Автореферат и диссертация по медицине (14.00.14) на тему:Некоторые патофизиологические механизмы коканцерогенного действия хронической гриппозной инфекции и новые экспериментальные подходы к его профилактике

АКАДЕМИЯ НАУК УКРАШ ,

ИНСШУТ ЗКОПВРИМВНТАЛЫШ ПАТОЛОГИИ, ОНКОЛОГИИ И РАДИОШОЛОГИИ им. Р.В.КАБВЦКОГО

На правах рукописи

• О Р Л О В С К И И . А 1В К С В Я А Р К А Д ЬВ В ИЧ

УДК 616-006:616.921.5-084

НВКОТОРЫВ ПАТОШШОШВОИВ МКХШШЫ КОКШИРОГВННОГО ДЕЙСТВИЯ ХРОШНВСКОЛ ГРИППОЗНОЙ ИШЫЩИ И НОВЬВ ЭКОТВ-, РИШТАДЬШВ ПОДХОДЫ К ВГО ПРО*]£[АШКВ

14.00.1* - ОНКОЛОГИЯ

А В Т О Р В Ф В Р А Т

диоовргации на ооиокание ученой степени кандидата биохогичеоких наук

К И В В - I 9 9 2

Работа выполнена в Йнатитутв экспериментальной патологии, онкологии и радиобиологии им. Р.Е.Кавецкого АН Украины

Научные руководители:

доктор медицинских наук В.И.СГРУК

доктор медициноких наук З.Д.САВЦОВА

Официальные оппоненты:

доктор биологических Наук Ю.П.Шмалько

доктор медицинских наук A.M.Щербинокая

Ведущее учреждение • НИИ онкологии Томского научного центра. РАМН

Защита диссертации состоится 1992 г.

в 13 чаоов 30 минут на заседании специализированного совета , Д 016.38.01 по защите диссертаций на соискание ученой степени доктора наук в институте эквпериментальной патоло—ш, онкологии и радиобиологии им. Р.Е.Кагввцкого АН Украины (252022, Киев-22, ул. Васильковокая, 45).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке института Автореферат разослан '.'■ '■';■>- ' .."."• ; 1992 г.

Ученый секретарь специализированного совета кандидат биологических наук

Ю.Б.Яниш

Актуальность проблемы. Проблема коканцерогенного действия гриппозной инфекции доотаточно отара. Первые экспериментальные работы по атому вопросу появились еще в 30-е годы, почти сразу же пооле изоляции вируоа гриппа (В.Г.Гаршин, 1939; Л.М.Шабад, 1938). В настоящее время известно, что необходимым условием коканцерогенного аффекта являетоя пролонгированная или хроническая инфекция (А.Ф.Фролов, 1973; В.И.Струк и др.,1987). извеотно также, что вирусы гриппа способны вызывать различные варианты пзроистентных инфекций как в культурах клеток, так и м у животных и человека (В.и.Гаврилов,1970; В.А.Зуев,1У7Э,1988; О.Г.Анджапаридзе, 1984; А.М.Щербинокая,1984;,В.И.Сгрук и др. ,1987, и др.). Стимуляцию опу-холеобразования при гриппозной инфекции объясняли, как правило, тремя факторами: возникновением хроничеокого воопаления, цитопро-лиферативным действием вируоа гриппа и нарушедаем иммунного над-эора (А.И.Абрикооов,1947; С.С.ВаИль,1957; Н.П.Корнюшенко и др., 1977; 3,Д.Савцова и др»,19£Й, и др.). Однако гипотезы такого рода объясняли,не вое наблюдаемые факты. Вместе о тем, показано, что хронические заболевания органов дыхания приводят к глубоким нейро-вегетативным перестройкам (Ф. Г.Углов, 1976; №. Ю.Алекоеев и др. ,1984).

Пооледниэ жэ, в свете имеющиеся данных (О.В.Волкова.1978; И.П.Те-рещенко.А.П.Кащулина,1983; К.П.Балицкий и др. ,1978Д987Л991,и др.)

не могут не отразиться на процессах диффервнцировки клеток органов дыхания и> в частности, на их злокачественной трансформации. Вместе о тем, роль нарвно-трофичеаких нарушений в отимуляции опухо-леобразования при гриппозной инфекции остается совершенно не изученной. Поэтому цэльв настоящей работы было:

выявить основные звенья нейровегетативной регуляции трофичеог ких функций пермиосйвных и непермиосивных для вируса гриппа висцеральных органов, нарушением которых при гриппозной инфекции опосредуется коканцерогенный о^ект последней.

