Автореферат и диссертация по медицине (14.00.40) на тему:Нейроэндокринная дифференцировка в опухолях предстательной железы и мочевого пузыря, ассоциированных со старением

На правах рукописи

сливкин

Валерий Владимирович

НЕЙРОЭНДОКРИННАЯ ДИФФЕРЕНЦИРОВКА В ОПУХОЛЯХ ПРЕДСТАТЕЛЬНОЙ ЖЕЛЕЗЫ И МОЧЕВОГО ПУЗЫРЯ, АССОЦИИРОВАННЫХ СО СТАРЕНИЕМ

14 00 53 - геронтология и гериатрия

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Санкт-Петербург - 2008

003169343

Работа выполнена на кафедре хирургии Самарского военно-медицинского

института МО РФ и в отделе клеточной биологии и патологии Санкт-Петербургского инстиута биорегуляции и геронтологии СЗО РАМН

Научный руководитель доктор медицинских наук, доцент Репетий Николай Григорьевич

Официальные оппоненты

член-корреспондент РАМН, заслуженный деятель науки РФ, доктор медицинских наук, профессор Аничков Николай Мильевич

доктор медицинских наук Забежинский Марк Абрамович

Ведущая организация-

ГУ «Российский онкологический научный центр им Н Н Блохина» РАМН

Защита состоится « » 2008 г. в часов

на заседании диссертационного Совета Д601 001 01 при Санкт-Петербургском институте биорегуляции и геронтологии СЗО РАМН по адресу. 197110 Санкт-Петербург, пр Динамо, д 3

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Санкт-Петербургского института биорегуляции и геронтологии СЗО РАМН (197110 Санкт-Петербург, пр Динамо, д 3)

Автореферат разослан

2008 г

Ученый секретарь диссертационного Совета кандидат биологических наук, доцент

Козина Л С

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы

В последние годы в промышленно развитых странах происходит неуклонное увеличение средней продолжительности жизни, а следовательно и прогрессирующее старение населения [РтсЬ Р , Клг1тоо(1 А Б, 2000], Средняя продолжительность жизни людей превысила 70 лет, а люди старше 60 лет составляют 15% всего населения Однако, в настоящее время большинство людей не достигает биологического предела продолжительности жизни, а период старости, как правило, связан со снижением активности и ухудшением здоровья

Старение - закономерный процесс, возникающий вследствие многих причин, которые постепенно вызывают изменения во всех органах и тканях Изучение механизмов, лежащих в основе регуляции важнейших гомеостатических функций организма в процессе старения, представляет собой одно из приоритетных направлений современной биологии и медицины [Хавинсон В X и соавт, 2000] В свою очередь, развитие концепции биологической регуляции [Хавинсон В X , Морозов В Г , 2002] является приоритетным направлением современной геронтологии Ведущую роль в процессах старения, развивающихся в мужском организме, играют нарушения синтеза и секреции андрогенов, что приводит к снижению многих гормональных функций

Опухоли предстательной железы и мочевого пузыря являются наиболее часто встречающимися заболеваниями мочеполовой системы у мужчин, ассоциированными со старением Эти процессы являются следствием гиперплазии стромы предстательной железы и нарушения темпов пролиферации и обновления эпителия мочевого пузыря Они встречаются у более 70% мужчин в возрасте 70 лет и старше Заболеваемость раком предстательной железы и мочевого пузыря в пожилом и старческом возрасте за последние 10-15 лет постоянно возрастает, и по скорости прироста эта патология занимает второе место после меланомы кожи. Среди причин смерти у мужчин раковые опухоли предстательной железы и мочевого пузыря занимают второе место после рака легких [Лопаткин НА, 1998, Лоран ОБ, Пушкарь ДЮ, 1999] По данным ВОЗ (2004), суммируя эпидемиологические и цитогенетические исследования, проведенные экспертами из 12 стран на общей когорте людей, насчитывающей 37000 пациентов различного возраста, можно выделить новообразования, преимущественно развивающиеся (более, чем у 78% обследованных) в возрасте старше 55-60 лет Эти опухоли представляют собой доброкачественную гиперплазию и карциному простаты, переходноклеточный рак мочевого пузыря и солидный тип гепатоцеллюлярного рака Мочекулярно-

биологические и генетические исследования позволяют предположить с большой долей вероятности в качестве пускового механизма их развития и прогрессии мутации определенных локусов хромосом и инволютивную перестройку тканей соответствующих органов Эти опухоли принято в настоящее время рассматривать как новообразования, ассоциированные со старением [Доклад группы экспертов ВОЗ, 1233, Женева, 2004]

Современные методы исследования (электронная микроскопия, гистохимия, иммуногистохимия и др) позволяют более глубоко изучать механизмы старения клеток и тканей Они дают возможность разработать новые неинвазивные информативные методы диагностики опухолевых процессов, среди которых особенно важное место занимают биологические маркеры - сигнальные молекулы, синтезируемые в нейроэндокринных клетках предстательной железы и апудоцитах мочевого пузыря В последние годы появились новые данные о роли локально синтезируемых гормонов в онкогенезе мужской мочеполовой системы [СЬе^еСг 8 а аI, 2004]

В настоящее время достаточно активно разрабатываются вопросы, связанные с выяснением роли нейроэндокринных (НЭ) клеток в механизмах опухолевого роста в предстательной железе [СЬе^г Б е1 а1, 2004], однако функция НЭ клеток в простате все еще мало изучена Полагают, что НЭ клетки необходимы для роста и дифференцирования, также как для регулирования гомеостаза секреторных процессов в зрелой предстательной железе Противоречивы данные о том, что пропорция НЭ клеток увеличивается в предстательной железе при злокачественном росте Дискуссионным остается вопрос о том, являются ли верифицируемые НЭ клетки в карциномах трансформированными клетками и отличаются ли они от нормальных НЭ клеток простаты Недостаточно изучен вопрос о влиянии гормонов, секретируемых нормальными (немалигнизированными) НЭ клетками на канцерогенез в предстательной железе Эти и другие аспекты функционирования и старения предстательной железы требуют дальнейшего изучения

Учитывая низкую эффективность традиционной эндоскопической диагностики изменений слизистой оболочки мочевого пузыря, высокую частоту рецидивов рака мочевого пузыря после трансуретральной резекции, разработка и внедрение в клиническую практику маркеров рака простаты и мочевого пузыря, позволяющих оценить прогноз развития опухолей этих органов у больных пожилого и старческого возраста, являются актуальными и своевременными

Цель и задачи исследования

Целью диссертационного исследования является изучение структурно-функциональной организации нейроэндокринных клеток,

присутствующих в опухолях предстательной железы и мочевого пузыря человека, ассоциированных со старением Для достижения поставленной цели были последовательно решены следующие задачи

1 Изучить структурно-функциональную организацию нейроэндокринных клеток предстательной железы и мочевого пузыря человека при старении

2 Верифицировать иммуноцитохимические фенотипы нейроэндокринных клеток в опухолях предстательной железы и мочевого пузыря у пациентов пожилого и старческого возраста

3 Определить онкопрогностическую значимость экспрессии хромогранина А и соматостатина, продуцируемых нейроэндокринными клетками предстательной железы человека

4 Изучить экспрессию маркера пролиферации Кл-67, проапоптозного фактора р53 и антиапоптозного фактора Мс1-1 при раке мочевого пузыря у больных пожилого и старческого возраста в зависимости от степени дифференцировки опухоли

