Автореферат и диссертация по медицине (14.00.08) на тему:Обоснование патогенетических подходов к медикаментозному лечению увеитов с учетом состояния свободнорадикального окисления

На правах рукописи

. -> - . >

о 1 -и;? ш

СЕМЕСЬКО СЕРГЕИ ГЕННАДЬЕВИЧ

ОБОСНОВАНИЕ ПАТОГЕНЕТИЧЕСКИХ ПОДХОДОВ К МЕДИКАМЕНТОЗНОМУ ЛЕЧЕНИЮ УВЕИТОВ С УЧЕТОМ СОСТОЯНИЯ СВОБОДНОРАДИКАЛЬНОГО ОКИСЛЕНИЯ

14.00.08 - глазные болезни 14.00.16 - патологическая физиология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Челябинск - 2002

Работа выполнена во Всероссийском центре глазной и пластической хирургии МЗ РФ и Центральной научно-исследовательской лаборатории Башкирского Государственного медицинского университета.

Научные руководители:

доктор медицинских наук В.У. ГАЛИМОВА,

доктор медицинских наук, профессор P.P. ФАРХУТДИНОВ.

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор И.Е. ПАНОВА, доктор медицинских наук, профессор В.А. МЫШКИН.

Ведущее учреждение:

КРАСНОЯРСКАЯ ГОСУДАРСТВЕННАЯ МЕДИЦИНСКАЯ АКАДЕМИЯ

часов

Защита состоится " /у " ,¿¿/1 /¿¿£'6— 2002 г. в

на заседании диссертационного совета К 208.019.01 в Уральской Государственной медицинской академии дополнительного образования МЗ РФ по адресу: 454021, г. Челябинск, Проспект Победы, 287.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Уральской Государственной медицинской академии дополнительного образования МЗ РФ.

Автореферат разослан " // " 2002 г.

Ученый секретарь диссертационного совета

доктор медицинских наук, профессор А.И. КУЗИН

р Q . СО/, / -

о

3

1

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы.

Увеиты занимают одно из важных мест в общей структуре воспалитель-х заболеваний глаз, составляя 5-12 % всей глазной патологии. Преимуществе поражение лиц молодого и трудоспособного возраста, выраженное тяже-е течение воспалительного процесса, часто приводящее к потере зрения и ут-ге трудоспособности, а также длительное лечение, существенно влияющее на чество жизни - все это определяет важную медицинскую и социальную значи-сть проблемы [A.M. Южаков, 1991; JT.A. Кацнельсон, В.Э. Танковский, 1998; А. Катаргина с соавт., 2000; Y. Guex-Crosier, 1999; J. Correia et al., 1998].

В настоящее время большое внимание уделяется изучению патогенеза еитов, в частности, выяснению закономерностей развития и особенностей тения воспаления, участия иммунной, эндокринной и других систем [JI.H. Тара-ва с соавт., 1998-2000; Chan С.-С. et al., 1998]. Несмотря на значительные дос-жения в этой области, многие аспекты, особенно связанные с молекулярными новами болезни, остаются нерешенными.

Установлено, что при различных по этиологии и патогенезу заболевани-. глаза создаются благоприятные условия для изменения стационарного состоя-1Я свободнорадикальных реакций с участием активных форм кислорода (АФК) ..И. Деев с соавт., 1999; М.И. Винецкая с соавт., 2000; R.C. Rose et al., 1998; ,С. Chiou, 2001], которые в норме являются важным звеном метаболизма,

В литературе обсуждается вопрос о значении нарушений процессов сво-даорадикального окисления (СРО) в патогенезе увеапького воспаления. Экс-;риментальными и немногочисленными клиническими исследованиями' показа) изменение содержания некоторых продуктов липопероксидации, субстратов сисления и антиокислительных ферментов при увеитах [Г.А. Винькова, 1999; .J. Augustin, 1996; F. Bosch-MoreJl et al., 1999; G.S. Wu, 1991-1999; N.A. Rao, ) 86-2000].

В лечении увеитов широко рекомендуется применение антиоксидантной VQ) терапии, в то же время назначение данных препаратов зачастую осуществится эмпирически, без учета состояния генерации АФК. Кроме того, установ-îho, что многие медикаменты обладают, наряду со своим основным фармаколо-1ческим эффектом, способностью влиять на СРО и проявлять как анти-, так и роокислительные свойства [Г.И. Клебанов, 1988-1999; P.P. Фархутдинов, 1987301 ; A.M. Mouithys-Mickalad et al, 2000].

Исследование процессов генерации АФК при увеитах, подбор лекарст-гнных препаратов, влияющих на течение свободнорадикальных реакций, дает эзможность уточнить причины и общие закономерности развития воспаления, ести целенаправленный поиск эффективных способов лечения, что представляет аучный и практический интерес.

К одним из способов изучения СРО относится регистрация хемилюми-есценции (ХЛ) - сверхслабого свечения, возникающего при взаимодействии вободных радикалов (CP). ХЛ является интегральным показателем, позволяю-дим оценить состояние системы СРО. Метод обладает высокой чувствительно-

стью, прост, удобен в исполнении, не вносит изменений в состояние биологического материала [Ю.А. Владимиров, 1991-1999, О.И. Пикуза с соавт., 1996, А. Rodaetal., 2000]. ■

Исследования процессов генерации АФК при увеитах в клинике требуют разработки, апробации и внедрения способа регистрации ХЛ биологического материала, оценки возможности использования метода при выборе и контроле эффективности лечения.

С учетом вышеизложенного были сформулированы цели и задачи исследования.

Цель: обоснование патогенетических подходов к лечению увеитов с учетом состояния генерации активных форм кислорода в слезной жидкости и влияния лекарственных препаратов на процессы свободнорадикального окисления.

Задачи:

1. Разработать объективный метод комплексного исследования процессов генерации активных форм кислорода в слезной жидкости на основе хемилюми-несцентного анализа.

2. Изучить влияние некоторых лекарственных препаратов, традиционно применяемых в лечении увеитов, на процессы свободнорадикального окисления in vitro.

3. Исследовать состояние генерации активных форм кислорода при увеитах.

4. Определить новые подходы к патогенетическому лечению увеитов с учетом роли свободнорадикального окисления.

Научная новизна.

Впервые разработан объективный метод комплексного исследования процессов генерации АФК на основе ХЛ анализа фракций СЖ, полученных методом центрифугирования и заключающийся в определении интегральных показателей суммарной антиокислительной активности супернатанта (АОАСЖ) в модельной системе, генерирующей АФК и спонтанного люминол- зависимого свечения осадка СЖ.

Впервые на экспериментальных модельных системах (МС) изучено влияние пятнадцати лекарственных препаратов, традиционно ' применяемых в лечении увеитов, на процессы. СРО, дайа оценка" их про- и антиоксидантной активности. '

Показано, что значения XJI СЖ зависят от активности увеального воспаления., Уменьшение активности увеита сопровождается повышением АОАСЖ и снижением спонтанной светимости осадка СЖ. ■ ■

Обосновано новое положение о том, что применение ХЛ исследования слезной жидкости в комплексном обследовании больных увеитами дает возможность определять состояние свободнорадикального статуса, контролировать эффективность проводимого лечения.

На основании проведенных исследований определены новые подходы в патогенетически ориентированному медикаментозному лечению увеитов, базирующиеся на рациональной антиоксидантной терапии с учетом состояния гене-

эации АФК и АО свойств применяемых медикаментов. Практическая значимость работы.

