Автореферат и диссертация по медицине (14.00.36) на тему:Физиологические и патологические закономерности функционирования системы комплемента

1 О 3 Э'Щ

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ УССР КИЕВСКИЙ ОРДЕНА ТРУДОВОГО КРАСНОГО ЗНАМЕНИ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ ИНСТИТУТ им. АКАДЕМИКА А. А. БОГОМОЛЬЦА

На правах рукописи

ТИТОВ Леонид Петрович

ФИЗИОЛОГИЧЕСКИЕ И ПАТОЛОГИЧЕСКИЕ ЗАКОНОМЕРНОСТИ ФУНКЦИОНИРОВАНИЯ СИСТЕМЫ КОМПЛЕМЕНТА

14.00.36—аллергология и иммунология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук

КИЕВ—1991 г.

Работа выполнена на кафедре микробиологии с иммунологией и вирусологией Минского ордена Трудового Красного Знамени государственного медицинского институту

ОФИЦИАЛЬНЫЕ ОППОНЕНТЫ:

доктор медицинских наук, профессор Е. Ф. Чернушенко доктор медицинских наук, профессор А. А. Иванов доктор медицинских наук, профессор О. Ф. Мельников

ВЕДУЩЕЕ УЧРЕЖДЕНИЕ: 2-й Московский ордена Ленина государственный медицинский институт им. Н. И. Пирогова Минздрава РСФСР.

на заседании специализированного совета Д. 088.13.06 при Киевском ордена Трудового Красного Знамени медицинском институте имени академика А. А. Богомольца (г. Киев, проспект Победы 34, санитарно-гигиенический корпус, аудитория 2).

Отзывы на автореферат высылать по адресу: 252057, г. Киев-57, проспект Победы, санитарно-гигиенический корпус.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке института (г. Киев-57, ул. Зоологическая, 1, стоматологический корпус).

Защита состоится

1991 г. ,ДМ

часов

Автореферат разослан

года

Ученый секретарь специализированного совета доктор медицинских наук

В. Г. БОРДОНОС

ОЕШДЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

^ Актуальность проблемы. Благодаря открытию в последнее де-, (Ытилетие ранее неизвестных закономерностей функционирования и В-еистем лимфоцитов, появляются новые возможности и перспективы направленной регуляции иммунитета. Вместе с тем, на атом фоне стало очевидным существенное отставание в познании , генетических,молекулярных и клеточных основ естественной резистентности, роли факторов, сэ определяющих, в развитии основных патологических процессов С воспаления,аллергических и аутоиммунных реакций, иммунологического повреждения тканей,иммуно-дефицитных состояний),составляющих основу патогенеза заболеваний.

Система комплемента, её физиологические и патологические аспекты в кооперации и дискоординации гуморальных и клеточных механизмов иммунитета, равно как и практическое использование данных о ее состоянии в оценке иммунного статуса в норяе и при патологических состояниях,являются малоизученным^ А. Я Кульберг, 1985;К. П. Кашкин,1988;Ь.М. Williams et al. ,1988).

Существенным шагом . вперёд в понимании закономерностей функционирования иммунной системы в целом и системы комплемента, в частности, является комплексный, системный подход к уровням. интеграции и регуляторным механизмам. В свяаи с этим функционированию системы комплемента при заболеваниях и в норме в связи с изменениями параметров других звеньев иммунной системы придаётся важное значение для установления взаимосвязанных процессов(Р. В-Штров с саав?, ,1983;С. Г.Осипов , В. Е Титов Л 985; Н. М. Ёережная ,1988; Е. Я Кузнда с соавт. ,1383; Б. М. Ковалев ,1989; Н. J. ÍAiIler-Eberhard .1989).

Своевременное выявление и адекватная оценка отклонений в состоянии системы комплемента, контроль за комплементарным профилем и процессом активации в динамике болезни, в течение . 'традиционного лечения и, особенно, при использовании иммукомо-дуляторов являются крайне важными. " • ,

Наиболее рациональным, на наш взгляд, является подход, предполагающий изучение состояния и соотношения зффекторных и регуляторных механизмов иммунитета, которые в наибольшей мере сопряжены с основными патогенетическими звеньями определённого заболевания, а также с основными физиологическими регуляторны-ш механизмами. Такими сопряженными звеньями могу? являться система комплемента и иммунокомпетентные клетки. Однако , это направление представляется малоизученным и нуждается в развитии. Выяснение этих вопросов по дачным in vivo и in vitro позволило бы, по нашему мнению, значительно повысить эффективность иммутокоррекции путем целенаправленного воздействия на ключевью зтаяы и функциональное состояние регуляторных механизмов этих систем,особенно,с противоположой ¡'.апра&г "ииостъа

Исходя ив этих предпосылок, ш в течение SO-x годов осуществляли разработку новых и усовершенствование имеющихся методов оценки иммунного статус а( системы комплемента и Т-сиетеш лимфоцитов).

Научное обоснование принципов и методов изучения, выявление и определение роли взаимосвязанных процессов в иммунной системе сформулировано в работах F. В. Штрова с соавт. (1S83-90гг.), Е- В. 'Чернуязенко с соавг. (1987), Л В. Новальчука, А. Е Чередеева( 1990).

Анализ указанных работ- показывает, что, несмотря на выявление множественных взаимосвязей в иммунном статусе при ряде вторичных иммунодефициткьк состояний, клиническая иммунология до настоящего времени не располагает полной информацией о закономерностях функционирования систем комплемента в условиях формирования дисбаланса в иммунном статусе, а также сдвигов, происходящих под влиянием иммунокорригирущей терапии.

Дедь работы- изучение физиологических и патологичеких закономерностей функционирования системы комплемента в клинике и эксперименте, установление взаимосвязей показателей системы комплемента с параметрами других авеньев иммунной системы к их значения в патогенезе, клинике к диагностике заболеваний.

Задачи исследования:

1. йсследовгть с помощью современных методов состояние системы комплемента и ее изменения при физиологических и патологических состояниях организма, разработать критерии оценки ишунного статуса организма на основе комплементарного профиля, интегральных показателей для оценки активности'и тякести клинического течений заболеваний.

2. Изучить взаимосвязь между содержанием к функциональной активностью компонентов, биологически активных фрагментов с показателями гуморального и клеточного звеньеи иммунного статуса, а также некоторыми гено- и фвяотипкчесвкми особенностями организма.

3. Изучить активации системы комплемента; содержание биологически активных фрагментов компонентой комплемента-03а,С4а,С5а) при заболеваниях и в процессе имкунокоррекции.

4. Кеследовать влияние иммуноыодулирувдзй терапии на состояние систеш комплемента у часто и длительно болеющих детей, больных сарковдозом, герпесом, а также в эксперименте.

Б. Усовершенствовать методы исследования систеш комплег мента.

6. Разработать и усовершенствовать методы оценки функционального состояния Т-системы лимфоцитов ir¡ vivo.

Баучная новизна результатов проведенной работы состоит в решении научной проблемы в области клинической иммунологии по

изучению физиологических и патологических закономерностей функционирования системы комплемента, разработке методов оценки иммунного статуса, выявлении сопряяеннж механизмов имыуно-регуляции системы комплемента и Т-системы лимфоцитов. С помощью современных иммунологических ' методов получены неизвестные ранее данные о состоянии системы комплемента и изменениях комплементарного прпфлля у больных аутоиммунными, аллергическими и инфекционными заболеваниями, а также у часто и длительно болеющих детей.

В работе впервые осуществлено комплексное,углубленное изучение системы комплемента у здоровых людей в зависимости от возраста, пола, принадлежности к определенным геногруппам по системе АВО, гаптоглобину(Нр), в течение беременности и менструального цикла. Установлен характер связи комплемента и его компонентов с уровнем циркулирукщих иммунных комплексов в зависимости от их массы и иммуноглобудинового состава.

Впервые выявлено наличие свези изменений в иммунном статусе с уровнем в крови биологически активных фрагментов компонентов комплемента- СЗа des arg, da des arg, C5a des arg, что позволяет предположить их участие в формировании дисбаланса в иммунной системе. Шказаны возможности использования моноцит-комплементарного индекса(Ш1) в клинической практике для оценки тяжэсти течения и распространенности процесса, а также в диагностических целях. Впервые выявлены возможности коррекции состояния системы комплемента иммукомодуляторами( тактиви-ном, тималином) и фармакологическими средствами(преднизолоном, циклоспорином А, пропрзнололом). Приоритетной является разработка нового подхода к сценке иимуяореаетизности организма на основе функциональных нагрузочных, внутри-ложных тестов (тест с ФГА и теофиллином и с ФГД и циклоспорином А), позволяющих вычленить и оцениА функцию регуляторного звена Т-системы иммунитета Впервые выявлен феномен локальной •отмены теофидлином анергии на туберкулин у больных туберкулезом легких, а так:« модуляция им алтигекспепифических и актигеннеспепифических механизмов ГЗТ и показаны возможности практического использования полученных результатов в диагностике и научных исследованиях при туберкулезе и других Слизких по патогенезу заболеваниях.

Основные положнкя, вшоскмыо на защиту:

1. Комплексный подход к сценке состояния систем: компле-мента(определение ЫКИ, комплементарного профиля, биологически активных фрагментов- СЗа,С4а,СЬа) при физиологических и патологических состояниях существенно повкпает эффективность диагностики, прогнозирования и контроля за кьмунореабилиташ'Ай.

2. Функционирование системы комплемента при физиоасгичзс-ких состояниях обусловлено влиянием ьярокого спектра биологи-

ческих( пол, возраст, менструальный цикл, беременность) и фи-'зическихС сезонность,излучение) факторов. Наиболее выраженные изменения в системе комплемента в норме выявлены в период протекания циклических, физиологических функциональных перестроек в организме.

3. Комплемент характеризуется наличием множественных и разнообразных"но направленности и силе межсистемных и внутрисистемных связей. Несистемные связи комплемента в иммунном статусе установлены с Б- и Т- системами иммунитета, фагоцитами и максимально проявляются в периоды возникающих в организме иммунобиологических процессов,инициирующих активацию координированиях, сопряженных регуляторньгх и эффекторных процессов. Ведущая роль в этих событиях принадлежит изменениям активации регуднторных механизмов Т-систеш лимфоцитов. Т-клеточный контроль может распространяться и на неспецифическую, резистентность организма. Внутрисистемные связи комплемента заключаются в наличии взаимосвязанных отношений мелду компонентами

и общей активностью,межкомпонентными и фрагмент-компонентными . связями, а также соотношением показателей классического и аль- : тернативкого путей активации.

4. Функционирование системы комплемента ж динамика ее ¿о--- казателей при патологических состоянияхСхронические инфекции,

аутоиммунные и аллергические заболевания) обусловлены формой и фазой течения процесса, его активностью, а также типом иммуно-реактивности организма.

5. Разработанные методы комплексной оценки функционадьнор го состояния системы комплемента и Т-систеш лимфоцитов соответствуют современному уровню, характеризуются новизной,

■ специфичностью, функциональностью,простотой выполнения. Они могут быть использованы для решения фундаментальных и прикладных вопросов клинической иммунологии, -

6. Результаты клинико-иммунслогического и экспериментального исследования закономерностей функционирования системы комплемента в процессе направленной кммунореабидитации и воздействия фармакологических препаратов и анализ их эффективности позволили установить,что разнонаправленные отклонения в системе комплемента можно корригировать препаратами иммуко-вдсстанавляващего действия,- тактивином и тималином. Иммуно-тропкые препараты- преднизолон, циклоспорин А и пропранолол, вакцина ВЦЖ- оказывают стимулирующий эффект в отношении систе--мы комплемента, который отличается па выраженности и характеру изменений комплементарного профиля.

Практическая значимость работы. На основании полученных результатов разработаны и внедрены в практику методы оценки состояния системы комплемента- а) общей гемолитической актиЕг

- б -

ноети классического и альтернативного путей активации радиальным гемолизом в агаровом геле; б) общей активности альтернативного пути по 50S гемолизу в жидкой фазе; в) прибор для исследования состояния комплемента кинетическим методом; г) автоматизированный метод определения обсей активности и активности компонентов.

