Автореферат и диссертация по медицине (14.00.53) на тему:Нейроэндокринные клетки предстательной железы при старении

На правах рукописи

СУПИЕВ Ад ил Турганович

НЕЙРОЭНДОКРИННЫЕ КЛЕТКИ ПРЕДСТАТЕЛЬНОЙ ЖЕЛЕЗЫ ПРИ СТАРЕНИИ

14.00.53 - геронтология и гериатрия

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Санкт-Петербург - 2005

Работа выполнена в отделе клеточной биологии и патологии Санкт-Петербургского института биорегуляции и геронтологии СЗО РАМН

Научный руководитель:

доктор медицинских наук, профессор Кветной Игорь Моисеевич

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук Рыжак Галина Анатольевна

доктор медицинских наук Забежинский Марк Абрамович

Ведущая организация:

ГОУ ВПО «Санкт-Петербургская медицинская академия им. акад. И.И. Мечникова» Минздравсоцразвития России

диссертационного Совета Д 601.001 01 при Санкт-Петербургском инетигуче биорегуляции и геронтологии СЗО РАМН по адресу Санкт-Петербург, пр Динамо, д. 3

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Санкт-Петербургского инсппута биорегуляции и геронтологии СЗО РАМП (197110 Санкт-Петербург, пр. Динамо, д. 3)

Защита состоится 2005 года

часов на заседании

Автореферат разослан <£^>Г

2005 г.

Ученый секретарь диссертационного Совета кандидат биологических наук, доцент

Козина Л.С.

001 ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность работы

В последние годы в промышленно развитых странах происходит неуклонное увеличение средней продолжительности жизни, а, следовательно, и прогрессирующее старение населения [Гаврилов Л.А., Гаврилова Н.С., 1991; Коркуппсо О.В. и соавт., 1993; Головкин В.И. и соавт., 2000; Finch С.Е , Kiikwood T.B.L., 2000], Средняя продолжительность жизни людей превысила 70 лет, а люди старше 60 лет составляют 15% всего населения. Однако в настоящее время большинство людей не достигает биологического предела продолжительности жизни, а период старости, как правило, связан со снижением активности и ухудшением здоровья.

Старение - закономерный процесс, возникающий вследствие многих причин, которые постепенно вызывают изменения во всех органах и тканях. Старению подвержены все организмы животного и растительного мира. Поэтому изучение механизмов, лежащих в основе регуляции важнейших гомеостатических функций организма в процессе старения представляет собой одно из приоритетных направлений современной биологии и медицины [Хавинсон В.Х. и соавт., 2000]. В свою очередь, развитие концепции биологической регуляции [Хавинсон В.Х., Морозов В.Г., 1973] является приоритетным направлением современной геронтологии.

Понятие «старение» характеризуется целым комплексом изменений, связанных с ослаблением функций организма, снижением способности приспосабливаться к окружающей среде, прогрессивным нарастанием патологических сдвигов и вероятности смерти. Относительно причин старения не существует единого мнения В частности, не определена окончательно роль внешних факторов в развитии процесса старения, хотя и известно, что воздействие ионизирующего излучения, хроническое отравление токсическими веществами и проживание в районах с неблагоприятной экологической обстановкой вызывают возникновение у людей различных заболеваний, признаков преждевременного старения, а также увеличивает смертность населения [Анисимов В.Н., Соловьев М.М., 1999].

Ведущую роль в процессах старения, развивающихся в мужском организме, играют нарушения синтеза и секреции андрогенов, что приводит к снижению всех гормональных функций.

Доброкачественная гиперплазия предстательной железы - ДГПЖ (аденома простаты) является наиболее часто встречающимся заболеванием мочеполовой системы у мужчин, ассоциированным со старением. Это заболевание является следствием гиперплазии стромьг железы и наблюдается у более 70% мужчин в возрасте 70 лет и старше. Заболеваемость раком предстательной железы и мочевого пузыря в пожилом и старческом возрасте за последние 10-15 лет постоянно возрастает и по скорости прироста эта патология занимает второе место после меланомы кожи. Среди причин смерти у мужчин раковые опухоли предст^т^^й^^селезы занимают второе

SMMMQTEKA1"1"

СПт^лн О* -

место после рака легких [Лопаткин Н А , 1998; Лоран О.Б., Пушкарь Д.Ю., Франк Г.А., 1999; Степанов В.Н., Гориловский Л.М, 1999].

Современные методы исследования (электронная микроскопия, гистохимия, иммуногистохимия и др.) позволяют более глубоко изучать механизмы старения клеток и тканей. Они дают возможность разработать новые неинвазивные информативные методы диагностики опухолевых процессов, среди которых особенно важное место занимают биологические маркеры - сигнальные молекулы, синтезируемые в клетках предстательной железы.

В последние годы появились новые данные о роли нейроэндокринных (НЭ) клеток в онкогенезе предстательной железы [Хейфец В.Г. и соавт., 2004]. Однако функция НЭ клеток в простате все еще мало изучена. Полагают, что НЭ клетки необходимы для роста и дифференцировки, также как для регулирования гомеостаза секреторных процессов в зрелой предстательной железе. Противоречивы данные о том, что пропорция НЭ клеток увеличивается в предстательной железе при карциноме. Определяемые НЭ клетки в аденокарциноме являются трансформированными клетками и отличаются от нормальных НЭ клеток.

Остается открытым вопрос о том, влияют ли нормальные, немалигнизированные НЭ клетки на канцерогенез в предстательной железе Эти и другие вопросы функционирования и старения предстательной железы требуют дальнейшего изучения.

Цель и задачи исследования

Целью диссертационного исследования является изучение функциональной морфологии нейроэндокринных клеток предстательной железы крыс и человека при старении.

Для достижения поставленной цели были поставлены и последовательно решены следующие задачи:

1. Изучить особенности структурно-функциональной организации нейроэндокринных клеток предстательной железы крыс и человека при старении;

2. Верифицировать экспрессию серотонина и мелатонина в нейроэндокринных клетках предстательной железы и изучить изменения гормонального фенотипа клеток при старении;

3. Описать изменения поведения нейроэндокринных клеток предстательной железы человека при развитии в ней гиперпластических процессов, ассоциированных со старением;

4. Определить онкопрогностическую значимость экспрессии серотонина и мелатонина в нейроэндокринных клетках предстательной железы человека.

