Автореферат и диссертация по медицине (14.00.25) на тему:Оптимизация создания антиаритмических средств растительного происхождения

На правах рукописи

вожовой

ВАЛЕРИЙ АРКАДЬЕВИЧ

УДК 615.225.3:616.151.4

ОПТИМИЗАЦИЯ СОЗДАНИЯ АПТИАРИТМИЧЕСКИХ СРЕДСТВ РАСТИТЕЛЬНОГО ПРОИСХОЖДЕНИЯ

14.00.25. - Фармакология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук

Москва-1999

Работа выполнена в Украинской Фармацевтической Академии

НАУЧНЫЙ КОНСУЛЬТАНТ:

Академик АНТК Украины, заслуженный деятель науки и техники Украины, доктор фармацевтических наук, профессор Б.А.Самура

ОФИЦИАЛЬНЫЕ ОППОНЕНТЫ:

Доктор медицинских наук, профессор Е.Г.Изюмов Доктор медицинских наук, профессор А.И.Мачула Заслуженный деятель науки и техники РФ, доктор медицинских наук, профессор Л.Н.Сернов

Ведущая организация: НИИ Фармакологии РАМН

Защита диссертации состоится " 2 " ноября 1999 г. в 13 часов на заседании диссертационного Совета при Московском государственном медико-стоматологическом университете (103473, Москва, ул. Долгоруковская, 4).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке университета (Москва, ул. Вучетича, д. 10А).

Автореферат разослан " 27 " сентября 1999 г.

Ученый секретарь диссертационного Совета, доктор медицинских наук,

профессор Л.Л.Кириченко

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Профилактика и лечение заболеваний сердечно-сосудистой системы является одной из наиболее актуальных проблем современной медицины. Одним из наиболее частых тяжелых осложнений сердечно-сосудистых заболеваний являются нарушения сердечного ритма. В последние годы арсенал применяемых в клинике антиаритмических средств значительно расширился (Машковский М.Д., 1998; Крылов Ю.Ф., 1997; 1998). Однако, нарушения сердечного ритма, как самостоятельная нозологическая форма и как грозное осложнение ряда сердечно-сосудистых заболеваний, остается главной причиной смерти больных.

Разработка новых патогенетических подходов к фармакотерапии гипок-сических и ишемических состояний является одной из важных задач, стоящих перед современной фармакологией (Каверина Н.В., Сколдинов А.П., 1990; Opie L.H. 1992. Значительный успех в развитии данного направления может быть достигнут лишь в том случае, если действие лекарства будет направлено на патогенетические процессы, лежащие в основе развития гапоксических и ишемических повреждений (Мазур H.A., Абдалла А., 1995).

Поэтому поиск новых более эффективных антиаритмических препаратов имеет важное практическое значение и является одним из актуальных направлений современной экспериментальной фармакологии (Бердяев С.Ю.,1996).

В настоящее время интенсивно проводится поиск новых лекарственных препаратов среди растений, издавна применяемых в народной медицине. Большинство растений обладают малой токсичностью, могут длительно применяться без существенных побочных явлений. По литературным данным для лечения сердечно-сосудистых заболеваний используют различные виды чины: посевную, черную, японскую и другие (Ковалев В.Н., Шестко И.Э., 1993). В связи с этим актуальным является поиск новых биологически активных веществ (БАВ) из растительного сырья, обладающих антиаритмической активно-

стыо, которые могут быть заготовлены в достаточном объеме на территории Украины. Таким сырьем могут быть растения рода чина из семейства бобовых.

Работа выполнена в соответствии с планами научных исследований по созданию новых антиаритмических средств в Украинской фармацевтической академии (№ гос. регистрации 0198 У007008).

Цель исследования. Целью настоящего исследования явилось сравнительное экспериментальное изучение специфической активности механизма действия нового антиаритмического препарата на основании изучения фармакологической активности растительного комплекса биологически активных веществ из чины посевной, а также токсикологические исследования безопасности препарата.

Основные задачи исследования:

1. Провести фармакологический скрининг комплекса БАВ из чины посевной с целью выявления его биологической активности.

2. Исследовать спектр антиаритмического действия комплекса БАВ из чины посевной для определения его эффективности при предсердных и желудочковых типах нарушения ритма сердечной деятельности.

3. Изучить антифибрилляторные свойства комплекса БАВ из чины посевной в условиях ишемии и реперфузии миокарда.

4. Изучить влияние комплекса БАВ из чины посевной на основные показатели в деятельности сердца и гемодинамики на интактных животных, а также в условиях ишемии реперфузии миокарда.

5. Оценить влияние комплекса БАВ из чины посевной на коронарный кровоток у животных с интактным и ишемизированным миокардом, провести анализ эффектов на изолированном перфузируемом сердце.

6. Исследовать возможные электрофизиологические механизмы, обуславливающие антиаритмическое действие комплекса БАВ из чины посевной.

7. Изучить комплекс БАВ по параметрам безвредности в соответствии с требованиями ФК МЗ РФ.

Научная новизна. Впервые изучена фармакологическая активность ра -тительного комплекса БАВ (условное название "Латифен") из чины посевной ■ установлена его антиаритмическая активность. На различных моделях нарушений ритма сердца (аконитиновая, хлоридкальциевая, хлоридбариевая и др.) установлено, что растительный комплекс БАВ из чины посевной обладает свойствами антиаритмиков I и IV классов. Латифен более эффективен и обладает более широким спектром действия, чем аймалин и аллапинин. Доказано, что комплекс БАВ из чины посевной поддерживает гемодинамику и деятельность сердца в условиях очаговой и глобальной ишемии, при этом препарат практически не влияет на деятельность интактного сердца. В защитном действии ла-тифена на миокард важную роль играет его антиоксидантное и антигипоксиче-ское действие.

Практическая значимость полученных результатов. Данные проведенных экспериментальных исследований специфической активности и безопасности латифена послужили основой при подготовке материалов на новое антиаритмическое средство с целью представления в МЗ Российской Федерации и Украины для получения разрешения на проведение клинических испытаний.

Результаты систематического анализа изученного растительного комплекса из чины посевной используются в учебном процессе и при проведении научно-исследовательских работ на кафедрах фармакогнозии, фармакологии, фармакотерапии и клинической фармации Украинской фармацевтической академии.

Подготовлены методические рекомендации для студентов и аспирантов по оптимизации создания антиаритмических средств растительного происхождения.

Апробация работы. Основные положения диссертации доложены и обсуждены на научных конференциях (Киев, 1994; Харьков, 1995-1997); I Конгрессе мировой федерации украинских фармацевтических товариществ (Львов,

1994); научно-практической конференции "Современные проблемы фармакологии" (Полтава, 1995); международной научно-практической конференции по созданию и апробации новых лекарственных средств (Москва, 1997-1998); международной научно-практической конференции по созданию и апробации новых лекарственных средств (Каунас, 1§97); ГУ-м и У-м Российском национальном конгрессе "Человек и лекарство" (Москва, 1997, 1998); научных конференциях кафедр патологической физиология, фармакологии, фармакотерапии, клинической фармации (1998-1999); международной научно-практической конференции "Оптимизация создания лекарственных препаратов" (Белгород, 1999).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 31 печатная работа.

Структура и объем диссертации. Диссертационная работа, объемом 271 страница, состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов , результатов собственных исследований и их обсуждения, выводов и практических рекомендаций, содержит 85 таблиц и 26 рисунков. Список литературы включает 142 отечественных и 161 источник зарубежных авторов.

На защиту выносятся:

— экспериментальные данные исследования фармакологической активности комплекса БАВ, выделенных из чины посевной;

— влияние нового растительного препарата латифена на основные показатели функции сердца и ишемизированного миокарда;

— исследование спектра антиаритмической активности латифена;

— специфическая активность латифена;

— результаты доклинического изучения безопасности латифена.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Эксперименты выполнены на 60 кроликах породы шиншилла, 80 собаках, 60 кошках, 1300 белых крысах линии Вистар, 1200 беспородных мышах. В качестве объекта исследования был взят комплекс биологически активных веществ (БАВ), выделенный из чины посевной на кафедре фармакогнозии Укра-

инской фармацевтической академии под руководством доктора фармацевтических наук, профессора В.Н.Ковалева.

