Автореферат и диссертация по медицине (14.00.16) на тему:Особенности изменений иммунобиохимических показателей в резидуальном периоде хронического описторхоза на фоне проводимого лечения

МИНИСТЕРСТВО ЗРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ НОВОСИБИРСКАЯ ГОСУДАРСТВЕННАЯ МЕДИЦИНСКАЯ АКАДЕМИЯ

На правах рукописи

Рау Наталья Юрьевна

ОСОБЕННОСТИ ИЗМЕНЕНИЙ ИММУНОБИОХИМИЧЕСКИХ ПОКАЗАТЕЛЕЙ В РЕЗИДУАЛЬНОМ ПЕРИОДЕ ХРОНИЧЕСКОГО ОПИСТОРХОЗА НА ФОНЕ ПРОВОДИМОГО ЛЕЧЕНИЯ

14.00.16 — патологическая физиология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Новосибирск - 2005

Работа выполнена в Алтайском государственном медицинском университете Министерства здравоохранения РФ

Научные руководители:

доктор медицинских наук, профессор

доктор медицинских наук, профессор

Официальные оппоненты:

Карбышева Нина Валентиновна Трунов Александр Николаевич

доктор медицинских наук,

профессор Начаров Юрий Владимирович доктор медицинских наук,

профессор Поляков Лев Михайлович

Ведущая организация: НИИ клинической и экспериментальной лимфологии СО РАМН, г. Новосибирск.

Защита состоится «_» февраля_2005 г. в_часов на заседании диссертационного совета Д.208.062.04 при Новосибирской государственной медицинской академии (630091, г. Новосибирск, Красный проспект, 52).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Новосибирской государственной медицинской академии.

Автореферат разослан «_»_2005 г.

Ученый секретарь диссертационного совета

доктор медицинских наук, профессор Зубахин А.А.

4M¡so

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ.

ЯоЗО&З

Актуальность темы.

Актуальность проблемы описторхоза в нашей стране, год от года возрастает. Это обусловлено распространенностью инвазии, на долю которой ежегодно приходится более 60% от числа всех зарегистрированных» больных био-гельминтозами (Сыскова Т.Г и др., 2000). Описторхоз, возбудитель которого Международным агентством по изучению рака отнесен к группе канцерогенов № 1 человека, до сих пор относится к так называемым «неуправляемым» нозо-формам. (Лепехин A.B. и др., 1992, Сергиев В.П., и др., 1997, Chapman R.W.,1999) В Обь-Иртышском бассейне показатель заболеваемости в ряде районов превышает 300,0-400,0 на 100 тыс. населения (Белозеров Е.С. и др., 1981, Лепехин A.B. и др., 1992.). При этом существующая статистика отражает лишь часть проблемы. Такая распространенность инвазии, продолжительность жизненного цикла паразитов (более 20 лет) в организме хозяина, многообразие вызываемых ими клинических проявлений, отсутствие четких патогмоничных признаков определяют актуальность данной проблемы, необходимость поиска путей ее решения (Глумов В.Я. 1981, Бычков В.Г. 1988, Альперович Б.И. и др., 1990, Карапенян М.С. 1991, Шайн A.A. и др., 1991, Ильинских H.H. 1992).

Описанные при описторхозе значительные морфологические изменения (Зубов H.A. 1973 , Малышева Л.Г. 1983, Пальцев А.И. 1991, Родичева Н.С. и др.,1991, Смирнова Л.М. и др., 1991, Бронштейн Г.А. и др., 1997, Глумов В.Я. и др., 2001,) прежде всего в гепатобилиарной системе, до настоящего времени не имеют полной характеристики с позиции оценки степени активности процесса в зависимости от течения описторхоза, периода инвазии и проводимого лечения.

Неудовлетворительность результатами антигельминтной терапии, течением резидуального периода с неполным выздоровлением больных даже при успешной дегельминтизации определяет необходимость проведения при описторхозе клинической реабилитации. Многими исследователями ставится вопрос о проведении реабилитационных мероприятий в резидуальном периоде описторхоза (Налобин В.А., 1991,Степанова Т.Ф. и др., 1991, Кузнецова В.Г. 2001, Карбышева Н.В. и др., 2002) прежде всего иммунореабилитации.

Ранее проведенные исследования, (Каленова Л.Ф. и др.,1991; Лепехин A.B. и др.,1992,1998; Степанова Т.Ф.,1998;) при трактовке механизмов патологического процесса при описторхозе основываются на развитии иммуносупрес-сии в организме хозяина, обусловленной воздействием «факторов» гельминта (Савин В.А. и др.,1991; Ильинских E.H. и др., 2000; Токмалаев А.К.,2001).

В настоящее время в патогенезе многих заболеваний человека, включая рак, вирусные инфекции, аллергические заболевания, аутоиммунные расстройства и иммунодефицитные состояния, в том числе СПИД активно начинает рассматриваться апоптотический механизм иммуносупрессии. По данным литера-

РОС. НАЦИОНАЛЬНАЯ БИБЛИОТЕК* —С.Петербург

ам&рк

т

туры одним из таких механизмов патологических процессов, способствующих развитию интернуклеосомальной фрагментации ДНК, является постоянное в течение жизни воздействие на клетки организма генотоксических агентов, ДНК - повреждающих факторов (Новожилова А.П. и др., 1996, Одинак М.М. и др.,19%, Новиков B.C. 1996,1998). Имеются экспериментальные данные свидетельствующие, что в теле марит описторхиев имеются генотоксические соединения (Ильинских Н.Н. 1984,1992). Анализ выделенных из марит генотоксикан-тов показал, что большая часть из них это необычные пуринов ые азотистые основания, которые при попадании в клетку человека, используются ею при биосинтезе ДНК вместо аденина и гуанина, что ведет к нарушению структуры этой молекулы.

Имеются немногочисленные свидетельства роли в патогенезе описторхо-за маркера острофазовых реакций и активности воспалительного процесса лак-тоферрина. Авторы рекомендуют определение концентрации ЛФ как дополнительный тест оценки длительности описторхозной инвазии (Юркина Э.А. и др.1998,2001).

Определение характера и степени иммунобиохимических изменений может быть важным как для понимания патогенеза описторхоза, так и поиска новых средств рациональной патогенетической терапии и реабилитации.

При оценке проводимой дегельминтизации многими авторами отмечается несоответствие между паразитоцидным и клиническим эффектом (Налобин В.А., 1991, Степанова Т.Ф. и др., 1991). В связи с этим, в классификации хронического описторхоза выделяют постописторхозные явления (Лепехин А.В. и др.,1992, Кузнецова В.Г. и др.,1998). Характеристика данного симптомоком-плекса с позиции механизмов развития, активности процесса могла бы служить основой подбора эффективной (адекватной) терапии в резидуальном периоде инвазии.

