Автореферат и диссертация по медицине (14.00.36) на тему:Новые подходы к оценке системы комплемента человека и животных: теоретические и практические аспекты

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ УССР КИЕВСКИЙ ОРДЕНА. ТРУДОВОГО КРАСНОГО ЗНАМЕНИ ВДШЦИИСКИИ ИНСТИТУТ им. акад. А.А. БОГОМОЛЬЦА

На правах рукописи

I, /¿НИ>

I -у

чг

КОВАЛЕВ БОРИС МАКАРОВИЧ

УДК 612.017.11.576.8.037.37

хг

НОВЫЕ ПОДХОДЫ к ОЦЕНКЕ СИСТЕМЫ КСМШГЕМЕНТА ЧЕЛОВЕКА И ЯИВОТНЫХ : ТЕОРЕТИЧЕСКИЕ И ПРАКТИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ

( 14.00.36 - аллергология и иммунология ) V/

' -3'

Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук

Киев - 1989

Гл

Рабата выполнена на кафедре микробиологии с иммунологией Владивостокского государственного медицинского института '

О ф и ц и алькые оппонент :

1. Т.В. Голосоза, д.м.н., профессор.

2. Э.В. Гшлинг, д.м.н., профессор,

3. В.А. Малышев, д.м.н., с.н.с.

Ведущая организация:

2-й Московский ордена Ле1шна государственный медицинский институт юл. Н.И. Пирогова.

Защита диссертации состоится "_"_IS89 г.

в 13 vacos 30 мзцуу на заседании сшцишшзйрсшанного Совета Д.088.13.06 при Киевском:, ордена Трудового Красного Знамен« медицинском институте им. акад. А.А. Богомольца ( Киев 4,,ул. Репина 23, аудитория каф. пропедевтики детских болезней ).

Отзыв на автореферат высылать по адресу: 252057 г. Киев 57, пр. Победы 34, санитарно-гигиенический корпус.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке института но адресу: Киев 57, ул. Зоологическая, I.

Автореферат разослан "_" 1989 г.

Ученый секретарь специализированного Совета доктор медицинских наук В.Г. Бордовое

Актуалмгость нроблеш. >ХТ1 съезд и Программа партии в новой е редакции поставляй перед органами здравоохранения ковке зада-и развития науки и внедрения ее достижений в народное хозяйство, сновная из них - сиияенле заболеваемости и смертности - не моет бить решена без всестороннего изучения иммунологических про-ессов и их г.:еста в жизнедеятельности человека. Научные исследо-атш в этом направлештл показали, что -проявление тонной систе-и, основная функция которой - обеспечение индивидуальности и це~ остяоетя организма. тесно связано с эффекторнши механизмами, реди которое система комплемента занимает одно из первых мест.

Под коглиемептом пстпи.пот комплекс пвазмешшх протеинов крои, пршж/лидях а:»ивноо участие в поддержании им/унного гоглео-газа (Кулъберг, 1935; :11,зИе1 и-Ь а1., 1932;. Киа1пс^, 1935). цнако вопрос о в.'пшлпп данной системы а ее компонентов на фор-ирова'низ ряда фязясшогкческих и патологических процессов в ор-акпздге из учен недостаточно. Мезду тем, среди причин заболевае-ости у человека значительное место могут занимать врожденные ли прнобротеннпо нзигнепия функциональной активности когдплемеп-а и его компонентов.

Среди показателей комплементарной активности в организме при кфекцион:«« I! неоаластических заболеваниях, болезга иг.гдуннюс эшлс-ксов н аллергических реакций большое внимание уделяется амолитичэепсй активности сыворотки крови как самом доступном зсте в клшшвекои практике, Спиаение этого показателя на фоне шие названной патологии считают следствием несостоятельности и'Стемч-коачлеменм,. Напротив, высокий ее уровень расценивают ак мобилизацию последнего против инфекций и других комплемент-ависишх заболеваний. Однако такая интерпретация результатов зшлитической активности комплемента ошибочна. Расшнриваиеся в эследние годи возможности изучения функционального состояния астемы комплемента в организгле (ШгиЪегвеп еъ а1. ,1984) и соб-гвенные исследовашш (Ковалев, 1988) создают предпосылку для го решения. Они позволяют повысить донозологическу» диагности-7 заболеваний с. врокдешшл или приобретенным дефицитом кошяе-знта, его гиперактивированпем и решать вопросы проведения про-ллактичоских и лечебных мероприятий.

Исследования последних лет показали, что в развитии хрони-эского глог;9рулонефрата, ревматоидного артрита я других кол-

лагенозов принимает участие специфические комплеыеитактивирующие структуру (Кормейн, Асгар, 1983; Иегер, 1986). Это дало основание использовать определение нефритического и ревматоидного факторов, иммунных комплексов и других веществ для прогнозирования течения и исходов этих заболеваний. Профилактическое направление советской медицины делает еще более актуальной определение степени функционального активирования комплемента в организме, разработку методических подходов направленных на долгосрочное прогно-з:грование здоровья людей с ранней коррекцией выявленных нарушений.

Несмотря на успехи, достигнутые в изучении физико-химических свойств системы комплемента, биологической активности в физиологических и патологических реакций, вопрос об шлуномоду^щпрщем его действии до настоящего времени остается открытым. Однако работы, проведенные в этом направлении ( НийИ, 1283; эитегу, ЬасЬ-шап, 1984; Когеап е* о1., 1985), свидетельствуют, что полноцен-иммунный ответ невозможен без участия в этом процессе комплемента и его компонентов. Поэтому расшифровка механизмов формирования иммунологических реакций в организме плода и неонаталъ-но.м периоде у новорожденных является решающим обстоятельством при изучении данного вопроса.

Целью исследования явилось изучение современных подходов в оцегже системы комплемента человека и животных, разработка и вно-дрекие в практику здравоохранения эффективных методов прогнозирования латентной инфекции, поражения щитовидной железы и аллэр- , гических реакций; используя разработанные методы определения степени активирования классического и альтернативного пути комплемента в организме, определить меру участия этих звеньев в формировании проткзоинфекционной защиты у новорожденных о незрелой иммунной системой и в патогенезе ряда заболеваний. В соответствии с этим определены следующие задачи:

- Разработать универсальный показатель оценки степени активирования классического и альтернативного путей системы комплемента в здоровом п больном организме вне зависимости от способов выявления уровня его гемолитической активности в сыворотке крови, .

- Выяекть возможную диагностическую и прогностическую связь этого показателя с латентной инфекцией у беременных аеацин, рожениц и их новорожденных, меру участия комплемента и его звеньев'в

формирования иммунологического равновесия в системе мать-плод и противокнйекционной защите у детей с незрелой иммунной системой.

- Установить тацунохкшческую и биологическую сущность терг.тола-бидьного протеинового фактора сшзоротки крови, обусловливающего феномен прозони (<Ш) коготлементарнои активности и изучить его взаимосвязь с патологией щитовидной келезы и атоническими реакциям организма.

- Изучить степень участия классического и альтернативного пути комплемента в становлении специфического нлэдутюго ответа.

- Разработать совреыешше подходи в оценке клеточного и гуморального звена оиотеш ко.мгшемента и лизоцима, определить целесообразность использования сыворотки крови китов как промкплен-ного сырья для производства сухого комплемента.

Основное положения виюск.ше на защиту:

1. Исхода из критериев (¿ункщюнального состояния систеш комплемента in vivo , только показатель активирования его в организме (АС'О), предложенный и апробированный автором, вне зависимости от методов определения гемолитической активности сыворотки крови кокет наиболее объективно отражать степень участия ко:л-1ие(яента в патологических и защитных реакциях организма. Увеличение показателя ЛС10 у беременных яешцин, ронениц и родильниц

в большом, проценте случаев.свидетельствуем о скрытом икфэкцксн-ноп процессе, который является основной причиной в формировании внутриутробной и ностнатальной патологии у ребенка.

2. Низкий уровень гемолитической активности (ГА) комплемента в пуповкиноИ сьпзоротке крови новорожденных и высокий показатель АО'0 у их матерей является следствием не дефицита синтеза его компонентов в организме мода, а мерой участия ко:.шлеглецта в формировании иммунологического равновесия в системе гяать~ялод„

3. Динамика изменений ГА у ребенка в неонаталъном периоде обусловлена особенностями активирования классического и альтернативного путей кошлешнта в рожденном организме ребенка. На фоне незрелой тзмушгой системы альтернативный путь и лнзоцам занимают одно из главных шст в иротиЕош1фекцио£шой защите новэ-рсндекннх. Но псходаоцу уровню этих параметров можно диагностировать группу повшюнного ряска детей к инфекционной патологии

в неонатаяьном периоде.

4. При йзуч?Ш!Л reMOJoramcicoii активности сыворотки крови че-

лозека обнаружен ранее неизвестный термолабильный, генетически детерминированный протеиновый фактор, обусловливающий феномен прозоны ко.мшге.менгаркой активности, Б большом проценте случаев он регистрируется в группе лиц с аллергически® реакциями и узловатом зобом щитовидной яелезы, среди которых аутоиммунные процессы занимают.одно из первых мест.