Для достижения поставленной цели мы очитали необходимым решить следующие задачи:

1) исследовать возможность нервно-трофической регуляции репродукции вируоа гриппа в легких у животных;

2) выявить основные закономерности трофичеоких перестроек в пермиссивных и непермиосивных для вируоа гриппа висцеральных органах организма-хозяина при острой и хроничвокой гриппозной инфекции;

3) выяснить, какая именно стадия хроничеокой гриппозной инфек-

-.г-

ции являегоя определяющей в формировании опухолевой диспозиции зараженного организме; . ;

4) разработать и проверить в эксперименте патогенетический подход к профилактике коканцерогенного действия хронической гриппозной инфекции путем купирования нервно-трофичвоких нарушений, выявленных при решении задач 2 и 3.

Работа выполнена в соответствии о планом НИР Института экспериментальной патологии, онкологии и радиобиологии им.Р.К.Кавецкого АН Украины (бывш. Института проблем онкологии им.Р.В.Кавецкого АН У'ХР): ;

тема "Установить степень зависимости спонтанных и индуцированных химическими канцерогенами опухолей экспериментальных животных от характера инфекции, вызванной различными штаммами вируоа гриппа, с целью выяснения механизмов вирус-химичеокого коканцерогенэза", № госрегистрации 790ИСЭ, шифр 00.69.02.С».01.Н2; •

тема "Изучить механизмы вирусного коканцэрогенеэа", К гооре-гистрации 01824029469, шифр .07.69.02.01.02.Н1,

Тема работы утверждена Ученым советом ИЭПОР им.Р.В.Кавецкого АН Украины (бывш. ИПО им.Р.В.Кавецкого АН У (ЯР) 22 ирня 1983 года (протокол й 15).

Научная новизна и практическая значимость работы. Основным итогом выполнения работы является выяснение фундаментальных патофизиологических закономерностей возникновения коканцерогенного эффекта гриппозной инфекции (ГИ):

- впервые показано, что репродукция вируса гриппа поддается нервной регуляции, в частности, .получено полное подавление репродукции вируса гриппа у мышей при использовании специально разработанной схемы лазероакупунктуры;

- впервые показано, что необходимым патофизиологическим механизмом коканцерогенного действия ГИ являются некродиотро^ические изменения висцеральных органов, обусловленные формированием порочного круга в системе М-холинергической парасимпатической иннервации последних при хроничеокой гриппозной пневмонии, установлена зависимость между уровнем чувствительности животных различных ин-бредных линии к коканцерогенному действию ГИ и динамикой трофических перестроек в их висцеральных органах в течение хронической ГИ;

- впервые^показано, что развитие тропических перестроек в висцеральных органах при острой и хронической ГИ носит в основном неспецифичеокии характер и подчиняется закону оптимума и пессимума

"уГ

оилы раздражения, открытому Н.Е. Введенским; при острой ГИ характер трофичеоких перестроек определяется в первую очередь концентрацией внеклеточных вирусных частиц в крови и межклеточной жидкости, при хронической - нэйрорефлекторными влияниями с легких.

Работа носит экспериментально-теоретический характер. Тем не менее, выявление нейромедиаторнои специфичности коканцерогенного действия ГИ дзет реальное основание для целенаправленного подбора мягких немедикаментозных методов (в первую очередь методов рефлексотерапии), пригодных для профилактики коканцерогенных аффектов в клиничеокой пульмонологии. Кроме того, в процессе выполнения работы разработан ряд новых методов экспериментального исследования.которые внедрены в ИЗПОР им.Р.В.КавецйОго АН Украины и могут найти широкое применение в практике медико-биологических лаборатории различного профиля.

По теме диссертации опубликовано 15 научных работ, в том числе 3 отатьи в межведомственных сборниках, II статей в журналах и I монография.'