Поиску раскрытия механизмов постописторхозных явлений, критериев диагностики степени активности процесса, определению на этой основе тактики ведения больных для повышения эффективности лечения и посвящено настоящее исследование.

Цель исследования:

Выявить особенности иммунобиохимических показателей в резидуальном периоде хронического описторхоза для определения критериев активности патологического процесса и разработки новых подходов к лечению.

Задачи исследования:

1. Определить уровень аутоантител к антигенам нативной и денатурированной ДНК у больных хроническим описторхозом до лечения и в резидуальном периоде инвазии, оценить их динамику в зависимости от течения описторхоза и проводимого лечения.

2. Определить концентрацию лактоферрина в сыворотке крови больных при описторхозной инвазии до лечения и после антигельминтной терапии.

3. Оценить динамику выявления специфических маркеров (антитела класса и ЦИК к антигену Ор. /еИпеих) у больных хроническим опи-сторхозом и изучить их взаимосвязь с уровнями аутоантител к антигенам на-тивной и денатурированной ДНК в сыворотке крови.

4. Определить диагностическую ценность тестирования уровня аутоантител к антигенам нативной и денатурированной ДНК в сыворотке крови у больных хроническим описторхозом.

5. Оценить клинико-лабораторную эффективность применения иммуностимулятора эхинацеи («Эстифан») в комплексной терапии хронического опи-сторхоза в сравнении с базовым лечением.

Научная новизна.

Впервые при хроническом описторхозе проведена оценка степени активности процесса, показана выраженность деструктивных, воспалительных процессов, сохраняющихся у обследованных пациентов даже после успешно проведенной дегельминтизации, в резидуальный период заболевания, превышающий регламентируемые сроки диспансерного наблюдения, что подтверждается достоверно высокими уровнями аутоантител к антигенам нативной и денатурированной ДНК и лактоферрина в сыворотке крови.

Показана диагностическая значимость определения специфических антител к антигенам Ор. /еИпеия и установлено, что противоописторхозные антитела класса и/или и/или ЦИК выявляются у 78,5 % обследованных больных хроническим описторхозом, а с нарастанием длительности инвазии у се-ропозитивных лиц антитела циркулируют в виде иммунных комплексов. При длительности заболевания более 5 лет наличие специфических циркулирующих иммунных комплексов выявляется у 61,3 % пациентов с сероположительным диагнозом.

Впервые показана информативность определения уровня аутоантител к антигенам нативной и денатурированной ДНК в процессе обследования до лечения и после антигельминтной терапии в резидуальном периоде описторхоза, позволяющая достоверно различить состояния «болен - здоров» с чувствительностью и специфичностью более 90 %.

Сравнительная оценка базовой и базовой и иммуностимулирующей терапии описторхозной инвазии впервые показала, что применение иммуностимулирующего препарата эхинацеи («Эстифан») при лечении пациентов с хроническим описторхозом снижает выраженность деструктивных процессов и аутоиммунных реакций, что проявляется нормализацией уровней аутоантител к антигенам нативной и денатурированной ДНК в сыворотке крови в регламентируемые сроки диспансерного наблюдения.

Практическая значимость.

Определение уровня аутоантител к антигенам нативной и денатурированной ДНК позволяет оценить выраженность деструктивных процессов при хроническом описторхозе в зависимости от течения и сроков инвазии. Динамика

этих показателей может использоваться в качестве критерия диагностики степени активности патологического процесса и эффективности лечения при опи-сгорхозе.

Выявленная коррелятивная взаимосвязь между уровнями специфических маркеров к антигену Ор. /еИпеия и аутоантител к антигенам нативной и денатурированной ДНК дает основание использовать выявление специфических противоописторхозных циркулирующих иммунных комплексов для оценки степени активности процесса при описторхозе.

Повышение концентрации лактоферрина у наблюдаемых больных с хроническим описторхозом позволяет использовать тестирование указанного белка для оценки активности воспалительных реакций в резидуальном периоде инвазии.

Полученные данные клинико-лабораторного обследования пациентов показали обоснованность применения иммуностимулирующего препарата эхина-цеи в комплексном лечении больных хроническим описторхозом.

Основные положения диссертации, выносимые на защиту:

1.Хронический описторхоз характеризуется развитием воспалительных, деструктивных процессов даже после эффективной дегельминтизации.

2,Определение уровней аутоантител к антигенам нативной и денатурированной ДНК является лабораторным критерием излечиваемости при хроническом описторхозе.

3.Применение иммуностимулирующего препарата эхинацеи в комплексном лечении больных хроническим описторхозом снижает активность деструктивных процессов в регламентируемые сроки диспансерного наблюдения и позволяет повысить клиническую эффективность проводимого лечения больных хроническим описторхозом.

Апробация материалов диссертационного исследования.

Основные положения диссертации и результаты работы представлялись на международной научно-практической конференции «Медицина и образование в XXI веке» (Новосибирск, 2004), на итоговой научной конференции, посвященной 50-летию АГМУ (Барнаул, 2004), на второй Всероссийской конференции «Компенсаторно-приспособительные процессы: фундаментальные, экологические и клинические аспекты» (Новосибирск, 2004), на конференции врачей инфекционистов в Республике Алтай (Горно-Алтайск, 2004), на Всероссийской 12 научно-практической конференции «Достижения современной гастроэнтерологии», посвященной 400-летию г.Томска (Томск, 2004). На заседании проблемной комиссии «Функциональные основы гомеостаза» НГМА МЗ РФ (Новосибирск, 2004.)

Публикации. По теме диссертации опубликовано 7 работ.

Внедрение в практику. Актом внедрения министра здравоохранения Республики Алтай от 16.09.2004 г №1143 результаты работы используются в практической деятельности врачей -инфекционистов Республики Алтай, а

также врачей-инфекционистов Горно-Алтайского Республиканского Центра по профилактике и борьбе со СПИД и инфекционными заболеваниями.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 147 страницах машинописи, иллюстрирована 17 таблицами и 12 рисунками. Работа состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, 2 глав с изложением результатов собственных наблюдений и исследований, обсуждения результатов исследования, заключения, выводов, практических рекомендаций и списка литературы (220 источников). Весь материал представленный в диссертации получен и проанализирован автором лично.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Характеристика обследованных больных.

