Автореферат и диссертация по медицине (14.00.01) на тему:Нарушение иммунорегуляции при послеродовом эндометрите и коррекция IN VITRO

3 л 1a h ?'

л\инистерство здравоохранения российской федерации

российский государственный медицинский

университет

На правах рукописи

ВЛУЛ И HА

Надежда Геннадьевна

НАРУШЕНИЕ ИММУНОРЕГУЛЯЦИИ ПРИ ПОСЛЕРОДОВОМ ЭНДОМЕТРИТЕ И КОРРЕКЦИЯ ¡п vitro

14.00.01 —акушерство и гинекология 14.00.36 — аллергология и иммунология

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Москва 1992

Работа выполнена в Российском Государственном медицинском Университете.

Научные руководители:

доктор медицинских паук, профессор Н. В. Стрижова, доктор медицинских наук, профессор Л. В. Ковальчук.

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор В. М. Сидельникова, доктор медицинских наук М. А. Стенина.

Ведущая организация — Московский областной научно-исследовательский институт акушерства и гинекологии.

Защита состоится « . . . »......19 г.

на заседании специализированного Совета К..084.14.03 Российского Государственного медицинского Университета (117437, г. Москва, ул. Островитянова, д. 1).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке РГМУ.

Автореферат разослан « . . . »..... 1992 г.

Ученый секретарь специализированного совета кандидат медицинских наук,

доцент Л. В. Сапелкнна

îhùjmo «"^лаобщая характеристика, работы.

рудльиость ПРОБЛЕМЫ» В связи с увеличением частоты гнойно-септн-еских осложнений послеродового периода, возникает необходимость дльнеЁшего изучения звеньев патогенеза для решения вопроса о нрог-озироваяии, доклинической диагностике и оценке эффективности про-одимой терапии при данной акушерской патологии. По данным разных второв, гнойно-септические осложнения послеродового периода состав-яют от 3 до 16$ родов / Гуртоьой Б.Л',, и др. ,1581; Зак И.Р. и др., 985; 1991; Кулаков В.Л. и др. 1984; Смокуна Ф.Л., Краснопольский , й, и др-,1988v(->-MMïn$ll * , r?ff /.

аиболее частым проявлением послеродовой инфекции являетел послсро-овый эндометрит, встречающийся у 0,5 - 10,9/. осложнений / Красно-ольский В.Ио и др. ,1908; Soptt, 1S88/ и от 10 до 45^ / Стргааков А.Н. др. ,1991; ÀtА/пал *tОС-, К'?

Наиболее интересной формой., с точки зрения изучения патогенеза характера иммунного ответа,является эндометрит без остатков пла-9Hгарной и децидуалыюй ткани в полости матки, так как отсутствует в1шй субстрат развития инфекции и специфической антигенной стимуля-ии. Возникновение данного осложнения, по-видимому, обусловлено, с дной стороны, характером патогенной микрофлоры и с другой - особен-остямй защитных реакций организма родильницы.

Возникновение и течение бактериальной инфекции у беременных и одильниц в значительной мера определяется состоянием клеточного л уморалыюго иммунитета, поскольку уровень иммунных реакций рвгули-увт течение и исход патологического пуэрлерия. Изменения иммунного гвета при послеродовом эндометрите прежде объяснялись особенностями убпопуляцйонного состара иммунокомпетентных клеток / Гуртовой Б.Л. др. Д981Д988; Го лота В.Л., Иванюта С.0. ,1987; Кудайбергенов К.К., 984,1985; Лысенко О.Н. ,1Ш9; Кириченко В.Ф.,1989; Вдопичонко р.П., D91 и др./. Иммунорегуляторниэ'механизмы и межклеточная кооперация ра послеродовом эндометрите остаются до конца неизученными.

При патогенетическом подходе к оценке иммунного статуса немало-ажноэ значение имеют методы, к которш относятся: определение рогу-зторной-функции клеток макрофагально-моноцитарного ряда, определение родукцйи цитокшюв, в частности, интерлойкинов 1 и 2 / ИЛ-1 и ИЛ-?./, тсерлейкилам отводится одна из главных ролей в регуляции иммунш« закций / Ковальчук Л.В. и др.,1986,1989,1990; Петров Р.В. и др.,1907, 389; Пол У.,1989; Прозоровский U.C., 1986;

С'грижоьа H.B. и др.! 1989; Я-J,, iU^MicAU ».*■, /9 ff;

hddy <?гоат£сиг&1 S.r., tm/.

