Автореферат и диссертация по медицине (14.03.06) на тему:Обоснование направлений в разработке и экспериментальном изучении новых фармакологических препаратов на основе пробиотиков и их биологически активных продуктов

На правах рукописи

Забокрицкий Николай Александрович

ОБОСНОВАНИЕ НАПРАВЛЕНИЙ В РАЗРАБОТКЕ И ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОМ ИЗУЧЕНИИ НОВЫХ ФАРМАКОЛОГИЧЕСКИХ ПРЕПАРАТОВ НА ОСНОВЕ ПРОБИОТИКОВ И ИХ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ПРОДУКТОВ

14.03.06 - Фармакология, клиническая фармакология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук

24 АПР 2014

Челябинск - 2014

005547677

005547677

Работа выполнена на кафедре фармакологии и клинической фармакологии Государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального образования "Уральский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации

Научный консультант:

доктор медицинских наук, профессор

Ларионов Леонид Петрович

Официальные оппоненты:

Шабанов Пётр Дмитриевич доктор медицинских наук, профессор. ФГКВОУ ВПО "Военно-медицинская академия имени С. М. Кирова" Министерства обороны Российской Федерации, кафедра фармакологии, заведующий

Зиганшин Айрат Усмановнч доктор медицинских наук, профессор, ГБОУ ВПО "Казанский государственный медицинский университет" Минздрава России, кафедра фармакологии фармацевтического факультета с курсом фармакогнозии и ботаники, заведующий

Несчисляев Валерий Александрович доктор медицинский наук, ФГУП НПО "Микроген" Минздрава России в г. Перми "Пермское НПО "Биомед", ведущий научный сотрудник, начальник отделения препаратов для бактериотерапии

Ведущая организация: Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Смоленская государственная медицинская академия" Министерства здравоохранения Российской Федерации.

Защита состоится «_»_ 2014 г. в _ часов на заседании

диссертационного совета Д 208.117.03 при Государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования "ЮжноУральский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации по адресу: 454092. г. Челябинск, ул. Воровского, 64.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального образования "Южно-Уральский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации.

Автореферат разослан «_»__2014

года.

Ученый секретарь диссертационного совета, доктор медицинских наук

Шишкова Ю.С.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы исследования и степень ее разработанности

В настоящее время в Российской Федерации наблюдаются существенные изменения в окружающей среде обитания. Нарастают неблагоприятные факторы (как экологические, так и социальные), ухудшаются условия жизни отдельных групп населения (особенно в регионах и сельской местности), качество атмосферного воздуха, продуктов питания, питьевой воды. Обеспеченность и доступность современными эффективными и безопасными лекарственными средствами достигли такого уровня, что это стало серьезно влиять на состояние здоровья населения страны, уровень заболеваемости и эпидемическую ситуацию по ряду инфекций (Гарбузов Г.А. Дисбактериоз: лечение и профилактика без лекарств. СПб.: Изд-во "Питер", 2012. 224 е.; Ивушкина Л.И. и соавт. Грамотрицательная условно-патогенная микрофлора - этиологический агент вторичной инфекции у больных туберкулезом легких. Антибиотики и химиотерапия. 2006. Т.51, №1. С.11-13; Онищенко Г.Г. Санитарно-эпидемиологическая обстановка. Режим доступа: http://rospotrebnadzor.ru/ epidemiologic_situation/6114/. html.; Melstrom K.A.J, et al. New perspectives for a new century : implications of pathogen responses for the future of antimicrobial therapy. J. Burn. Care. Res. 2006. Vol.27, №3. P.251-264).

По данным различных источников существенно увеличилась не только общая инфекционная заболеваемость, но и количество инфекций, отличающихся вялотекущим, рецидивирующим и хроническим течением. Возросло и число инфекционных поражений, вызываемых условно-патогенными возбудителями (Онищенко Г.Г. О состоянии заболеваемости внутрибольничными инфекционными болезнями. Стерилизация и госпитальные инфекции. 2006, №1. С.5-7; Rodryguez-Bano J. et al. Clinical and Molecular Epidemiology of Extended-Spectrum p-Lactamase-Producing Escherichia coli as a Cause of Nosocomial infection or Colonization : Implications for Control. Clin. Infect. Dis. 2006. Vol. 42. P.37-45). Значительное внимание уделяется изучению различных видов таких микроорганизмов, их этиологической и патогенетической роли в возникновении тех или иных патологических состояний (Акимкин В.Г. Актуальные вопросы эпидемиологии внутрибольничных инфекций. М.: ММА им. И.М. Сеченова, 2000. 34 е.).

В настоящее время все большую значимость приобретает проблема борьбы с воспалительными и гнойными заболеваниями кожных покровов и слизистых. По данным ряда авторов неудовлетворительные результаты лечения таких поражений существенно возросли (Nordmann P. et al. Emergence of plasmid-mediated resistance to quinolones Emergence of plasmid-mediated resistance to quinolones in Enterobacteriaceae. J. Antimicrob. Chemother. 2005. Vol. 56. P.463-469; Phaff S.J. et al. Macrolide resistance of Staphylococcus aureus and Haemophilus species associated with long-term azithromycin use in cystic fibrosis Macrolide resistance of Staphylococcus aureus and Haemophilus species associated with long-term azithromycin use in cystic fibrosis. J. Antimicrob.

Chemother. 2006. Vol.57. P.741-746; Piddock L.J. Clinically relevant chromosomally encoded multidrug resistance efflux pumps in bacteria. Clin. Microbiol. Rev. 2006. Vol.19, №2. P.3 82-402).

Данные о заболеваемости людей пародонтитом и пародонтозом (более чем 95 и 80 % взрослого населения соответственно) хорошо известны. В настоящее время можно сказать, что это два наиболее распространенных в мире заболевания. Лечение их, как правило, комплексное, достаточно сложное, длительное и в целом дорогостоящее. Предлагаемые лекарственные и профилактические средства недостаточно эффективны (Грудянов А.И. и соавт. Применение пробиотиков в комплексном лечении воспалительных заболеваний пародонта. М: МИА, 2006. 112 е.; Матисова Е.В. Колонизация условно-патогенными микроорганизмами слизистой оболочки полости рта при хроническом пародонтите : дис... канд. мед. наук. Волгоград, 2010. 146 е.).

На фоне роста заболеваемости населения РФ особую тревогу вызывает снижение показателей женского здоровья. Так, количество женщин, страдающих бесплодием, составляет около 20%, а нарушения нормального состава вагинальной микрофлоры отмечается более чем в 70% всех наблюдаемых случаев. Сформировавшиеся дисбиотические явления поддерживают патологические процессы в органах малого таза, препятствуют наступлению беременности, создают реальную угрозу осложнений у матери и ребенка (Анкирская A.C. и соавт. Мониторинг видового состава и чувствительности к антимикотикам дрожжеподобных грибов, выделенных из влагалища женщин репродуктивного возраста. Клиническая микробиология и антимикробная химиотерапия. 2006. Т.8, №1. С.87-95; Инфекции в акушерстве и гинекологии. Под ред. О.В. Макаровой, В.А. Алешкиной, Т.Н. Савченко. М.: МЕДпресс-информ, 2007. 464 е.).

Увеличивается количество больных вирусными гепатитами, а также гепатитами токсической, алкогольной и лекарственной этиологии. Они являются этиологической причиной более 50% случаев циррозов печени. Ежегодно в мире регистрируется более 500 млн. заболевших вирусными гепатитами. В РФ количество больных с циррозом возрастает на 200 тыс. чел. в год. Ежегодное увеличение числа больных гепатобилиарными заболеваниями весьма значительное и составляет от 15 до 30% населения (Гончикова С.Н. и соавт. Дизрегуляция апоптоза гепатоцитов при различных поражениях печени, возможности фитокоррекции. Бюллетень ВСНЦ СО РАМН. 2009. №2 (99). С.236-238; Ивашкин В.Т. О состоянии организации медицинской помощи больным с заболеваниями органов пищеварения в Российской Федерации. Рос. журн. гастроэнтерол. 2004. Т.14, №3. С.4-9; Гепатология : избранные лекции по внутренним болезням : Под ред. A.C. Празднова. Челябинск: ЧелГМА, 2002. №8. 146 с.).

Приведенные факты, с учетом потенциальной опасности постоянного их нарастания, охвата все большего количества, в первую очередь, трудоспособного

населения РФ, можно без преувеличения отнести не только к широкораспространенным, но и к социально-значимым заболеваниям со всеми вытекающими отсюда последствиями.

В этой связи целесообразным представлялось использование для лечения различных заболеваний пробиотических препаратов, которые в настоящее время считаются наиболее адекватными и эффективными профилактическими и лекарственными средствами (Осипова И.Г. Экспериментально-клиническое изучение споровых пробиотиков : дис... д-ра биол. наук. М„ 2006. 283 е.; Сорокулова И.Б. Теоретическое обоснование и практика применения бактерий рода Bacillus для конструирования новых пробиотиков : автореф. дис... д-ра биол. наук. Киев, 1999. 32 е.; Шендеров Б.А. Медицинская микробная экология и функциональное питание : пробиотики и функциональное питание. М.: Гранть, 2001. T.III. 288 е.).

Таким образом, наши усилия были сосредоточены на разработке современных (в том числе и новых видов) фармацевтических препаратов для использования в практической медицине по таким направлениям, как: травматические и инфекционные поражения кожных покровов; воспалительные заболевания тканей и органов полости рта (хронический генерализованный пародонтит); бактериальный вагиноз; токсические поражения гепатобилиарной системы.

Цель исследования

Целью настоящей работы было проведение экспериментальных исследований по обоснованию актуальных направлений разработки, получению и изучению новых фармакологических препаратов на основе пробиотических микроорганизмов и их биологически активных метаболитов, определению путей их практического применения для лечения таких значимых заболеваний, как инфекционные и травматические поражения кожных покровов, хронический генерализованный пародонтит, бактериальный вагиноз и острый токсический гепатит.

Задачи исследования

1. Провести исследования по обоснованию разработки экспериментальных образцов новых медицинских препаратов и их использования для лечения: в терапии - острого токсического гепатита, в хирургии - инфекционных и травматических поражений кожных покровов, в стоматологии - хронического генерализованного пародонтита, в гинекологии - бактериального вагиноза.

2. Сконструировать экспериментальные образцы фармакологических пробиотических препаратов в мягкой (бацилакт) и жидкой (дентозар, фемивит, гепатобиол) лекарственных формах.

3. Провести на различных видах лабораторных животных доклинические испытания созданных экспериментальных образцов пробиотических препаратов и обосновать рекомендации по их практическому применению.

4. На экспериментальных моделях изучить основные механизмы действия разработанных образцов пробиотиков.

5. Разработать проекты нормативных документов, необходимых для реализации и внедрения результатов выполненной работы.

Методология и методы исследования

Работа выполнена в 2007-2012 гг. на кафедре фармакологии и клинической фармакологии в соответствии с планами НИР ГБОУ ВПО "Уральский государственный медицинский университет" Минздрава России. Иммунофармаколо-гические исследования проведены в Институте иммунофизиологии и иммунофарма-кологии УрО РАН (г. Екатеринбург).

На начальном этапе исследований были изучены по своим родовым и видовым характеристикам различные пробиотические микроорганизмы, по комплексу предложенных нами объективных критериев выбраны наиболее оптимальные штаммы, на основе которых в последующем были сконструированы экспериментальные образцы пробиотиков, изучены в доклинических исследованиях на адекватных экспериментальных моделях их безопасность и фармакологическая активность. Терапевтическая эффективность разработанных пробиотических препаратов дентозар и фемивит была также изучена в пилотных клинических экспресс-исследованиях.

Для решения поставленных задач автором использован комплекс современных методов, включающих методы индикации и идентификации микроорганизмов, изучения их биохимических и антагонистических свойств, высокоэффективной жидкостной хроматографии, иммуноферментного анализа, оценки терапевтической эффективности препаратов на различных экспериментальных моделях, в том числе и на клеточных культурах. В работе было задействовано 1755 лабораторных животных.

Степень достоверности, апробация результатов, личное участие автора

Достоверность результатов работы, обоснованность выводов и рекомендаций базируется на достаточном числе наблюдений и использовании современных методов статистической обработки материалов исследования, при консультативном участии специалистов в области математического анализа, с использованием пакетов компьютерных программ Microsoft Office Excel 2007 и "Statistica 6.0".

Материалы диссертации доложены и обсуждены на: 62-й, 64-й, 65-й, 68-й межвузовских научно-практических конференциях «Актуальные вопросы современной медицинской науки и здравоохранения» (Екатеринбург, 2007, 2009, 2010, 2013); III Съезде Фармакологов России (Санкт-Петербург, 2007); VI Всероссийском научном семинаре с молодежной научной школой (Уфа, 2007); Российской научно-практической конференции, посвященной 70-летию ПГФА (Пермь, 2007); ежегодной Российской научно-практической конференции "Фармация и общественное здоровье" с международным участием (Екатеринбург, 2008, 2009, 2010, 2011, 2012); научно-практической конференции "Высокие технологии и инновации - российской экономике" (Екатеринбург, 2008); третьей межрегиональной

специализированной Выставке-конференции "Национальный проект - здоровье" (Екатеринбург, 2008); the International conference Pharmacology (Harbin, China, 2008); VII Международном конгрессе "Доказательная медицина - основа современного здравоохранения" (Хабаровск, 2008); II Международной научно-практической конференции "Адаптация биологических систем к естественным и экстремальным факторам среды" (Челябинск, 2008); Российской научно-практической конференции ПГФА, проводимой в рамках 14-ой международной выставки "Медицина и здоровье" (Пермь, 2008); научно-практической конференции с международным участием "Достижения клинической фармакологии в России" (Москва, 2009); Всероссийской научно-практической конференции "Актуальные проблемы фармацевтической науки и практики" (Владикавказ, 2009); XI, XII, XIII, XIV, XV международных конгрессах «Здоровье и образование в XXI веке» (Москва, 2009, 2010, 2011, 2012, 2013); межрегиональной научно-практической конференции "Актуальные вопросы современной физиологии и медицины" (Ижевск, 2010); IV Съезде фармакологов России "Инновации в современной фармакологии" (Казань, 2012); Евразийском Конгрессе с международным участием "Медицина, фармация и общественное здоровье" (Екатеринбург, 2013); VIII Всероссийской конференции с международным участием "Иммунологические чтения в г. Челябинске" (Челябинск, 2013); Всероссийской конференции с международным участием "Современные проблемы биохимии и биотехнологии" (Уфа, 2013).

Результаты настоящей диссертационной работы доложены и обсуждены в ГБОУ ВПО "Уральский государственный медицинский университет" Минздрава России на межкафедральном заседании, протокол №12 от 21.06.2013 г. и проблемной комиссии по фармакологии и фармации протокол №14 от 25.06.2013 г.

Личное участие автора в выполнении исследований, результаты которых изложены в данной научно-квалификационной работе, заключались в следующем; теоретические исследования выполнены автором лично в полном объеме; автором обоснованы основная идея работы, ее цели, конкретные задачи и методология выполнения экспериментальных исследований; автор непосредственно осуществлял организацию, планирование, выполнение более 95% всего объема работ, анализ и обобщение полученных результатов; лично автором впервые предложены к использованию моно-, бикомпонентные метаболические и комбинированные пробиотики в качестве новых фармакологических препаратов; выбраны перспективные штаммы микроорганизмов и их биологически активных веществ; обоснован комплекс критериев и экспериментальные модели для оценки свойств пробиотиков, проведена оценка терапевтической эффективности полученных образцов. Автором сформулированы основные положения, выносимые на защиту, заключение, выводы и предложения по практическому применению полученных результатов.

В работе использованы материалы, полученные лично автором, а также в соавторстве со специалистами Уральского государственного медицинского университета, Института иммунологии и физиологии УрО РАН, Ижевской государственной медицинской академии и других организаций.