Материалом для исследования послужили результаты обследования 312 больных с хронической фазой описторхоза, среди них было 179 (57,4%) женщин и 133 (42,6%) мужчины в возрасте от 15 до 65 лет с преобладанием лиц молодого и среднего возраста.

Диагноз описторхоза бьш установлен по результатам клинического обследования больных, эпидемиологических и клинико-лабораторных данных. Хронический описторхоз определен на основе общепринятых подходов к разграничению острой и хронической фазы инвазии. Длительность процесса у всех больных была не менее года.

У 300 наблюдающихся описторхоз протекал манифестно, у 12 больных отмечено латентное течение инвазии. В 80 % случаев описторхоз диагностирован впервые, остальные пациенты после неэффективных курсов дегельминтизации в анамнезе. Все пациенты жители Алтайского края и Республики Алтай. Верификация описторхоза производилась по результатам копровоскопии, микроскопии желчи при дуоденальном зондировании и иммуноферментного анализа (ИФА) с использованием тест систем ЗАО «Вектор-Бест», выявляющих специфические антитела класса 1|>М и к антигену Ор. ¿еНпедо, а также антитела, присутствующие в крови больных описторхозом в виде циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК).

По результатам копроовоскопии диагноз поставлен 224 (71,8%) больным, при микроскопии дуоденального содержимого у 88 (28,2%). Паразиты обнаружены при копроовоскопии и дуоденальном зондировании у 35 (11,2%) обследованных.

ИФА использовался как скрининговый тест, результат которого учитывался при обнаружении паразитов и/или их яиц. Диагноз описторхоза подтвержден методом ИФА и микроскопией фекалий у 179 (57,3%), ИФА и микроскопией желчи у 66 (21,2%) наблюдавшихся.

Всем больным проведена антигельминтная терапия бильтрицидом (фирма «Байер») по рекомендуемой схеме: 75 мг на кг/массы в три приема, перорально, курс лечения - 1 день. В план лечения была включена подготовительная, до назначения бильтрицида, терапия, направленная на стихание воспалительного процесса, с применением желчегонных средств, спазмолитиков, десенсибилизирующих препаратов. Комплекс реабилитационных мероприятий проводился индивидуально, кроме активного дренажа желчных ходов, у части пациентов использовали репаранты. 50 больным проведен 5-ти дневный курс лечения эхинацеей в таблетированной форме под коммерческим наименованием «Эс-тифан» («Вифитех», Россия, № государственной регистрации П № 015371\01).

Через 3 месяца после проведенного лечения под наблюдением состояли пациенты, у которых 100 % эффективность дегельминтизации подтверждена трехкратными отрицательными результатами контрольных исследований фекалий и однократным дуоденального содержимого.

«Контрольная группа» представлена донорами, группа «практически здоровые» представлена пациентами, имеющие в анамнезе различные хронические заболевания в стадии ремиссии.

Методы обследования.

Все больные (312 пациентов) хроническим описторхозом обследованы в условиях Центра по диагностике, лечению, профилактике описторхоза и «редких» гельминтозов на базе 1-го инфекционного отделения городской больницы № 5 г. Барнаула, Горно-Алтайского Республиканского Центра по профилактике и борьбе со СПИД и инфекционными заболеваниями.

Определение иммуноглобулинов класса М к антигену Ор. РеНпеш.

Антитела класса 1|>М в сыворотке крови обследуемых выявляли при помощи иммуноферментного анализа с использованием коммерческой тест-системы ЗАО «Вектор-Бест» «Описторх-1дМ-стрип» (Ткаченко Т.Н. и др., 2001).

Учет результатов проводили с помощью анализатора колориметрического иммуноферментного, регистрируя оптическую плотность в лунках планшетов при длине волны 492 нм. Всего уровни иммуноглобулинов класса М к антигену Ор. АеИпеш в сыворотке крови определены у 312 больных хроническим описторхозом до лечения с лабораторно подтвержденным диагнозом наличием яиц или взрослых паразитов при микроскопии желчи или содержимого кишечника, и в динамике наблюдения через 2 недели, 3 и 6 месяцев. Контрольную группу составили 88 человек из района, где на протяжении десяти лет описторхоз регистрируется в единичных случаях.

Определение иммуноглобулинов класса в к антигену Ор. РеНпети.

Антитела класса определялись коммерческой тест-системой «Тиатоп-стрип» ЗАО «Векгор-Бест» (Ткаченко Т.Н. и др., 2001).

Использованы активные компоненты тест-системы антигены описторхов, иммобилизованные в лунках планшетов, коньюгат иммуноглобулинов против

1{»С человека с пероксидазой хрена, контрольные положительная и отрицательная сыворотки.

Способ определения антител - твердофазный иммуноферментный анализ, в ходе которого при взаимодействии исследуемых образцов сывороток крови в лунках стрипов с иммобилизованными антителами описторхов происходило связывание специфических антител и образование комплекса «антиген — антитело» на поверхности лунок.

Всего уровни иммуноглобулинов класса в к антигену Ор. ГеНпеш в сыворотке крови определены у 312 больных хроническим описторхозом до лечения с лабораторно подтвержденным диагнозом наличием яиц или взрослых паразитов при микроскопии желчи или содержимого кишечника. Контрольную группу составили 88 человек из района, где на протяжении десяти лет описторхоз регистрируется в единичных случаях.

Определение циркулирующих иммунных комплексов к антигену Ор. РеЦпеш.

Выявление циркулирующих иммунных комплексов в сыворотке крови осуществлялось ИФА с использованием коммерческой тест-системы ЗАО «Вектор-Бест» «Тиатоп - ЦИК - стрип» (Ткаченко Т.Н. и др., 2001).

Учет результатов проводили с помощью анализатора колориметрического иммуноферментного, регистрируя оптическую плотность (ОГТ) в лунках планшетов при длине волны 492 нм.

Всего уровни ЦИК к антигену Ор. ГеМпеш в сыворотке крови определены у 312 больных хроническим описторхозом до лечения с лабораторно подтвержденным диагнозом наличием яиц или взрослых паразитов при микроскопии желчи или содержимого кишечника. Контрольную группу составили 88 человек из района, где на протяжении десяти лет описторхоз регистрируется в единичных случаях.

Определение концентрации лактоферрина в сыворотке крови.

Исследования выполнялись на тест-системах «Лактоферрин-стрип 0-4106» производства ЗАО «Вектор-БЕСТ» по инструкции производителя (Юркина Э.А. и др. 2001).