Научная новизна работы

Впервые детально изучена ультраструкгура НЭ клеток предстательной железы при старении и иммуногистохимически верифицирована экспрессия в них серотонина и мелатонина. Описаны изменения НЭ клеток при развитии доброкачественной гиперплазии предстательной железы и карциномы -гиперпластических процессов, ассоциированных с возрастом.

Установлено, что в нормальной предстательной железе количество НЭ клеток увеличивается с возрастом, в том числе происходит гиперплазия серотонин/мелатонин продуцирующих НЭ клеток. У крыс в модели преждевременного старения популяция НЭ клеток снижается, однако НЭ клетки сохраняют типичные электронно-микроскопические признаки.

Установлено что при преждевременном старении, несмотря на сохранность нормальной ультраструктуры, в НЭ клетках отмечается гиперплазия митохондрий, отек эндогшазматического ретикулума, очаговая вакуолизации цитоплазмы. В НЭ клетках, продуцирующих серотонин/мелатонин, эти изменения выражены более сильно, часто встречаются значимые ультраструктурные повреждения, сопровождающиеся дегрануляцией различной степени выраженности.

Гистохимическими и иммуногистохимическими исследованиями установлено, что в раковых опухолях предстательной железы содержатся опухолевые НЭ клетки, ответственные за синтез серотонина и мелатонина. Показано, что нейроэндокринная дифференцировка в аденокарциноме простаты проявляется в виде изолированных островков НЭ клеток. Такая форма распределения клеток может расцениваться как предполагаемый очаг индукции нейроэндокринной дифференцировки в субпопуляции эпителиальных клеток.

Практическая значимость работы

Впервые установлена роль нейроэндокринных клеток и вырабатываемых ими гормонов (серотонина и мелатонина) в развитии доброкачественной гиперплазии и аденокарциномы предстательной железы -опухолевых заболеваний, ассоциированных с возрастом.

Определение уровня экспрессии гормонов - серотонина и мелатонина, необходимых для нормальной функции предстательной железы, является информативным тестом, который можно использовать с диагностической и прогностической целью при ДГПЖ и аденокарциноме. Установлено, что усиление экспрессии серотонина является неблагоприятным фактором в прогностическом отношении указанных опухолей, в то время как усиление экспрессии мелатонина является положительным фактором прогноза.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. В процессе старения происходит изменение структурно-функциональной организации НЭ клеток предстательной железы.

2. Серотонин и мелатонин - гормоны, продуцируемые НЭ клетками, через паракринные и аутокринные секреторные механизмы участвуют в механизмах роста опухолей предстательной железы, ассоциированных с возрастом. Нарушение синтеза и секреции гормонов в НЭ клетках способствует развитию доброкачественной гиперплазии и аденокарциномы предстательной железы.

3. Определение уровня экспрессии гормонов - серотонина и мелатонина является информативным 1естом, который может быть использован с диагностической и прогностической целью при доброкачественной гиперплазии и карциноме предстательной железы.

Апробация и реализация результатов исследования

Материалы диссертации доложены на VII медико-биологической конференции молодых ученых СЗО РАМН (Санкт-Петербург, 2004), юбилейной конференции молодых ученых Северо-Западного региона (Санкт-Петербург, 2004), проблемной комиссии Санкт-Петербургского института биорегуляции и геронтологии СЗО РАМН (2005).

Результаты исследований используются в научно-педагогической и практической деятельности Санкт-Петербургского института биорегуляции и геронтологии СЗО РАМН, ГУ НИИ акушерства и гинекологии им. Д.О. Отта РАМН, Санкт-Петербургского центра простатологии.

Публикации

По материалам диссертации опубликовано 7 печатных работ, из них 1 монография, 4 статьи и 2 тезисов.

Структура и объем диссертации

Диссертация состоит из введения, обзора литературы, главы с изложением материала и методов исследования, 2 глав собственных исследований, обсуждения результатов, выводов, практических рекомендаций и указателя литературы. Работа иллюстрирована 15 рисунками и содержит 5 таблиц. Текст диссертации изложен на 120 страницах Список литературы содержит 150 источников (48 отечественных и 102 иностранных авторов).

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ Моделирование преждевременного старения животных

Данная серия исследований выполнена на 40 самцах белых крыс линии Вистар (масса тела 120-130 г.), из которых 16 животных составили контрольную группу. Все животные перед опытом проходили карантин и содержались в обычных условиях вивария при естественном освещении и сбалансированном рационе питания.

Опытные крысы (24 особи) подвергались общему однократному облучению (радиационное моделирование преждевременного старения). Для моделирования изменений, сходных с процессами, возникающими в ходе старения, проводили общее однократное гамма-облучение животных в дозе 6 Гр на кобальтовом аппарате «ГУБ 20000» при мощности дозы 200 рад/мин. Гамма-облучение проводилось с помощью установки «Эксперимент» (источник '"Се; мощность поглощенной дозы в прямом пучке 5,32 мГр/час).

Облучение и взятие экспериментального материала проводилось в лаборатории радиационной патоморфологии Медицинского радиологического научного центра РАМН (г. Обнинск), за что автор выражает глубокую благодарность кандидатам медицинских наук В.В. Южакову и В.В. Попучиеву.

После облучения животные были переведены в виварий и содержались в тех же условиях, что и крысы контрольной группы.

Через 7 суток после облучения у крыс опытной и контрольной групп после декапитации была взята предстательная железа для исследования.

Изучение предстательной железы у человека

Для проведения морфологических и иммуногистохимических исследований предстательной железы был использован биопсийный и операционный материал, полученный в МСЧ №122 и больнице Петра Великого (г. Санкт-Петербург) у 48 больных с доброкачественной гиперплазией предстательной железы и у 32 больных аденокарциномой простаты. В контрольной группе исследовался аутопсийный материал (предстательная железа), полученный у 22 погибших мужчин от разных причин без патологии предстательной железы (табл. 1).

Средний возраст лиц, у которых были взяты биопсийный или аутопсийный материал в контрольной группе составил 54 года, у больных с ДГПЖ - 66,4 года (варьировал от 50 до 74 лет) и у больных с аденокарциномой - 66,3 года (варьировал от 58 до 84 лет). Объем опухоли варьировал от 1,5 мм до 10,6 мм, в среднем составлял 6,1 мм.