Апробация работы, Основные положения работы были представлены на конференциях молодых ученых и отчетных научных конференциях Института экспериментальной патологии, онкологии и радиобиологии им.Р.В.Каввцкога АН Украины (бывш, Института проблем онкологии им. Р.Б.Кавецкого АН УССР) (КиевЛ981,1903,1985), заседаниях Киевского городского научного общеотва патофизиологов (Киев, 1985,1990), Всесоюзной конференции "Новые метода морфологического иоалвдо1__ния в теоретической и практической онкологии" (Тбилиси, 1983), Всесоюзном семинаре по электронной микроскопии (Тернополь,1985), симпозиуме МАИР "Роль канцерогенов и промоторов в экспериментальном канцерогенезе и развитии опухолей у человека" (Будапешт,1983), 4-м Всесоюзном съезде онкологов (Ленинград, 1986), Европейском конгрессе виру-оологов (Берлин,1990), XXIII Всемирном конгрессе по альтернативной медицине (Москва, 1991). В последнем случае, за исследования по рефлексотерапии ГИ, автору Советом директоров международной медицинской ассоциации "Medicina kttexnHii/* )nieinai¡e»«f . " и Открытого международного у ниве роите та комплементарной медицины присуждена почетная ученая степень ^»det о/ Sa'e»ct » и вручен соответствующий диплом. •

Работа была апробирована 07 мая 199?г на заседании экспертного оовета Института экспериментальной патологии, онкологии и радиобиологии им. Р.В.лавэцкого АН Украины.

т ч - -

Структура и объем диссертации.Работа изложена на 87 отр. машинописного текста, ооотоиг и? введения, обзора литературы, главы материалов и методов и Ц глав собственных исследований/заключения, выводов. Работа иллоотртрована 13 таблицами и 2 риоунками. Библиографический указатель включает ПО источников на руоском и иностранных языках.

Автор выражает благодарность за проведете совместных экспериментов и обсуждение результатов к.м.н. В.М.Андрианову, д.б.н. А.Л.Воронцовой, И^М.Воейковой, к.м.н. Л.Н.Горбаню, к.б.н.Ю.И.Куд-рявцу, к.б.н. А.П.Кузьменко, д.м.н.,проф. В.С.Мооиенко, к.б.н. Н.Л.Новиченко, академику АН Украины В.Г.Пинчуку, д.м.н. З.Д.Сав-цовой, к.м.н. М.И.Смелковой* д.м.н. В.И.Струку, к.б.н. И.Н.Тодо-ру, академику АН Украины В.З.Фролькису, В.А.Хмаре, к.м.н. И.Н.Шевченко, д.м.н. В.А.Шляховенко, к.м.н. В.М.Юдину, к..б.н. О.В.!Одк-ной.

- ir- •

Основные положения,, выносимые на защиту.

1. Для проявления коканцерогенного действия ГИ принципиально важное значение имевт нейродистроЗические перестройки висцеральных органов хозяина.

2. Тропические переотройки в висцеральных органах организма-хозяина, возникающие под влиянием острой й хронической ГИ, носяг-нэспецифический характер и подчиняются закону оптимума и пессиму--ма силы раздражения.

3. Компонента нейродиотрофичеоких реакций, ответственная за , коканцерогенное действие хронической ГИ, является М-холидаргиче-

окой и организована по принципу порочного круга. Прерывание такого* порочного круга приводит к устранению коканцерогенного действия хронической ГИ.

4. Решающее значение для формирования опухолевой диспозиции организма, при хронической ГИ имеет стадия вторичного усиления репродукции вируса гриппа. '

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Все оригинальные методические моменты, имеющие принципиальное значение для аранжировки собственных экспериментов, включены в описание соответствующих опытов. В данном разделе указаны лишь широко известные базовые методы.

Эксперименты проводили на мышах линий CC57U/, üjffi/j ,ВаЬв/о и C57BL/6. Эффективное число животных составило Й90.

В работе использована аллантоисная культура вируса гриппа ; А/РК/8/31» о исходным инфекционным титром 10 ' - I09' ЭИД^о/0,2 мл.

Титрование вируооодержаиих материалов выполняли, заражая 10-дневные куриные эмбрионы в аллантоионую полость серийными разведениями материала о коэффициентом 10. При титровании нестерильных материалов разведения готов т о добавлением канамицина или моно-ницина в концентрации 1000ед/мл. Титр вычисляли по методу Рида и Менча.

• Инотилляцию вируса мышам производили интраназально под легким эфирным наркозом, приготовляя разведения аллантоисной культуры вируса на изотоническом растворе хлорида натрия о добавлением антибиотиков (см.предыдущий пункт), что давало возможность предотвратить бактериальное заражении легких носо лоточными смывами.