Для определения концентрации лактоферрина в анализируемом материале строился калибровочный график по средним значениям оптической плотности каждого стандартного раствора. Контрольная сыворотка предназначалась для проверки точности и достоверности анализа.

При постановке реакции сыворотка разводится в 50 раз, вследствие этого для получения конечного результата необходимо умножить результат в нг/мл, соответствующий оптической плотности, на 50.

Результаты иммуноферментного анализа регистрировали на вертикальном фотометре \1ultiskan МСС 340 в при длине волны 492 нм.

Концентрацию лактоферрина в сыворотке крови человека определяли у 78 больных хроническим описторхозом до антигельминтной терапии и после

лечения — через 2 недели, 3 и 6 месяцев. Всего обследовано 94 больных. Контрольная группа представлена 87 донорами.

Определение аутоантител к нативной и денатурированной ДНК в сыворотке крови человека.

Аутоантитела к нативной и денатурированной ДНК сыворотки крови человека определялись с помощью тест-системы «ДНК-ТЕСТ» производства ГТМЦ Сибмедприбор. Уровни аутоантител к нативной и денатурированной ДНК в сыворотке крови человека определяли у 78 больных до проведения ан-тигельминтной терапии и после лечения — через 2 недели, 3 и 6 месяцев. Контрольная группа представлена 12 донорами. Для сравнения дополнительно использованы результаты обследования 20 «практически здоровых» лиц без проявлений каких-либо заболеваний.

Методы статистической обработки.

Статистическая обработка вариационных рядов включала подсчет средних арифметических величин (М) и стандартных ошибок средних арифметических (ш), стандартного отклонения. В таблицах информация представлена в виде М ± ш. В работе использовались также методы непараметрической статистики. Для определения диагностической ценности изучаемых показателей использовался дискриминантный анализ.

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

Оценка динамики уровня аутоантител к антигенам нативной и денатурированной ДНК у больных хроническим описторхозом до лечения и в резидуальном периоде инвазии. Для изучения выраженности и продолжительности деструктивных процессов при описторхозе, характера их развития проведено определение уровня аутоантител к антигенам нативной и денатурированной ДНК в сыворотке крови больных описторхозом как универсального феномена повреждения клеточных мембран при патологических процессах различной этиологии (ИвановВЛ. и др., 1996, Кудрявцева И.В., 2000, Трунов А.Н. и др., 2000).

Полученные данные показали наличие выраженной деструкции. У наблюдаемых больных концентрации как нативной, так и денатурированной ДНК были значительно повышены и имели высокую степень достоверности различия с нормативными значениями контрольной группы.

При определении аутоантител к антигенам нДНК у больных хроническим описторхозом до лечения выявлен достоверно высокий их уровень равный 4,80 + 0,22, превышающий как «среднюю» контрольной группы, так и «среднюю» значения показателя, полученную при обследовании группы «практически здоровых» лиц, данные представлены в таблице 1.

Таблица 1

Уровень аутоантител к антигенам натнвной ДНК (Кн ДНК) в сыворотке крови больных опнсторхозом до лечения

Показатели Контрольная группа Группа «практически здоровые» Больные

N 12 20 78

М±т 1,14 ±0,03 1,36 + 0,06 4,8 + 0,22

Р <0,001

Р1 <0,001

р - с группой «практически здоровые» р | - с контрольной группой

В процессе обследования высокий уровень аугоантигел выявлен и к антигенам дДНК, равный 5,59 ± 0,23. Достоверное повышение антител к антигенам денатурированной ДНК отмечено до лечения при сравнении как с контрольной группой (р < 0,001), так и с группой «практически здоровых» лиц (р <0,001), данные представлены в таблице 2.

Таблица 2

Уровень аутоантител к антигенам денатурированной ДНК (Кд ДНК) в сыворотке крови больных опнсторхозом до лечения

Показатели Контрольная Группа Группа «практически здоровые» Больные

N 12 20 78

М±ш 1,24 + 0,10 1,98 ±0,06 5,59 ±0,23

Р <0,001

Р1 <0,001

р* - с группой «практически здоровые»

р1** - с контрольной группой

' Кроме оценки «средних» значений уровней аутоантител к антигенам ДНК

был проведен анализ существующих индивидуальных разбросов показателей К нДНК и К дДНК в группах обследуемых больных при сравнении как с кон-I трольной группой, так и с группой «практически здоровых» лиц, который пока-

зал высокий уровень аутоантител к антигенам ДНК более, чем в 90 % случаев у больных хроническим опнсторхозом. Результаты динамики уровня аутоантител к антигенам нативной и денатурированной ДНК показали, что наличие деструкции не зависело от течения описторхоза - латентного или манифестного. Ак-

тивность процесса была выше при клинически выраженных формах болезни, чем при латентном течении инвазии, данные представлены в таблице 3.

Таблица 3

Уровни аутоантител к антигенам нативной и денатурированной ДНК (К нДНК и К дДНК) в сыворотке крови больных описторхозом в зависимости от течения инвазии (М ± т)

Показатели Контрольная группа (И =12) Группа «практически здоровые» (п = 20) Течение инвазии

Манифестное (п = 66) Латентное (п = 12)

КнДНК 1,14 + 0,03 1,36 + 0,06 4,68+0,32 3,46 + 0,42

КдДНК 1,24 + 0,10 1,98 ±0,06 5,49 ±0,28 4,38 + 0,36

Р* < 0,001 <0,001

Р1 <0,05 <0,05

р - с группой «практически здоровые»; Р1** - между группами с различным течением.

О диагностическом значении определения уровня аутоантител к антигенам нативной и денатурированной ДНК для выявления деструкции свидетельствуют и данные проведенного дискриминантного анализа с рассчетом коэффициентов классифицирующих функций показателей К нДНК и К дДНК у больных хроническим описторхозом и в группе обследованных без инвазии. Результаты дискриминантного анализа показателей К нДНК и К дДНК у больных хроническим описторхозом и в группе пациентов без инвазии (контрольная группа и группа «практически здоровых» лиц) позволяют достоверно разграничить состояния «болен — здоров» с чувствительностью и специфичностью более 90 %, данные представлены в таблицах 4,5.

Полученные данные представляют практический интерес, в первую очередь с позиции определения тактики ведения больных, мероприятия при которой должны осуществляться вне зависимости от формы течения инвазии - латентного или манифестного, что обусловлено наличием выраженных деструктивных процессов. На основе анализа полученных результатов считаем, что динамику уровня аутоантител к антигенам нативной и денатурированной ДНК можно рассматривать в качестве объективного критерия активности процесса в различные периоды описторхозной инвазии.

