Автореферат и диссертация по медицине (14.00.25) на тему:Оптимизация фармакодинамики иммуностимуляторов воздействием КВЧ-излучения при сальмонеллезной иммуносупрессии

^ я

- - , V

>

На правах рукописи

ПРИБЫТКОВА Ольга Владимировна

ОПТИМИЗИЦИЯ ФАРМАКОДИНАМИКИ ИММУНОСТИМУЛЯТОРОВ ВОЗДЕЙСТВИЕМ квч-ИЗЛУЧЕНИЯ ПРИ СААЬМОНЕЛЛЕЗНОЙ ИММУНОСУПРЕССИИ

14.00.25 — фармакология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Челябинск— 1997

Работа выполнена на кафедре фармакологии Челябинск государственной медицинской академии

Научный руководитель: доктор медицинских

наук, профессор В.И. РАТНИКОВ

Научный консультант: академик МАНЭБ

доктор медицинских наук, профессор Л.И. Ратникова

Официальные оппоненты: доктор медицинских

наук, профессор,

Ф.С. Зарудий

доктор медицинских наук, профессор,

Л.П. Ларионов

Ведущее учреждение —НИИ фармакологии РАМН, Моек

Защита состоится «___»___________1997г. в_чао

на заседании Диссертационного Совета Д.08404.02 п Челябинской государственной медицинской академии адресу 454092, г.Челябинск, ул.Воровского, 64

С диссертацией можно ознакомиться в библиоте Челябинской государственной медицинской академии.

Автореферат разослан «_»__________ 1997г.

Ученый секретарь Диссертационного Совета доктор медицинских наук,

профессор A.B. Зурочка

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Интерес к иммуностимулирующей эрапии особенно возрос в последние годы и связан прежде :его с решением задач, выдвигаемых инфекционной патологией, нкологией, а также неинфекционными заболеваниями, в :незе которых важную роль играют нарушения иммунного гатуса организма (Смирнова Г.И. 1994; Новикова И.А. и эавт. 1994; Rojas —Espinosa Oscar et al. 1994; Хаитов P.M.

соавт. 1995; Murayama Tsugiya et al. 1995). Признание горичных иммунодефицитов в качестве элемента патогенеза нфекционного процесса ведет к необходимости включения комплексное лечение иммунокорригирующих средств (Ратникова .И., Макаров В.Б., Ратников В.И. 1994). В развитии инфекций, ызванных грамотрицательными микроорганизмами, >пцественнуго роль играют как гуморальные, так и клеточные ммунные реакции (Синицин С.П., Ратникова Л.И. 1988; usek David M. 1994). Многие инфекционные заболевания, частности сальмонеллез, протекают с внутриклеточным аразитированием микробов, в связи с чем одним из важнейших еханизмов защиты организма является внутриклеточный иллинг возбудителей. Иммунный статус при сальмонеллезе 1кже характеризуется выраженной антигенемией, высоким ровнем ЦИК, депрессией иммунных процессов, особенно о системе Т —клеток, дефектами фагоцитарной активности акрофагов ((Вараксин Г.Ф., 1986; Погорельская Л.В. и др., 587; Alpuche— Aranda Celia M. et al. 1994). Выявление нарушений ммунитета при этом является актуальной проблемой, так 1K может быть критерием прогноза эффективного лечения ри данной грамотрицательной инфекции. Требуется также 1льнейшее совершенствование способов иммунокорригирующей ;рапии при сальмонеллезе, относящемся к числу инфекционных 1болеваний, сопровождающихся значительными нарушениями иммунной системе организма.

Достижения современной фармакологии позволяют по —

новому подойти к проблеме медикаментозной регуляци иммунных процессов при инфекционной патологии (Ратнико В.И. и соав. 1982; Drews J. 1990). В настоящее врем осуществляется широкий поиск лекарственных препарате! оказывающих активирующее воздействие на специфически и неспецифические защитные реакции организма (Ратнико В.И., Ратникова Л.И., 1991; Rutter Judith, 1994). Однак клиническое применение многих из созданных средств оказалос ограниченным вследствие их слабой активности или наличи различных побочных эффектов (Приймяги A.C., 1990; Волги В.Г., 1994; Arranz Fancisco Revenga et al., 1994; Закиро M.M., 1995). Одним из возможных путей преодоления указанны недостатков является сочетание, а также поиск способо воздействия на популяции клеток иммунной системы с целы улучшения фармакодинамических эффектов имеющихс иммуномодулирующих препаратов (Земсков В.М. 1991; Ghind S.S., 1993; Ефимов Ф.И. 1995). С этой точки зрения интере представляют электромагнитные волны миллиметрового диапазон; Результаты многочисленных исследований показали, что ММ -излучение низкой интенсивности является физически фактором, который вызывает в организме повышени неспецифической резистентности и активацию специфически иммунных реакций (Головачева Т.В. 1991; Зубенкова Э.С 1991; Колбун Н.Д. 1993; Говалло В.И. 1991; Голант M.I 1991; Бессонов М.Е. 1994; Вотяков В.И. 1990; Исаева В.С 1991; Кабисов Р.К. 1992). Однако сведения, имеющиеся литературе относительно характера воздействия КВЧ — излучени на эффекты иммунотропных препаратов, представлен; недостаточно и отличаются противоречивостью (Motzkii Shirley M. 1991; Li Jixi 1991).