Одна ::з наиболее вероятных причин связи между протеиновым фактором и данной патологией мы видам в чрезмерном активировании им> комплемента по пути реактивного лизиса с последующим формированием цитологического мембраноатакуэдего комплекса (С5Ь - С9). Наличие в сыворотке крови термолабильного протеина, обусловливающего феномен прозоны комплементарной активности, мсжет быть диагностическим и прогностическим критерием вышеназванной патологии.

5. Экспериментальное изучение участия классического и альтернативного путей комплемента в становлении спецщуйчбского иг»ыунно— го ответа, демонстрируя их целесообразность, в то же время показывает, что индифферентность систеш комплемента, отсутствие ее активированных компонентов сопровождается снижением интенсивности антителогенеза к ткмусзависидш антигенам»

6. Определена практическая значимость 'китового комплемента для использования его в диагностических иммунологических реакциях наряду с комплементом, полученным из сыворотки крови морских свинок.

7. Оценка различных звеньев систеш комплемента долана быть комплексной. Внедрение простых, доступных лабораторных методов обследования, адекватных показателей в клиническую практику может способствовать решению наиболее значимых медико-биологических проблей," расшифровке этиологических и патогенетических' механизмов патологических процессов, протекающих с дефектом комплемента или извращенной активностью последнего, поиску наиболее рациональных способов лечения и профилактики заболеваний..

Научная новизна полученных результатов. В работе впервые:

I. Ка основании всестороннего изучения гемолитической актив-кости сывороточного комплемента наш предложен и научно обоснован единый тест функциональной деятельности комплемента и непосред-( ствекнкй критерий степени участия его в защитна* и патологических реакциях организма - показатель активирования ко;,шлемента в организме (АС'О).

2. Обнаружена тесная, пршопропорцяональная зависимость г.те:::— ду (¡функциональной активностью комплемента и уровнем сывороточного лизоцима в организме. Нарушение указанной взаимосвязи сопровождается явной и скрытой инфекционной патологией, что сообщает ей диагностическую и прогностическую значимость.

3. Предложена гипотеза о том, что низкий уровень гемолитической активности классического и альтернативного путей в пупорлш-иой крови новорожденных - результат непосредственного участия комплемента и его компонентов в формировгчии иммунологического равновесия в системе мать-плод.

Установлено, что антимикробную защиту у детей с незрелой иммунной системой определяют альтернативный путь активирования комплемента и лизоцим, которые без специфических антител способны распознавать и элиминировать чужеродные агенты из организма.

4. При изучении гемолитической активности сывороточного комплемента обнаружен ранее неизвестный феномен "прозоны" его активности, который связан с присутствием в крови генетически обусловленного протеинового фактора, 0 помощью гистологических исследований показано» что наличие этого фактора в крови сопровождается деструктивными изменениями тиреовдных фолликулов и гипсхдушсдаей щитовидкой велезы. Последнее рассматривается как защитная реакция организма на гиперфункции данного органа.

6. Обнаружена связь протеинового фактора сыворотки крови с аллергическими заболеваниями организма, которая свядете.рствует о возможности использования феномена прозоны для диагностики и прогнозирования этого патологического процесса.

6» Определена мера участия классического и альтернативного пути комплемента в иммунном ответе; она продемонстрировала их ш.муномодулирукщие свойства, на фоне реакции организма на тимус-зависшше антигены.

7. Разработаны методические подходы определения клеток продуцентов основных кошонентов комплемента и лизоцима для определения функциональной полноценности системы в норме и патологии. Изучена сыворотка крови китов и доказана возможность использования ее в качества источника для получения в промышленном масштабе сухого комплемента, пригодного при использовании его в иммунологических реакциях.

Научно-практическая ценность результатов работы определяется тс:,г.: ноию-я: дкагпосткческкш возтлскностямп, которые бшпх продемонстрирован!: при изучении клеток-продуцентов основных компонентов ког.яле.макта, гемолитической активности классического и альтернативного путей в сыворотке крови, синтеза метка-®: лизоцима и его уроз:щ з биологических жидкостях организма. 3 частности, при этом!

- продажен и апробирован универсальный показатель активирования кодшлемента в организме (ЛС'О), позволяющий независимо от метода-, ческих подходов, оценивать йуккциокальнке преобразования этого косого детекторного звона, как при поддержании гомеостаза, так и развитии патологического процесса;

- установлены закономерности взаимоотношений меяду активированием комплемента и количество;.: спвороточного лизоцима, которые, с учетом показателя АС'0, помогают диагностировать начальную, латентную йорглу инфекционного заболевания и своевременность профилактических к лечебных мероприятий;

- в настоящее врегля существует ряд гипотез, предполагающих фор-шрование иммунологической гкпо - хг ареактквностп у беременных rúíüimi к плоду, за счет маскировки эмбрионального антигена белками материнского происхождения, высокого уровня гормонов, создания иункциональной границы мезду тканями матери л плода, юиунодепрес-сивной роли альфа-фотопротеипа и других эмбриоспецгдричееких белков. Эти сакторн определяют такую реакцию, по не исключают участил других механизмов. В данной работе выдвигается гипотеза об участии комплемента в формкровании иммунологического равновесия в системе иать-плацента-плод. Исследование в этом направлении особенно важно при установлении пери^ташюй патологии,*

- обнаружен и обстоятельно изучен ранее неизвестный феномен про-зонп ко;,элементарной активности сыворотки крови, обусловленный термолабильныл фактором, который, во-первых, в большом проценте случаев дает представление о предрасположенности лиц к медикаментозной аллергии, о непосредственном участии комплемента в •формировании аутоиммунного узлового поражения щитовидной железн; во -вторпх, является экспресс-методом ранней индикации данной патологии;

- определены антшеомшгементарные к гемстсксические свойства трияоаа-Б, применяемого при заболеваниях, сопровождающихся избытком саней кальция в организме. Он в концентрации 0,48 мкг/шг '•

макет применяться как антикомплементарное средство при профилактике состояний, развивающихся на фоне активирования классического пути комплемента. Взаимодействие трнлона-Б с эритроцитами крови з дозе, равной 2,4 мкг/кл и вше, сопровождается лизисом последних за счет присущих ому в этой концентрации гемотоксических свойств;

- всесторонние исследования завершились решением такой утилитарной задачи, как падение комплемента из крови китов и апробация его в иммунологических реакциях.

Внедрение з практику. По материалам работы изданы методический рекомендации "Определение степени активирования комплемента в организме в норме и патологии", Владивосток, IS88 г., получено авторское свидетельство на изобретение I2025S2 "Способ диагностики узлового поражения щитовидной нелезы" (соавт. З.К.Булгаков, С. П.КоЕалева), авторское свидетельство на изобретение Jf- 686732 " Способ' получения комплемента" (соавт. И.С.Мотавкина и др.), рационализаторское предложение отраслевого значения МЗ РС'ЮР Z C-I2SI "Способ приготовления высокоактивного комплемента" (соавт. U.C. Мотавкпна), a 0-IC0I "Микрометод количественного определения ли-эоцшда в сыворотке крови и других биологических нидкодкостях" ( соавт. Н.С.Мотавкина, А.С.Шаронов), J5 0-1632 "Микрометод определения коглплемента в снворотке крови организма человека и животных" (соавт. то яе), монография "Штрометоды в иммунологии", Владивосток, 1967 г. (соавт. Мотавкина, Шаронов). Результаты исследований внедрены в клинике детских болезней медицинской академии ГДР г. Эрзурт, 'Одесском КШ1ВЭ им, К.И.Мечникова, в Горьковском НШ1КВ 1,13 PCSOP, в Гродненском медицинском институте, на кафедре микробиологии Пермского, Киевского и Владивостокского мединститутов.

Апробация таботы. Материалы диссертации доложены и обсуждены ta Всесоюзном симпозиуме по токсоплазмозу г.Москва, 1971, 1975 гг. ia Ш Пленуме совета СФ АМН СССР по проблеме иммунологии, Владп-зосток, 1975 г., на Всесоюзном симпозиуме по биологическим проблемам Севера, Петрозаводск, IS76 г., на Всесоюзном симпозиуме г. )мск, IS76 г., на I Всесоюзной конференции, г.Новосибирск, 1977 г. :а Всесоюзном симпозиуме по конституциональному иммунитету г. Ле-шнград, 1977 г., «а Республиканской и Всесоюзной коррекциях г. Владивосток, 1981, I9S3 гг., на Мелдународном конгрессе, г.Прага, :932 г., на Всесоюзном съезде детских врачей г. Иваново, 1937 г.,

на Всесоюзной конференции по комплементу, г. Киров, 1937 г., на Республиканской конференции по проблемам человек-океан, г. Владивосток, 1938 г.