ИЛ-1, продуцируемый активированными макрофагами и Ш1-2, выделяемый Т-хелперами, являются ключевыми фшсторами в запуске пролиферативно-го ответа Т-клеток иа антигены и митогены ¡Я¿'¿Аиг- A.i.et &Cj //

В настоящее время установлены дефекты в системе интерлейкинов при ряде заболеваний / Петров Р.В., 1989; Заречнева Н.В.,1989; Ко-вальчук Л.В.,'Чередеев-А.Н., 1990; Константинов A.A. л др. ,1987; ШссС Ъ d л£., Jtyfb/iivn- И. С'«Jana J. /9<rs Л-

однако, родильницы с инфекционными осложиониями послеродового периода практически не подвергались подобному исследованию.

Для нормализации клмнщсо-иммуиологячоских показателей используется род как синтетических, так и природных препаратов, обладающих иммуномодулирующим действием. Наряду с изучением влияния на характер иммунного ответа известных препаратов, таких как Тактлвин, Миелопвд и др. / Аряон В.Я. и др.,1984:1905; Власенко Р.Я.,1989; Ганковсиая Л.В. и др.,1989; Ковальчук Л.В. и др. 1989; Константинов A.A.,1389; Петров Р.В. и др., 1987; Погодин O.K. и др. ,1991; Соловьев М-И.Д991 Ствпаненко P.H. и др., 1985, 1988, 1989; Стенина f;i,A и др.Д$89; Суладзе Т.А.,1989; Таранов.В.А. и др.-,1909 и др./ ведется поиск новых препаратов, преимущественно природного нроисховденал. К таким препаратам ,.ю;хет быть отнесен "Лалрот'% созданный иа основе лакто-феррина женского молока. В литературе недостаточно освещены вопроси, касающиеся иммунорегуляторпых свойств лактскйеррина и его производных fcUmd М, ¿елка ////• а Ли С , ///7, '<2ucacfy JA, /Ж. и практически отсутствуют работы, посвященные изучению пролиферашз-ного ответа иммуноцитов, продукции и рецепции ИЛ-1 и ИЛ-2 в культу- . ре Ut viiw при воздействии препаратами лактоферрича.

ЦЕЛЬ РАБОТЫ: на основании изучения характера иммунных реакций обосновать необходимость иммунокорригирущвй терапии при послеродовом эндометрите и определить выбор препарата в культуре ¿/l ritte .

Исходя из цели, были поставлены следующие задачи:

1. Определить уровень пролифе]>ативной активности лимфоцитов ¡периферической крови у здоров)« иебеременных женщин, у здоровых беременных Ш триместра, у родильниц с нормальным и осложненным

~ 3 -

эндометритом послеродовым периодом,

Провести комплексную оценку системы интерлейкинов 1 и 2, включающую определение продукции этих медиаторов и отвечаемости на них лимфоцитов в тех же группах обследуемых. <1л хпХко провести сравнение лролифоративной активности ш....;уио-компетентных клеток при воздействии Тактивииа, Миэлопида и "Лапрота" у всех групп обследуемых.

Изучить влияние исследуемых иммуномодуляторов на продукцию и рецепцию ИЛ-1 и Ш-2 -

УЧТТАЯ НОВИЗНА. Впервые проведена комплексная оценка продукции -1 и ИЛ-2С отвечаемости на них лимфоцитов в нормальном и ослоенном эндометритом послеродовом периоде, показана зависимость им-яподефицитного состояния ¡. развивающегося при эндометрите от про-кции а рецепции ИЛ-1 и ИЛ-2, выявлена роль ¡слеток макрорагально-яоцитарного рада в развитии этого иммунопатологического состоя-т„ Впгрвие проведено изучение препарата "Дапрот" в культуре иы-мцитов и проведен сравнительный анализ препаратов ишуномодули-ощего действия / Тактовин, Миолопвд, "Лаярот"/ и обоснование виза препарата для профилактики и шмунокоррекциа.

ЭТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТИ При развитии послеродового эндометрита явлено состояние угнетения пролиферативной активности иммуноком-сентких клеток. Дано обоснование применения шмунокорригарущей эагшя при развйтиа эндометрита посла родов а назначения Мивлопи-и "Лаярота" с цель» профилактики возникновения послеродовых зШш-септаческих осложнений. Проведена сравнительная оценка вли-щ препаратов иммуномодуларуккцего действия в культуре ш, Н(/ю .

Вштвлена ценность определения продукция ИЛ-1 л ИЛ-2 я отво-)ыостя па них лимфоцитов, что' может служить дополнительным диф-эеициально-диагностичесдшл тестом в плане доклинической диагнос-:и и зффзктивпоста проводимой'терапии,

)тш, РЕЗУЛЬТАТОВ исследования в клинику. Основные положения ¡сортации и рекомендации использованы в работе отделений родиль-■о дома й 3 г, Москвы и в работе лаборатория кодификаторов и лекторов противоопухолевой терапии ШИШ им. П.Л. Герцена.

'0БА1ЩЯ ЖСЬТТАШ, Материалы диссертации доложены и обсуждена совместной конференции кафедр акушерства и гинекологии й 2 ;ебного .факультета, иммунологии ЫБф РГМУ, городских врачей ровного дома В 3 3.06.1992. Результаты'работы представлены на I.съезде иммунологов России / 1992г./.

ГИКАИИИ. По материалам диссертации опубликованы 2 наушне гаи.

ОБЬЕМ И СТРУКТУРА РАБОТЫ. Диссертация изложена на страницах машинописного текста й состоит из введения, трех глав, заключени и выводов. Иллюстрирована таблицами и рисунками. Список ли тературы вклюзает 250 источников, в том числе - 113 зарубежных авторов.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ.

1. тптит и методы исследования,

Клинико-иммунологическое обследование проведено у 48 здоровых небеременных женщин-доноров, у 23 беременных Ш триместра нв-осложнемнс,, беременности, у 43 родильниц о неосложненкым течение послеродового периода и у 32 родильниц с послеродовым эндометритом. Всего обследовано 146 человек. Всем обследуемым проводилось общеклиническое исследование, осмотр специалистов по показаниям. Женщины-доноры были соматически и гинекологически здоровыми, у беременных не бшю выявлено отклонений от нормы в течение период гестации, у родильниц с неослочганным течением пуэрперия не биле выявлено патологии беременности, родов и раннего послеродового с риода, выписка родильниц из родильного стационара производилась на 5-, сутки после родов. В группе родильниц с эндометритом в ЗС выявлена-эрозия шейки матки во время данной беременности - без лечения; у - явления кольпита. Роды и ранний послеродовый п« риод протекали без особенностей и выписка производилась на 5-7 сутки после родов. Клинические проявления эндометрита развились на 7-9 сутки после родов. Симптоматика инфекционного процесса включала: гипертермию - у 10С$, озноб - 90?, боли внизу яивота -85%, кровя. ..стые выделения из половых путей - 95%, слабость, пот лииость - 100$, дизурические расстройства - 2ОК. Иммунологическс обследование производилось в первые сутки от поступления в стаад онар до начала лечения.

Объектом лечения служила периферическая кровь. Выделение м< нонуклеарных кдеток /ШК/ производили центрифугированием на градиенте плотности фиколла-верографина по методу Воуим /1968г./. Оценка продукции '41-1 и ИЛ-2 и отвечаемости на них лимфоцитов П] водили с помощью метода, основанного на модификации реакции бла< трансформации /РБТЛ/, ^сработанного на кафедре иммунологии МВФ РГМУ / Косальчук Л.В. и др. 1986/. МНК разделяли на прилипающие /ПК/ и неприлШащив /[ШК/ к стеклу клетки. Дан получении сред, содержащих ИЛ-1, ЦК в концентрации 0,2х106 Ли среды КР«1-1640 < добавлением антибиотиков, 1,-глуташна, НЕРЕ5 - буфера а 10$ эмб-риоиаыюЯ сыворотки цдода коровы /"полная" среда/ культивирова-

i в пенициллшовых флаконах в среда Ъ% COg при температуре 37°С течение 72 часов с последующим центрифугированием и заморажи- ' швм при -20°С. Для получения культуральних сред, содержащих 1-2, НПК в концентрации 1х106 /мл "полной" среды о добавлением »тогенной дозы фитогемагглютинина /ФГА/ культивировали в стан-артных условиях в течение 24 часов с последующим цэнтрифугирова-леы и замораживанием.