Все указанное выше определяет актуальность изучени характера влияния КВЧ —волн на эффекты иммуномодуляторс гуморального и клеточного действия с целью оптимизаци их использования при сальмонеллезной инфекции.

Цель исслелования. Целью настоящей работы явилос

зучение динамики ряда иммунологических показателей при кспериментальном сальмонеллезе под влиянием раздельного сочетанного применения тимогена и продигиозана, а также азработка способа оптимизации иммунокорригирующего эйствия указанных препаратов электромагнитными волнами райне высокочастотного диапазона.

Задачи исследования. В соответствии с указанной целью оставлены следующие задачи:

1. Изучить иммунологические показатели у животных э и в различные сроки после воспроизведения сальмонеллезной нфекции.

2. Провести сравнительную оценку иммунокорригирующего эйствия продигиозана и тимогена при сальмонеллезной ммуносупрессии.

3. Исследовать возможность развития синергизма при эчетанном применении иммуностимуляторов с реимущественным гуморальным и клеточным типами действия родигиозана и тимогена у мышей с сальмонеллезной инфекцией.

4. Установить характер влияния на показатели иммунного гатуса организма при сальмонеллезной иммуносупрессии veктpoмaгнитныx волн крайне высокочастотного диапазона.

5. Разработать способ оптимизации корригирующего гйствия продигиозана и тимогена путем их комбинированного спользования с КВЧ — излучением при сальмонеллезной ммуносупрессии.

Научная новизна. Впервые проведено изучение раздельного сочетанного влияния на антителообразование, реакцию овышенной чувствительности замедленного типа и ункциональное состояние перитонеальных_ макрофагов родигиозана и тимогена у животных с экспериментальным 1льм0неллез0м. Новыми являются данные о синергическом арактере иммунотропного действия указанных ммуностимулирующих препаратов при сальмонеллезной ммуносупрессии.

Иммунокорригирующие эффекты использованных

лекарственных средств сопоставлены с показателями летальност: зараженных животных.

Новым направлением, не представленным ранее в изучени: биологических свойств крайне высокочастотного излучения является оценка влияния волн данного диапазона на выраженност сальмонеллезной иммуносупрессии.

Критериям новизны соответствует также вся совокупност данных, полученных в результате проведенных исследовани: комбинированного иммуннокорригирующего действия изученны фармакологических препаратов с КВЧ — облучением пр нарушениях иммунитета, обусловленных сальмонеллезно инфекцией.

На основании полученных данных разработан спосо оптимизации фармакодинамики продигиозана и тимоген при иммуносупрессии инфекционного генеза.

Практическая ценность. Полученные в работе данны относительно особенностей иммунокорригирующих эффекто раздельного и сочетанного применения продигиозана и тимоген при экспериментальной сальмонеллезной инфекции должн! учитываться в клиническом использовании данных препарато! С практической точки зрения материалы диссертаци обосновывают необходимость комплексного анализа параметро иммунного статуса у больных сальмонеллезом для своевременног обнаружения нарушений иммунитета. Показано, что выявленны комплекс иммунных сдвигов, характеризующих развити вторичного иммунодефицитного состояния, являете предпосылкой для проведения эффективной иммунокоррекцш Результаты выполненных исследований, показавших высоку! активность комбинации электромагнитных волн нетеплово интенсивности с изученными иммуностимуляторами в отношени гуморального, клеточного и макрофагального звеньев иммунитет) представляются перспективными для использования подобно комбинации при ряде иммунодефицитных состояний.

Способ комплексной терапии иммуностимуляторами КВЧ —волнами использован в практике инфекционногс

фдиологического и хирургического отделений Челябинской >родской клинической больницы №8. Кроме того, теоретические шросы исследования внедрены в учебные процессы кафедр армакологии и инфекционных болезней Челябинской здицинской академии при изложении соответствующих разделов LHHOй дисциплины.

Апробация работы. Результаты работы доложены:

на II национальном конгрессе "Человек и лекарство" 4осква, 1995);

на XII Российской научной конференции "Факторы неточного и гуморального иммунитета при различных изиологических и патологических состояниях" (Челябинск, '95);

на объединенной конференции областного отделения героссийского научного общества фармакологов и кафедры армакологии Челябинской государственной медицинской садемии (Челябинск, 1997).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 8 печатных 1бот.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена 1 fjl/ страницах машинописного текста, иллюстрирована ) таблицами и 22 рисунками, состоит из введения, обзора гтературы, описания материалов и методов исследований, 1ключения, выводов, списка литературы, включающего гечественных и зарубежных авторов^З.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материалы и методы исследования

Для проведения экспериментов использовано 1420 >ловозрелых мышей линии СБА и гибридов Fl(CBAxC57BL/6).