5 Определить уровень секреции антигена, ассоциированного с опухолями мочевого пузыря (ВТА) у больных пожилого и старческого возраста в зависимости от степени дифференцировки опухоли и оценить его значимость как биологического маркера для новообразований данной локализации

6 Оценить роль и значение ВТА и иммуногистохимических маркеров в развитии, диагностике и оценке прогноза опухолей простаты и мочевого пузыря, ассоциированных со старением

Научная новизна работы

Впервые детально изучена функциональная морфология нейроэндокринных клеток предстательной железы и мочевого пузыря, присутствующих в опухолях указанных органов, ассоциированных со старением Иммуногистохимически верифицированы гормональные фенотипы нейроэндокринных клеток предстательной железы и мочевого пузыря, как в нормальной, так и опухолевой ткани Детально описаны изменения поведения нейроэндокринных клеток предстательной железы и мочевого пузыря человека при развитии в них опухолевых процессов, ассоциированных со старением Изучены изменения уровня секреции ВТА при опухолевых процессах в мочевом пузыре и оценена значимость ВТА как биологического маркера для новообразований мочевого пузыря Проанализирована онкопрогностическая значимость экспрессии различных гормонов, продуцируемых нейроэндокринными клетками предстательной железы и мочевого пузыря

Практическая значимость работы

Впервые установлена роль нейроэндокринных клеток и вырабатываемых ими гормонов (хромогранина А и соматостатина) в развитии доброкачественной гиперплазии и аденокарциномы предстательной железы - опухолевых заболеваний, ассоциированных с возрастом

Определение уровня экспрессии этих гормонов, необходимых для нормальной функции предстательной железы, является информативным тестом, который можно использовать с диагностической и прогностической целью при опухолях данного органа Установлено, что усиление экспрессии хромогранина А является неблагоприятным фактором в прогностическом отношении карценомы простаты, в то время как усиление экспрессии соматостатина является положительным фактором прогноза, указывающим на развитие доброкачественной гиперплазии предстательной железы

Впервые показана зависимость изменения показателей секреции ВТА от степени дифференцировки переходноклеточного рака мочевого пузыря у больных пожилого и старческого возраста Установлено наличие строгих корреляций между секрецией ВТА, степенью дифференцировки переходноклеточных карцином мочевого пузыря и показателями экспрессии иммуногистохимических маркеров, отражающих пролиферативный потенциал опухоли и гибель клеток в форме апоптоза

Высокая информативная ценность показателей секреции ВТА у больных раком мочевого пузыря и их корреляции с пролиферацией и апоптозом опухолевых клеток позволяет считать ВТА перспективным неинвазивным биологическим маркером диагностики и прогноза развития рака мочевого пузыря у пациентов пожилого и старческого возраста

Основные положения, выносимые на защиту

1 В процессе старения происходит изменение структурно-функциональной организации НЭ клеток предстательной железы Хромогранин А и соматостатин - гормоны, продуцируемые НЭ клетками, через паракринные и аутокринные секреторные механизмы участвуют в механизмах роста опухолей предстательной железы, ассоциированных с возрастом Нарушение синтеза и секреции гормонов в НЭ клетках способствует развитию доброкачественной гиперплазии и аденокарциномы предстательной железы

2 Определение уровня экспрессии гормонов - хромогранина А и соматостатина является информативным тестом, который может быть использован с диагностической и прогностической целью при доброкачественной гиперплазии и аденокарциноме предстательной железы

3 Показатели секреции ВТА строго коррелируют со степенью дифференцировки, пролиферацией и апоптозом переходноклеточных опухолей мочевого пузыря у больных пожилого и старческого возраста

4 Анализ секреции ВТА позволяет оценить прогноз и эффективность лечения рака мочевого пузыря у каждого пациента на любом этапе наблюдения

Апробация и реализация результатов исследования

Материалы диссертации доложены на совместном заседании отдела клеточной биологии и патологии и отдела клинической геронтологии Санкт-Петербургского института биорегуляции и геронтологии СЗО РАМН, межкафедральном заседании кафедр хирургии, военно-полевой терапии и военно-полевой хирургии Самарского военно-медицинского института, на 41-й итоговой научно-практической конференции научно-педагогичекого состава Самарского военно-медицинского института, конференции «Взаимодействие медицинской науки и практики», Новополоцк, 2007

Результаты исследований используются в научно-педагогической и практической деятельности Санкт-Петербургского института биорегуляции и геронтологии СЗО РАМН и Самарского военно-медицинского института МО РФ

Публикации

По материалам диссертации опубликовано 9 работ, в том числе 1 статья в журнале по перечню ВАК РФ, 1 глава в монографии, 7 тезисов

Связь с научно-исследовательской работой Института

Диссертационная работа является научной темой, выполняемой по основному плану НИР Самарского военно-медицинского института и Санкт-Петербургского института биорегуляции и геронтологии СЗО РАМН

Структура и объем диссертации

Диссертация состоит из введения, обзора литературы, главы, посвященной описанию материалов и методов обследования больных, глав результатов собственных исследований и их обсуждения, заключения, выводов, практических рекомендаций и списка использованной литературы Работа изложена на 131 странице машинописного текста, содержит 16 таблиц, 14 рисунков Список использованной литературы включает 19 отечественных и 212 зарубежных источников

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материал и методы исследования

Для проведения морфологических и иммуногистохимических исследований предстательной железы был использован биопсийный и операционный материал, полученный у 48 больных с доброкачественной гиперплазией предстательной железы (ДГПЖ) и у 32 больных с аденокарциномой простаты В контрольной группе исследовался аутопсийный материал (предстательная железа), полученный у 22 мужчин, погибших от разных причин без патологии предстательной железы

Средний возраст лиц, у которых были взяты биопсийный или аутопсийный материал в контрольной группе составил 34,1 года, у больных с ДГПЖ - 66,4 года (варьировал от 50 до 74 лет) и у больных с аденокарциномой - 66,3 года (варьировал от 58 до 84 лет) Объем опухоли варьировал от 1,5 мм до 10,6 мм, в среднем составлял 6,1 мм

Для сопоставления диагностической ценности различных методов обследовано 348 мужчин, большинство обследуемых (74,2%) находились в возрасте 60 лет и старше При этом у 65 чел (18,7%) патологии предстательной железы выявлено не было, ДГПЖ была диагностирована у 143 чел (41,1%), простатит - у 42 (12,1%), сочетание ДГПЖ и простатита - у 69 чел (19,8%), рак предстательной железы был верифицирован у 29 пациентов (8,3% случаев)

Для выполнения поствленных задач нами было обследовано 159 пациентов с переходноклеточным раком мочевого пузыря Группу сравнения составили 154 пациента без онкологических заболеваний мочевого пузыря

В ходе исследования использовали следующие методы гистологические и иммуногистохимические методы, морфометрические исследования (изучали оптическую плотность и площадь экспрессии Ki-67, Mcl-1, р53, соматостатина), определение секреции антигена, ассоциированного с опухолями мочевого пузыря (bladder tumor antigen -ВТА), общеклиническое обследование

Статистическая обработка результатов

Результаты морфометрических и иммуногистохимических исследований обрабатывали с помощью компьютерных программ Excel, Statistica 5 0 (Statsoñ) и Anova Для оценки межгрупповых различий (сравнение средних значений) применяли t-критерий Стыодента Взаимозависимость уровня экспрессии гормона и возраста устанавливали при помощи корреляционного анализа (в т ч с использованием корреляционного теста Спирмена)