Таблица 1

Распределение материала по возрастным группам

Исследуемые группы Возраст обследованных (лет)

40-49 50-59 60-69 70 лет и старше Всего

Контрольная И 6 5 - 22

Больные ДГПЖ - 9 18 21 48

Больные аденокарциномой - 4 19 9 32

Всего: 11 19 42 30 102 1

Уровни сывороточного PSA (по данным анализов из историй болезней) перед оперативным лечением у 26 пациентов с карциномой в среднем составил 9,35 нг/ мл (варьировал от 1,6 до 20,84) и у 22 пациентов с ДГПЖ -6,08 нг/ мл (варьировал от 0,69 до 15,68).

Гистологические и иммуногистохимические методы

Кусочки предстательной железы объемом 1 см3 фиксировали в 10% нейтральном формалине (рН 7,2), обезвоживали и заливали в парафин согласно стандартной гистологической схеме. В качестве обзорной окраски использовали гематоксилин и эозин.

Иммуногистохимическое исследование проводили с использованием мышиных моноклональных антител к серотонину (Dako, 1:100), ультраспецифичных кроличьих антител к мелатонину (CIDtechR.es. Сотр., 1:100) В качестве вторых ан гител использовали универсальный набор, содержащий биотинилированные анти-мышиные и анти-кроличьи иммуноглобулины; визуализацию окрасок проводили с применением комплекса авидина с биотинилированной пероксидазой (ABC-kit, Novocastra). Проявление пероксидазы проводили диаминобензидином (Dako). Для проведения иммуногжл ох им и ческой реакции с am телами к серотонину использовали стандартный одноэтапный протокол, а для мелатонина проводили одноэтапный протокол с трипсинизацией -демаскировкой антигена.

Морфометрические исследования

Морфометрические исследования проводили с использованием системы компьютерного анали ¡а микроскопических изображений, состс ящей из микроскопа Nikon Erhpse Е400, цифровой камеры Nikon РХМ1200,

персонального компьютера на базе Intel Pentium 4 и программного обеспечения «Видеотест-Морфология 4.0».

В каждом случае анализировали 10 полей зрения при увеличении х400. Среднее количество иммунопозитивных клеток рассчитывали на 1 м'м2 ' площади среза. Оптическую плотность экспрессии гормонов измеряли в условных единицах. Также определяли площадь экспрессии (которая представляла собой отношение площади иммунопозитивных клеток к общей площади всех клеток), выражаемое в процентах. Указанные параметры отражают интенсивность синтеза или накопления исследуемых гормонов.

Статистическая обработка результатов

Результаты морфометрических исследований обрабатывали с помощью компьютерных программ EXCEL и STATISTICA 5.0 (Statsoft). Для оценки межгрупповых различий (сравнение средних значений) применяли t-критерий Стьюдента. Взаимозависимость уровня экспрессии гормона и возраста устанавливали при помощи корреляционного анализа.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Нейроэндокринные клетки предстательной железы крыс в радиационной модели преждевременного старения

Контрольная группа

Среди всей популяции НЭ клеток предстательной железы наиболее распространены мелатонин/ссротонин продуцирующие клетки.

У интактных крыс молодого возраста мелатонин/серотонин продуцирующие НЭ клетки были разбросаны по всей железе и равномерно представлены во всех ее отделах. Клетки чаще всего имели грушевидную форму, реже определялись цилиндрические и треугольные клетки. Часто можно видеть длинный, в виде отростка, апикальный конец клетки, достигающий просвета канальцев и обеспечивающий контакт НЭ клеток с окружающей средой. Ядра клеток были сферическими, нежная хроматиновая сеть наиболее была выражена по периферии ядра в виде тонкого слоя.

Серотонин/мелатонин продуцирующие НЭ клетки в основном располагались в базальных отделах железы среди эпителиальных клеток поодиночке или в виде скоплений из 4-6 клеток, некоторые из которых имели длинный отросток, дистальный конец которого открывался в просвет канальцев.

Таблица 2

Продуцируемые гормоны и ультраструктурная характеристика секреторных гранул нейроэидокриннмх клеток предстательной железы _ у крыс в контрольной группе_

Клетки Гормоны Размеры гранул (нм) Ультраструктурная характеристика секреторных гранул

Серотонин/ мелатонин продуцирующие НЭ клетки Сероюнин Мелатонин 200-300 Полиморфные (округлые, почковидные, гантелеобразные, ракетообразные), иногда окруженные узким светлым ободком и тонкой мембраной с электронно-плотной сердцевиной, часто имеющие округлую и бобовидную форму; сердцевина высокой электронной плотности

При электронно-микроскопическом исследовании

мелатонин/серотонин продуцирующих клеток они были верифицированы как НЭ клетки открытого типа с длинными апикальными цич оплазматическими отростками. В них выявлялось большое количество полиморфных (округлых, почковидных, гантелеобразных, ракетообразных) секреторных гранул с сердцевиной высокой электронной плотности, часто окруженных узким светлым ободком (halo) и тонкой мембраной. Средний диаметр гранул составлял 250 нм (табл. 2).

Проведенные исследования показали, что обшая популяция нейроэндокринных клеток в нормальной предстательной железе у крыс контрольной группы, достигших половозрелого возраста, была довольно многочисленной. Число серотонин/мелатонин продуцирующих НЭ клеток в этом возрасте составляло 320141 на 1 мм2.

Подопытная группа (модель преждевременного старения)

В простате у крыс при моделировании преждевременного старения серотонин/мелатонии продуцирующие НЭ клетки встречались реже, чем в контрольной группе.

В цитоплазме серотонин/мелатонин продуцирующих НЭ клеток отмечалось функциональное напряжение органелл. Митохондрии были набухшие, с дезорганизацией крист, иногда причудливой формы. Пластинчатый комплекс был птперплазирован и имел признаки различной функциональной активности, в нем идентифицировались везикулярные компоненты. В цитоплазме встречалось много свободных рибосом и полисом, ядра клеток имели неровные контуры. Нередко наблюдалось отслоение наружного листка кариолеммы. Цитоплазма была Вс куолизирована за счет расширения канальцев шероховатого эьдоплазматического ретикулума и разрушение митохондрий.

В базальной части клеток выявлялось разное количество полиморфных (округлых, почковидных, гантелеобразных, ракетообразных и бобовидных) секреторных гранул высокой электронной плотности, часто окруженных узким светлым ободком и тонкой мембраной. Многие клетки содержали умеренное число гранул, среди которых встречаются вакуоли (табл. 3).