Положения, выносимые на защиту

1. Экспериментальные образцы пробиотика бацилакт, на основе гелевых форм транскутанных проводников (тизоль, эфтидерм, кремнийтитанорганический глицерогидрогель), метаболических препаратов дентозар и фемивит, а также комбинированный препарат гепатобиол являются новыми эффективными лекарственными средствами.

2. Лечебный эффект предлагаемых экспериментальных препаратов обеспечивается высокой биохимической и антагонистической активностью пробиотических бактерий в отношении различных видов условно-патогенных (патогенных) возбудителей инфекционных заболеваний; комплексом, продуцируемых ими биологически активных веществ и выраженными иммуномодулирующими свойствами.

3. Разработанные и изученные экспериментальные образцы пробиотических препаратов могут быть рекомендованы как самостоятельно (монотерапия), так и для включения в комплексную систему лечения больных с такими широко распространенными и социально-значимыми заболеваниями, как инфекционные и травматические повреждения кожных покровов, хронический генерализованный пародонтит, бактериальный вагиноз, токсические поражения гепатобилиарной системы.

4. Внедрение разработанных пробиотиков в различных лекарственных формах существенно расширит фармацевтический рынок Российской Федерации, наполнит его новыми эффективными, доступными и недорогими фармакологическими препаратами, позволит значительно снизить зависимость практической медицины от использования антибиотиков и других противомикробных препаратов.

Научная новизна

Критериям научной новизны соответствует вся совокупность результатов проведенных теоретических и экспериментальных исследований. Обоснованы современные направления в исследованиях новых фармакологических препаратов и по их результатам сконструированы и испытаны шесть экспериментальных образцов пробиотиков. Изучены основные механизмы действия полученных пробиотических препаратов.

Впервые созданы препараты нового поколения: моно- и бикомпонентные метаболические (дентозар и фемивит), а также комбинированные (гепатобиол) пробиотики, состав которых представлен как живыми пробиотическими клетками, так и их биологически активными продуктами.

На основании данных лабораторных и доклинических исследований впервые показана терапевтическая эффективность разработанных экспериментальных образцов пробиотических препаратов для лечения ряда широкораспространенных и социально-значимых заболеваний человека: травматических повреждений кожных покровов, осложненных гнойно-воспалительными процессами; хронического генерализованного пародонтита, бактериального вагиноза, острого токсического гепатита.

Обоснованы рекомендации для клинических испытаний в современном практическом здравоохранении предлагаемых новых образцов фармакологических пробиотических препаратов.

Теоретическая и практическая значимость работы

Теоретический вклад в экспериментальную фармакологию состоит в обосновании и реализации новых принципов в конструировании пробиотических препаратов на основе не только живых микроорганизмов, но и метаболических продуктов бактериального синтеза.

Расширены и дополнены критерии выбора микроорганизмов и биологически активных веществ (БАВ), которые целесообразно использовать для создания новых пробиотиков.

На экспериментальных моделях изучен ряд механизмов взаимодействия макроорганизма и пробиотических микроорганизмов, входящих в состав разрабатываемых пробиотических препаратов.

Теоретический вклад в клиническую микробиологию состоит в том, что изучены некоторые особенности циркуляции условно-патогенной микрофлоры при таких дисбиотических и патологических состояниях, как раневые инфекции кожных покровов, бактериальный вагиноз, хронический генерализованный пародонтит, а также динамика их изменений при применении экспериментальных пробиотических препаратов. Впервые установлено наличие гепатопротекторного действия у пробиотических микроорганизмов и их метаболитов.

По результатам выполненных исследований разработаны:

экспериментальные образцы мягкой лекарственной формы препарата бацилакт на основе трех современных транскутанных проводников: кремнийтитанорганичес-кого глицерогидрогеля, тизоля и эфтидерма для лечения травматических и инфекционных поражений кожных покровов;

экспериментальный образец лечебно-профилактического средства монокомпонентного метаболического пробиотика дентозар для коррекции микрофлоры и лечения воспалительных заболеваний ротовой полости;

экспериментальный образец бикомпонентного метаболического пробиотика фемивит для восстановления нормальной вагинальной микрофлоры и лечения бактериального вагиноза;

экспериментальный образец комбинированного пробиотического препарата гепатобиол для лечения и профилактики острых и хронических токсических поражений печени;

проекты фармакопейных статей на каждый препарат;

технические условия на предлагаемые препараты;

сборник инструкций по поддержанию в активном и жизнеспособном состоянии пробиотических микроорганизмов, являющихся основой для получения пробиотиков;

технологические инструкции по производству и применению новых пробиотиков.

Все разработанные образцы новых пробиотических препаратов защищены патентами РФ.

Внедрение результатов исследования в практику

Выполнен комплекс экспериментальных исследований разработанных препаратов, который оформлен в виде "Отчетов о доклинических испытаниях". Полученные положительные результаты этих испытаний объективно подтверждают перспективность и необходимость проведения их дальнейших (клинических) испытаний, целесообразность доведения предлагаемых экспериментальных образцов препаратов до фармакопейных лекарственных форм и внедрения их в практическую медицину по следующим направлениям: хирургия, терапия, инфекционные болезни, дерматология, гинекология, стоматология.

Результаты исследований внедрены: в учебный процесс для студентов фармацевтического, лечебно-профилактического, педиатрического, медико-профилактического и стоматологического факультетов ГБОУ ВПО "Уральский государственный медицинский университет" Минздрава России; в научно-исследовательскую деятельность ГБОУ ВПО "Уральский государственный медицинский университет" Минздрава России, по направлению "Микробиологическая фармакология", Института иммунологии и физиологии УрО РАН по направлению "Иммунофармакология", Института органического синтеза им. И.Я. Постовского УрО РАН, ФГБУ "Уральский научно-исследовательский институт травматологии и ортопедии им. В.Д. Чаклина" Минздрава России; в научно-производственную деятельность ООО "Научно-производственное объединение "УралБиоСинтез", ООО "Пробиотикфарминвест", ООО "Дентозар", ООО "НПЦУ "Медик".

Публикации

Соискатель имеет 160 опубликованных работы, из них по теме диссертации опубликовано 63 научные работы общим объемом 15,00 печатных листа, в том числе 20 статей в научных журналах и изданиях, которые включены в перечень российских рецензируемых научных журналов и изданий для опубликования основных научных результатов диссертации, а также 1 работа в зарубежном научном издании.

Соискателю выдано 9 патентов РФ на изобретения. 33 работы опубликованы в материалах всероссийских и международных конференций и симпозиумов.

Объем и структура диссертации

Диссертация изложена на 488 страницах машинописного текста, иллюстрирована 85 таблицами и 62 рисунками. Работа состоит из введения, обзора литературы, пяти глав собственных исследований, обсуждения их результатов, выводов, практических рекомендаций. Список литературы состоит из 601 отечественного и 199 зарубежных источников.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материалы и методы исследования

Работа выполнена в период с 2005 по 2013 гг. Исследования проводили на кафедре фармакологии и клинической фармакологии ГБОУ ВПО «Уральский государственный медицинский университет» Минздрава России, а также в Институте иммунологии и физиологии УрО РАН, ГБОУ ВПО «Ижевская государственная медицинская академия» Минздрава России, 48 ЦНИИ Микробиологии - Центре ВТП биологической защиты МО РФ, ФГУН «Екатеринбургский научно-исследовательский институт вирусных инфекций» Роспотребнадзора, ООО «НПЦ Уралбиосинтез» (г. Екатеринбург), ООО «Дентозар» (г. Екатеринбург), ООО «Пробиотикфарминвест» (г. Екатеринбург), ООО «Научный центр фармбиотехнологии» (г. Екатеринбург).

Исследования проводили в рамках плана НИР ГБОУ ВПО "Уральский государственный медицинский университет" Минздрава России, № гос. регистрации 01200900294. Тема диссертации утверждена ученым советом университета 12 октября 2007, протокол №3. Работа поддержана грантами программ СТАРТ-08, -09, -11 (2008, 2009, 2011 гг.) Фонда содействия развитию малых форм предприятий в научно-технической сфере, Госконтракты: №5937р/8302; №7966р/10419; №9099р/14842; №9096р/14843. Часть исследований выполнены в рамках проекта Программы Президиума РАН №21 "Фундаментальные науки - медицине" (2009 г.).

Выбор бактериальных микроорганизмов, перспективных для использования их в качестве основы для создания новых пробиотических препаратов, осуществляли по следующим критериям: результатам всестороннего изучения их родовых и видовых характеристик, а также биологических особенностей выбранных штаммов; отсутствию патогенных свойств, безопасности для человека (в комплексных доклинических исследованиях); степени антагонистической активности в отношении различных видов патогенных и условно-патогенных микроорганизмов; уровню биохимических свойств; отсутствию гемолитической активности, выраженности лечебных и протективных свойств пробиотиков, сконструированных с их использованием.

Использовали бактериальные споровые культуры следующих пробиотических штаммов: Bacillus subtilis В-2335; Bacillus subtilis В-4759; Bacillus subtilis B-2895; Bacillus subtilis B-3679; Bacillus subtilis B-9906; Bacillus subtilis B-9909; Lactobacillus plantarum 8P-A3. Все указанные штаммы бацилл депонированы и находятся на

постоянном хранении во Всероссийской Коллекции Промышленных Микроорганизмов (ФГУП ГосНИИГенетика).

Для выращивания штаммов Bacillus subtilis и Lactobacillus plantarum использовали плотную (агаризованную) питательную среду Гаузе 2, мясо-пептонный агар (МПА), мясо-пептонный бульон (МПБ) и капустный агар.

Поддержание штаммов бактерий в жизнеспособном и физиологически активном состоянии, изучение их морфологических, тинкториальных, культуральных свойств проводили в соответствии с существующими рекомендациями и требованиями (Лабинская А.С. Микробиология с техникой микробиологических исследований. М.: Бином, 2012. 394 е.).

Определение антагонистической активности проводили в отношении тест-культур, полученных из музея ФГБУ ГИСК им. Л.А. Тарасевича. Для проведения исследований использовали штаммы тест-культур: Staphylococcus aureus 209Р, Staphylococcus epidermidis АТСС 14990, Candida albicans ИМВ 690, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9024, Salmonella typhimurium 55, Escherichia coli 0157, Streptococcus pyogenes ATCC 19615, Proteus vulgaris 177.

Родовую индикацию и видовую идентификацию проводили используя традиционные микробиологические методы исследований, а также идентификационные наборы МИКРО-ЛА-ТЕСТ и книги кодов СМММ-2 и Микроб-Автомат.

Объектами исследований являлись экспериментальные образцы: бактериального пробиотика (бацилакт), моно- бикомпонентных метаболических пробиотиков (дентозар и фемивит) и комбинированного (бактериального и метаболического) пробиотика гепатобиол.

Конструирование, приготовление, изучение свойств, условий хранения и создаваемых на их основе экспериментальных образцов пробиотических препаратов осуществляли в соответствии с действующими требованиями и рекомендациями, изложенными в источниках литературы, посвященных вопросам биотехнологии (Волков М.Ю. Комбинированный пробиотический препарат "Бактистатин" и его эффективность при желудочно-кишечных болезнях сельскохозяйственных животных : дис... д-ра биол. наук. М., 2006. 418 е.; Несчисляев В.А. Пробиотики: микробиологические и технологические аспекты получения, контроля и конструирования препаратов : дис... д-ра мед. наук. Пермь, 2005. 277 е.; Осипова И.Г. Экспериментальное-клиническое изучение споровых пробиотиков : дис... д-ра биол. наук. М., 2006. 283 е.; Сорокулова И.Б. Перспективы применения бактерий рода Bacillus для конструирования новых биопрепаратов. М., 1996. Т.41, №10. С.13-15).

Биокомпоненты (биомассу) для приготовления различных видов экспериментальных образцов пробиотических препаратов получали путем культивирования на плотных и в жидких питательных средах, а также при глубинном культивировании.

Экспериментальный образец пробиотика бацилакт содержал в своем составе культуры бактериальных клеток Bacillus subtilis В-2335 - 1-Ю6 см'3 КОЕ и Lactobacillus plantarum 8Р-АЗ - 1-Ю6 см"3 КОЕ и гелевые основы - тизоль, эфтидерм, кремнийтитанорганический глицерогидрогель (КТГГ).

В состав экспериментального образца препарата дентозар были включены метаболиты пробиотических бактериальных клеток Bacillus subtilis ВКПМ В-3679, прополис, никотиновая кислота, кальция пантотенат, пиридоксин, ментол, эфирные масла мяты перечной, шалфея, лаванды, а также глицерин.

Комплекс биологически активных веществ получали в лабораторных условиях по имеющимся в настоящее время в научной литературе рекомендациям (Волков М.Ю. и соавт. Метаболиты Bacillus subtilis как новые перспективные пробиотические препараты. Журн. Микробиологии, эпидемиологии, и иммунологии. 2007. №2. С.75-80; Бациллы. Генетика и биотехнология : пер. с англ. : Под. ред. К. Харвуда. М.: Мир, 1992.530 с.).

Метаболиты выделяли из КЖ, находящихся в конце экспоненциальной фазы роста бактериальных клеток Bacillus subtilis штаммов В-3679 и В-9906 при их глубинном культивировании.

Качественное и количественное содержание метаболитов определяли методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Разделение проводили при комнатной температуре с использованием колонки Supelcosil™ LC-18 (250 х 4,6 мм, размер частиц 3Л 5 мкм).

Химический состав выделяемых БАВ в среднем характеризовался следующими показателями: белково-полисахаридный комплекс - 250-300 мг.г"1; (общее количество белка) свободные аминокислоты - 120-140 мг.г"1;. гексозамин - 40-50 мг.г"1; пуриновые и пиримидиновые основания: аденин - 16-17 мг.г"', гуанин - 2-3 мг.г , цитозин - 2-4 мг.г"1, тиамин - 3-5 мг.г"1, урацил - 12-14 мг.г"1; водорастворимые витамины: пиридоксин (В6) - 1,5 мкг.г"1, рибофлавин (В2) - 1,7 мкг.г'1; ферментативный комплекс: активность протеолитических ферментов - 900-950 ед.г" , активность амилолитических ферментов - 1000-1100 ед.г"1; антибиотики и антибиотикоподобные соединения -0,1-0,5%; другие соединения - менее 5%.

Незначительные колебания химического состава зависели в основном от условий культивирования (качества питательных сред) и технологических особенностей выделения БАВ.

Средство интимной гигиены фемивит содержало метаболиты пробиотических клеток сенной палочки, метаболиты пробиотических клеток кисломолочных бактерий, эфирные масла шалфея и лаванды, прополис, бензоат натрия.

Химический состав БАВ, выделенных из культуры Lactobacillus plantarum штамм 8Р-АЗ, характеризовался следующими показателями: белково-полисахаридный комплекс - 100-150 мг.г'1; глюкозамин - 25-30 мг.г'1; свободные

аминокислоты - 160-170 мкг.г'; антибиотики и антибиотикоподобные вещества-0,1-0,3%; другие соединения - менее 5-8%.

Экспериментальный образец препарата гепатобиол содержал в своем составе бактериальные клетки и метаболиты Bacillus subtilis В-9906; глицерин и ароматизатор.

В опытах использовали беспородных белых мышей с массой тела 16-22 г (1190 шт.), белых крыс линии Wistar - 180-220 г (458 шт.), морских свинок - 200-250 г (63 шт.), кроликов - 1500-2000 г (44 шт.). Работу с экспериментальными животными проводили в соответствии с установленными нормативами и правилами.

С целью оценки терапевтической эффективности экспериментальных образцов препаратов у лабораторных животных моделировали различные поражения (локализованную гнойную инфекцию, травматические и термические повреждения, сальмонеллезную инфекцию).