Продигиозан и тимоген вводили пятикратно в дозах 5мг/кг и 50мкг/особь соответственно. Растворы препаратов товили ex tempore на дистиллированной воде и инъецировали >дкожно.

В качестве генератора электромагнитного поля крайн высокой частоты использовали аппарат "Явь—1" с частото излучения 42,24 ГГц (длина волны 7,1 мм) с модуляцией Воздействие проводили контактно на область грудины экспозицией 20 минут ежедневно в течение пяти суток.

Приготовление суспензий лимфоидных клеток осуществлял по общепринятому методу Р.В.Петрова и Ю.М.Зарецкой (1965 Жизнеспособность клеток оценивали в тесте с 0,1% растворо: трипанового синего (Теппай, 1964). В качестве тимусзависимог антигена применяли эритроциты барана.

Воздействие иммуностимуляторов и КВЧ — излучения н гуморальный иммунный ответ оценивали по количеств антителообразующих клеток (АОК) в селезенк экспериментальных животных и титрам гемагглютининов сыворотке крови. Число АОК в селезенке определяли п методу Легпе, ЫогсИп (1963) в модификации СипшдЬат. (1965 титры антител по общепринятому методу (З.Зигль, 1979) н пятые сутки после антигенной нагрузки. Подсчитывали количеств антителообразующих клеток во всем органе и при перерасчет на 10е спленоцитов. Титры гемагглютининов выражали

Для характеристики влияния иммуностимулирующи препаратов и миллиметровых волн на клеточные иммунны реакции использовали феномен повышенной чувствительност замедленного типа (ПЧЗТ) в постановке, предложенной Ьапдгапд и соавторами (1974). Интенсивность реакции ПЧЗТ определял через 24 часа после инъекции разрешающей дозы антиген путем измерения с помощью инженерного микрометра МК-0 — 25 величины отека лапок в опытной и контрольной группа животных.

Характер влияния изучаемых факторов на перитонеальны макрофаги анализировали по изменению ряда показателе их функциональной активности: способности к фагоцитоз частиц латекса (И.С.Фрейдлин и соавт., 1976) в модификаци Л.Я.Эберта и соавт. (1983), восстановлению нитросинег

зтразолия в диформазан (Sedal, 1974; А.Н. Маянский, 1977; .М.Гордиенко, 1983), люминолзависимой хемилюминесценции ^.В. Зурочка и соавт. 1989).

Для изучения прикладных аспектов использования ммуностимулирующих свойств продигиозана и тимогена, также электромагнитных волн миллиметрового диапазона рименяли модель иммуносупрессии, обусловленной воздействием . typhimurium. Эффективность противоинфекционного ммунитета оценивали по изменению летальности зараженных ышей (И.В.Фильчиков и соавт. 1986; Morrison 1986).

Животные опытных групп подвергались воздействию ммуно су пр есси рую щ с го агента и получали один или комбинацию сследуемых факторов. При оценке иммунокорригирующего гйствия препараты и КВЧ— облучение применяли на протяжении яти суток после инфицирования S. typhimurium. Контролем тужили данные, отмеченные в группе животных, подвергнутых сражению, но получавших вместо исследуемых веществ авные объемы изотонического раствора натрия хлорида, се болезненные манипуляции и забой животных проводились од легким эфирным наркозом.

Данные опытов были статистически обработаны с ычислением средней арифметической (М), ошибки средней эифметической (±т), критерия Стьюдента (t) и достоверности азличий (р) (М.Л. Беленький, 1963; В.Ю. Урбах, 1975).

Результаты исследования и их обсуждение. Проведенными ^следованиями установлено, что развитие экспериментального 1АЬМонеллеза сопровождается формированием вторичного ммунодефицитного состояния. Регистрируемые при этом зменения различных показателей иммунного статуса организма 1висели от сроков исследования и имели комбинированный ipактер, т.е. наблюдались нарушения гуморального и клеточного ммунных ответов, а также функционального состояния эритонеальных макрофагов. Наиболее выраженные сдвиги, зидетельствующие об иммунносупрессивном влиянии атологического процесса на иммунные механизмы защиты

организма, обнаружены на 7 —е сутки от момента заражени: животных. Следует также отметить, что указанный перио, характеризуется наиболее высокой летальностью инфицированны: мышей. Полученные нами данные совпадают с наблюдениям! других авторов, которые также отмечали развитие значительно! иммуносупрессии при моделировании сальмонеллезной инфекцш в опытах на мышах (Блюгер А.Ф. 1980; Годованный Б.А 1985; Hassan Jubril Olu et al. 1994; Pope M., Kotlarski 1 1994). По —видимому, в течение первой недели развити: патологического процесса в организме животных создаютс: условия для стойкого угнетения иммунной системы. Высказан< предположение, что ведущую роль при этом может играт эндотоксемия, посредством которой усиливается образовани азота оксида, оказывающего, как известно, отчетливы] иммуносупрессивный эффект (Takagi Kuniaki, 1994).