Нейроиммуноэндокринные механизмы развития возраст-ассоциированных опухолей предстательной железы

На всех препаратах в НЭ клетках была отмечена выраженная экспрессия исследуемых маркеров соматостатина и хромогранина А Площадь экспрессии соматостатина достоверно снижалась с увеличением возраста Так в препаратах, полученных у молодых пациентов, величина площади экспрессии соматостатина составила 5,35±0,02%, что в 4 раза больше чем в препаратах группы 60-69 лет 1,37±0,03%, а у хромогранина А она была равна 4,48±0,03% у молодых пациентов и, соответственно, в группе 60-69 лет 4,0±0,03% (р<0,05) С увеличением возраста площадь экспрессии хромогранина А и соматостатина уменьшается Между возрастом пациентов и значениями площади экспрессии соматостатина и хромогранина А выявлена положительная корреляция (к=0,06)

30 39 40-49

50 £9 60-69 возрастные группы

Соматостатин

25 29 30-39 40-49

□ Хромогранин А

50 59 60-69

возрастные группы

Рис. 1. Площадь экспрессии и оптическая плотность экспрессии соматостатинаУхромогранина А в предстательной железе различных возрастных групп (контрольная группа)

Примечание *р<0,05 достоверная разница между площадью экспрессии и оптической плотностью экспрессии соматостатина с увеличением возраста

**р<0,05 достоверная разница между площадью экспрессии и оптической плотностью экспрессии хромогранина А с увеличением возраста

Оптическая плотность соматостатина и хромогранина А достигает максимального значения в препаратах группы лиц 25-29 лет 0,36±0,02 у е и 0,31±0,01 уе соответственно, а в препаратах у пациентов пожилого возраста наблюдается достоверное снижение этих показателей 0,27±0,02 у е и 0,25±0,01 у е соответственно (р<0,05)

Полученные данные свидетельствуют о достоверном снижении экспрессии хромогранина А и соматостатина в НЭ клетках предстательной железы человека с увеличением возраста (р<0,05)

Площадь экспрессии соматостатина в препаратах с ДГПЖ ниже, чем в препаратах контрольной группы больных того же возраста Величина площади экспрессии соматостатина в препаратах с ДГПЖ составила 4,35±0,02% у 50-59-летних пациентов, что в 2 раза больше чем в группе больных 60-69 лет, а для хромогранина А она была равна 4,37+0,02% в группе лиц 50-59 лет (р<0,05) С увеличением возраста площадь экспрессии хромогранина А увеличивается, особенно у пациентов с ДГПЖ в возрасте 70 лет и старше 5,32±0,03%

Оптическая плотность экспрессии соматостатина достигает максимального значения в группе лиц 50-59 лет (0,36±0,01 уе), а хромогранина А (0,39±0,02 у е ) У пациентов с увеличением возраста, наблюдается достоверное снижение оптической плотности соматостатина, а у хромогранина А она увеличивается (р<0,05)

1-69 70 и старше

возрастные группы

Соматостатин

50 59 60-69 70 и старше

возрастные группы

□ Хромогранин А

Рис. 2. Площадь экспрессии и оптическая плотность экспрессии соматостатина/хромогранина А при доброкачественной гиперплазии предстательной железы различных возрастных групп

Примечание *р<0,05 достоверная разница между площадью экспрессии и оптической плотностью экспрессии соматостатина с увеличением возраста

**р<0,05 достоверная разница между площадью экспрессии и оптической плотностью экспрессии хромогранина А с увеличением возраста

Площадь экспрессии соматостатина и хромогранина А в доброкачественной гиперплазии предстательной железы была достоверно выше, чем в контрольной группе (р<0,05)

Площадь экспрессии соматостатина в карциномах достоверно снижалась с увеличением возраста (р<0,05) Для хромогранина А отмечается тенденция к значительному увеличению показателей (2,41 ±0,02) У пациентов величина площади экспрессии соматостатина составила 3,41 ±0,02%, в группе пациентов 60-69 лет она была равна 3,25±0,01, а для хромогранина А 2,04±0,02 Оптическая плотность

соматостатина достигает максимального значения в группе больных 50-59 лет (0,39±0,01 уе), у хромогранина А наблюдается обратная тенденция (0,46±0,03)

Во всех случаях аденокарцином были обнаружены хромогранин А/соматостатин-продуцирующие НЭ При окраске гематоксилином-эозином они были крупнее обычных клеток, располагались в базальной части атипичных желез Цитоплазма их была эозинофильна, ядро смещено в апикальный полюс

Обширные и множественные скопления нейроэндокринных клеток в основном обнаруживались в высокодифференцированных опухолях При этом опухолевые нейроэндокринные клетки не демонстрировали признаков пролиферативной активности

Соматостатин

70 и старше возрастные группы

70 и старше возрастные группы

□ Хромогранин А

Рис. 3. Площадь экспрессии и оптическая плотность экспрессии соматостатина/хромогранина А при аденокарциноме предстательной железы различных возрастных групп

Примечание *р<0,05 достоверная разница между площадью экспрессии и оптической плотностью экспрессии соматостатина с увеличением возраста

**р<0,05 достоверная разница менаду площадью экспрессии и оптической плотностью экспрессии хромогранина А с увеличением возраста

При иммуногистохимическом исследовании раковых опухолей предстательной железы с использованием специфических антисывороток к соматостатину было обнаружено, что в 20 из 32 случаев аденокарциномы часть клеток, в которых была зарегистрирована положительная реакция с антисывороткой к хромогранину А, вступала в положительную реакцию с антисыворотками против соматостатина

Таким образом, проведенные иммуногистохимические исследования показали, что в раковых опухолях предстательной железы содержатся опухолевые НЭ клетки, ответственные за синтез хромогранина А и

соматостатина. Сравнение экспрессии нейроэндокринных маркеров, перечисленных выше, в аденокарциноме и в интактной железе выявили следующие различия (табл 1,2)

Из данных, представленных в таблице 1, следует, что в исследуемых образцах предстательной железы экспрессия соматостатина в интактной железе была в пределах нормы чаще, чем в аденокарциноме При этом не наблюдалось различий в экспрессии соматостатина в аденокарциноме и в интактной железе в 33% образцов, а в 59% образцов экспрессия соматостатина в аденокарциноме была выше, чем в интактной железе Различия в продукции соматостатина в аденокарциноме по сравнению с интактной железой были статистически достоверны (р<0,05) Подобная динамика экспрессии была характерна и для хромогранина А (р<0,05), что представлено в таблице 2 В частности, в 65,7% образцов хромогранин А больше экспрессировался в аденокарциноме, чем в интактной железе, и обратная картина наблюдалась в 4,5% образцах интактной железы Также приблизительно в 1/3 образцах хромогранин А экспрессировался в одинаковой степени как в аденокарциноме, так и в интактной железе

Следующим этапом исследования было сравнение экспрессии каждого вышеперечисленного маркера в образцах, полученных от пациентов с аденокарциномой, с образцами, полученными от пациентов с доброкачественной гиперплазией предстательной железы (см также табл 1 и 2) Установлено, что как соматостатин, так и хромогранин А больше экспрессировался в образцах с аденокарциномой, чем в доброкачественной гиперплазии (р<0,05)

Таблица 1

Экспрессия соматостатина в исследованных образцах препаратов предстательной железы без паталогии, при доброкачественной гиперплазии и аденокарциноме

Группа исследованных образцов Количество исследованных образцов Экспрессия соматостатина