Структура диссертации. Диссертация состоит из введете, обзора литературы, 6 глав собственных исследований, общего заключения и выводов. Работа излскена на 230 станицах машинописного текста и иллюстрирована 40 рисунками и 27 таблицами. Список литературы со-дзрякт 52 отечественных к 228 зарубежных источников. Приложение ■ имеет 8 актов внедрения.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Сногокомпонент ная система комплемента является'главным гуморальным ззьпом неспецифической защиты организма, Она первая взаимодействует с генетически чужеродными агентами и играет важную роль в сохранении его гомеостаза. Поэтому знание степени ее функционального активирования в здоровом и больном организме, дает нужную информацию клиницистам .при определении стадии инфекционного процесса, выборе правильного подхода к лечению и профилактике заболеваний.

Комплемент сыворотки крови человека и животных активируется, в основно-.., комплексом антиген-антитело и обусловливает ряд биологически важных феноменов. Исходя из этого, на протяжении десятилетий ^нкциональная полноценность его в организме оценивается с" помощью косвенного показателя - гемолитической активности (ГА) сыворотки крова по отношению к сенсибилизированным эритроцитам барана. Однако, оперируя ГА нельзя дать истинную оценку степени активирования комплемента в организме. Основное, что мешает этому,- многочисленность способов определения ГА, а самое"главное - величина данного показателя всегда находится в прямой зависимости от количества компонентов комплемента, не задействованных в процессе его активирования. В связи с этим мы предлагаем (Ковалев, 1987) объективный показатель активирования комплемента (С') в организме (АС'О), который выражается в условных единицах и является частным от деления среднего уровня ГА сыворотки крови здоровых ладей-доноров (ГАС'Д) и исследуемой сыворотки (ГАСИ),

То есть АС'О г= ГАС'Д (не менее 30) = услов< од<

ГАСИ

3 здоровом организме активирование компонентов комплемента ь'аходатся под непосредственны:.; контролем их иыактиваторов. Они

обеспечивает физиологический баланс биологически активных ве -ществ, необходимый для поддержания гомеостаза. IIa этом основании А.С'0 у здоровых людей (средний показатель) равен единице. Однако равновесие между этапами активирования и инактивированпя в системе комплемента, сложившиеся в процессе эволюции, макет нарушаться. Увеличите степени активирования комплемента наблюдается при инфицировании организма бактериями и вирусами, врожденной или приобретенной недостаточности ее ингибиторов, образовании комплексов антигек-антитело, появления в сыворотке с :ецифических комплеглент-активируздих структур. Повышенное вовлечение в процесс активирования пнтактннх компонентов приводит к снижению ГА комплемента за счет уменьшения н е задействованных его протеинов, составляющих основу данного параметра. Следовательно, в указанной ситуации показатель АС'0 у людей с патологией будет превышать уровень такового у здоровых людей. Например, ГАС'Д равна 68,9 гем.ед., ГАСИ сыворотки крови человека на фоне инфекционного процесса - 48,6

гем.ед., тогда АС0 = = 1,41 услов.ед. В этом случае

48,6 гем.ед.

система комплемента биологически активна по отношению к возбудителю и принимает непосредственное участке в его элиминации из организма, В то время, когда комплемент бездействует и его компоненты не активируются, снижение ГА сыворотки крови не происходит. Сна даже повышается за счет накопления свободных компонентов, синтезируемых клетками организма. Показатель АС*0 в этом случае будет снижен или равен таковог.у у здоровых людей-дсноров. Например, если Г АО 'д равен 68,9 гем.ед., ГАСИ - 82,6 гем.ед., то ACO = ^^ШтЦ; = 0,83 услов.ед. В данном примере ACO указывает на то, что комплемент бездействует и не препятствует инфекционному агенту. При врожденном-или приобретенном дефиците его компонентов показатель АС»0 находится на. низком уровне ели равен нули. Доказательством правомочности предлагаемого над® подхода для определения степени активирования комплемента в организме человека в норме и патологии могут служить результаты, представленные в табл. I. Они достоверно показывают, что с помощью ГА, установленной разными способами, нельзя составить объективного представления об участии комплемента в патологическом процессе. Это достигается при использовании показателя АС'О. Независимо от методики регистрации ГА сыворотки крови по показателя

Таблица I

функциональная активность комплемента в разных -группах обследуемых людей, установленная по гемолитического тесту и показателю АС'О

Число •Уровень ге- Показатель

Группы обследованных обследо- молитической АО'О в ус-

людей ванных активности комплемента лов. ед. ( М ± ш )

в геи. ед. ■

( М ± п )

+ Ддоровые лзди-доноры 200 66,7 ± 0,8 1,0 ± 0,02

- Здоровые люди-доноры НО 53,7 ± I»6 1,0 ± 0,01

" Здоровые люди-доноры 90 77,3 ± i.s 1,0 ± 0,04

- Беременные нениршы 66 51,2 + 1,4 1,04 ± 0,02

- Беременные венщинк ин-

фицированные токсогшаз 78 49,3 ± 1,8 1,11 ± 0,03

дами

" Роаеницц 85 54,2 ± 1.5 1,42 ± 0,12

" Еенщины, родившие де-

тей с инфекционной 43 48,9 ± 1.5 1,69 ± 0,07

патологией

" Яенщинн родившие здо- 42 54,2 ± 1.8 1,42 ¿ 0,13

ровых детей

- Туберкулезные больные 49 со + 2,4 1,15 ± 0,09

- Психические больные 52 45,5 I 1.8 1,18 + 0,04

- Психические больные

инфицированные ток- 97 43,7 ±1.6 1,25 ± 0,06

соплазмами

- Психические больные с 89 38,9 ±1,3 1,38 ± 0,04

туберкулезной патол.

+ Больные инфарктом миокарда 94 52,6 ± 1.6 1,03 ± 0,05

+ 1-2 недели болезни 18 51,7 ± 2,2 1,06 ± 0,07

+ 3-4 недели болезни 14 50,4 ± 2,6 1,08 ± 0,06

+ 5-7 недели болезни 8 48,4 ±1.8 1,11 ± 0,04

Примечание: (-) - определение гемолитической активности по 1005 гемолизу. (+) - по 502 гемолизу. (") - шгкрометодом (Мотавкнна,"Ковалев , Шаронов).

АО'0 моит точно установить степень участия комплемента в формл-ровашш как защитной реакции организма, так патологических процессов. Показатель АС'0 позволяет суммировать все ранее полученные результаты ГА сыворотки крови у человека в корме и патологии, дать единую оценку практической значимости комплемента при различных состояниях организм необходимую .для рационального плакирования лечебных и профилактических мероприятий.

Это касается и альтернативного пути, активирование которого в организме не связано с антиген-антитело ко.'.птлексами к начальными С1»С2-,С4 компонентами комплемента. Использование показателя АС'О позволяет определить меру участия этого звена в (Торг.гироваини защитной реакции при несовершенстве иммунной системы, а тагс::е в процессе развития ко'яплементзависимых заболеваний.

Тесная связь лизоцима о секреторной функцией какройагоз не могла не привлечь внимание к изучению его связи с системой комплемента в норме и патолопш. Диспропорцию между гемолитической активностью и лизоцимом сыворотки крови мы наблюдали при экспериментальном токсоплазмозе (Ковалев, 1972).

Проведенные исследования в этом направлении позволили заклто-чить, что чем выше показатель АС'0, тем значительнее уровень фермента в крови людей-доноров (табл.2).

Таблица 2

Взаимоотношение между уровнем сывороточного лизоцжв. и функциональной активностью комплемента в организме здоровых людей-доноров

Показатель : Уровень сывороточного лизоцима в шг/мл АС'О Г

10 20 30 40

ЙЗЯй^ :0,83+0,03 :0,8%0,02 :1,0±0,01 :1,16+0,03

^ГЕДания 0'87±°>03 1»08±°'06 1.^0,06 -

Аналогичная закономерность была выявлена в организме рожениц и лиц, инфицированных токсоплазмаш. Однако, оценивая дисбаланс лизоцима и комплемента у последних и здоровых людей (табл.3), было обнаружено, что на фоне данной инфекции он встречается у 40$ обследованных, а среди здоровых - в 12,5?.

Таким образом, полученные нами результаты позволяют сказать,

что в здорово:.: организме мезду комплементом и лизоцшом существует прямая пропорциональная зависимость. Нарушение • взаимоотношений в системе комплемент - лнэоцнм чаще встречается у лиц с ин~ фекг/ионной пзтоло: юа, которая, повидкмомуявляется следствием неоднозначного активирования комплемента (табл.3).

Таблица 3

Дисбаланс лнзоцима и ксг.шлеиента в группах здоровых людей и лиц, инфицированных токсоплаз.мами

Сп:.!ишьао:.ше группы '1исл0 обследованных "лктр лпзо- " цпма 'Ъоказатель -АС'О Диооаланс ь % ОТНОСИЛИ

Здоровые люди 126 I: (166+8,4) 1,0±р,С1 12,5

Лица, шю.пцлпо-

г:шш;о toj:co- - 150 I:(109+4,5) 1,18+ С,С2 40,0

плазмами

В числе первых барьеров на пути ¡шфекцгш стоит снсте;ла кои -нлемепта - ыоедюо эффекторное звено, направленное на подавление и элпшнацдо возбудители и да^шшх ко.*.яшекоов. Степень активл-ровалгл коликемсиха и воздействие его на г.ия<роорх'анизш тем больше, чем дюиьао концентрация специфически кммуногдобулшюи, Они типичны дш предимдгшюй фази и характерна яатеыгиой форме ш -фекционлого процесса (Hadding, 1Э75),

Иифвкциошшо заболевания плода и новорожденного всегда формируются на фоне скрытого кчи легко протекающего патологического процесса у матерей, »аоиваетго бактериями, вирусами, щюстейш-, ;.гп. Заражение плода происходит при непосредственном контакте с инфицированными тканями в родовых путях пли при проникновения возбудителя из крови глтерл через плаценту (Островский, Воробьев, 1955; Шелтои, 1231). Понятно, что своевременная диагностика латентного инфекционного заоолеванил п санация беременных женщин долзщк снизить появление аномалий раахштля плода, а главлоо -уменьшить е1£утриутробнуэ инфекцжйшую патологию у детей.