' Очистку вируса гриппа осуществляли цонтрифугированием в линейном градиенте плотности сахарозы (20 - 60 %W/V ), приготовлен-

ном на фосфатном буфере, при 25 ООО .об/мин в роторе 5^-28 Буя'и^Р .

Ввделение микродомальных фракций для измерения продукции ион-радикалов супероксидз осуществляли стандартным методом дифференциального г атрибутирования, постмитохондриальный суперна-тэнт центрифуглровали 90 минут при 100 000^.

Выделение микросомальных фракции для определения инфакционно-

проводили низкоскоростным коагуляционным методом Катя£к (1971).

Измерение продукции супероксидных радикалов микрооомами производили спекгрофотометрическим адренохромовым методом (В.В.Ляхович, В.М.Мишин, А.Г.Покровокий, 1977).

Регистрацию опактров электронного парамагнитного резонанса выполняли на радиоспектрометре РЭ-1307 (СССР) при температуре жидкого азота и стандартных для исследования легких и печени параметрах магнитных полек (Я.И.Ажипа,1&8Э). ■

Гекоеналовую пробу осуществляли по модифицированной методике, подробно описанной в монографии В.И.Струка и др. (1987).

■ Определение экспрессии белка рЗО эндогенных ретро виру сов мышей проводили методом конкурентного радиоиммунного анализ в системе ^^1-рЗОМиI*V-анти-рЗОМиI*V (З.Д.Савцова,Ш1).

Радиоавтографические исследования выполняли общепринятым методом (0.И.Епифанова,в.в.Терских, 1977 ).

Гистологические исследования выполняли на стандартных гематоксилин- зоз и новых препаратах. Диагностика выполнена к.м.н.И.Н.Шевчен-ко и к.м.н.М.И.СмелковоЬ.

Ультра структурные исследования выполнены совместно с к.м.н. В.М.Андриановым на электронном микроскопе }ГВМ-100В (Япония). Основную массу препаратов контрастировали по методу Рейнольдса. Для изучения липо- или гликопротеидных компонентов мемб{ан, гликокалик-Ьа и сурфактанта применяли фиксацию в присутствии, соответственно, хлористого лантана или рутениевого красного.

Ингаляция мышей металлооодерасацим аэрозолем (2В08Х20НГ7Т в затравочных камерах Киевского института гигиены труда и профзаболеваний МЗ УССР проводили в течение 2 недель по 4 часа в день при концентрации аэрозоля в камере ¡3 мг/м^.

Статистическую обработку результатов проводили по методу . Стьодента или(в случае дискретных величин) по методу Вилкокоона--Манн-Уитни.

- 7 -

СОБСТВЕННЕЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

Для решения первой задачи бил предпринят следующий опыт. Мышей линии СС57^, зараженных вирусом А/Рй/8/34 в дозе Ю2ЗИД50 на м&шь, подвергали лазероакупунктурному воздействию по двум схемам на разных отадиях репродуктивного цикла вируса. При воздействии на рефлексогенные зоны легких на фоне актиномицин-Д-зависимои стадии (через 2 часа после заражения) отмечено полное подавление репродукции вируса. Это, видимо, обусловлено тем, что, как известно, именно на этой стадии в синтез вирусных белков включаются связанные полисомы. Значительно менее чувствительном к рефлексотерапии оказалась стадия ранних вирусных белков, синтезируемых на овободных полиоомах (30 минут после заражения). При воздействии на . более поздних стадиях и/или по другой схеме (воздействие на рефлексогенные, зоны тимуса и гипоталамуса) подавление репродукции не . отмечалось. Однако и в этих случаях все же наблюдалась устойчивая иммунокоррекция и коррекция электрического потенциала точек акупунктуры. Таким образом, было показано, что как функциональные проявления ГИ, так и самая репродукция вируоа поддаются неиророф-. локторнои регуляции.