Впервые предложен, апробирован и внедрен в клиническую офтальмо-иогическуго практику удобный неинвазивный экспресс - метод регистрации ХЛ СЖ для изучения состояния генерации АФК и АО активности при заболеваниях глаза, в частности при увеитах.

Комплексное исследование состояния СРО в СЖ, заключающееся в оценке АО активности супернатанта и спонтанной ХЛ осадка СЖ, использовано в клинике с целью объективной диагностики степени активности воспаления у больных увеитами (заявка о выдаче патента Российской Федерации "Способ определения активности воспалительного процесса у больных увеитами", № 2001118897 от 20 июля 2001 г.). ' "

Установленная способность препаратов, традиционно применяемых в лечении увеитов, в различной мере влиять на генерацию АФК была использована как дополнительный фактор патогенетически ориентированной терапии увеаль-ного воспаления.

Параметры ХЛ СЖ использованы в качестве критериев эффективности проводимого медикаментозного лечения.

Обоснованы новые подходы к патогенетическому лечению увеитов, основанные на рациональном применении препаратов с АО активностью при динамическом мониторировании состояния генерации АФК.

Положения, выносимые на защиту.

Г. Разработанный комплексный метод ХЛ анализа процессов СРО с участием АФК, заключающийся в исследовании АОАСЖ и спонтанной светимости осадка СЖ позволяет оценивать свободнорадикальный статус и способствует выбору рациональной тактики лечения.

2. Лекарственные препараты, традиционно применяемые в лечении увеитов в различной мере оказывают влияние на состояние СРО in vitro.

3. Показатели АОАСЖ и спонтанной светимости осадка СЖ, отражающие состояние генерации АФК,: нахбдятся в,зависимости от активности воспаления при увеитах и могут служить критериями эффективности проводимого лечения.

4. Новые подходы к патогенетическому лечению, основанные на оценке состояния генерации АФК в СЖ и выборе лекарственных препаратов с учетом их влияния на СРО, повышают эффективность лечения увеита.

Внедрение результатов работы в практику.

Работа выполнена в рамках плана научных исследований Всероссийского центра глазной и пластической хирургии.

Разработанные методы внедрены в практику Всероссийского центра глазной и пластической хирургии; Методы скрининга ангиоксидантных и проок-сидантных свойств лекарственных, препаратов применяются также в Центральной научно-исследовательской лаборатории Башгосмедуниверситета, Республи-

канской клинической больнице (г. Уфа). Новые данные, полученные при вшгол нении исследования введены в учебную программу и включены в. курс лекцш для курсантов и слушателей кафедры глазной и пластической хирургии Институ та последипломного образования Башгосмедуниверситета.

Апробация работы и публикации.

Основные положения работы представлены на юбилейной научной кон ференции, посвященной 80-летию профессора В.В. Волкова "Офтальмология н; рубеже веков" (Санкт-Петербург, 2001); на международном конгрессе "Новы* медицинские технологии" (Санкт-Петербург, 2001); на Национальной научно практической конференции с международным участием ."Свободные радикалы антиоксиданты и болезни человека" (Смоленск, 2001); на. ХП научно практической конференции "Новые технологии микрохирургии глаза" (Оренбург 2001); на IX научно-практической конференции Екатеринбургского Центр; МНТК "Микрохирургия глаза" (Екатеринбург, 2001). Работа обсуждена на со вместном заседании Ученого совета Всероссийского центра глазной и пдастиче ской хирургии, кафедры глазной и пластической хирургии Башгосмедуниверси тета и Научно-технического совета Центральной научно-исследовательской ла боратории Башгосмедуниверситета.. Автором опубликовано 27 печатных работ, I том числе 9 - по теме диссертации. Подана заявка о выдаче патента Российское Федерации (№ 2001118897 от 20 июля 2001 г.)..

Структура и объем диссертации.

Диссертация изложена на 165 страницах машинописного текста, состой-из разделов "Введение", "Обзор литературы", "Материалы и методы исследова ния", "Результаты собственных исследований", "Обсуждение", "Выводы", "Прак тические рекомендации", "Список литературы". Работа иллюстрирована 28 таб лицами, 31 рисунком. Библиографический список содержит 296 работ, из них 51 отечественных и 238 зарубежных авторов.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Материалы и методы исследования.

' - В настоящей работе в соответствии с поставленной целью и задачами были выделены основные этапы исследования, которые представлены в таблиц 1.

Первым этапом исследования было создание метода анализа процессо: СРО, протекающих с участием АФК, в СЖ. Для этого применялась модельна система, в которой инициировали генерацию АФК. Чтобы изучить процессы ра дикалообразования был использован метод ингибиторного анализа с селектив ными перехватчиками АФК, а также известными АО - производными 3 оксшшридина. После разработки, метод исследования СЖ был апробирован : клинике. Вторым этапом было исследование влияния 15 медикаментов на про цессы СРО в трех МС. На третьем этапе работы изучали состояние генераци:

,ФК в СЖ у пациентов с увеитами. В итоге, анализируя собственные результаты данные литературы, были определены патогенетические подходы к лечению веитов с учетом состояния СРО.

Таблица 1.

Общая характеристика проведенных исследований

Этапы и задачи исследования Объект и объем исследования

1. Разработка метода ХЛ анализа процессов генерации АФК в СЖ. МС для определения АО свойств. Химические вещества - селективные "перехватчики" АФК. Известные и широко применяемые в медицине АО. СЖ 56 здоровых лиц и 27 пациентов с различными офтальмологическими заболеваниями.

2. Изучение влияния на процессы СРО in vitro некоторых медикаментов, традиционно используемых в лечении увеитов. МС, генерирующие АФК и система, в которой протекают процессы пе-рекисного окисления липидов (всего три МС и 15 препаратов четырех групп).

3. Исследование генерации АФК в СЖ больных увеитами. Полное клинико-лабораторное обследование 73 пациентов с увеитами, анализ АО свойств и спонтанной светимости СЖ.

4. Определение патогенетических подходов к лечению увеитов с учетом роли СРО. Анализ собственных результатов и данных литературы.

Комплексное обследование пациентов включало оценку общего состояния доровья и общепринятое клинико-функциональное исследование органа зрения.

При постановке диагноза, определении степени активности увеального оспаления руководствовались известными и общепринятыми рекомендациями, ¡иагностическими критериями и классификациями Л.А. Кацнельсона, В.Э. Таковского (1998), а также Международной группы по изучению увеитов. International Uveitis Study Group recommendations for the evaluation of intraocular ■iflammatory disease, 1987). Оценку признаков активности проводили, взяв за |Снову шкалу CCLRU (1994). При этом в цифрах (баллах) от 0 до 2 определяли остояние анализируемого признака: 0 - признак отсутствует, 1 - признак слабо. ыражен, 2 - признак выражен.

В лечении больных применяли традиционные подходы. Основой фармако-ерапии увеитов, независимо от их этиологии, было раннее применение местного [ системного неспецифнческого противовоспалительного лечения. Всем пациен-ам назначались препараты трех основных групп: антибактериальные (антибио-ики и синтетические антимикробные), мидриатики, и противовоспалительные редства (глюкокортикоиды и нестероидные антифлогистики). Подбор и назна-ение медикаментов производили основываясь на этиологии заболевания, степе-

ни активности увеального воспаления, ведущих симптомах процесса в динами: и с учетом индивидуальных особенностей каждого пациента.

Для изучения СР реакций, связанных с генерацией АФК использовал' метод записи ХЛ. ХЛ изучали на установке ХЛ-003, изготовленной в Межвузо ской лаборатории технических систем медико-биологических исследован! Башкирского государственного медицинского и Уфимского государственно) авиационного технического университетов (Отраслевой регистр "Медицинск; промышленность России и стран СНГ"). Прибор регистрирует излучение длине волны 0,3-0,6 мкм, чувствительность составляет 104-107 фотон/с.