Фармакологическая активность растительного комплекса БАВ из чины посевной изучена в соответствии с объемом специального фармакологического скрининга. В каждой серии опытов было использовано 5-10 животных.

Для выявления фармакологической активности комплекса БАВ из чины посевной (латифен) исследовали противовоспалительную, противогипоксиче-скую, анаболическую, гипогликемическую, антиаритмическую активности в опытах на лабораторных животных.

Противовоспалительную активность латифена исследовали на модели каррагининового отека в опытах на мышах по общепринятой методике. Латифен вводили в дозах 10,25 и 50 мг/кг перорально.

Антигипоксическую активность латифена исследовали в сравнении с эталонным препаратом оксибутират натрия на беспородных мышах-самцах, массой 18-22 г.

Гипогликемическая активность латифена была изучена на здоровых кроликах массой 2,5+3,0 кг. Латифен вводили в дозе 40 мг/кг. Количество глюкозы в крови определяли орто-толуидиновым методом, препаратом сравнения служил глибенкламид в дозе 15 мг/кг.

Антиоксидантные свойства были изучены в опытах ш vivo и in vitro по накоплению конечного продукта перекисного окисления липидов (ПОЛ) - малонового диальдегида (МДА) с помощью методов И.Д.Стальной и Г.Г.Гаришвили, Ю.А.Владимирова и А.И.Арчакова.

Определение трансмембранных ионных токов проводили на трабекулах предсердия лягушки Rana esculenta длиной около 3 мм со средним диаметром 0,1 мм. Для фиксации потенциалов и измерения ионных токов использовали методические приемы, описанные ранее K.Kelemen с соавт. (1974). Во избежание отклонений при регистрации ионных токов вследствие особенностей индивидуального строения сердечных волокон, использовали только те трабекулы,

потенциал действия которых был не менее 110 мВ и фоновые величины которых восстанавливались после отмывания в растворе Рингера. Эксперименты проводили в специальной термостатической камере при постоянной температуре 18°С. Трабекулы стимулировали прямоугольными импульсами частотой 0,6 Гц.

Быстрый входящий ток регистрировали, используя раствор Рингера, не содержащий СаС12. Медленный входящий ток регистрировали, используя раствор Рингера, в котором №С1 был замещен эквимолярным количеством хо-линхлорида с добавлением 0,1 лшоль!л сульфата атропина, см. К.Ке1ешеп с со-авт. (1974).

Возможное эмбриотоксическое, гонадотропное, иммунотропное и мутагенное действие латифена изучали в соответствии с официальными методическими рекомендациями Фармакологического комитета МЗ РФ.

Статистический анализ полученных экспериментальных данных проводили методами вариационной статистики с применением критерия Стьюдента. Расчеты выполняли на персональном компьютере с использованием программного обеспечения "\Vmdows-95".

Эффективную дозу латифена определяли на модели хлоридкальциевой аритмии и рассчитывали по методу В.М.Штабского (1980).

В соответствии с поставленными задачами, для оценки антиаритмической активности использовали "Методические рекомендации" Фармакологического комитета МЗ РФ по экспериментальному и клиническому изучению новых антиаритмических лекарственных средств. Нарушения ритма сердца воспроизводили внутривенным введением аконитин-сульфата в дозе 40 мкг/кг, кальция хлорида - 200-250 мг/кг, бария хлорида - 4 мг/кг.

Изучаемые препараты вводили за 2-3 минуты до введения аритмогенных агентов или на фоне развившейся аритмии. Изучено влияние латифена на частоту сердечных сокращений, артериальное давление, показатели ЭКГ, величину

интервала PQ, амплитуду зубца R. Регистрацию ЭКГ проводили во II стандартном отведении ( Орлов В.Н.,1993).

Критерием эффективности латифена при аконитиновой аритмии считали отсутствие аритмии или появление единичных экстрасистол. Оценку антиаритмического эффекта при хлор кальциевой аритмии проводили по уменьшению количества случаев фибрилляции желудочков, а положительным терапевтическим эффектом при хлорид бариевой аритмии считалась полная нормализация синусного ритма от начала 6-ой минуты до конца 10-ой минуты.

В острых опытах на беспородных собаках при нембуталовом наркозе экспериментальную аритмию по "методу Харриса" вызывали перевязкой левой коронарной артерии. Спустя 24 часа, животным с устойчивым нарушением ритма сердца, внутривенно вводили латифен в дозе 40 мг/кг при помощи инъ-ектора Seringer pump 355 (Sage Instruments, USA).

Метод оценки основных показателей гемодинамики и деятельности сердца производили на взрослых беспородных анестезированных кошках обоего пола массой 3,2+4,1 кг. Анестезированных животных (этаминал натрия, 40 мг/кг веса животного, в/в до уровня Ша) переводили на искусственное дыхание кислородно-воздушной смесью при помощи аппарата «Лада» (СССР). Вентиляцию легких производили из расчета130-150 мл!мин!кг веса животного таким образом, чтобы pH артериальной крови колебался в пределах 7,35+7,45, а р02 было выше 90 мм рт. ст. Контроль показателей газового состава крови производили на газоанализаторе «Corning-165» (фирма «Corning», Англия).

Катетеризировали правую бедренную иену для введения препарата и левую бедренную артерию для измерения системного артериального давления. Эти катетеры также использовали для забора проб крови и контроля ее газового состава.

После левосторонней тороко- и перикардотомии выделяли восходящую часть дуги аорты, на которую помещали датчик электромагнитного расходомера крови MFV-1200 (фирма Нихон Коден, Япония).

В полость левого желудочка, через верхушку сердца, вводили катетер для

регистрации левожелудочкового давления и его первой и второй производных [dP/dt и

Измерение артериального и левожелудочкового давления производили при помощи электрических манометров фирмы «Elema-Simens» (Швеция-ФРГ), которые перед начатом каждого эксперимента калибровали. В течение всего эксперимента регистрировали ЭКГ во II стандартном отведении. В качестве регистратора использовали «Mingographe-82» (фирма Elema-Simens, Швеция-ФРГ).

На основании анализа кривой фазового кровотока в восходящей части дуги аорты (Spenser M.F., Greiss P.S., 1962) и других регистрируемых показателей (артериальное и левожелудочковое давление, ЭКГ) определяли параметры гемодинамики и деятельности сердца у кошек.

Определение порога электрической фибрилляции сердца проводили на беспородных кошках обоего пола массой 2,5-3,7 кг. Анестезию, искусственное дыхание животных и контроль газового состава крови осуществляли также, как и при проведении экспериментов по изучению основных показателей гемодинамики и деятельности сердца.

Катетеризировали правую бедренную вену для введения соединения и, после левосторонней торако- и перикардотомии, к правому желудочку сердца подшивали серебряные биполярные электроды. Через 30 мин, после подшития электродов, определяли порог электрической фибрилляции сердца сканированием электрически уязвимого периода сердечного цикла (восходящая часть зубца Т на ЭКГ) серией из 20 прямоугольных импульсов постоянного тока увеличивающейся интенсивности (длительность импульса 4 мс, частота 50 имп/с) до возникновения фибрилляции. Величина порога фибрилляции оценивалась по минимальной интенсивности тока (в милиамперах), вызывающей фибрилляцию. В работе использовали электрический стимулятор 215/11 HSE (Германия). Артериальное давление регистрировали при помощи электроманометров фир-

и

мы Екша-Бтепз (Швеция-ФРГ), ЭКГ во II стандартном отведении - при помощи электрокардиографа "ЭКЧТ-04" (СССР) (Каверина Н.В. с соавт., 1985).

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ Анализ полученных результатов фармакологического скрининга показал, что комплекс биологически активных веществ из чины посевной (табл.1) проявляет слабую противовоспалительную активность. Наибольший противовоспалительный эффект (38,1%) у латифена наблюдали в дозе 25 мг/кг, по активности уступает вольтарену на 29,5%.

Таблица 1

Противовоспалительная активность латифена на модели каррагининового отека у мышей

Объект исследования Доза, мг!кг

10 25 50

Масса лапки в мг х±Бх Угнетение отека % Масса лапки в мг х±Бх Угнетение отека % Масса лапки в мг х±8х Угнетение отека %

Латифен 138,4 + 4,5* 15,1 127,7+2,8* 23,1 131,5 ±3,7* 20,8

Вольтарен 78,6 + 4,5' 52,6 - - - -

Контроль 166 ±2,5 100 - - - -

Примечание: * - Р< 0,05 в сравнении с контролем.