В отношении тропических сдвигов в органах хозяина выяснилось следующее (таблица I). йо результатам измерении на интактных мышах четырех линии были вычислены оредневидовые нормы длительности такса налового наркоза (26,3 + 2,3 мии), адреналиноксидазнои активности микрооом легких (20,0 + 1,5 нМ адренохрома на I мг белка мик-росом в мицуту) и печени (33,7 + 3,7 тех же единиц), содержания белка рЗО эндогенных ретровирусов мышей в ткани легких (0,51+0,14 мкг рЗО на грамм сырого веса ткани) и селезенки (2,73+0,79 тех же единиц). У мышей С57В1, при острой ГИ .достоверные сдвиги этих параметров отсутствовали. У мышей линий СС57^, ВаЬв/с и СЗН в тех случаях, когда исходный уровень параметра был не ниже средневидо-вой нормы, на пике виремии наблюдалось его снижение. Коли же исходный 'уровень был ниже нормы, то на пике виремии он возрастал. При этом, хотя инфекционные титры микросомальной фракции легких оказались практически одинаковыми у всех четырех линий животных, титры экотрактов межклеточного вещества легких и титры цитратной крови у мышей С57В1, были значительно ниже, чем у остальных трех линий.

После этого стало очевидно, что наблюдаемые метаболические сдвиги носят характер неспзцифического ответа клеток на внешний раздражитель и подчиняются закону оптимума и песоимума силы раздражения. В качестве раздражителя, видимо, выступают внеклеточные

Та^пиа 1.

Влияние острой гриппозной инфекции на активность субклеточных • Лучки» она льнах систем

в различных органах мышей, К +гй ''

..! Доза ви- !. Линия 1 руса !_ ! гппппа !"

с30 иг/иг ткачи

—:—■■ - — I-----

ШНТЗНСИВНООТЬ продукции. 0? .ШрО 'ЛЧИТЗ ЛЕНОСТЬ 'нМ/мг бе яка х мин ¡гг;;., валового

■ГЙЭМДдд • легкие ! селезёнка •

легкие

со

1

С^ВБ. Контроль, Ю3'5

3 ГО4'0

\ - В/о

-57 Ч

йрзднзвидо--¿ая норма

1,0'» ар,2

0,09+0,01 0,25+0,07*

0,06+0,00? О,ЮЛ, 01* ;

1,20+0,1 :

0,70+0,1*

0,60+0,3

1,48+0,1 . 1,46>,1***

0,32+0,1 2,40+0,2* '

?,40+0,2 Г, 20+0,03*

. 4,00+0,2 1,50+0,13*

2,17+0,69

24,6 28,8

32,5 22,0

10,2 . 14,5

26,5 17,5

23,5-±4,73

печень

¡наркоза , мин

49,й 44,с

70,0 54,0

31,3 61,3

30,9 59,0

45,4+5,28

15,1+0,7 20,2+0,5*** Р =0,14 35,'»¿Г., О • 34,4+2,2 Р > 0,1, 19,0+2,0. 25,5+2,0

Р =0Т002

29,6+0,6 23,3+0,5

?<оТоо1

26,.15+4-, 26

Примечание ^

* - Р < 0,05 •; ** - ?. = 0,05 ; _ 0 > 0>0~

Приведены значения средневидовых норм, полученные в данной серии опытов. Окончательные значения,

уточненные в последующих экспериментах, даны в текоте. .

вируоные частицы, нэйраминидаза которых, отщепляя от клвточн"х мембран отрицательно заряженные остатки опаловых кислот, гипврпо-ляризует мембрану. Однако предположение о роли внеклеточных вир"с-ных частиц - слишком серьезно, чтобы его м<шад было принять без прямого доказательства.

Поэтому был поставлен проверочный опыт. Мышам Ва1в/о вводили неперкиссивным путам (в/б) возраставшие дозы *лтиЛ«»вируса гриппа и. после этого измеряли длительность гексеналового наркоза. Сказалось (таблица 2), что, начиная о определенного уровня, дальнейшее увеличение, дозы вируса приводит сначала к снижении индукции, а затем и к угнетении детоксицирувщих ферментов пэчани, что соответствует закону оптимума и пессимуиа силы раздражения. 1зм сс-лым проверяемое предположение было доказано.

Совершенно аналогичная связь между исходным уровнем экспрессии клеточных белков, ее изменениями у зараженных животных и величиной оредневидовой нормы была обнаружена при хронической и Секции. Однако здесь виремия отсутствует, и поэтому внеклеточные вирусныг. материал не может быть Закгорон, вызываюким наблюдаемые изменения. Поскольку было уже. известно (Ю.И.Кудрявец и др.,1Г37>, что подобные эффекты может вызывать интерферон, первоначально предположили, что причина сдвигов, наблюдаемых при хронической ГИ, состоит в индукции интер$ерона. . ! Эту. гипотезу пришлось отворить, т.к. у мышей о хронической ГИ в наших опытах не были выявлены достоверно определимые титры интерферона в сыворотке крови.