Получены'и внедрены авторские свидетельства на изобретения: N 1050718 от 24.03.19а1 г. "Способ лечения дегенеративно-дистрофических и пссттравматических заболеваний органов опоры и движения";N1076809 от 1.11.1983 г. "Способ определения неврологических стадий остеохондроза позвоночника"; N1455315 от 1.10. 1988 г. "Способ определения состояния Т-клеточнсго иммунитета"; N1530987 от 22.08.1989 г. "Способ дифференциальной диагностики сарюоидоэа и специфических и неспецифических заболеваний легких";М536314 от 15.09.1989 г. "Способ определения сенсибилизации организма больного при туберкулезе". Получено положительное решение на заявку на изобретение N 449620Э/30 ст 28.09.1989 г. "Способ определения интерлейкин-2 зависимой активности Т-лимфоцитов в организме".

Ш материалам работы изданы следующие методические рекомендации:!) ¡"Методы определэниа бактерицидности сыворотки крови и • фагоцитов".-Минск, 1984(соавторы А. П. Крзсклькаков , Л Г. Борткввич);2) "Лечение и профилактика патологических состояний у детей в периоде новорожденностк".-Минск, 19851со-авт. R К. Зубович, И. В. дардыяская, ¡Q. Е Мальцев); 3) "Оценка иммунного. статуса организма г.о кожным тестам с фитогемагглютинкком и циклоспорином А". -Минск. -1990( ссавт. Л. К. Тесевш.О. П. Чудаков, Г. Д. Харитоник, И. Н. Семененя); 4) "Основы клинической микробиологии и иммунологии"-Минск. ~1984(соавг.А. П. Ерасильникоз и др.). Разработаны обучавшие и исследовательские »омпыагеркые программы для IBM ■совместимых персональных компьютеров для расчета активности компонентов и изучения механизмов активации системы комплемента.

Результаты исследований и разработанные методы внедрены на кафедре пропедевтики детских болезней и ДНИЛ Киевского медицинского института,научно-производственном объединений "Вектор", ЦНЯЛ Тюменского медицинского института, в !1КИЛ,ка кафедрах биологии, микробиологии с иммунологией и вирусологией , тубзр-кулеза, хирургической стоматологии, кожш и венерических болезней Минского мединститута. Минского государственного института усовершенствования врачей, З-оЯ клинической больниц г. Минска, НИИ охраны материнства и детства ¡¡С БССР, B3Í пулью-

- s -

нологии и фтизиатрии ЫЗ ШСР,. НИИ неврологии и нейрохирургии кз ЕСС?,НИй эпидемиологии АМН СССР, НИИ РМ МЗ СССРС г. Челябинск), в йшницком облтубдиспансере.

Апробация работы. Материалы диссертации доложены и обсуждены на: институтской научной конференций Минск, 1981), 1- ей Белорусской 1щмунологической научной ковференцяиС Витебск, 1982) 1-ой Всесоюзной конференции по инфекционной иммунологии(Москва 1982),2-ом съезде отоларингологов БССР( Минск, 1984), 1-м Всесоюз юм съезде медгенетиков (Киев, 1984), на заседании кафедры иммунологии 2-го Шскоаскаго медаяститута( 13S6), 2-й Всесоюзной конференции г.о инфекционной ишужшэгии( Саратов, 1987), Всесоюзной конференции по оценке иммунного статуса и организации мае совых иммунологических исследований Ангарск, 1987), на Всесоюзной научной конференции по системе камшгемента( Киров, 1987), на Пленуме правления Белорусского научного общества иммуноло-гов(Витебск, 1987),на заседании Минского отделения общества иммунологов(1985,1989),иа Пленуме Научного совета по иммунологии "Медиаторы иммунитета"(Минск,1937), на Пленуме Научного совета по иммунологии и Всесоюзной проблемной комиссии "Клиническая иммунология и аллергология'Ч Витебск,1989),1-м Всесоюзном съезде иммунологов(Сочи,.1989), 10-й Европейской им мунологической конференций Эдинбург, 1990), 1-ом иммунологическо съезде Белоруссии( Минск, 1990). Основное содержите диссертации опубликовано в 61 научной работе, изданных в СССР и за рубежом Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на Z.9G страницах машинописного текста, включая 5 5 таблиц к 36 рисунков. Состоит из введения,. обзора литературы, материалов.и методов исследования, Э глав собственных исследований, заключения выводов и практических рекомендаций. Библиографический указатель литературы включает 256 источников отечественных и 256 источников зарубежных авторов.

ащтшш£ работы

Материалы я методы исследования

Контингент обследованных лиц. В материалы работы включены данные иммунологического ' обследования здоровых и больных различными заболеваниями за пеоиод с 1979 по 1990 год. IIa числа обследованных лиц здоровых людей (детей и взрослых) было 47С человек, больных травматологического профилщ-147, инфекционными зэ0олйванкями-б4б, аутоиммунными и аллергическими болаанями -632; 282 ребенка с разными заболеваниями, а также 113 больных

(детей к женщин с невынашиванием беременности), которым проводилась иммунокорригирущая. терапия. Клиническое обследование больных осуществлялось в клюшках, в которых пациенты находились на лечении или амбулаторно при иммуно-эпидешологических исследованиях. Клиническое обследование было направлено на установление формы и фазы патологического процесса, локализации очага и степени активности.

Эксперименты выполнены на инбредньи мылах линии BALB/c, а также беспородных мшах 2-4-х месячного возраста весом 18-22 г. ; на крысах линии "Vistar", на кроликах породы "Шиншилла" и морских свинках.

Материалом для исследования служила периферическая кровь обследованных больных, забранная в утреннее время натощак. Имунный статус больных оценивали комплексно, используя в работе рекомендации Всесоюзной проблемной комиссии по эпидемиологии иммунодефицитов и оценке иммунного статуса.

Первичное иммунологическое обследование,включающее определение количества лейкоцитов и лимфоцитов периферической крови, содержания Т-и Е-лимфоцитов (Е-РОК и ЕАС-РОК), осуществляли методом розеткообразования (M Jcndal et al. ,1972;N. Msndes et al. , 1973), иимукорегуляторные субпопуляции î-клеток, несуще рецепторы для иммуноглобулинов 8-и M определяли методом UMsretta . et al.,(1976). Исследовали также содержание теофиллин-чувствительных (Тф. ч. ) и теофиллин-резистентных (Тф. р.) Т- клеток (Share A. et al.,1973). Рассчитывали отношения 1а/ Т? и Тф. р./Тф ч. клеток .Уровень иммуноглобулинов классов G.A, M определяли методом радиальной иммунодиффузии (&Mancini .et al.,1965), !gE -иммуноферментным методом.

Функцию Т-системы лимфоцитов in vivo определяли с помощью разработанных нами нагрузочных внутржожных тестов. Фагоцитарную активность йейтрофилов исследовали по отношения к культуре стафилококка. Уровень циркулирующих иммунных комплексов (ИИЮ, осажденных с помоиыо полизтилечгликоля, определяли методом M.Digeort. ,et al(1977). Активность интерферона в сыворотке исследовали по биологической активности (Ф. У1 Ераов с со-авт. ,1980),а фактор некроза опухолей(ФЮ)-иммуноферментным методом тест системой на основе моноклональных антител (А.&Шню-тич ,1989).

Состояние системы комплемента оценивали комплексно, используя функциональные и количественные тесты .Общую гемолитическую активность классического пути (КП) определяли по 501 гемолизу ( JI С.Резникова, 1970),общую гемолитическую активность альтернативного пути (АЛ) методом 5GZ гемолиза и молекулярного титрования (Л. В. Козлов с соавт. ,1982; JL ÍL Титов, А. Н. Ба~ гян, 1988). функциональную активность компонентов классического

-CIq,C4- C5 и альтернативного пути -факторов В и D исследовали в гемолитическом recifi с определением функционально-активных молекул (Л. R Коалов с соавт. 1982; А. IL Красильников,Л. П. Титов, Л. Г. Зорткевич, 1334). В работе использовали реагенты на исследуемый компонент, полученные как путем химической инактивации, таг. и аффиннсочивряяые лабораторного приготовления или производства ВНИИ ОЧП (г. Ленинград). Количественное содержание Cl ингибитора, Clq, CS, фактора В осуществляли с помощью шиоспедафических антисывороток методом простой радиальной им-кЗ'нодиффузии. Уровень аяафклатоксинов комплемента в плазме -СЗа des arg,C4a des агг,С5а des arg исследован радиоиммунным методом с использованием наборов фирмы "Arrersharo". МКК определяли по методу Л. П. Титова (1978).

Эритроцитаркае антигены системы АВО выявляли общепринятыми методами, фенотипы гаптоглобина (Нр)-с поморю электрофореза в полиакриламидком геле ( H.H. Hoppe et al., 1972). Титры О-антител к таиечной палочке определяли реакцией агглютинации, а антител к клебсиедла^ - в РСК ( А, П. Красильников с соавт., 1976).

Все исследования выполнены на кафедре микробиологии с иммунологией и вирусологией и в лаборатории иммунологии детского возраста ДШ Минского государственного медицинского института.

Статистическая обработка материалов исследований проводи-лзсь на ЭВМ EC-1Q2Q и ПК "AICTRAD PC-1640" с использованием пакетов прикладных программ статистических расчетов.

ОСНОВНЫЕ РЕЖЬТЛ'Ш МССЛЩШШП И ИХ ОВОЗДИШ

X. Разработка методов ксследагазка скстеш кешлежета к Т-скетсь&ы зтгфопща&.

1.1. Разработка методов тсле^ргагш системы юмашмеята.

Многокомпошнтность и полифункциональность системы комплемента затрудняет разработку и внедрение е шрэкую практику методов комплексной, интегратизной оценки ее состояния. В связи с зтим чада разработаны и усовершенствованы следующие методы; А-опроделвнне общей активности КЕ радиальным гемолизом в геле; В-определекиэ общей активности АЛ по 50% гемолизу в жилкой фазе; В -метод и устройство для определения активности комплемента кинетическим способом; Г-автоматкзироваяный метод шмплексшй оценки состояния системы комплемента.

А. Определение активности КП комплемента методом радиального гемолиза в геле осуггстзллли в несколько этапов: 1) при-

- Q -

готовлэние смеси гемолитической системы с расплавленным агаром;

2) проделывание в агаре лунок (до 20 и Солее на одной чашке); 3) внесение разведений (1/2; 1/4-, 1/8; 1/16) комплемента морской свинки с известной активность» в 5 лунок, а б остальные- испытуемых сывороток в разведении 1/4; 4) выдерживание чашек в холодильнике при 4" С, а затем в термостате при 37*С; 5) определение квадрата диаметра (Д*) зон гемолиза соответствующих разведений контрольной - опытных проб; 6) построение калибровочного графика по данным Д1 зон гемолиза разведений контрольной сыворотки (стандарта) и соответствующей им активности комплемента; 7) определение по калибровочному графику активности комплемента (СВ50) в пробах. В результате исследования определены основные параметры выполнения метода: а) 0,91 концентрация агара; б)оптимальяое гремя диффузии сыворотки -20-21час; в) оптимальное время инкубации для проявления зон гемолиза - 90 мин.-, г)температурный диапазон проявления гемолитической реакции - 25-55*С; д) пригодность отечественных марок агаров без дополнительной очистки; е) концентрация сенсибилизированных эритроцитов - 1,2nd5 клеток/мл; ж) возможность хранения готовых к употреблению чашек без утраты свойств в течение 3-х суток; з) возможность исследования лиофилизированно-го комплемента морской свинки в качестве стандарта Особого внимания заслуживает простота выполнения метода и его экономичность. Определение активности системы комплемента этим методом представляется быстрым, удобным и экономичным для клинических исследований.