Поражение печени изучали путем моделирования острого токсического гепатита у белых мышей и крыс, а также на культурах эксплантированных гепатоцитов белых крыс. Для исследований использовали культуры, содержащие не менее 90% живых клеток (Seglen P.O. Preparation of isolated rat liver cells. Methods in Cell Biology. Academic Press. 1976. Vol.13. P.29-83). Культивирование гепатоцитов осуществляли в атмосфере с 5% содержанием С02 при 37°С. После инкубации культуру гепатоцитов переносили в свежую среду 199 и использовали в дальнейших исследованиях.

Экспериментальный токсический гепатит моделировали на белых мышах путем однократного введения им внутрибрюшинно 40% раствора (2 мг) четыреххлористого углерода (ССЦ) в вазелиновом масле. Белым крысам с этой же целью вводили внутрижелудочно 40% раствор ССЦ в вазелиновом масле в течение 2-х недель из расчета 0,2 г.кг'1.

Моделирование экспериментальной генерализованной сальмонеллезной инфекции проводили методом заражения лабораторных животных бактериальной культурой Salmonella typhimurium, для чего белым мышам однократно внутрижелудочно вводили ее суточную взвесь в дозе, соответствующей величине одной LD50.

Моделирование гнойной инфекции осуществляли на белых мышах путем внутрикожного введения им суточных бактериальных культур. Заражающая доза составляла 1,5-109 клеток для S. aureus, 3-Ю7 - для St. pyogenes, 5-10 - для Ps. aeruginosa.

Изучение безопасности исследуемых препаратов для лабораторных животных проводили в токсикологических исследованиях. Гистологические исследования органов и тканей лабораторных животных выполняли после фиксации отобранного материала в 10% растворе формалина и последующего приготовления парафиновых срезов, окрашенных гематоксилин-эозином.

Исследование биохимических показателей сыворотки крови проводили по следующим показателям: активности аминотрансфераз (AJ1T, АСТ) и щелочной фосфатазы; количеству общего белка, общего билирубина и мочевины; тимоловой пробе; активности альфа-амилазы.

Для оценки активности клеточных факторов неспецифического иммунитета у экспериментальных животных получали клетки перитонеального экссудата. Метаболическую активность фагоцитов определяли в НСТ-тесте. Исследование фагоцитарной активности нейтрофилов и моноцитов периферической крови, перитонеальных макрофагов осуществляли путем спектрофотометрии клеточной суспензии (КМС) с добавлением соответствующих красителей. Определение количества Т- и В-лимфоцитов периферической крови проводили в реакции розеткообразования с отмытыми эритроцитами барана.

Гуморальный статус у экспериментальных групп животных при оценке терапевтической эффективности испытуемых препаратов оценивали путем исследования количественных показателей сыворотки крови: титров иммуноглобулинов M, G, А, Е, а-интерферона, рецепторного антагониста интерлейкина-1 и концентрации циркулирующих иммунных комплексов. Определяли также концентрацию секреторного иммуноглобулина slgA в слюнной жидкости по методу Манчини. Уровень активности лизоцима в слюнной жидкости оценивали с использованием бактериальной культуры Micrococcus lysodeikticus.

Исследование персистирования штаммов Bacillus и Lactobacillus, входящих в состав образцов пробиотиков проводили на белых мышах, которым предварительно вводили изучаемые культуры. Оценивали концентрацию пробиотических микроорганизмов во внутренних органах (печени, селезенке, лимфатических узлах) на различные сроки наблюдения.

Статистическую обработку осуществляли с помощью пакетов компьютерных программ Microsoft Office Excel 2007 и "Statistica 6.0". Результаты представлены в виде средней арифметической (М) и средней ошибки среднего арифметического (m). Использовали метод дисперсионного анализа (ANOVA). Оценку нормальности распределения полученных данных проводили по методу Колмогорова-Смирнова. Для оценки достоверности межгрупповых различий использовали непараметрический U-критерий Манна-Уитни и параметрический F-критерий Фишера в зависимости от нормальности распределения данных. Проверку статистических гипотез осуществляли при критическом уровне значимости р<0,05. В ряде случаев для сравнения зависимых выборок использовали непараметрический W-критерий Вилкоксона.

Результаты исследования

Одной из важных задач, которую необходимо было решить, являлась разработка новых медицинских препаратов на основе пробиотиков и трансдермальных проводников для лечения инфекционных и травматических заболеваний кожных покровов.

Для ее выполнения необходимо было создать пробиотик, отвечающий заданным требованиям, изучить биологические свойства бактериальных культур, являющихся его основой, обосновать целесообразность использования гелевых транскутанных препаратов, провести экспериментальные исследования по разработке оптимального компонентного состава гелевых пробиотических образцов, провести их доклинические испытания и по результатам полученных исследований сделать заключение о возможности и целесообразности их использования для лечения поражений кожи различной инфекционной и травматической этиологии.

Для конструирования препарата бацилакт были теоретически обоснованы и выбраны два вида пробиотических микроорганизмов: Bacillus subtilis В-2535 и Lactobacillus plantarum 8Р-АЗ, а также три вида транскутанных проводников: эфтидерм, тизоль и кремнийтитанорганический глицерогидрогель.

Для выбора и оценки эффективности различных комбинаций изучаемых культур в экспериментальном образце препарата в качестве основного критерия использовали величину антагонистической активности (таблица 1).

Таблица 1 — Антагонистическая активность различных соотношений и концентраций смешанных бактериальных культур штаммов В. эиЫШБ В-2335 и Ь. р!атагит 8Р-АЗ (п=10)

Соотношение (концентрации) бактериальных культур В. subtilis В-2335 и L. plantarum 8Р-АЗ Наличие роста тест-культур

St. pyogenes АТС С 19615 Sal. typhimu-rium 55 S. aureus 209Р С. albicans ИМВ 690

90:10 5,5-106/1,2-106 Наличие роста Наличие роста Наличие роста Наличие роста

80:20 4,8-106/2,2-10б Наличие роста Наличие роста Наличие роста Наличие роста

70:30 4,3 ■ 106/3,1 • 10й Наличие роста Наличие роста Наличие роста Наличие роста

60:40 3,8106/4,810б Нет роста* Нет роста* Наличие роста* Нет роста*

50:50 3,1106/5,4106 Нет роста* Нет роста* Нет роста* Нет роста*

40:60 2,3106/6,2106 Нет роста* Нет роста* Нет роста* Нет роста*

30:70 1,7-106/7, МО6 Нет роста* Наличие роста* Нет роста* Нет роста*

20:80 1,410б/8,5106 Наличие роста Наличие роста Наличие роста Наличие роста

10:90 0,710б/9,610б Наличие роста Наличие роста Наличие роста Наличие роста

Примечание: - * - достоверные (р<0,05) различия по 11-критерию Манна-Уитни в группах «60:40 3,8-10б/4,8'10б» и «50:50 3,Ы06/5,4-106» по отношению к группе «90:10 5,5-10б/1,2-106», а в группах «40:60 2,3-106/6,2-106» и «30:70 1,7-106/7,1-106» по отношению к группе «10:90 0,7-10б/9,6-106».

Анализ результатов экспериментальных исследований показывает, что минимальная концентрация бактериальных клеток в смешанной культуре, при которой еще наблюдается полное подавление роста тест-культур, равна для В. subtilis В-2335 2,3-Ю6 кл-см"3, а для культуры L.plantarum 8Р-АЗ 5,4-Ю6 кл-см"3.

С использованием лиофильновысушенного биокомпонента (бактериальных культур вышеприведенных штаммов) и трех гелевых основ: тизоля, эфтидерма и кремнийтитанорганического глицерогидрогеля были получены экспериментальные образцы гелевых пробиотических препаратов.

Препараты готовили путем тщательного перемешивания взятых исходных компонентов. Соотношение компонентов во всех трех экспериментальных образцах гелевых пробиотиков составляло 1:1. Для улучшения сохраняемости бактериальных клеток и, в первую очередь, лактобацилл в готовый препарат добавляли глицерин.

Сохраняемость испытуемых препаратов изучали на различные сроки. Было установлено, что хранение в течение 3, 6 и 12 месяцев при температуре 4±2°С не оказывало существенного отрицательного влияния на жизнеспособность бацилл.

Изучение антагонистической активности исследуемых образцов биогелей (таблица 2) свидетельствовало о их высокой антагонистической активности в отношении таких видов патогенных и условно-патогенных возбудителей, как: Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis, Streptococcus pyogenes, Candida albicans, Pseudomonas aeruginosa, Proteus vulgaris и Salmonella typhimutium. Сравнительно более значимые результаты были получены для экспериментального образца бацилакта на основе КТГГ.

Таблица 2 - Оценка антагонистической активность гелевых форм пробиотика бацилакт на рост тест-культур (М±т, п=8)__

>ксперимен-тальны образец Суммарная концентрация пробиотических клеток 106 КОЕ см'3 ТЕСТ-КУЛЬТУРА, ВЕЛИЧИНА ЗОН ПОДАВЛЕНИЯ РОСТА, ММ

S. aureus 209Р S.epidermidis АТСС 14990 St.pyogenes АТСС 19615 С.albicans ИМВ 690 Ps. aeruginosa АТСС 9024 P.vulgaris 177 Sal. typhimutium 55

1 2 3 4 5 6 7 8 9

Бацилакт и тизоль 1 28,2±2,3 20,1±1,9 21,8±2,0* >30 16,7±1,3 27,6 ±2,8 23,4±2,2

2 29,4±2,8 20,5±1,8 25,3±2,2 >30 17,5±1,4 28,3 ±3,2 23,9±2,1

3 >30 20,9±2,0 25,1±1,9 >30 18,0±1,8 >30 25,1±2,4

5 >30 22,2±2,3 26,2±2,6 >30 19,0±2,1 >30 27,2±3,1

10 >30 25,1±2,4 27,3±2,8 >30 20,6±1,8 >30 28,9±3,3

Бацилакт и эфтидерм 1 27,4±3,1 19,8±1,7 22,2±1,7 >30 15,6±1,6 26,4±2,8* 23,2±2,0

2 28,6±2,9 21,9±1,9 22,0±1,9 >30 17,4±1,9 27,2±2,6* 23,9±1,9

3 >30 21,4±2,0 24,6±2,0 >30 19,2±2,0 >30 24,7±2,1

5 >30 22,3±2,1 25,9±2,3 >30 20,8±2,2 >30 27,0±2,3

10 >30 24,8±2,2 26,5±2,4 >30 21,3±2,4 >30 28,8±2,9

Продолжение таблицы 2

1 2 3 4 5 6 7 8 9

Бацилакт и КТГГ 1 29,4±2,5 22,7±2,0 24,9±1,8 >30 18,2±1,9 29,4 ±2,7 23,9±2,1

2 29,9±3,0 23,4±2,5 26,2±2,3 >30 19,3±2,0 >30 25,1±2,4

3 >30 23,9±2,3 26,9±2,8 >30 20,4±1,8 >30 27,7±2,5

5 >30 25,1 ±2,4 28,6±2,5 >30 22,1 ±2,1 >30 28,6±2,9

10 >30 27,6±2,5 29,0±2,9 >30 23,8±2,6 >30 29,5±2,9

Биокомпонент (контроль) 1 29,1±2,2 23,2±1,8 26,2±1,7 >30 17,4±1,5 >30 22,6±2,1

2 >30 23,6±2,3 27,0±2,1 >30 17,1±1,6 >30 23,3±2,5

3 >30 26,4±2,2 27,6±2,6 >30 17,7±1,9 >30 23,8±2,7

5 >30 26,8±2,5 27,9±2,7 >30 18,4±1,9 >30 26,7±2,6

10 >30 26,9±2,4 29,3±2,8 >30 20,2±1,8 >30 28,5±2,9

Примечание: - 1) В качестве второго контроля использовали стерильное вазелиновое масло. Во всех случаях подавление роста тест-культур отсутствовало.

2) Оценку различий средних значений определяли методом дисперсионного анализа (АЫОУА). * -достоверные (р<0,05) различия по Р-критерию Фишера по сравнению с контролем.

Терапевтическую эффективность разработанных препаратов изучали на моделях инфекционных процессов пограничных покровов тела лабораторных животных, а также на моделях резаных ран (таблица 3).

Таблица 3 - Сравнительная оценка влияния гелевых форм препарата бацилакт на развитие гнойно-некротических поражений у белых мышей, вызванных S. aureus, St. pyogenes, Ps. aeruginosa (M±m, n=10)

Образцы препаратов Инфицирующие культуры

Staphylococcus aureus 209Р Streptococcus pyogenes АТСС 19615 Pseudomonas aeruginosa АТСС 9024

Срок заживления, сутки Индекс поражения, ед. Срок заживления, сутки Индекс поражения, ед. Срок заживления, сутки Индекс поражения, ед.

Бацилакт (тизоль) 8,1±0,2* 512,0* 8,5±0,5* 445,2* 10,4±0,6 583,1*

Бацилакт (эфтидерм) 8,7±0,4 524,3* 8,2±0,5* 440,6* 10,9±0,4 602,4*

Бацилакт (КТГГ) 8,5±0,4 477,6* 8,3±0,4* 415,5* 10,1 ±0,4 563,7*

Контроль (эплан) 9,9±0,3 581,9* 9,6±0,6* 613,8* 11,3±0,7 693,0*

Контроль (без лечения) 11,7±0,5 674,8 11,9±0,7 674,7 12,8±0,5 747,3

Примечание: - * - достоверные (р<0,05) различия по Р-критерию Фишера по сравнению с группой «Контроль (без лечения)».

Приведенные результаты свидетельствуют о хорошем ранозаживляющем действии всех трех вариантов изучаемых препаратов. Так, существенно снижалась

интенсивность развития гнойно-некротического процесса и индекс поражения, на 2-3 суток уменьшались сроки заживления, чем в группах животных, где лечение осуществляли препаратом сравнения.

Более выраженный эффект наблюдали у бацилакта на основе кремнийтитанорганического глицерогидрогеля (рисунок I).

□ Бацилакт с КТГГ ■ Контроль (Эплан) □ Контроль (без лечения)

Рисунок I - Влияние пробиотического препарата на основе кремнийтитанорганического глицерогидрогеля на сроки заживления при инфекционных и раневых поражениях (п=10).

Примечание: - 1. 1-травматическое повреждение кожных покровов, осложненное инфекционным процессом, вызванным Staphylococcus aureus; Н-травматическое повреждение кожных покровов; 2. Па оси ординат указаны относительные величины, характеризующие сроки заживления поражений кожных покровов (%); 3. * - достоверные (р<0,05) различия по F-критерию Фишера группы «Бацилакт с КТГТ» по сравнению с группой «Контроль (без лечения)» и группы «Контроль (Эплан) по сравнению с группой «Контроль (без лечения)».

Аналогичные результаты были получены и при изучении разработанных образцов бацилакта на моделях резаных неинфицированных ран кожи, что подтверждало их сравнительно высокую терапевтическую эффективность.

В дальнейших исследованиях было показано, что лечебный эффект у белых мышей при местном применении разработанных препаратов сопровождался их значимым влиянием на состояние различных звеньев иммунитета, что выражалось в стимуляции фагоцитоза, повышении концентрации ЦИК, увеличении количества иммуноглобулинов А, Е, G, М и а-интерферона, активности Т- и В-лимфоцитов, что в целом свидетельствовало о их выраженном иммуномодулирующем действии (таблицы 4. 5).