Исследование влияния латифена на продолжительность жизни в условиях гепоксии (табл.2) показало, что средняя продолжительность жизни контрольных мышей составляла в среднем 19,7 мин, что соответствует требованиям Фармакологического Комитета Министерства Здравоохранения Российской Федерации. Под действием латифена в дозе 40 мг/кг наблюдали увеличение продолжительности жизни до 23,5 мин, что сопоставимо с действием натрия оксибутирата.

Рис. 1. Влияние однократного введения латифена (40 мг/юг) и оксибутирата натрия (400 мг/кг) на продолжительность жизни мышей в условиях гемической гипоксии Примечание: * - Р< 0,05 в сравнении с контролем.

Исследование антигипоксической активности было проведено также при

физических гипоксиях. Гипоксию с гиперкапнией вызывали у мышей путем

помещения каждого животного индивидуально в стеклянный сосуд емкостью

250 мл и герметично закрывали.

Таблица 2

Влияние однократного введения латифена и оксибутирата натрия на продолжительность жизни мышей в условиях гипоксии с гиперкапнией

№ Препараты Доза Кол-во Продолжительность жизни р

п/п (мг/кг) животн. в мин в % к контролю

1. Контроль - 10 28,5 ± 1,62 100 -

2. 20 8 26,9 ± 1,96 94,4 >0,5

3. Латифен 40 8 28,3 ±3,19 99,3 >0,5

4. 80 8 32,7 + 3,11 114,7 <0,5

5. Оксибутират 200 6 41,8 ±4,6 134,0 <0,05

6. натрия 400 6 45,1 ±5,13 144,6 <0,01

Полученные результаты (табл.2) показали, что эффекты оксибутирата натрия на двух моделях гипоксий соответствуют данным литературы о его высо-

кой антигипоксической эффективности при физических гипоксиях (гипоксия с гиперкапнией, острая гипобарическая гипоксия) и низкая - при химических гипоксиях (гемическая, гистотоксическая), что позволяет оценивать данные модельные условия как адекватные условия оценки антигипоксической активности латифена.

Установлено, что латифен в дозах 40-80 мг!кг обладает выраженной антигипоксической активностью в условиях гемической гипоксии и менее выраженной в условиях гипоксии с гиперкапнией.

Анаболическую активность латифена изучали на гонадэктомированных крысах-самцах по методике Herschlerger Z, Shipley Е, Meyer R. Препаратом сравнения был выбран оротат калия, обладающий анаболическим действием, но не проявляющий андрогенной активности. Эффективная доза ЕД50 латифена и оротата калия была установлена экспериментальным путем и соответственно равна 40 и 28 мг!кг.

Результаты проведенных экспериментов представлены в табл. 3.

Таблица 3

Анаболическое действие латифена на крысах-самцах

Анаболическое действие Масса животных

Объект исследования Доза мг!кг Масса т. Levator ani л«г/100г массы В % к контролю Анаболическая активность % В начале эксперимента В конце эксперимента

Латифен' 40 25,1+0,72* 141,01 41,01 55,4±2,32 79,2±3,71

Оротат калия 28 26,1+0,92* 147,2 47,2 56,3±1,75 81,3+3,41

Контроль - 17,8±0,83 100 - 56,6±2,71 70,3±3,23

Примечание: * - Р<0,05 по отношению к контролю.

Анализ представленных данных свидетельствует о том, что латифен обладает анаболической эффективностью, которая по степени выраженности близка к анаболической активности калия оротата.

Влияние латифена на углеводный обмен (рис.2) показали, что латифен, введенный однократно здоровым кроликам в дозе 40 мг/кг обладает гипоглике-мическим эффектом. Наибольшее снижение уровня сахара в крови на 4,1 ± 0,68 лшоль/л (29%), по сравнению с исходным уровнем 5,9 ± 0,32 ммоль/л, наблюдалось через шесть и восемь часов после введения. Через 10 и 24 часа после введения латифена концентрация глюкозы в крови составляла 4,5 ± 0,35 и 5,0 ± 0,16 ммоль/л.

*

Рис. 2. Гипогликемическая активность латифена у интактных кроликов Примечание: * Р<0,05 - статистическая разница в сравнении с начальным уровнем .

Глибенкламид, введенный в дозе 15 мг/кг, наиболее активно снижал концентрацию сахара через 4-8 часов после введения. Наибольшее снижение глюкозы в крови составляло 4,0 ± 0,28 ммоль/л (33,4%) по сравнению с исходным уровнем 6,0 ± 0,29 лшоль/л.

Сравнительный анализ гипогликемической активности латифена и отечественного перорального антидиабетика глибенкламида показал, что латифен обладает умеренным гипогликемическим действием.

Экспериментальную модель аритмии вызывали внутривенным введением аконитина-сульфата в дозе 40 мг/кг. Латифен и препараты сравнения: новокаи-намид и аймалин вводили внутривенно за 3-5 минут до аконитина в эффектов-

ных дозах. Критериями эффективности исследуемого комплекса БАВ из чины посевной были начало и продолжительность аритмии, процент смертности, динамика ЭКГ.

Таблица 4

Антиаритмическая активность латифена на модели ___аконитиновой аритмии_

Объект Исследования Начало аритмии, Продолжительность аритмии, мин Летальность в%

Контроль 2,39 ±0,16 18,26 ±1,02 100

Новокаинамид -ь аконитин 6,31 ± 1,03* 18,11 ± 1,45 50

Аймалин + аконитин 3,45 ±1,06 14,18 ± 1,01* 60

Латифен + аконитин 8,12 ± 1,01* 8,04 ± 1,07* 10

Примечание: *- Р < 0,05 в сравнении с контрольными данными.

контроль аймалин латифен

Рис. 3. Антиаритмическая активность латифена на модели аконитиновой аритмии Примечание: *- Р<0,05 в сравнении с контролем

Исходя из результатов исследований (табл.4, рис.3), можно сделать вывод, что латифен способствует более позднему началу аритмии в сравнении с новокаинамидом и аймалином на 1,99 и 4,67 мин соответственно, продолжительность аритмии уменьшается в 1,63 и 1,76 раз, а процент гибели экспери-

ментальных животных становится ниже в 5 и 6 раз по сравнению с новокаина-мидом и аймалином, соответственно.

На основании приведенных данных можно сделать вывод, что латифен превосходит по активности препараты сравнения на данном виде аритмий.

Следовательно, сравниваемые с новокаинамидом на этой модели вещества могут быть отнесены к I-классу антиаритмических средств по классификации Vanghan- Williams Е.М. (1984).

Таким образом, полученные данные на модели аконитиновой аритмии позволяют предположить, что испытуемый препарат обладает свойствами 1 класса антиаритмиков и имеет несомненные преимущества, заключающиеся i значительной терапевтической широте.

Экспериментальную модель хлоридкальциевой аритмии вызывали внутривенным введением кальция хлорида в дозе 200 мг!кг. Латифен и препараты сравнения вводили внутривенно за 5 минут до кальция хлорида в эффективных дозах.

Таблица 5

Антиаритмическая активность латифена на модели хлоридкальциевой аритмии

Объект Начало Продолжение Летальность

исследования аритмии мин аритмии мин в%

Контроль 4,24+ 1,16 58,16 ±3,42 40

Новокаинамид + кальция хлорид 7,04 ± 1,13* 43,12 ±2,18* 20

Аймалин + кальция хлорид 5,32 ± 1,59 45,32 ±3,01* 30

Латифен + кальция хлорид 9,16+1,08* 22,13 ±2,04* 5

Примечание: * - Р<0.05 в сравнении с контролем и исходными данными.

Как видно из полученных результатов (табл.5), предварительное введение латифена способствует увеличению латентного периода начала аритмий в

сравнении с новокаинамидом и аймалином на 2,12 и 3,8 мин, соответственно. Продолжительность аритмии уменьшилась в 1,9 и 2,04 раза, соответственно. Наиболее существенным из сравниваемых показателей является уменьшение процента смертности экспериментальных животных в 5 раз в сравнении с аймалином и в 4 раза по сравнению с новокаинамидом. Латифен обладает способностью защищать сердце при хлоркальциевой интоксикации и проявляет свойства антиаритмиков IV класса, изученное соединение превосходит по эффективности эталонный препарат данного класса.