В качестве эталона для оценки интенсивности ХЛ использовали ЖС-1 (ГОСТ 9411-81), испускающее свет в видимой области спектра и прокалиброва] ное в абсолютных единицах квант/с*4р*мг по стандартному радиолюминесцен ному источнику. Кинетика ХЛ регистрируется с помощью компьютерного и терфейса. Таким образом, весь процесс измерения ХЛ и обработка результате проводятся в автоматическом режиме, что позволяет повысить точность и объе) тивность полученной информации. Программа определяет следующие параметр хемилюминограммы: светосумму (по площади под кривой), спонтанную свет) мость, вспышку, максимальную светимость и наклон кривой. В качестве наиб< лее информативных показателей ХЛ были взяты светосумма Б и максимально амплитуда медленной вспышки 1тах (Р.Р. Фархутдинов, 1995).

В работе применяли три МС, в которых происходит генерация АФК.

МС на цитрат-фосфатном буфере. В исходном варианте использовал 20 мл фосфатного буфера с добавлением цитрата и люминола. Состав буфер; 2,72 г КН2Р04, 7,82 г КС1, 1,5 г СбН807Ка3*5,5Н20 на 1 литр дистиллированно воды. Величину рН полученного раствора доводили до 7,45 ед. титрованием н; сыщенным раствором КОН и добавляли 0,2 мл маточного раствора люминол (10'3 М). Образование АФК инициировали введением 1 мл 50 мМ раствора сер нокислого железа при постоянном перемешивании (Р.Р. Фархутдинов, 1995).

МС фагоцитоза. Отбирали венозную кровь в пластиковую пробирку гепарином (на 1 мл крови 50 ЕД гепарина). Кровь в объеме 0,1 мл с пригото! ленным раствором препарата или физиологическим раствором в том же объеме качестве контроля, инкубировали в термостате в течение 10 минут, разводили в мл физиологического раствора с люминолом (10"5 М) и регистрировали ХЛ в те чение 10 мин.

МС, в которой развиваются процессы перекисного окисления липидо (ПОЛ). В данной системе используются липосомы, полученные из куриног желтка, содержащего липолротеиновые комплексы, сходные с липидами кров (Г.И. Клебанов с соавт., 1988), при добавлении к которым ионов двухвалентног железа (10 мМ) развивается цепное окисление полиненасыщенных жирных ки слот, сопровождающееся свечением.

В СЖ изучали процессы радикалообразования. Стимулированную вды ханием паров 10 % нашатырного спирта слезу забирали канюлей из слезного озе ра и нижнего конъюнктивального свода, не касаясь конъюнктивы и роговицы.

Для выяснения природы сверхслабого свечения, возникающего при ре гистрации ХЛ СЖ, проводили тест восстановления нитросинего тетразоли

НСТ-тест) по традиционной методике. Тест отражает метаболические процессы, вязанные с генерацией супероксид-аниона в НАДФН-оксидазной реакции ком-:онентами осадка СЖ. Результат оценивали в процентах клеток, накапливающих юрмазан.

В работе были использованы следующие медикаменты: Мексидол, 5 % аствор для инъекций (Экспериментальное производство медико-биологических репаратов Российского Кардиологического научно-производственного ком-шекса Министерства здравоохранения РФ), "Эмоксипин" 1 % глазные капли АКО "Синтез", Россия), Ципромед [ципрофлоксацин 0,3 %] ("Promed exports", Тндия), Гентамицина сульфат 0,3 % ("Белмедфармпрепараты", Россия), Левоми-(етин 0,25 % (АО "Белмедпрепараты", Россия), Нормакс [норфлоксацин 0,3 %] "Ipca", Индия), Сульфацил-натрия раствор 20 % ("Татхимфармпрепараты", Роста), Тропикамид 0,5 % ("Polfa", Польша), Цикломед [циклопентолата гидрохло->ид 1 %] ("Promed exports", Индия), Атропина сульфат 1% ("Московский эндок-1инный завод", Россия), Мезатон 1 % [фенилэфрина гидрохлрид] (Украина), 1реднизолон 25 мг/мл ("Никомед", Россия), Гидрокортизон микрокристалличе-кая суспензия, 25 мг/мл ("Гедеон Рихтер", Венгрия), Дексаметазон 0,1 % глазная успензия ("Polfa", Польша), Диклоф [диклофенак - натрий 0,1 %] ("Promed xports", Индия), Софрадекс ("Roussel", Индия), Дексона ("Cadila", Индия).

Статистическую обработку полученных данных проводили на персо-галыюм компьютере Pentium, используя пакет компьютерных статистических фограмм STATISTICA V5.5A (1999). Вычислялись средние величины, стан-иртные отклонения, стандартные ошибки средних и доверительные интервалы. \пя установления связи между переменными применялся метод ранговой коррекции с вычислением коэффициента Спирмена rs. Определялась достоверность 1азличий с помощью критерия Стьюдента -1. За вероятность различий принимаюсь значения р<0,01, р<0,05.

Результаты собственных исследований и их обсуждение.

Общая характеристика клинического материала.

Пациенты были осмотрены на базе Всероссийского центра глазной и шастической хирургии, городской клинической болышцы № 10 г. Уфы (зав. отд. ).К. Сабиров), II детского отделения Уфимского НИИ глазных болезней (зав. >тд. Заслуженный врач Республики Башкортостан А.Ж. Жуманиязов).

Всего было обследовано 95 пациентов с различными заболеваниями орана зрения (таблица 2). Среди больных было 53 мужчины и 42 женщины. Из 80 гациентов с увеитами 73 составили материал основной клинической части ис-ледования. 27 больных были обследованы в процессе клинической апробации [ри разработке метода ХЛ . анализа процессов СРО в'СЖ. Контрольные группы 56 человек) были представлены лицами, не страдающими офтальмологическими аболеваниями.

Таблица

Общая характеристика пациентов_

Диагноз Количество больных

Общее Мужчины Женщины

Кератит 5 (5,3 %) 2 (2,1 %) 3 (3,2%)

Конъюнктивит 5 (5,3 %) 4 (4,2 %) 1 (1,1 %)

Миопия 5 (5,3 %) 2(2,1 %) 3 (3,2 %)

Увеит 80 (84,2 %) 45 (47,4 %) 35 (36,8 %)

Всего 95 (100 %) 53 (55,8 %) 42 (44,2 %)

Одностороннее поражение глаз среди больных кератитами у 2 пациенте (2 глаза) было вызвано герпес - вирусной инфекцией, у 3 (3 глаза) - травмой р говицы. Острый конъюнктивит у 1 больного (1 глаз) был обусловлен инородны телом, у 2 (2 глаза) - бактериальной инфекцией, у 2 пациентов (4 глаза) была д] агностирована конъюнктивальная форма весеннего катара.

В группе лиц с близорукостью прогрессирующее течение заболеваш отмечено у 4 больных (8 глаз), у 1 (2 глаза) миопия была стабилизирована. У пациентов близорукость была средней степени, у 2 - высокой. У всех лиц с мю пией, кератитами и конъюнктивитами не было выявлено тяжелой соиутствующе соматической патологии. Среди пациентов с увеитами 12 человек (12 глаз) был обследованы в процессе разработки метода ХЛ анализа СЖ. Из них 5 больных ( глаз) лечились по поводу посттравматического эндофтальмита, 3 пациента ( глаза) - острого иридоциклита неясной этиологии и 4 человека (4 глаза) - обос рения ревматоидного иридоциклита.