Постановку РБТЛ осуществляли по стандартной методике .в 96-уночных круглодонных платах для иммунологических исследований с четом пролиферации КЙЖ и НПК без и в присутствии ФГА d митоген- • эй дозе 5 мкг/мл " Siqma. " /США/ по уровню включения 3Н-тимиди-а.

. Для тестирования культуральних сред, содержащих ИЛ-1 и 11JI-2 лунки "опыт" помещали О Д мл суспензии НПК с концентрации!! х106 /мл "полной" сроди; 0,1 мл тестируемой среди, содержащей Л-1 или ил-2 и штогоннуо дозу ФГА. Для оценки отвечаемости лим-оцитов в качества стандартных препаратов использовал« пул супер-атантоп ПК и НИК от 4 - 6 здоровых доноров.

Для анализа результатов использовали следующие показатели: ИС ШК/НПК = МНК /НПК/ + ФГА имп/мин ;

ЫПК /НПК/ имп/мин КС ИЛ /1,2/= /НПК + ФГА + ИЛ /1.2/ имп/мин ;

. НПК имп/мин ИВ PET = ПС ИЛ /1.2/ - ИС /НПК/ ; где

ИС /МНК/ - ИС /НПК/ ИС - индекс стимуляции; 113 - индекс восстановления РБТЛ.

Опрадзлеиио влияния ишуномодулирукади препаратов на ФГА-ин-уцярованнуэ пролиферация икмуноцятов определяли согласно методи-ecKias роксмэнцацйяы "Способ оценки действия иммуномодуляторов <«-ttio " /Ковзльчук Л,0. и др. 1909/.

В РБТЛ к 0,1 ая суспензии клеток МНК и НПК в концентрации хЮ® /ил "полной" среда в присутствии субоптимальной дози ФГА (rDidcn, d clrJ.tlSZ5v./ - 1 мкг/мл - добавляли 0,1 мл исследуемого имуноглодулятора в концентрациях: Тактивина - 3 мкг/мл; Миолопида-мкг/мл; "Лалрот" - 1 шг/ал. Дозы препаратов установлены в пре-вдуяих исследованиях по максимальному действию на лролифератив-ufl отЕот шэдунопоштатеитних клеток /ИКК/ в случае "применения Так-явш;а и Миэлопида, а доза "Лапрот" расчитана по уровню содержания рэпарата пря парентеральном введении. Учет РБТЛ -проводили ..j ровню включения 3Н-тимидина.

Для оценки влияния исслецуешх препаратов на продукция Ш1-1 и ИЛ-2 в культуры ПК / в случав продукции ИЛ-1/ и НПК в присутствии ФГА / в случав продукция ИЛ-2/, добавляли иссдвдуемие препараты на 16-18 часов культивирования.

• Тестирование надосэдочных жидкостей, содержащих ИЛ-1 и ЙЯ-2 после воздействия иммуномодуляторами проводили по ранее •олисашю методике с вычислением ИС /ИЛ-1, М-2/+ исследуемый препарат и ИВ РБТ.

Статистическая обработка полученных результатов проведена п ПЭВМ "Мазовия" по программе "Дескриптивная статистика"о

2. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ обсуждение.

При обследовании здоровых беременных Ш триместра било зарегистрировано выраженное угнетение ФГА-издуцированной пролифераци МШ по сравнению с уровнем непеременных женщин-доноров= Для выло нения идаунорегуляторной функции моноцитов производилась их удаление из суспензии №К с последующим исследованием пролифератив-ной активности оставшихся лимфоцитов /НПК/ - табл„ 1,.