Исследование действия латифена на аритмию, вызванную бария хлоридом, показало, что на 2-ой минуте после введения препарата (т.е. на 4-ой минуте после введения бария хлорида) аритмия полностью устраняется, и синусовый ритм наблюдается до конца наблюдения, т.е. более 15 мин.

В качестве эталона нами был взят сематилид, который вводили кроликам массой 3,5 кг в дозе 5 мг/кг после предварительного введения раствора бария хлорида. Наблюдение проводили в течение 15 минут. Сематилид полностью устранил аритмию с 6-ой по 8-ую минуты после его введения (т.е. с 8-ой по 10-уго минуты после введения бария хлорида). Затем на 9-ой минуте аритмия вновь возобновилась и продолжалась до конца 15-ой минуты. Терапевтическим эффектом считали отсутствие нарушений сердечного ритма в период наблюдения до 15 минут после введения бария хлорида. Экспериментальные исследования показали, что обычно через 5-6 минут наступает эффект. Продолжительность антиаритмического эффекта от 2 минут до 7 и более. Необходимо отметить, что продолжительность эффекта в ряде опытов у препарата латифена была гораздо больше, чем у сематилида.

Таким образом, у латифена обнаруживаются выраженные свойства антиаритмиков Ш-го класса, причем изученное соединение намного превосходит по эффективности эталонный препарат данного класса — сематилид.

Таблица б

Влияние латифена на показатели ЭКГ бодрствующих собак во втором стандартном отведении (М ± т)

HR PQ PQ корр QRS QRS корр QT QT корр

Время (мс) (мс) (мс) (мс) (мс) (мс) (мс)

Фон 103,0±20,9 85,1+3,0 93,0±5,1 40,1±2,0 31,7±1,7 210+17,8 261,0±28,0

20 113,0±13,2 95,0±2,7 115,1±11,0 45,0±2,1 33,0±1,7 218,1±13,6 290,1±19,0

30 111,0±18,9 93,0±17,0 118,0±17,0 4б,0±6,0 36,7±0,3 221,0±16,0 290,1±26,0

50 100,0±15,2 100,1±13,0 110,0±18,1 50,1±6,0 40,0±0,18 225,0±10,4 290,1±24,1

60 102,0±13,65 100,0±12,0 116,0±11,0 60,1 ±4,0 41,7±7,3 220,1±13,2 313,0±34,0

80 102,0±13,45 95,0±10,1 110,0±14,1 60,0±9,1 42,0±7,3 220,0±7,6 300,1±19,1

90 108,0±13,8 90,1 ±9,0 96,1±16,0 60,2±13,0 42,1 ±7,6 225,0±7,6 296,0±22,0

120 95,0±13,8 105,0±11,1 98,0±17,0 54,0±7,0 40,0±0,9 213,3±7,6 283,0±19,0

150 102,0±10,9 115,0±14,0 115,1±11,0 60,1±5,1 43,0±1,7 218,0±6,7 307,0±26,1

180 98,0±13,4 105,1±12,0 117,0±12,0 57,0±3,1 41,7±1,7 219,0±11,7 287,1±20,0

210 93,0±16,1 110,0±10,1 107,1+15,0 51,0±3,0 1,7±3,3 225,0±10,4 277,0±18,1

240 94,0±17,2 105,0±16,0 98,0±10,0 5 0,1 ±4,0 40,0±2,9 223,0±9,0 280,0±15,0

Исследование влияния латифена на параметры ЭКГ в эксперименте на собаках (табл.6) показало, что через 20 мин после перорального введения латифена на ЭКГ появляется тенденция к увеличению интервала Q-T. В период наиболее выраженного проявления антиаритмического действия увеличение интервала Q-T статистически значимо отличается от исходного уровня (табл.7.). Следует подчеркнуть, что этот эффект совпадает во времени с антиаритмическим действием препарата и может быть обусловлен свойствами препаратов как 1-го так и 3-го класса. При этом отмечается тенденция к удлинению интервала P-Q, а интервал QRS статистически значимо не меняется. Это свидетельствует о возможном уменьшении атриовентрикулярной проводимости и отсутствии изменений внутрижелудочковой проводимости. Учитывая, что ла-тифен оказывает довольно выраженный эффект на модели хлоридбариевой аритмии, можно предположить, что он в определенной степени проявляет свойства антиаритмиков III класса.

Таблица 7

Влияние латифена на корегированные показатели ЭКГ у бодрствующих собак во Ii-ом стандартном отведении (изменения к исходному уровню, в мс, М + т)

Время, мин PQ QRS QT

30 23,0 ±4,9' 6,0 ±7,2 28,3 ± 1,7*

60 25,7 ±6,9 15,3 ± 5 51,7 ± 15,9

90 20,3 ± 4,5* 23,3 ± 15,1 35,0 ± 7,6*

120 13,0 ±4,5 24,3 ± 9,4 21,7 ± 10,1

150 4,7 ±4,6 20,5 ± 5,5 45,0 ± 7,6*

180 10,7 ±6,7 16,7 ±4,3 25,0 ± 10,4

210 18 ±2,Г 11,3 ±3,8 18,3 ±7,3

240 12,7 ± 11,8* 10,3 ±5,2 18,3 ± 16,4

Примечание: * - Р>0,05 по отношению к исходному уровню.

Установлено, что продолжительность эффекта в ряде опытов у латифена была гораздо больше в 3-5 раз, чем у сематилида. Можно предположить, что латифен относится к антиаритмикам Ш-го класса, причем по эффективности превосходит эталонный препарат данного класса - сематилид.

При исследовании острой токсичности латифена было установлено, что 1Л350 латифена равна соответственно на крысах - 1780 и 1931 мг!кг, на мышах -4568 и 4781 мг!кг массы. Коэффициент видовой чувствительности к лекарственному средству для крыс составляет 0,40. Следовательно, латифен не обладает видовой чувствительностью. Эффективная доза определена при хлоридкаль-диевой аритмии и рассчитана по методу Литчфильда и Уилкоксона и составила - 40 мг!кг.

Следующим этапом исследований было изучение влияния латифена на основные показатели гемодинамики и деятельности сердца у различных видов животных с интактным и ишемизированным миокардом, а также коронарный кровоток и ультраструктурные изменения в миокарде при ишемии. Опыты проведены на 35 беспородных кошках обоего пола массой 2,5-3,5 кг.

В первой группе животных изучали влияние физиологического раствора (5 мл, в/в) на основные показатели деятельности сердца и гемодинамики у анестезированных кошек с интактным миокардом.

Установлено, что физиологический раствор, введенный внутривенно, не оказывает влияния на основные показатели деятельности сердца и гемодинамики. Регистрируемые показатели были стабильными на протяжении 3-х часового эксперимента.

В следующей группе животных изучали влияние латифена (40 мг/кг, в/в) на основные показатели деятельности сердца и гемодинамики у анестезированных интактных кошках.

Таблица 8

Влияние латифена (40 мг/кг, в/в) на основные показатели гемодинамики

и деятельности сердца у интактных ксшек (М ± т)

Фон 5 мин 10 мин 20 мин 40 мин 60 мин

САД, мм рт. ст. 124,0 ± 16,0 109,0+18,0 114,0 ±21,0 115,0 ± 14,0 118,0 ± 16,0 121,0 ± 14,0

ЧСС, уд/мин 172,0 ± 12,0 136,0 ±14,0* 148,0 ± 11,0* 154,0 ±21,0 150,0 ± 18,0 169,0 ±16,0

Ударный объем, мл 1,53 ±0,6 1,19 ± 0,4* 1,26 ±0,5* 1,29 + 0,6 1,37 ±0,5 1,48 ±0,6

Минутный объем, л 0,26 ± 0,03 0,16 ±0,04* 0,19 ±0,04* 0,20 ± 0,05 0,21 ±0,04 0,25 ± 0,03

Работа сердца, кг/я 0,43 ± 0,04 0,23 ± 0,07' 0,29 ± 0,06* 0,31 ±0,07* 0,33 ± 0,05 0,41 ±0,05

Сократимость, мм рт. ст./с 3427,0 + 726 2562,0 + 852 2611,0 ±740 2724,0 ± 692 2950,0 ±761 3274,0 ±685

Индекс энергетических затрат 21,33 ±2,7 14,82 ±2,1* 16,87 ± 1,9 17,71 ±2,7 17,70 ±2,4 20,45 ±2,3

ОПС, дин х сек х см "5 38116 ±1936 5446 ±2354* 47952 ±1852* 45954 ±2678* 44907 ±2197 38681 ±2043

Примечание: - Р < 0,05 по сравнению с фоном.