В процессе обследования больных хроническим описторхозом было показано, что активность деструктивных процессов сохранялась весь период наблюдения и после проведенной антигельминтной терапии. Обследования наблюдаемых больных проводились через 2 недели, 3 и 6 месяцев после лечения. Результаты прс!веденного исследования показали, что практически все выяв-

ленные значения - коэффициенты (К нДНК и К дДНК) и после эффективной антигельминтной терапии имели высокую степень достоверности различия с нормативными коэффициентами.

Таблица 4

Коэффициенты классифицирующих функций дискриминантного анализа уровня нативной ДНК (К нДНК) у больных хроническим описторхозом, в контрольной группе и у «практически здоровых»

Показатели Больные Контрольная группа «Практически здоровые»

КнДНК 0,3509098 1,484993 1,61225

Constant -2,2150679 -3,72774 -4,12009

Чувствительность, % 100,0 94,9

Специфичность, % 100,0 100,0

PPV, % 100,0 100,0

SMD 4,27 4,09

F 41,16 62,5

Р 0,00000007 0,0000005

Таблица 5

Коэффициенты классифицирующих функций дискриминантного анализа уровня денатурированной ДНК (К д ДНК) у больных хроническим описторхозом, в контрольной группе ■ у «практически здоровых»

Показатели Больные Контрольная «Практически

группа здоровые»

КдЦНК 0,3215697 1,411903 1,538491

Constant -2,216152 -4,02276 -4,45575

Чувствительность, % 96,2 89,7

Специфичность, % 100,0 90,0

PPV, % 100,0 97,2

SMD 4,73 3,53

F 45,55 53,83

Р 0,000002 0,000007

В первые две недели после проведенной антигельминтной терапии показатель К нДНК значительно повышался и достигал максимального значения за весь наблюдаемый период и оставался на высоком, практически не отличаю-

щемся от показателя у больных, уровне и через 3 месяца после лечения. Отчетливая тенденция к снижению К нДНК наметилась лишь через б месяцев после дегельминтизации. Но при сопоставлении с контрольной группой показатель К нДНК к концу периода наблюдения оставался по-прежнему достоверно высоким, что представлено на рисунке 1.

□ Контрольная группа □ Группа сравнения

Рис. 1 Уровни аутоантител к антигенам нативной ДНК (Кн ДНК) в сыворотке крови больных описторхозом после антигельмикгной терапии в динамике наблюдения

Тот же характер процесса выявлялся при определении аутоантител к антигенам денатурированной ДНК, данные представлены на рисунке 2. Отмечено повышение К дДНК до лечения при сравнении как с контрольной группой, так и с группой «практически здоровых» лиц. Тот же «всплеск» показателя К дДНК в первые 2 недели после проведенной антигельминтной терапии с максимальным его значением за весь период наблюдения. И только спустя полгода после дегельминтизации зарегистрировано снижение К дДНК, уровень которого по-прежнему не достигал значений показателей контрольной группы и группы (р <0,001) «практически здоровых» лиц (р <0,001).

Наряду с оценкой «средних» значений, был также проведен анализ индивидуальных разбросов показателей К нДНК и К дДНК в группах обследуемых больных. Как показали результаты анализа, высокий уровень аутоантител был выявлен в 90% случаев. После дегельминтизации значительное повышение К нДНК и К д ДНК, более чем в 1,5 раза при сравнении с уровнем аутоантител до лечения, отмечено в 32% и 21% случаев соответственно. Повышение показателей К нДНК и К дДНК было отмечено в основном у пациентов с повторным курсом дегельминтизации и выраженной сопутствующей патологией. Чаще всего больные страдали язвенной болезнью двенадцатиперстной кишки, у них развивались васкулиты, беспокоили артралгии, проявления дерматита.

Через 2нед. Через 3 мес Через 6 нес.

□ Контрольная группа В Группа сравнения

Рис. 2. Уровни аутоантител к антигенам денатурированной ДНК (Кн ДНК) в сыворотке крови больных описторхозом после антигельминтной терапии в динамике наблюдения

Анализ полученных данных по изучению уровня аутоантител к антигенам нативной и денатурированной ДНК позволяет говорить о наличие выраженной деструкции в патогенезе резидуального периода описторхозной инвазии.

Установлено, что продолжительность деструктивных процессов (свыше полугода) превышает регламентируемые сроки диспансерного наблюдения больных описторхозом. Это обусловливает неполное клиническое выздоровление и может быть существенной составляющей постописторхозных явлений, основой патологии в резидуальном периоде описторхоза даже при эффективной антигельминтной терапии и определять особенности течения резидуального периода инвазии.

Результаты исследования представляют практический интерес, в первую очередь с позиции определения тактики ведения больных, что динамика уровня аутоантител к антигенам нативной и денатурированной ДНК может быть использована в качестве объективного критерия активности процесса в различные периоды описторхозной инвазии.

Оценка динамики выявления специфических маркеров (антитела класса 1^Ми1£Ск антигенам о.АеКпеиэ и ЦИК у больных с хроническим описторхозом).

При проведении ИФА до лечения с одновременным использованием трех тест-систем у каждого пациента специфические маркеры (антитела класса ^М и/или и/или ЦИК) выявлены всего у 245 из 312 обследованных больных хроническим описторхозом, что составило 78,5% против 19,3% в группе контроля (по х2 р < 0,001).

Частота выявления специфических маркеров у обследованных больных до проведения антигельминтной терапии представлена в таблице 6.

Из данных таблицы видно, что среди больных хроническим описторхозом с сероположительным диагнозом Т|*М были зарегистрированы в 2,0%, и ЦИК — соответственно в 23,3 % и 74,7 % случаев.

При длительности инвазии не более года у большинства больных (у 45 из 55) выявлялись специфические антитела класса 1§С. были обнаружены всего у 3 пациентов этой группы. У 7 больных из 55 циркулировали иммунные комплексы.

С увеличением длительности описторхоза, как показали исследования, распределение специфических маркеров существенно изменялось.

Таблица 6

Частота выявления специфических маркеров у больных хроническим описторхозом с сероположительным диагнозом в зависимости от длительности инвазии

Маркеры Длительность течения описторхоза Всего

1 год 2-5 лет 6-10 лет и более

абс. число % абс. число % абс. число % абс. число %

IgM 3 U 1 0,4 1 0,4 5 2,0

IgG 45 1М 8 з,з 4 1,6 57 23,3

ЦИК 7 2,8 26 10,6 150 61,3 183 74,7

Всего 55 22,4 35 14,3 155 63,3 245 100,0

При течении инвазии более года и до 5 лет значительно уменьшился процент выявления IgG. Если у больных с течением хронического описторхоза не более года процент IgG среди сероположительных лиц составлял 81,8 %, то в груше с продолжительностью инвазии от 2-х до 5-ти лет - всего 22,9 %. Это были пациенты с реинвазией, у которых в анамнезе постоянное употребление речной рыбы семейства карповых и обострение процесса с манифестацией клиники.