Анализируя наши наблюдения, mosho сказать, что адекватную характеристику бесспмптомяо.чу токсошшзмозу н друтш! охрж'ич т -фекцпонцкм заболеваниям г,южно составить по показатели актшзщю- ( вания комплемента в организме (АС'О). Г;'-лчедний, не изменяясь в группе здорових лекарш-доноров и яеищт о нормально протегеащей беременностью (1,0 ± 0,01 и 1,05 ± 0,03 услоз.ед. соответственно),

находится на высоком уровне (1,38 + 0,02 усдов.ед.) у беременных с токсоплазмозной инфекцией. Доказательством этому служат и данные, полученные при изучении степени активирования классического и альтернативного путей комплемента, уровня сывороточного лизоця-ма у реяениц с различии,I статусом новорокденных. Как следует из таблицы 4, указанные параметры значительно увеличиваются в группе рокениц, дети которых из родильного дома 'были госпитализированы с инфекционной патологией.

Таблица 4

Степень активирезания классического и альтернативного путей комплемента ц уровень сывороточного лизоцима з организме рожениц при различном статусе новорожденных

Характер об- .Классический .-Альтернативный :Лизо-

путь комшге- путь комплемен- цнм 3

следованных мента та мхг

групп îï тем. t пока- и гем. : пока- n на мл

акт. в; затель акт. в затель

гем.ед' АС'О | гем.ед АС'О

Женщины -доноры

Еешцинк, -золившие здоровых детей

Еешцины, родившие детзй с инфекционной патологией.

43

:77,8+ : 1,0 +: 18 :16,16+: 1,0 + : 30 : 12,2+

2,2" Ô,0Z 0,39" 0,04" 0,4

54,2+ 1,43 + 31 14,2 + 1,14+ 35 13,9+

1,6" 0,1 ~ 0,48 " 0,12" 0,9"

48,9+ 1,69 + 43 12,2 + 1,32+ 43 13,4+ 1,9" 0,07 ~ 0,7 ~ 0,07" 0,8"

Естественно, для решения такой вагной проблемы нельзя ограничиться только своевременной диагностикой скрытой инфекции у беременных жещин. Столь же важно знать формы защиты ребенка в том виде, как ее можно представить после рождения, в период незрелости иммунной системы. Компоненты комплемента матери не проходят через плаценту. Плод начинает продуцировать их на 4-5 неделе гис-тации и, несмотря на низкую концентрацию, они в состоянии выполнять вазнке эффекторные функции, оказывают большое влияние ira эффективность фагоцитарного звена (Иво Миллер, 1983). Как следует из табл.5., в сыворотке крови из пуповины здоровых доношенных и недоношенных новорожденных степень активирования комплемента по классическому пути на 30-35| нико, чем у родильниц. Это относит-

0

ся и к альтернативному пути. Его гемолитическая, активность в этой группе детей имеет ту же тенденции. Однако на 7 день вне-утробной кизни уровень комплемента по классическому пути резко увеличивается до £3,3 + 3,5 гегл.сд. и статистически достоверно превшаст таковой у их матерей. Альтернативное звено и С3 компонент остаются в прекних пределах. Такие изменения со стороны комплемента свидетельствуют о том, что снижение гемолитической активности в пуповинной крови здоровых новороадешшх связано с потреблением его компонентов, которое происходит при активировании ко.мплемента у плода. Об этом свидетельствует и высокий уровень сывороточного лизоцика (16,0 - 19,5 мкг в мл rio отноаешад к 12,0 - 14.6 у родильниц и здоровцх кенщин)» находящийся в прямой зависимости от функционального состояния систеш комплемента.

Таблица 5

Гемолитическая активность классического и альтернативного пути комплемента, уровень 03 компонента в сыворотке крови новорожденных и матерей

Комплемент гем.ед.

(компонент)

Здо-

ровые Мать

.н гсенщи ни N

Здоровые новорожденные (пуповинная кровь)

н ронош N ^недонош.

Новорожденные 1-7 день гизни

>39:77,8+:85:54,4+: 67:38,0+:34 : 30,1 +

пухь (ul + ш) 2|0- jjgr 2fQ -

Альтернативный путь 18 16,2+ 85 13,0+ 38 6,8 + 12 6,4 + (М±ш) 0,4~ 0,4 0,3" 1,3"

03 мгр2 (М ± ш)

- 20 144,6 35 ± 3,9

129,0 ± 3,6

:20: 68,8 + 3,5 ~

20 7,2 + 0,9 ~

19. 118,8+ 4,5 ~

Внутриутробное развитие плода - своеобразный иммунологический парадокс. Несмотря на его антигенные различия с тканями материнского организма, это развитие не управляется познанными законами трансплантационной иммунологии. Поэтому народу с известными гипотеза?,и о регуляции иммунного баланса в системе мать-плацента-плод (Грязнова, Златовратская,' 1980; Гордина, Головкстиков,.1380;Ro -сklin et al,I982; Rudi et al., 1983) система комплемента через-биологически активные компоненты (СЗа, С5а и др.) может играть в этом процессе ведущую роль. -

Таблица 6

Показатели гемолитической шстивности илассического и альтернативного путей комплемента, уровень иммуноглобулинов г.! и А в пуповидной сыворотке крови новорожденных и детей в ранний неонатаяьный период иизшх

Групп и ■.етерпзл :юоледова- Гемолитическая активность С' в гем.ед. (!д £ н ) Кммуноглобулшш игр/100 МЛ (!,: ± ш)

:П1Я пути активашш

N классический г f альтеша-^ т явный. N Чк

Зквооотка

»"повинной

тоови недо:23:39,9+1(9 -.12: 6,4+1,1 :23: 11,3+0,3:23:0,91+0,44

■юиенных ~

датей

Зызоротка

хутювинной

шови доно:Б7:37,6±2,0 :38: 6,1+0,3 :67:ГЗ,9+0,9 :67:0,82+0,31 пенных детей

Зыворотка

гейВ1-76~ :20:68,8+3,5 :20: 7,2±0,9 :20:30,6+3,9 :20: 2,6+0,5 даей нкзни

■ Как видно из табл. 6, в организме новорожденных сштез иммуноглобулинов находится в обратной зависимости от активирования ком-иемента. Чем больше ког.шонентов последнего задействовано, т.е. Шл ншге гемолитическая активность в сыворотке пуповянной крови, гем меньше концентрация иммуноглобулинов М и А. Участие комплемента в создании и поддержании иммунологического равновесия в си-зтеме мать-плод подтверждают и результаты обследования новораг-ценных близнецов, где их внутриутробное развитие сопряжено с двойной " антигенной нагрузкой " на организм матери (табл. 7).

В сыворотке пуповинной крови обоих близнецов альтернативное звено комплемента выявить не удалось, а гемолитическая активность эго классического пути находилась на низком уровне. У них отсутствуют и сывороточные глобулины А, В то яе время содержание иммуноглобулинов М соответствовало норме. Весьма демонстративные изменения показателей наблюдаются у здоровых близнецов в тот пзри-эд, когда подавление иммунологических реакций нецелесообразно (8-9 день лизни). В указанные сроки на фоне увеличения гемаялти-

ческой активности классического пути и появления альтернативного звена комплемента синтез иммуноглобулинов М и А возрастает в несколько раз.

Таблица 7

Состояние классического и альтернативного путей комплемента, уровня сывороточного глобулина М и А у новорссн -денных близнецов в раннем неонатаяьнов периоде

Группы обсде-дошзшых и материал ис -следования Число обе -ледовая - ■ них Гемолитическая активность С*в гем.ед. М + ш Иммуноглобулины мгр/100 мл М + ш

: класса | альтер -ческий | иатив. М : А

Сыворот- 1-й ка кро- плод ви из пуповины

2-й плод

Оцворот- 1-й ка кро- плод

2-й

ви на 8-9 день аизпи

плод

4 15,2+4,2 0 • 10,0+6,3 нет

4 15,8+3,6 0 4,7+3,9 нет

7 20,1+1,4 5,0±2,1 37,8+5,4 14,7+3,4

7 27,1+3,0 3,3±3,0 40,8^5,5 10,0+3,3

Итак, следует подчеркнуть, что процесс активирования комплемента в организме плода наря1£у с защитной выполняет и шглуномо-дулиррзаую (функцию, участвуй в создании иммунологического равновесия в системе мать-плод.