Таблица 4 - Влияние экспериментальных препаратов на функциональное состояние клеточных факторов иммунитета у белых мышей с инфицированной S. aureus раной кожи (М±т, п=10)

Метод лечения (применяемые образцы препаратов) Срок наблюдения, сутки ФА НПК, опт. ед ФАПМ, опт. ед НСТ-тест, опт. ед Количество Т- лимфоцитов (Е - РОК), 10й • см"3 Количество В- лимфоцитов (БАС - РОК) I06 • см"3 Количество АОК, на 106ЯСК селезенки

Бацилакт с тизолем 1 1,229±0,123 0,830±0,015* 0,233±0,019* 0,46±0,07* 0,74±0,16* 0,043±0,013

7 1,641±0,138* 0,493±0,011 * 0,292±0,024* 0,63±0,09* 1,26±0,34* 0,124±0,098*

Бацилакт с эфтидер-мом 1 1,223±0,096 0,344±0,008* 0,187±0,002* 0,37±0,03 0,60±0,09* 0,045±0,022

7 1,608±0,204* 0,404±0,009 0,215±0,006* 0,58±0,04* 0,97±0,08* 0,156±0,067*

Бацилакт с КТГГ 1 1,163±0,088 0,730±0,011 * 0,359±0,011* 0,59±0,06* 1,42±0,36* 0,061 ±0,00 8

7 1,582±0,153 1,389±0,113* 0,410±0,009* 0,84±0,13* 2,44±0,81 * 0,199±0,096*

Контроль (эплан) 1 1,264±0,147 0,487±0,026 0,439±0,013* 0,52±0,08* 0,70±0,26* 0,054±0,017

7 1,736±0,221* 0,573±0,014* 0,483±0,012* 0,76±0,10* 1,39±0,59* 0,139±0,077*

Контроль (без лечения) 1 1,245±0,104 0,452±0,010 0,136±0,004 0,32±0,03 0,44±0,09 0,049±0,011

7 2,810±0,312 0,754±0,018 0,627±0,023 0,48±0,05 0,83±0,11 0,087±0,007

Контроль (интакт- ные) 1 0,665±0,019 0,610±0,021 0,568±0,017 0,23±0,01 0,25±0,03 0,046±0,014

7 0,780±0,022 0,63 8±0,026 0,343±0,018 0,21 ±0,03 0,27±0,03 0,052±0,020

Примечание: - оценку различий средних значений определяли методом дисперсионного анализа (АЫОУА). * - достоверные (р<0,05) различия по Р-критерию Фишера по сравнению с группой «Контроль (без лечения)».

Так, в частности, было установлено увеличение фагоцитарной активности нейтрофилов периферической крови и перитонеальных макрофагов (в среднем в 2 раза), повышалось количественное содержание Т- и В-лимфоцитов (в 1,5-2 раза), титры иммуноглобулинов А и й увеличивались в 2 раза, менее значительно возрастало количество иммуноглобулинов Е и М. Особый интерес представляло увеличение титров а-интерферона и рецепторного антагониста интерлейкина-1 во всех без исключения группах подопытных животных, подвергавшихся лечению экспериментальными образцами препарата бацилакт (независимо от вида транскутанного проводника).

Таблица 5 - Количественные изменения показателей гуморального иммунитета

и уровня цитокинов при лечении локализованной гнойной инфекции кожи животных, вызванные S. aureus (M±m, n=10)__

Образцы препаратов Срок наблюдения, сутки Исследуемые показатели

Ig м, мг-см"3 Ig А, мг-см"3 Ig G, мг-см"3 Ig Е, мг-см"3 а-ИФН, пг-см"3 РАИЛ-1, пг-см"3 ЦИК, опт.ед.

Бацилакт (тизоль) 1 8,68±0,24* 1,30±0,12* 14,1±1,3* 0,60±0,01* 63,2±1,4* 37,1±1,2 0,59±0,03*

7 2,83±0,29* 2,79±0,16* 21,7±1,8 0,44±0,02 33,8±1,6 8,9±0,2* 0,14±0,02

Бацилакт (эфти-дерм) 1 7,86±0,36* 1,13±0,18* 13,6±1,4* 0,60±0,03 57,2±1,7* 31,3±1,6 0,62±0,03 *

7 3,15±0,34* 2,54±0,12* 20,3±1,5* 0,46±0,02 37,3±1,4 8,0±0,3* 0,16±0,02

Бацилакт (КТГГ) 1 7,78±0,37* 1,14±0,11 * 14,9±1,6* 0,63±0,05* 5б,4±1,6* 33,6±1,9 0,56±0,03

7 2,81±0,28* 2,47±0,12* 19,3±1,4 0,42±0,03 32,1±1,4* 7,8±0,4* 0,14±0,01

Контроль (эплан) 1 6,52±0,30 1,02±0,16 14,0±1,5 0,56±0,04 47,5±1,3* 28,2±1,3 0,59±0,03

7 3,07±0,22* 2,23±0,17* 18,3±1,4 0,48±0,05 34,8±1,9 6,8±0,2* 0,18±0,02

Контроль (без лечения) 1 6,47±0,33 1,09±0,19 10,3±1,4 0,60±0,03 49,2±1,5 36,1±1,8 0,71 ±0,04

7 4,08±0,25 2,14±0,16 18,1±1,7 0,49±0,02 35,6±1,6 7,9±0,3 0,16±0,01

Контроль (интакт-ные) 1 2,99±0,31 1,06±0,09 1,02±1,5 0,29±0,03 37,9±1,4 2,2±0,1 0,15±0,02

7 3,04±0,36 0,93±0,11 10,4±1,4 0,31 ±0,02 30,8±1,5 2,3±0,2 0,14±0,01

Примечг (АЫОУ/ «Контро шие: - оценку различий средних значений определяли методом дисперсионного анализа * - достоверные (р<0,05) различия по Я-критерию Фишера по сравнению с группой ль (без лечения)«.

В заключение считаем необходимым указать на то, что испытуемые экспериментальные образцы оказывают свою терапевтическую эффективность исключительно за счет особенностей биологического действия входящих в их состав пробиотических клеток. Попадая с током крови во внутреннюю среду макроорганизма, они задерживаются в органах, богатых лимфоидной тканью, где сохраняются в течение 1-2 недель, одновременно продуцируя при этом различные биологически активные вещества, и таким специфическим образом оказывают положительное влияние не только на ранозаживляющие процессы, но и стимулируют различные физиологические функции и, в первую очередь, факторы клеточного и гуморального иммунитета, что в целом способствует более быстрому наступлению лечебного эффекта.

Следующий этап наших исследований был посвящен изучению возможности создания нового метаболического препарата (с использованием биологически активных веществ пробиотического штамма Bacillus subtilis В-3679) для применения в качестве профилактического и лечебного средства при воспалительных заболеваниях тканей и органов ротовой полости. Ранее метаболиты споровых

пробиотических микроорганизмов практически не использовались для конструирования медицинских фармакологических препаратов.

Комплекс биологически активных метаболитов выделяли из культуральной жидкости вышеуказанного штамма при его глубинном культивировании после проведения следующих технологических операций: концентрирования (сепарирования), ультразвуковой дезинтеграции остаточного количества бактериальных клеток, стерилизующей ультрафильтрации и лиофильного высушивания.

Установленный химический состав полученного БАВ включал в себя следующие компоненты: белково-полисахаридный комплекс, свободные аминокислоты, гексозамин, водорастворимые витамины (пиридоксин, рибофлавин), пуриновые и пиримидиновые основания (аденин, гуанин, цитозин, тимин, урацил), ферментативный комплекс (протеолитические и амилолитические ферменты), антибиотики и антибиотикоподобные соединения.

Сравнительные испытания уровня антагонистической активности метаболического комплекса были проведены с использованием споровой культуры исходного штамма Bacillus subtilis В-3679 и медицинского иммунобиологического препарата "Биоспорин" (таблица 6).

Таблица 6 - Влияние опытных препаратов на рост бактериальных тест-культур

(М±щ, п=3)

№ п/п Образцы препаратов Зоны угнетения роста тест-культур, мм

Candida albicans 690 Staphylococcus epidermidis 14990 Escherichia coli 0157 Staphylococcus aureus 209 Р Pseudomonas aeruginosa 9027 Proteus vulgaris 15 Streptococcus pyogenes АТСС 19615

1 Споровая культура В. зиЬИПэ В-3679 24,4±2,8* 20,6±1,4 23,7±2,2* 24,8±2,1 17,2±1,1 12,3±1,1 21,9±1,4

2 Комплекс БАВ' В. эиЫШз В-3679 (общее количество препарата в лунке): 1 мг; 5 мг; 10 мг; 25 мг; 50 мг; 5,2±1,4* 9,1±1,6* 12,7±1,8* 26,2±1,9 28,6±2,1 4,5±1,3* 10,2±2,4* 13,1 ±2,0* 25,3±2,6* 30,3±1,9* 6,2±1,1* 8,6±2,3* 10,9±1,7* 24,0±1,8* 24,4±3,1* 5,4±1,8* 8,2±1,6* 12,7±1,2* 26,8±3,2 28,4±3,3 4,3±1,1* 7,2±2,3* 10,0±2,1 * 18,4±1,5 20,9±3,4* 3,8±1,2* 6,3±2,0* 10,6±2,4* 13,3±2,5 15,8±3,0 4,6±1,1* 9,2±1,3* 11,9±2,7* 18,4±3,2 19,2±2,6

3 МИБП «Биоспорин» 29,0±2,9 19,2±1,0 32,5±2,8 26,3±2,3 15,6±1,2 14,6±1,3 19,2±1,5

4 Контроль (стерильное вазелиновое масло) 0 0 0 0 0 0 0

Примечание: - 1) 1 - Указаны весовые количества сублимационно высушенного комплекса метаболитов Bacillus subtilis. 2) * - достоверные (р<0,05) различия по U-критерию Манна-Уитни в группах «Споровая культура штамма ВКПМ В-3679» и «Комплекс БАВ1 штамма ВКПМ В-3679» по отношению к группе «МИБП «Биоспорин»».

Показано, что активность подавления роста у изучаемого комплекса в отношении возбудителей II-IV групп патогенности: Candida albicans, Staphylococcus epidermidis, Escherichia coli штамм 0157, Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa, Proteus vulgaris. Streptococcus pyogenes была не ниже, а в некоторых случаях и выше, чем у живых культур или биопрепарата на их основе.

На модели экспериментального сальмонеллеза у белых мышей применение в качестве лекарственного средства метаболического комплекса показало увеличение выживаемости подопытных животных до 100% (для «Биоспорина» - 85%) при среднем уровне летальности у нелеченных мышей равным 60%. Об иммуномодулирующих свойствах комплекса свидетельствовало увеличение комплементарной активности, уровня лизоцима, концентрации циркулирующих иммунных комплекса и общей бактерицидной активности сыворотки крови (ОБАСК).

В ходе проведения дальнейших исследований был сконструирован экспериментальный образец метаболического препарата дентозар, в состав которого были включены следующие компоненты: метаболиты пробиотических бактериальных клеток сенной палочки (штамм В-2535), а для усиления бактериостатического, противовоспалительного и ранозаживляющего действий, повышения уровня обменных процессов, стимулирования местного иммунитета - никотиновая кислота, кальция пантотенат, ментол, прополис, эфирные масла мяты перечной, шалфея, лаванды.

В экспериментальных исследованиях на лабораторных животных (белых мышах, белых крысах, морских свинках и кроликах) изучали острую и хроническую токсичность разработанного образца препарата, которые в целом подтвердили безопасность его использования. Результаты оценки общего состояния животных, местно-раздражающего и кожно-резорбтивного действий, влияние препарата на функции печени, почек и эндокринную систему, кумулятивного, аллергизирующего, канцерогенного и тератогенного действий, способности препарата вызывать реакцию специфического лизиса лейкоцитов и анафилактический шок, а также изучения нервно-психического состояния лабораторных животных и патоморфологические (гистологические) исследования позволяют утверждать о безвредности влияния дентозара на организм экспериментальных животных.

Возможность применения предлагаемого препарата для лечения воспалительных процессов слизистой оболочки ротовой полости была подтверждена на белых крысах путем моделирования у них ожоговой травмы II степени тяжести. Экспериментально было установлено, что уменьшение площади термического поражения, скорость очищения ран от гнойно-некротических тканей, время образования грануляций и начало эпителизации, а также сроки до полного заживления при использовании в качестве лечебного средства метаболического пробиотика дентозар были терапевтически достоверно значимыми (уровень

эффективности лечения дентозаром превышал аналогичный показатель для препарата сравнения в среднем на 24%).

Эффективность применения зубного эликсира предлагаемого состава как гигиенического и лечебного средства изучали в клинико-лабораторных исследованиях, в которых были задействованы пациенты с подтвержденным клиническим диагнозом - хроническим генерализованным пародонтитом средней степени тяжести.

В ходе бактериологических исследований из ротовой полости больных было выделено и идентифицировано 56 видов микроорганизмов. В отношении культур наиболее типичных и распространенных для данного заболевания видов оценивали антагонистическую активность метаболического пробиотика дентозар. Наиболее высокие уровни подавления роста установлено для таких видов, как: Escherichia coli, Staphylococcus epidermidis, Proteus vulgaris, Candida albicans, Staphylococcus aureus, Veillonella parvula, Neisseria spp. Достаточно выраженную антагонистическую активность наблюдали и для других видов: Streptococcus pyogenes, Streptococcus haemolyticus, Streptococcus mutants, Pseudomonas aeruginosa, Actinomyces spp., Treponema macrodentium, Fusobacterium polymorphum (таблица 7).

Таблица 7 - Динамика изменения концентрации условно-патогенных микроорганизмов у больных хроническим генерализованным пародонтитом средней степени тяжести (М±т, п=6)

п/п Вид микроорганизма Частота выделения, % п/п Вид микроорганизма Частота выделения, %

До лечения После лечения До лечения После лечения

1. Staphylococcus aureus 55,6±2,8 12,8±1,1* 9. Neisseria spp. 12,4±1,2 2,4±0,3*

2. Staphylococcus epidermidis 35,2±1,7 15,3±1,2* 10. Actinomyces spp. 55,9±3,1 1,7±0,1*

3. Streptococcus pyogenes 12,3±1,2 0,1 ±0,0* 11. Treponema macrodentium 2,8±0,3 0,1±0,0*

4. Streptococcus haemolyticus 20,3±1,6 5,2±0,6* 12. Fusobacterium polymorphum 56,2±2,7 1,5±0,1*

5. Streptococcus mutants 18,4±1,3 8,7±0,9* 13. Proteus vulgaris 5,6±0,8 0,1±0,0*

6. Escherichia coli 3,1 ±0,4 0,1±0,0* 14. Candida albicans 69,5±3,0 10,4±0,9*

7. Pseudomonas aeruginosa 3,5±0,4 0,1 ±0,0* 15. Lactobacillus spp. 65,1±2,9 80,7±3,6*

8. Veillonella parvula 70,4±3,1 8,2± 1,0*

Примечание: - * - достоверные (р<0,05) по W-критерию Вилкоксона различия с группой «до лечения»

В дальнейшем изучали некоторые иммунологические феномены у больных, которым назначали данный препарат (орошение ротовой полости аэрозольным способом 4 раза в сутки в течение 7 дней). На 2-4 сутки наблюдали существенное увеличение концентрации лизоцима в слюнной жидкости (рисунок 2), сопровождающееся повышением уровня М на 1 сутки, а также А и А на 7-14 сутки (таблица 8).

12 3 4

Срок наблюдения, сут.

□ Дентозар ■ Асепта

Рисунок 2 - Динамика изменения уровня лизоцима в слюнной жидкости (п=3). Примечание: - * - достоверные (р<0,05) по и-критерию Манна-Уитни различия в группе «Дентозар» по отношению к группе «Асепта».

Таблица 8 - Динамика изменения уровня иммуноглобулинов (М±т, п=6)

п/п Исследуемые показатели, мг-см"3 У больных до лечения У больных, которым был назначен дентозар У больных, которым был назначен асепта

сроки наблюдения, сутки

1 7 14 1 7 14

1. А 0,2±0,1 0,25±0,1 0,31±0,2* 0,36±0,3* 0,2±0,1 0,22±0,2 0,23±0,1

2. 1ёА 0,45±0,12 0,54±0,08 0,55±0,01* 0,59±0,07* 0,44±0,1 0,45±0,11 0,43±0,09

3. 1&М 0,31 ±0,09 0,54±0,11* 0,36±0,07 0,28±0,08 0,30±0,11 0,29±0,2 0,29±0,1

4. ^ 2,12±0,13 2,15±0,1 2,40±0,02 2,45±0,1 2,0±0,П 2,2±0,12 2,1±0,08

Примечание: - * - достоверные (р<0,05) по \У-критерию Вилкоксона различия в группах «1, 7 и 14-сутки» по отношению к контролю «До лечения».