В этом же временном периоде (течение инвазии более года и до 5 лет) возрос процент циркулирующих иммунных комплексов. При продолжительности описторхоза не более года противоописторхозные иммунные комплексы выявлялись у 12,7 % обследованных, при инвазии от 2-х до 5-ти лет — у 74,3%. В этом же периоде IgM были обнаружены лишь у одного больного.

Обследование больных с описторхозной инвазией более 5 лет показало, что у большинства серопозитивных лиц антитела циркулируют в виде иммунных комплексов. При течении описторхоза более 5 лет ЦИК зарегистрированы у 150 (61,3 %) больных из 245 с сероположительным диагнозом. IgG в этом

временном периоде были обнаружены только у 4 больных, что составило 1,6 %. Иммуноглобулины класса М к антигену Op. felineus были выявлены у одного больного.

Наблюдение за динамикой специфических маркеров у больных хроническим описторхозом после проведения антигельминтной терапии бильтрицвдом также показало преобладание антител, присутствующих в крови наблюдаемых больных в виде циркулирующих иммунных комплексов.

Через 2 недели после лечения ЦИК выявлены у 65 % обследованных из числа лиц с сероположительным диагнозом. Значительную долю среди серопо-ложительных результатов ЦИК составили и через 3 месяца после дегельминтизации - 35, 3 %. К концу диспансерного наблюдения спустя 6 месяцев после проведения антигельминтной терапии противоописторхозные иммунные комплексы выявлялись у 56,7 % пациентов с сероположительным диагнозом.

Таким образом, при хроническом описторхозе выявлена длительная и преимущественная циркуляция иммунных комплексов: при течении описпгорхо-за более 5 лет ЦИК зарегистрированы у 150 (61,3 %) больных из 245 с сероположительным диагнозом. При выявлении специфических маркеров после дегельминтизации также установлено преобладание противоописторхозных антител в виде циркулирующих иммунных комплексов.

При хроническом описторхозе был проведен анализ возможной взаимосвязи между уровнями аутоантител к антигенам ДНК и выявлением специфических маркеров описторхозной инвазии.

Наличие взаимосвязи было выявлено между уровнями аутоантител к антигенам ДНК и циркуляцией противоописторхозных иммунных комплексов.

В процессе динамического наблюдения после проведенной дегельминтизации происходило нарастание взаимосвязи между уровнями К нДНК, К дДНК и наличием специфических противоописторхозных ЦИК. Зарегистрированная циркуляция иммунных комплексов свидетельствовала о более выраженной деструкции по данным показателей уровня аутоантител к нДНК и дДНК.

Так, при выявлении противоописторхозных иммунных комплексов через 3 месяца после лечения уровень аутоантител к нДНК достигал 5,0. В более отдаленном периоде, через 6 месяцев после дегельминтизации эта взаимосвязь была еще более значима и показана на рисунке 3. При наличии специфических противоописторхозных ЦИК в этом периоде показатель К нДНК уже превышал 5,0.

6,0

5,5

□

Z

(О

1 4,0

I 3,5 в

г

О

2,0

□ Median

1.0

I 125V-75* ~T~ Min-Max

О 1

ЦИК через в месяцев

Рис 3. Взаимосвязь наличия противоописторхозных ЦИК и уровня К нДНК

Выявленная достоверная взаимосвязь между К нДНК, К дДНК и специфических ЦИК у больных описторхозом, а также на протяжении полугода после дегельминтизации, может рассматриваться с позиции механизмов развитии деструкции при описторхозе, патологии в резцдуальном периоде инвазии, возможного участия в патогенезе иммунных механизмов.

Определение концентрации лактоферрина при хронической опистор-хозной инвазии до и после антигельминтной терапии.

Определение лактоферрина как острофазного белка было проведено для оценки выраженности воспалительного процесса, диагностического значения этого показателя при хроническом описторхозе.

Результаты проведенных исследований показали, что в целом концентрация лактоферрина при оценке «средней» у больных хроническим описторхозом до проведения антигельминтной терапии достоверно (р < 0,004) превышала «среднюю» контрольной группы^данные представлены в таблице 7.

Таблица 7

Концентрация лактоферрина (нг/мл) в сыворотке крови больных хроническим описторхозом до лечения

Показатели Контрольная Группа Больные

N 87 78

М±т 997 + 62 1677+112

• Р <0,004

р*- с контрольной группой

При оценке результатов анализа распределений индивидуальных значений лактоферрина было установлено, что превышение уровня М ЗГ5 контрольной группы наблюдалось лишь у 45% обследованных.

Результаты проведенного дискриминантного анализа показателей уровня лактоферрина у больных хроническим описторхозом и в контрольной группе пациентов без инвазии показали невысокую чувствительность данного теста, не превышающую 54%.

Таблица 8

Концентрация лактоферрина (нг/мл) в сыворотке крови больных описторхозом

после антигельминтной терапии в динамике наблюдения

Показатели Контрольная группа Больные после лечения

через 2 недели через 3 месяца через 6 месяцев

N 87 51 30 22

М±т 997 + 62 1892+114 2040 ±169 1479+131

Р <0,005 <0,007 <0,001

Р1 <0,05 <0,03 >0,05

р* - с контрольной группой

р1** - с группой до лечения

Достоверный рост концентрации лактоферрина был выявлен у 95% наблюдаемых лиц через 2 недели и 3 месяца после дегельминтизации.

Максимальных значений этот показатель достигал к 3 месяцу резидуаль-ного периода описторхоза. Отчетливая тенденция к снижению «средней» уровня лактоферрина наметилась только через полгода после антигельминтной терапии, данные представлены в таблице 8. Концентрация его стала несколько ниже при сравнении с группой до лечения (р > 0,05), но не достигла «средней» значений контрольной группы (р < 0,001).