В пределах нормы Повышенная

Абс ч % Абс ч %

Интактная предстательная железа 22 20 90,9 2 9,1

ДГПЖ 48 42* 87,5 6* 12,5

Аденокар-цинома 32 13* 40,6 19* 59,4

Примечание *р<0,05 достоверно по сравнению с показателями экспрессии соматостатина в исследованных образцах предстательной железы без патологии

Таблица 2

Экспрессия хромогранина А в исследованных образцах препаратов предстательной железы без паталогии, при доброкачественной гиперплазии и аденокарциноме

Группа исследованных образцов Количество исследованных образцов Экспрессия хромогранина А

В пределах нормы Повышенная

Абс ч % Абс ч %

Интактная предстательная железа 22 21 95,5 1 4,5

ДГПЖ 48 45* 93,7 з* 6,3

Аденокарцинома 32 11* 34,3 21* 65,7

Примечание *р<0,05 достоверно по сравнению с показателями экспрессии хромогранина А в исследованных образцах предстательной железы без патологии

Таким образом, нейроэндокринная дифференцировка в аденокарциноме простаты обычно проявляется в виде изолированных островков НЭ клеток, экспрессирующих хромогранин А и соматостатин С усилением нейроэндокринной дифференцировки, эти островки увеличиваются как в числе, так и в объеме Такая форма распределения клеток может расцениваться как предполагаемый очаг индукции нейроэндокринной дифференцировки в субпопуляции опухолевых эпителиальных клеток Начальное изменение местного опухолевого гомеостаза может исходить из отдельной малигнизированной эпителиальной клетки, которая уже приняла постмитотический нейроэндокринный фенотип, возможно в результате влияния онкогена

Нейроиммуноэндокринные характеристики опухолей мочевого пузыря

У пациентов пожилого и старческого возраста, не страдающих онкологическими заболеваниями (контрольная группа) средние показатели секреции ВТА составляли 1 9±0 05 нг/мл

У обследованных пациентов с первичным неоперированным раком мочевого пузыря средний уровень секреции ВТА резко возрастал и составлял 731±97 нг/мл (р<0,05)

Распределение больных в соответствии с гистологически определенными стадиями опухоли показало, что секреция ВТА была

достоверно более снижена при низкодифференцированных 03 опухолях, составляя в среднем 1325±108 нг/мл, тогда как при возрастании дифференцировки (степень в2) этот показатель снижался до 616±76 нг/мл (р<0 05) (табл 3)

Таблица 3

Секреция ВТА в переходноклеточных карциномах мочевого пузыря

Степень дифференцировки опухолевых клеток Уровень секреции ВТА (нг/мл)

225±42

616±76*

вз 1325±108*

Примечание *р<0,05 достоверно по сравнению с показателями секреции ВТА в высокодифференцированных карциномах мочевого пузыря

Таблица 4

Оптическая плотность маркеров в переходноклеточных карциномах мочевого пузыря

Степень дифференцировки опухолей Оптическая плотность (уел ед)

Кл-67 Мс1-1 р53 соматостатин

01 1,34±0,02 1,18±0,05 6,40±1,01 3,29±0,19

1,51±0,02* 1,31±0,08л 4,78±0,09° 2,07±0,08#

вз 2,24±0,07* 2,30±0,09л 2,04±0,07° 0,81±0,02#

Примечание *р<0,05 достоверно по сравнению с показателем оптической плотности Кь67 в высокодифференцированных карциномах мочевого пузыря, лр<0,05 достоверно по сравнению с показателем оптической плотности Мс1-1 в высокодифференцированных карциномах мочевого пузыря, °р<0,05 достоверно по сравнению с показателем оптической плотности р53 в высокодифференцированных карциномах мочевого пузыря, #р<0,05 достоверно по сравнению с показателем оптической плотности соматостатина в высокодифференцированных карциномах мочевого пузыря

Экспрессия изученных иммуногистохимических маркеров была неодинаковой в опухолях различной степени дифференцировки (табл 4, 5) Так, наиболее высокие показатели оптической плотности и площади экспрессии Кь67 и антиапоптозного белка Мс1-1 были зарегистрированы в низкодифференцированных 02-3 опухолях, тогда как в них же отмечались наиболее низкие соответствующие показатели проапоптозного протеина р53 Наоборот, в высокодифференцированных опухолях отмечалось ослабление экспрессии К.1-67 и Мс1-1 с одновременным усилением экспрессии фактора р53 (рис 4, 5)

Наиболее сильная экспрессия соматостатина наблюдалась в клетках высокодифференцированных карцином, при снижении

дифференцировки опухоли показатели экспрессии внутриопухолевого соматостатина снижались

Таблица 5

Площадь экспрессии маркеров в переходноклеточных карциномах мочевого пузыря

Степень дифференцировки опухолей Площадь экспрессии (% площади поля зрения)

К1-67 Мс1-1 р53 соматостатин

0,37±0,05 1,29±0,14 5,16±0,21 6,34±0,08

в2 0,47±0,06* 1,65±0,08Л 3,29±0,21° 3,21±0,67#

вз 0,71±0,04* 2,22±0,12л 1,14±0,08° 1,79±0,15#

Примечание *р<0,05 достоверно по сравнению с показателями площади экспрессии К1-67 в высокодифференцированных карциномах мочевого пузыря лр<0,05 достоверно по сравнению с показателями площади экспрессии Мс1-1 в высокодифференцированных карциномах мочевого пузыря р<0,05 достоверно по сравнению с показателями площади экспрессии р53 в высокодифференцированных карциномах мочевого пузыря, "р<0,05 достоверно по сравнению с показателями площади экспрессии соматостатина в высокодифференцированных карциномах мочевого пузыря

■ К1-67 Н Мс1-1 0 р53 Н соматостатин

Рис. 4 Динамика оптической плотности иммуногистохимических маркеров при различной степени дифференцировки карциномы мочевого пузыря

Примечание:*р<0,05 достоверно по сравнению с показателями оптической плотности Кл-67 в высокодифференцированных карциномах мочевого пузыря: Лр<0,05 достоверно по сравнению с показателями оптической плотности МсМ в высокодифференцированных карциномах мочевого пузыря: р<0,05 достоверно по сравнению с показателями оптической плотности р53 в высокодифференцированных карциномах мочевого пузыря: #р<0,05 достоверно по сравнению с показателями оптической плотности соматостатина в высокодифференцированных карциномах мочевого пузыря.

Показатели экспрессии иммуногистохимических маркеров коррелируют между собой. Так, выраженные отрицательные корреляции экспрессии наблюдаются между МсМ и р53; Кл-67 и р53; Кл-67 и соматостатином; МсМ и соматостатином, тогда как, наоборот, положительно взаимодействуют между собой МсМ и Кл-67; р53 и соматостатин. Эти корреляции, на наш взгляд, наглядно отражают онкобиологическое значение изученных маркеров.

У всех обследованных пациентов была обнаружена выраженная достоверная положительная корреляция между уровнем секреции ВТА и показателями экспрессии Кд-67 в опухолевой ткани (по классификационному тесту Спирмена г5= +0.922; р<0.0001).

в2

вз

■ К1-67 ЕЭМсМ Е3р53 Нсоматостатин

Рис. 5. Динамика площади экспрессии иммуногистохимич'еских маркеров при различной степени дифференцировки карциномы мочевого пузыря.