Среди анализируемой когорты 73 больных с увеитами чаще заболеваш встречалось у мужчин - 45 (61,6 %) против 28 (38,4 %) у женщин. Примерно т: кое же распределение, с преобладанием мужчин отмечалось в возрастных гру1 пах 4-15 и 16-40 лет. Средний возраст больных увеитами составил 27,7 ± 2,1 лет.

В этиологической структуре заболевания преобладали постгравматич( ские увеиты (36,9 %), из них у 17 пациентов (23,3 %) увеит развивался поел проникающего ранения, у 7 (9,6 %) - после контузии глазного яблока. Несмотр на проведенное комплексное клинико-лабораторное обследование всех осмот ренных пациентов, у 24 больных (32,9 %) этиологию увеита установить не уд; лось. Увеит при системных заболеваниях был выявлен у 15 пациентов (20,6 %).' 11 лиц (15,1 %) увеит был связан с ревматоидным артритом, у 4 (5,5 %) - с ревмг тическим процессом. Суставной синдром и минимальные признаки активност системного процесса в виде клинико-лабораторного комплекса были выражены 3 (4,1 %) пациентов. Инфекционный увеит был обусловлен герпетической т

фекцией в 6 случаях (8,2 %) и цитомегаловирусной инфекцией - в I случае (1, %).

Среди обследованных 73 больных увеит был диагностирован в 87 гла зах (100 %). Односторонний процесс был выявлен при постгравматических увей тах у 26 больных (31,0 %), при инфекционных у 6 пациентов (8,2 %). У 14 (19,: %) больных отмечалось двухстороннее поражение, из них у 9 (12,3 %) увеит бы.

обусловлен системным заболеванием (ревматоидный артрит), у 5 (6,8 %) этиология была неизвестна. В исследуемой когорте преобладали поражения переднего отдела увеального тракта (62,1 %), затем - панувеит (21,8 %), задний увеит (11,5 %) и периферический увеит (4,6 %). Большинство пациентов (39 лиц, 53,4 %) заболевали впервые. Увеит у 21 из них был вызван травмой (28,8 %), у 2 инфекцией, у 16 (21,9 %) этиология впервые возникшего увеального воспаления была неизвестна. Сопутствующими заболеваниями органа зрения у 6 больных (12 глаз) была стабилизированная миопия средней или слабой степени. У 14 человек (28 глаз) была выявлена деструкция стекловидного тела. Острота зрения при поступлении с коррекцией составляла от 0,001 до 1,0, в среднем 0,58±0,13.

34 пациента (46,6 %) были госпитализированы повторно с обострением хронического рецидивирующего увеита. Больные с увеитами при системных процессах (10 человек) имели хроническое рецидивирующее течение заболевания, из них 4 - часторецидивирующее (с обострениями один и более в 2 года по классификации О.Г. Поздеевой, 1996) и 2 - непрерывно рецидивирующее. Дебют увеита у этих пациентов был отмечен 1,2 - 7,4 года назад. 7 пациентов с посттравматическими увеитами госпитализировались повторно во второй и третий раз за последние 6-11 месяцев после полученного проникающего ранения глаза.

Из осложнений хронических увеитов у четверти пациентов была выявлена кератопатия и лентовидная дистрофия роговицы, в 33,3 % случаев осложненная катаракта (задняя субкапсулярная у 19 больных и полная и почти полная катаракта у 10). Сращение-заращение зрачка и задние синехии отмечалось у 45,2 % больных, пигментные депозиты на передней капсуле хрусталика выявлялись в 32,1 %. Вторичная увеальная компенсированная глаукома была диагностирована у 1 пациентки (I глаз). Явления фиброза и деструкции стекловидного тела по данным В-сканирования отмечались у 24 пациентов. У 5 больных (5 глаз) с хроническими увеитами была диагностирована тотальная и субтотальная отслойка сетчатки.

Лаборатор}гые показатели отражали неспецифическую реакцию организма на воспаление в виде лейкоцитоза (в 43,8 % случаев), лейкоцитарного сдвига влево в 30,1 %, лимфоцитоза в 28,8 %, ускорения скорости оседания эритроцитов до 24-35 мм в час в 35,6 %.

Для исследования состояния генерации АФК в СЖ при увеитах было необходимо разработать удобный метод анализа процессов СРО.

Разработка, экспериментальная, клиническая апробация и обоснование применения метода регистрации хемилюминесценции слезной жидкости.

При изучении процессов радикалообразования в СЖ была исследована АО активность супернатанта СЖ и спонтанная светимость осадка СЖ.

В результате исследования был создан и апробирован в клинических условиях способ исследования свободнорадикальных реакций в СЖ путем раздельного изучения ее фракций, получаемых при центрифугировании. Для оценки АО свойств супернатанта СЖ была адаптирована к малым объемам биологического материала МС на цитрат - фосфатном буфере. Методом ингибиторного

анализа с применением селективных перехватчиков гидроксильного радикала тушителей синглетной формы кислорода было доказано, что в МС происходи генерация АФК. Экспериментальным путем подобрана оптимальная концентра ция активатора ХЛ - ионов двухвалентного железа, при которой в реакционно: смеси преобладали процессы окисления. Определяющая роль железа была дока зана угнетением индукции свечения в присутствии хелатора этилендиаминтетра ацетата, связывающего ионы металла. Было установлено, что СЖ способна вли ять на XJI МС, то есть изменять в ней процессы генерации АФК. Практически использование регистрации XJI СЖ стало возможным лишь после выбора опре деленных условий измерения свечения. В итоге была разработана методика XJ анализа процессов СРО в СЖ. Суть метода заключается в следующем.

Исследуемый образец СЖ в объеме 0,15 мл центрифугируется при 200( об. в мин. 5 мин., затем отбирается супернатант и оценивается его АО актив ность. Для этого готовится МС, состоящая из фосфатного буфера (20 м!У КН2Р04, 105 мМ КС1) с добавлением цитрата натрия (50 мМ) и люминола (10' М). Величина рН доводится до 7,5 ед. титрованием насыщенным раствором КОН В термостатируемую кювету хемшпоминомера XJIM-003 (37°С) помещается 5 mí МС с 0,1 мл физиологического раствора (контроль) или с супернатантом СЖ в том же объеме (опыт). При постоянном перемешивании реакционной смеси вводится активатор окисления - 1 мл 10 мМ раствора сернокислого железа. Определяется светосумма XJÍ - наиболее информативный интегральный показатель, отражающий квантовый выход произошедших в МС свободнорадикальных реакций. Ее значения регистрируются за 5 минут измерения. Полученные цифровые показатели светосуммы выражаются в процентах от контроля. Величина АОАСЖ вычисляется в % по формуле 100 - (S ХЛ МС - S ХЛ МС+СЖ)/ЙХЛ МС * 100, где S ХЛ МС - светосумма хемилюминесценции модельной системы (контроль), S ХЛ МС+СЖ - светосумма хемилюминесценции модельной системы в присутствии супернатанта слезной жидкости. Средний уровень светимости МС в присутствии супернатанта СЖ здорового человека составил 22,48±1,12 у.е., то есть ХЛ МС менее 50 % от контроля, или АОАСЖ более 50 % (52,88-4:2,4 %, р<0,05).