Субъективно пациенты отмечали улучшение общего состояния, увеличение слюноотделения, уменьшение кровоточивости и болей в деснах, исчезновение неприятного запаха.

На заключительном этапе изучали динамику выделения различных видов микроорганизмов до и после применения зубного эликсира дентозар. По результатам выполненных исследований было установлено, что влияние разработанного метаболического пробиотика приводило к нормализации микробного пейзажа полости рта у больных данной категории. Так, существенно снизилась частота выделения представителей микрофлоры, наиболее типичных для хронического генерализованного пародонтита средней степени тяжести. Уменьшилась или снизилась до физиологических значений концентрация таких видов микроорганизмов, как: Pseudomonas aeruginosa, Treponema macrodentium, Streptococcus haemolyticus, Streptococcus mutants, Staphylococcus epidermidis, Staphylococcus aureus, Candida albicans, Fusobacterium polymorphum, Neisseria spp., Actinomyces spp. Одновременно был отмечен исключительно важный факт -увеличение до 80% количества молочнокислых бактерий, являющихся важнейшими представителями нормальной микрофлоры.

Таким образом, полученные на экспериментальном этапе настоящих исследований данные позволяют заключить, что новый пробиотический метаболический препарат может быть эффективен и перспективен для использования в современной медицинской практике для решения конкретных задач при лечении больных стоматологического профиля.

Закономерным продолжением развития проблемы метаболических пробиотиков были теоретические и экспериментальные исследования, направленные на разработку препаратов такого рода, состоящих из комплексов биологически активных соединений, выделенных из микроорганизмов различных родов и видов.

С целью создания экспериментального образца метаболического бикомпонентного пробиотика и оценки возможности его перспективного применения у больных с инфекционно-воспалительными заболеваниями гинекологического профиля был определен спектр пробиотических микроорганизмов и изучены их значимые для решения данной проблемы биологические свойства. В результате были выбраны четыре штамма вида Bacillus subtilis (В-2335, В-4759, В-2895, В-3679) и пять штаммов лактобацилл (Lactobacillus acidophilus 2707. Lactobacillus plantarum 8P-A3. Lactobacillus fermentum 90T-C4, Lactobacillus fermentum B-4916, Lactobacillus buchneri 2).

Выполненные экспериментальные исследования показали, что сравнительно более высокая биохимическая активность определялась у штаммов Bacillus subtilis В-3679 (по показателям величины и скорости синтеза протеолитических и амилолитических ферментов) и Lactobacillus plantarum 8Р-АЗ (по уровню кислотообразования). Одновременно культуры указанных штаммов отличались и по

более выраженной антагонистической активности (для таких тест-культур, как: Staphylococcus epidermidis АТСС 14990, Streptococcus pyogenes АТСС 19615, Pseudomonas aeruginosa АТСС 9024, Candida albicans ИМВ 690), а также по уровню стимулирования перитонеальных макрофагов белых мышей.

В силу вышеизложенного было принято обоснованное заключение, что данные пробиотические штаммы могут являться и наиболее приемлемыми продуцентами метаболических комплексов, которые в последующем посредством использования уже описанных биотехнологических приемов и были выделены.

В дальнейшем, по результатам изучения антагонистической активности комплексов БАВ, выделенных из бактериальных культур сенной палочки и молочнокислых бактерий, при их совместном применении, было установлено, что наиболее оптимальным их соотношением является 1:1.

Готовая композиция сконструированного метаболического бикомпонентного препарата фемивит включала в свой состав также прополис, эфирные масла шалфея и лаванды, а также бензоат натрия. Сохраняемость экспериментального образца препарата при температурах 2±2°С и 20±2°С на 6, 9 и 12 месяцев наблюдения не приводила к достоверному снижению его специфической активности.

Результаты изучения острой и хронической токсичности не выявили никаких побочных эффектов и в целом подтвердили безопасность препарата. При гистологических исследованиях не было найдено также и какого-либо неблагоприятного влияния препарата на слизистые половых органов белых крыс и морских свинок. Следует отметить, что при изучении липидного обмена у белых крыс и морских свинок было установлено, что назначение препарата фемивит приводило к снижению уровней общего холестерина, ß-липопротеидов, ЛПНП и ЛПОНП и уменьшению коэффициента атерогенности. Одновременно укажем, что предлагаемый образец пробиотика не оказывал неблагоприятного влияния на функцию сердечнососудистой системы экспериментальных животных.

Дальнейшие исследования были посвящены изучению и оценке потенциальной возможности использования разработанного препарата для коррекции микробиоценоза у лиц с клинически подтвержденным диагнозом - бактериальный вагиноз. Пробы вагинального секрета высевали на плотные питательные среды, в последующем проводили их родовую индикацию и видовую идентификацию. Всего было выделено 16 наиболее типичных видов микроорганизмов и по отношению к ним была проведена количественная оценка уровня антагонистической активности бикомпонентного метаболического пробиотика. Достаточно высокая активность препарата была зарегистрирована практически для всех изученных видов. Наибольшую степень подавления роста наблюдали для стафилококков, кишечной палочки, протея и грибов рода кандида (таблица 9).

Таблица 9 - Антагонистическая активность биокомпонента по отношению к наиболее типичным видам микроорганизмов микрофлоры больных бактериальным вагинозом (М±ш, п=3)

п/п Вид микроорганизма Величина зоны подавления роста препаратом фемивит, мм п/п Вид микроорганиз ма Величина зоны подавления роста препаратом фемивит, мм

Количество препарата, мг Количество препарата, мг

10 25 50 10 25 50

1. Staphylococcus epidermidis 13,6±2,0 20,0±1,6* 26,1 ±2,7* 9. Candida albicans 10,5±1,2 24,2±2,4* 30,4±2,8*

2. Corynebacte-rium spp. 11,3±1,2 16,5±1,3* 20,1±2,5* 10. Proteus vulgaris 10,1±1,6 26,9±2,5* 29,4±2,7*

3. Bacteroides fragil is 12,2±1,6 14,6±1,5 19,3±1,9* 11. Escherichia coli 12,5±1,3 20,2±2,3* 28,4±3,1*

4. Mycoplasma hominis 11,7±1,0 18,3±2,7* 21,2±2,5* 12. Peptostrepto-coccus anaerobius 4,8±0,6 8,6±1,2* 10,2±1,4*

5. Micrococcus luteus 10,0±1,2 14,2±1,2* 17,6±2,2* 13. Gardnerella vaginalis 10,4±1,3 15,7±1,2* 17,5±1,8*

6. Propionibacterium spp. 5,2±0,6 7,1 ±0,8* 8,2±0,7* 14. Staphylococcus aureus 20,4±2,2 26,0±2,6* 30,7±2,8*

7. Veyllonella spp. 6,4±0,6 14,8±2,3* 19,1±1,9* 15. Neisseria spp. 13,2±1,4 17,9±2,2* 21,6±3,0*

8. Eubacterium limosum 9,2±1,0 13,0±1,8* 20,3±2,6* 16. Actinomyces spp. 14,1±1,8 20,7±2,0* 23,3±2,3*

Примечание: - 1) В качестве контроля во всех случаях использовали стерильное вазелиновое масло. Зон подавления роста на выявлено. 2) * - достоверные (р<0,05) по 11-критерию Манна-Уитни различия в группах, где использовали дозы 25 и 50 мг препарата фемивит по отношению к группам, где использовали дозу 10 мг.

У больных, которым был назначен фемивит (интравагинально 3 раза в день на протяжении 7 суток), в динамике изучали количественные изменения микробного пейзажа до и после его применения (таблица 10).

Критерием терапевтической эффективности разработанного экспериментального образца служило достоверное снижение в сравнительных испытаниях частоты выделения конкретного, в том числе и условно-патогенного вида микроорганизмов и повышение количества представителей нормальной микрофлоры. В свою очередь получение положительных результатов подтверждало также значимость и перспективность практического применения фемивита у больных с данной патологией.

Таблица 10 - Частота выделения различных видов микрофлоры у больных бактериальным вагинозом до и после применения фемивита (М±т, п=6)

№, п/п Вид микроорганизма Тип дыхания Частота выделения, %

До лечения После лечения

1. Lactobacillus acidophilus Факульт. анаэроб 22,3±1,4 44,2±2,7*

2. Lactobacillus plantarum Факульт. анаэроб 26,7±1,6 62,6±2,9*

3. Lactobacillus brevis Факульт. анаэроб 12,0±0,8 31,4±2,0*

4. Staphylococcus epidermidis Факульт. анаэроб 76,2±3,1 23,6±1,8*

5. Cory nebacterium spp. Строгий анаэроб 17,5±0,8 20,5±1,4

6. Bacteroides fragilis Анаэроб 12,4±0,6 14,3±1,1

7. Prevotella spp. Облигат. анаэроб 11,6±0,7 10,9±1,0

8. Mycoplasma hominis Факульт. анаэроб 12,8±0,5 9,1±0,9*

9. Micrococcus luteus Облигат. анаэроб 8,0±0,2 10,3±1,0

10. Micrococcus spp. Облигат. анаэроб 7,7±0,2 б,8±0,4

11. Propionibacterium spp. Факульт. анаэроб 4,3±0,1 3,1±0,1

12. Fusobacterium spp. Облигат. анаэроб 9,7±0,5 3,5±0,08

13. Veyllonella spp. Анаэроб 2,4±0,08 0,00±0,()0

14. Eubacterium limosum Строгий анаэроб 8,8±0,6 6,2±0,3

15. Candida albicans Факульт. аэроб 32,7±2,9 1,0±0,02*

16. Proteus vulgaris Факульт. аэроб 3,6±0,1 0,12±0,01*

17. Escherichia coli Факульт. анаэроб 5,2±0,1 0,10±0,01*

18. Peptostreptococcus anaerobius Анаэроб 10,6±1,0 12,3±1,2

19. Gardnerella vaginalis Факульт. анаэроб 9,2±0,9 2,2±0,3*

20. Staphylococcus aureus Факульт. анаэроб 23,6±2,8 2,8±0,2*

21. Neisseria spp. Аэроб 6,4±0,3 6,0±0,7

22. Actinomyces spp. Факульт. анаэроб 4,8±0,1 2,5±0,07

23. Bifidobacterium bifidum Анаэроб 17,6±1,8 56,4±2,9*

24. Streptococcus spp. Факульт. анаэроб 68,4±3,0 19,8±2,1*

Примечание: - * - достоверные (р<0,05) по W-критерию Вилкоксона различия с группой «До лечения».

Объективно можно утверждать, что использование фемивита приводило к положительному изменению микробиоценоза, увеличению количества аборигенных микроорганизмов: Lactobacillus (три вида), Bifidobacteruim, Corynebacterium spp., Micrococcus luteus, Micrococcus spp., Peptostreptococcus anaerobius и вытеснению таких условно-патогенных представителей, как: Staphylococcus epidermidis, Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Candida albicans, Proteus vulgaris, Fusobacterium spp.

Таким образом, нормализация микробиоценоза у больных бактериальным вагинозом является весьма значимым фактором общего оздоровления организма женщины, а разработанный пробиотический препарат нового поколения может быть

в перспективе рекомендован для практического применения в комплексной терапии больных гинекологического профиля.

Целью дальнейших исследований было решение исключительно важной для практической медицины задачи, а именно - разработке и оценке возможности применения эффективного гепатопротекторного пробиотика.

Учитывая представленные ранее данные о высоком биологическом потенциале спорообразующих микроорганизмов рода Bacillus и опыт использования уже ранее разработанных пробиотических препаратов на их основе, наши усилия были направлены на выбор и обоснование конкретных и наиболее оптимальных для решения данной задачи штаммов. Одновременно существенный интерес представляло создание комбинированного гепатопротекторного препарата, в котором специфические фармакологические свойства пробиотических микроорганизмов будут существенным образом усилены, а возможно даже и потенциированы, включением в состав препарата комплекса предварительно полученных метаболитов.

Сравнительные микробиологические исследования были проведены с использованием 6 штаммов Bacillus subtilis (В-2335, В-4759, В-2895, В-3679, В-9906, В-9909). Отметим, что штаммы В-9906 и В-9909 выделены и депонированы во Всероссийскую коллекцию промышленных микроорганизмов при непосредственном участии автора. Объективными критериями выбора конкретного штамма, обладающего наиболее приемлемыми характеристиками для включения его в состав разрабатываемого гепатопротектора, были следующие: степень биохимического потенциала, отсутствие гемолитических свойств, уровень антагонистической активности, выраженность гепатопротекторной эффективности.

Результаты выполнения сравнительных исследований позволили установить, что по совокупности свойств заданным требованиям отвечали три штамма Bacillus subtilis В-2335, В-4759, В-9906, культуры которых на средах с дефибринированной кроличьей и человеческой кровью не проявляли гемолитических свойств, а при глубинном выращивании активно синтезировали протеолитические и амилолитические ферменты. Показана также их высокая антагонистическая активность в отношении тест-культур штаммов различной степени патогенности.

Споровые суспензии выбранных пробиотических штаммов обладали существенным уровнем протективных свойств. На экспериментальной модели острого токсического гепатита, вызванного введением лабораторным животным четыреххлористого углерода, процент выживших животных был сравнительно наиболее высоким при назначении бактериальной культуры штамма В-9906 и составлял (%): 76 (для белых мышей, в контроле - 36) и 73 (для белых крыс, в контроле - 40) (рисунок 3).

Белые мыши

Белые крысы

0 Bacillus subtilis В-9906 М Bacillus subtilis В-4759 □ Bacillus subtilis В-2335 □ Контроль (без лечения)

Рисунок 3 - Оценка влияния исследуемых штаммов на выживаемость лабораторных животных при остром токсическом поражении печени (п=10). Примечание: - * - достоверные (р<0,05) различия по Р-критерию Фишера по сравнению с группой «Контроль (без лечения)».

Гепатопротекторная активность данного штамма была подтверждена и результатами биохимических (по таким наиболее значимым критериям, как: активность аланинаминотрансферазы, аспартатаминотрансферазы, щелочной фосфатазы и уровень общего билирубина) и гистологических исследований. Во всех изучаемых случаях неблагоприятные изменения, характерные для токсического гепатита, были существенно менее выраженными у лабораторных животных, которым вводили данное пробиотическое средство.

Таким образом, дальнейшие исследования, направленные на конструирование комбинированного гепатопротектора. проводили с использованием культуры штамма Bacillus subtilis В-9906 и выделенного из этого же штамма метаболического комплекса.

Выполненная в дальнейшем серия экспериментов с использованием эксплантированных крысиных гепатоцитов при моделировании токсического поражения четыреххлорисгым углеродом в прямых опытах продемонстрировала наличие гепатопротекторного действия непосредственно у метаболического комплекса. Повышение пролиферативной активности культуры клеток гепатоцитов наблюдали уже через 48 часов, полностью культура восстанавливалась через 96 часов (рисунок 4).

в Культура гепатоцитов с добавлением комплекса БАВ и СС14 В Культура гепатоцитов с добавлением комплекса БАВ (контроль №1) □ Культура гепатоцитов с добавлением СС14 (контроль №2)

Рисунок 4 - Пролиферативная активность эксплантированных гепатоцитов белых крыс при токсическом воздействии на разные сроки наблюдения (п=10). Примечание: - * - достоверные (р<0,05) различия по результатам дисперсионного анализа (ANOVA) с использованием F-критерия Фишера по сравнению с группой «Культура гепатоцитов с добавлением СС14 (контроль №2)».

Экспериментальный образец препарата (жидкая лекарственная форма) гепатобиол включал в себя следующие компоненты: суспензию спор Bacillus subtilis В-9906, метаболический комплекс (в равных соотношениях, масс.%), а также ароматизатор и глицерин.