Б.' Определение общей гемолитической активности комплемента по альтернативному пути (с участием СЗб, факторов В * D, пропердина) проводится редко, что может быть объяснено недостаточной разработкой адекватных методов исследования. В связи с этим нами разработан метод определения активности АП комплемента по 50% гемолизу и проведено его сравнение с методами радиального гемолиза и молекулярного титрования. В соответствии с данной методикой определение обцей гемолитической активности АП комплемента осуществлялось в несколько этапов: 1) внесение в пробирки ■ 10-кратно разведенной сыворотки (в 10 пробирок е шагом в 0,05 мл); 2) доведение объема изотоническим веронало-вым буфером до 1,5 мл; 3) внесение 1,5 мл стандартной взвеси кроличьих эритроцитов-, 5) остановка реакции при 4* С в течение 10 минут; б) центрифугирование в течение 10 минут при 1500 об/ мин.; 7) измерение оптической плотности супернатантов при 412 нм; 8) расчет общей активности АП в условных гемолитических единицах 5QZ гемолиза - АГОО.

В результате определения обшей гемолитической активности АП комплемента у 40 здоровых лиц были установлены олтимальян?

концентрации основных ингредиентов, включаемых в изотонический вероналовый буфер: 0,001 М МеС1г и 0,001 Ы ЭДТА. ' При сравнительном исследовании активности АЛ тремя разнили методами подучены практически аналогичные результаты (табл.1).

Таблица 1.

Сравнительная характеристика методов определения обчей активности АП системы комплемента

г-:-■-1

| Наименование Статистические показатели |

| коэффициент коэффициент ■)

| методов Х+м вариации корреляции |

1 |1) 502 гемолиза в ¡жидкой фазе (АБ50) 1 34,7+0,64 11,0 1-2 +0,83 (р<0,01) |

1 |2) молокулярногоэ ¡титрования (2*10 )мл 1 11,62+0,26 13,2 2-3 +0,78 (р<0,05) |

I |3) радиального гемо-¡лиза в агаровом геле- ^йЧмм5) • 1 142,4+3,4 15,0 3-1 +0,75 (р<0,05) |

Сравнение статистических параметров, характеризующих методы, показало достаточно высокую и достоверную корреляции полученных результатов.

Таким образом, для изучения общей активности комплемента, опосредованной альтернативной активацией,могут быть использованы все три способа. Однако, модифицированный метод титрования комплемента по 50%- гемолизу и метод молекулярного определения в жидкой фазе являются более стандартными и чувствительными и позволяют проводить исследования колебаний комплемента в широком диапазона. Учитывая простоту выполнения и учета, отсутствие . необходимости использования дорогостоящей аппаратуры, метсд радиального гемолиза в геле может быть рекомендован для лабораторий клинической иммунологии практического здравоохранения. Работы последних лет указывают на перспективность разрабатываемого направления технологии системы компле-мента( Д. Н Вавилова с соавт., 1984; Б. М. Ковалев ,1989; С. ОгонеЪ е^ . а1. ,1986; Р. Л. ЬасЫлапп ,1987).

В. С целью автоматизации процесса определения активности комплемента осуществлена разработка надежного,в использовании, компактного и относительно дешевого электронно-оптического

прибора, адаптированного к исследованиям системы комплемента в биологических жидкостях. Предложено устройство,принцип действия которого основан на измерении пропускания инфракрасного излучения <.4=900-1200 нм) дисперсной системой(взвесь суспензии эритроцитов в процессе лизиса комплементом). Регистрация кинетики гемолитической реакции решается с помоцьв автоматической записи.

Инструктивно прибор р-шолнен в виде нескольких блоков, включающих электронную схему и стабилизированный источник питания,тердастатяруемое кюзетное отделение с оптронной парой, электронный регулятор температуры с источником питания, камеру подогрева реагентов. Исследование гемолитической активности системы комплемента по КП и АЛ с помощью данного прибора показало хорошую воспроизводимость метода. При многократном исследовании одной и той же сыворотки коэффициент вариации составил 6,26%'. Устройство позволяет в течении рабочего дня исследовать до 100 проб сывороток яа активность комплемента, а тахж изучать механизмы биологической и лекарственной активации и ингибиции системы комплемента.

Г. Большинство используемых полукодичественнкх методов оценки функциональной активности комплемента многоэтапны и требуют больших затрат ручного труда,особенно,яа конечных этапах (определение степени гемолиза, построение калибровочных кривых, расчет показателей).

В связи с вышеизложенным наш модифицирована технологии определения функциональной активности основных компонентов классического и альтернативного путей активации комплемента. 3 основу пояокэны методы гемолитического определения функции системы комплемента (Л. П. Титов, А. Н. Батян,1992), а тага® молекулярного титрования актизности компонентов, факторов В и 0(А.Е Красильников,Л П. Титов, Л. Г. Борткевкч,4934). Для определен!« общей активности КП использовали ЕА комплекс с эритроцитами барана, активности компонентов- ЕАСп- комплексы, приготовленные с применением аффинноочшпрнных резгентоЕ. Способ осуществляли поэтапно: 1) приготовление ингредиентов;2) разведение проб сывсроток(КД-1/70, АП-1/7); 3) приготовление смеси, состоящей из комплексов Е и ЕА.ЕАС,?, испытуемой пробы; 4) инкубация 30 мин. при 37°С; б) остановка гемолиза внесением охлахдекногс за-буферекного физиологического раствора; б) центрифугирование; 7)перекос кадосадочной жидкости из пробирки в ссотЕетствуюаув лунку иммунологической планаеты; 8) фогоиетрированне кадоса-дочкой жидкости на мультискане при -412 нм; 9) расчет конечных показателей функциональной активности системы комплемента- . СН50, АП50, числа 1- эф«$ективкых молекул с помовдю разработанной математической компьютерной программы. Таким образом, ш-

дифицированы заключительные этапы определения функциональной активности системы комплемента. Автоматизация учета, расчета показателей активности существенно повышают стандартность, воспроизводимость и производительность метода, а математическая обработка повышает объективность полученных результатов.

Разработанные и усовершенствованные методы и устройства исследования функциональной активности компонентов системы комплемента позволяют использовать их для решения задач исследовательского характера. Резюмируя итоги и перспективы дальнейших методических поисков, следует отметить особую важность сочетания функционального и количественного подходов, а также автоматизации технологических процессов.

1.2. Разработка методов оценки ?-системы лимфоцитов ; л vi vo

■ftoaa представляется весьма активным в иммунологическом отношении органом. В ней содержатся основные типы клеток, необходимых для развития локального иммунного ответа: ангигенпре-зентируодае, антигенреактивные клоны эффекторных и регулятор-ных субпопулзций, вспомогательные клетки(а Д. Беклемишев,1385; Б. Д. Брондз, 1987; Е Е Нецукицын. , 1987; К. Honda, 1986; К. В. Narayanan ,1988). Недостатком юмзшкхся в настояадэе время иммунологических методов кожного теотирования(проба.Манту,проба с СТА,проба Иоффе) является тс,что с их помощью не представляется возможным оценить вклад отдельных типов иммунокомлетентных клеток > определяющих интенсивность ответной реакции организма. С целью повышения информативности методов оценки Т-системы лимфоцитов tn vivo разработано три типа знутрикожкых тестов: а) тест с ФГА +теофиллин(ТО); б)тест с туберкулиномСРРБ -U + ТФ ; в) тест с -ФГА + циклоспорин А{ ЦсА). В разрабртанных способах индуктор ответа- мптогек( антиген) вводится одновременно с иммунотропным препаратом. Учет результатов осуществляется через 24-48 часов путем измерения горизонтального и вертикального диаметров пятна инфильтрации. В качестве иммуно -тропных препаратов использованы ТФ и Дс А- препараты с противоположным аффектом на функцию Т-клеток,особенно, регуля-тосных субпопуляций. ТФ оказывает преимущественное влияние на функцию Т-супрессоров, а Цс А -Т-хедперов. В результате введения ТФ и Цс А совместно с политональным митогеном Т-клеток меняется конечный результат ответной реакции как по выраженности, так и по направленности.

А. Несмотря на то,что локальный ответ на PPD является простым и ориентировочным методом исследования событий, которые развиваются в организме на уровне иммунокомлетентных кде-

ток, вовлекаемых в реакцию, тем не менее ок остается важным тестом в диагностике туберкулеза. Однако, при раде состояний, в том числе и в динамике выраженного туберкулезного процесса, этот тест претерпевает существенные изменения и часто оказывается отрицательным и, соответственно, может трактоваться как отсутствие Г3| на антигены микобактерий, ¿ибо как формирование состояния анергии. Это создает значительные трудности для ди-'агностики, дифференциальной диагностики и снижает его клиническую значимость. В этой сеязи представляет интерес анализ результатов использования Енутрикожяого теста с ФГА +ТФ у разных групп исследованных лиц(табл.2 ).

Таблица 2 .

Направленность изменений реакции ГЗТ на ФГА с ТФ у больных с разной патологией

1........... I Группы больных i Направленность реакции (X) i

повышение снижение отс. изме- |

некий !

I 1. больные туберку j

| лезсм( 6) 6(100)* 0(±11) 0(±11) I

I 2. больные саркои- I

I дозом'12) 10(34,3110,7)* 2(16,7110,7) 0(±S,6) (

1 3. больные с пере-

1. • ломами челгети

1 (2В) 13(4б,4±9,4) 6(21,4+7,7) 9(32,2+8,3) ¡

| 4. кардиологичес-'

I кие больные(28) 8(30,8+7,9) 15(57,7±9,5)* 3(11,5+10,1)1 »

*- достоверность различий- Р< 0,05-, <0,0i.

У больных туберкулезом легких при постановке внутрикояяой пробы с ФГА и ФГА с ТФ у всех больных(ЮОХ) реакция увеличилась с б,6±0,8 мм до 14,17+1,8 мм соответственноеО,001). У больных саркоидоэом стимуляция ответной реакции отмечалась в 83,3S случаев. В группе больных с переломами челюсти размер инфильтрата увеличивался у 46,425; пациентов. Это означает, что in vivo при комбинированном введении ФГА с ТО усиление ответной реакции отмечается примерно у 30*, а угнетение - у 222.

Б. Значительный интерес представляет данные по шдуляюж ТФ отрицательной и положтелькой реакции на PPD-L у больных к пдороЕЫХ людей. Наличие папулы разшром 5 мм к более на месте

введения туберкулина с при отрицательной цробе только на РРВ свидетельствует о наличии скрытой сенсибилизации организма антигенами шкобактерий, а по разности диаметра положительной пробы на РРО с Т© и без него имеется возможность определить угнетение или стимуляцию Т-клеточного звена иммунитета. У здоровых лвдей с положительной реакцией Канту повышение ответа выявлено только у ЬХ обследованных, снижение- у 48%, а у 44% наблюдаемых ответ не изменился. Среди больных туберкулезом повышение ответа установлено у 68% пациентов, а снижение-у 32 X. У больных саркоидозом применение нового теста не выявило реверсии реакции на положительную, что может быть расценено либо как отсутствие сенсибилизации к туберкулину, либо как наличие состояния супрессии. Очевидно, что в группе здоровых лиц, а также больных саркоидозом при введении РРО в комбинации с ТФ состояние сенсибилизации, скрытое механизмами анергии, выявляется в небольшом проценте случаев.

В противоположность этому у больных туберкулезом, то есть у сенсибилизированных лиц, но в состоянии анергии, у 90Х ответная реакция(отвечаеыость) на РРО восстанавливается. Это означает, что ТФ в комбинации со специфическим антигеном(Р?ГО или митогеном' ФГА) локально вызывает отмену состояния анергии, а также модулирует ГЗТ, что позволяет выявить как состояние сенсибилизации, так и оценить степень и направленность дисбаланса в Т-звене иммунитета у конкретного индивидуума. Нами получены экспериментальные подтверждения локальной модуляции ответа организма животных на специфические; антигены и ФГА теофилликом. Расшифровка закономерностей разноиапразленности ответной реакции, на антигены и мктогены у больных и здоровых людей при сочетанном введении с ТФ является важной для пониманий сущности иммунорегуляторных процессов. Этот феномен, как и отмена анергии -ТФ, представляются 'перспективными для дальнейшего исследования. Нами получены наиболее отчетливые различия в величине соотношения■ иммунорегуляторных субпопуляций-Тгг/Тд в группах лиц с отрицательной и положительной динамикой изменений ГЗТ при ее модуляции Т<К?<0, 01).