Исследуется спонтанная светимость осадка СЖ. Для этого осадок СЖ объемом 0,05 мл помещается в физиологический раствор (рН 7,2) с люминолом (10"s М) в объеме 2 мл и регистрируется в течение 5 мин. ХЛ. Учитывается основной, наиболее информативный показатель - светосумма свечения (светимость). Средние значения спонтанной светимости осадка составили в норме l,84:fc0,ll у.е.

В результате проведенного анализа фракций СЖ было установлено, что разница в показателях светимости СЖ парных глаз оказалась не более 5 %.

Таким образом, при изучении XJI СЖ впервые удалось выделить два компонента, вносящие существенный вклад в процессы СРО в СЖ, а именно определить, что АО активностью обладает супернатант СЖ, полученный в результате центрифугирования, а спонтанное свечение генерируется осадком СЖ.

Изучение роли фракций СЖ в процессах СРО, выявление их участия в ХЛ представляло интерес как для уточнения механизма свечения, так и для выяснения причин, ведущих к нарушению состояния СРО при некоторых заболева-

ниях. Так, при воспалительных процессах (эндофтальмит, конъюнктивит, кератит) обнаружено увеличение спонтанной светимости осадка СЖ, уменьшение АОАСЖ; при миопии определено понижение АОАСЖ.

Как было установлено, одним из факторов, определяющих спонтанное свечение осадка СЖ, являются клетки, активно накапливающие гранулы форма-зана в НСТ-тесте, то есть обладающие способностью генерировать АФК. Из литературы известно, что этими клетками являются макрофаги и полиморфноядер-ные лейкоциты (транзиторные клетки крови), количество которых резко возрастает при воспалительных процессах в глазу. Не исключено, что определенное значение в уровень спонтанной светимости вносят процессы СРО, протекающие, например, в мембранных структурах спущенных клеток, постоянно в норме присутствующих в СЖ здоровых лиц. Кроме того, возрастание спонтанного свечения при повреждении роговицы, конъюнктивы может быть связано с выбросом окислителей и АФК самими измененными клетками этих тканей.

В настоящей работе показано, что супернатант СЖ и широко применяемые в медицинской практике АО (производные 3-оксипиридина), а также селективные перехватчики АФК (мочевина, гистамин) влияют на XJI разработанной МС сходным образом. На Основании этого можно заключить, что супернатант СЖ обладает АО активностью, обусловленной взаимодействием компонентов СЖ с антиоксидантными свойствами. Известно, что в СЖ содержится большой набор субстанций, способных угнетать СРО. Однако, механизмы действия этих веществ различны. Так, например, урат и мочевина являются перехватчиками гидроксилыюго радикала; трансферрин, лактоферрин связывают ионы железа -мощные активаторы СРО, ферменты супероксиддисмутаза, каталаза утилизируют АФК, глутатион является тиоловым антиоксидантом, и т.д. Поэтому определение количественного состава антиоксидантов или их активности, не в полной мере отражает АОАСЖ. Несмотря на некоторые различия в свечении МС в присутствии селективных перехватчиков АФК и супернатанта СЖ, влияние этих веществ на ХЛ оказалось сходным. Это, во-первых, подтверждает роль АФК в развитии ХЛ, а во-вторых, свидетельствует об идентичности механизмов, ответственных за подавление свечения МС перехватчиками АФК и супернатантом СЖ.

Таким образом, суммарная АО активность биологической жидкости - это не просто сумма антиокислительной активности ее компонентов, это динамический, интегральный показатель взаимодействия каждой составляющей и системы прооксидации в данный момент времени. Поэтому определение отдельных АО, либо продуктов или субстратов свободнорадикальных реакций не дает объективной оценки состояния СРО и A OA биологического материала в целом.

Влияние некоторых препаратов, традиционно применяемых в лечении увеитов на процессы свободнорадикального окисления in vitro.

Появление в последнее время ряда научных сообщений о необходимости местной и системной АО терапии при увеигах, побудило нас изучить действие лекарственных препаратов, традиционо используемых в лечении увеитов на процессы СРО.

Таблица 3.

Влияние лекарственных препаратов на процессы СРО в МС

Препарат Объем, мл Влияние на СРО

В МС АФК, Б, % от контроля В МС ПОЛ, Б, % от контроля В МС фагоцитоза, Б, % от контроля

1 2 3 4 5

Антибактериальные препараты

Ципромед 0,100 0,050 0,025 0,010 2,8±0,02 13,1±0,10 25,4±0,21 62,9±0,43 35,6±0,30 52,8±0,47 60,5±0,57 77,7±0,65 48,9±0,47

Гентамицина сульфат 0,100 0,050 0,025 0,010 26,5±0Д1 46,9±0,39 70,3±0,65 87,6±0,77 39,4±0,28 54,5±0,4б 60,7±0,53 83,9*0,78 69,8*0,68

Левомицетин 0,100 0,200 0,400 0,800 84,5±0,83 77,1 ±0,76 60,3±0,42 52,8±0,33 88,7±0,73 86,7±0,71 78,5±0,75 73,9*0,65 85,5±0,82

Нормакс 0,100 0,050 0,025 0,010 14,1±0,11 22,5±0Д7 42,5±0,39 65,9±0,56 42,2*0,38 67,9±0,60 79,5*0,71 87,5*0,83 28,410,26

Сульфацил-натрля 0,100 0,050 0,025 0,010 0,46±0,01 1,22±0,01 2,07*0,02 2,45±0,01 54,04±0,47 56,60*0,52 59,62±0,56 67,85±0,61 25,8*0,24

Мидриатики и цнклоплегики

Тропикамид 0,100 0,050 0,025 0,010 12,3±1,1 27,9±1,6 52,2±1,4 65,9±2,1 2,9*0,5 60,1±1,2 66,2*1,8 69,3*1,8 53,7±2,1

Цикломед 0,100 0,050 0,025 0,010 24,2±1,8 47,3±1,2 71,6±2,2 97,4±3,1 355,5*3,5 203,9±2,9 153,4±1,6 102,1*1,1 21,9*1,1

Атропина сульфат 0,100 0,050 0,025 0,010 46,7±1,7 6б,0±1,9 12,Ш,2 78,3±2,8 78,9*1,5 87,9*1,8 97,6*2,1 99,1±3,0 36,1±1,5

Мезатон 0,100 0,050 0,025 0,010 27,б±1,1 40,0±1 ,9 51,6±1,2 70,4±2,1 66,2+1,8 76,0*1,7 76,6*2,1 88,0*2,2 37,5*1,4

Таблица 3 (продолжение)

1 2 3 4 5

Антифлогистики

Преднизолон 0,100 51,1 ±0,40 36,1±0,24 7,1 ±0,07

0,050 59,6±0,58 55,8±0,4б

0,025 67,3±0,61 67,9±0,59

0,010 79,0±0,68 81,5±0,72

Гидрокортизон 0,100 67,4±0,55 П8,б±1,01 33,5±0,32

0,050 78,5±0,71 115,7±0,98

0,025 86,0±0,80 111,2±0,95

0,010 95,3±0,86 101,8±0,93

Дексаметазон 0,100 30,0±0,25 55,0±0,41 82,1±0,80

0,050 44,3±0,36 67,4±0,62

0,025 62,6±0,55 75,6±0,74

0,010 75,2±0,70 87,4±0,83

Диклоф 0,100 26,1±0,23 56,5±0,54 38,8±0,3б

0,050 37,3±0,37 63,4±0,31

0,025 68,2±0,54 70,2±0,б8

0,010 75,6±0,75 77,5±0,72

Комбинированные препараты

Дексона 0,100 15,1±0,12 38,3±0,29 28,9±0,25

0,050 34,1±0,24 57,2±0,43

0,025 45,3±0,37 64,3±0,57

0,010 59,3±0,58 72,2±0,бб

Софрадекс ОД 00 13,2±0,12 24,1 ±0,20 51,4±0,50

0,050 27,7±0,25 41,2±0,36

0,025 41,0±0,36 55,1±0,48

0,010 5б,б±0,51 63,4±0,61

Примечание. Достоверность полученных значенийр<0.01.