Изучение острой и хронической токсичности образца препарата свидетельствовало об отсутствии у него каких-либо неблагоприятных и патологических воздействий на лабораторных животных.

Терапевтическую эффективность экспериментального образца препарата гепатобиол изучали на белых мышах путем моделирования острого токсического гепатита. В качестве препарата сравнения назначали урсосан (таблицы 11-13).

Таблица 11 - Биохимические показатели сыворотки крови белых мышей при моделировании острого токсического гепатита на фоне лечения экспериментальным образцом препарата гепатобиол (М±т, п=10)

Группы животных Срок наблю цения, сутки Исследуемые биохимические показатели

АЛТ, Ед'дм"3 ACT, Ед- дм'3 ГГТФ, нмоль-(с-дм)'3 Щелочная фосфатаза, Ед-дм"3 Общий белок, г-дм"3 Билирубин общий, мкмоль-дм"3 Мочевина, ммоль- дм"3

Гепатобиол 3 78,5±5,1* 84,3±4,5* 1,86±0,5* 131,6=1=0,4* 31,3±3,5* 14,8±0,4* 20,8±0,3*

8 68,5±4,3* 65,2±3,3* 1,09±0,4* 114,5±0,3* 38,8±3,6* 10,2±0,2* 17,6±0,4*

14 55,6±4,2* 59,5±5,6* 0,92±0,3* 107,5±0,4* 42,4±3,4* 9,6±0,4* 6,8±0,5*

30 48,9±4,5 51,4±3,2* 0,82±0,4* 103,5±0,2* 43,8±3,7 8,8±0,3* 7,2±0,5*

Контроль (урсосан) 3 82,4±4,3* 86,7±4,3* 1,93±0,5* 138,4±0,4* 28,4±3,7 16,3±0,5* 22,3±0,4*

8 69,5±4,1* 67,2±3,4* 1,21±0,6* 119,3±0,3* 37,3±3,8* 11,4±0,4* 19,6±0,5*

14 58,6±4,4* 61,5±5,2* 0,98±0,7* 107,5±0,4* 40,6±3,6 10,3±0,3* 11,2±0,3 *

30 50,3±4,2 58,4±3,3 0,87±0,5* 106,6±0,2* 46,6±3,6 9,1±0,4* 9,3±0,5*

Контроль (без лечения) 3 94,3±5,7 96,4±4,5 2,76±0,6 147,6±0,5 24,2±4,1 18,9±0,3 31,9±0,6

8 77,8±4,2 79,4±3,6 2,01±0,5 129,5±0,6 28,5±3,2 13,2±0,3 23,6±0,4

14 68,5±4,3 75,4±3,3 1,73±0,5 118,5±0,4 37,8±4,3 12,8±0,4 17,8±0,5

30 56,4±4,3 61,4±3,3 1,29±0,4 114,5=1=0,2 40,8±3,3 10,2±0,4 13,3±0,5

Контроль (интактные) 3 45,5±4,3 48,4±3,2 0,71 ±0,5 102,4±0,5 43,4±4,4 8,1 ±0,4 7,8±0,5

8 48,5±4,2 49,4±3,3 0,77±0,3 108,5±0,3 42,6±4,6 8,3±0,3 8,1±0,4

14 47,5±4,6 50,4±3,1 0,74±0,4 104,5±0,5 45,8±3,7 8,2±0,2 7,9±0,5

30 46,3±4,2 48,4±3,3 0,73±0,6 105,5±0,4 44,8±3,2 8,4±0,3 8,3±0,3

Примечание: - оценку различий средних значений определяли методом дисперсионного анализа (АМОУА). * - достоверные (р<0,05) различия по р-критерию Фишера по сравнению с группой «Контроль (без лечения)».

При количественной оценке биохимических показателей сыворотки крови (АЛТ, ACT, ГГТФ, щелочной фосфатазы, общего белка, общего билирубина, мочевины) было установлено, что все биохимические синдромы, характеризирующие поражение паренхимы печени, при назначении гепатобиола были значительно менее выраженными, что в целом позволяет утверждать о его эффективности и наличии у него гепатопротекторных свойств.

Таблица 12 - Показатели гуморального иммунитета и уровня а-интерферона

сыворотки крови белых мышей при моделировании острого токсического гепатита на фоне лечения экспериментальным образцом препаратом гепатобиол (М±ш, п=10)

Группы животных Срок наблюдения, сутки Исследуемые показатели

Ig м, мг-см*3 IgA, мг-см'3 Ig G, мгсм'3 Ig Е, МЕ-см"3 а-ИФН, пг-см"3 ЦИК, опт.ед.

Гепатобиол 3 9,15±0,2* 0,77±0,18 8,7±1,6 0,22±0,02 18,1±1,2* 0,30±0,02*

8 6,74±0,3* 1,46±0,16* 14,1±1,5 0,14±0,03* 30,1±1,4* 0,32±0,03

14 4,55±0,3* 1,22±0,16* 11,3±1,5* 0,13±0,03* 27,1±1,3* 0,18±0,03*

30 3,34±0,3* 0,95±0,13* 9,5±1,5* 0,12±0,02* 21,4±1,6 0,12±0,02*

Контроль (урсосан) 3 9,33±0,3 0,99±0,13* 8,9±1,7 0,21±0,02* 15,4±1,3* 0,36±0,02

8 8,82±0,2 1,56±0,12 16,6±1,6 0,16±0,03* 24,6±1,5* 0,34±0,03*

14 5,24±0,3* 1,34±0,16 13,7±1,5 0,15±0,03* 23,2±1,4 0,21 ±0,03

30 3,87±0,3* 1,1!±0,13* 11,8±1,5* 0,14±0,02* 22,1±1,6 0,18±0,02*

Контроль (без лечения) 3 9,64±0,2 0,73±0,15 8,6±1,7 0,25±0,02 10,1±1,4 0,37±0,02

8 8.93±0,2 1,62±0,16 1б,5±1,4 0,18±0,02 22,9±1,5 0,31 ±0,03

14 6,46±0,3 1,3б±0,16 14,8±1,5 0,17±0,03 21,8±1,4 0,20±0,03

30 4,82±0,3 1,29±0,13 13,3±1,5 0,16±0,02 22,7±1,6 0,19±0,02

Контроль (интактные) 3 3,42±0,3 0,91 ±0,12 9,3±1,5 0,12±0,02 23,4±1,4 0,11±0,03

8 3,30±0,2 0,94±0,13 9,4±1,5 0,11±0,03 22,6±1,6 0,14±0,02

14 3,37±0,3 0,93±0,12 9,0±1,5 0,13±0,02 25,4±1,4 0,13±0,03

30 3,32±0,3 0,92±0,13 9,7±1,5 0,12±0,02 21,7±1,6 0,12±0,02

Примечание: - оценку различий средних значений определяли методом дисперсионного анализа (АЫОУА). * - достоверные (р<0,05) различия по Р-критерию Фишера по сравнению с группой «Контроль (без лечения)».

Исследования гуморального статуса лабораторных животных с острым токсическим гепатитом показало наличие выраженного иммуномодулирующего эффекта при назначении экспериментального образца гепатобиола, о чем свидетельствовали результаты оценки динамики изменения таких показателей, как IgM, IgA, IgG, IgE, ЦИК. Имела место также стимуляция выработки эндогенного а-интерферона, а также более раннее переключение синтеза IgM на IgG. Механизм данного действия может быть обусловлен специфическими свойствами базового штамма Bacillus subtilis В-9906 и объясняться как прямым, так и опосредованным воздействием компонентов метаболического комплекса на иммунокомпетентные клетки (таблица 12).

Результаты сравнительных испытаний свидетельствовали о том, что манифестация иммуновоспалительного синдрома в меньшей степени была выражена в группе животных которым для лечения назначали препарат гепатобиол. Нормализацию всех регистрируемых показателей наблюдали уже к 30-м суткам.

Исследования по оценке гуморального статуса подопытных животных при воспроизведении у них экспериментальной модели острого токсического гепатита, позволяют сделать заключение о наличии у комбинированного пробиотического препарата гепатобиол более значимого иммуномодулирующего эффекта, в сравнении с контрольным препаратом (урсосан) (таблица 13).

Таблица 13 - Показатели функциональной активности нейтрофилов крови и клеточного иммунитета белых мышей с токсическим гепатитом при лечении экспериментальным образцом препарата гепатобиол, (М±т, п=10)__

Группы животных Срок наблюдения, сутки Фагоцитарная активность, опт. Ед. НСТ, опт. Ед. Т- лимфоциты 106-см"3 В- лимфоциты, 106см"3 АОК, 10й-см"3

Гепатобиол 3 56,2±0,43* 0,22±0,01* 0,36±0,04 0,34±0,04* 0,093±0,007

8 51,0±0,41* 0,21±0,02* 0,39±0,02* 0,42±0,06* 0,124±0,021*

14 44,0±0,27* 0,08±0,01* 0,24±0,03 0,27±0,03* 0,096±0,008*

30 41,2±0,34* 0,06±0,01 0,20±0,02 0,18±0,03* 0,078±0,009*

Контроль (урсосан) 3 47,5±0,51* 0,15±0,01* 0,34±0,05 0,33±0,02* 0,091±0,006

8 44,3±0,49* 0,16±0,01* 0,38±0,03* 0,44±0,03* 0,133±0,032*

14 29,3±0,37* 0,07±0,01* 0,25±0,02 0,32±0,04 0,94±0,023*

30 28,7±0,31* 0,06±0,01 0,23±0,02 0,30±0,06 0,67±0,022*

Контроль (без лечения) 3 42,1±0,52 0,07±0,01 0,30±0,04 0,26±0,04 0,099±0,01б

8 61,3±0,59 0,09±0,01 0,29±0,02 0,35±0,04 0,214±0,031

14 58,7±0,45 0,05±0,01 0,21±0,03 0,35±0,03 0,187±0,023

30 57,3±0,64 0,05±0,01 0,20±0,02 0,31±0,06 0,121±0,021

Контроль (интактные) 3 13,0±0,27 0,03±0,01 0,22±0,04 0,19±0,02 0,046±0,003

8 13,8±0,26 0,02±0,01 0,18±0,03 0,14±0,02 0,049±0,004

14 14,3±0,22 0,02±0,01 0,25±0,02 0,17±0,04 0,047±0,006

30 13,6±0,34 0,03±0,01 0,21±0,03 0,18±0,03 0,045±0,004

Примечание: - оценку различий средних значений определяли методом дисперсионного анализа (АЫОУА). * - достоверные (р<0,05) различия по Р-критерию Фишера по сравнению с группой «Контроль (без лечения)».

Из данных таблицы 13 видно, что в I и II группах лабораторных животных, получавших экспериментальный образец препарата гепатобиол и препарат сравнения урсосан, наблюдалось более выраженное увеличение всех изучаемых клеточных факторов иммунитета - повышение фагоцитарной активности нейтрофилов крови в 4,1 и 3,8 раза, поглотительной способности нейтрофилов в НСТ-тесте в 7 и 5 раз, увеличение количества Т- и В-лимфоцитов в 1,7 и 1,6 раз и антителообразующих клеток (АОК) в 2 раза в обеих группах, соответственно. На ранние сроки

эксперимента значительно возрастало и количественное представление популяций Ти В-лимфоцитов, а также АОК, что свидетельствовало об активации всех звеньев клеточного иммунитета.

Полученные нами на экспериментальном этапе исследований результаты свидетельствуют, что впервые разработанный комбинированный пробиотический гепатопротекторный препарат характеризуется комплексом положительных фармакологических эффектов, что, в принципе, делает его перспективным для решения актуальных задач современный гепатологии.

Таким образом, результаты выполненного комплекса исследований позволяет утверждать, что поставленные задачи выполнены в запланированной объеме, а цель работы достигнута.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Созданы и испытаны шесть новых образцов пробиотических препаратов, изучены их фармакологические свойства, экспериментально подтверждена, в том числе и по результатам доклинических и предварительных клинических испытаний, их терапевтическая эффективность и показана перспективность дальнейшего использования.

Сконструированы пробиотики нового поколения - метаболические и комбинированные, что может стать новым направлением в разработке такого класса пробиотических препаратов.

Широта распространения среди населения РФ указанных ранее заболеваний стоматологического и гинекологического профиля, кожных покровов, гепатобилиарной системы свидетельствует о их социальной значимости. В виду этого представляется целесообразным решить проблему их лечения путем организации выпуска и насыщения российского фармакологического рынка сравнительно недорогими, эффективными и доступными для широких слоев населения разработанными и предлагаемыми для практического использования пробиотическими лекарственными средствами.

ВЫВОДЫ

1. Проанализирован современный уровень инфекционной заболеваемости в Российской Федерации, тенденции ее развития на ближайшее десятилетие и состояние рынка фармакологических препаратов, позволившие обосновать актуальность разработки и целесообразность внедрения в современную медицинскую практику для массового потребления эффективных пробиотических препаратов, созданных на основе различных видов микроорганизмов и продуцируемых ими комплексов метаболитов (биологически активных веществ).

2. Теоретически обоснована и экспериментально подтверждена принципиальная возможность создания нового класса пробиотических препаратов -метаболических (в том числе и многокомпонентных) и комбинированных пробиотиков, не уступающих по комплексу своих наиболее значимых биологических

свойств (биохимической и антагонистической активности, стимуляции клеточных и гуморальных факторов неспецифического иммунитета, протективному действию, терапевтической эффективности) пробиотикам на основе живых микроорганизмов.

3. Разработаны новые перспективные мягкие лекарственные формы на основе культур Bacillus subtilis и Lactobacillus plantarum и трех видов транскутанных проводников (тизоля, эфтидерма и кремнийтитанорганического гидрогеля) для лечения инфекционных и травматических повреждений кожных покровов.

На моделях инфекционных поражений кожных покровов доказана терапевтическая эффективность экспериментальных образцов фармакологических препаратов при инфекциях, вызванных золотистым стафилококком, пиогенным стрептококком, синегнойной палочкой. Установлено выраженное противоинфекционное и ранозаживляющее действие изучаемых препаратов. Лечебный эффект сопровождался значимым влиянием применяемых лекарственных форм на различные факторы клеточного и гуморального иммунитета (стимуляцией фагоцитоза, повышением концентрации циркулирующих иммунных комплексов, увеличением количества иммуноглобулинов А, Е, G, М, активности Т- и В-

клеточного звена иммунитета).

4. Сконструирован и предлагается для применения в стоматологии при различных воспалительных заболеваниях, в частности, при хроническом генерализованном пародонтите, новый пробиотический метаболический препарат дентозар, обладающий высокой антагонистической активностью в отношении условно-патогенной микрофлоры таких родов, как: Staphylococcus, Streptococcus, Pseudomonas, Veillonella, Neisseria, Actinomyces, Treponema, Fusobacterium, Proteus, Escherichia, Candida, позволяющий в короткие сроки устранять дисбиотические и воспалительные явления в тканях и органах полости рта.

Механизм действия препарата обусловлен специфическим влиянием биологически активных метаболитов, их бактериостатическими свойствами, высокой ферментативной активностью, противовоспалительным действием и стимулированием клеточных и гуморальных факторов неспецифического иммунитета.

5. Для нормализации дисбиотических нарушений влагалищного биотопа у гинекологических больных с бактериальным вагинозом, вагинальным кандидозом и неспецифическим вагинитом, с целью восстановления и поддержания нормальной вагинальной микрофлоры разработан и испытан бикомпонентный метаболический препарат фемивит на основе высокоактивных пробиотических штаммов бацилл и лактобацилл.

Положительное влияние препарата на динамику патологических процессов в полости влагалища выражается такими значимыми эффектами, как: исчезновение из вагинального секрета кокковых, дрожжеподобных и анаэробных микроорганизмов и установление однородной палочковидной грамположителыюй микрофлоры. Через 2-

3 недели после применения препарата происходит стойкое восстановление нормальной влагалищной микрофлоры, элиминация факультативной и облигатно-анаэробной микрофлоры, увеличение числа лактобацилл, исчезновение воспалительных явлений.