Регистрацию показателей гемодинамики начинали за 5 минут до введения латифена и продолжали в течение 1 часа от момента окончания введения препарата.

Установлено (табл.8), что в первые минуты от момента введения препарата, происходит угнетение всех регистрируемых показателей гемодинамики и деятельности сердца. Так, через 5 минут после введения латифена, САД составляло 109 ± 18 мм рт. ст. против 124 ± 16 мм рт. ст. на фоне, т.е. снижалось на 12% (Р < 0,05). Также отмечалось урежение сердечных сокращений (на 20,9%). Ударный объем сердца составлял 1,19 ± 0,4 мл, тогда как на фоне - 1,53 ± 0,4 мл, а минутный объем сердца составлял - 0,16 ± 0,04 л против 0,26 ± 0,03 л на фоне до ведения препарата, т.е. значения этих показателей на 5-ой минуте снижались, соответственно, на 22,2 и 38,5 %% (Р < 0,05). Сократимость миокарда снижалась на 25,2% (Р < 0,05).

Важно отметить, что указанные изменения носили кратковременный характер и, начиная с 7-=-10 мин с момента окончания введения препарата, отмечалась устойчивая тенденция к восстановлению изучаемых показателей гемодинамики и деятельности сердца. К 20-ой минуте с момента введения латифена САД было снижено на 7,3% (115 ± 14 мм рт. ст. против 124 ± 16 мм рт. ст.), ЧСС - на 12,8% (154 ± 21 уд/мин против 172 ± 12 уд/мин). Ударный объем сердца составлял 1,29 + 0,6 мл, тогда как на фоне 1,53 ± 0,6 (т.е. снижался на 10,5%), а минутный объем - 0,20 ± 0,05 по сравнению с 0,26 ± 0,03 на фоне (т.е. снижался на 19,2%). Снижение сократимости миокарда составляло 13,9%. Значение ОПС к этому времени на 17,85 превышало фоновую величину. Отмеченные изменения изучаемых показателей (за исключением ОПС) на 20 минуте от момента введения препарата, были статистически не достоверными (Р < 0,05 по сравнению с фоном перед введением препарата).

К 60-ой минуте от момента введения латифена значения всех основных показателей гемодинамики и деятельности сердца практически не отличались

от величин, зарегистрированных на фоне (Р < 0,05). Так, САД было снижено на 2,4% (121 + 14 ммрт. ст. против 124 ± 16 ммрт.ст.), ЧСС-на 1,7% (169 ± 16 уд/мин против 172 ± 12 уд/мин). Ударный объем сердца составлял 1,48 + 0,6 ли, тогда как на фоне перед введением препарата - 1,53 ± 0,6 мл, а минутный объем - 0,25 ± 0,03 и 0,26 ± 0,03, соответственно. Сократимость миокарада была лишь на 4,5% ниже фоновой (3274 ± 685 и 3427 ± 726 лш рт. ст/с\ а ОПС - на 1,5% выше своего исходного уровня (38681 ± 2043 и 38116 ± 1936 дин х сек х см5, соответственно).

Таким образом, у животных с интактным миокардом в ответ на введение латифена (40 мг/кг, в/в) наблюдается угнетающее действие на сердечнососудистую систему. Однако оно носит обратимый и кратковременный характер. Восстановление регистрируемых показателей гемодинамики и деятельности сердца отмечается, начиная с 7-10 мин, и уже к 30-ой минуте от момента окончания введения препарата их значения статистически значимо не отличаются от фоновых величин. Следует отметить, что подобные изменения гемодинамики характерны для большинства антиаритмических препаратов, относящихся к 1а классу антиаритмических веществ по классификации УагщЬап \Villiarnse - хинидиноподобный эффект.

Острую региональную ишемию миокарда моделировали на анестезированных кошках путем одномоментной перевязки нисходящей ветви левой коронарной артерии на границе верхней и средней трети.

Установлено, что острая региональная ишемия миокарда сопровождается значительными изменениями регистрируемых показателей деятельности сердца и гемодинамики. В первые минуты от момента перевязки коронарной артерии реакции сердечно-сосудистой системы отмечены пито- (в 70% случаев) и гипердинамические (у 30% животных этой группы) реакции на ишемию. Однако, начиная с 30 мин от момента окклюзии, отмечено прогрессирующее снижение всех регистрируемых показателей деятельности сердца и гемодинамики.

На 30-ой минуте САД снижено на 10,1% (со 109 ± 9 до 98 ± 11 мм рт. ст.), ударный и минутный объемы сердца уменьшены, соответственно, на 7,4 и 11,8%. Сократимость миокарда составила 2726 ± 856 мм рт. ст.!с, тогда как на фоне перед окклюзией — 3404 ± 762 мм рт. ст./с, т.е. снизилась на 678 мм рт. ст.!с (табл.9).

Через 60 минут от момента перевязки коронарной артерии САД составило 81,0 ± 9,1 мм рт. ст. против 109,1 ± 9,2 мм рт. ст., т.е. снизилось на 25,7%. Ударный объем сердца снизился на 16% (1,47 ± 0,5 мл против 0,75 ± 0,6 мл на фоне), а минутный объем сердца - на 23,5% (0,26 ± 0,03 л против 0,34 ± 0,04 л на фоне). Сократимость миокарда упала на 25,3% (табл.9.). На 90-ой минуте ишемии снижение регистрируемых показателей более выражено и составляет 25,7; 18,9; 29,4 и 25,3% для САД, ударного объема сердца, минутного объема сердца и сократимости, соответственно.

В дальнейшем продолжалось прогрессирующее снижение всех регистрируемых показателей гемодинамики и деятельности сердца и к 120-ой минуте от момента острой одномоментной перевязки коронарной артерии их угнетение наиболее выражено. Так, САД снижено до 78 ± 15 мм рт. ст. со 109 ± 9 мм рт. ст. на фоне, т.е. на 28,4%. Ударный объем сердца уменьшался на 28% (1,26 ± 0,5 мл против 1,75 ± 0,6 мл на фоне), а минутный объем сердца - на 38,2% (0,21 ± 0,04 л против 0,34 ± 0,04 л на фоне). Падение сократимости миокарда составило 36%. Также развивалась брадикардия (ЧСС снижено на 16,6%). ОПС возросло на 15,9% по сравнению с фоном до коронарной окклюзии (табл.9). У 60% животных выявлены выраженные нарушения ритмической активности сердца.

Таблица 9

Влияние острой коронарной окклюзии на основные показатели гемодинамики и деятельности сердца у кошек (М + т)

фон 60 мин 15 мин 30 мин 60 мин

САД, мм рт.ст. 109,1 ±9,2 98,1 ± 11,2 88,2 ± 14,0* 81,1 ± 9,2* 78,0 ± 15,0*

ЧСС, уд/мин 193,4 ± 11,1 184,0 ± 20,1 176,1 ± 17,0* 168,2 ± 14,2* 161,0 ± 13,0*

Ударный объем, мл 1,75 ± 0,6 1,62 ± 0,4 1,47 ± 0,5* 1,42 ± 0,4* 1,26 ± 0,5*

Минутный объем, л 0,34 ± 0,04 0,30 ± 0,04* 0,26 ± 0,03* 0,24 ± 0,05* 0,21 ± 0,04*

Работа сердца, кг/м 0,49 ± 0,05 0,39 ± 0,07* 0,30 ± 0,06* 0,26± 0,06* 0,22 ± 0,07*

Сократимость, мм рт.ст./с 3404 ± 762 2726± 856* 2655 ± 741* 2543 ± 695* 2179 ± 764*

Индекс энергетических затрат 21,04 ± 2,7 18,03 ± 2,1 15,49 ± 1,9* 13,61 ± 2,8* 12,56 ± 2,3*

ОПС, дин х сек х см "5 25621 ± 1936 26107 ± 2534 27049 ± 2851* 26973 ± 2768* 29684 ± 2298*

Примечание:

Р < 0,05 по сравнению с фоном.