Были протестированы 15 медикаментов четырех групп (антибактериальные, мидриатики, антифлогистики и комбинированные препараты) в трех МС (таблица 3). В качестве первой модели использовали фосфатный буфер с добавлением цитрата натрия и люминола в диметилсульфоксиде. Образование АФК инициировали введением раствора сернокислого железа. Второй системой служила модель фагоцитоза, в которой АФК генерировались при активации фагоцитов и третьей - модель, состоящая из суспензии липосом куриного желтка в фосфатном буфере, активируемая ионами двухвалентного железа.

В МС, генерирующей АФК, из группы антибактериальных препаратов в наибольшей степени угнетал генерацию СР сульфацил-натрий. В меньшей степени влияли на генерацию АФК ципромед, нормакс, гентамицин. В изученных концентрациях на модель АФК практически не влиял левомицетин. Все мидриатики проявили АО свойства. По убывающей АО активности они расположились следующим образом: тропикамид, цикломед, мезатон, атропина сульфат. Антифлогистики (как стероидные так и диклофенак натрия) также угнетали генерацию АФК. Причем, диклоф проявил максимальную АО активность, затем - дек-саметазон и преднизолон. Минимально вызывал угнетение продукции СР гидрокортизон.

На МС, в которой протекали процессы ПОЛ, препараты различных групп влияли неоднозначно. Этот факт, вероятно, можно объяснить различием в характере генерируемых радикалов в изученных МС. Из антибактериальных средств сильнее всего подавлял процесс ПОЛ ципромед; затем - сульфацил-натрий, гентамицин, нормакс; левомицетин практически не влиял на ПОЛ.

Тропикамид был также самым мощным АО из группы мидриатиков, затем - мезатон и атропин. Интересно отметить, что цикломед проявил выраженные прооксидантные свойства. В системе ПОЛ гидрокортизон показал себя как слабый прооксидант, все остальные противовоспалительные средства подавляли ПОЛ. По интенсивности угнетения ПОЛ препараты расположились следующим образом: преднизолон, дексаметазон и диклоф.

В МС фагоцитоза в большей степени подавлял продукцию АФК из группы антибактериальных препаратов сульфацил-натрий, затем - нормакс, ципромед, гентамицин. Практически не влиял на генерацию АФК фагоцитами левомицетин. Все мидриатики подавляли ХЛ фагоцитов, причем интенсивнее угнетал АФК цикломед, затем - атропин и мезатон. Тропикамид действовал на продукцию АФК фагоцитами в меньшей степени. Противовоспалительные средства обладали выраженным угнетающим действием на ХЛ фагоцитов. Интенсивнее всех из данной группы подавлял светосумму ХЛ преднизолон. В меньшей степени влияли на генерацию АФК гидрокортизон, диклоф и дексаметазон.

Изученные комбинированные препараты, представляющие собой сочетание глюкокортикоида и антибиотика(ов) проявили АО свойства в МС АФК и ПОЛ, а также значительно угнетали ХЛ фагоцитов.

Полученные экспериментальные данные о влиянии препаратов на процессы СРО в МС послужили основанием для клинического изучения терапевтической эффективности медикаментов с учетом их АО свойств.

Хемилюминесценция слезной жидкости при увеитах.

Изучение процессов генерации АФК в СЖ при увеитах было выполнено у 73 пациентов (87 глаз). У больных на момент осмотра были выявлены клинически выраженные признаки активного (57 пациентов, 63 глаза) или субактивного (16 пациентов, 24 глаза) воспаления увеального тракта. Данные исследования СЖ представлены в таблице 4.

Таблица 4.

Показатели ХЛ СЖ пациентов с увеитами ._,

Исследуемые лица Хемилюминесценция СЖ

АОАСЖ, % Осадок СЖ, Б, у.е.

Здоровые (контроль, п=30) 52,88+2,4 1,84+0,11

Активный увеит (п=63) 21,41+0,78 12,78+1,91

Субактивный увеит (п=24) 37,1211,47 4,25+0,63

Примечание, п - число глаз. Достоверность полученных значений р<0.05.

В сравнении со значениями XJ1 СЖ здоровых лиц (норма), показатели АОАСЖ больных при увеитах на момент поступления были снижены и составили в среднем около 21,4 % при активном и 37,1 % при субактивном процессе. "Уровень спонтанного свечения осадка СЖ при активном увейте возрастал примерно в 7 раз, при субактивном - в 2,3 раза (р<0,05). То есть выявлялись высокие уровни генерации АФК в СЖ.

Всем пациентам назначалась медикаментозная терапия в соответствии с общеизвестными рекомендациями по лечению увеитов. При выборе препаратов базисной местной терапии ориентировались на полученные ранее данные о влиянии препаратов на процессы СРО in vitro. В первой группе больные получали лекарства, обладающие выраженными АО свойствами, во второй - медикаменты в меньшей степени влияющие на генерацию СР. В первой группе (21 пациент, 23 глаза) в качестве одного из трех базисных препаратов назначались: из антибактериальных инсталляции альбуцида, ципромеда, нормакса, из мидриатиков - помимо инъекций атропина применялись инсталляции тропикамида, из антифлоги-стиков эти пациенты получали капли диклоф и из комбинированных средств, содержащих глюкокортикоид и антибактериальный препарат - софрадекс или дексона. Во второй группе (18 пациентов, 22 глаза) применялись медикаменты, обладающие меньшей антио ки с лите льной активностью: из антибиотиков - лево-мицетин (инсталляции), гентамицин (парабульбарно и инсталляции в возрастной дозировке), из мидриатиков - атропин (инстилляции), цикломед (инсталляции), мезатон (субконъюнктивалыше инъекции), из противовоспалительных препаратов назначали капли дексаметазона. Дексаметазон был применен во второй группе с целью создания равномерных групп, то есть уменьшения разницы в возможном эффекте лечения пациентов, обусловленном фармакологической активностью препарата и не связанной с АО свойствами.

Оценивали динамику клинической картины и изучали состояние процессов генерации АФК в СЖ. В начале лечения значения АОАСЖ находились в пределах 16 - 19 %, в то же время показатели спонтанной светимости осадка превышали нормальные значения приблизительно в 5,5-5,7 раз (р<0,05). На третий -пятый дни лечения в обеих группах отмечалось снижение значений АОАСЖ и увеличение спонтанной светимости осадка, причем эти изменения были выражены в меньшей степени в первой группе пациентов. Вероятно, к этому времени развивается максимальный дисбаланс процессов оксидации, возможно связанный с истощением эндогенного пула антиоксидантов и нарастающей активацией воспалительных процессов, сопровождаемых генерацией АФК.

Дальнейшее течение воспалительного процесса в обеих группах было различным. У пациентов 1-й группы под действием противовоспалительного лечения препаратами с более высокой АО активностью наблюдалась быстрая положительная динамика клинической картины. В среднем к 15 дню регистрировалось постепенное повышение значений АОАСЖ и уменьшение спонтанного свечения, причем в первой группе эти показатели приближались к значениям нормы раньше, чем во второй группе. В целом, уровень генерации АФК при лечении препаратами с АО свойствами был меньше, чем в группе сравнения.