Таблица 3

Продуцируемые гормоны и ультраструктурная характеристика секреторных гранул нейроэндокринных клеток предстательной железы __у крыс подопытной группы_

Тип клеток Гормоны Размеры гранул (им) Ультраструктурная характеристика гранул

Серотонин/ мелатонин продуцирующи е НЭ клетки Серотонин Мелатонин 200-300 Полиморфные (округлые, почковидные, гантелеобразные, ракетообразные и бобовидные), высокой электронной плотности, часто обуженные узким светлым ободком и тонкой мембраной. Многие клетки содержали умеренное число гранул, среди которых встречаются вакуоли

Популяция нейроэндокринных клеток в предстательной железе у опытных крыс через 7 дней после однократного облучения (модель преждевременного старения) сохраняла общую структуру, выявленную у животных контрольной группы. Однако имело место снижение числа серотонин/мелатонин продуцирующих НЭ клегок НЭ клеток (280+34). Изменения количества нейроэндокринных клеток предстательной железы контрольной и подопытной групп животных в динамике представлены на рис. 1.

400 -,-

х

Контрольная группа Подопытная группа

* - р<0.05 по сравнению с контрольными показателями

Рис. 1. Диаграмма изменений количества нейроэндокринных клеток предстате пьной железы в контрольной и подопытной группах животных

Проведенные электронно-микроскопические исследования

нейроэндокринных клеток предстательной железы после общего однократного облучения показали, что при преждевременном старении отмечается гиперплазия митохондрий, отек эндоплазматического ретикулума, очаговая вакуолизация цитоплазмы. В серотонин/мелатонин продуцирующих НЭ клетках наблюдалась дегрануляция разной степени. В то же время необходимо отметить, что секреторные гранулы в эндокринных клетках обладают достаточной морфологической стабильностью, сохраняя типичные признаки и тинкториальные свойства, даже в погибших клетках.

Таким образом, проведенные нами исследования структурно-функциональной организации нейроэндокринных клеток предстательной железы крыс в модели преждевременного (радиационного) старения позволили ус гановить следующие основные этапы их возрастной эволюции.

Установлено, что у интаклных крыс молодого возраста НЭ клетки разбросаны по всей железе и равномерно представлены во всех ее отделах. Клетки чаще всего имели грушевидную форму, реже определялись цилиндрические и треугольные клетки. Часто можно видеть длинный, в виде отростка, апикальный конец клетки, достигающий просвета канальцев и обеспечивающий контакт НЭ клеток с окружающей средой. Ядра клеток бычи сферическими, нежная хроматиновая сеть наиболее была выражена по периферии ядра в виде тонкого слоя.

Наиболее часто среди всей популяции НЭ клеток встречаются серотонин/мелатонин продуцирующие НЭ клетки, число которых со старением снижается.

У животных опытной группы через 7 суток после однократного облучения (модель преждевременного старения) в большинстве эпителиальных клеток обнаруживались набухшие митохондрии с просветленным магриксом. Профили шероховатого эндоплазматического ретикулума были расширены, число его структур увеличено, особенно много было везикул и вакуолей. Число свободных рибосом и полисом увеличено. Межклеточные щели расширены.

При электронно-микроскопическом исследовании нейроэндокринных клегок обращает на себя внимание увеличение количества и размеров митохондрий, которые приобретают нехарактерные для них формы, их кристы повреждены.

Наряду с вышеописанными изменениями секреторные гранулы в НЭ клетках обладают достаточной морфологической стабильностью, сохраняя типичные признаки и тинкториальные свойства при старении, что дает основание предполагать активное влияние гормонов, продуцируемых НЭ клетками (в основном, серотонина и мелатонина) на развитие и течение патологических процессов в предстательной железе, в том числе и ассоциированных с возрастом (ДГПЖ и рак).

НЭ клетки предстательной железы человека при возрастных гиперпластичсских процессах, ассоциированных с возрастом

Контрольная группа

В контрольной фуппе для исследования предстательной железы материал взят у 22 погибших мужчин, которые не имели заболеваний мочеполовых органов (возраст от 43 до 65 лет).

На всех препаратах в НЭ клетках была отмечена выраженная экспрессия исследуемых маркеров: мелатонина и серотонина

40-49

50-59

□ Мелатонин

I Серотонин

60-69

возрастные группы

Рис. 2. Контрольная группа. Площадь экспрессии мелатонина/серотонина в предстатечьной железе различных возрастных групп

Площадь экспрессии мелатонина достоверно снижалась с увеличением возраста (рис. 2). Так, у пациентов в группе 40-49 летних величина площади экспрессии мелатонина составила 4,42±0,03%, что почти в 3 раз больше, чем в группе 60-69 летних (1,35±0,04), а у серотонина она была равна 4,36±0,02% (р<0,05). С увеличением возраста площадь экспрессии серотонина и мелатонина уменьшается. Между возрастом пациентов и значениями площади экспрессии мелатонина выявлена положительная корреляция (к=0,06).

Оптическая плотность мелатонина и серотонина достигает максимального значения в группе 40-49 летних (0,29±0,01 у.е. и 0,29+0.02 у.е. соответственно), у пациентов пожилого возраста, наблюдается достоверное снижение этого показателя (р<0,05) (рис. 3).

0,35

40-49

50-59

□ Мелатонин

1Серотонин

60-69

возрастные группы

Рис. 3. Контрольная группа Оптическая плотность экспрессии мелатонина/серотонина в предстательной железе различных возрастных групп

Полученные данные свидетельствуют о достоверном снижении экспрессии серотонина и мелатонина в НЭ клетках предстательной железы человека с увеличением возраста (р<0,05).

Доброкачественная гиперплазия предстательной железы

При микроскопическом исследовании предстательной железы большей частью узлы имеют аденоматозную структуру. Они построены из тесно расположенных ветвистых желез причудливой формы, образующих многочисленные крипты и сосочковые выросты. Железы выстланы 1-2 слоями клеток высокого призматического эпителия, в области сосочков количество слоев увеличивается.

Цитоплазма эпителиальных клеток светлая, слегка зернистая, в апикальных отделах выявляются жировые включения. Ядра гиперхромные, округлой формы располагаются преимущественно в базальных отделах клеток.