В течение последующего срока наблюдения, охватывающее вторую неделю развития патологического процесса, обнаружен' постепенное повышение исследуемых иммунных реакций. ] указанный период анализируемые параметры иммунного статус еще не достигли уровней соответствующих показателей интактных животных, что позволяло изучат иммуннокорригирующие свойства используемых в работ иммуностимуляторов и крайне высокочастотных волн. Наряд с положительными сдвигами в структуре иммунных показателей в этот период наблюдения снижалась летальност инфицированных мышей.

При выполнении настоящей работы были детальн проанализированы состояние антителообразующей функции динамика одного из основных клеточных феноменов— реакци: повышенной чувствительности замедленного типа, а такж ряд показателей, характеризующих состояние перитонеальны макрофагов.

Из данных, представленных в таблице 1, следует, чт у животных с сальмонеллезом на 7 —е сутки развити патологического процесса почти в 4 раза снижался гуморальны

ммунный ответ. Об этом свидетельствует статистически остоверное уменьшение содержания количества нтителопродуцентов, рассчитанное на 10® ядросодержащих леток селезенки. Супрессия биосинтеза антител сохранялась на 14 —е сутки экспериментов. Так, к указанному сроку одержание АОК в селезенке составляло лишь 59% от налогичного показателя у здоровых мышей. Наличие супрессии ^морального ответа при экспериментальном сальмонеллезе одтверждено также в опытах с определением титров эмагглютининов. Обнаружено существенное уменьшение итра указанных антител, наиболее выраженное к 7 —м суткам азвития инфекции. Восстановление титров циркулирующих эмагглютининов оставалось сниженным в среднем на 33% тносительно контрольных значений у интактных мышей.

При использовании продигиозана в качестве ммунокорригирующего средства отмечен позитивный эффект а гуморальные иммунные реакции (таб.1). При этом гимулирующее действие препарата выявлялось и на 7 —е утки развития инфекции, хотя было менее выраженным о сравнению с приростом синтеза антител на 14 —е сутки, [оказано, что к этому сроку гуморальный иммунный ответ осстанавливался до уровня такового у интактных животных, таблице 1 показано, что среднее число АОК у инфицированных ышей, получавших продигиозан, статистически достоверно е отличалось от контроля. К 14 —м суткам наблюдалась 1кже полная нормализация титров гемагглютининов в сыворотке рови при использовании в качестве корректора указанного ыше фармакологического агента. Иммунокорригирующее ействие тимогена в отношении упомянутых выше показателей ^морального иммунного ответа было менее значительным о сравнению с таковым у продигиозана, что наиболее рельефно ыявлялось на 7 —е сутки. Однако к 14 —му дню под влиянием гого препарата содержание антителообразующих клеток в глезенке и титров гемагглютининов в сыворотке крови не гличались от соответствующих величин у интактных мышей.

Не исключено, что в более поздний период исследованш активизация антителообразования под влиянием тимогеш была вторичной и явилась следствием повышения вводимые препаратом выброса цитокинов с иммуностимулирующт типом действия.

Таблица :

Влияние различных способов коррекции на показатели гуморального иммунного ответа у мышей, зараженных

БЛурЫтипшп

Серии опытов АОКхЮ6 спленоцитов

п 7-е сутки п 14-е сутки

Контроль 15 382115 15 382115

Инфекция 8 10418,4"* 8 228115"*

Инфекция+ продигиозан 8 215117,8"* 8 330120

Инфекция+ тимоген 8 150,6111,0*** 8 312112**

Инфекция+ продигиозан+ тимоген 8 196116"* 8 348116

Инфекция+ КВЧ 7 148111,5"* 7 321118

Инфекция+ иммуностимуля-торы+ КВЧ 7 299,1120,3* 7 345121

Примечание. Здесь и далее по тексту *р<0,05 **р<0,00 *"р<0,0001

АОК — антителообразующие клетки п — число опытов

Учитывая то обстоятельство, что продигиозан являлся эеимущественно активатором гуморальных иммунных реакций, тимоген — клеточных, было предпринято исследование £ сочетанного применения. При этом не изменялись дозы зодимых веществ, а была изменена кратность ведения —, 3 — , 5 —ые сутки — продигиозан; 2-е, 4 —е сутки — шоген). Анализ полученных данных показал, что в этих :ловиях препараты проявили синергизм (табл.1). В результате гого было достигнуто иммунокорригирующее действие вплоть ) полного восстановления показателей гуморального иммунного гвета к 14 —м суткам (табл.1, рис.1).

Рисунок 1

Влияние иммуностимуляторов и КВЧ-излучения на титры гемагглютининов у мышей с сальмонеллезной инфекцией

1 — контроль

2 — инфекция

3 — инфекция Н- продигиозан

4 — инфекция + тимоген

5 — инфекция + иммуностимуляторы

6 — инфекция + КВЧ

7 — инфекция + иммуностимуляторы + КВЧ

Как показано в проведенных исследованиях иммуннокорригирующий эффект проявляли не толью используемые фармакологические вещества, но и обработк инфицированных животных электромагнитными волнами крайн высоких частот. Их влияние на динамику антителообразующи: клеток в селезенке было более сходно с таковым при применени] тимогена (табл.1). Подобные направленность и выраженност отмечены и при исследовании титров гемагглютининов сыворотке крови (рис.1).