Гилотьунореактивность, необходимая в период внутриутробного развития плода у новорозденных в перинатальном периоде,, шхает стать одной из причин повышенной восприимчивости к различным инфекционный заболеваниям. Становление иммунной системы ребенка после рождения завершается, спустя годы. Удовлетворительный им-, ыунитет по отношению к наиболее часто встречающимся возбудителям заболеваний формируется в основном в 2-7 летнем возрасте (Пеироз, 1382), в то время, как комплемент и лизоцнм биологичес-¿сую активность обретают уяе на 19-й неделе гестации (Иво Миллер,' 1583). Как следует из табл. 8, преимущественная роль в формирова-нш сопротивляемости инфекции организмоп новорозденного, с его незрелой и.мунной системой в неонаталъном периоде, принадлежит , не специфическим факторам защиты и, в ^ервую очередь, альтернативг

нежу пути активирования комплемента и лиэоцпму.

Таблица 8

Динамика показателей гемолитической активности классичес-. кого и альтернативного путей комплемента, уровня 03 компонента и лизоцима в сыворотке крови детей с перинатальной инфекцией в возрасте от 0 до' 1,5 месяцев жизни

Группы, возраст обсле -дованных новорожден -них, материал исследования

Гемолитическая активность С' гем.ед. М + пп

н

классич. путь

■и

альтернатив, путь

СЗ , компонент мгр/ЮО

мл М £ ш

Лизоцпм мкг. мл М + П

Сыворотка пуповтшой крови здоровых детей

Сыворотка крови детей , до 7. дней аензни

Группа детей с перинатальной инфекцией: (до 7 дней) жизни

Недели жизни 2

3

4

5

.128:36,% 0,4:72: 7,7±0,6:31:120,0±3,6 :121:17,3+0,4 23:68,8^3,5 :13: 6,4+0,6:15:118,8±4,5 : 23:12,3^1,4

25:27,5+2,9 :20: 6,7±0,9:12:114,2+2,5 : 45:16,0+0,9

50 31,5+2,4 II ?,8±1,3 14 135,7+7,4 69 14,9+0,9

■32 41,8+2,6 12"7,6+1,2 6 133,4+9,9 48 17,7+0,9

30 40,7±3,3 II 7,9^0,7 10 127,3^4,2 42 15,4+1,4

39 45,9+2,4 15 10,9+1,2 II 130,4112,8 75 15,4+0,9

Матери новорожденных

85 54,4+1,9 65 13,0±0,9 20 144,6+3,9 85 15,5±р,8

Проведенные исследования позволяют заключить, что функционально активный комплемент пршгаает непосредственное участие в формировании иммунологического равновесия в системе мать-плод» Совместно с лызоцимом, альтернативное звено комплемента является одним из главны:: барьеров на пути инфекции в организме новорозденнюс в "раннем неонатальном периоде«,.

в

и

феномен птюзотш комплементарной активности (ФП). С точки зре-уия биологической целесообразности организм не должен задействовать комплемент сверх того, что необходимо в конкретной снтуа -цшз. Однако, несмотря на регулирующие механизмы чрезмернее активирование 'встречается довольно часто, приводя к локальному, а иногда и генерализованному нарастанию метаболитов реакции. Последние могут вызывать, изменять, хронизировать течение болезни. К зтоцу причастны комплексы антиген-антитело, лияоподясахарццы, агрегированные А, а такие вещества, которые сопутствую*- определенной патологии - нефритический фактор при хроническом гдоме-рулонефрите, ревматоидный фактор при ревматоидном артрите (Ьам-ЪегЪ е* а1., 1976; Альбины с'соавт., 1982; Кормейн, Асгар,1983). Существование специфически активирукгцих структур - повод для поиска еще неизвестных веществ, вовлекающих сиетедгу- комплемента в патологический процесс, и для понимания явлений, сопутствующих отому.

При изучении гемолитической активности комплемента в сыворотке крови рожениц и их новорожденных, был обнарунен ранее неиз -вестный феномен прозоны (Щ) комплементарной активности (Кова -лев с соавт., 1985). При анализе результатов определения ФП была обнаружена четкая зависимость между феноменом и присутствием в сыворотке крови.неизвестного термолабильного-фактора, способного через СЗ компонент активировать систем комплемента е организме человека. Результатом этой реакции является формирование мембраноатакующего комплекса (С5Ъ - С9), способного посредством образования отверстия в мембране эритроцитов вызывать их лизис. Этот фактор относится к нормальным гемолизинам крови, ткет протеиновую природу с молекулярной массой 12 - 25 гД. Исчерпывающий диализ сыворотки против избытка физиологического раствора хлористого натрия в течение 48 часов не освобождает ее от ФП.

Феномен прозоны комплементарной активности, который мы выявили у рожениц, не регистрируется у. их новоразденных до 13-15 дня жизни и отсутствовал в сыворотке крови отцов. Последнее обстоятельство, равно как и отсутствие его в иуповинной крови, мы расцениваем как свидетельство генетической детерминированности сывороточного фактора, вндуцирувдего ФП. Очевидно, он сцеплен с У-хромосомой,1 наследуется но материнской линии и не передается тралевлацентарыо»

Частота обнаружения Ш в сыворотке крови людей и новорожденных показала, что у последних он выявляется в 1,16 р случаев, у рссениц - в 10,0 у доноров - 6,68 %. Однако у ленцин он регистрируется в 9,68 % случаев против 5,68 % находок у мужчин. Разнообразии нозологических форм, при которых нагл удалось определить ФП, позволяет думать,- что протеиновый фактор является константным генетически предопределенным продуктом клеток организма, функциональное созревание которых завершается к кошу 2-й, началу 3-й недели после рождения ребенка.

Свидетельство о том, что Ш чаще регистрируется у аенщзш предопределил выбор для детального обследования пациенток с заболеванием щитовзцщой аелезы (129 женщин в возрасте 21-68 лет). Названная патология у них встречается в 9-17 раз чаще, чем у мужчин (Месробяну с соавт., 1977). При обследовании больных мы одновременно провели скенирование щитовидной яелезы, которое позволяет определить функциональную активность ее долей или опухолевых .образований. Результаты исследования показали, что ФП выявляется в сыворотке крови у 25,27 % аенщин с поражением щитовидной железы, в 3-5 раза чаще по сравнению с другими обследованными группа-т людей. Он в 50-100 % наблюдений соцутстзует таким нозологическим единицам, как тиреоидит, диффузное увеличение щитовидной железы, диффузный узловатый токсический зоб. В 8,3-32,4'* случаев его регистрировали у пациенток с диффузным токсическим и нетоксическим зобом, гипотиреозом, узловатым нетоксическкм зобом. ФП отсутствует при хроническом тиреоддите, энднмячеснш (1-П степени) увеличении щитовидной яелезы. Не удалось выявить его при исследовании сывороток крови больных раком легкого (63 человека в воз -расте 36-65 лет) 3-й степени с иетастазированием в региональные, лимфатические узлы .(подчелюстные и шейные). При радаоизотопном обследовании яелезы у 18 из 25 женщин с ФП была выявлена низкая функциональная активность и дефект накопления йодистого натрия, который характерин для узловатого зоба (так называемые "холодные узлы") и злокачественных опухолей щеп (метастазы регионарных лимфатических, узлов Ври раке легкого),

Морфо-гастологический анализ резецированной ткани келеоы у больных женщин с ФП в сыворотке крови выявил один-два узла (3,5 - 1,5 см в диаметре) на разрезе серо-красного цвета с белесоватыми прозаиками. Микроскопически узлы представлены полями, преимущественно состоящими из микрофолликулов, выстланных обычные

формулярным эпителием с широкими прослойками фиброзной ткани, В строме, среди тиреоидннх фолликулов, имеются большие очаговые скопления малцх и средних лимфоцитов, часть из которых (вторичные фолликулы) имеют центр размножения. Строка в участках с выраженными дистрофическими изменения:,к содержит многочисленные "удушеицые" гираовдвые фолликулы, выстланные уяшцепнш атрофя-ческигл фолликулярным эпителием. Подобная гистологическая: картина свойствена очаговой форме аутотпреоидита, которая развивается как в неизменной железе, так и на фоне диффузного и узловатого зоба .(Бомач', I98J). 7 больных без $1 узлы сформированы макро-цдк 1.зв:ро>фоллзп{улз;.к:, строма в иитерфоллжудярном пространстве слабо свожена или шест гсиронио фиброзные прослойки. Лшлфопцная инфильтрация в строме отсутствует и представлена незначительными лшдфогпстиоцнтарпими элементами, В строме отсутствуют "уД7 -шешше" тиреоидине фолликулы. Эти дшшые дают основание считать, что Я в сыворотке крови кеицин типичен для состояний сопровождающихся гипофункцией щитовидной жзлезы, лимфовдной инфильтрацией и склерозом ее стромы. Более того, вше названные изменения есть ответная реакция организма на связанную с патологическим процессом гиперфункции этого органа.