6. Создан экспериментальный образец принципиально нового комбинированного гепатопротектора гепатобиол на основе метаболитов и специально выбранного пробиотического штамма Bacillus subtilis В-9906, характеризующегося высоким уровнем продукции таких биологически активных веществ, как: белково-полисахаридный комплекс, свободные аминокислоты, пуриновые и пиримидиновые основания, витамины В2 и В6, протеолитические и амилолитические ферменты,-антибиотикоподобные соединения, а-интерферон.

При экспериментальном моделировании острых токсических гепатитов, вызываемых введением четыреххлористого углерода, выявлено существенное увеличение выживаемости лабораторных животных, для лечения которых использовали гепатобиол.

7. Установлено, что механизм гепатозащитного действия экспериментального образца препарата заключается в повышении устойчивости гепатоцитов к повреждающему воздействию экзотоксинов, стимулировании их пролиферативной и митотической активности, что сопровождается снижением в сыворотке крови уровня трансаминаз, щелочной фосфатазы, общего билирубина, уменьшением клеточной дегенерации и жировой инфильтрации клеток печени.

8. Разработанные экспериментальные образцы нового поколения, монокомпонентных (дентозар), бикомпонентных (фемивит) и комбинированных (гепатобиол) пробиотиков могут стать основой для создания нового семейства лекарственных средств и значительно расширить спектр патологических состояний, в отношении которых они могут применяться, и показаний к их назначению, что позволит решить ряд важных проблем современной фармацевтики и медицины.

В целом внедрение новых пробиотических фармакологических средств позволит обеспечить рынок эффективными, доступными для широких слоев населения, и сравнительно недорогими отечественными препаратами и рекомендовать их для лечения широкораспространенных и социально-значимых заболеваний, что является актуальной проблемой современного практического здравоохранен ия.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. В системе комплексной этиотропной, патогенетической, а также симптоматической терапии предусматривать и реализовывать мероприятия, направленные на регулирование эволюционно сложившихся симбиотических взаимоотношений "макроорганизм-микроорганизм". Для коррекции и восстановления нормальной микрофлоры таких биотопов организма человека, как: кожные покровы,

ткани и органы полости рта, вагинальная полость, использовать разработанные пробиотические препараты бацилакт, дентозар, фемивит.

2. Учитывая терапевтическую эффективность гелевого пробиотического препарат бацилакт, считаем, что показаниями к его применению являются инфицированные (вплоть до гнойно-некротических поражений) стафилококками, стрептококками и псевдомонадами поражения кожных покровов.

Препарат может назначаться и в качестве профилактического средства для предупреждения инфицирования травматических повреждений кожи.

3. Назначение метаболического препарата дентозар можно рекомендовать в качестве профилактического средства (для сохранения и коррекции микрофлоры полости рта) и для включения его в схему комплексного лечения хронического генерализованного пародонтита.

Препарат в жидкой лекарственной форме целесообразно применять для орошения полости рта по одной терапевтической дозе 3 раза в сутки в течение 7 дней.

4. Рекомендовать использование бикомпонентного метаболического пробиотика фемивит в качестве необходимого элемента в комплексной терапии при лечении инфекционной, воспалительной и трофической патологий, сопровождающихся дисбиотическими состояниями, у больных гинекологического профиля.

5. Разработанный пробиотик гепатобиол, обладающий выраженными протекторными свойствами, способностью защищать гепатоциты от повреждающего действия токсических веществ и стимулировать их пролиферативную и митотическую активности, целесообразно использовать как лечебное средство при острых токсических гепатитах.

Учитывая специфическое влияние гепатобиола на продуцирование эндогенного а-интерферона, считаем возможным рекомендовать его назначение при острых и хронических вирусных гепатитах.

6. С целью повышения в современной практической медицине эффективности проведения этиотропной антибактериальной терапии, особенно при заболеваниях, вызываемых возбудителями, резистентными к противомикробным препаратам, считаем целесообразным осуществлять одновременное назначение больным метаболических пробиотиков и антибиотиков.

7. Учитывая положительные протективные и иммуномодулирующие эффекты пробиотиков, в частности гепатобиола, предлагаем рекомендовать его в качестве профилактического средства и средства экстренной профилактики при повышении эпидемиологического уровня инфекционной заболеваемости, эпидемических вспышках или угрозе возникновения эпидемий, а также - для повышения иммунного статуса контингентов групп риска.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ АВТОРОМ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Забокрицкий, А.Н. Биоспорин - пробиотик, перспективный для решения актуальных задач медицины в современных условиях / А.Н. Забокрицкий, М.П. Морозов, И.А. Поберий, Н.А. Забокрицкий // Российский медицинский журнал. -М.: Медицина, 2007. -№4. - С.46-48.

2. Хонина, Т.Г. Местное антимикробное средство с регенерирующей активностью / Т.Г. Хонина, Г.А. Зобнина, Л.П. Ларионов, Т.Г. Бояковская, Н.А. Забокрицкий, Е.В. Шадрина, О.Н. Чупахин // VI Всероссийский научный семинар с молодежной научной школой : тезисы докладов. - Уфа, 2007. - С.247-249.

3. Забокрицкий, Н.А. Перспективы наружного применения пробиотического Геля-S в терапии инфекционных, травматических и ожоговых процессов кожных покровов / Н.А. Забокрицкий. Л.П. Ларионов // Материалы Российской научно-практической конференции, посвященной 70-летию ПГФА. - Пермь, 2007. - С.331-339.

4. Забокрицкий, А.Н. Перспективы создания нового гепатопротекторного препарата на основе спорообразующих бактерий / А.Н. Забокрицкий, П.Г. Васильев, О.В. Ладыгин, А.Ю. Грачев, Н.А. Забокрицкий И Аллергология и иммунология журнал. - М., 2007. - Т.8, №1. - С.138-139.

5. Ларионов, Л.П. Преимущества и перспективы гелевых основ различной химической природы для создания мягких лекарственных форм с местными пенетрирующими эффектами / Л.П. Ларионов, Т.Г. Хонина, С.Н. Киппер, Н.А. Забокрицкий, Т.Г. Бояковская, Г.Ф. Бадрутдинова, П.В. Сорокин, Е.В. Шадрина // Материалы Российской научно-практической конференции, посвященной 70-летию ПГФА. - Пермь, 2007. - С.356-359.

6. Забокрицкий, Н.А. Создание с использованием современных транскутанных проводников экспериментальных образцов новых лекарственных форм пробиотиков для наружного применения и их доклиническая оценка / Н.А. Забокрицкий // Фармакология - практическому здравоохранению : материалы III Съезда Фармакологов России. - СПб, 2007. — №1. - С. 1696.

7. Хонина, Т.Г. Средство для лечения воспалительных заболеваний слизистой оболочки полости рта / Т.Г. Хонина, Н.Д. Чернышева, Г.И. Ронь, Л.П. Ларионов, Н.А. Забокрицкий, Е.В. Шадрина, О.Н. Чупахин // VI Всероссийский научный семинар с молодежной научной школой : тезисы докладов. - Уфа, 2007. - С.249-251.

8. Larionov, L.P. The élaboration of new elementorganic hydrogels for pharmaceutical compositions of local and external application / L.P. Larionov, T.G. Khonina, P.V. Sorokin, E.V. Shadrina, A.A. Boyko, N.A. Zabokritskiy, G.V. Philippova, O.N. Chupakhin // Material of International conférence Pharmacology. Harbin, China, 10-13 June, 2008. -Harbin, 2008.-P.4-5.

9. Забокрицкий, Н.А. Внутриклеточное накопление аминокислот и глюкозаминов при глубинном культивировании пробиотических бактерий Bacillus subtilis и Bacillus licheniformis / Н.А. Забокрицкий, М.Ю. Шапошникова, В.Д. Королев, А.Ю. Грачев, В.В. Щелгачев, А.Н. Забокрицкий, П.Г. Васильев // Фармация и общественное здоровье : материалы Российской научно-практической конференции. -Екатеринбург, 2008. - С. 146-148.

10. Забокрицкий, Н.А. Возможности и перспективы клинического применения нового зубного эликсира "Дентозар" в медицинской практике в лечении стоматологических больных с воспалительными заболеваниями органов полости рта / Н.А. Забокрицкий, Л.П. Ларионов, Е.Ф. Гайсина// Адаптация биологических систем к

естественным и экстремальным факторам среды : материалы II Международной научно-практической конференции. - Челябинск, 2008. -Т.2. - С.88-92.

11. Забокрицкий, H.A. Доклинические исследования нового перспективного зубного эликсира / H.A. Забокрицкий, Е.Ф. Гайсина, Л.П. Ларионов // Медицина и здоровье : материалы Российской научно-практической конференции ПГФА, проводимой в рамках 14-ой международной выставки. - Пермь, 2008. - С.247-250.

12. Забокрицкий, H.A. Изучение влияния комплекса биологически активных веществ, продуцируемого клетками штамма В. subtilis 3/28 (В-3679), на культуру эксплантированных гепатоцитов белых мышей / H.A. Забокрицкий, О.В. Ладыгин, Л.П. Ларионов, В.В. Щелгачев, А.Ю. Грачев, А.Н. Забокрицкий, П.Г. Васильев // Фармация и общественное здоровье : материалы Российской научно-практической конференции. - Екатеринбург, 2008. - С.152-155.

13. Ларионов, Л.П. Изучение влияния комплекса биологически активных веществ, продуцируемого клетками штамма В. subtilis 3/28 (В-3679), на морфофункционалыюе состояние печени белых мышей / Л.П. Ларионов, А.Ю. Грачев, A.A. Должанов, О.В. Ладыгин, H.A. Забокрицкий, П.Г. Васильев, А.Н. Забокрицкий // Фармация и общественное здоровье : материалы Российской научно-практической конференции. - Екатеринбург, 2008. - С.202-205.

14. Забокрицкий, H.A. Изучение некоторых гепатопротекторных свойств штаммов спорообразующих бактерий рода Bacillus на модели острого токсического поражения печени белых мышей / H.A. Забокрицкий, Л.П. Ларионов // Медицина и здоровье : материалы Российской научно-практической конференции ПГФА, проводимой в рамках 14-ой международной выставки. - Пермь, 2008. - С.250-251.

15. Забокрицкий, H.A. Иммунологические аспекты доклинического применения современных пробнотических траисдермальных терапевтических систем как альтернатива антибиотической иммунодепрессии / H.A. Забокрицкий // Вестник РУДН, серия "Медицина". - М.:РУДН, 2008. -№7. - С.596-601.

16. Забокрицкий, H.A. Иммунологические аспекты перспективного применения в клинике новых экспериментальных образцов пробиотических препаратов в составе современных траксдермальных терапевтических систем / H.A. Забокрицкий, Л.П. Ларионов, Т.Г. Хонина, C.B. Суслонова // Медицина и здоровье : материалы Российской научно-практической конференции ПГФА, проводимой в рамках 14-ой международной выставки. — Пермь, 2008. — С.251-253.

17. Забокрицкий, H.A. Иммунологические основы перспективного клинического применения новых образцов пробиотиков с использованием современных траисдермальных терапевтических систем / H.A. Забокрицкий, Л.П. Ларионов, Т.Г. Хонина, C.B. Суслонова // Доказательная медицина - основа современного здравоохранения : материалы VII Международного конгресса. - Хабаровск, 2008. -С.64-67.

18. Ларионов, Л.П. Исследование токсикологических и ранозаживляющих свойств элементоорганических гидрогелей и местных фармацевтических композиций на их основе / Л.П. Ларионов, П.В. Сорокин, H.A. Забокрицкий, Г.Б. Филиппова, Е.В. Шадрина, A.A. Бойко, Т.Г. Хонина, О.Н. Чупахин // Фармация и общественное здоровье : материалы Российской научно-практической конференции. -Екатеринбург, 2008. - С.205-207.

19. Забокрицкий, H.A. Клинико-лабораторные исследования нового зубного эликсира "Дентозар" в терапии социально-значимых заболеваний полости рта / H.A. Забокрицкий, Е.Ф. Гайсина, Л.П. Ларионов // Доказательная медицина - основа

современного здравоохранения : материалы VII Международного конгресса. -Хабаровск, 2008. - С.67-70.

20. Забокрицкий H.A. Некоторые аспекты доклинических исследований нового зубного эликсира "Дентозар" / H.A. Забокрицкий. Е.Ф. Гайсина, Л.П. Ларионов // Доказательная медицина - основа современного здравоохранения : материалы VII Международного конгресса. — Хабаровск, 2008. - С.70-74.

21. Забокрицкий, H.A. Оценка острой токсичности комплекса биологически активных веществ, продуцируемых пробиотическими микроорганизмами рода Bacillus / H.A. Забокрицкий, В.В. Щелгачев, О.В. Ладыгин, M.IO. Шапошникова, АЛО. Грачев, А.Н. Забокрицкий, П.Г. Васильев // Фармация и общественное здоровье : материалы Российской научно-практической конференции. - Екатеринбург, 2008. -С.148-150.

22. Забокрицкий. H.A. "Фемивит" - новый российский перспективный препарат в терапии больных бактериальным вагинозом и неспецифическим кольпитом / H.A. Забокрицкий, А.Б. Бакуринских, Л.П. Ларионов, H.A. Уракова, A.A. Бакуринских // Доказательная медицина - основа современного здравоохранения : материалы VII Международного конгресса. — Хабаровск, 2008. - С.76-79.

23. Забокрицкий, H.A. "Фемивит" - новый российский перспективный препарат в терапии социально-значимых инфекций, передающихся половым путем / H.A. Забокрицкий, А.Б. Бакуринских, Л.П. Ларионов, H.A. Уракова, A.A. Бакуринских // Медицина и здоровье : материалы Российской научно-практической конференции ПГФА, проводимой в рамках 14-ой международной выставки. - Пермь, 2008. - С.246-247.

24. Забокрицкий, H.A. Экспериментальное изучение гепатопротекторных свойств штаммов пробиотических спорообразующих бактерий рода Bacillus при моделировании острого токсического поражения печени белых мышей / H.A. Забокрицкий, О.В. Ладыгин, Л.П. Ларионов, А.Ю. Грачев, В.В. Щелгачев, А.Н. Забокрицкий, П.Г. Васильев // Фармация и общественное здоровье : материалы Российской научно-практической конференции. - Екатеринбург, 2008. - С.150-152.

25. Забокрицкий, H.A. Возможность использования пробиотиков в лечении некоторых воспалительных заболеваний органов малого таза с точки зрения доказательной медицины / H.A. Забокрицкий, А.Б. Бакуринских, Е.В. Кащенко, A.A. Бакуринских // Фармация и общественное здоровье : материалы ежегодной Российской конференции с международным участием. - Екатеринбург, 2009. - Т1. -С.34-37.

26. Забокрицкий, H.A. Доклиническое исследования острой токсичности нового зубного эликсира "Дентозар" / H.A. Забокрицкий, Е.В. Кащенко, H.H. Малмыгина, Н.С. Швецова // Актуальные вопросы современной медицинской науки и здравоохранения : материалы 64-й Всероссийской научно-практической конференции молодых ученых и студентов с международным участием. - Екатеринбург, 2009. -С.451-452.

27. Волков, A.A. Изучение токсичности и безопасности в применении новой субстанции L-IV-99 / A.A. Волков, H.A. Волкова, H.A. Забокрицкий // Актуальные вопросы современной медицинской науки и здравоохранения : материалы 64-й Всероссийской научно-практической конференции молодых ученых и студентов с международным участием. - Екатеринбург, 2009. - С.447-448.

28. Забокрицкий, H.A. Изучение хронической токсичности нового фармакологического препарата - зубного эликсира "Дентозар" в эксперименте / H.A.