Следовательно, полученные результаты не позволяют использовать уровень лактоферрина в качестве универсального диагностического критерия описторхозной инвазии. В то же время достоверное повышение концентрации лактоферрина у большинства наблюдаемых лиц (95%) через 2 недели и 3 месяца после антигельминтной терапии, не приходящее к значению «средней» контрольной группы (р < 0,001) через полгода после дегельминтизации, даже при индивидуальных колебаниях этого показателя, является несомненным свидетельством активности воспалительного процесса при хронической фазе опи-сторхоза и в резидуальном периоде инвазии. Информативность данного теста возрастает при динамичном наблюдении за отклонениями от нормы содержания лактоферрина у конкретного больного.

Полученные данные позволяют использовать изменения показателя ЛФ для оценки активности процесса при хронической фазе описторхоза, в резидуальном периоде инвазии и подбора адекватной терапии в комплексном лечении больных.

Оценка клинической и лабораторной эффективности применения иммуностимулятора эхинацеи в комплексной терапии хронического опи-стрхоза в сравнении с базовым лечением.

Результаты проведенных нами исследований по оценке выраженности и продолжительности деструктивных процессов у больных хроническим опи-сторхозом, обосновали необходимость поиска средств для повышения эффективности лечения и реабилитации.

На основе изучения механизмов развития деструкции, оценки роли в этом процессе свободнорадикального окисления (Налобин В.А. 1991, Трунов А.Н., и др., 2000), иммунных механизмов, включая апоптотический механизм (Сепиа-швили Р.И. и др., 2000) нами было проведено изучение влияния эхинацеи на клиническое течение резидуального периода описторхоза, уровень аутоантител к антигенам нативной и денатурированной ДНК. Исследования проводились в сравнении с лечением только антигельминтиком бильтрицидом.

Обследовано 80 больных хроническим описторхозом. Для этого в сыворотке крови проведено определение уровня аутоантител к антигенам нативной и денатурированной ДНК. Больные обследованы до лечения с последующим распределением на 2 группы. У 50 больных основной группы (1-я группа, основная) проведен 5-ти дневный курс лечения препаратом эхинацеи. Пациенты принимали Echinacea purpura в таблетированной форме под коммерческим наименованием «Эстифан» («Вифитех», Россия) по 200 мг 3 раза в сутки. В последующем всем 80 больным проведена антигельминтная терапия бильтрицидом (фирма «Байер») по рекомендуемой схеме: 75 мг на кг/массы в три приема, перорально, курс лечения - 1 день. Из них 30 пациентов, получавшие только бильтрицид, составили группу сравнения (2-я группа).

Назначение эхинацеи («Эстифана») сыграло существенную роль в клинике резидуального периода описторхоза. У пациентов 1-ой группы после назна-

чения антигельминтика и приема эхинацеи при сравнении со 2-ой группой не зарегистрировано развития астеновегетативного синдрома и появления или усиления болей в правом подреберье, часто возникающих после приема бильт-рицида. Через 2 недели после лечения у больных, получавших только бильтри-цид (2-я группа) можно было отметить усиление болезненых проявлений со стороны органов гепатобилиарной системы: возрос процент жалоб на чувство дискомфорта в области правого подреберья, пациентов продолжали беспокоить боли в области печени и боли в эпигастрии. При лечении только бильтрицидом было зарегистрировано повышение уровня билирубина (желтушный синдром), у части больных гепатомегалией и у 26,7 % (8) наблюдаемых этой группы повышением активности АлАТ (явления цитолиза),данные представлены в таблице 9.

В этот же период наблюдения у пациентов 1-ой группы жалоб было значительно меньше, лишь у 7 больных сохранялись диспепсические явления, дискомфорт в области правого подреберья. Частота артралгий и васкулиггов была прежней. Через 3 месяца после проведенного лечения болезненные проявления со стороны гепатобилиарной системы наблюдались только у пациентов 2-ой группы. Наиболее ярко клиническая эффективность иммуностимуляции проявилась через 6 месяцев после проведенного лечения. У больных, в комплексе лечения получавших эхинацею (1-ая группа), восстановление равновесия сил организма происходило более полноценно. В этом периоде наблюдения пациенты не предъявляли жалоб на какие-либо проявления дискомфорта со стороны гепатобилиарной системы, были активны, работоспособны. Практически у всех больных 1-ой группы с атралгиями и васкулитами наступило выздоровление.

Таблица 9

Клинико-биохимические показатели у больных хроническим описторхозом в зависимости от проводимого лечения в динамике наблюдения

\

»

Клинико- Частота выявления после лечения (%)

биохимические пока- Через 2 недели Через 3 месяца Через 6 месяцев

затели 1 груп- 2 груп- 1 груп- 2 груп- 1 груп- 2 груп-

па па па па па па

л = 50 я = 30 « = 50 и = 30 « = 50 « = 30

Синдромы:

астеновегетативный, 10,0 36,4 нет нет нет 6,7

Диспепсический, 14,0 36,4 4,0 15,9 нет 20,0

Гепатомегалия нет 10,0 нет нет нет нет

Гипербилирубине- нет 10,0 нет 10,0 нет 6,7

мия нет 26,7 нет 16,7 нет 6,7

Гиперферментемия

(явления цитолиза)

Примечание: 1-я группа - лечение эхинацеей и бильтрицидом 2-я группа - лечение бильтрицидом

Без назначения эхинацеи только дегельминтизация бильтрицидом не обеспечила полноценного выздоровления. У всех больных 2-ой группы сохранялись явления васкулита и у 9 из 13 — артралгии весь регламентируемый при описторхозе период диспансерного наблюдения (в течение полугода). Наряду с клиническими проявлениями иммунопатологии (артралгии, васкулиты) из числа других, предъявляемых до лечения жалоб, у 6 человек оставались неприятные ощущения в области правого подреберья, которые компенсировались диетой. Результаты биохимического исследования сыворотки крови у этих выявили умеренную гиперферменте мию и повышение уровня билирубина. Слабость, аллергические проявления со стороны кожи и органов дыхания были зарегистрированы в 1 случае. Других жалоб не было.

Определение уровня аутоантител к антигенам нативной и денатурированной ДНК в динамике наблюдения через 2 недели, 3 и 6 месяцев после проведенного лечения также выявило значительные различия изучаемых показателей в группах обследованных больных, данные показаны на рисунках 4, 5.

5-

Рис 4. Уровни аутоантител к нДНК в сыворотке крови больных хроническим описторхозом в зависимости от проводимой терапии в динамике наблюдения

В группе больных, получавших эхинацею («Эстифан»), наблюдалось значительное снижение как К нДНК, так и К дДНК. Нормализация их уровня произошла в сроки, установленные для диспансерного наблюдения при описторхозе: показатели К нДНК и К дДНК снижались к 6 месяцам после терапии, приходя к значениям, достоверно не отличающимся от их содержания в контрольной группе.