Примечание :*р<0,05 достоверно по сравнению с показателями площади экспрессии К1-67 в высоко дифференцированных карциномах мочевого пузыря: Лр<0,05 достоверно по сравнению с показателями площади экспрессии Мс1-1 в высокодифференцированных карциномах мочевого пузыря: р<0,05 достоверно по сравнению с показателями площади экспрессии р53

в высокодифференцированных карциномах мочевого пузыря: "р<0,05 достоверно по сравнению с показателями площади экспрессии соматостатина в высокодифференцированных карциномах мочевого пузыря.

Известно, что показатели гибели клеток путем апоптоза оцениваются по двум основным параметрам - уровням экспрессии антиапоптозного (Мс1-1) и проапоптозного (р53) протеинов. Экспрессия указанных маркеров в опухолевых клетках выражается в иммунопозитивной окраске их ядер при использовании соответствующих моноклональных антител.

У всех обследованных нами пациентов была обнаружена достоверная положительная корреляция между уровнем секреции ВТА и показателями экспрессии антиапоптозного фактора - протеина Мс1-1 в опухолевой ткани (по классификационному тесту Спирмена г5 = +0.858; р<0.0001).

У всех обследованных пациентов была обнаружена достоверная отрицательная корреляция между уровнем секреции ВТА и показателями экспрессии Кь67 в опухолевой ткани (по классификационному тесту Спирмена г5= -0.909; р<0.0026).

Анализ уровня секреции ВТА выявил достоверную отрицательную корреляцию этого показателя с внутриопухолевым содержанием соматостатина у больных раком мочевого пузыря (г5 = -0 898, р<0 0021)

Роль и место иммуноцитохимии в скрининге и диагностике опухолей предстательной железы н мочевого пузыря

В рамках настоящего исследования было проведено сопоставление диагностической ценности распространенных методов выявления онкологической патологии предстательной железы Для уточнения возможностей определения простат-спецефического антигена (ПСА), пальцевого ректального и трансректального ультразвукового исследований после осмотра пациента выставлялся предварительный диагноз по каждому методу, а затем - окончательный диагноз на основании всех трех методов с обязательным гистологическим подтверждением

Было обследовано 348 мужчин Распределение их по возрасту представлено в табл 6

Таблица 6

Распределение обследуемых мужчин по возрасту

Возраст (лет) 40-49 50-59 60-69 70-79 80 и > Всего

Кол-во больных абс (%) 46 (13,2%) 44 (12,6%) 126 (36,2%) 121 (34,8%) 11 (3,2%) 348 (100%)

Таким образом, большинство обследуемых (74,2%) находились в возрасте 60 лет и старше Анализируя полученные нами данные, можно отметить, что из 348 осмотренных мужчин уровень сывороточного простат-специфического антигена (ПСА) ниже 4 нг/мл отмечен лишь у 132 (37,9%) Подробные данные представлены в таблице 7

Как следует из представленной таблицы 7, у большинства осмотренных больных (67,2%) уровень ПСА находился в пределах менее 10 нг/мл.

У обследованных нами пациентов с уровнем ПСА менее 4 нг/мл выявлено отсутствие патологии ПЖ у 41 (31,1%), доброкачественная гиперплазия простаты (ДГПЖ) - у 34 (25,7%), простатит - у 23 (17,4%), сочетание ДГПЖ и простатита - у 33 (25,0%), рак ПЖ - у 1 (0,8%)

У обследуемых в группе с уровнем ПСА от 4 до 10 нг/мл выявлено отсутствие патологии ПЖ у 17 (16,7%), ДГПЖ - у 63 (61,8%), простатит - у 9 (8,8%), сочетание ДГПЖ и простатита - у 11 (11,7%), рак у 2 (1,9%)

Таблица 7

Распределение осмотренных пациентов по уровню простат-специфического антигена

Содержание ПСА в сыворотке крови (нг/мл) Количество осмотренных абс %

До 4 132 37,9%

4-10 102 29,3%

10-20 70 20,1%

20-30 12 3,4%

30-100 28 8,1%

> 100 4 1,2%

Всего 348 100%

В группе обследованных с уровнем ПСА от 10 до 20 нг/мл выявлено отсутствие паталогии ПЖ у 6 (8,6%), ДГПЖ у 33 (47,2%), простатит у 8 (11,4%), сочетание ДГПЖ и простатита у 18 (25,7%), рак выявлен у 7 (7,1%) Таким образом, с повышением уровня ПСА с 10 до 20 нг/мл выявляемость рака увеличивается по нашим данным с 1,9% до 7,1%

В группе с уровнем ПСА от 20 до 30 нг/мл отсутствие паталогии ПЖ у 1 (8,3%), ДГПЖ выявлена у 6 (40%), простатит у 1 (8,3%), ДГПЖ в сочетании с простатитом 2 (16,8%), рак у 4 (33,3%) пациентов

В группе обследованных нами мужчин с уровнем ПСА от 30 до 100 нг/мл диагноз был следующим ДГПЖ - 8 (28,5%), простатит - 1 (3,6%), ДГПЖ в сочетании с простатитом - 5 (17,9,%), рак - у 14 (50,0%) У 4 больных с уровнем ПСА более 100 нг/мл установлен диагноз рака предстательной железы у 3 (25,0%), ДГПЖ - у 1 (25,0%)

Полученные данные согласуются с литературными и свидетельствуют о высокой частоте выявления рака в группе с уровнем ПСА более 30 нг/мл Результаты, полученные в нашем исследовании, представлены в таблице 8

Таким образом, анализируя полученные результаты, мы не можем однозначно высказаться о высокой диагностической ценности ПСА как самостоятельном методе диагностики рака предстательной железы, так как в группе со значительно повышенным уровнем (более 20 нг/мл) у 17 пациентов из 32 (53,1%) при тщательном обследовании не было выявлено рака

При пальцевом ректальном исследовании подозрение на рак возникло у 27 (7,8%) осмотренных мужчин У 13 из них (48,1%) рак подтвержден морфологически В то же время у 16 из 29 пациентов, у которых был верифицирован рак ПЖ, при ректальном исследований подозрений выявлено не было (55,2%)

Таким образом, пальцевое ректальное исследование остается одним из основных методов диагностики различных заболеваний предстательной железы, в том числе рака, однако специфичность его составила в выявлении рака всего лишь 48,1%, а чувствительность 44,8%

Из 348 обследуемых нами мужчин данные трансректального ультразвукового исследования выявили изменения в предстательной железе, позволившие заподозрить наличие рака у 46 пациентов (13,2%), однако лишь у 23 из них (50,0%) диагноз был подтвержден морфологически В то же время, у 6 из 29 пацентов, больных раком ПЖ (20,1%) при трансректальном ультразвуковом исследовании (ТРУЗИ) подозрений на рак ПЖ выявлено не было

Таким образом, наши данные свидетельствуют о значительной "гипердиагностике" рака предстательной железы при ТРУЗИ, так как лишь у 1/3 пациентов диагноз подтверждается Это согласуется с мнением ряда авторов, которые считают, что ультразвуковая томография как самостоятельный метод, не может использоваться в скрининге рака предстательной железы из-за недостаточной специфичности [Chodak G W, 1989, Lee et al, 1989]

Таблица 8

Изменения предстательной железы, диагностированные у обследованных мужчин в зависимости от уровня ПСА