В. Разработан нзеый функциональный нагрузочный способ оценки иммунореактивности организма, основанный на ингибиции функции ИЛ-2 зависимой актквнссти Т-скстемы лимфоцитов. Пациенту осулдаствлявг постановку трех проб на внутренней поверхности предплечья: 1) с 0,1 ш ФГА в концентрация 20 мкг/мл; 2)' с ФГА+ 6,25 мкг/мл Це А и 3) с ФГА + 25 мкг/мл Пс А.

Клинические исследования, выполненные в группах пациентов с переломами нжшей челюсти(26), ревматическими болезнями{ 12), со сквозными дефектами лица и шеи (34), больных кардиологкчес-

кого профиля(25) и контрольной грушю(15) показали, что зависимость величины, обратной квадрату диаметра кохной реакции, от концентрации Цс А косит линейный характер в нтервале концентрации Цс А от О до 50 мкг/мл. Это позволило выявленную закономерность описать математически и рассчитывать дозу Цс А, ингибируищго на 50% К Л-2 зависимый ответ Т-лимфоцитов в кожном тесте по формуле: "

25 6,25 - + -

1/Д^- 1/Д2 макс. 1/д|-1/Дг макс.

где: ИД 50- концентрация Дс А, ингибирухлцая 50Z реакции кожной пробы; Д макс. - диаметр кожной пробы на ФГА(т. е. максимально возможная активность Т-системы лимфоцитов in vivo у этого индивидуума на данную дозу митогена); Д1 и Д2 - диаметры кожных проб о ФГА и ФГА с ЦсА в концентрации 6,25 и 25 мкг/мл.

ИД 50 ЦсА может служить критерием для оценки ИЛ-2 зависимой активности Т-системы иммунитета у данного индивидуума, а при сравнении с данными референтной группы позволяет выявить отклонения в-состоянии Т-системы лимфоцитов у пациентов разных групп. Предлагаемый способ позволяет выявить и оценить функциональную активность Г-системы лимфоцитов аа счет вычленения вклада циклоспоринчувствительной субпопуляции Т-клеток,что повышает информативность кожных тестов, расширяет их возможности и ценность в отношении исследования состояний, патогенез которых связан с избыточный или сниженным биосинтезом ИЛ-2, а также при заболеваниях, ' в патогенетической терапии которых используется ЦсА(трасплантация органов и тканей, аутоиммунные и аллергические заболевания, в эксперименте). Это позволит более точно'определить" индивидуальную дозу препарата и оптимизировать лечение этим высоко иммунотропным препаратом. Pesiar,груя полученные данные, можно констатировать, что комплекс разработанных и усоверикнствованных методов оценки состояния системы комплемента.и Т-системы лимфоцитов характеризуется тем, что позволяет вскрыть более тонкие механизмы функционирования гуморального и клеточного звеньев иммунной системы в зависимости от патогенетических особенностей заболеваний, представляет гозможность установления взаимосвязей между показателями in vítro и in vivo. Развиваемое направление по совершенствованию методических подходов и принципов оценки отдельных звеньев иммунитета и иммунной системы в целом согласуется с современными перспективными концепциями развития клинической иммунологии (JL В. КоЕальчук, А. Н. Чередеев, 1990).

ИД 50 - 1/2 Д2 макс, х

2. Фкаиологическка закономерности функционирования системы комплемента

Исследования комплемента показывают, что у новорожденных детей уровень функциональной активности компонентов довольно высокий, причем активность С2 и С4 компонентов несколько вше, чем СЗ и С5, что отличается от их соотношения у взрослых. Более высокий уровень эффективных молекул компонентов комплемента выявлен в 1-ые сутки после рождения.

У детей в возрасте до 14 лет значимых различий системы комплемента в зависимости от пола не выявлено. Вместе с тем заметна несколько более высокая активность КП у мальчиков, а альтернативного - у девочек. Состояние комплемента с возрастом не имеет выраженных изменений. У девочек ряд показателе^ С1, общая активность, факторы АП) имеют тенденцию к повышению, а С2,С4 и СЗ компоненты к срижнйо.

У мальчиков изменения комплемента в возрасти«,: аспекте носят более достоверный характер при однонаправленной тенденции. Достоверно повышается уровень С4(Р<0,01) и фактора В альтернативного пути(Р<0,05)(рис.1).

£3-0-3 года П-4-6 лег л«т Ш-11-Ц дет

цяпанЕКТи

Рис.1 . Состояние системы комплемента у мальчиков в возрасте от 1 до 14 лет

Из числа обследованных здоровых доноров нами выделено четыре возрастные группы: 15-20(1), 21-30(2), 31-40(3), 41-50(4). Содержанке С2, СЗ и обшая активность КП и АП были выше в 1-ой и 2-ой группах, в сравнения с 4-ой(Р<0,05). Количественное со-

держание СЗ достоверно повышено в 1-ой группе. Более высокая активность С4 и С5 регистрировалась во 2-ой группе. Повышенный уровень факторов АП был во 2-ой и 3-ей группах по сравнении с 1-ой и 4-ой (?<0,05). Содержание СЗ, общая активность КП и АП выше у лиц с ВСЗ) и ниже у лиц с 0(1) группой крови(Р<0,001). Повышенный уровень C2.C4.CS компонентов,факторов В и D выявлен у доноров с АВ(4) группой кравк(Р<0,05). Существенных отличий в активности комплемента я зависимости от фенотипов Нр не установлено. Выявлена сезонная динамика активности комплемента-повышение- в весенне-летний и снижение- в осенне-зимний период.

С целью исследования механизмов естественной эндогенной регуляции системы комплемента уДЗб женщине 43 здоровых, 34- с невыкаливанием беременности и 29- с адреногенитальным синдромом) 3-х кратно ( в фолликуликовую, середине цкеда и лютеино-вую фазу) проведено исследование СН50 и активности компонентов. Полученные данные свидетельствуют, что у здоровых женщин активность КП повышается к середияе(Р<0,05) и практически нормализуется к концу ииш(Р<0,05). У я&ищин с невынашиванием беременности и адрезогекитальным синдромом активность КП в середине цикла не изменена,но достоверна повышена в конце(Р<О,COI).

Комплементарный профиль- характерный уровень С1,С4,С2,СЗ, С5 компонентов,факторов В и D у женщин с адреногэнитальным синдромом также достоверно выше в конце цикла(Р<0,001). В то же время установлена обратная динамика изменений активности С5 компонента в сравнении с тенденциями изменений активности других компонентоЕ(Р<0,01).

беременность является по сваей общзбгологической значимости уникальным физиологическим процессом. Состояние е5:стемы комплемента в процессе беременности изучено недостаточно. Выполненное исследование свидетельствует, что в первые 8 недель беременности существенных изменений,состояния системы комплемента не отмечается,но,начиная с 11-ой по 14-й неделя,имеется достоверное снижение Cffi0(P< 0,001) с последующим постепенным и достоверным повышением к 25-30-й неделям(Р <0,01). Затем, с 31 по 35-ю недели имеет место постепенное снижение функциональней активности комплемента до исходного от начала беременности уровня.

Результаты исследований, изложанных в яастояаек разделе, свидетельствуют, что у новорожденных соотношение С2.С4 и C¿,C5 компонентов отличается от такового у подростков и взроелкх. Различия в уровне отдельных компонентоз у детей и взрослых в состоянии физиологической нормы обусловлены полом, возрастом, генетическими факторами;группой крови,фенотипои Яр),сезонностью. Змзиодогическзя перестройка организма яенюыы в терние менструального цикла, а такжэ в течение беременности сопровождается физиологически обусловленной модуляцией состояния с ко-

темы комплемента от гшга- до гипер- и нормокомллементемии. Изменение уровня С5 противоположно динамике остальных компонентов. Это указывает на существование важных физиологических закономерностей естественной регуляции активности и содержания компонентов системы комплемента, вскрытие которых позволяет объяснить разнообразные варианты дисбаланса этой важной регуляторной и зффекторной'сиетеш не только в норме, но и при заболеваниях.

2. Шаеистемше и в;1утр;кжгтси1ай; связя комшгмакга

Система комплемента в целом, ее отдельные компоненты и фрагменты характеризуются широким спектром биологической активности. Шюгие компоненты к,особенно, фрагменты способны прямо или опосредованно осуществлять вакные в системе взаимодействующих иммунокомпетентных клеток функции( А. ЯКульберг,198б; К. П. Кашкин, 1S87; D. Vergani. ,1986; Е. L. Morgan ,1987).

С целые? установления вовмозяшх взаимосвязей количественных параметров В-, Т- и 0- клеток с системой комплемента, у. 143 больных травматологического профиля использован дискретно-динамический анализ. Характер взаимоотнокений относительных и абсолютных показателей лимфоцитов с показателями системы комплемента чаце указывает на отсутствие или обратную свяаь СН50 с уровнем В- и Т- клеток(г=-0,48;Р<0,01) и положительную или отсутствие таковой с 0лимфоцитами(г=+0,28;р<0,05). Изменение активности комплемента имеет положительную корреляцию с Т£-клеткауи(г=+0,5;Р<0,01) и отсутствие связи с Тпгклгтками. Обнаружено, чт-о активность комплемента имеет' обратную связь с соотношением Tin/tatг=-0,25;Р<0,05). Прослеживается положительная связь Tff-клеток с общей активностью КП и АЛ, активностью С4, СЗ, факторов В и В, отсутствие связи с С2 и С5 , отрицательная- с величиной НКИ(табл.3 ). •

Показатели CffiO СЗ С4 СБ AIEO

- 0 - - 0

Б-клетки - 0 - - + Таблица 3. Взаимо-

- о 0 - 0 связь параметров

Т-клетки - 0 - о иммунного статуса и

0 0 0 + системы комплемента.

0- клетки о. о 0 0 4 + - положительная

0 - - 0 - '— отрицательная

Тш-клетки■ 0 - - 0 - о - отсутствует

+ о 0 4

Tg-клетки + + 0 0 +

Ttr/Tg - - - 0 0 -

- 19 -

С целью более углубленного анализа исследуемых взаимосвязей изучена корреляция В- и "Т-клеток, иммуноглобулинов,ДИК, фагоцитоза, цитокинов-интерферона, ЙЮ с системой гомплемента у £82 детей(здоровых и частоболепиих). Результаты проведенных исследований рис. 2 ) позволили еыявнть -наличие отрицательной связи между Б-клетками и комплемектом(г=-0,46;Р<0,01), подозрительной связи'с IgM(r=+0,42:P'-0,05), IgG(r=+Q,2G-, ?<0,05), причем, как с IgM так и с IgG, отмечается линейный характер связи между показателями з пределах концентраций от 0,3 до 3,3 г/л и от 3 до 18 г/л, соответственно), то есть, гипо- IgG-гаммаглобу-линения, как правило, сочетается с гипокомплементемией, а кор-мо- и гипергамыаглобулинемия- с гиперкомплементемией. Гипер-комплемектемия сочетается со средними значениями IgA в крсви, при общей отрицательной направленности связи. Изменения активности комплемента в зависимости от концентрации в сыворотке IgE представляет собой полную противоположность той зависимости, которая выявлена с другими классами lg. Коэффициент корреляции между СН50 и IgE равен - 0,7(Р<0,01),то есть увеличение концентрации IgE сопровождается снижением активности комплемента. Установлено, что связь комплемента с уровнем IgM и IgA в слюне практически отсутствует, но с концентрацией IgG она высокодоетоверна(г=-Ю,87-,Р<0,01). Уровень иммунных комплексов в крови не индуцирует существенных сдвигов в система компле-мента(г=-0,12; Р> 0,0а). Не установлено значительной связи между изменениями СЕ50 и фагоцитарным показателем нейтрофнлов.

Анализ направленности и силы связи между обоим содержанием Т-лимфоцитов и активностью комплемента позволяет говорить о наличии тенденции обратной зависимости между этими показателями, хотя в интервале низких значений Т-кзеток(300- 600 wl/мкл) активность КП достоверно повышена!.Р<0,05).