В просвете желез сгустившийся секрет, немногочисленные амилоидные тельца, слутценные эпителиальные клетки, макрофа1 и, скопления лейкоцитов. Часть желез умеренно кистозно расширена. Может наблюдаться также меташ'азия эпителия в переходный, многослойный плоский, а также пролиферация эпителия с формированием криброзных и сосочковых структур.

Самые большие узлы, иногда достигали в диаметре 5-6 см, состояли из многочисленных кист довольно крупного размера, разделенных тонкими фиброзными, нередко гиалинизированными прослойками, иногда содержащими пучки 1ладких мышц. Перегородки между кистами нередко разрушаются и тогда образуются крупные гроздевидные кистозные конгломераты, в просвет которых выступают остатки перегородок в виде фиброзных выступов с булавовидным утолщением на конце.

Кисты выстланы однорядным высоким цилиндрическим, кубическим или плоским эпителием, иногда обнаруживаются единичные сосочковые образования. В просвете кист гомогенное содержимое, окрашивающееся эозином в бледно-розовый цвет. Иногда наблюдается множество мелких амилоидных телец.

Значительно реже встречаются «фиброзно-аденоматозные» узлы, построенные из немногочисленных редко разбросанных трубочек выстланных кубическим или низкопризматическим эпителием с хорошо очерченными границами, слабо заметной цитоплазмой и довольно крупным ядром В просвете железистых трубочек секрет ярко-розового цвета.

Вокруг эпителиальных трубочек нередки пролифераты миоэпителиальных клеток, образующих подушковидньте выпячивания, симулирующие пролиферацию эпителия. Строма узлов богата вытянутыми клетками типа фибробластов, образующих беспорядочно расположенные пучки и кольцевидные сгруктуры.

Фиброзно-мышечные узлы наблюдались почти во всех случаях, наряду с узлами железистого и смешанного строения Они, как правило, множественные, редко превышают 1-2 см в диаметре, чаще бывают микроскопических размеров. Узлы состоят из богатой клеточными элементами волокнистой ткани, напоминающей строму предстательной железы эмбриона. Чаще в них преобладают клетки мышечного типа В толще таких узлов иногда можно видеть примитивно построенные трубочки, выстланные плоским, кубическим, реже однорядным высоким призматическим эпителием.

Площадь экспрессии мелатонина в ДГПЖ ниже, чем в контрольной группе у больных того же возраста. Величина площади экспрессии мелатонина в ДГПЖ составила 4,34±0,01% у 50-59 летних пациентов, что в 2 раза больше чем в группе 60-69 лет, а для серотонина она была равна 4,36+0,02% в группе 50-59. С увеличением возраста площадь экспрессии серотонина увеличивается, особенно у пациентов ДГПЖ в возрасте 70 лет и старше (5,33±0,02%) (Рис.4.).

50-59

60-69

□ Мелатонин

Юеротонин

70 и старше

возрастные группы

Рис. 4. Доброкачественная гиперплазия предстательной железы. Площадь экспрессии мелатонина/сероточина в различных возрастных группах

50-59

60-69

Ш Мелатонин ■Серотонин

70 и старше

возрастные группы

Рис. 5. Доброкачественная гиперплазия предстательной железы Оптическая плотность экспрессии мелатонина/серотонина в предстательной железе различных возрастных групп

Оптическая плотность экспрессии мелатонина достигает максимального значения в группе 50-59 летних (0,35±0,02 у.е.), а серотонина (0,3810,01 у.е.). У пациентов с увеличением возраста, наблюдается

достоверное снижение оптической плотности мелатонина, а у серотонина она увеличивается (рис. 5).

Площадь экспрессии мелатонина и серотонина в доброкачественной гиперплазии предстательной железы была достоверно выше, чем в контрольной группе (р<0,05).

Аденокарцинома предстательной железы

Микроструктура рака предстательной железы в исследованных случаях характеризовалась полиморфизмом. В одной и той же опухоли обычно обнаруживалась различная дифференцировка раковых клегок. В отличие от очагов нодулярной гиперплазии, отмечался гиперхроматоз ядер, клеточный полиморфизм, исчезновение соединительнотканных сосочков в просвете желез. Амилоидные тельца в просвете раковых желез обнаруживаются крайне редко. По периферии желез исчезают миоэпителиальные клетки. Образованные клетками железистые трубочки округлой, овальной или неправильной формы тесно прилежат друг к другу, стромы между ними почти нет. В просвете иногда содержатся гомогенные массы розового цвета В строме опухоли вокруг сотовидных комплексов можно видеть группы разрозненных опухолевых клеток, нередко складывающихся в небольшие трубочки, тяжи, железистые структуры.

4

3,5

I 3

I 2,5

g 2 с

■~g 1,5 1

0,5 0

шт

50-59

«0-69

70 и старше

возрастные группы

□ Мелатонин

Юеротонин

Рис. 6 Карцинома предстательной железы Площадь экспрессии мелатонина/серотонина в предстательной железе различных возрастных групп

Площадь экспрессии мелатонина в раковых опухолях достоверно снижалась с увеличением возраста ф<0,05) Для серотонина отмечается тенденция к значительному увеличению показателей (2,33±0,02%).

У патентов величина площади экспрессии мелатонина составила 3,34±0,01%, в группе 60-69 летних она была равна 3,28*0,02%, а для серотонина 2,02*0,01% (рис.6.).

Оптическая плотность мелатонина достигает максимального значения в группе 50-59 (0,35±0,01 у.е.), у серотонина наблюдается обратная тенденция (0,43±0,02) (рис. 7).

□ Мелатонин ■ Серотонин

70 и старше

возрастные группы

Рис. 7 Карцинома предстательной железы Оптическая плотность экспрессии мелатонина/серотонина в различных возрастных группах

Во всех случаях аденокарцином были обнаружены серотонин/мелатонин-продуцирующие НЭ. При окраске гематоксилином-эозином они были крупнее обычных клеток, располагались в базальной части атипичных желез. Цитоплазма их была эозинофильна, ядро смещено в апикальный полюс.

Обширные и множественные скопления нейроэндокринных клеток в основном обнаруживались в высокодифференцированных опухолях. При этом опухолевые нейроэндокринные клетки не демонстрировали признаков пролиферативной активности.