Таблица 10

Влияние латифена на основные показатели гемодинамики

и деятельности сердца у кошек в условиях острой ишемии (М ± ш)

фон 60 мин 15 мин 30 мин 60 мин

САД, мм рт.ст. 124 ± 9 101 ±11 104 ±8** 108 + 7** 102±10**

ЧСС, уд/мин 168 ± 10 150 ± 14 124 ± 17 118 ± 11 120 ±13

Ударный объем, мл 2,03 ± 0,4 1,67 ±0,5 1,83 ±0,4** 1,87 ±0,5** 1,90 ±0,5**

Минутный объем, л 0,34 ± 0,03 0,25 ± 0,05* 0,23 ± 0,04 0,22 ± 0,05 0,23 ± 0,06**

Работа сердца, кг/м 0,56 ±0,05 0,34 ± 0,07* 0,32 + 0,06** 0,32 ±0,07** 0,31 ±0,07**

Сократимость, мм рт.ст./с 3187 ± 471 2514 ±395* 2170 ±409 2256 ±483 2376 ±456**

Индекс энергетических затрат 20,83 ±1,9 15,16 ±1,5 12,89 ±1,8 12,74 ±2,1** 12,24 ±2,3**

ОПС, дин х сек х см "3 29147 ±2172 32288 ±2847 36137 ±2983 39233 ±2632** 35442 ±3118**

Примечание: * - Р < 0,05 по сравнению с фоном;

** - Р < 0,05 по сравнению с контролем ишемии (см. табл. 10).

Исследование влияния латифена с лечебной целью на расстройства гемодинамики и деятельности сердца с острой региональной ишемией миокарда у анестезированных животных, латифен вводили кошкам внутривенно в дозе 40 мг/кг массы тела животного через 1 час от момента перевязки коронарной артерии. Показано, что в этой группе животных к 60-ой минуте от момента перевязки коронарной артерии (фон перед введением препарата) изменения регистрируемых показателей гемодинамики и деятельности сердца аналогичны наблюдаемым в контроле (см. табл.9 и 10). Так, САД в контрольной группе животных снижалось на 19,3%, а в настоящей - на 18,5%, ударный объем в контрольной группе снижен на 16%, а в настоящей — на 17,7%. Снижение минутного объема сердца в контроле составляло 23,5%, а у леченных животных -26,5%. Сократимость миокарда снижена, соответственно, на 19,9 и 21,1%%.

Однако в дальнейшем, если в контрольной группе животных происходило прогрессирующее снижение регистрируемых показателей, у животных, получавших латифен, они оставались относительно стабильными.

На 90-ой минуте ишемии (через 30 мин после введения латифена) у леченых животных САД было снижено по сравнению с фоном до окклюзии на 12,9%, тогда как в контроле - на 15,7%. Снижение ударного объема сердца в контроле составило 18,9%, а у животных, получавших латифен, лишь на 7,9%. Изменение величин минутного объема сердца по сравнению с фоном до окклюзии было близким в обеих группах: -29,4% в контроле и -35,3% у леченных животных. Сократимость миокарда на 90 минуте ишемии в группе животных, получавших латифен, составляла 2256 ± 483 мм рт. ст.1с против 3187 ±471 мм рт. ст.!с на фоне до окклюзии, т.е. снижалась на 29,2%, тогда как в контрольной группе - на 25,3%. Урежение ЧСС у животных, леченных латифеном, было более выраженным, чем в контроле (соответственно, -29,8% и -13% по сравнению с фоном до окклюзии).

На 120 минуте ишемии, когда у контрольных животных САД уменьшилось на 28,4% по сравнению с фоном до перевязки коронарной артерии и на

11,36% по сравнению с 60 мин ишемии, то у животных, леченных латифеном, оно было на 7,7% ниже фона до окклюзии и на 1% превышает уровень САД на 60 мин ишемии (фон перед введением препарата).

Изменение ударного объема к этому моменту регистрации у контрольных животных составляло -28% по сравнению с фоном до перевязки и -14,3% по сравнению с 60 мин ишемии, тогда как у леченных животных -6,4% и +13,7%, соответственно. Минутный объем сердца был в группе животных, получавших латифен, на 32,4% ниже фона перед окклюзией и на 8% - фона перед введением (60 мин ишемии), а в контроле - на 38,2 и 19, 2 %%, соответственно (табл.10 и И).

Сократимость миокарда у контрольной группы животных к 120 минуте ишемии снижалась по сравнению с фоном перед окклюзией на 36% и на 17,9% по сравнению с 60 минутной ишемии, тогда как у леченных животных сократимость миокарда к этому моменту регистрации была ниже фона перевязки на 25,5%, а по сравнению с фоном перед введением латифена, т.е. с 60 минутой ишемии, была на 8% выше (табл.10 и 11). Вместе с тем, у леченных животных отмечено более выраженное урежение сердцебиений. Так, у животных, леченных латифеном, ЧСС была на 28,6% ниже фона до коронарной окклюзии и на 20% ниже уровня, зарегистрированном на 60 мин ишемии, тогда как в контроле 16,6 и 8,53%, соответственно.

Следует отметить, что полученные в настоящей серии экспериментов данные свидетельствуют о наличии у латифена антиаритмичсской активности в условиях острой региональной ишемии миокарда. Так к 60 минуте ишемии, т.е. к моменту начала внутривенного введения препарата, у 5 из 7 животных были отмечены нарушения сердечного ритма, которые после введения латифена были полностью купированы у 3-х кошек, а в остальных случаях у леченных животных сохранялись лишь единичные экстрасистолы. У одной кошки через 52 минуты после перевязки коронарной артерии развились грубые нарушения сердечного ритма, которые полностью купировались после латифена.

Таким образом показано, что латифен, введенный внутривенно в условиях острой региональной ишемии миокарда, стабилизирует основные показатели деятельности сердца и гемодинамики на удовлетворительном уровне и обладает антиаритмической активностью.

Известно, что уменьшение коронарного кровотока, нарушает электрофизиологические свойства, сократимость, метаболизм и ультраструктуру миокарда. Поскольку латифен проявляет свойства противоаритмических средств, относящихся к IV классу, мы изучили его влияние на основные показатели гемодинамики и деятельности сердца, а также ультраструктуру миокарда в условиях реперфузии.

Влияние реперфузии на основные показатели гемодинамики и деятельности сердца изучали в опытах на анестезированных кошках после острой региональной 40-минутной ишемии миокарда, которую вызывали путем одномоментной перевязки нисходящей ветви левой коронарной артерии на 1-2 мм ниже ее выхода из-под ушка. Реперфузию осуществляли путем одномоментного распускания петли.

Полученные данные (табл.11) показывают, что к 35 минуте ишемии развиваются грубые расстройства всех регистрируемых показателей гемодинамики и деятельности сердца. Так, САД снижалось со 117 ± 11,1 мм рт. ст. на фоне до 88 ± 5 мы рт. ст., т.е. на 4,8%; снижение ударного и минутного объемов сердца составляло, соответственно, 26,1 и 34,2 %%; более чем на 'Л падала сократимость миокарда. Близкая картина наблюдалась и на 40-ой минуте ишемии, т.е. на фоне перед реперфузией.

Восстановление кровотока в бассейне нисходящей ветви левой коронарной артерии у 5 из 6 животных (90% случаев) приводило к развитию грубых нарушений со стороны сердечного ритма, которые у 40% из них переходили в фибрилляцию желудочков сердца, что хорошо коррелирует с известными литературными данными (Во1Н Я. е1 а!., 1983).