■Две основные субпопуляции Т-клеток- Гп-клетга индукторно-хелперныз.и Tg- супрессорно-цктотокскческие различаются по многим критериям и- обладают функциональными свойствами с противоположной направленностью. Исследованием установлено, что корреляция СК50 с Tm-кдетками негначительная(г—0,12;Р>0,05), в тс время 'как с содер.юяием Tg субпопуляции выявляется отчетливая положительная зависимость О-+0,51; 0,01).

Известно три основных анафилатоксина систем комплемента СЗа,С4а и С5а, обладающих разными иммунобиологическая) свойствами. Влияние и связь уровня анафилатоксшюв в крови с покт затедями иммунного статуса до настоящего времени не исследованы. У 52 детей- 18 здоровых, 22 часто болеюких ОРВИ и 12 больных аллергическими заболеваниями одновременно исследованы параметры иммунного статуса и состояние системы комплемента. Результаты показывают, что направленность к с,tía мелскстемяья:

ЖО/мл

130

100 160

I5D

100

i'ju 160

:зо

а) й г=-0,4б Д р<0,05 Vjs^l pstttmssssS) М В-клетки 100 300 600 «. . 1 ■ 1......, ■ ' б) г=+0,42 р<0,05-, Л***1 Ы(г/л1 0,3 1,0 3,0

В1* п Г=+0,36 р<0,с5 ^^ IgG "(Г/Л1 2 10 20 г\ л г=-0,07 j/V Р<0,С5 Ig А(г/л1 0,3 1,6 2,4 3,2

г=-0,12 % - Р>0,05 Т-клетки 300 600 900 I2C0 ei r»-C,13 р<0,05- UV X/ Fc^i -клетки 80 160 240 320 ..... '.и, ' ;

r=+Q,6t Р<0,05 дгтушцашяе—о ул/^ Рс^- клетки Г00 150 200 , 250 -i-1-1----1 _г 3^ r—0,13 : У* з

Рис. 2. Характер взаимосвязей комплемента с показателями В- к Т-систем иммунитета: а)Б-клетками;б) lgM-.в) IgG;r) IgA; д) Т-клет-ками;е)rem -клетками; ж) Fcg-клетками; з)соотношением Tm /Tg .

и внутрисистемных связей у здсровых и больных детей значительно отличается. При развитии патологического процесса меняется как сопряженность, так и направленность взаимосвязей.

С4а des srg имеет разную направленность связи с В- и Т-клет-ками,положительную-с соотношением Tm/Tg(P<0,01) к содержанием IgM(P<G,01).C компонентами КП у здоровых и часто болекдих детей уровень С4а имеет положительную,а у больных аллергией отрицательную связь. С активностью С4 компонента отрицательная связь Солее значима,с показателями АП она отсутствует.

С5а des are в крови характеризуется положительной связью с уровнем Е-РОК,Тш-клеток и отрицательной с Tg-клетками, что в определенной мере согласуется с данными T.G.Eg>iang ,A-D. Befus., (1984); К. В. Yancey. ,(1588) о стимуляции С5а иммунного

ответа С уровнем ШЖ. корреляция С5а отрицательная, а с IgA и IfKf- положительная. Внутрисистемные связи С5а с компонентами КП у здоровых детей, в основном, полоаитеяьной направленности, а у больных- отрицательной. Отрицательная корреляция имеет место и с показателями С фагоцитарной активностью нейтро-фялов связь либо отсутствует, либо имеет положительный знак.

Таким образом, анафилатотеикы системы комплемента характеризуются ¡лироким спектром межсистемных и внутрисистемных связеа. Подученные результаты целесообразно рассматривать в сеязи со способность» этих биологически активных полипептидоё взаимодействовать с различными типами иммунскомпетентных кле-. ток М'зстно или системно и вызывать формирование дисбаланса в имлг/нном статусе при выраженной активации системы комплемента.

Дзнные о связи показателей с-истемы комплемента с интенсивностью аллергических реакций немедленного и замедленного типов в литературе отсутствуют. Исследование интенсивности кожных проо немедленного типа на аллергены домаяшей пыли и активности комплемента проведено у 63 больных бронхиальной астмой в меж -приступный, приступный и постпркступный периода Показано,что направленность и сила связей меняется в зависимости от периода. Так, в пристулном и лостприступном периодах коэффициента корреляции ДЛЯ С2-0,5;Р< 0,05 И +0,66;Р<0,01), ДЛЯ С4- - 0,5? и - 0,7(Р<0,01), для СЗ - 0,52 и + 0,7(Р<0,01), а для • С5--0,36 и - 0,55(Р<0,05) и <0, 01), фактора В- -0,12 и -0,55(Р<0,05), соответственно.

Анализ связи йункционирования системы комплемента с интенсивностью ксжной реакции ГЗТ выполнен у больных кардиологического профиля (стенокардией,кардиосклерозом). Изучена взаимосвязь функциональной активности компонентов комплемента с интенсивностью ГЗТ на СЕРА и ФРА с разными концентрациями ЦсА - 6,25 и 25 мкг/мл. Результаты показывают, что величина инфильтрата в ответ на ŒTA имеет положительную связь

с CffiO, активностью СЗ.С4 и С5 компонентов и обратную- с активностью Clq, С2 кошонентов, BhD факторов. Связь активности компонентов с интенсивность*! внутрикожного ответа на ФГА при ингибиции ответа разными концентрациями ЦсА свидетельствует не только об изменении силы связи,но и о ее обратной направленности. Изменения такого характера установлены,в основном, для компонентов КЙ.

Сравнительный анализ взаимосяэей системы комиялемента с интенсивностью кожных аллергических реакций разных типов свидетельствует, что между результатами реакций ГНГ и активностью компонентов КП корреляция чаще имеет отрицательную направленность, а с - ГЗТ- положительную.

Ранее нами установлена зависимость активности комплемента сыворотки крови от содержания моноцитов и предложен новый по-казатель-МКИ. МКИ исследован у лабораторных животных: морских свинок- 3,67+0,04 и крыс- 32,04 +1,2. У животных также имеется положительная связь моноцитов с СЕ50 - +0,7о и Clq+0,53 и C3-+0,45(Р<0,01 и <0,05) компонентами, на основании чего предлагается определение монокомпонентны;-: МНИ. Исследование МКК у здоровых людей и больных с патологией разного генеза показывает существенные различия (табл. 4 ).

Таблица 4 . МКИ у больных различными заболеваниями

Нозологическая * Число ,

форма обследованных . Xtm Р

Гломерулонефрит • •

у детей 68 4,52± 0,38 < 0,01

Системная красная

волчанка ео. 10,56± 0,62 < 0,05

Ревматоидный артрит 87, 7,84+ 0.56 > 0,05

Псориаз 26 4,72± 0,38 < 0,05

Саркоидоз' • 26 12,4 + 1.2 < 0,01

Туберкулез 28 6,8 ±0,7 > 0,05

ХЕЗЛ 19 6,1 + 0,6 > 0,05

Здоровые дети 47 8,51± 0,32

Здоровые взрослые 44 7,781.0,42

Больше возможности применения ЩИ имеются при заболеваниях легких, инфекциях, аутоиммунных болезнях. Исследование связи величины ШШ с шюшэдыо очага воспаления в легком позволило установить наличие сильной положительной корреляций г-+0,99). В связи с этим представляется возможным использование Шй. в дифференциальной диагностике заболеваний.

- 23 -

Представленные в разделе результаты свидетельствуют о наличии как положительных, так и отрицательных типов взаимосвязей между системой комплемента,клеточными и гуморальными факторами других звеньев иммунной системы. Наличие отрицательных зависимостей комплемента с уровнем В- и Т-лимфоцитов, Тпгклеток, IeE, IgA,соотношением Trn/Tg и шлотателъных с уровнем ïg-клеток, lçG, IgM позволяет судить о возможности Т-клеточкого контроля системы комплемента.

4. Состояние системы комплемента у больных хроническими спеця&ичеввкй и неспецйфкчеегаам заболезашегмк дыхательного тракта.

Особенностью последних лет является увеличение в обпей патологии человека чпслз хронических заболеваний,в том числе и инфекционной этиологии. Хроническое течение инфекционных заболеваний многие исследователи связывают с иммунологическими и генетическими механизмами естественной и приобретенной резистентности организма(Дж. Дик. ,1982;Р. В. Петров, 1987; JL Йегер,1990).

Проведено исследование состояния системы комплемента и механизмов клеточного иммунитета и установлена их связь п некоторыми генетическими маркерами у Сольных первично-хроническими инфекциями верхних дыхательных путей( склеромой, озеной, туберкулезом легких и пневмонией).

Хронические клебсмедлезы - одни из наиболее распространенных первично-хронических заболеваний верхних дыхательных путей бактериальной этиологии. Ранее полученные данные о состоянии и фукщшнировашга иммунной системы при клебсиеллезах свидетельствуют о наличии ряда изменений в специфическом ( .4. П. Красиль-ников, Н. А. йзраитель ,1971; А.IX Красильников, М. В.Мякиннико-ва,И. А. Крылов ,1980) и неспецкфическом звеньях иммунной системы(Д П. Титоз,1978; Т. А. йанашкова, 1985). Однако, имеющаяся о состоянии системы комплемента и других показателях иммунного статуса информация свидетельствует о сущэственом отставании исследований в области клинической иммунологии при этих заболеваниях.

функционирование системы комплемента у Сольных склеромой несколько отличается от нормального: отмечается незначительное повышение общей активности КП, несколько увеличена активность 02 и С4 компонентов. Активность 03 соответствует норме, а количественное содержание, исследованное иммунохимически, достоверно повьшено(Р<0,01). Активность 05 компонента находится на верхней границе нормы. Общая гемолитическая активность АД, факторов ВиД достоверно снижены( Р<0,01). Состояние системы комплемента у больных РСК+ и РСК- свидетельствует об отсутствии достоверных различий показателей в этих группах, ва исключением содержания Cl ингибитора(Р<0,05).

Корреляционные связи комплемента с параметрами В- и

Т-системы иммунитета у больных склеромой свидетельствуют о том, что обшая активность и компоненты классического пути - С2 -С5 имеют отрицательную связь с уровнем ЕАС-РОК в крови, а общая активность и ($актор В АЛ - положительную. Отрицательная зависимость характерна для связи общего содержания Т-клаток с С350. Противоположные свяаи имеются между показателями системы комплемента и субподяциями иммунорегуляторных Т-клеток.

Иммунный статус организма, выраженность его показателей, определяется суммарной активностью генов, контролирующих клеточные и гуморальные факторы иммунитета ( 'ДЫЗарецкая ,1986; ЛИ Алексеев ,1989).

Иммуногенетические исследования позволили выявить некоторые различия в иммунном статусе. Так, больные с фенотипом Нр1-1 характеризуются средним уровнем Т- и В-лимфоцитов, иммуноглобулинов Б, повышенным уровнем 1еА, высоким титром О-антител, высокой активностью комплемента, несколько сниженным МКИ. Бальные, принадлежащие к гендгруше Ер2-2 характеризуются сниженным уровнем О-антител к палочке склеромы, нормальным уровнем л и Ы классов, сниженной активностью комплемента, ЫКЛ Гетерозиготные по Вр больные имешг промежуточные значения иммунологических показателей.

Исследование состояния системы комплемента у больных озе-ной также свидетельствуют об отсутствии существенных различий в обшей активности КП-С1Б0 (Р>0,05). Установлен достоверно повышенный уровень активности С4, С2, СЗ, С5 компонентов (Р<0,05). Выявлено достоверное снижение общей активности и фактора В АП (Р<а,05).