При иммуногистохимическом исследовании раковых опухолей предстательной железы с использованием специфических антисывороток к мелатонину было обнаружено, что в 20 из 32 случаев аденокарциномы часть клеток, в которых была зарегистрирована положительная реакция с антисывороткой к серотонину, вступала в положительную реакцию с антисыворотками против мелатонина.

Таким образом, проведенные иммуногистохимические исследования показали, что в раковых опухолях предстательной железы содержатся опухолевые НЭ клетки, ответственные за синтез серотонина и мелатонина.

Сравнение экспрессии нейроэндокринных маркеров перечисленных выше в аденокарциноме и в интактной железе выявили следующие различия (табл.4, 5).

Таблица 4

Экспрессия мелатонина в предстательной железе _ у пациентов разных групп__

Группы Всего Экспрессия мелатонина

В пределах нормы Повышена

Абс.ч. % Абс.ч. %

с интактной предстательной железой 22 20 90,9 2 9,1

с доброкачественной гиперплазией 48 42 87,5 6 12,5

с аденокарциномой 32 13 40,6 19 59,4

Из данных таблицы 4 следует, что в исследуемых образцах предстательной железы экспрессия мелатонина в интактной железе была в пределах нормы чаще, чем в аденокарциноме При этом не наблюдались различия в экспрессии мелатонина в аденокарциноме и в интактной железе в 33% образцов, и в 59% образцах экспрессия мелатонина в аденокарциноме была выше, чем в интактной железе. Разница в продукции мелатонина в аденокарциноме по сравнению с интактной железой была статистически достоверна (р<0,05).

Такая же динамика экспрессии была характерна и для серотонина (табл. 5).

В частности, в 65,7% образцов серотонин больше экспрессировался в аденокарциноме, чем в интактной железе, и обратная картина наблюдалась в 4.5% образцах интактной железы. Также приблизительно в 1/3 образцах 5НТ экспрессировался в одинаковой степени, как в аденокарциноме, так и в интактной железе.

Следующим этапом нашего исследования было сравнение экспрессии каждого вышеперечисленного маркера в образцах полученных от пациентов с аденокарциномой с образцами полученных от пациентов с ДГГ1Ж (табл.4, 5). Установлено, что как мелатонин, так и серотонин больше экспрессировался в аденокарциноме, чем в ДГТПК (р<0,05 и р<0,02 соответстве шо).

Таблица 5

Экспрессия серотонИна в предстательной железе _ у пациентов разных групп_

Экспрессия серотонина

Группы Всего В пределах нормы Повышена

Абс.ч. % Абс.ч. %

с интактной предстательной железой 22 21 95,5 1 4,5

с доброкачественной гиперплазией 48 45 93,7 3 6,3

с аденокарциномой 32 11 34,3 21 65,7

Таким образом, нейроэндокринная дифференцировка в аденокарциноме простаты обычно проявляется в виде изолированных островков НЭ клеток, экспрессирующих серотонин и мелатонин. С усилением нейроэндокринной дифференцировки, эти островки увеличиваются как в числе, так и в объеме. Такая форма распределения клеток может расцениваться как предполагаемый очаг индукции нейроэндокринной дифференцировки в субпопуляции опухолевых эпителиальных клеток. Начальное изменение местного опухолевого гомеостаза может исходить из отдельной малигнизированной эпителиальной клетки, которая уже приняла постмиотический нейроэндокринный фенотип, возможно в результате влияния онкогена.

Имеются убедительные доказательства паракринного влияния продуктов, синтезирующихся в НЭ клегках простаты на соседние эпителиальные клетки, как в нормальной, так и в опухолевой ткани. При доброкачественной гиперплазии НЭ клетки обычно бывают локализованными в виде небочьших незрелых гиперпластических узелков.

НЭ клетки, локализованные в опухолях простаты, проявляют иммунореактивность к антиапоптозному фактору bcl-2 [Bonkhoff Н, Stem U, Remberger К, 1995]. Отмечено повышение пролиферации опухолевых эпителиальных клеток, расположенных по соседству с НЭ клетками, иммунопозитивными к bcl-2.

Таким образом, результаты иммуногастохимических исследований и данные литературы позволяют заключить о возможной регуляции роста опухолей простаты серотонином, мелатонином и, по-видимому, другими гормонами, продуцируемыми НЭ клетками через паракринные и аутокринные секреторные механизмы.

выводы

В нормальной предстательной железе с увеличением возраста животных повышается численность общей популяции НЭ клеток, в том числе серотонин/мелатонин продуцирующих НЭ клеток. При радиационном старении популяция нейроэндокринных клеток в основном сохраняет типичную структуру, однако численность их снижается.

У крыс в радиационной модели преждевременного старения, обнаруживаются изменения структурно-функциональной организации различных типов нейроэндокринных клеток предстательной железы. При этом выявляется ультраструктурная дезорганизация разной степени тяжести, а в НЭ клетках наблюдаются выраженные морфологические изменения ядра и цитоплазмы.

В предстательной железе мужчин без патологии мочеполовой системы выявляются возрастные инзолютивные изменения, выражающиеся в атрофических процессах, а у лиц старше 60 лет атрофические процессы, сопровождаются часто гиперплазией органа. При этом гиперпластические процессы представляют собой очаговые разрастания железистых, фиброзной и мышечной ткани предстательной железы, локализующиеся преимущественно в окружности периурстральных желез.

В аденокарциноме предстательной железы обширные и множественные скопления нейроэндокринных клеток в основном обнаруживаются в высокодифферениированных опухолях. При доброкачественной гиперплазии эти клетки локализованы в виде небольших незрелых гиперпластических узелков.

Нейроэндокринная дифференцировка в аденокарциномах простаты проявляется в виде изолированных островков НЭ клеток, экспрессирующих серотонин и мелатонин. Такая форма распределения клеток может расцениваться как предполагаемый очаг индукции нейроэндокринной дифференцировки в субпопуляции эпителиальных клеток.

С диагностической и прогностической целью при ДГПЖ и раковых опухолях простаты целесообразно определять экспрессию серотонина и мелатонина. При этом усиление экспрессии серотонина является неблагоприятным признаком, тогда как увеличение мелатонина является благоприятным признаком при оценке прогноза развития новообразований

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. В.Х. Хейфец Роль нейроиммунноэндокринных механизмов в онкогеронтологии предстательной железы и мочевого пузыря / В.Х. Хейфец, И.М. Кветной, И.В. Князышн, A.B. Трофимов, А.Т. Супиев // «Система», Санкт-Петербург. - 2004.- 92 С.