Известно, что подобно кизкомолекулярным антигенам и гаптенам пеницилин, стрептомицин, сульфаниламиды и др., взаимодействуя с белками организма, вызывают аллергические реакции (Gell et al., IS68), среди которых активирование системы комплемента (П-Щ тип реакций) и образование СЗа, С5а аиафилатоксинов занимает одно из первых мост. Последние, освобождая вазоактивные амины и ферменты из палшорфноадершюс лейкоцитов н базофмлов, повреждают окружа-адие ткани.

В 48,4 % случаев у женщин с поранением щитовидной железы и ФП комплементарной активности наблюдаются аллергические реакции, среди которых (63,3 % больных) медикаментозная аллергия занимает одно из первых мест. Последующие исследования показали, что сто ле случайное совпадение, а вполне закономерное явление. ФП у, больных с полинозом, пишевой и пылевой аллергией, аллергическим бронхитом и ринусопатней наблюдается на фоне невоецреимчи-еости к лекарственным препаратам.

. Судя по итогам исследования сывороток крови новорожденных и ххх матерей, гдз появление ФП да 15-й день жизни ребенка сопря-

köho о наличием такового у родплышцы, даещей аллергический ге-нез заболевания, тсрмолабильный, недашлизпрущийся протеиновый фактор, о которым связан этот феномен, мо;:сно отнести к разряду генетически обусловленных. Его появление и деятельность в организме долина контролироваться особым геном, который функционально активируется 1шп;екцпей или лх токсикшн, аутопжунншя агентами и медикаментозными препаратами. Не исключено, что он является "мобильным" rsuos/r, который,*зчезая из одного участка я внедряясь в другой, Mo.fuicj'^.trrpyo? сопределеннш Фрагменты да и, следовательно, осуществляет переда^ по наследству новой информации.

Такш образом, обнаруженный нами генетически обусловленный протеиновый фактор олпзороткп крови, активирующий комплемент по альтернативному пути и пути реактивного лизиса в организме человека при' поражении вщговцшой яелези и медикаментозной аллергии может предопределять разаотис данной патологии. Действующим началом ее является ^лбраноатазукотй ясашгеко (С5о - СЭ), который, формируясь на мембране клеток, вызывает их дегращглящго и лизис.

Скстет кошшлепга n, y^flgpgi .отпет,. Проведенные неследования показывают, что развитие полноценного иммунного ответа в организме невозможно без включения в процесс системы комплемента. Sc гаактлштгя у тгоошяс до кжупизащт приводит к существенно-'.у подавленно н^лушюго ответа ( Гериа, IS76; попЬчИ et nl ». 1980). В становлении гагтиологочесяой реактивности непосредственное участие щкшпмапт субкомпоненты G3 я С5 компонентов (СЗа.СЗО, 35а) обладателю шлунатодуляишшд действием и 1шщкэ . х В-дш-йоцктах соответствуйте рзцепторк (Петров, I570| Hugll, ISS3; su-wry, baoiunan, 1285), Однако, несмотря на успехи достигнута при :;зучеггшс этого вопроса, место системы комплемента среди рохуляго-поз иммунного ответа, до конца не вштоионо.

3 связи с amt наш бкяа поставлена цель; методом гшгибпрова -пш классического и альтернативного пути активирования комплсмен-pü изучить степень учаскит систем.! в икфгаок ответе, В качестве uiaimiBOTopoB бнлп использован» трплсн-Б (ЗДТА) в концентрации Зг48 - 2,4 мг на мл свекей енвороткп и зимозан, нерастворимый уг~ тепед из .стош« 'дрстевюс клетотс, Исследование проводили на ш-ш. при ящршшашт пх орптроигсташ барана а определена у них в гочешго 5 дней эксперимента аитателообразущих меток (ЛОК) в се-юзенке к гемпгглютиишюв в стшоротко крови. Первой (контрольной)

группе животных внутривенно вводили 5x10 эритроцитов барана, Агорой - эритроциты и 1,35 мг активного зшлозана, третьей - вместо зимозана 0,48 да трилона-Б, Данные эксперимента показали, что значительные отклонения от контрольных величин были обнаружены у ышей при нарушении трилоном-Б сборки активного С1 кошонеита комплемента и, следовательно, активирования классического его пути. На фоне бездействия этого звена системы, слабый ишунный ответ у животных указывает на то, что в его развитии необходимы не только СЗо, СЗа субкомпоненты но и 01 фрагмент комплемента. По -следний, повидиыому, участвует в процессах распознавания и взаимодействия макрофагов с антигеном. В этой связи ш провели изучение выраженности шлдунного ответа у мышей, иммунизированных сенсибилизированными эритроцитами (ЕА) - главный активатор С1 компонента и искуственно приготовленным комплексом эритроцит-антитело -С1 (ЕАС1). Судя по результатам, уровень антнтелообразушцих клеток (АОК) в селезенке второй группы животных статистичести достоверно (Р^.0,01) был выше, чем в групе контрольных мышей. Саше интенсивные показатели специфического иммунного ответа оказались у животных, которым вводили готовый ЕАС1 комплекс, где число АОК на селезенку составило 400 * 20,9 против 219 ± 40,3 в контрольной группе.

Подобная выраженность иммунной реакции и в сыворотке крови при регистрации у нее титра гемагглшининов. Титры противоэритроцитар-ных антител■были самыми высокими в Щ группе мышей. Это обстоятельство показывает, что введение в организм кивотных ЕА комплекса о активным С1 компонентом комплемента намного сокращает период распознавания или прикрепления антигена к макрофагам. Полученный результат позволяет сделать заключение , что специфический иммунный ответ на тицусзависимый антиген (эритроциты барана) у мышей • прямо зависит от функционального состояния классического и аль -тернативного звена системы комплемента. Несомненно; что последняя наделена тт^шодулирувдиаи свойствами, связанными с биологически активными СЗ, С5 и С1 компонентами.

Поиск методического решения При изучении клеток продуцентов . компонентов комплемента и лизощма. Наиболее распространенными подходами для выявления клеток, споообных синтезировать компоненты комплемента, являются методы, основанные на использовании ме- • чедих флюорохромсм антител против основных его компонентов и суб-

Фракций (Ruddy et■al., 1974; Lai Bianca et al IÖ74), ЛИНИИ

мышей BIO 2/0 с врожденным дефицитом компонентов (Nelson et al., 1973), коныогированных с белками, ишунохшячески идентичных с 02, СЗ, 04 и др. фракциями комплемента аминокислот, меченных Cj^ радиоактивным углеводом ( Gölten, 1972).

В наших исследованиях по выявлению клеток продуцентов С1,С2, 03,04 компонентов был разработан общедоступный способ, позволяющий находить и изучать клетки ответственные за синтез вше названных протеинов комплемента. Проведенные эксперт,тенты показали, что при добавлении к взвеси гвзяеспособных клеток различных органов и тканей организма сенсибклизировашых эритроцитов барана и реагента (r ), в котором hg достает одного из компонентов комплемента, феномен бдяшкообразования будет наблюдаться только в том случае и с той клеткой, которая секретирует недостающий компонент. Величина зоны гемолиза зависит от активности клетки продуцента данного компонента. Изучение клеток перзтонеального экссудата, печени, легких, селезенки, почек, белой крови лабораторных животных (белые крысы, морские свинки) и человека по выработке основных компонентов комплемента (Gl,С2,03,04) показало, что перечисленные органы и клетки являются основными поставщиками составляющих систем комплемента фракций. Печень - главный источник 03 и С4, в легких происходит синтез 02,01, в селезенке - 01,04 и G3 компонентов, а в почках - 01. Клетки перитонеального экссудата и лейкоциты крови синтезируют 02,04 и 01 фрагменты комплемента. В продукции последних непосредственное участие принимают моноцаты, перитонеальные и альвеолярные макрофаги, полиморфноядергые лейкоциты и тучные клетки. Следует отметить, что клетки, синтезирующие компоненты комплемента (за исключением тучных), принадлежат к макро^агаль-ног<у звену организма, принимающему активное участие в становлении специфического иммунного ответа.

Об участии органов и клеток в выработке лизоцима судят по ири-сутсвию его в экстрактах и культкральной жидкости (Забиров,1976), определяют метода пероксидазной метки фермент-антксыворотка ( ег-londsen et al 1974), способ ауторадиографии ( Lai Pat et al-, 1975)c Суть нашего способа заключается в том, что, если суспензию клеток органов и тканей объединить с тест-микробами, чувствительные к лизоциглу, в гель-растворе агарозы, то лизоцим, проду-

цируемый меткой, будет дифс&ундировать в среду и лизировать бактерии, расположенные вокруг этой клетки. Последнюю можно регистрировать с помощью фазовоконтрастной или люминесцентной микроскопии. Исследование клеточных суспензий, приготовленных- из вше названных органов и тканей белых крыс и лейкоцитов крови человека, на способность синтезировать лизоцим показало, что ими являются макрофаги и полиморфноядерные лейкоциты, постоянно присутствующие в этих тканях.