Учитывая наличие иммуностимулирующего воздействи КВЧ —волн на гуморальный иммунный ответ, поставлен задача изучить их влияния на эффект иммуностимуляторов В специально выполненной серии опытов инфицированны: мышей, получавших сочетание продигиозана с тимогеном дополнительно подвергали воздействию крайне высокочастотное излучения. Это сопровождалось усиление:

иммунокорригирующего действия иммуностимулирующи препаратов, что наиболее значимо выявлялось уже н 7 —е сутки (табл.1). К окончанию периода наблюдения и указанной группе животных гуморальные иммунные реакци: восстанавливались до уровня контрольных (интактные мыши]

Механизм активирующего влияния крайне высокочастотны волн на реакции гуморального иммунного ответа остаетс нераскрытым. Но полученные нами данные совпадают результатами других исследователей, которые показал: стимулирующее воздействие электромагнитного излучени особенно в индуктивную фазу иммуногенеза (Вайнштей: В.Е. 1982; Севастьянова A.A. 1983 ). Кроме того, показано что под влиянием КВЧ—лучей лучше инициируются продуктивные иммунные реакции периферической лимфоидно: ткани (Родштат И.В. 1993).

Сальмонеллезная инфекция у мышей сопровождалас также угнетением клеточного иммунного ответа — повышенно: чувствительности замедленного типа. Показатель этой реакци: на 7 —е и 14 —е сутки снижался в среднем в 3,1 и 2,2 раз

оответственно. Использование с целью воздействия на ПЧЗТ :ммуностимулятора гуморального типа продигиозана опровождалось достоверным корригирующим эффектом лишь а 14 —е сутки (табл.2). Тимоген, в отличие от продигиозана, ыражено активировал клеточное иммунное реагирование оба наблюдаемых срока, восстанавливая до нормы показатель 1ЧЗТ на 14 —е сутки. При совместном использовании двух казанных выше препаратов также выявлен их синергизм, роявляющийся особенно на 7 —е сутки (табл.2), »лектромагнитные волны КВЧ —диапазона оказывали орригирующее влияние на повышенную чувствительность амедленного типа у мышей с сальмонеллезом. Однако это ействие существенно не отличалось от такового как при аздельном, так и при сочетанном применении продигиозана : тимогена. Но, с другой стороны, при комбинированном спользовании КВЧ—лучей с указанными препаратами орригирующий эффект был наиболее значительным. Из энных, представленных в таблице 2, следует, что показатель 1ЧЗТ в группе мышей, получавших комбинацию изученных эакторов, статистически значимо превышал аналогичные оказатели у животных других групп. Характерно, что отмеченная птимизация действия иммуностимуляторов регистрировалась ак на 7 —е, так и на 14 —е сутки течения экспериментального альмонеллеза.

Оптимизирующее влияние электромагнитного излучения :иллиметрового диапазона на эффекты изученного сочетания ммуностимуляторов не связано, по —видимому, с влиянием а специфические для подобного воздействия рецепторы — лимфоцитов. В соответствии с данными литературы на егодняшний день рецепторов, воспринимающих лектромагнитные поля, у человека и млекопитающих не бнаружено (Лебедева Н.Н.1987). Известно, что КВЧ —волны оспринимаются эпидермисом, некоторыми элементами венозной тенки, фибробластами, лейкоцитами, скоплениями тучных леток в зонах биологически активных точек (Говалло В.И.,

Таблица

Сравнительное действие продигиозана, тимогена и КВЧ-излучения в различных комбинациях на интенсивность

реакции ПЧЗТ

Серии опытов Выраженность реакции ПЧЗТ х1СГ2 мм

п 7-е сутки п 14-е сутки

Контроль 15 28±1,5 15 28±1,5

Инфекция 8 9±0,7*** 8 12,6±0,95***

Инфекция+ продигиозан 8 11,3±0,7*** 8 21±1,0*

Инфекция+ тимоген 8 16,0±0,9*** 8 23,0±1,2

Инфекция+ продигиозан тимоген 8 15,3±1,Г" 8 22±1,3

Инфекция+ КВЧ 7 13±0,9*** 7 19,0±1,4"

Инфекция+ иммуностимуляторы + КВЧ 7 20±1Д** 7 29±1,3

Примечание. ПЧЗТ — повышенная чувствительност] замедленного типа

арер Ф.С. 1993). Согласно современным представлениям, ВЧ —терапия направлена в большей степени на восстановление правляющей системы организма, ответственной за поддержание эмеостаза и обеспечение оптимальных условий ункционирования (Девятков Н.Д. 1984; Голант М.Б. 1991). Исходя из этого, можно допустить, что усиление корригирующего ^»фекта иммуностимулирующих препаратов при воздействии ВЧ—лучами обусловлено восстановлением биофизических араметров иммунокомпетентных клеток.