Выраженность клинических признаков воспаления в первой группе-па-

циентов также уменьшалась быстрее, чем во второй группе. Инъекция сосудов глазного яблока уменьшалась в первой группе пациентов в среднем в 1,3 раза быстрее, чем во второй группе (р<0,05). Резорбция роговичных преципитатов в первой группе наступала на 13,5=1,18 день, во второй - на 16,2+0,5 дня. Исчезновение фибрина и опалесценции во влаге передней камеры в первой группе происходило в 1,2 раза быстрее в сравнении с пациентами второй группы (р<0,05). Уменьшение помутнения стекловидного тела в первой группе наступало на 12,9±0,5 день, во второй - на 15,8+0,4 дня.

Для оценки эффективности проведенного лечения пациентов изуч ались функциональные результаты и Осложнения в обеих группах. Острота зрения при выписке составляла 0,67+0, ] I в первой и 0,59+0,17 во второй группах. Офталь-могонус нормализовался в обеих группах к моменту купирования воспалительного процесса.

Из осложнений синехиеобразование отмечалось в первой группе у 2 пациентов (3 глаза), во второй - у 4 пациентов (4 глаза). Осложненная катаракта в течение периода наблюдения развивалась у '3 пациентов (3 глаза) в первой и у 7 больных (7 глаз) во второй группе, помутнение стекловидного тела в первой группе регистрировалось у 3 больных (3 глаза), во второй - у 5 пациентов (6 глаз). Во второй группе у 4 больных (4 глаза) был диагностирован отек макулы, вызывавший существенное снижение остроты зрения до 0,11+0,09.

Сроки выписки из стационара в первой группе варьировали от 12 до 17 дней, составляя в среднем 13,3+1,05 дней, во второй группе пациенты выписывались из стационара на 16-20 день, в среднем на 17,1+1,20 день. В итоге у пациентов первой группы сроки купирования увеита сократились в среднем в 1,3 раза (р<0,05).

В отдаленные сроки наблюдения (от 3 до 11 мес.) у 5 больных (5 глаз) отмечался рецидив увеита, связанный с обострением основного системного заболевания (ревматоидный артрит), у 5 (5 глаз) прогрессировала катаракта, у 2 (2 глаза) развивался фиброз стекловидного тела. У четырех из этих пациентов при выписке из стационара при отсутствии клинических признаков активного уве-ального процесса, отмечалось снижение АОАСЖ на 10-15 % при нормальных показателях спонтанной светимости осадка СЖ.

Для выяснения характера взаимосвязи значений ХЛ СЖ с клиническими показателями активности увеита был проведен корреляционный анализ. Рассчитывали коэффициент ранговой корреляции Спирмена. Уровень значимости а принимали равным 0,05. Коэффициент корреляции между величиной АОАСЖ, спонтанной светимостью осадка и выраженностью инъекции конъюнктивы составил -0,62 (р<0,05) и +0,78 (р<0,01) соответственно, наличием роговичных преципитатов -0,46 (р<0,01) и +0,35 (р<0,01), выраженностью опалесценции камерной влаги -0,54 (р<0,01) и +0,42 (р<0,01), степенью помутнения стекловидного тела:-0,38 (р<0,05) и +0,27 (р<0,05) соответственно. Вычисленные коэффициенты ранговой корреляции были больше критических значений (при достоверности корреляции р<0,01, р<0,05), то есть анализируемые выборки клинических признаков и показателей ХЛ связаны довольно тесно. Обратная корреляционная связь значений АОАСЖ и прямая корреляция показателей спонтанной светимо-

сти осадка СЖ указывает на то, что чем интенсивнее выражены симптомы воспаления, тем более заметны нарушения процессов генерации АФК. Все вышеизложенное позволяет заключить, что имеется связь между показателями клинической активности увеита и значениями ХЛ СЖ.

Особый интерес представляло изучение взаимосвязи АОАСЖ и спонтанного свечения осадка СЖ. Коэффициент корреляции г5 между этими двумя показателями варьировал в зависимости от активности увеита в широких пределах - от -0,23 до -0,69 (при уровне значимости а 0,05 и соответственно расчетных значениях г5 0,64), однако достоверность корреляции находилась в пределах р<0,01 до р>0,05. Следовательно, оба значения - как АОАСЖ, так и показатель спонтанной светимости осадка СЖ, являлись самостоятельными факторами, определяющими уровень генерации АФК в СЖ.

Подходы к патогенетическому лечению увеитов с учетом роли СРО.

На основе обобщения данных литературы и результатов собственных исследований можно прийти к выводу, что АФК играют чрезвычайно важную роль в патогенезе таких воспалительных заболеваний глаз, как увеиты. С практической точки зрения, учитывая, что при увеитах происходит ускорение процессов СРО, в частности за счет повышенной генерации АФК, показано применение антиоксидантотерапии, на что указывают подавляющее большинство исследователей. АО способны оказывать циггопротективное действие и прерывать патологический каскад радикально-опосредованных реакций, способствующих поддержанию и прогрессированию воспалительного процесса. Кроме того, известно, что АФК определяют защитные микробицидные свойства фагоцитов, а также играют роль в поддержании определенного уровня клеточной пролиферации, дифференцировки и апоптоза. АФК обладают рядом регуляторных свойств, стимулируя накопление циклических нуклеотидов, процессы фосфорилирования белков, экспрессии генов. Однако, при патологии, когда происходит избыточная генерация АФК, кроме разрушения генетически чужеродных структур, происходит повреждение молекулярных компонентов собственных клеток. Поэтому баланс процессов оксидации важен как в норме, так и, особенно, при патологии.

Избыточная пероксидация при увеитах, связанная как с ускорением ПОЛ, так и с генерацией АФК при фагоцитозе, способна вызывать дополнительное повреждение увеального тракта, сетчатки, хрусталика, стекловидного тела с развитием клинически значимых проявлений в виде снижения зрения. В то же время, чрезмерное подавление образования АФК, обладающих бактерицидными свойствами, может способствовать персистенции инфекции и хронизации процесса.

Учитывая саногенетическое значение СРО, следует дифференцировано использовать антиоксиданты. Для этого, во-первых, необходимо определять состояние свободнорадикального статуса и при наличии дисбаланса процессов окисления проводить коррекцию генерации СР. Во-вторых, необходимо учитывать влияние уже применяемых медикаментов на течение окислительных реакций. И в зависимости от величины нарушения оксидативного статуса дифференцировано применять медикаменты с большим или меньшим влиянием на течение

реакций СРО.

Таким образом, на основании данных проведенных экспериментальных и клинических ,исследований и литературных сведений, были сформулированы новые подходы к патогенетическому лечению увеитов с учетом роли АФК, заключающиеся в обоснованном, дифференцированном применении препаратов с АО активностью в зависимости от состояния генерации АФК. При этом необходимо контролировать эффективность проводимой терапии, изучая в динамике процессы СРО.

ВЫВОДЫ

1. Разработан и апробирован в клинических условиях комплексный подход к изучению процессов свободнорадикального окисления в слезной жидкости, (зснованный на регистрации спонтанного люминол-зависимого свечения осадка и определения антиокислительной активности супернатанта слезной жидкости в модельной системе.

2. С помощью разработанного метода комплексного анализа процессов радика-лообразования установлено, что в норме супернатант слезной жидкости обладает высокой антиокислительной активностью (более 50 %) и низкими значениями спонтанной светимости осадка (менее 1,84±0,11 у.е.). При воспалительных заболеваниях глаза происходит снижение • антиокислительнь» свойств супернатанта и повышение показателей спонтанной светимостт осадка слезной жидкости.