Таким образом, методические подходы, предложенные наш для определения клеток продуцентов комплемента и лизоцима, имеют ряд преимуществ перед ранее известными способа!,ш. Они объективны, просты в исполцснии и могут быть использованы для дкфференцирован-ного изучения комплемент-компетентных и лизоцим синтезирующих клеток. Участие одних и тех же клеток в продукции комплемента и лизоцима предопределяет их взаимоотношения, как при формировании защитных реакций, так и при развитии патологического процесса.

Сыворотка крови китов т как промышленное сырье для получения сухого комплемента. Традиционным промышленным сырьем для получения сухого комплемента является сыворотка морской свинки, которую трудно занюнить сыворотка,ш крупного рогатого скота и других животных. Последние имеют низкую гемолитическую активность или дефицит отдельных его компонентов (Giclas et «l., I9BI)« С этой целью проведено исследование сыворотки крови китов (кашалот, малый и большой полосатик) на возможность использования их в виде сырья для промышленного получения сухого комплемента. Из одного литра крови животных, выбрасываемая при добыче китов, можно подучить 300-350 ш сыворотки. Определение гемолитической активности оыворотки показало, что она наиболее выражена у каиало-■ тов. Лизис сенсибилизированных эритроцитов барана у них наблы -дался во всех разведениях и свидетельствовал о высоком содержании комплемента, Однако аналогичные результаты получены и.с чистыми эритроцитами, что указывает на неэквивалентность действию комплемента и на непригодность этх кивотних для получения его в промышленных масштабах. Низкая концентрация комплемента была и сыворотке малого полосатика. С промышленной целью необходимо использовать сыворотку большого полосатика (Брайда). Она лишина цптотоксачнооти. Гемолиз«,сенсибшш:зЕроваш!Ых эритроцитов барана в ее присутствии происходит за счет комплемента. Источником последнего монет быть и сыворотка серых катов, наделенная аналоги-

нши свойствами. Кроме того после смешивании сыворотки китов с комплементом морской свинки мы получили способ получения высоко-■ активного комплексного комплемента. В частности, из одной аггпулы сухой стандартной сыворотки морской свинки и 16 т цельней китовой - мопно плучить 180 г,га высокоактивного комплексного прета-, рата. В соответствии о инструкцией Из одного мл комплемента t,юрской свинки мояио приготовить только 10 мя комплемента в рабочей дозе. В связи с зтим предложенный нами способ уменьшает до 50 раз расход дорогостоящего и дефицитного комплемента применяемого в иммунологических реакциях.

Итак, поиск перспективных заменителей сырья при производстве сухого комплемента морской свинки свидетельствует о том, что решить эту проблему мссшо путем переработки сыворотки крови большого полосатика Брайда и серых китов или экономически выгодней комшгексированиом последней с комплементом морской свинки. Ухе сегодня (при соответствующе!! организации) большое количество кои' племзнта маяно получить из сыворотки крови'серых китов, промысел которых (10-15 особей) ведут для коренных кителей Чукотки.

Выводы

I» Особое значение в комплексной оценке (функционального состояния системы комплемента может занять универсальный показатель активирования комплемента в организме (АС'О), который вне зависимости от методов определения гемолитической активности сыворотки кроЕИ дает адекватную характеристику степени участия системы в иммунных и иммунопатологических реакциях организма.

2. функционально нарастающее активирование комплемента в организме сопровождается увеличением концентрации сывороточного лизо-г-цима. Нарушение отмеченной взаимосвязи сопровождается снижением эффективности гуморального звена неспецифической защиты и повышением степени риска возникновения инфекционного заболевания.

3. Дифференцированное определение АС*0 для классического и альтернативного путей активирования комплемента у беременных женщин, рааениц и их новорожденных позволяет не только своевременно распознать скрытую инфекцию, но и понять механизм фюрлирования иммунологического равновесия' в системе мать-нлацента-шгод. Альтернативный путь активирования комплемента и лизоцим - основные гуморальные факторы защиты новорожденного с незрелой системой

специфического реагирования в первые -дан влеутробной глзни.

4. Выявлен ранее неизвестны!-! термолабильнкй, недиализпрузсвдй-сп протеиноэый (¡актор сыворотки крови, ахтквиругагий комплемент по альтернативному пути и пути реактивного лизиса. Возникающий при этом феномен прозоны (§П) комплементарной активности связан

с формированием на клетке меабраноатакувдего комплекса (С5о - С9),

5. й! в 3-5 раз чаще (25,27 %), по сравнению с другими группами обследованных, обнаруживается у тешдин с заболеваниями цнто-вудной лелезк (тиреоядиг, узловатый токсический и иетоксический зоб, дпффузноз увеличение щитовидной железы), при которых ауто-кл^ший синдром является частой находкой.

6. Ыорфо-пгстологическое изучение удаленных участков железы лыявило в ее измененной строме большое количество "удупенных" ти-рооздиця фолликулов, очаговую лпмфовдцу» анфяяьтрациэ с дшефоид-н:ам фолликулами. Последние содержали светлые центра - центра размножения. Корреляция их с ОП указывает на то, что обнаруженный в сыворотке крозн активирующий комплемент фактор кокет быть производным клеток этих фолликулов. Появление его у лиц с патологией ¡дотовпдной келезы следует расценивать как доказательство ра?шш5я кешлемент-зависшого процесса в данном органе.

7. Протеиновый фактор, обусловливающий ФП комплементарной активности и сопровоздаюиршся снижением функциональной активности железы на фоне аутоиммунного процесса, монет быть одной гае Форм заняты организма при ишерфушецж данного органа»

3. Обнаружено, что протеиновый фактор сыворотки крови, не про-никаздлй через плаценту и появлхетмйся на 13-15 день внеутробной >.;изни новорожденного, генетически детерминирован и наследуется по материнской линии, Помимо заболевания щитовидной нелезы в больдюм 'процент? (48,4 %) случаев он сочетается с аллергическими реакциями, среди которых лекарственная аллергия занимает одно из первых мест (в 53,3 °р наблюдений). Оперируя Ш,-метано.предвидеть возмскшость не только приобретенной, но и врожденной повышение»! чувствительности к лекарственным прзпаратам,

,9. Формирование специфического ншунного ответа на тимус-зависимый шша'он, судя по экспериментальным данным, находится в прямой зависимости от функционального состояния классического и альтернативного путей комплемента, его биологически активных компо- -центов, образующихся в крови при зпзиматическом расщеплениг С1,

СЗ фрагментов.

10, Процесс активирования комплемента, превосходшций физиологические пределы, мелет быть устранен трилоном-Б (ЭДТА), который в концентрации от 0,48 до 2,4 мкг на tai сыворотки обладает антикомплементарной активностью. Увеличение дозы ЭДТА до 2,68 мкг на vw л выше приводит к ^специфическому лизису эритроцитов человека к животных. Последнее необходшо учитывать в терапевтической практике, при использоЕанхга трилона-Б в качестве антысоагулянта и при заболеваниях, сопровождающихся избыточны?»! отлазенпем солей халышя в организме.

11, Доказана возможность использования сыворотки китов (больного полосатика-Брайда и серого кита) для изготовления сухого сомплемепта в промышленных масштабах. Препарат, полученный и приготовленный в экспедиционных условиях, по диагностическим качествам не уступает комплементу морской свинки. Диагностические воз-«атаости последнего такяе удалось повысить, сократив расход дорогостоящего сырья в 50 раз за счет создания комплексного комплекта. 3 этом высокоактивном препарате соединены в соотношении 1:10 сыворотки крови морской свинки и кита,

12, При изучении состояния комплемента на фоне физиологических i патологиче„ких процессов разработаны новые методические подхода по определению:

- степени активирования комплемента в организме по однопмен-юму его показателю АС'О;

- клеток-продуцентов основных компонентов комплемента (С1,С2, 13,04) и лизоцима;

- гемолитической активности классического и альтернативного tyreü кошлемента (макро - и микрометоды);

- количества сывороточного лизоцима (мккрометод);

- феномен прозоны (Щ) комплементарной активности;

- узлового поражения щитовидной железы и лекарственной аллср-

'ИИ.

СПИСОК РАБОТ ПО ТЕМ ДИССЕРТАЦИИ :

1, Кошйементарио-пропердшовая система, уровень кальция, мания и меди в сыворотках крови здоровых людей-доноров г. Злади-юстока. - В кн.: Проблемы биозелиматолоиш и клшатофнзиологкп. Материалы симпозиума АН СССР. Новосибирск, 1970 . 0. 109.

2. Гуморальные неспецифические факторы защиты организма при

экспериментальном токсоплазмозе и их взаимоотношение о полными аомплементсшзывающтга антителами. - В кн.: Всесоюзный симпозиум по токсоплазмозу. М«,. 1971. С. 45.

3. Связь сывороточного лнзоцима и антител с количеством ток-соплазмен'ного антигена в органах белых крыс при экспериментальном токсоплазмозе» - В кн.: Всесоюзный симпозиум по токсоплазмозу. М., 1371. С. 49 (соавтор - Ф.И.Котков).'

4. Фагоцитоз и опсонизкрушие свойства иммунных сывороток при токсоплазмозе. - В кн.: Всесоюзный симпоэзочл по токсоплазмозу. М,, 1971. С. 41-42 (соавтор - Н.С.Мотавккна).