В работе предпринято изучение факторов, корригирующих х функциональное состояние перитонеальных макрофагов, оторые имеют большое значение в осуществлении механизмов ротивоинфекционной защиты. Показано, что моделирование альмонеллеза сопровождалось существенным угнетением оглотительной способности этих клеток. Так, на 7 —е сутки кспериментов более чем в два раза снижалось количество акрофагов, захватывающих частицы латекса. Выраженная упрессия захватывающей способности мононуклеарных Фагоцитов регистрировалась и на 14 —е сутки (табл.3). Как оказали проведенные исследования, пятикратное введение родигиозана достоверно повышало число клеток, активно ахватывающих частицы латекса. Подобное действие препарата роявлялось достаточно активно уже на 7 —е сутки течения нфекционного процесса и сохранялось таковым также и а 14 —е сутки. В отличие от продигиозана активирующее ействие тимогена на поглотительную способность макрофагов ольше проявлялось лишь ко второму сроку исследования, ,е. на 14 —е сутки. Сочетанное применение двух указанных ыше препаратов также сопровождалось увеличением процента ктивно фагоцитирующих клеток. При этом следует отметить, го эффект от подобной комбинации не превышал действия а,ного продигиозана, хотя на 7 —е сутки он был сильнее, ем действие тимогена. Обращает на себя внимание тот >акт, что как раздельное, так и сочетанное использование родигиозана и тимогена не приводило к восстановлению

Таблица 3

Изменение функциональной активности перитонеальных макрофагов у мышей с сальмонеллезной инфекцией при различных способах коррекции

Серии опытов Число опытов Ф.И. %% НСТ положительные клетки %% Хемилюминесценция имп/мин.

7 —е сут. 14 —е сут. 7 —е сут. 14 —е сут. 7 —е сут. 14 —е сут.

Контроль 15 4?,б±1,3 47,6±1,3 56,2±2,5 56,2±2,5 1230±100 1230±100

Инфекция 8 21,3±1,6*" 28,6±1,7"* 23,4 ±1,5"* 30,4 ±1,8*** 379±24"* 595±3б*"

Инфекция + продигиозан 8 34,5±1,4*" 37,6 ±2,0" 38,4±1,4"* 43,5±2,2* 539 ±28"* 820±51*

Инфекция + тимоген 8 27,2±1,2*" 36,0±2,2** 29,9±1,6*" 38,0±2,0**' 502±25*** 758±40"

Инфекция +• продигиозан + тимоген 8 32±1,3*" 3б,3±2,0"* 38,6±1,7"* 42,1 ±2,2" 517±30*" 701 ±68'*

Инфекция + КВЧ 8 28,1 ±1,5"* 32,0 ±2,0"* 30,5±1,8"* 33,4 ±2,0*" 440±31"* 780 ±52"

Инфекция + иммуностимуляторы 4-КВЧ 8 40,9±1,5* 46,6±2,1 46,2±2,0* 53,5±2,3 735±34*" 1056 101

Примечание. Ф.И. — фагоцитарный индекс

НОТ — иитппгинстй ТРТПЯ Л П A vrvr

) контрольного уровня показателя поглотительной активности акрофагов.

При анализе влияния на захватывающую способность акрофагов электромагнитных волн миллиметрового диапазона :тановлено их корригирующее воздействие, которое было эсколько слабее (7 —е сутки), чем под влиянием продигиозана. ействие указанного физического фактора у мышей с 1Льмонеллезной инфекцией по своей выраженности больше ^ответствовало таковому у тимогена.

Учитывая одинаковую направленность изменений эглотительной функции макрофагов в результате воздействия армакологических препаратов и КВЧ —волн, проведены ссперименты с комбинированным использованием применяемых работе корригирующих факторов. В указанной серии сспериментов на 7 — е сутки развития инфекции фагоцитарная ктивность макрофагов была наиболее высокой в сравнении аналогичными показателями в других экспериментальных зуппах. Кроме того, следует указать, что только у мышей гай группы к 14 —м суткам происходило полное восстановление мсобности макрофагов захватывать частицы латекса. Подобного |зфекта, как было отмечено выше, не достигнуто ни в а,ной из экспериментальных групп.

Установленные закономерности изменений поглотительной пособности макрофагов подтверждены и при расчете агоцитарного числа, т.е. среднего количества частиц латекса, гхваченных одной клеткой. Лишь при комбинированном спользовании изученных иммуностимуляторов и КВЧ— эздействия фагоцитарное число у инфицированных животных овышалось до уровня, характерного для интактных мышей контроль: 4,1 =ь0,2; 7 —е сутки: 3,8±0,22, р>0,5; 14 —е сутки: 9±0,25, р>0,5).