Уровень ПСА (нг/мл) Но рма дгпж Простатит ДГПЖ+Простатит Карцинома Всего

Абс % абс % абс % абс % абс %

До 4 41 31Д 34 5,7 23 17,4 33 25,0 1 0,8 132

4-10 17 6,7 63 61,8 9 8,8 11 11,7 2 1,9 102

10-20 6 8,6 33 47,2 8 1,4 18 25,7 5 7,1 70

20-30 1 8,3 4 3,3 1 8,3 2 16,8 4 33,3 12

30-100 - - 8 8,5 1 3,6 5 17,9 14 50,0 28

> 100 - - 1 25,0 - - - - 3 75,0 4

Итого 65 8,7 143 41,1 42 2,1 69 19,8 29 8,3 348

Таким образом, только сочетание трех методов - на сегодняшний день может служить клинически обоснованным скринингом рака ПЖ В то же время подобных программ в отношении рака МП не существует

В связи с этим именно иммуноцитохимические исследования могут служить дополнительным реальным объективным диагностическим методом для определения риска развития и прогноза течения опухолевого процесса, ассоциированного со старением в предстательной железе и мочевом пузыре

выводы

1 Опухоли предстательной железы и мочевого пузыря являются возраст-ассоциированными заболеваниями, так как, с одной стороны, они достоверно чаще встречаются в пожилом и старческом возрасте, а с другой - пожилой и старческой возраст является одним из значимых факторов риска их развития

2 Полученные данные свидетельствуют о достоверном снижении экспрессии хромогранина А и соматостатина в нейроэндокринных клетках предстательной железы человека с увеличением возраста Площадь экспрессии соматостатина и хромогранина А в препаратах доброкачественной гиперплазии предстательной железы достоверно выше, чем в препаратах контрольной группы

3 В раковых опухолях предстательной железы содержатся опухолевые нейроэндокринные клетки, ответственные за синтез хромогранина А и соматостатина Соматостатин и хромогранин А в большей степени экспрессируются в препаратах аденокарциномы, чем в препаратах доброкачественной гиперплазии предстательной железы

4 В регуляции роста опухолей предстательной железы активно участвуют хромогранин А и соматостатин, продуцируемые нейроэндокринными клетками через паракринные и аутокринные секреторные механизмы

5 У пациентов с первичным неоперированным раком мочевого пузыря средний уровень секреции ВТА повышался по сравнению с пациентами контрольной группы соответствующего возраста без онкологической паталогии мочевыводящей системы

6 Экспрессия иммуногистохимических маркеров была неодинаковой в карциномах мочевого пузыря различной степени дифференцировки Наиболее высокие показатели оптической плотности и площади экспрессии Кл-67 и антиапоптозного белка Мс1-1 были зарегистрированы в низкодифференцированных 02-3 опухолях, тогда как в них же отмечались наиболее низкие соответствующие показатели проапоптозного протеина р53

7 В высокодифференцированных 01 опухолях мочевого пузыря отмечалось ослабление экспрессии в опухолях Кь67 и Мс1-1 с одновременным усилением экспрессии фактора р53 Наиболее сильная

экспрессия соматостатина наблюдалась в клетках

высокодифференцированных карцином, при снижении

дифференцировки показатели экспрессии внутриопухолевого соматостатина снижались

8 Обнаружена достоверная отрицательная корреляция между уровнем секреции ВТА и показателями экспрессии Ю-67 в опухолях мочевого пузыря. Анализ уровня секреции ВТА выявил достоверную отрицательную корреляцию этого показателя с внутриопухолевым содержанием соматостатина у больных раком мочевого пузыря

9 Иммуноцитохимические исследования могут служить дополнительным реальным объективным диагностическим методом для определения риска развития и прогноза течения опухолевого процесса, ассоциированного со старением, в предстательной железе и мочевом пузыре

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1 Анализ секреции ВТА рекомендуется использовать для диагностики, оценки прогноза и эффективности лечения злокачественных опухолей мочевого пузыря

2 Для определения прогноза развития карцином мочевого пузыря и простаты рекомендуется при патогистологическом исследовании проводить иммуногистохимическое исследование для выявления экспрессии в опухолях соматостатина, хромогранина А, К.1-67, р53 и Мс1-1

Выражаю глубокую признательность профессору, доктору медицинских наук Кветному Игорю Моисеевичу за помощь в проведении иммуногистохгшических исследований и содействие в реализации работы

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1 Доксазозин в лечении артериальной гипертензии, сочетающейся с доброкачественной гиперплазией предстательной железы в пожилом возрасте/А Н Ильницкий, К И Прощаев, В В Сливкин, В В Люцко // Взаимодействие медицинской науки и практики Матер очно-заочн конф -Новополоцк,2007 -С 3

2 Малахов В Г Актуальные вопросы скрининга онкологической патологии предстательной железы и мочевого пузыря/В Г Малахов, НГ Репстий, В В Сливкин/ Актуальные вопросы современной медицины Сб тезисов и статей ХХХХ1 итоговой научно-практической конференции научно-педагогического состава Самарского военно-медицинского института -Самара -2008 С 111 -112

3 Мелатонин перспективы использования как нейроэндокринного маркера возраст-ассоциированнои и эколого-зависимой патологии/Т В Кветная, И М Кветной, В В Сливкин//Взаимодействие медицинской науки и практики Матер очно-заочн конф - Новополоцк, 2007 - С 8

4 О клинических и нейроиммунноэндокринных эффектах доксазозина в лечении доброкачественной гиперплазии предстательной железы в пожилом возрасте /АН Ильницкий, Прощаев К И, Филиппов С В , Люцко В В , Сливкин В В // Клин мед - 2008 №2 - С 64-69

5 Репетий НГ Нейроэндокринные клетки при аденокарциноме предстательной железы/Н Г Репетий, В В Сливкин, В Г Малахов // Актуальные вопросы современной медицины Сб тезисов и статей ХХХХ1 итоговой научно-практической конференции научно-педагогического состава Самарского военно-медицинского института -Самара -2008 С 107-109

6 Сливкин В В Нейроэндокринная дифференцировка опухолей предстательной железы и мочевого пузыря // Взаимодействие медицинской науки и практики Матер очно-заочн конф - Новополоцк, 2007 - С 21

7 Сливкин В В Иммуногистохимическая диагностика при раке мочевого пузыря/В В Сливкин, Н Г Репетий// Актуальные вопросы современной медицины Сб тезисов и статей ХХХХ1 итоговой научно-практической конференции научно-педагогического состава Самарского военно-медицинского института -Самара -2008 С 105- 107

8 Хроническая почечная недостаточность в пожилом и старческом возрасте /К И Прощаев, АН Ильницкий, ИВ Князькин, В В Сливкин// В кн Избранные лекции по гериатрии - С-Пб - Прайм-Еврознак - 2007 -С 331-368

9 Экстрапинеальный мелатонин роль и значение в регуляции гомеостаза/И М Кветной, С С Коновалов, В О Полякова, Т В Кветная, И В Князышн, В В Сливкин // Мелатонин итоги и перспективы исследований Тез докл Всероссийской конференции - Санкт-Петербург - 2008 - С 23-24

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВОЗ - Всемирная организация здравоохранения

ДГПЖ - доброкачественная гиперплазия предстательной железы

МАО - моноаминооксидаза

МП - мочевой пузырь

МТ - мелатонин

ПЖ - предстательная железа

ПСА - простат-специфический антиген

ТРУЗИ - трансректалыюе ультразвуковое исследование

ТУР - трансуректальная резекция

цАМФ - циклический аденозин-монофосфат

ВАТ - bladder tumor antigen (антиген, ассоциированный

с опухолями мочевого пузыря)