Отсутствовали значительные отклонения в активности и количественном содержании компонентов у больных оЗеной РОК-положительных и РСК-отрицагелных. Иммуногенетические исследования при озене показали ,что относительное содержание Т- и В-клеток у больных не имеет тесной связи с фенотипом Нр. Их уровень в генсгрупах'Нр1-1 и Нр 2-2 достоверно не различается (Р>05,). Концентрация иммуноглобулинов О и А классов имеет тенденцию к повышению в геногруппе - Нр 2-2. Бальные гетерозиготные по Нр имели промежуточные значения концентрации иммуноглобулинов, этих классоз. Содержание иммуноглобулинов М класса в выделенных геногруштах практически не различается (Р> 0,05).Установлено существенное различие в титре специфических О-антител. У больных озеной геногрушш Нр 1-1 титр составил 1/20+2,5 Нр 2-1-1/17± 3,3 и Нр 2-2-1/1012,4, то есть у гомозиготных больных наблюдаются достоверно различные уровни О-актител.

Таким образом, у больных озеной.имеются отклонения, как в функционировании системы комплемента, так и в иммунном статусе. Ряд , показателей иммунитета характеризуется ассоциацией с-

. - 25 -

фенотипом Нр. "

Поражения нижних отделов дыхательных путей бактериальной этиологии при пневмонии к туберкулезе свидетельствует о более обширном распостранении патологического процесса, чем при склероме и озене. Исследование распределения антигенов системы АВО не выявило достоверных различий как от контроля, так и в пределах разных по клиническому течения групп. Не установлено значительных различий и в частоте фенотипов Бр. Анализ состояния системы комплемента (С®0,СЗ) не выявил существенных различай актизности у больных туберкулезом с разными группами крови и фенотипом Нр. Однако, имеются различия в величине индекса бактерицидности у больных туберкулезом и .пневмонией с фенотипом Нр2-1 и Нр2-2 (Р<0,05). Содеркзлиз СЗ нижэ при туберкулезе, чем при пневмонии. У больных туберкулезом з возрастном аспекте отмечзетгя повыкенче СШО и одновременное угнетение внутрикожного ответа на туберкулин.

5. Состаж-д ежталм комплемента при ауто'лшуниш и аллергических заболеваниях

Роль системы комплемента при аутоиммунных и аллергических заболеваниях исследовалась многими авторам. В больией степени система кошлекзита исследована при аутоиммунной патологии. Главной посылкой таких поисков было установление связей с формой, фазой и активностью процесса (Ви А. Насонова. ,1981; Г. И Мат-вейков с соавт. ,1982; Н. А. Константинова с соавт. 19.82; А. В. Мадхи-дов. ,1985; Г. Н. Дранкик. ,1989). Состояние системы ксмп.яемента изучено при таких заболеваниях как системная красная волчан-ка(СКВ), сахарный диабет, саркоидоз.

Системная красная волчанка. Большинство исследователей отмечает сниженный уровень комплемента, активности СЗ и С4 компонентов и повиданный уровень Щ®. Считается, что актигация комплемента классическим способом является основным патогенетическим механизмом развития воспалительных процессов и имму-нолсгичэского повреждения. Емасте с тем, у людей и животных с генетическими дефектами системы комплемента развивается СКЗ подобный синдром. При зтсм отмечается нарушение злкминэашк ЦИК, которые накапливаются в кроЕИ и вызывают развитие васку-литов. Мы полагаем, что кроме генетически детерминированного механизма снижение общей гемолитической активности комплемента и ряда компонентов может быть и приобретенным в результате избыточной стимуляции кммунорегуляторных механизмов определенного типа. Установлены различия в степени активности СКВ в зависимости от исходного уровня комплемента- низкого, среднего и высокого (табл.5 ).

Таблица 5 .

Распределение больных СКВ с разной степенью активности процесса в зависимости от уровня комплемента

Группы больных по активности комплемента

Степень активности процесса

1-Я. П=70 <30 СН50(%)

4

33

5,27+2,7 47,14+9,0

33

47,14+9,0

2-я. п-48

30 -45СЕ50(2)

3-я. п=35 >45 СН50( 7.)

Р (1-3)

10

28

20,33±5,8 58,34+7,1

8

22

22,85±7,0 62,8513,2 <0,05 >0,05

10

20,33±5,8 5

11,82+5,4 <0,001

1

Представленные данные свидетельствуют, что у больных СКВ имеются существенные различия по активности процесса в зависимости от функционирования системы комплемента. 70(45,452) из 154 больных СКВ в активную фазу имеют сниженный уровень комплемента, а 54,55%- нормальный и высокий. Вполне вероятно, что патология в системе "комплемента у лиц 1 группы является ведущей в патогенезе системного иммунокомплексного процесса, а у лиц 2 и 3 групп- сопутствующей. Из 70 больных е гитокомплемечт-емией 26(37,14%) характеризовались стойко сниженным уровнем, а 44(62,85%) временно сниженным, что указывает- на то, что, несмотря на завершение процесса обострения, снижение уровня ЦИК, активность комплемента осталась практически на прежнем уровне. Это означает, что гилокомплементемия в известных пределах регулируется эндогенными факторами. Кроме того,стойкая гипокомп-лементемия .вероятно, является генетически детерминированной, что необходимо учитывать при проведении иммуномодулирующэй терапии.

В процессе лечения больных СКВ спленином отмечается достоверное повышение общей активностиСР<0,05). Активность компонентов ГО и АЛ существенно не изменяется- Повышение обшей активности комплемента может быть обусловлено за счет изменения активности ингибиторов и инактиваторов отдельных стадий активации комплементарного каскада

У рольных СКВ установлены взаимосвязи между показателями иммунного статуса и системой комплемента, которые подкрепляет рассмотренные выше взаимосвязи с Т-системой лимфоцитов, что

обосновывает патогенетическую значимость- дисбаланса регулятор-"нсго звена Т-лимфоцитов и его влияние на функционирование системы комплемента при аутоиммунной патологии.

Саркоидоз также представляет собой заболевание с дисбалансом иммунного гомеостаза,характеризующегося перераспределением регуляторных и эффеигорных иммунокомпетентеных клеток в организме (Е. Ф. Чернушекко с соавт. ,1985). При этом заболевании имеется нарушения сбалансированности в Т-звене иммунитета. В легких накапливаются активированные Т4+ лимфоциты. Аналогичные явления отмечаются и в периферической крови. У больных саркои-дозом установлен своеобразный комплементарный профиль.со сниженные уровнем общей активности и активности отдельна компонентов КП и АП активации (рис. 3 ). Установлена зависимость состояния системы комплемента от формы заболевания. Общая активность КП при медиастиналькой форме процесса была 44,512,6; при легочно-медиастикальной- 41,2+2,7 и легочной- 41,7±2,2 СН50(Р>0,06). Более значимая зависимость от клинической формы выявлена в альтернативном пути активации. У больных с медиас-тинальной формой она составила 29,2±0,2,при легочно-медиасти -нальной- 27,1+0,81 и при легочной- 84,310,51 АЛ50(Р<0,05). Функциональная активность показателей системы комплемента у больных нормализуется только в процессе 3-х месячного курса лечения преднйзолоном. Отмечалось повышение обшей активности КП, а также уровень С2.С4.СЗ и С5 компонентов.

Рис. 3. Комплементарный профиль при саркоидозе

Таким образом, при сзркоидозе отмечается нарушение функционирования системы комплемента обусловленное снижением активности компонентов X и АН .йммунокорригирукщая тератом

преднизолоком в течение 3-х месяцев способствует нормализации показателей системы комплемента.

Сахарный диабет. Состояние системы комплемента исследовано у 91 больного инсулинзависимым диабетом (1 тип) и 47 больных инсулиннезазисимымС 2 тип) диабетом в связи с формой заболевания и наличием антигенов В локуса НЬА системы гкстосовмести-мости. функциональная активность компонентов комплемента изучена у больных диабетом в состоянии декомпенсации при поступлении в стационар. Результаты исследования функционирования системы комплемента у больных диабетом 1 и 2 типа представлены на рис.4.

Рис.4. Содержание компонентов 1Ш комплемента у больных сахарным диабетом 1 и 2'типа

Как видно из представленных данных,у больных инсулиизави-симым диабетом статистически достоверно повышен уровень СЗ,С4 компонентов, факторов В и D по сравнению с контролем. При ин-сулиннезавксимом диабете достоверно повышен уровень С4, факторов В и D и снижена активность С5. Имеются некоторые различия в содержании эффективных молекул С4.СЗ и С5 компонентов у Зольных с диабетом 1 и 2 типа. Анализ распределения HLA антигенов у больных 1 типа выявил достоверное повышение частоты антигенов В8(21,81 против 12,ÖZ в контроле,Р<О,05) и В1ВС33,3% и 13,5% соответственно;Р <0,001). Изучение содержания компонентов комплемента в зависимости от наличия или отсутствия в фенотипе антигенов В8 и В18 свидетельствует о достоверном повышении' у больных с наличием В8 содержания СЗ(Р<0,01) и снижении активности С4(Р<0,01). Уровень факторов В и D снижен у

больных -носителей антигена В1В. Полученные данные свидетельствуют о вовлеченности системы комплемента в патологический процесс и связи уровня активности компонентов с фенотипом по HLA системе гистосовместимости.

Состояние системы комплемента при амергических заболеваниях, обусловленных реакциями 1 типа, изучено недостаточно. В связи с зтим нами исследовано 28 больных различными аллергическими за5олеваниями(поллинозами-8,аллергией к домашней пыли-5, бронхиальной астмой-4, крапивницей-21). Полученные данные о состоянии системы комплемента у больных аллергическими заболеваниями свидетельствуют о том, что общая гемолитическая активность комплемента несколько выше у больных псллмюзом и крапивницей. Уровень С2 и С4 компонентов не различается. С5 компонент, общая активность, активность факторов В и D альтернативного пути также не имеют существенных различий в обследованных группах(Р>0,05). У больных поллинозом установлен пониженный уровень СЗ(Р<0,05). Выявлены значительные различия величины ШЬ повышение у больных поллинозом((3,1+1,4) и снижение у больных бронхиальной астмой(3,15±0,2) и крапивницей (5,34+0,35)СР<О,05). У детей , Сольных бронхиальной астмой 63),. в разные периоды болезни исследована связь иммунных комплексов с активностью отдельных компонентов комплемента. Во время приступа связь ЗйК разной молекулярной массы с CffiO отрицательная (г=-0,53 и -0,68)(осазкдение 3,5а. и 3,75% ШГ). Аналогичную направленность связи имеют и компсяенты-С2,С4,СЗ, 05. Связь уровня ЦИК с активностью факторов АП также обратной направленности во все периоды заболевания, что может, в определенной мере, свидетельствовать в пользу доминирования в состава белкового преципитата агрегатов иммуноглобулинов, которые лучше активируют комплемент по альтернативному пути. Имеются различия в характере связи ПИК разного иммуноглобулинового состава с активностью отдельных компонентов комплемента.

б. Влияние на снетеку комплемента мл^уиокоррнгкруищей терапии

Практически нет работ,где был бы проведен систематичес!кй и исчерпывающий анализ влияния иммунонорригирувдюс препаратов на систему комплемента Изучено влияние широко применяемых им-мунокорригируюдах препаратов -тактивина и тималжна на функционирование системы комплемента. Эффективность препаратов исследована в 2-х группах часто к длительно болеющих детей(22 ребенка в возрасте 3-7 лег). 1 группа- 10 детей, которым им-муноксррекцию проводили такгивином и 2-я - 11 детей, получавших тималин. Состояние системы комплемента оценивали до лечения, через 7 дней и 1,5 месяца. Результаты исследования сведете льствуяг, что у часто и длительно болекзвдх детей общая

„ активность КП и ряд компонентов, особенно С2 и С5, повышены в сравнении с контролем (Р<0,05). В результате 7 дневного курса лечения тактивгаом активность большинства компонентов КЯ пони-лается(Р<0,05)(рис. 5) и через 1,5 месяца соответствует контрольным дачным.