При восстановлении поглотительной способности макрофагов араллельно наблюдалось улучшение состояния яслородозависимого метаболизма в этих клетках. Сальмонеллез мышей сопровождался ингибированием способности макрофагов

восстанавливать нитросиний тетразолий в диформазан. И табл.3 следует, что показатель HCT —теста у инфицированны: животных на 7 —е сутки развития патологического процесс снижался в среднем в 2,4 раза. На низком уровне он оставалс и к 14 —м суткам, что обусловило целесообразность проведени корригирующих вмешательств. Определенная коррекци достигалась при использовании продигиозана. У мышей получавших указанный препарат, отмечено статистическ: достоверное повышение HCT — показателя по сравнению таковым в группе животных, которым коррекция не проводила« уже на 7 —е сутки развития патологического процесса. Пр: последующем течении сальмонеллеза, а именно к 14 —м сутка] от момента инфицирования животных, несмотря на заметну! активацию внутриклеточных кислородозависимых бактерицидны механизмов показатель HCT —теста все еще оставался ниж нормативного уровня у инфицированных мышей.

Корригирующее действие тимогена в отношени восстановления способности макрофагов трансформироват HCT — краситель в диформазан было выражено в меньше степени, чем у продигиозана. Различия между уровням показателей HCT —теста у мышей двух сравниваемых груп оказались статистически значимыми на 7 — ой день развити инфекционного процесса (табл.3). В тоже время при сочетанно: применении указанных препаратов получен эффект, боле близкий к действию продигиозана. Следовательно, пр использованной в работе схеме сочетанного применени двух иммуностимуляторов их общий эффект не превыша такового у продигиозана.

Электромагнитное излучение миллиметрового диапазон при условии пятикратного воздействия на инфицированны мышей также, как и иммуностимулирующие препарать способствовало восстановлению функциональной активност перитонеальных макрофагов. Так, на 7 —е сутки течени инфекции отмечено статистически достоверное повышени показателя HCT —теста в сравнении с таковым в групп

нфицированных мышей, не подвергнутых какому —либо □здействию. Однако наиболее высокие показатели НСТ — гста отмечены при комбинированном использовании исследуемых ммуностимуляторов с КВЧ — облучением. В этом случае эффект орригирующего воздействия, оцениваемый по приросту дформазансодержащих клеток, статистически значимо превышал оказатели НСТ в остальных экспериментальных группах, последнее было отмечено уже на 7 —е сутки развития альмонеллезной инфекции у животных, хотя к этому сроку эедний показатель НСТ —теста еще оставался ниже контрольного ровня у интактных мышей. Особого внимания заслуживает э, что в указанной группе мышей к 14 —м суткам имело есто полное восстановление НСТ —теста, чего не наблюдалось ри других способах использования иммунокорригирующих акторов. Следовательно, оптимизирующее воздействие КВЧ — учей на эффекты иммуностимуляторов проявлялось наиболее ыражено.

Полученные в работе данные о влиянии электромагнитного злучения на функциональное состояние макрофагов одтверждаются наблюдениями, что при выполнении НСТ — эста ин витро сразу после воздействия миллиметровых волн аблюдается активация процессов окисления в фагоцитах \евятков Н.Д., Бецкий О.В.1990 ). Согласно данным ряда сследователей, в миллиметровом диапазоне существуют нформационные каналы воздействия электромагнитного злучения на биологические системы, в том числе и на истему иммунитета (Колбун Н.Д., Бессонов А.Е. 1993).

Функциональная неполноценность перитонеальных акрофагов при сальмонеллезной инфекции подтверждена акже методом хемилюминесценции. Обнаружено, что на — е и на 14— сутки развития инфекционного процесса оказатели индуцированной хемилюминесценции были гатистически достоверно снижены (табл.3). Использованные работе иммуностимуляторы вне зависимости от их раздельного л.и сочетанного применения оказывали примерно одинаковые

корригирующие эффекты в отношении исследуемо] биофизической реакции. Воздействие КВЧ — облучение? сопровождалось сходными изменениями как на 7 — е, так 1 на 14 —е сутки развития инфекционного процесса. М.Б.Голан1 (1991) объясняет регистрируемые биофизические изменени: с позиций возможностей возникновения в клетках мембранны: акустоэлектрических волн и соответствующих измененш информационной синхронизации работы клеток и клеточноп метаболизма.

Комбинированное использование иммуностимуляторо: и КВЧ—лучей с целью коррекции супрессии, обусловленно] сальмонеллезной инфекцией, сопровождалось наиболе< выраженным приростом показателей хемилюминесценци] при исследовании макрофагов (табл.3). Возможно, подобно' действие миллиметровых волн связано с поглощением и: молекулами воды и последующим переходом энергии эти: волн через гидрационный механизм к мембранным рецепторньп белкам. Подобный механизм спектрально — резонансных явлени] описан М.Б. Голант (1983), Ю.И.Хургиным (1991).

Иммунокорригирующее действие изученных в работ« факторов, особенно в условиях комбинированного применени: у инфицированных животных, сопровождалось снижение! их летальности.