СЛИВКИН Валерий Владимирович НЕЙРОЭНДОКРИННАЯ ДИФФЕРЕН-ЦИРОВКА В ОПУХОЛЯХ ПРЕДСТАТЕЛЬНОЙ ЖЕЛЕЗЫ И МОЧЕВОГО ПУЗЫРЯ, АССОЦИИРОВАННЫХ СО СТАРЕНИЕМ// Автореф дис канд мед

наук 14 00 53 - СПб , 2007 - 23 с_

Подписано в печать 19 02 2008 Формат 60*84 1/16 Бумага офсетная Печать офсетная Печ л 1,0 _Тираж 100 экз Заказ _

Отпечатано с готового оригинал-макета ЗАО "Принт - Экспресс" 197101, С-Петербург, ул Большая Монетная, 5 лит А

Актуальность проблемы

В последние годы в промышленно развитых странах происходит неуклонное увеличение средней продолжительности жизни, а следовательно и прогрессирующее старение населения [Finch P.W., Kirkwood A.S., 2000], Средняя продолжительность жизни людей превысила 70 лет, а люди старше 60 лет составляют 15% всего населения. Однако в настоящее время большинство людей не достигает биологического предела продолжительности жизни, а период старости, как правило, связан со снижением активности и ухудшением здоровья.

Старение — закономерный процесс, возникающий вследствие многих причин, которые постепенно вызывают изменения во всех органах и тканях. Изучение механизмов, лежащих в основе регуляции важнейших гомеостати-ческих функций организма в процессе старения представляет собой одно из приоритетных направлений современной биологии и медицины [Хавинсон В.Х. и соавт., 2000]. В свою очередь, развитие концепции биологической регуляции [Хавинсон В.Х., Морозов В.Г., 2002] является приоритетным направлением современной геронтологии. Ведущую роль в процессах старения, развивающихся в мужском организме играют нарушения синтеза и секреции андрогенов, что приводит к снижению многих гормональных функций.

Опухоли предстательной железы и мочевого пузыря являются наиболее часто встречающимися заболеваниями мочеполовой системы у мужчин, ассоциированными со старением. Эти процессы являются следствием гиперплазии стромы предстательной железы и нарушения темпов пролиферации и обновления эпителия мочевого пузыря. Они встречаются у более 70% мужчин в возрасте 70 лет и старше. Заболеваемость раком предстательной железы и мочевого пузыря в пожилом и старческом возрасте за последние 10-15 лет постоянно возрастает и по скорости прироста эта патология занимает второе место после меланомы кожи. Среди причин смерти у мужчин раковые опухоли предстательной железы и мочевого пузыря занимают второе место после рака легких[Лопаткин Н.А., 1998; Лоран О.Б., Пушкарь Д.Ю., 1999]. По данным ВОЗ (2004), суммируя эпидемиологические и цитогенетические исследования, проведенные экспертами из 12 стран на общей когорте людей, насчитывающей 37000 пациентов различного возраста, можно выделить новообразования, преимущественно развивающиеся (более, чем у 78% обследованных) в возрасте старше55-60 лет. Эти опухоли представляют собой доброкачественную гиперплазию и карциному простаты, переходноклеточ-ный рак мочевого пузыря и солидный тип гепатоцеллюлярного рака. Моле-кулярно-биологические и генетические исследования позволяют предположить с большой долей вероятности в качестве пускового механизма их развития и прогрессии мутации определенных локусов хромосом и инволютив-ную перестройку тканей соответствующих органов. Эти опухоли принято в настоящее время рассматривать как новообразования, ассоциированные со старением [Доклад группы экспертов ВОЗ, 1233, Женева, 2004].

Современные методы исследования (электронная, микроскопия, гистохимия, иммуногистохимия и др.) позволяют более глубоко изучать механизмы старения клеток и тканей. Они дают возможность разработать новые не-инвазивные информативные методы диагностики опухолевых процессов, среди которых особенно важное место занимают биологические маркеры — сигнальные молекулы, синтезируемые в нейроэндокринных клетках предстательной железы и апудоцитах мочевого пузыря. В последние годы появились новые данные о роли локально синтезируемых гормонов в онкогенезе мужской мочеполовой системы[СЬе1Ге12 Б. а1., 2004].

В последние годы появились новые данные о роли нейроэндокринных (НЭ) клеток в онкогенезе предстательной железы [СЬе1£е1г Б. еЬ а1., 2004]. Однако функция НЭ клеток в простате все еще мало изучена. Полагают, что НЭ клетки необходимы для роста и дифференцирования, также как для регулирования гомеостаза секреторных процессов в зрелой предстательной железе. Противоречивы данные о том, что пропорция НЭ клеток увеличивается в предстательной железе при карциноме. Определяемые НЭ клетки в адено-карциноме являются трансформированными клетками и отличаются от нормальных НЭ клеток. Остается открытым вопрос о том, влияют ли нормальные, немалигнизированные НЭ клетки на канцерогенез в предстательной железе. Эти и другие вопросы функционирования и старения предстательной железы/гребуют дальнейшего изучения.

Учитывая низкую эффективность традиционной эндоскопической- диагностики изменений слизистой мочевого пузыря, высокую частоту рецидивов рака мочевого пузыря после трансуретральной резекции- разработка и внедрение в клиническую практику неинвазивных маркеров рака простаты и мочевого пузыря* позволяющих оценить прогноз развития опухолей этих органов! у больных пожилого и старческого возраста, являются актуальными и своевременными. Цель и задачи исследования

Целью диссертационного исследования? является изучение структурно-функциональной» организации нейроэндокринных клеток,. присутствующих в опухолях предстательной? железы» и мочевого пузыря человека, ассоциированных со старением; Для достижения поставленной цели будут поставлены и решены следующие задачи: к изучить структурно-функциональную организацию нейроэндокринных клеток предстательной железы и мочевого пузыря человека при старении;

2. верифицировать иммуноцитохимические фенотипы нейроэндокринных клеток в опухолях предстательной железы и мочевого пузыря у пациентов пожилого и старческого возраста;

3. определить < онкопрогностическую значимость экспрессии хромограни-на А и соматостатина,. продуцируемых нейроэндокринными клетками предстательной железы человека;

4. изучить экспрессию маркера пролиферации К1-67, проапоптозного фактора р53 и антиапоптозного фактора Мс1-1 при раке мочевого пузыря у больных пожилого и старческого возраста в зависимости от степени диффе-ренцировки опухоли.

5. определить уровень секреции антигена, ассоциированного с опухолями мочевого пузыря (ВТА) у больных пожилого и старческого возраста в зависимости от степени дифференцировки опухоли и оценить его значимость как биологического маркера для новообразований данной локализации.

6. оценить роль и значение ВАТ и иммуногистохимических маркеров в развитии, диагностике и оценке прогноза опухолей простаты: и мочевого пузыря^ ассоциированных со старением.