Вместе с тем, в тот же период.нами была р^работана методика (В.И.Струк и др. ,1937) применения гексеналовой пробы для определения соотношения активности симпатического и парас. мпатйческого отделов вегетативной нервной системы. С помощьо этой методики было установлено, что для животных с острой ГИ пооле развития пневмонии, с хронической ГИ, 9 также о макроскопическим-* мртастазами карциномы Льюис в легки?, характерен относительный гипертгус пара-оимпатикуоа. Одновременно были обнаружены (Ю.И.Кудрявец и др,1937; А.а.Орловский н др., 1939) метаболические сдвиги нервно-трофического характера в печени при первичном и сетастатичеоком опухолевом росте в легких. На основании этих данных была сформулирована сле-дупдая гипотетическая схема.

При хронической гриппозной пневмонии происходит длительная гиперстимуляция ирритантных рецепторов легких. Ве результатом является синаптическое прерывание на афферентных парасимпатических путях и функциональная деээдерентация высших структур," отвечающих

Тайлииа 2. ■

Длительность гексеналового наркоза у мкшей ВА1»В/с пни нчпериис'сивнои-введении вируса гриппа. . .

Номер ! rpvnnb! 1 1 Доза вируса,SHIçq I звэдение ! . II звэдение ! Продол?л1тэльность ! ! наркоза , мин ! ! Р

I ТО5'5 15,0+1.0 <0,02

II ю6 I06'5. • 13,3+3,3, ' <£С,02

III I06'5 ю7 38,t+M -С С,05

Контроль *• 28,3+2,0 •

контроль активности парасимпатикуса. Эти структуры приходят ч тормозное состояние и не могут осуществлять адекватный тормозный контроль над нижележащими центрами эфферентной парасимпатической активнооти - в первую очередь, дорзальным ядром вагуса. Гиперак-тивнооть парасимпатических зфферентов приводит к обструкции бронхов и ателектазу, усиливая тем самым воспалительный процесс в легких, что ведет вновь к гиперотимуаяции ирритантных рецепторов и т.д., порочный круг замыкается. Одновременно гиперактивность парасимпатических эфферэнтов ведет к функциональному перенапряжению клеток паренхимы висцеральных органов. Следует отнепи'Ь, что уль-траотруктурные признаки такого перенапряжения были обнаружены нами в паренхиме печени и в еще большей степени - в альвеолярном эпителии мышей о хронической ГИ. Золи такое перенапряжение достаточно велико и длительно, то оно приведет к орыву клеточных компенсаторных механизмов, диодифференцировке клеток и к облегчению их злокачественной трансформации.

Если эта гипотеза справедлива, то прерывание порочного круг:, (например, введением небольших доз периферических холиноблокаторов) должно привести к резкому онижению коканцер генного э:;фекга. В силу длительности изучаемого процесса, очевидно, что профилактические 'воздействия следует проводить лишь на ключевых стадиях паз-вития хронической ГИ. Для выявления таких стадий, в свою очередь, следовало решить задачу 3 настоящей работы.

- Ш основании имеющихоя литературных и собственных дгнных мы предположили, что решающую роль в формировании опухолевой диспозиции может играть стадия вторичного усиления репродукции вируса гриппа, наблюдаемая у мышей чарез 5 - б месяцев после заражения.

Это предположение нуждалось в прямой проверке.

Для этого мышам Ва1в/с вводили ингаляционным путем'электросварочный аэрозоль о доказанной ранее (В.И.Струк л д^.,1985) ко-канцерогенной активностью. Одна.из групп животных получала этот аэрозоль непосредственно перед началом стадии вторичного усиления, другая - оразу же после ее окончания. Естественно, для второй из этих групп промежуток времени от окончания ингаляции до забоя был значительно меньше. Кроме того, у этих животных лучше происходила элиминация пылевых частиц из легких. Гак что оуммарная. экспозиция легких к частицам аэрозоля у второй группы была примерно в 3,э раза меньше, чем у первой. Однако стимуляция опухолеобразования в

легких (35,45? и 32,1% животных о опухолями, соответственно), по рачнению о контролями вируса, азрозоля и интактным (24,3#; 15,7$ и 15,7%, соогрчтсгвэнно), у обеих групп окаэалаоь практически одинаковой. То есть чувствительность к дополнительному коканцероген-ному фактору у мышей, прошедших стадию вторичного уселения, более ч*м втрое превосходила таковую у мышей, не прошедших ату стадию. Тем самым бы~э доказана решающая роль стадии вторичного усиления в формировании опухолевой диспозиции зараженного организма.