Из полученных в работе материалов видно, что развити сальмонеллезной инфекции сопровождается выраженно] иммуносупрессией. Использование с целью коррекции дефекто иммунных реакций продигиозана и тимогена уменьшае ингибирующее влияние патологического процесса на иммуннув систему организма. Однонаправленным, но несколько мене выраженным действием обладает и электромагнитное излучени крайне высокочастотного диапазона. Комбинированно применение изученных иммуностимуляторов и миллиметровы: волн сопровождалось выраженным корригирущим эффектом проявляющимся более быстрым восстановлением нарушенны иммунных процессов, чем это происходило при раздельно!

шользовании указанных факторов.

ВЫВОДЫ

1. Экспериментальная сальмонеллезная инфекция [рактеризуется развитием иммунодефицитного состояния, ирессией гуморального и клеточного иммунных ответов, также снижением функциональной активности перитонеальных акрофагов. В динамике регистрируемой инфекционной дмуносупрессии выявлено два периода: период доминирования фушений в системе иммунитета (1—7 —е сутки) и период ¡.стичного восстановления иммунного статуса и эотивоинфекционной резистентности организма (8—14 —е '■тки).

2. Применение продигиозана и тимогена оказывало ммунокорригирующе действие, проявляющееся более ¿раженными стимуляцией биосинтеза антител и активацией ункционального состояния перитонеальных макрофагов под к.иянием продигиозана и более значительным повышением гакции повышенной чувствительности замедленного типа ш использовании тимогена. Иммуностимулирующие эффекты эепаратов проявляются на протяжении обоих периодов 1рушения иммунобиологического статуса организма при 1Льмонеллезной инфекции, но более выражены в течение юрого периода.

3. Отмечен синергический эффект при совместном пользовании продигиозана и тимогена, позволивший уменьшить эатность введения каждого из изученных препаратов при :спериментальной сальмонеллезной инфекции. При этом к.учшение показателей иммунного статуса сопровождается эвышением резистентности организма к моделируемому Секционному процессу.

4. Электромагнитные волны крайне высокочастотного 1апазона оказывали идентичное по направленности и драженности в сравнении с фармакологическими

иммуностимуляторами корригирующее воздействие, снижа депрессию специфических механизмов иммунного ответа повышая функциональную активность системы мононуклеарны фагоцитов. Полного восстановления рассмотренных признако: за исключением процессов антителообразования, к конц наблюдения (14 —е сутки) не происходит.

5. Установлено оптимизирующее воздействие КВЧ ■ излучения на эффекты иммуностимуляторов пр комбинированном применении изученных фармакологически средств с миллиметровым облучением, что сопровождаете полным восстановлением исследуемых иммунных показателе на 14 —е сутки развития экспериментального сальмонеллез и повышением противоинфекционной резистентности организм;

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Особенности фармакокоррекции при иммуносупрессия инфекционного генеза // Факторы клеточного и гуморальног иммунитета при различных физиологических и патологически состояниях: Тез. докл. XII Российской науч. конф. — Челябинс: 1995, —С.95. (Соавт.: Г.П. Пономарева, Е.М. Семыкина)

2. Экспериментальное изучение средств антиоксидантно терапии при инфекционной патологии // Человек и лекарств! Тез. докл. II конгр., — Москва, 1995.— С.225. (Соавт.: ЛТ Ратникова, Г.П. Пономарева, В.И. Ратников)

3. Влияние про— и антиоксидантов на ауторегуляторны механизмы защиты //Актуальные вопросы практической теоретической медицины: Сб. науч. статей.— Челябинс] 1995. —С.48. (Соавт.: Л.С. Коротовских, Г.П. Пономарев, К.В. Ратников)

4. фармакологическая коррекция макрофагального контро/ моделированной сальмонеллезной инфекции // Человек лекарство: Тез. докл. III междунар. конгр. — Москва, 1996.-С.189. (Соавт.: Г.П. Пономарева, К.В. Ратников)

5. Новые аспекты коррекции дисфункции мононуклеарных агоцитов // Современные проблемы аллергологии, клинической ммунологии, иммунофармакологии. Первая национальная энференция Российской ассоциации аллергологов и клинических ммунологов: Тез. докл.— Москва, 1997, —С.308.

6. Особенности коррекции функции мононуклеарных агоцитов при раздельном и комбинированном воздействии етилурацила с КВЧ —терапией // Современные проблемы и\.ергологии, клинической иммунологии, иммунофармакологии. ервая национальная конференция Российской ассоциации ^лергологов и клинических иммунологов: Тез. докл. — Москва, 397. — С.504.

7. Ellaboration of the new metods macrophageal activity ¡habilitation in Sallmonellosis infection // International Journal a immunorehabilitation. — 1997. —№4.— P.43. (Co— authors.: .1. Ratnikov., K.V. Ratnikov).

8. Корригирующие эффекты иммуностимуляторов и КВЧ — элн после острой сальмонеллезной инфекции // Факторы аморального и клеточного иммунитета при различных изиологических и патологических состояниях: Тез. докл. III Рос. конф.-Челябинск, 1997.-С.125. (Соавт.: Г.П. ономарева)