Таблица 11

Влияние реиерфузии после острой коронарной окклюзии на основные показатели

гемодинамики и деятельности сердца у кошек (М + ш)

фон ишемия реперфузия

35 мин 40 мин 1 мин 5 мин 10 мин 15 мин 30 мин

САД, мм рт.ст. 117+11 88 + 5* 89 + 7* 71+8* 82 + 9* 84+6* 78+13* 76+10*

Ч СС, уд/мин 174+15 157 + 23 155 + 18 143 + 9* 147 + 11* 159 + 7* 163 +10* 161+9*

Ударный объем, мл 2,34+0,05 1,73+0,09* 1,64+0,07* 1,45 + 0,15* 1,59 + 0,08* 1,66 + 0,11* 1,62 + 0,09* 1,51 + 0,10*

Минутный объем, л 0,41+0,03 0,27+0,05* 0,25+0,05* 0,21+0,06* 0,23 + 0,05* 0,26 + 0,07* 0,26 + 0,08* 0,24 + 0,07*

Работа сердца, кг/м 0,64+0,11 0,32+0,07* 0,30+0,08* 0,20 + 0,07* 0,25 + 0,04* 0,29+ 0,05* 0,27 + 0,10* 0,24 + 0,09*

Сократимость, мм рт.ст./с 3539+714 2619+625* 2442+453* 1840 + 301* 2017 + 315* 1946 + 388* 1847 + 294* 1734 + 339*

Индекс энергетических затрат 20,36+3,4 13,82+1,6* 13,80+1,7* 10,15 + 1,3* 12,05 + 2,4* 13,36+1,7* 12,71 + 1,2* 12,24+1,4*

ОПС, дин х сек х см "5 22806 + + 1947 26048 + + 1831* 28452 + + 2538* 27021+ + 1782* 28493 + +2179* 25820 + +1816* 23979 + +1653* 25308 + + 1762*

Примечание: * - Р < 0,05 по сравнению с фоном.

Таблица 12

Влияние латифена (40 мг/кг, в/в) на основные показатели гемодинамики

и деятельности сердца в условиях реперфузии после острой коронарной окклюзии (М ± т)

Фон ишемия реперфузия

35 мин 40 мин 1 мин 5 мин 10 мин 15 мин 30 мин

С АД рт.ст. 132 ± 13 99 ± 10 92 ± 11* 89 ±9 94 ± 12 90 + 9** 91 ± 10** 91 ±12**

ЧСС, уд/мин 187 ±12 161 ±11 158±13* 143 ± 14 146 + 17 143 ±11 * 150 ± 14 154 ± 15

Ударный объем, мл 2,17±0,17 1,58±0,21 1,51 ±0,18* 1,45±0,13** 1,4 ±0,19** 1,40+0,14 1,40±0,12** 1,49 ± ±0,16 **

Минутный объем, л 0,41 ±0,06 0,25±0,05 0,24 ± 0,06* 0,21 ±0,05 0,21 ± 0,05 0,20 ± ± 0,04** 0,2110,03** 0,23 ± ± 0,04 **

Работа сердца, кг/м 0,72±0,16 0,33±0,13 0,29 ± 0,67* 0,25 ± 0,08 0,26 ± 0,07 0,24 ± 0,06 0,25±0,07** 0;28± ±0,06 **

Сократимость, мм рт.ст./с 298б±487 2121+421 2097 ±486* 1962 ±523 2084 ±516 2007 + ±482** 1983±496** 1951 ± ±532 **

Индекс энергетических затрат 24,68+5,8 15,94+4,6 14,54 ±4,3* 12,73 ±3,2 13,72±2,7** 12,87 ±2,8** 13,65±3,1** 14,01 ± ±2,8 **

ОПС, дин х сек х см "5 25730 ± ±2138 31648± ±1986 30636± ±2317 * 33871 ± ±2426 35774± ±2515** 35964 ± ±2139** 34632 ± ±2137** 31621± ±2243**

Примечание: * - Р < 0,05 по сравнению с фоном;

** - Р < 0,05 по сравнению с контролем реперфузии.

Наряду с нарушением ритмической активности сердца происходило и дальнейшее угнетение всех регистрируемых показателей гемодинамики и деятельности сердца. Так, на 5 минуте реперфузии САД было снижено на 29,9%, а ударный и минутный объемы сердца - на 32,1 и 43,9 %% соответственно. Сократимость миокарда к этому моменту на 48% ниже исходного уровня.

К 10 минуте реперфузии, параллельно со стабилизацией у большинства животных сердечного ритма, отмечена тенденция к некоторому повышению регистрируемых показателей гемодинамики и деятельности сердца. Так, если САД на 5-ой мин реперфузии составляло 82 ± 9 мм рт. ст., то на - 89 ± 6 мм рт. ст. Ударный и минутный объемы сердца на 10 мин реперфузии равны 1,66 ± 0,11 мл и 0,26 ± 0,07 л, соответственно, тогда как на 5-ой - соответственно, 1,59 ± 0,08 мл и 0,23 ± 0,05 л. Также незначительно повышается и сократимость миокарда (табл. 11).

Однако отмеченное улучшение носит кратковременный характер, и уже с 20-30 минут реперфузии наблюдалось резкое угнетение всех регистрируемых показателей деятельности сердца и гемодинамики. Так, например, САД снижается со 117 ± 11 мм рт. ст. на фоне до 76 ± 10 лш рт. ст. на 30 минуте реперфузии; ударный объем сердца на 35,5% ниже фонового, а минутный - на 41,5%; более чем в 2 раза снижается сократимость миокарда (табл.11).

Таким образом, реперфузия миокарда после 40-минутной ишемии сопровождается грубыми нарушениями ритмической деятельности сердца, у 40% животных переходящими в фибрилляцию. Параллельно с нарушениями ритмической активностью сердца в первые 5-10 минут от момента начала реперфузии отмечено снижение всех регистрируемых показателей деятельности сердца и гемодинамики, которые стабилизируются к 20-30 минуте реперфузии.

Влияние латифена на основные показатели гемодинамики и деятельности сердца в условиях острой ишемии миокарда и последующей реперфузии, вызываемые коронарной окклюзией в данной группе животных, изучали к 35-40 минуте, аналогичны таковым, наблюдаемым в контроле (см. табл.11 и 12). Лати-

фен начинали вводить за 5 минут до реперфузии (на 35-он мин от момента коронарной окклюзии) в дозе 40 мг/кг в/в .

В отличие от контрольной группы животных, у животных, получавших латифен за 5 минут до реперфузии, изменения основных показателей гемодинамики и деятельности сердца носили несколько иной характер (табл.12). Так, например, если в контрольной группе животных ударный объем сердца к 30 мин снижен более чем на 35%, то у животных, получавших латифен, - лишь на 30%. Такая же динамика отмечена и в отношении минутного объема сердца. Сократимость миокарда у контрольных животных прогрессивно снижалась: на 5-ой мин - на 43,0%, на 15 мин — на 47,8% и на 30 мин - на 51%, тогда как у животных, леченных латифеном, даже на 30 мин реперфузии снижение сократимости миокарда на 16% меньше.

Следует особо подчеркнуть, что если в контрольной группе животных реперфузия приводила к развитию грубых нарушений ритмической активности сердца, то в группе леченных животных у 4-х кошек из 6-ти наблюдались лишь единичные экстрасистолы, а у остальных они практически отсутствовали.

При изучении влияния латифена на порог электрической фибрилляции сердца выявлено, что латифен в дозе 40 мг/кг увеличивается порог электрической фибрилляции желудочков сердца в среднем в 1,6 раза. Эффект длился в среднем 1,2 ч.

При изучении антиаритмичекой активности латифена на модели острой регионарной ишемии миокарда, воспроизведенной по методу А.Нагпз, было выявлено, что латифен оказывает достаточно эффективное антиаритмическое действие, сравнимое с эффективностью эталонных антиаритмических препаратов I класса по классификации Уаи§Ьап-\УПНатз Е.М. Однако длительность эффекта латифена не превышает 45-60 минут.

Следующим этапом изучения латифена явилось изучение влияния на трансмембранные токи в трабекуле предсердия лягушки.

На основании данных, полученных в этих экспериментах, можно говорить о том, что латифен подавляет быстрый входящий Na+ ток, т.е. проявляет свойства, характерные для антиаритмиков I класса по классификации Vaughan-Williams Е.М.

При изучении специфической активности было проведено исследование влияния латифена на дыхание и окислительное фосфорилирование митохондрий и показано, что он в изученных концентрациях в системе in vitro не является разобщителем и таким образом не оказывает токсического действия на митохондрии.

Экспериментально показано, латифен ингибирует ферментативное и ас-корбатзависимое ПОЛ микросом в системе in vitro, то есть проявляет антиокси-дантный эффект.

Таким образом, на основании материалов настоящего исследования выявлен высокоэффективный комплекс биологически активных веществ из чины посевной с выраженным антиаритмическим и антиишемическим свойствами. Согласно классификации V.Williams (1984) данный комплекс можно отнести к группе антиаритмических средств, сочетающих в себе свойства препаратов I и IV классов.