Сй-де лечения

£ХЫ.5 нвсацА ГЛг коМТРОл»

Рис.5.. Изменения в системе комплементам часто болеющих детей в процессе иммунокоррекцки таки:вином

Изменения альтернативного пути неоднозначны. Общая активность и • активность фактора Ь повышается, ' а активность фактора В- 'снижается. Шмунокоррекция тималином слособствовала достоверному повышению активности 014,04 и С5 компонентов Щ1 Одновременно отмечено повышение функциональной активности факторов В и С АЛ,что,в определенной мере,отличает его влияние на систему комплемента от тактивина. Изменение уровней функциональной активности комплемента в результате иммунокорригирую-щей терапии происходит на фоне изменений соотношения регуля-торных Т-лимфоцитов. ' При коррекции тактивином соотношение . меняется с 1,42±0,-08 до 2,55±0,2б(Р<0,01), а при коррекции тималином с 2,27±0,12 до 2,45±0,16(Р>0,05). Установлена связь изменений количественнного содержания компонентов комплемента в сыворотке крови в зависимости от величины соотношения Тт/Тг.

Использование в качестве иммуномэдуляторов стимуляторов лейкопоэза- пентоксила и мегилурацила показало отсутствие достоверных различий в активности комплемента до и после лечения. .

Эффективность влияния иммуномодуляторов- полипептидов тимуса на состояние системы комплемента может быть как прямого,так и опосредованного характера. Опосредованный механизм, очевидно, реализуется через модуляцию функции Т-системы

лимфоцитов и, в первую очередь, через устранение, дисбаланса Тх /Тс. Вероятно, снижение Т-супрессоров способствует нормализации процесса и уровней активности комплемента. Таким образом, медикаментозная иммунокоррекцин, адресованная регуляторным Т-клеткам , вызывает направленные изменения в системе комплемента. Возможно, что полипептиды тимуса оказывают и прямое влияние на активность генои, контролирующих уровень компонентов комплемента.

Имеются данные о повышении активности комплемента у тимзгасмированных животных (КВ. Васильев, 1985 ). На регуляции биосинтеза компонентов системы комплемента сказывается влияние ряда цитокияов(КЛ-1,Ш1-2, у- интерферона, фактора некроза опухолей) (M.G. Goodman et al ,1982; J. М. Veiler .M.V. Hofcbs ,1987). Кроме того, уровень компонентов е значительной мере регулируется пслоеыми гормонами (Е. В. Игнатьев, В. М. "Чеснокова, 198S).

Эффективным способом коррекции катастрофически нарастающих быстропротекавщих в организме иммунопатологических реакций при многих тяжелых шшнических состояниях является ге-мосорбция. Медиаторами таких процессов в значительной мере являются анафилатоксины системы комплемента- СЗа,С4а,С5а, которые образуются путем расщепления нативных молекул при активаций. С этой целыо у 21 больного( Б- ревматоидным артритом, 9- с перитонитом, и 4 с бронхиальной астмой) функциональными и иммунохимическими методами изучено состояние системы . комплемента в процессе геюсорбвди. Результаты исследований свидетельствуют, что у больных ревматоидным артритом функциональная активность компонентов после гемосорбции повышается, но затем, через определенное время, наблюдается возврат к исходному более низкому уровню. Определение содержания компонентов -Clq, С1 ингибитора, СЗ и фактора В иммунохимичееким методом также подтверждает увеличение в крови содержания компонентов. . Вместе с тем, одновременное исследование концентрации анафила-токсинов- СЗа,С4а,С5а выявило повышенный уровень биологически активных фрагментов до гемосорбции и снижение после ее проведения (рис. 6).

Анализ концентрации анафилатоксинов в зависимости от числа проведенных гемосорбций свидетельствует о постепенном снижении уровня С4а. Содержание СЗа после первых двух процедур несколько увеличивалось, а с 3 по 8-ю снижалось. Уровень С5а после сорбции существенно не снижался. Более того, имелась некоторая тенденция к его повышению. Иммунохимическое определение белков комплемента представляется важным. Результаты ис -следования Clq, С1 ингибитора,СЗ и фактора В указывают на их повышение в крови после гемосорбции. Установлено, что между содержанием продуктов активации комплемента -СЗа,С4а,С5а и об-

«.11

Н.31

£5.41 >

»4.51 Я

из. № Е2.Т» 1.8» 3.58

8ИШД

г—— \

С

^ I 1

С4а

готжнты

Рис.6 . Содержание анафилатоксинов комплемента у Сольных до и после гемосорбции

вдм содержанием компонентов имеются выраженные взаимосвязи, характер и степень взаимозависимости которых меняются в процессе гемосорбции.

Экспериментальное исследование по влиянию на систему комплемента фармакологических и биологических препаратов, одновременно модулируюпщх и состояние Т-системы лимфоцитов, выполнено с применением циклоспорина А,который ингибирует функцию Т-хелперов и йнтерлейкин-зависимые процессы, пропранолола,влияющего на экспрессию рецепторов для ЙЛ-2 на иммунокомпетентных клетках, а также вакцины БЦЖ стимулирующей функцию Т-супрессо-ров. 3 . результате выполненных экспериментов-получены.данные свидетельствующие о наличии изменений в функционировании системы комшемекта. При введении мышам ЦсА отмечается повышение уровня комплемента в сыворотке и снижение выраженности ответа ГЗТ на ФГА. Общая активность КП повышается на 3-й, 7-й и 10 день введения ЦсА. Более достоверные различия, отмечаются на 3- й и 7-й дни при введении препарата в дозе 30 мг/кг массы. Параллельно повышению общей активности имело место повышение уровня Clq.C3.C4 и С5 компонентов. Направленность изменений интенсивности реакции ГЗТ носит обратный характер в сравнении с системой комплемента. Связь величины воспалительного утолщения лапки в ответ на ФГА с дозой ЦсА носит отрицательный характер (г=- 0,85;Р<0,01). Сила отрицательной связи ГЗТ с комплементом выше нежели положительная связь комплемента с дозой ЦсА, что можно рассматривать как большую зависимость изменений системы комплемента от глубины угнетения Т-системы лимфоцитов, чем от вводимой дозы ЦсА. С целью изучения эффекта

на систему комплемента пропранолола крысам линии "Vistar" вводили препарат в дозе ОД; 1,0 и 5,0 мг/кг массы в течение 5,10 и 15 дней. Полученные данные свидетельствсуюг, что пропрано-лол вызывает дозозависимое повышение общей активности КП, МКК, активности С1.С2 и СЗ компонентов.

Вакцина БГД является одним из широко известных и эффективных иммуномодуляторов. Реализация иммуяомодулирухщих свойств вакцины происходит на уровне взаимодействия клеток системы мононук-леарных фагоцитов, и Т-системы лимфоцитов. Вакцину БЦЖ введши крысам в дозе 0,05 и 0,2 мг. Результаты исследования свидетельствуют о стимуляции С2 и С4 компонентов на 5-ый день,затем активность камг.онентоз понижается до контрольного уровня и ню». Сти-мулируищй эффект отмечается при введении обеих доз БДК. Сдвиги в уровне С2 и С4 более выражены, чем С5 компонента.

Полненные с эксперименте и клинике данные свидетельствуют, что воздействие фармакологических препаратов, нарушающее сбалансированность регулягорных процессов Т-системы, или имму-нокоррекция дисбаланса Т-системы препаратами тимуса(тактивином, тималкном) сопровождаются разнонаправленными изменениями в функционировании системы комплемента. Более того,они указывают, что все компоненты иммунной системы работают ео взаимосвязи, как единое целое(В. Ф. Чеботарев,19?9;В.ГЛ'эрозсв,1Э90).

Физиологические закономерности функционирования системы комплемента определяются необходимостью поддержания достаточно высокого уровня защиты органязка'з периоды неэффективности спе- • цифических механизмов и высокой готовностью к активации при обеспечении нормально протекающих процессов. Развитие разнообразных патологических процессов .вследствие отличий патогенетических механизмов,в разной мере связано с активным участием системы комплемента. В связи с этим выявляются новые взаимосвязи, отра- • лЕдЦие закономерности функционирования комплемента в условиях определенной патологии(В. Г. Майдаяник,Г. Е Дранник, 1939; К. А. Лебедев с ссзвт.,1390).

В выполненном исследовании взаимосвязи системы комплемента изучались у больных с патологическими процессами с преобладанием активации механизмов иммунэсупреоски (хронические инфе1сции. дыхательного тракта и легких) и активацией хел-перно-индукторных механиЕмов(аутоиммунные и аллергические заболевания) . В целом мо.тао заключить,что функционирование системы комплемента пек данных заболеваниях отличается ж по ее участию в патогенезе, так и по характеристике гамплгмептар-ного профиля в зависимости от формы, фазы и периода заболеваний.

Взаимосвязи по силе к направленности подвижны и меняются в зависимости от активности патогенетических механизмов основного заболевания или при 'эдекслравдеяксм фармакологическом воздействии на ключевые процессы иммунорегудлцнх. Выявленные под-'-

в шише физиологические и патологические закономерности функционирования системы комплемента соответствуют концепции " мобилей", предложенной академиком АН СССР и АМН СССР, профессором Г. В. Петровым и расширяют имеющиеся научные представления по данному вопросу. Вместе с тем, они ставят вопрос о взаимосвязи и соотношении специфических быстро протекащих, приобретенных реакций и неспецифических, естественных механизмов резистентности, о роли, месте и соотношении регуляторных и зффекгорных процессов разных звеньев иммунной системы.

ОСНОВНЫЕ ВЫВОДЫ

1. Компоненты классического и альтернативного путей системы комплемента у здоровых детей и взрослых характеризуются некоторыми отличиями в активности при относительно высоком уровне показателей, а также вариабельностью и достаточной стабильностью. Имеющиеся в пределах физиологической нормы колебания,обусловлены физиологическими (пол,Еозраст, менструальный цикл,беременность) ,генетическими (группа крови.фенотип галтоглобина,антигены НьА) и физическими( сезонность ) факторами .

2. Существенные изменения в состоянии системы комплемента в сторону снижения или повышения общей активности,активности и количественного содержания компонентов классического и альтернативного путей, содержания биологически активных фрагментов вызывали развитие патологических процессов. Имеется связь изменений в состоянии комплемента с формой и фазой процесса,активностью, характером течения и типом иммунореактивности организма •

3. Установлен комплекс взаимосвязей системы комплемента с параметрами иммунного статуса. Сила и характер выявленных взаимосвязей меняется в зависимости от особенностей патологического процесса. Межсистемкые связи комплемента свидетельствуют о сопряженности сдвигов в'регуляторном звене Т-системы лимфоцитов,содержании В-лимфоцитов, изотопов иммуноглобулинов и показателей комплемента Внутрисистемные связи комплемента указывают на теснув прямую корреляцию уровня общей активности классического пути с активностью и количественным содержанием ряда компонентов (С1-СЗ) и обратную - с общзй активностью и активностью факторов В и Д альтернативного пути. Уровень анафи-латоксинов комплемента - СЗа, С4а, С5а имеет положительную или отрицательную связь с функциональной активностью одноименных компонентов.

4. .Хронические клебсиеллезы дыхательных путей - склерома и озена характеризуются незначительными отклонениями в функциональной активности классического пути комплемента и сниженной функциональной активностью факторов альтернативного пути. Ха-

рактер и направленность взаимосвязей системы комплемента с параметрами иммунного статуса при данной патологии является близким к таковым при других заболеваниях.

5. фонические процессы низших отделов дыхательного тракта (туберкулез, саркойдоз, пневмония) различаются по состоянию системы комплимента. При туберкулезе и пневмонии у больных чаще выявляется повышенная активность комплемента, а при саркои-дозе - сниженная.Состояние системы комплемента у больных, принадлежащих к разным группам крови по системе ABO и фенотипу га-птоглобина,характеризуется отличиями в активности компонентов.

6. Состояние системы комплемента при аутоиммунных и аллергических заболеваниях претерпевает существенные изменения, глубина и направленность которых определяется специфическими для этих процессов патргенетическими механизмами. Характер взаимосвязей комплемента у детей, Сольных бронхиальной астмой, с уровнем и составом иммунных комплексов в доприступном, при -

ступном и постприступном периодах меняется по силе и направленности.