3. При увеитах обнаружено снижение значений суммарной антиокислительнот активности супернатанта и повышение величины спонтанной светимост! осадка, что говорит об ускорении процессов генерации активных форм ки слорода. Показатели хемилюминесценции слезной жидкости находятся 1

, корреляционной зависимости от выраженности клинических признаков вое паления и отражают степень активности увеита. Значения спонтанной свети мости осадка и антиокислительной активности супернатанта слезной жидко сти изменяются в процессе лечения увеита и могут служить объективным] критериями контроля за лечением.

4. Установлено, что препараты, традиционно применяемые в лечении увеитоЕ способны влиять на процессы свободнорадикального окисления. В модель ных системах, генерирующих активные формы кислорода, по убывающе, антиокислительной активности медикаменты располагаются следующим об разом: сульфацил-натрия, ципромед, тропикамид, софрадекс, нормакс, дек сона, цикломед, гентамицина сульфат, диклоф, мезатрн, дексаметазон, атрс пина сульфат^ предниз'олон, гидрокортизон, левомицетин.

5. В модельной системе, где протекают процессы перекисного окисления лига дов, препараты Проявили различные свойства. Проокислительная активное!

.. ., . обнаружена у цикломеда' и в меньшей 'Степени у гидрокортизона. Мак« мальными антиокислительнымй свойствами обладал софрадекс^ затем г убывающей - ципромед, нормакс, гентамицина сульфат, сульфашш-натри преднизолон, дексона, тропикамид, дексаметазон, диклоф, мезатон, атропш

~ сульфат^лёвомицетин.! < »ч . -

Применение лекарственных препаратов с учетом их антиокислительной активности и. состояния генерации активных форм кислорода позволило повысить эффективность й сократить сроки лечения.

'. Определены новые подходы к патогенетическому лечению увеитов с учетом роли активных форм кислорода, заключающиеся в обоснованном, дифференцированном применении препаратов с антиокислительной активностью в зависимости от состояния процессов свободнорадикального окисления.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

Разработанный комплексный метод хемилюминесцентного исследования процессов генерации активных форм кислорода в слезной жидкости, основанный на раздельном исследовании фракций слезной жидкости, полученных центрифугированием, рекомендуется применять для изучения нарушений процессов свободнорадикального окисления в клинической офтальмологии.

I. Для изучения влияния лекарственных препаратов на процессы свободнорадикального окисления, рекомендуется исследовать хемилюминесцентным методом антиокислительную активность медикаментов в модельных системах, где происходит генерация активных форм кислорода и процессы пере-кисного окисления липидов.

3. Для объективного определения активности увеального воспаления рекомендуется применять комплексную оценку генерации активных форм кислорода в слезной жидкости. При значениях светимости осадка более 8,75+0,42 условных единиц и..суммарной антиокислигельной активности супернатанта менее 25.%'воспалительный процесс расценивается как активный, при значениях сйетимости' осадка 8,75+0,42 - 1,84±0,11 условных единиц и суммар-

• ной антиокислигельной активности супернатанта 25 - 50 % воспалительный процесс определяется как субактивный, при значениях светимости осадка " 1,84±0/11 и менее1 условных единиц и суммарной антиокислительной активности супернатанта' 50 % и более воспалительный процесс расценивается как неактивный.

4. Разработанный метод позволяет оценивать эффективность проводимого лечения и' коррекции нарушений , свободнорадикального статуса по показателям спонтанной хемилюминесценции осадка и величине .антиокислительной активности супернатанта слезной жидкости.

5. Рекомендуется дифференцированный подход к применению препаратов, оказывающих влияние на течение реакций свободнорадикального окисления в зависимости от состояния генерации активных форм кислорода в слезной жидкости при увеитах и антиокислительных свойств медикаментов.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Суммарный антиоксвдантный потенциал слезы - интегральный показатель состояния процессов оксидации в тканях глаза // Юбилейная научная конференция, посвященная 80-летию профессора В.В. Волкова "Офтальмология на рубеже веков". 25-26 июня 2001 г. - Санкт - Петербург. - С. 385. (соавт.: P.P. ФарХуТДИНОВ).

2. Хемилюминесценция слезной жидкости - новый метод исследования сво-боднорадикалышх процессов при офтальмопатологии // Материалы 1-го Международного конгресса "Новые медицинские технологии". - Санкт-Петербург, 2001. - С. 79-80 (соавт.: Р.Р, Фархутдинов, Б.М. Азнабаев).

3. Суммарный антиоксвдантный потенциал слезной жидкости при увеитах // Национальная научно-практическая конференция с международным участием "Свободные радикалы, антиоксиданты и болезни человека". Смоленск, Россия. 19-22 сентября 2001 г. Сборник трудов. С. 261-263 (соавт.: P.P. Фар-хутдинов).

4. Хемилюминесценция слезы - перспективный метод изучения свободноради-кальных процессов в клинической офтальмологии // Национальная научно-практическая конференция с международным участием "Свободные радикалы, антиоксиданты и болезни человека". Смоленск, Россия. 19-22 сентября 2001 г. Сборник трудов. С. 18-19 (соавт.: P.P. Фархутданов).

5. Влияние мидриатиков на процессы свободнорадикального окисления in vitro // Новые технологии микрохирургии глаза/ Материалы XII научно-практической .конференции. - Оренбург: ИНК "Газпромпечать" ООО "Орен-бурггазпромсервис", 2001. - С. 304-310 (соавт.: P.P. Фархутдинов).

6. Состояние генерации активных форм кислорода в слезной жидкости в норме и при офтальмопатологии // Новые технологии микрохирургии глаза/ Мате-.риалы ХП научно-практической конференции. - Оренбург: ИПК "Газпромпечать" ООО "Оренбурггазпромсервис", 2001. - С. 310-316 (соавт.: P.P. Фархутдинов).

7. Процессы радикалообразования в слезной жидкости при увеитах // Материалы IX научно-практической конференции Екатеринбургского Центра МНТК "Микрохирургия глаза", - Екатеринбург, 2001. - С. 175-178 (соавт.: P.P. Фархутдинов).

8. Антиокислительная активность антибактериальных глазных капель Н Материалы IX научно-практической конференции Екатеринбургского Центра МНТК "Микрохирургия глаза". - Екатеринбург, 2001. - С. 170-174 (соавт.: P.P. Фархутдинов).,-

9. Способ определения активности воспалительного процесса у больных увеи-тами. Заявка о выдаче патента Российской Федерации К» 2001118897 от 20 июля2001 г. (соавт.: P.P. Фархутдинов, А.Ж. Жуманиязов).

СЕМЕСЬКО СЕРГЕЙ ГЕННАДЬЕВИЧ

ОБОСНОВАНИЕ ПАТОГЕНЕТИЧЕСКИХ ПОДХОДОВ К МЕДИКАМЕНТОЗНОМУ ЛЕЧЕНИЮ УВЕИТОВ С УЧЕТОМ СОСТОЯНИЯ СВОБОДНОРАДИКАЛЬНОГО ОКИСЛЕНИЯ

14.00.08 - глазные болезни 14.00.16 - патологическая физиология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Челябинск - 2002

Подписано в печать 05.02.2002 г. Формат 60x84/16. Бумага ксероксная. Компьютерный набор. Усл.печ.л. 1,05. Отпечатано на ризографе. Тираж 100 экз. Заказ № 2005. Лицензия № Б 848395 от 06.10.2000 г., per. № 228. КМЦ, ГУП МАУ, 450056, г. Уфа, Аэропорт-56. Тел. (3472) 14-34-71.