5. Определение комплементарной активности в сыворотках крови с иомодао фотоэлектроколоримеара ОЭК-М, - В кн.: Комплексный сборник изобретений и рац. предложений медицинских вузов и научно— исследовательских институтов РСФСР. Москва—Иваново, ХЭ71.

С. 300-302 (соавтор - Н.С.Мотавкина).

6. Микрохимический метод количественного определения лизоцима в сыворотках крови людей и животных. - Лаб. дело, 1972, В 10. С. 597-599.

7. Люмпнесцентно-шгкроскотпгаеское изучение фагоцитарной реакции и опсошззнрующего действия иммунных сывороток при токсоплазмозе, - Мед. паразитология, 1974. й I. С. 83-84 (соавтор - Н.С. Мотавкина).

8. Иммунологические аспекты состояния неспецифических ^торов резистентности к инфекциям в условиях Крайнего Севера и Дальнего Востока. - В кн.: Система адаптации человека и внешняя среда. - Ленинград, 1375, С. 111-112 ( соавторы - Н,С.Мотавкина, О.Н.Авелнчев, Н.М.Рогачева).

3» Состояшш неспецифпческих факторов иммунитета у людей с разной групповой принаддеяностыа к кзоантпгенной системе в условиях Крайнего Севера. - В кн.: Материачы I Всесоюзной конференции по медицинской генетике. М., 1975. С. 75-76 (соавторы - Н.С. Мотавкина, О.Н.Лведичев).

10. 21овые подходы к изучению комплементарной систеш и ее активности, - В кн.: Факторы естественного иммунитета при различных физиологических и патологических состояниях. Омск, 1976. Вш. 4, С, 9 (соавтор - Л.С.Шаронов).

,11. Новый пстошшк высококачественного комплемента в отходах -"китового пробела» - В кн.: Медико-биологические аспекты пробле-

мы исследования и Освоения Мирового океана. Тезисы докладов I Всесоюзной конференции г. Владивосток, ГЭ76. С. 11-13 (соавторы - Н.С.Мотавкина и др.).

12. Сезонная нормограмма сывороточного комплемента и его. компонентов (С1,С2,СЗ,С4) у доноров с разной группой крови и ? фактору в условиях муссонного климата г. Владивостока. - В ich.: Кюлунояо-гические к аллергологическке исследования на Дальнев Востоке. Владивосток, 1977. С. 12-15 (соавтор - А.С.Шаронов).

13. Неспецифические факторы естественного иммунитета - вадные регуляторы адаптации в условиях вредных воздействий. - В кн.: Адаптация человека к различным географическим, климатическим и пропз-водственнш условиям. Новосибирск, 1977. Т. II. С. 145-146 (соавторы -• Н.С.Мотавкина, Р.Е.Пьянова и др.).,

14. Иммуиогенетика показателей естественной резистентности к инфекции у жителей Чукотки. - В кн.: Научно-технический прогресс и полярная медицина. Новосибирск, 1378. С. 64 (соавторы - M.G.Mo-тавкина, О.Н.Авеличев).

15. Микрометод количественного определения лизоцпма. - Лаб. дело. 1979. J3 12. С. 722-723 (соавторы - Н.С.Мотавкина, А.С.Шарснов).

16. A.C. В 686732 ЗНИИШЭ ГК. Способ получения комплемента. -Заявка. 05.05.77; Опубл. 25.09.79. Бвл. JS 35 (соавторы - Н.С.йотав-кина и др.).

IV. Микрокетод определения комплементарной активности сыворотки крови и других жидкостей. - Лаб. дело. 1980. й 7. С. 433-434 (соавторы - Н.С.Мотавкина, А.С.Шаронов).

18. Фракции комплемента (С1,С2,СЗ,С4) и их продуценты. - 3 кн.: Факторы естественного иммунитета при различных физиологических и патологических состояний, Челябинск, 1980. Вып. 7. С. 9-10.

19. Изменение сывороточного лизоцима у работников китобазы "Советская Россия" на промысле в районе Антарктиды и Юясннх широт. -

В кн.: Факторы естественного иммунитета при различных физиологических и патологических состояниях. Челябинск, 1980. Вып. 7. С. 58 -59 (соавтор - А.С.Шаронов).

. 20. Индикация продуктов отдельных фракций комплемента. - В кп,• Предложение рационализаторов здравоохранения. Владивосток, 1980. Бш. JS 3. С.. 60-61.

21. Усовершенствованный метод определения.активности четырех компонентов комплемента в сыворотке крови людей. - В кн.: Иредло-

яения рационализаторов здравоохранения, Владивосток, 1980. Бнм, й <5. С. 52-53 (соавтор - Л.С.Шаронов).

22. А.с. J5 0-I29I Удостоверение на рац. предает, отраслевого значения IS РС50Р. Способ приготовления высокоактивного комплемента. - Опубл. 15.02.80. 2-й КЮЛГШ им. Пирогова (соавтор - Н. С.Нотавкина).

23. Неспецифнческке гуморальные факторы естественного иммуни-'тета у работников морских профессий в период океанского промысла в Южных широтах. - В кн.: Психологические аспекты адаитацж человека в условиях океана. Тезисы докладов Республиканской конференции. Владивосток, 1981. С. 125 ( соавторы - Н.С.Нотавкина и др.),

24. Serum imr.unoglc/bulino in оеa-workers during oceanic fishery in south latitudea. - XVI. International соngi'ess of intei-naoional medicine. Praha. August 22-S7. 1982. 0. 369.

(соавторы - Н.С.Мотавкнна, А.О.Шаронов, Г.И.Булгакова),

25. Десинхронизация различных факторов иммунитета в условиях длительного морского плавания. - В кн.: мировой океан. 17 Всесоюзной конф» Владивосток, 1983. Секция 14. С. 130 (соавторы - II. С.Нотавкина, А.С.1Саронов, Г.И.Булгакова и до),

26. Способ получения комплемента. - В кн.: Изобретательство п рационализация в медицине. Республ, сборник научных трудов. М., Ï983. С. Ï65-166 (соавторы - Н.О.Мотшйиша и др.).

27. A.c. Я- 120 2 5 92 ВШИГПЭ ГК, Способ дшгностики узлового поранения щитовидной.железы. - Заявл. 28.0Э.82. Опубл. 07.01.86. Бш. H (соавторы - В.И.Булгаков, С,П.Ковалева)4

28. Микрометоды в иммунологии. - Монография. Издат. Дальневосточного университета. Владивосток, I9B7 С» 1ЛВ0 (соавторы - U.C. ■Мотавкшш, А.С.Шаронов).

29. Ыикрометод определения хахеток-продуцентов компонентов комшгемента (СГ,С2,СЗ,С4). - в кн.: Шисрометоды в иммунологии, Владивосток, 1987. С. 163-Г66. '

30». Комплементарная система в формировании иммунологического равновесия в системе мать-шгацента-плод. - В кн.: УП Вссроскйский съезд детских врачей» Иваново, 1937. Часть П. 0. 192.

, 31» Способ выявления клеток-продуцентов лизоцнма микроорганизма - Сборник методических разработок и рад, прсдлскений сотрудников ЩЩ. Владивосток. 1988. С. 29-31.

32, Определение степени активирования комплемента в норме и патологии. - Методические рекомендации. Владивосток, ДВО АН •СССР. IS88. С. I-I5.•

. 33. Показатель активирования комплемента в организме - новый подход к оценке функционального состояния системы комплемепта у •человека в норме и патологии . - Лаб. дело. 1988. JS 8. С. 65-67.

34. Состояние комплемента при патологии щитовидной келезы и его диагностические возможности, - В кн.: система комплемента. И», 1988. С. 13-15 (соавтор - С.П.Ковалева).

35. Динамика преобразования путей активация (классического п альтернативного) комплемента у новорожденных и их i/атерей в норме п патологии. - В гл.: Система комплемента. М., IS88. С. 16 -18 (соавтор - С.П.Ковалева).

36.Перспектива использования комплемента морских млекопитающих дая производственных целей. - В кн.: Система комплемента. М., I933_ С. 19-21 ( соавторы - Н.С .Мотавкша и др.).

37. Активация традиционного комплемента морских свинок комплементарной добавкой морских млекопитающих с целью снижения себестоимости препарата. - В кн.: Система комплемента. М., С. 22 -23 (соавтор - Н.С.Мотавкина).

38. Микром тодпческяэ подходы к массовому исследованию комплемента, - В кн.: Система комплемента. П., С. 24-25 (соавтор -А.С.Шаронов),

39» Сравнительное изучение, комплементарной активности сыворотка крови китов. - В кн.: Медико-социальные аспекты проблемы человек-океан. ■ Владивосток, 1988. С. 262.

. 40. Влияние сывороток крови кптоз на комплементарную актив -ност,ь морских свинок. - В кн.: Медако-социашше аспекты проблемы человек-океан. Владавооток, IS88. С. 262.

41. Нейрогуморальный а из,лунный гсмзостаз при эксперимен -тальном токсошгазмозе у белых крнс. - 2МЗН. 1989. Ж. С. 75-80 (соавтор - Р.Е.Пьянова).