Итак, вопрос о срках введения холиноблокаторов был решен. В следующем опыте, завершающем настоящее исследование, мышам-самкам линии СЗН о хронической ГИ проводили 2 курса по б инъекций малых дез К-холиноблокатора - ганглерона (5 мг/кг на инъекцию) или М-хс яиноблокатора - атропина (0,1 мг/кг на инъекцию). Первый курс проводили через 1,5 меояца после заражения (на стадии формирования хронической ГИ), второй - через 4,5 месяца после заражения (перед началом отадии вторичного усиления). Параллельно исследовали 4 контрольных группы - контроли интактный (группа б), вируса (группа 5), ганглерона (группа 4) и атропина (группа 3). Выб>,р линии и пола животных обеспечивал возможность регистрировать выход опухолей не только пер. ¡иссивного для вируса гриппа органа - легкйх, но и непер7 МИСС1ИВН1Г0 - молочной тэлеэи.

Как видно из таблицы 3, по влиянию'на образование опухолей обеих локализаций атропин и ГИ оказались совершенными антагониота-. ми. Атропин полностью устранил (группа I) стимуляцию эпителиальных опухолей легких, вызванную ГИ; в свою очередь, ГИ, не вызвав оама по се<э достоверного изменения выхода опухолей молочной железы, полностью устранила резкое повышение выхода таких опухолей, отмеченное в контроле атропина. В груша 2 о сочетанным действием ГИ и ганглерона подобный антагонизм на наблюдался. Т«м самым была установлена 1»-холинергичеокая природа нервно-трофичеокои компоненты коганцерогенного действия ГИ и доказана возможность полного устрапения такого ее действия путем разрыва порочного круга парасимпатической иннерваг'и.

' 'Таблица Î

Buxof морфологических изменений в легких й fil мышеЯ с хронической гриппозной . инйекиией под воздеГ-;гаием голиноблокаторов, %

$ группы Без измене; ний Î Воспалительные. '. 'реакции Злокачественные (по г^сто. on- -зским коптер!!ЯМ4! опухоли

01 ! ' ! Offi б месяцев ! ' . .8 месяцев

б ■ IOO 0 0 II 33

32 32 36 17 37

4 33 5Z Г5 ■ 37 47

29 68 3 41 . 54

2. 0 67 33 26 45

X ' 27 68 5 II ' 22

Примечание .Опухоли легких у животных, получавших атропин (группы1 и 3) относились к совдянительноткашпм и мезенхимзльным гистологическим типам, тогда как во всех остальных группах отмечались лишь эпителиальные опухоли легхих.

•о-

ВЫВОДЫ

1. Репродукция вируоа гриппа, подобно ооазтвенныи биооин-тегическим процеосам клетки-хозяина, поддается нейровагетагив-нои регуляции.

2. Решающее значение длч формирования опухолевой диспозиции органчзма-хозяина при хронической гриппозной инфекции имеет отадия вторичного усиления репродукции вируса гриппа, наблюдаемая у мышей о хронической инфекцией через 5 - 6 месяцев после заражения.

3. Влияние хронической гриппозной инфекции на малвгнизацию клетох легких у животных опосредовано М-холинергическими про-•¡эооами и носит, в основном, нэспецифичаокий характер.

4. Нейрорефлвкторная компонента коканцврогенного двйотвия хронической гриппозной инфекции организована по типу порочного круга, специфическое прерывание которого М-холинобяокатором приводит к устранению коканцврогенного аффекта.

-15-

СТ1ИС0К РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

А

1. Роль взаимодействия онковипуоов о инфекционными вирусами и химическими ктшерогенами в развитии экспериментальны" .опухолей// Вирусы пака и лейкоза.-М.,1980.- С.92-96 / соавт. В.И.Стп«к, Е.П.Сипорик, З.Д.Савнова, О.Ю.Дениоенко, о.р.Мельников, Ю.П.Гри-невин, С.Д.Шербан.

2. Некоторые подходы к изучению взаимодействия *«руса грп-па и индукторов микрооомальных оксидаз пои вирус-химическом ко-кан"ерогенезе // Вирусы цена и лейкоза.-if. ,1981,- С.193-195/ соавт. B.H.Ctdvk, В.А.Шляховенко, а.М.Таоаховский.