7. Концентрация анафилатоксинов комплемента - СЗа, С4а, С5а в крови здоровых И больных характеризуется различной силой и направленностью взаимосвязей с показателями В- и ?-систем иммунитета, полиморфноядерньи лейкоцитов, а их образование и уровень, очевидно, оказывает влияние на формирование дисбаланса в иммунной системе.

8. Корригирующие иммунный статус препараты (тималин, так-• тивин, пенгокпил) способствуют нормализации состояния системы

комплемента. Более выраженный эффект оказывает тактивин' и менее значимый-пентоксил. Соотношение иммунорегуляторных субпопуляций Trr/Tg в процессе иммунокоррекции имеет отрицательную, а содержание Tg-клеток- положительную связь с показателями системы комплемента.

9. Гемосорбция является одним из эффективных способов кор' рекаии системы комплемента В результате ее проведения в плазме повшается содержание гемолитически эффективных молекул белков комплемента и снижается концентрация анафилатоксинов. Эффективность элиминации гемосорбцией анафилатоксинов из крови зависит от числа проведенных процедур и типа сорбента. Определение функциональной агаивности компонентов комплемента и содержания анафилатоксинов является одним из важных критериев оценки эффективности сорбции,а также контроля биосовместимостк сорбентов.

10. Выполненные экспериментальные исследования свидетельствуют о возможностях фармакологической коррекции состояния системы комплемента Циклоспорин А вызывает дозозависимое угнетение Т-системы лимфоцитов и одновременное повышение общей активности

и активности компонентов классического и альтернативного путей активации. Введение пропранолола вызывает изменение общей гемолитической активности и активности компонентов Ш, МКИ. Вакцина БДЖ стимулирует активность КП в первые дни после введения и угнетает в более поздние сроки.

11. Сфгальмогерпес характеризуется повышенной активностью КП и АН комплемента. Коррекция иммунного статуса с помошью специфического и неспецифического иммуноглобулинов способствует нормализации комплемента: специфический иммуноглобулин более зффгктивно корригирует активность Ш, а неспецифяческий - AIL Герпетическая вакцина вызывает повышение активности белков обоих путей активации комплемента.

Практические реюшздацш

1. Разработанные и модифицированные методы и устройства для комплексной оценки состояния системы комплемента!радиального гемолиза, гемолитического и кинетического титрования, автоматизированного определения, МКИ) ориентированы на выполнение научно-практических задач различного уровня сложности (скрининг на недостаточность компонентов,опенка тя-дасти течения, болезни, эффективности иммунокоррекции) целесообразно внедрить в практику здравоохранения.

2. Новые нагрузочные методы тестирования состояния Т-кле-точного иммунитета( тест с ФГА и ТФ, тест с ФГА и ЦсА) могут быть использованы в- области, инфекционной и клинической иммунологии, онкологии, СГВДа, применяться как для индивидуальных, так и для массовых иммунологических исследований.

3. Ыэтод выявления сенсибилизации организма больных туберкулезом, скрытой механизмами анергии, - видимо, может быть использован и при других хронических инфекциях,'а также инвазиях. Шедрение метода в практику улучшит диагностику, дифференциальную диагностику хронических инфекций, а также позволит использовать его'в эпидемиологических исследованиях.

4. Методические рекомендации: а) "Иетоды определения бак-терицидности сыворотки крови и фагоцитов б) "Лечение и профилактика патологических состояний у детей в период новорожденном:;!"; в)"Оценка иммунного статуса организма по кожным тестам с ФГА и ЦсА", могут использоваться в лабораториях и отделениях практического здравоохранения и в-учебном процессе.

.5. Ксмпьвтертные программы для IBM совместимых персональных компьютеров для расчета показателей системы комплемента и изучения механизмов активации классическим и альтернативным способами шгут использоваться в практических и учебных целях.

Основное содержание диссертации опубликовано в' 'следующих" работах:

1. Состояние факторов'гуморального иммунитета у больных гонореей. // Актуальные вопросы дерматологии/. -Минск., 1980. С. 157-161 (в соавторстве с Н. И. Фёдоровым).

2. Выраженность моноцит-комплементарного индекса у больных остеохондрозом// Здравоохранение Белоруссии.-19S1.-N6.-С. 12 -14 (в соавторстве с В.Я Латышевой).

3. Состояние гуморального иммунитета при гломерулонефрите у детей.//Здравоохранение Белоруссии.-1982.-N5.-С. 37-39( в соавторстве с А. Е Сукало).

4. Определение гемолитической активности комплемента методом радиального гемолиза в геле. // Здравоохранение Белоруссии.-1932.-N1.-С. 29-31 (в соавторстве с Е А. Волковой).

5. Изучение рзневой микрофлоры и естественного иммунитета у травматологических бол? ных в процессе лазеротерапии. // Ортопедия, травматология и протезирование.-1983. -N6.-С. 13-17 (в соавторстве с А. С. Крюком, А. И КрасильнжоЕЫМ, Н. С. Сердюченко, А. А. Губ-ко).

6. Ыиюнуклеарные фагоциты, гемолитическая активность комплемента и его коюганентов. // Фагоцитоз и иммунитет. -Москва. -1983. -С. 220 (в соавторстве с Г. Д. Заритоник).

7. Естественный иммунитет у здсроЕых и больных туберкулёзом лёгких в возрастном аспекте.// 1-ый Белорусский съезд геронтологов. -Минск.-1983. -С. 177-178.

8. Способ лечения дегенеративно-дистрофических и посттравматических заболеваний органов опоры и движения. // А. с. N1076809,1984 (в соавторстве с А. С. Крюком,В. А. Иостовникоекм, Н.- С. Сердюченко).

9. Способ определения неврологических стадий остеохондроза позвоночника.//А. с. N1050718,1383 (в соавторстве с ЕЯ. Латышевой).

10. Система комплемента и заболевания дыхательных путей. // Тезисы докладов VII съезда терапевтов БССР. -Минск. -1984.-С. 158-160.

11. Фенотипы третьего компонента комплемента-СЗ, гаптогло-бика-БР, изоантигенов АВО и показателей иммунитета у больных хроническими нфекциями дыхательных путей.// Тез. докл. 1-го Всесоюз. съезда медгенетиков, -Москва. -1984. -С. 330.

12. The Complement system and T-lymphocyte system relationshsep and clinical significance. // Abstracts on VI Congress of Immunology.-1985.-Toronto.-P. 125.

13. Состояние системы комплемента у здоровых .людей в зависимости от пола, возраста, группы крови и времени года //

Здравоохранение Белоруссии.-1987,-Nl. С. 85-89(в соавторстве с А. Е Ватином).

14. Содержание некоторых компонентов классического и альтернативного пути активации системы комплемента у больных .сахарным диабетом.// Проблемы эндокринологии.-1987.-N2.С.9-13

(в соавторстве с Г. В. Кораиго, Г. Д. заритоник, Г. В. Семеновым).

15. Исследование системы комплемента у больных саркоидозом органов дыхания. // Проблемы туберкулеза. -1987. -N3. С. 48-50

(в соавторстве с А. Н. Еатяном).

16. Intersystems and intrasystems relations of the conqple-msnt.//8-th european immunology meeting. -Zagreb. -1987. -P. 55.

17. Сравнительная характеристика исследования общей гемолитической активности альтернативного пути системы комплемента различными методами.//Лабораторное дело. -1987. -N9.-С. 696-699 (в соавторстве с А. Н. Еатяном).

18. Иммунореактивность больных склеромой и её связь с фенотипом гаптогдобина //Иммунология. -1988. Деп. МРЖ. -N12. -Д-13945.

19. Взаимосвязь параметров системы комплемента с показателями других звеньев иммунитета и её значение для клинической иммунологии. //Система комплемента -Киров. -1987. -С. 55-58.

20. Устройство для регистрации кинетики ферментативных реакций.//Здравоохранение Белоруссии.-1987.-fill.-С. 59-60 (в соавторстве с И. В. Бегуном, С. Г. Бойко, А. С. Наумовичем, А. В. Сукало).

21. Состояние системы комплемента у больных саркоидозом органов дыхания при терапии кортикэстерсвдами. // Проблемы туберкулеза -1986.-Ml. -С.58-61 \в соавторстве с А.ЕБатяном).

22. Complement system in ophthalmoherpes during immunotheraputical treatment. //9-th •• european immunology meeting.-1988. -ROOM.-P. 123 ( co-authors Chekina A. V. , Kolouuetz N. D. , Kolomietz A. 6.) _

23. Система комплемента- биологическая и клиническая значимость. //Здравоохранение Белоруссии. //1989. -N6. -С. 45 -50.

24. Interrelations of blood serum interferon, complement system and imrrranoregulatory link of T-system lymphocytes.// Second International Dermatology Symposium.-Berlin. -1989. -P.9. (coauthor I. V. Korobko).

25. New testing of T-system immunity in vivo.// VU-th International Congress of Immunology.-Berlin. -1989. -P.36.

26. Дискретно-динамический и корреляционный анализ взаимосвязей системы комплемента с В- и Г-системами иммунитета// Здравоохранение Белоруссии. -1989. -N2. -С. 22-25.

27. Моноцит-комплементарный индекс при заболеваниях инфек-

ционной и неинфекшонной этиологии. // "Здравоохранение Белоруссии. -1989. -N2. -С. 28-31..

28. Новые подходы к оценке иммунореакгивности организма по анутрикожным пробам на митогены и специфические антигены. // ¡-ый Всесоюз. съезд иммунологов. -Мзсква. -1989. -С. 156 (в соавторстве

с А. Н. Ватянсм,. JL И. Тесевичем).

29. Рймплемент и системная красная волчанка. //Акт. вопр. диффузных болезней. -Минск. -1989. -С. 56 (в соавторстве с И. П. Титовой) .

30. Контролируемое слепое исследование эффективности ге-моссрбции при ревматоидном артрите.// Ревматология.-198Э.-N2.-С. 15-19 (в соавторстве с Г. П. МатЕейковым, В. IL Царёвым).

31. Способ определения состояния Т-клеточного иммунитета. //А. с. N1455315. - 1983 (в соавторстве с А. Н. Ватяном).

32. Способ выявления скрытой инфицироЕанности организма микобактериями. // А. С. N1535314.-1989 (в соавторстве с А. Н Ватином, 0. КВатян).

33. Способ дифференциальной диагностики саркоидоза и специфических и неспеписЬических заболеваний лёгких. // А. с. HI530987. -1989(в ссазтсрстае с А.Н. Батаном,R С. 5Епаковской).

34. Вдкяние циклоспорина А на состояние системы комплемента и Т-систеыы лимфоцитсЕ. // 1-ый съезд иммунологов БССР. --Минск.-1990.-Р. 154.

35. Быстрый метод сценки системы комплемента.// - Так re (в соавторстве с Е. Е. Сагалович).

ЗБ. Trie abolition сГ апеггу arid the modulation cf delayed hypersensitivity by theophylline in the patients nth tuberculosis cf the lungs.// X european imin.olo£y ireetingr. -ISSOj- Edinburgh. -S. 22-35 Сcc-author A. N. Batyan).

37. Tne ccnpiement system in children fith atopic bronchial asthma. // III european meeting on ccircierrent in hun-sn disease.-1990.-Bratislava-P. 134. (со- author N. N. Sukovatvkh;.

38. Anaphylatoxins cf the complement system anc the indexis of the immune Status cf the Healthy and Sick Children. //II! european г-eetmg* on ccnpiement in human diseases. -1Э9С1. -Bratislava Complement and Inflammation.-1990. -N7. - P. 134.

39. The' Quantity of Anaohvlatoxms cf the Conrueirent ir: the Blood as a Criterion cf the Effectiveness cf Meirosorbtior, and the Bioccmpatibility cf Sorbents. // II! european rreeting' on ccnpiement in human diseases.- Bratislava Complement

and Inflammation. -1990. -K7. -P. 152. (со-author L. I. Mszur).

40. State of compleirent system, cellular and humoral irnrainity in votten suffering frotn miscarriage. // VII World Congress on human Reproduction.-1990.-P. 39.-Helsinki (co-authors Yu. V.Milko-Chernomorets, A. N. Shilko).