ВЫВОДЫ

1. Биологически активные вещества, выделенные из чины посевной, могут служить источником получения антиаритмических препаратов.

2. Установлен антиаритмический эффект латифена при аритмиях пред-сердного (мерцание предсердий, наджелудочковая тахикардия) и желудочкового (политопная желудочковая экстрасистолия, пробежки желудочковой тахикардии, медленная желудочковая тахикардия) типов, индуцируемых хлоридом кальция.

3. Впервые выявлено, что латифен проявляет наиболее выраженный антиаритмический и антигипоксический эффект.

4. Латифен в условиях острой регионарной ишемии миокарда стабилизирует основные показатели гемодинамики и сердечной деятельности.

5. В условиях реперфузии после острой регионарной ишемии миокарда проявляет выраженную антиаритмическуго активность.

6. Высокая кардио и органопротективная активность латифена в условиях гипоксических, ишемических и реперфузионных повреждений обусловлена его специфическим мембраностабилнзирующим действием.

7. Латифен оказывает влияние на ферментативное и аскорбатзависимое перекисное окисление липидов.

8. Латифен относится к практически безвредным веществам, не проявляет видовой чувствительности, не кумулируется в организме.

ВНЕДРЕНИЕ В ПРАКТИКУ

Полученные результаты изучения растительного комплекса биологически активных веществ, выделенных из чины посевной, используются в учебном процессе при чтении лекций и проведении практических занятий, выполнении научно-исследовательских работ на кафедрах фармакогнозии, фармакологии и фармакотерапии Украинской фармацевтической академии.

Результаты доклинического изучения специфической активности, острой токсичности и безопасности латифена использованы для подготовки материалов с целью представления в МЗ РФ и Украины для получения разрешения на клинические испытания.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ:

1. Фармакологическое исследование лекарственных препаратов и БАС //Материалы научно-практической конференции 23-24 сентября 1992 года «Лекарственные средства Украины, синтез, научные исследования, производство,

реализация». - Харьков, 1992. - С. 176. (соавт. А.И.Березнякова, С.Б.Попов, Ю.А.Лемишко, О.ИЛаскевич).

2. Сравнительное изучение аллергизирующей активности препаратов в опытах in vitro и in vivo // Материалы научно-практической конференции 23-24 сентября 1992 года «Лекарственные средства Украины, синтез, научные исследования, производство, реализация». - Харьков, 1992. - С. 178. (соавт. А.И.Березнякова, С.Б.Попов, Ю.А.Лемишко, О.И.Паскевич).

3. Биологическая активность новых производных дикарбоновых кислот // Материалы научно-практической конференции 23-24 сентября 1992 года «Лекарственные средства Украины, синтез, научные исследования, производство, реализация». - Харьков, 1992. - С. 185. (соавт. Ю.А.Лемишко, О.И.Паскевич).

4. Антиаритм1чний ефект аймалшу, алашнину i латифена на р1зних моделях аритмш // Матер1али науково'1 конференцн до 100-р1ччя з дня народження ак. ОЛ.Черкеса. - Кшв, 1994. - С. 72. (соавт. Ю.О.Лемшко).

5. Фармаколопчна характеристика рослинного комплексу з чини nociBHoY // Матер1али науково!' конференцн до 100-р1ччя з дня народження ак. ОЛ.Черкеса. - Кшв, 1994. - С. 73. (соавт. Ю.О.Лемшко, В.Г.П1вненко).

6. Антиаршмчна актившсть чини nociBnoï // Матер1али I Конгресу cbítoboi федерацн украшських фармацевтичних товариств. - Льв1в, 1994. - С. 398. (соавт. Ю.О.Лем'шко).

7. Антиоксидантна та мембраностабшзацшна д!я чини nociBHoY // Ма-тер!али I Конгресу cbítobo'l федерацн украшських фармацевтичних товариств. -Львш, 1994. - С. 298. (соавт. Ю.О.Лемшжо, АЛ.Березнякова).

8. Вплив комплексу БАВ з чини nociBHOÏ на органи i системи // Ма-Tepiann науковоТ конфсренц^' УкрФА. - Харюв, 1994. - С. 42. (соавт. Ю.О.Лем1шко).

9. Перспективи юншчного використання латифену // Матер1али науково'1 конференци УкрФА. - Харюв, 1994. - С. 178. (соавт. Ю.О.Лемшко, АЛ.Березнякова).

10. Особенности комбинированного взаимодействия препаратов, проявляющих антигипоксический, антиоксидантный, антиаритмический эффект при поражении миокарда // Материалы научной конференции «Новое в медицине: теория и практика». - Харьков, 1994. — С. 7. (соавт. Ю.А.Лемишко, В.Н.Ковалев).

11. Нарушение ключевых ферментов антиоксидантной системы при аритмии и их фармакологическая коррекция // Материалы научной конференции «Новое в медицине: теория и практика». - Харьков, 1994. - С. 54.

12. Изучение влияния субстанции из чины посевной, сукцифената субстанции и их лекарственных форм на пол микросом в системе in vitro // Материалы научно-практической конференции «Научные достижения и проблемы производства лекарственных средств». - Харьков, 1995. - С. 177. (соавт. О.И.Паскевич).

13. Вплив субстанцц з чини пос1вно1 та п лкарськоТ форми на перекисне окисления лшвдв // Матер ¡ал и науково-практичноТ копферешш «Сучасш про-блеми фармакологи». - Полтава, 1995. - С. 31. (соавт. Ю.О.Лем1шко).

14. Виб!р препарата при лжарнянш терапи аритмш // «Шки». - 1996. -№1.-С.52-54.

15. Вплив латифену на кислотао-основне становище оргашзму i тканинне дихання // «Лжи». -1996. - № 1. - С.86-95.

16. Вплив латифену на ключов1 фермента антиоксидантноТ системи // Ма-тер1али науково-практично! конференцп, присвяченоТ 75-р!ччю УкраТнськоТ фармацевтично'1 академн. - Харкав, 1996. - С. 266-267. (соавт. Ю.О.Лемшко).

17. Влияние латифена на ключевые ферменты антиоксидантной системы И «Лекарства - человеку». Международный сборник научных трудов IV научно-практической конференции по созданию и апробации новых лекарственных средств. Т. 4. - Москва, 1997. - С. 121-122.

18. Особенности скринингового поиска антиаритмических средств. // «Лекарства - человеку». Международный сборник научных трудов IV научно-

практической конференции по созданию и апробации новых лекарственных средств. Т. 4. — Москва, 1997. - С. 123-126.

19. Латифен - новый препарат антиаритмического действия из чины посевной И «Человек и лекарство». IV Российский национальный конгресс. — Москва, 1997. - С. 252. (соавт. А.И.Березнякова, В.Н.Ковалев).

20. Морфолого-анатомическая характеристика травы чины посевной // «Лекарства человеку». Международный сборник научных трудов IV научно-практической конференции по созданию и апробации новых лекарственных средств. Т. 4. - Москва, 1997. - С. 265-268. (соавт. М.МЛитвиненко, Л.С.Картмазова, И.Э.Шмараева, В.Н.Ковалев).

21. Влияние латифена на мочевыделительную систему и функции печени в хроническом эксперименте // «Лекарства человеку». Международный сборник научных трудов IV научно-практической конференции по созданию и апробации новых лекарственных средств 3-5 ноября 1997. - Каунас, 1997. - Т. 5. -С. 65-68.

22. Влияние латифена на дыхание и окислительное фосфорилирование метахондрий П «Лекарства человеку». Международный сборник научных трудов IV научно-практической конференции по созданию и апробации новых лекарственных средств 3-5 ноября 1997. - Каунас, 1997. - Т. 5. - С. 72-75.

23. Влияние латифена на сердечно-сосудистую систему и систему крови в хроническом эксперименте И «Лекарства человеку». Международный сборник научных трудов IV научно-практической конференции по созданию и апробации новых лекарственных средств 3-5 ноября 1997. - Каунас, 1997. - Т. 5. - С. 69-71.

24. Фотохимическое изучение некоторых видов чины // «Лекарства человеку». Международный сборник научных трудов IV научно-практической конференции по созданию и апробации новых лекарственных средств 3-5 ноября 1997. - Каунас, 1997. - Т. 5. - С. 377-381. (соавт. И.Э.Шмараева, В.Н.Ковалев, А.И.Березня кова).