3. Активяиия и >»прзсоия субклеточных Ф^йК^й^ь™* тем при острой гриппозно" инфекши у мышей // Докл.

Сер.Б.» 1984,- 'Я.- С.73-75 / соавт. З.Д.'Савповя, И.Стук,В.Г. .Пинчук.

4. Изменения экспрессии некоторых клеточнчх бег :ов при xdo-нической гриппозной инфекции у мышей // Док д. АН УССР,- Сйп.Е -198'».—"510.— С.7В-80 / ооавт. З.Д.Са-иов*, В.И;Стп,к, В.Г.Пин^гК.

5. Оггн" морфо^ушш.'-гонаяьного подхода к исследованию природы экзогенной физиологической пегуляцик клеточных функций в норм :т при канцерогенезе 7/ Эксперим..' онкология.- 1984.- (,.- С.73/ соавтор В.М.Андрианов. Рукопись деп. в ВИНИТИ 15.05.1984,

:Ь 3071-84, Юс.

6. Некоторое закономерности ксканиерогенниго действия аэрозолей металлов // Гигиена труда. Выи.21'.- Киев: Здоров'я, Т985.-С,59-63 / соавт. В.И.Струк, Л.Н.ГорЗань, З.Д.Сат»иова, Г.П.Потеб-ня, И.Н.Йевченко, Н.Л.Новиченко.

7. Опыт рефлексотерапии экспериментального гриппа, у мыией// Пат. ^физиология и эксперим,терапия.-1?8б.- №5.- J.6C-62 / соавтор В.Н.ЗалесскиЛ. .

8. Инфекционные вируоы и канцерогенез,- Киев: Ьаукова думка, 1987.- 256 с. 7 соавт. В.И.Струк, Т.И.Тихоненко, З.Д.Савнова, Г.П.Потебня, Б.С.Чародиикий, Т.И.Пономарава, И.Н.Шевченко, Ь.З. Гольберг, Н.Л.Ноэиченко, В.М.Андрианов.

9. Вознгкновзниэ опухолей легких у мышей при хроничеокой гриппозной инфекции и ингаляции маталлосодеркагего аэрозоля// .Экснерим. онкология,- 1987,-/й,- С.7Г-73 / соазт. И.Н.Йевчзто,' В.И.Струк.- :

-и-

10. Нормализующее цейотвие интерферона на сиотему ыногоие-кк левых оксидаз печени животных с карциномой Льюис // Экоперим.

онкология. 1987,- М.- С.58-61 /соавт. Ю.И.Куцрявви, А.Л.Во-рониова, Ф.П.Пелькио, В.Ф.Чехун.

11. -Вторичное усиление репродукции вируоа гриппа и развитие опухолей легких у мышей // Вопр. онкол..- 1989.-1 К2,- С.215-220 /соав •. И.Н.Шевченко, В.И.Струк. ; ; • '

12. Иммунокорригирующий, эффект, лазерной рефлексотерапии при экспериментальной ^оиппозной инфекции // ЖМЭИ.- 1990,- М.-С.75-80/ обавт. З.Д.Савиова, В.Н.Залесскнй.

13. Р/Льъуой/с Ьаьег Лаи/и^п^иге ¿о* [/¡гив Я гоЫис Поп СопЬгоС, // ¿олег* /п ±Ие /Уе 5с1л/гсе. -

^Д^^лйяние периферических холинобпокаторов на коканиеро-'^ц^ное дайотяиа экопериментальной хронической гриппозной инфак-фт нии // Вопр. онкол..- в печати /соачт. В.Н.Залесский, М.И.Сме-

лкова. ' - ' • ' ' . • ' ;

15. Противовирусное действие аминофосфоновых кислот при острой гриппозной инфекции ? экоперименте// Дом.АН УССР.-' 1991.-* I.- С. 154 - 157 / соавт. В.В.Федуров,'А.В.Алиогратов, В.А Солоденко, Г.Н.Кавева, О.И.Колодяжный, В.П.Кухарь

Пода, к пет. /о. t. М Формат *е* M/h Бумаг* tftpiH. веч. офс. Усл. печ. д. 0, в-1 Уч.-»яд. л. о, 6f Тираж /ЛО, 6ыЛ-ЛЛЧ Бесплатно

Ккеаскаь книжная типография научной книги. 'Ока, Репина, 4.