Научная новизна работы

Впервые детально изучена функциональная морфология нейроэндокринных клетокпредстательной железы и мочевого пузыря, присутствующих в опухолях указанных органов, ассоциированных со старением. Иммуноги-стохимически верифицированы гормональные фенотипы нейроэндокринных клеток, предстательной* железы и мочевого пузыря, как в нормальной, так И: опухолевой; ткани. Детально описаны изменения поведения нейроэндокринных клеток предстательной^ железы человека и мочевого пузыря при развитии, в них опухолевых процессов, ассоциированных со старением: Изучены изменения уровня секреции ВТА при опухолевых процессах мочевого пузыря и оценена значимость данного протеина как биологического маркера для новообразований данной локализации. Проанализирована, онкопрогностиче-ская1 значимость экспрессии различных гормонов, продуцируемых нейроэн-докринными клетками предстательной железы и мочевого пузыря:

Практическая значимость работы

Впервые установлена роль нейроэндокринных клеток и вырабатывает мых ими гормонов (хромогранина А и соматостатина) в развитии доброкачественной гиперплазиишаденокарциномы предстательной железы - опухолевых заболеваний, ассоциированных с возрастом.

Определение уровня экспрессии этих гормонов, необходимых для нормальной функции предстательной железы, является информативным тестом, который можно использовать с диагностической и прогностической целью при опухолях данного органа. Установлено, что усиление экспрессии хромо-гранина А является неблагоприятным фактором в прогностическом отношении указанных опухолей, в то время как усиление экспрессии соматостатина является положительным фактором прогноза.

Впервые показана зависимость изменения показателей секреции ВТА от степени дифференцировки переходноклеточного рака мочевого пузыря у больных пожилого и старческого возраста. Установлено наличие строгих корреляций между секрецией ВТА, степенью дифференцировки переходнок-леточных карцином мочевого пузыря и показателями экспрессии иммуноги-стохимических маркеров, отражающих пролиферативный потенциал опухоли и гибель клеток в форме апоптоза.

Высокая информативная ценность показателей секреции ВТА у больных раком мочевого пузыря и их корреляции с пролиферацией и апоптозом опухолевых клеток позволяет считать ВТА перспективным неинвазивным биологическим маркером диагностики и прогноза развития рака мочевого пузыря пациентов пожилого и старческого возраста.

Основные положения, выносимые на защиту

1. В процессе старения происходит изменение структурно-функциональной организации НЭ клеток предстательной железы.

2. Хромогранин А и соматостатин - гормоны, продуцируемые НЭ клетками, через паракринные и аутокринные секреторные механизмы участвуют в механизмах роста опухолей, предстательной железы, ассоциированных с возрастом. Нарушение синтеза и секреции гормонов в НЭ клетках способствует развитию доброкачественной гиперплазии и аденокарциномы предстательной железы.

3. Определение уровня экспрессии гормонов — хромогранина А и соматостатина является информативным тестом, который может быть использован с диагностической и прогностической целью при доброкачественной гиперплазии и аденокарциноме предстательной железы.

4. Показатели секреции ВТА строго коррелируют со степенью дифференци-ровки, пролиферацией и апоптозом переходноклеточных опухолей мочевого пузыря у больных пожилого и старческого возраста.

5. Анализ секреции ВТА позволяет оценить прогноз и эффективность лечения рака мочевого пузыря в каждом конкретном случае и на любом этапе наблюдения.

Апробация и реализация результатов исследования

Материалы, диссертации доложены, на совместном заседании отдела клеточной биологии и патологии и отдела клинической геронтологии Санкт-Петербургского института биорегуляции и геронтологии СЗО РАМН, межкафедральном заседании кафедр хирургии; военно-полевой терапии и военно-полевой хирургии Самарского военно-медицинского института,, на 41-й итоговой научно-практической конференции научно-педагогичекого состава Самарского военно-медицинского института, конференции« «Взаимодействие медицинской, науки и практики», Новополоцк, 2007.

Результаты исследований используются в научно-педагогической и практической деятельности Санкт-Петербургского института биорегуляции и геронтологии СЗО РАМН и Самарского военно-медицинского института МОг РФ*

Публикации

По материалам диссертации опубликовано 9 работ, в том, числе 1 статья в журнале по перечню ВАК РФ, 1 глава в монографии, 7 тезисов.

Связь с научно-исследовательской работой Института

Диссертационная работа является научной темой, выполняемой по основному плану НИР Самарского военно-медицинского института и Санкт-Петербургского института биорегуляции и геронтологии СЗО РАМН.

Структура и объем диссертации

Диссертация состоит из введения, обзора литературы, главы, посвященной описанию материалов и методов обследования больных, 3 глав результатов собственных исследований и их обсуждения, заключения, выводов, практических рекомендаций и списка использованной литературы. Работа изложена на 131 странице машинописного текста, содержит 16 таблиц, 14 рисунков. Список использованной литературы включает 19 отечественных и 212 зарубежных источников.

выводы

1. Опухоли предстательной железы и мочевого пузыря являются возраст-ассоциированными заболеваниями, так как, с одной стороны, они достоверно чаще встречаются в пожилом и старческом возрасте, а с другой — пожилой и старческой возраст является одним из значимых факторов риска их развития.

2. Полученные данные свидетельствуют о достоверном снижении экспрессии хромогранина А и соматостатина в нейроэндокринных клетках предстательной железы человека с увеличением возраста. Площадь экспрессии соматостатина и хромогранина А в препаратах доброкачественной гиперплазии предстательной железы достоверно выше, чем в препаратах контрольной группы.

3. В раковых опухолях предстательной железы содержатся опухолевые нейроэндокринные ьслетки, ответственные за синтез хромогранина А и соматостатина. Соматостатин и хромогранин А в большей степени экспрес-сируются в препаратах аденокарциномы, чем в препаратах доброкачественной гиперплазии предстательной железы.

4. В регуляции роста опухолей предстательной железы активно участвуют хромогранин А и соматостатин, продуцируемые нейроэндокринными клетками через паракринные и аутокринные секреторные механизмы.

5. У пациентов с первичным неоперированным раком мочевого пузыря средний уровень секреции ВТА повышался по сравнению с пациентами контрольной группы соответствующего возраста без онкологической патало-гии мочевыводящей системы.

6. Экспрессия иммуногистохимических маркеров была неодинаковой в карциномах мочевого пузыря различной степени дифференцировки. Наиболее высокие показатели оптической плотности и площади экспрессии Кл-67 и антиапоптозного белка Мс1-1 были зарегистрированы в низкодиффе-ренцированных 02-3 опухолях, тогда как в них же отмечались наиболее низкие соответствующие показатели проапоптозного протеина р53.

7. В высокодифференцированных 01 опухолях мочевого пузыря отмечалось ослабление экспрессии в опухолях К1-67 и Мс1-1 с одновременным усилением экспрессии фактора р53. Наиболее сильная экспрессия сома-тостатина наблюдалась в клетках высокодифференцированных 01 карцином, при снижении дифференцировки показатели экспрессии внутриопухолевого соматостатина снижались.

8. Обнаружена достоверная отрицательная корреляция между уровнем секреции ВТА и показателями экспрессии Кл-67 в опухолях мочевого пузыря. Анализ уровня секреции ВТА выявил достоверную отрицательную корреляцию этого показателя с внутриопухолевым содержанием соматостатина у больных раком мочевого пузыря.

9. Иммуноцитохимические исследования могут служить дополнительным реальным объективным диагностическим методом для определения риска развития и прогноза течения опухолевого процесса, ассоциированного со старением, в предстательной железе и мочевом пузыре.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Анализ секреции ВТА рекомендуется использовать для диагностики, оценки прогноза и эффективности лечения злокачественных опухолей мочевого пузыря.

2. Для определения прогноза развития карцином мочевого пузыря и простаты рекомендуется при патогистологическом исследовании проводить им-муногистохимическое исследование для выявления экспрессии в опухолях соматостатина, хромогранина А, Кл-67, р53 и Мс1-1.