Забокрицкий, E.B. Кащенко, H.H. Малмыгина, Н.С. Швецова // Актуальные вопросы современной медицинской науки и здравоохранения : материалы 64-й Всероссийской научно-практической конференции молодых ученых и студентов с международным участием. - Екатеринбург, 2009. - С.449-451.

29. Забокрицкий, H.A. Клинические исследования нового зубного эликсира "Дентозар" в терапии социально-значимых заболеваний полости рта / H.A. Забокрицкий, Е.Ф. Гайсина, Е.В. Кащенко, H.H. Малмыгина, Н.С. Швецова // Инновационные технологии в биологии и медицине : научные труды X Международного конгресса «Здоровье и образование в XXI веке». - М.: РУДН, 2009. - С.426-428.

30. Забокрицкий, H.A. Клинические предпосылки к практическому применению пробиотического штамма Bacillus на основании результатов доклинических исследований по изучению гепатопротекторных свойств / H.A. Забокрицкий, Л.П. Ларионов, Е.В. Кащенко // Научно-практический журнал "Клиническая фармакология и терапия". - М., 2009. - №6 (дополнительный). -С.274-275.

31. Забокрицкий, H.A. Некоторые физиологические аспекты действия нового пробиотического препарата на состояние слизистой оболочки тонкого кишечника у лабораторных животных в эксперименте / H.A. Забокрицкий // Вестник Уральской медицинской академической науки. — Екатеринбург, 2009. -№2 (25). - С.278-279.

32. Забокрицкий, H.A. Новое средство индивидуальной гигиены полости рта "Дентозар" в терапии некоторых заболеваний полости рта / H.A. Забокрицкий, Е.Ф. Гайсина, Л.П. Ларионов, Е.В. Кащенко, H.H. Малмыгина, Н.С. Швецова // Фармация и общественное здоровье : материалы ежегодной Российской конференции с международным участием. - Екатеринбург, 2009. —Т2. - С.93-96.

33. Ураков, А.Л. Однократное кратковременное механическое сдавливание мягких тканей как "неведомый" фактор, способный изменить локальное действие лекарств / А.Л. Ураков, В.И. Витер, A.A. Касаткин, М.Л. Кашковский, H.A. Забокрицкий, Ю.С. Сюткина, М.В. Рязанцева И Научно-теоретический журнал "Фундаментальные исследования". - М.,2009. -№7. - С.64-65.

34. Забокрицкий, H.A. Перспективные возможности нового зубного эликсира "Дентозар" в доклинических исследованиях / H.A. Забокрицкий, Е.Ф. Гайсина, Л.П. Ларионов // Инновационные технологии в биологии и медицине : научные труды X Международного конгресса «Здоровье и образование в XXI веке». - М.: РУДН, 2009. -С.428-431.

35. Волков, A.A. Разработка фармацевтической композиции мягкой лекарственной формы на основе кремнийтитанорганического глицерогидрогеля и изучение её влияния на локомоторные функции экспериментальных животных при термическом ожоге / A.A. Волков, Л.П. Ларионов, Т.Г. Хонина, В.В. Алтухов, H.A. Забокрицкий, Е.В. Шадрина, М.В. Иваненко // Научно-практический журнал "Клиническая фармакология и терапия". — М., 2009. -№6 (дополнительный). — С.257-259.

36. Хонина, Т.Г. Синтез и биологическая активность кремнийтитан-органическнх глицерогидрогелей / Т.Г. Хонина, О.Н. Чупахин, Л.П. Ларионов, П.В. Сорокин, H.A. Забокрицкий, А.П. Суворов, Е.В. Шадрина, М.В. Иваненко // Химико-фармацевтический журнал. - М.:ФОЛИУМ, 2009. -Т.43, №2. - С.26-32.

37. Забокрицкий, H.A. Фармакологическое изучение некоторых свойств пробиотического штамма Bacillus / H.A. Забокрицкий // Актуальные проблемы фармацевтической науки и практики : сб. науч. трудов Всероссийской научно-практической конференции. — Владикавказ, 2009. - С.261-263.

38. Забокрицкий, H.A. Физиологические особенности применения нового эликсира для полости рта "Дентозар" как средство повышения местного иммунитета у пародонтологических больных / H.A. Забокрицкий, Е.В. Кащенко, H.H. Малмыгина Н.С. Швецова // Вестник Уральской медицинской академической науки. — Екатеринбург, 2009. -№2 (25). - С.279-280.

39. Забокрицкий, H.A. Физиолого-морфологические особенности фармакокинетики бикомпонентного пробиотического препарата / H.A. Забокрицкий, Т.Г. Хонина // Вестник Уральской медицинской академической науки. - Екатеринбург, 2009. -№2 (25). - С.280-282.

40. Забокрицкий, H.A. Доклиническая фармакологическая оценка токсичности, безопасности и эффективности нового зубного эликсира "Дентозар" / H.A. Забокрицкий, A.A. Бакуринских, Е.А. Бакуринских // Научн. журнал Биомедицина (ISSN 2074-5982). - М.:"Научный центр биомедицинских технологий РАМН", Х/2010. -№5. - С.87-89.

41. Забокрицкий, H.A. Коррекция дисбиотических нарушений при использовании средства интимной гигиены "Фемивит" / Л.П. Ларионов, H.A. Забокрицкий, М.А. Бакуринских, А.Б. Бакуринских // Научн. журнал Биомедицина (ISSN 2074-5982). - М.:"Научный центр биомедицинских технологий РАМН", Х/2010. -№5. -С.102-104.

42. Забокрицкий, H.A. Новое средство интимной гигиены Фемивит в коррекции воспалительных заболеваний органов малого таза / H.A. Забокрицкий, Л.П. Ларионов, А.Б. Бакуринских // Научн. журнал Биомедицина (ISSN 2074-5982). - М.:"Научный центр биомедицинских технологий РАМН", Х/2010. -№5. - С.85-87.

43. Волков, A.A. Разработка и доклиническое изучение инновационных композиций мягкой лекарственной формы на основе диметилдиглицероксисилана при термической травме / A.A. Волков, Л.П. Ларионов, H.A. Забокрицкий, Т.Г. Хонина, H.H. Тосова, Е.В. Федотова, A.A. Мишечкина, В.Е. Кочеткова, Е.В. Тарасова // Научн. журнал Биомедицина (ISSN 2074-5982). - М.:"Научный центр биомедицинских технологий РАМН", Х/2010. -№5. — С.71-74.

44. Забокрицкий, H.A. Фармакокинетические особенности системного распределения спорообразующих микроорганизмов мягкой лекарственной формы пробиотиков рода Bacillus / H.A. Забокрицкий, Т.Г. Хонина, Л.П. Ларионов // Экспериментальная и клиническая фармакология. - М.: "Фолиум", 2010.-№5, —С.41.

45. Ураков, А .Л. Экспериментальное доклиническое изучение показателя кислотности гнойных экссудатов / А.Л. Ураков, Б.Г. Юшков, Р.И. Таджиев, Л.П. Ларионов, H.A. Забокрицкий // Фармация и общественное здоровье : материалы ежегодной конференции с международным участием. - Екатеринбург, 2010. - С. 101104.

46. Ураков, А.Л. Экспериментальное изучение нового антисептического средства / А.Л. Ураков, Б.Г. Юшков, H.A. Забокрицкий, Р.И. Таджиев, Л.П. Ларионов, В.Б. Дементьев, С.А. Кривопалов // Научн. журнал Биомедицина

(ISSN 2074-5982). - М.:"Научный центр биомеднцинских технологий РАМН", Х/2010. -№5. - С. 140-142.

47. Ураков, АЛ. Гипертермичность, гипергазированность и гиперщелочность растворов как факторы пиолитической активности / А.Л. Ураков, H.A. Уракова, Б.Г. Юшков, H.A. Забокрицкий, М.Ю. Гаускнехт // Вестник уральской медицинской академической науки. - Екатеринбург, 2011. -№ 1 (33). - С.84-87.

48. Забокрицкий, H.A. Клинико-лабораторный анализ применения нового зубного эликсира дентозар у больного пародонтитом / H.A. Забокрицкий, Е.Ф. Гайсина, А.И. Базите, A.A. Бакуринских, Л.П. Ларионов, Е.А. Бакуринских, А.Б. Бакуринских // Фармация и общественное здоровье : материалы ежегодной Российской конференции с международным участием. - Екатеринбург, 2011. - С.300-302.

49. Забокрицкий, H.A. Мониторинг пародонтологического и гигиенического статусов при применении зубного эликсира Дентозар / H.A. Забокрицкий, Е.Ф. Гайсина, A.A. Бакуринских, Л.П. Ларионов, Е.А. Бакуринских // Фармация и общественное здоровье : материалы ежегодной Российской конференции с международным участием. - Екатеринбург, 2011. - С.304-306.

50. Забокрицкий, H.A. Ремоделирование пародонта гигиеническим эликсиром "Дентозар" при хроническом генерализованном пародонтите средней степени тяжести / H.A. Забокрицкий, Е.Ф. Гайсина, Л.П. Ларионов // Фармация и общественное здоровье : материалы V Международной научно-практической конференции. - Екатеринбург, 2012. - С.355-358.

51. Забокрицкий, H.A. Биотехнологические аспекты разработки и конструирования экспериментальных образцов пробиотических препаратов на основе транскутанных проводников / H.A. Забокрицкий // Вестник Башкирского университета (ISSN 1998-4812). - Уфа, 2013. -Т.18, №3. - С.730-734.

52. Забокрицкий, H.A. Иммунофармакологическая оценка влияния экспериментального образца биогепатопротектора на некоторые показатели гуморального иммунитета / H.A. Забокрицкий // Российский иммунологический журнал (ISSN 102 8-7221).-М.: Наука, 2013.-Т.7 (16), №2-3 (1). - С.41-43.

53. Забокрицкий, H.A. Сравнительная оценка гепатопротективной активности бактериальных культур некоторых пробиотических микроорганизмов на выживаемость лабораторных животных / H.A. Забокрицкий // Российский иммунологический журнал (ISSN 1028-7221). - М.: Наука, 2013. -Т.7 (16), №2-3 (1). - С.38-40.

54. Забокрицкий, H.A. Актуальные фармако-биологические аспекты разработки, конструирования и создания инновационного биогепатопротектора комбинированного пробиотического препарата нового поколения / H.A. Забокрицкий // Здоровье и образование в XXI веке : журнал научных статей. М.:СОМВОЗ, 2013. -Т. 15, №1-4. - С.64-68.

ПАТЕНТЫ

55. Пат. 2336877 РФ Местное антимикробное средство / В.Н. Чарушин, Т.Г. Хонина, О.Н. Чупахин, Н.Д. Чернышева, Г.И. Ронь, Л.П. Ларионов, Г.А. Зобнина, С.А. Зобнин, Б.М. Браташ, H.A. Забокрицкий, Е.В. Шадрина. - Москва, 2008. - 13 с.

56. Пат. 2326667 РФ Средство для лечения гнойно-воспалительных заболеваний кожи и мягких тканей различной этиологии / В.Н. Чарушин, Т.Г. Хонина, О.Н. Чупахин, Л.П. Ларионов, Г.А. Зобнина, С.А. Зобнин, Б.М. Браташ, Т.Г. Бояковская, H.A. Забокрицкий. - Москва, 2008. - 14 с.

57. Пат. 2363445 РФ Зубной эликсир "Дентозар" / А.Н. Забокрицкий, М.П. Морозов, Л.П. Ларионов, H.A. Забокрицкий, В.В. Шляпников. - Москва, 2009. -12 с.

58. Пат. 2367454 РФ Средство интимной гигиены "Фемивит" / А.Н. Забокрицкий, М.П. Морозов, H.A. Забокрицкий, Л.П. Ларионов, В.В. Шляпников. -Москва, 2009.- 11 с.

59. Пат. 2382046 РФ Водорастоворимые кремнийорганические производные полиолов и гидрогели на их основе / О.Н. Чупахин, Т.Г. Хонина, Л.П. Ларионов, Е.В. Шадрина, A.A. Бойко, H.A. Забокрицкий, A.A. Волков. - Москва, 2010. - 22 с.

60. Пат. 2401116 РФ Ранозаживляющий пробиотический препарат / H.A. Забокрицкий, Т.Г. Хонина, А.Н. Забокрицкий, Л.П. Ларионов, В.В. Шляпников, С.В. Суслонова, H.A. Уракова. - Москва, 2010. - 10 с.

61. Пат. 2389013 РФ Способ экспресс-оценки промывочной активности лекарств / АЛ. Ураков, Н.С. Стрелков, А.Ю. Толстолуцкий, H.A. Уракова, H.A. Забокрицкий. - Москва, 2010. - 8 с.

62. Пат. 2429869 РФ Средство "Гепатобиол", обладающее гепатопротективным действием / H.A. Забокрицкий, О.В. Ладыгин, А.Н. Забокрицкий, М.П. Морозов, H.A. Уракова, А.Л. Ураков. - Москва, 2011. - 14 с.

63. Пат. 2417102 РФ Фармацевтическая гелесодержащая композиция для местного и наружного применения / О.Н. Чупахин, Т.Г. Хонина, Л.П. Ларионов, П.В. Сорокин, М.В. Иваненко, A.A. Бойко, М.С. Коллерова, Г.А. Зобнина, H.A. Забокрицкий. — Москва, 2011. - 10 с.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

С. - грибы рода Candida

Е. - бактерии рода Escherichia

Р. - бактерии рода Proteus

Ps. - бактерии рода Pseudomonas

S. - бактерии рода Staphylococcus

Sal. - бактерии рода Salmonella

St. - бактерии рода Streptococcus

AJIT - аланинаминотрансфераза

АОК - антителообразующие клетки

ACT - аспартатаминотрансфераза

БАВ - биологически активные вещества

БВ- бактериальный вагиноз

ГВЗ - гнойно-воспалительные заболевания

Е - эритроциты барана

ЕАС - эритроциты барана+антиген+комплемент ИЛ-1 - интерлейкин-1

КТГГ- кремнийтитанорганический глицерогидрогель

КЖ — культуральная жидкость

KMC - концентрированная микробная суспензия

КОЕ - колониеобразующая единица

МИБП - медицинский иммунобиологический препарат

МПА - мясо-пептонный агар

МПБ - мясо-пептонный бульон

НПК - нейтрофилы периферической крови

HCT - нитросиний тетразолий

OAK - общий анализ крови

ОБАСК - общая бактерицидная активность сыворотки крови

ПМ - перитонеальные макрофаги

РА — рецепторный антагонист

РАИЛ-1 - рецепторный антагонист интерлейкина-1

РОК - розеткообразующие клетки

РСЛЛ - реакция специфического лизиса лейкоцитов

СП - санитарные правила

СФМ - система фагоцитирующих мононуклеаров

УПМ - условно-патогенная микрофлора

ФА - фагоцитарная активность

ФИ - фагоцитарный индекс

ФП - фагоцитарный показатель

ЦИК - циркулирующие иммунные комплексы

ЯСК - ядросодержащие клетки

LD50 -доза, вызывающая гибель 50% инфицированных животных

На правах рукописи

Забокрицкий Николай Александрович

ОБОСНОВАНИЕ НАПРАВЛЕНИЙ В РАЗРАБОТКЕ И ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОМ ИЗУЧЕНИИ НОВЫХ ФАРМАКОЛОГИЧЕСКИХ ПРЕПАРАТОВ НА ОСНОВЕ ПРОБИОТИКОВ И ИХ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ПРОДУКТОВ

14.03.06 - Фармакология, клиническая фармакология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук

Челябинск - 2014

Подписано в печать 25.02.2014 г. форма 60x84 '/„, Усл. печ. л. 2,0. Тираж 300 экз. Отпечатано с готового оригинал-макета в типографии ООО «Издательство УМЦ УПИ» Заказ № 5039 620078, г. Екатеринбург, ул. Гагарина, 35а, оф.2