2. Супиев А.Т. Некоторые особенности нейроэндокринных механизмов старения у мужчин / А.Т. Супиев, И.В. Князышн., С.С. Коновалов, И.М. Кветной // Альманах геронтологии. - М.,2004. - Вын.З - С.113-116.

3. Супиев А.Т. Разработка неинвазивного метода диагностики рака предстательной железы // Человек и его здоровье: Тезисы VII медико-биологической конференции. - СПб, 2004. - С.282.

4. Супиев А.Т. Цитоспин как новый неинвазивный метод ранней диагностики рака мочевого пузыря И Тезисы конференции молодых ученых Северо-западного региона. - СПб, 2004. - С. 183.

5. Супиев А.Т. Роль мелатонина в функции предстательной железы в норме и при различных патологических процессах // Фармацевтический бюллетень. - 2005. - № 4. - С.22-23.

6. Супиев А.Т., Нейроэндокринные клетки простаты и их роль в развитии опухолевых процессов / А.Т. Супиев, И.М. Кветной // Фармация Казахстана. - 2005. - № 5. - С.29-30.

7. Супиев А.Т., Влияние серотонина на развитие патологических процессов в предстательной железе / А.Т. Супиев, С.В.Филиппов, И.М. Кветной // Медицина, Казахстан. 2005. - № 5. - С.30-31.

СУПИЕВ А. Т. Нейроэндокринные клетки предстательной железы при старении // Автореф. дис... канд. мед. наук: 14.00.53 - СПб., 2005.

-22 с._

Формат 60x84 1/8. Объем 1,0 усл. п.л.

Тираж 100 экз. Заказ 03-08. Бесплатно.

Подписано к печати 23.05.2005.

Отпечатано с готового оригинал-макета

Издательство «Система».

Р1 Ш 2

РНБ Русский фонд

2006-4 8381

Актуальность работы

Проблема старения еще никогда не имела такого значения в жизни человечества, как в наши дни. В последние годы в промышленно развитых странах происходит постепенное и неуклонное увеличение средней продолжительности жизни, что вызывает прогрессирующее старение населения [Гаврилов Л.А., Гаврилова Н.С., 1991; Коркушко О.В. и соавт., 1993; Головкин В.И. и соавт., 2000; Finch С.Е., Kirkwood T.B.L., 2000], средняя продолжительность жизни людей превысила 70 лет, а люди старше 60 лет составляют 15% всего населения. Однако в настоящее время большинство людей не достигает биологического предела продолжительности жизни, а период старости, как правило, связан со снижением активности и ухудшением здоровья. Следовательно, увеличение продолжительности жизни человека является одной из наиболее сложных проблем биологии и медицины [Хавинсон В.Х., Морозов В.Г., 2001].

Старение - закономерный процесс, возникающий вследствие многих причин, которые постепенно вызывают изменения во всех органах и тканях. Старению подвержены все организмы животного и растительного мира. Поэтому изучение механизмов, лежащих в основе регуляции важнейших гомеостатических функций организма в процессе старения представляет собой одно из приоритетных направлений современной биологии и медицины [Хавинсон В.Х. и соавт., 2000]. В свою очередь, развитие концепции биологической регуляции [Хавинсон В.Х., Морозов В.Г., 1973] является приоритетным направлением современной геронтологии.

Понятие «старение» характеризуется целым комплексом изменений, связанных с ослаблением функций организма, снижением способности приспосабливаться к окружающей среде, прогрессивным нарастанием патологических сдвигов и вероятности смерти. Относительно причин старения не существует единого мнения. В частности, не определена окончательно роль внешних факторов в развитии процесса старения, хотя и известно, что воздействие ионизирующего излучения, хроническое отравление токсическими веществами и проживание в районах с неблагоприятной экологической обстановкой вызывают возникновение у людей различных заболеваний, признаков преждевременного старения, а также увеличивает смертность населения [Анисимов В.Н., Соловьев М.М., 1999].

Ведущую роль в процессах старения, развивающихся в мужском организме играют нарушения синтеза и секреции андрогенов, что приводит к снижению всех гормональных функций. Существует гипотеза, что заместительная терапия тестостероном у пожилых мужчин с гипогонадизмом может улучшить умственные способности, в особенности визуально-пространственную ориентацию [Tan R., Pu S., 2003].

Доброкачественная гиперплазия предстательной железы (аденома простаты) является наиболее часто встречающимся заболеванием мочеполовой системы у мужчин, ассоциированным со старением. Это заболевание является следствием гиперплазии стромы железы и наблюдается у более 70% мужчин в возрасте 70 лет и старше. Заболеваемость раком предстательной железы и мочевого пузыря в пожилом и старческом возрасте за последние 10-15 лет постоянно возрастает и по скорости прироста эта патология занимает второе место после меланомы кожи. Среди причин смерти у мужчин раковые опухоли предстательной железы занимают второе место после рака легких [Лопаткин Н.А., 1998; Лоран О.Б, Пушкарь Д.Ю., Франк Г.А., 1999; Степанов В.Н., Гориловский Л.М., 1999].

Современные методы исследования (электронная микроскопия, гистохимия, иммуногистохимия и др.) позволяют более глубоко изучать проблему и выяснять механизмы старения клеток и тканей. Они дают возможность разработать новые неинвазивные информативные методы диагностики опухолевых процессов, среди которых особенно важное место занимают биологические маркеры - сигнальные молекулы, синтезируемые в клетках предстательной железы.

В последние годы появились новые данные о роли нейроэндокринных (НЭ) клеток в онкогенезе предстательной железы [Хейфец В.Г. и соавт., 2004]. Однако функция НЭ клеток в простате все еще мало изучена. Полагают, что НЭ клетки необходимы для роста и дифференцирования, также как для регулирования гомеостаза секреторных процессов в зрелой предстательной железе. Противоречивы данные о том, что пропорция НЭ клеток увеличивается в предстательной железе при карциноме. Определяемые НЭ клетки в аденокарциноме являются трансформированными клетками и отличаются от нормальных НЭ клеток.

Остается открытым вопрос о том, влияют ли нормальные, немалигнизированные НЭ клетки на канцерогенез в предстательной железе. Эти и другие вопросы функционирования и старения предстательной железы требуют дальнейшего изучения.

