферативной активности в диагностике атипической лейкоплакии шейки матки /Л.И. Харитонова, И. А. Бехтерева, Н. Ю. Мелехова, А. Н. Иванян и др. // Мать и дитя: материалы VIII Российского форума,— М., 2006,— С. 552-553.

7. Морфологические маркеры в диагностике атипической лейкоплакии шейки матки/НЛО. Мелехова, А.Н. Иванян, И. А. Бехтерева и др.// Электронный меди-

ко-биологический журнал «Математическая морфология» ООО «Интернет-Проект».— 2006, октябрь. — Т. 7. ст. 29 (С. 312-319). — http://www.medline.ru.

8. Медицинские и социальные аспекты рака шейки матки / А. Н. Иванян, О. В. Благодыр, Н.Ю. Мелехова, И. А. Бехтерева //Практическая гинекология: от новых возможностей к новой стратегии: материалы Международного конгресса,—М., 2006,—С. 254.

9. Клинико-морфологические особенности лейкоплакии шейки матки / Н. Ю. Мелехова, А. Н. Иванян, JI. И. Харитонова, И. А. Бехтерева // Практическая гинекология: от новых возможностей к новой стратегии: материалы Международного конгресса. — М., 2006. — С. 118.

10. Диагностические аспекты эктопии шейки матки / Н. Ю. Мелехова, А. Н. Иванян, Н. JI. Овсянкина, И. А. Бехтерева//Практическая гинекология: от новых возможностей к новой стратегии: материалы Международного конгресса.— М., 2006. —С. 118-119.

11. Онкологический потенциал различных патологических состояний шейки матки / Н. JI. Овсянкина, Н. Ю. Мелехова, А. Н. Иванян, И. А. Бехтерева // Журнал акушерских и женских болезней.— 2006.— Т. LV.— Выпуск 3. — С. 67-71.

12.Морфологические и иммуногистохимические особенности состояния рубца на матке после кесарева сечения / Т. А. Густоварова, А.Н. Иванян, А.Е. До-росевич, И. А. Бехтерева // Российский вестник акушера-гинеколога. — 2007.— Т.7.—№4,—С. 7-17.

13.Доросевич, А.Е. Морфологические особенности нервного и сосудистого компонентов коммуникационных систем в тканях рака шейки матки / А. Е. До-росевич, И.А. Бехтерева, В.В. Судиловская // Архив патологии. — 2009.— Т. 71.— № 5,— С. 43-46.

14. Бехтерева, И.А. Гистофизиология эпителиального и соединительнотканного компонентов влагалищной части шейки матки / И. А. Бехтерева, А. Е. Доросе-вич // Морфология. — 2009.— Т. 136,— № 5.— С. 90-96.

15.Бехтерева, И.А. Морфологические параллели коммуникационных систем в тканях шейки матки при папилломавирусной инфекции / И. А. Бехтерева // Актуальные проблемы патологической анатомии: материалы Республиканской научно-практической конференции.— Гродно: ГрГМУ, 2010.— С. 21-25.

16.Бехтерева, И.А. Сравнительная морфометрическая характеристика коммуникационных систем в тканях шейки матки при папилломавирусной инфекции и плоско клеточных раках / И. А. Бехтерева // Проблемы патоморфологиче-ской диагностики современных инфекций и других заболеваний / Сборник научных статей II съезда патологоанатомов Республики Беларусь.— Гомель: ГУ РНПЦРМЭЧ, 2011,—С. 20-23.

17. Бехтерева, И.А. Роль эпителиально-сосудистых взаимоотношений в становлении и развитии рака шейки матки / И. А. Бехтерева, В. В. Судиловская // Вестник

национального медико-хирургического центра им. Н.И. Пирогова.— 2011.— Т. 6.—№3,—С. 98-105.

18. Особенности экспрессии стероидных гормонов, пролиферативной активности, площади сосудистого русла в тканях матки при субмукозных миомах и железистой гиперплазии эндометрия / И.А. Бехтерева, Т. А. Густоварова, Л. А. Щербакова и др. // Вестник Витебского государственного медицинского университета.— 2011.— Т. 10.— №2.— С. 45-53.

19.Клинико-морфологические аспекты субмукозной миомы матки у женщин репродуктивного возраста / Л.А Щербакова, Т. А. Густоварова, А.Н. Иванян, И. А. Бехтерева и др. // Российский вестник акушера-гинеколога. — 2012.— Т. 12,—№ 1,—С. 24-28.

20. Бехтерева, И. А. Структурно-функциональные особенности коммуникационных систем при папилломавирусной инфекции и плоскоклеточном раке в тканях шейки матки / И. А. Бехтерева, В. В. Судиловская // Клиническая дерматология и венерология. —2012.— № 2.— С. 10-17.

21.Бехтерева И. А. Морфологическая и морфометрическая характеристика сосудистого компонента (сосуды микроциркуляторного русла и клеточные популяции вокруг них) коммуникационных систем в тканях рака шейки матки / И. А. Бехтерева//Российский медико-биологический вестник им. академика И.П. Павлова. —2012,—№4,—С. 134-137.

22.Бехтерева, И. А. Морфофункциональные характеристики сосудистого компонента коммуникационных систем в тканях рака шейки матки / И. А. Бехтерева, А.Е. Доросевич // Медико-биологические проблемы жизнедеятельности. — 2013,— №2(10).— С. 52-60.

23.Бехтерева, И. А. Морфологическая, морфометрическая и иммуногистохи-мическая характеристика коммуникационных систем в тканях рака шейки матки / И. А. Бехтерева, А. Е. Доросевич // Научные ведомости Белгородского государственного университета.— 2014.— № 11 (182).— Вып. 26.— С. 42-51.

24. Бехтерева, И. А. Особенности коммуникационных систем и иммуногисто-химическая характеристика различных клеточных популяций в тканях рака шейки матки/ И. А. Бехтерева, В. В. Судиловская // Вестник национального медико-хирургического центра им. Н.И. Пирогова.—2014.— Т. 9.—№ 1,-—С. 128-131.

25.Бехтерева, И. А. Морфогенетические особенности сосудистого компонента коммуникационных систем — одно из основополагающих звеньев морфогенеза и прогрессии рака шейки матки / И.А. Бехтерева, А.Е. Доросевич //100 лет От-товской морфологии: от рутинной гистологии к молекулярной микроскопии: материалы Международной юбилейной конференции. — СПб., 2014.— С. 5-6.

Список принятых сокращений

впч — вирус папилломы человека

ГРЛ — гранулоцитарные лейкоциты

клз — контрлатеральная зона

КС — коммуникационные системы

ЛФ — лимфоциты

мпэ — многослойный плоский эпителий

МЦР — микроциркуляторное русло

МФ — макрофаги

ПАР — паренхима

пви — папилломавирусная инфекция

пл — плазмоциты

ПНР — полимеразная цепная реакция

РШМ — рак шейки матки

ФБ — фибробласты

ФЦ — фиброциты

цин — цервикальная интраэпителиальная неоплазия

шм — шейка матки

энд — эндотелиоциты

эцм — экстрацеллюлярный матрикс

Подписано в печать 2.09.2014 г. Формат 60 х 90/16

О&ьем 3,0 п. л. Тираж 120 экз. Заказ № 328

Отпечатано ООО «ИПК «КОСТА»