При осуществлении терапии только бильтрицидом к концу периода наблюдения активность деструктивных процессов сохранялась. Снижение К нДНК и К дДНК намечалось только спустя полгода после дегельминтизации. При этом уровень их показателей по-прежнему не достигал значений контрольной группы (р < 0,001) и группы «практически здоровых» лиц (р < 0,001).

I

I I

Рис 5 Уровни аутоангител к дДНК в сыворотке крови больных хроническим описгорхозом в зависимости от проводимой терапии в динамике наблюдения

Полученные результаты свидетельствуют о несомненном влиянии эхина-цеи на активность деструктивных процессов при хроническом описторхозе. Данное положение наглядно иллюстрируется динамикой исследованных показателей уровней аутоангител к антигенам нативной и денатурированной ДНК в процессе всего регламентируемого периода диспансерного наблюдения.

Иммуностимуляция эхинацеей способствует ускорению элиминации антигенов описторхов, влияет на динамику образования ЦИК, прекращая тем самым персистенцию этиологического фактора и развитие иммунопатологических процессов при хроническом описторхозе. Таким образом, прослеживается взаимообусловленность рассматриваемых процессов, что в конечном итоге способствует стиханию активности патологического процесса и обосновывает применение в комплексном лечении больных хроническим описгорхозом эхи-нацеи для эффективной иммунореабилитации.

Анализ полученных данных позволяет сделать следующие выводы.

Выводы.

1. У пациентов с хроническим описгорхозом, независимо от манифестного или латентного течения инвазии, тестируется выраженность деструктивных процессов и аутоиммунных реакций, о чем свидетельствует повышение уровня аутоантител к антигенам нативной и денатурированной ДНК. Динамика нарастания их уровней отражает активность патологического процесса.

2. Выраженность деструктивных процессов и аутоиммунных реакций при хроническом описторхозе сохраняется и после эффективной дегельминтизации и превышает регламентируемые сроки диспансерного наблюдения больных, что определяет развитие симптомокомплекса постописторхозных явлений в резидуальном периоде заболевания.

3. У пациентов с хроническим описторхозом установлено достоверное повышение концентрации лактоферрина, что свидетельствует о выраженности воспалительных процессов в патогенезе заболевания до и после проведения ан-тигельминтной терапии.

4. Специфические маркеры (противоописторхозные антитела класса IgM и/или IgG, и/или ЦИК) выявляются у 78,5 % обследованных больных хроническим описторхозом, с увеличением длительности инвазии у большинства серо-позитивных лиц антитела циркулируют в виде иммунных комплексов.

5. При хроническом описторхозе выявлены взаимосвязи между уровнями аутоантител к антигенам нативной и денатурированной ДНК и содержанием специфических циркулирующих иммунных комплексов.

6. Использование в комплексной терапии хронического описторхоза иммуностимулятора эхинацеи приводит к достоверному снижению выраженности деструктивных процессов, аутоиммунных реакций и положительному терапевтическому эффекту лечебных мероприятий в резидуальном периоде заболевания по сравнению с данными, полученными при применении базовой терапии.

Практические рекомендации.

1. Определение уровня аутоантител к антигенам нативной и денатурированной ДНК и специфических противоописторхозных циркулирующих иммунных комплексов позволяет оценить выраженность деструктивных процессов при хроническом описторхозе в зависимости от течения и периода инвазии. Динамические изменения уровня этих показателей может быть использовано в качестве критерия активности патологического процесса, а также изле-чиваемости.

2. Показана клинико-лабораторная эффективность применения иммуностимулирующего препарата эхинацеи «Эстифан». Его использование рекомендовано в комплексной терапии описторхоза для повышения качества лечебных мероприятий на территории Алтайского края и республики Алтай.

Список работ, опубликованных по теме диссертации.

1. Карбышева Н.В., Pay Н.Ю. Дискриминантный анализ в оценке выраженности процесса при описторхозе. // Журнал РАЕ- Успехи современного естествознания.-2004.-№ 4. С. 110.

2. Pay, Н.Ю. Иммунореабилитация в комплексной терапии описторхоза.//Журнал РАЕ- Фундаментальные исследования.-2004.-№ 1.-С.58.

3. Карбышева Н.В., Pay Н.Ю. Диагностика активности процесса при описторхозе// Журнал РАЕ- Фундаментальные исследования.-2004.- № 2.-С.151.

4. Карбышева Н.В., Киушкина И.Н., Pay Н.Ю., Татаринцев П.Б., Со-лощенко М.Ф. Возможности диагностики описторхозной инвазии: Медицина и

образование в XXI веке: Тез. докл. междунар. науч.- практ. конф - Новосибирск, 2004.-74 с.

5. Карбышева Н.В., Киушкина И.Н., Pay Н.Ю., Танашкин C.B. Клини-коиммунобиохимические взаимосвязи в патогенезе хронического описторхоза: Материалы итоговой научной конференции, посвященной 50- летаю АГМУ,-Барнаул, 2004.- 136 с.

6. Воробьев A.A., Тельных Ю.В., Халтурина Е.О., Киселевский М.В., Карбышева Н.В., Гранитов В.М., Хабаров A.C., Киприятов Д.В., Pay Н.Ю. и др.. Иммунореабилитация при инфекционно-воспалительных и соматических заболеваниях с использованием трансфер факторов: Методическое письмо Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации.-Москва.-2004.

7. Карбышева Н.В., Киушкина И.Н., Pay Н.Ю. Диагностика описторхоза: проблемы, возможные пути решения. // Научно-практический журнал Сибирского отделения РАМН, Сибирский журнал гастроэнтерологии и гепатоло-гии.-2004.-№ 18.-167-170С.

Список использованных сокращений.

АГ -антиген

AT -антитело

ААТ -аутоантитело

ДЦНК - денатурированная ДНК

ИЛ - интерлейкин

ИФА - иммуноферментный анализ

ЛФ - лактоферрин

нДНК - нативная ДНК

ЦИК - циркулирующие иммунные комплексы

Соискатель Pay Н.Ю.

Подписано в печать 24 12.04 г. Формат 60 х 84 / 16 Усл. печ. л. 1.0. Тираж 100 экз. Заказ Л® 2п/05

Отпечатано в типографии издательства «Сибмедиздагг» 630075, г. Новосибирск, ул. Залесского, 4 Тел /факс" (3832) 25-24-29" E-mail" riomed@mail.ru

1 ►

!'i с , /

РНБ Русский фонд

2005-4 41450

%

22 АПР 2005 / 1323