Цель и задачи исследования

Целью диссертационного исследования является изучение функциональной морфологии нейроэндокринных клеток предстательной железы крыс и человека при старении.

Для достижения поставленной цели были поставлены и последовательно решены следующие задачи:

1. Изучить особенности структурно-функциональной организации нейроэндокринных клеток предстательной железы крыс и человека при старении;

2. Верифицировать экспрессию серотонина и мелатонина в нейроэндокринных клетках предстательной железы и изучить изменения гормонального фенотипа клеток при старении;

3. Описать изменения поведения нейроэндокринных клеток предстательной железы человека при развитии в ней гиперпластических процессов, ассоциированных со старением;

4. Определить онкопрогностическую значимость экспрессии серотонина и мелатонина в нейроэндокринных клетках предстательной железы человека.

Научная новизна работы

Впервые детально изучена ультраструктура НЭ клеток предстательной железы при старении и иммуногистохимически верифицирована экспрессия в них серотонина и мелатонина. Описаны изменения НЭ клеток при развитии доброкачественной гиперплазии предстательной железы и карциномы -гиперпластических процессов, ассоциированных с возрастом.

Установлено, что в нормальной предстательной железе количество НЭ клеток увеличивается с возрастом, в том числе происходит гиперплазия серотонин/мелатонин продуцирующих НЭ клеток. У крыс в модели преждевременного старения популяция НЭ клеток снижается, однако НЭ клетки сохраняют типичные электронно-микроскопические признаки.

Установлено что при преждевременном старении, несмотря на сохранность нормальной ультраструктуры, в НЭ клетках отмечается гиперплазия митохондрий, отек эндоплазматического ретикулума, очаговая вакуолизации цитоплазмы. В НЭ клетках, продуцирующих серотонин/мелатонин, эти изменения выражены более сильно, часто встречаются значимые ультраструктурные повреждения, сопровождающиеся дегрануляцией различной степени выраженности.

Гистохимическими и иммуногистохимическими исследованиями установлено, что в раковых опухолях предстательной железы содержатся опухолевые НЭ клетки, ответственные за синтез серотонина и мелатонина. Нейроэндокринная дифференцировка в аденокарциноме простаты проявляется в виде изолированных островков НЭ клеток. Такая форма распределения клеток может расцениваться как предполагаемый очаг индукции нейроэндокринной дифференцировки в субпопуляции эпителиальных клеток.

Практическая значимость работы

Впервые установлена роль нейроэндокринных клеток и вырабатываемых ими гормонов (серотонина и мелатонина) в развитии опухолевых заболеваний - доброкачественной гиперплазии и аденокарциномы предстательной железы, ассоциированных с возрастом.

Определение уровня экспрессии гормонов — серотонина и мелатонина, необходимых для нормальной функции предстательной железы, является информативным тестом, который можно использовать с диагностической и прогностической целью при ДГПЖ и аденокарциноме. Установлено, что усиление экспрессии серотонина является неблагоприятным фактором в прогностическом отношении указанных опухолей, в то время как усиление экспрессии мелатонина является положительным фактором прогноза.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. В процессе старения происходит изменение структурно-функциональной организации НЭ клеток предстательной железы.

2. Серотонин и мелатонин - гормоны, продуцируемые НЭ клетками, через паракринные и аутокринные секреторные механизмы участвуют в механизмах роста опухолей предстательной железы, ассоциированных с возрастом. Нарушение синтеза и секреции гормонов в НЭ клетках способствует развитию доброкачественной гиперплазии и аденокарциномы предстательной железы.

3. Определение уровня экспрессии гормонов - серотонина и мелатонина является информативным тестом, который может быть использован с диагностической и прогностической целью при доброкачественной гиперплазии и аденокарциноме предстательной железы.

Связь с научно-исследовательской работой Института

Диссертационная работа является научной темой, выполняемой по основному плану НИР Санкт-Петербургского института биорегуляции и геронтологии С 30 РАМН.

Структура и объем диссертации

Диссертация состоит из введения, обзора литературы, главы с изложением материала и методов исследования, собственных исследований, обсуждения результатов, выводов, практических рекомендаций и указателя литературы. Работа иллюстрирована 17 рисунками и содержит 5 таблиц. Текст диссертации изложен на 120 страницах. Список литературы содержит 150 источников (48 отечественных и 102 иностранных авторов).

ВЫВОДЫ

1. В нормальной предстательной железе с увеличением возраста животных повышается численность общей популяции НЭ клеток, в том числе серотонин/мелатонин продуцирующих НЭ клеток. При радиационном старении популяция нейроэндокринных клеток в основном сохраняет типичную структуру, однако численность их снижается.

2. У крыс в радиационной модели преждевременного старения, обнаруживаются изменения структурно-функциональной организации различных типов нейроэндокринных клеток предстательной железы. При этом выявляется ультраструктурная дезорганизация разной степени тяжести, а в НЭ клетках наблюдаются выраженные морфологические изменения ядра и цитоплазмы.

3. В предстательной железе мужчин без патологии мочеполовой системы выявляются возрастные инволютивные изменения, выражающиеся в атрофических процессах, а у лиц старше 60 лет атрофические процессы, сопровождаются часто гиперплазией органа. При этом гиперпластические процессы представляют собой очаговые разрастания железистых, фиброзной и мышечной ткани предстательной железы, локализующиеся преимущественно в окружности периуретральных желез.

4. В аденокарциноме предстательной железы обширные и множественные скопления нейроэндокринных клеток в основном обнаруживаются в высокодифференцированных опухолях. При доброкачественной гиперплазии эти клетки локализованы в виде небольших незрелых гиперпластических узелков.

5. Нейроэндокринная дифференцировка в аденокарциномах простаты проявляется в виде изолированных островков НЭ клеток, экспрессирующих серотонин и мелатонин. Такая форма распределения клеток может расцениваться как предполагаемый очаг индукции нейроэндокринной дифференцировки в субпопуляции эпителиальных клеток.

6. С диагностической и прогностической целью при Д111Ж и раковых опухолях простаты целесообразно определять экспрессию серотонина и мелатонина. При этом усиление экспрессии серотонина является неблагоприятным признаком, тогда как увеличение мелатонина является благоприятным признаком при оценке прогноза развития новообразований.