Таблица Ь

Уровни спонтанной., фГА-индуцированной пролиферации ШК и НПК с отвечаемости лимфоцитов на йЛ-1 и'ИЛ-2 и продукция ИЛ-1 и ИЛ-2 у беременных Ш триместра неосдожненной беременности»

Показатели функциональной активности лимфоцитов

Неббреыбшыэ

УвйДИНК1

Беременные 1 триместра

№ сп. 493^38 396±75

МНК+ФГА Ш93±2514 5420±742х 13,6±2,1Х

ИС МНК *2вс4±4.

НПК СП. 558±73 320±77

НПК+ФГА 886?±Э56 4590±985*

ИС НПК 15,9±2 ' 10,8*2,1

ИВ РБТЛ ШГ-1 0,78±0,1 100# ■ 0,62±0,1 7(8,2?

ИВ РБТЛ ИЛ-2 0,91*0,1 100# , 0,83±0,1

ИС ИЛ-1 19,6*1,9 100% .. '16,5±2 ¡84,25

ИС ИЛ-2 21,3±1,8 ' 100^ 16,4±1,5

х - достоверность различий по сравнению с группой доноров.

Было обнаружено достоверное снижение ФГА-индуцированной пролиферации лимфоцитов беременных по сравнению с группой контроля р/ 0,05, что может бить связано с искусственно созданным дефицитом ИЛ-1 при удапении моноцитов. Клеткам макрофагашю-моиоцитар-ного ряда отводится важная роль в инициации и рогудящм пролифе-

\

ативного ответа ИКК / Кульберг А.Я. ,1986; Ковальчук JI.B. и др. 990; МаянсниЯ Д.Н.,1991; Петров Р.В. и др.1990; Стрияопа Н.В. и р. 1992; Старцева Н.М. Д989; bdJUf- t. et «Л-, fatte 2 tè l-, (ta-, ЦяолА.Ъ /Ш; C j. rf aC-, Со(i/пап S>., /Ш/.

Если y здоровых доноров удаление моноцитов из суспензии M ¡К риводило к уменьшению пролиферации лимфоцитов, то у беременных Ш риместра показатели пролифератишюй активности MliK и IHIK не раздались достоверно. По сравнению с группой доноров, у боремвнних гмечалось снихение пролилоратшзной активности ИКК, что может быть Зусловлено снижением отвечаемости лимфоцитов на ИЛ-2 до 76, габл 1/ Изменение экспрессии рецепторов ИЛ-2 может быть след-гвием сниженной продукции моноцитами ИЛ-1 до 78? от уровня доно-эв. а такке обуславливаться прямым иммуломодулирующим влиянием эрмонов беременности, иммуносупрессивные свойства которюс отмече-i рядом авторов / Головистиков В.И. Д979Д983; Горлина Н.К. ,1984; эвалло В IL. 1987; Златовратская Т.В.,1981; Петрунин Д.Д.,1981; этрунина КЗ.Л- и др.1989; Стрижова Н.В. и др. 1989; Соколова З.П. др 1986; Побединский Н.С. ,1986; Gotdm ^лС-

vthomJCo fid (U., /Ш; Меш. et ecâ.

Экспрессия рецепторов ИЛ-1 у беременных достоверно но отлилась от уровня доноров, но выявленный дефицит продукции ИЛ-1 зрушал процессы 'активации лимфоцитов, что подтверждает данные гарцевой Н.М. /1990г./.

Известно, что к родам происходит как увеличение секреции гтрогенных гормонов, которые, подавляя активность Т-хелперов мо-гт влиять на продукцию ИЛ-2; так и отмечено увеличение экспрес-ти рецепторов эстрогенов / Дорахвелидзе З.В.,1991/. KpONe того, организме беременной изменяется метаболизм арахидоновон кцело-», что находит отражение в увеличении синтеза простагландипов >уппы.Е и сопровождается снижением синтеза ИЛ-1 моноцитами 'JXni ¿.-U. U/О.., МЫJ CvCdsiein. P,,ffff; foCdy*, М.&.

В наших исследованиях не выявлено достоверного спглеиля протащи ИЛ-2 у беременных, это позволяет предположить, что вклв-шше изменения пролиферативного ответа иммуноцитов обусловлены | снижением продукция ИЛ-2, а изменениями в рацепториом аипауа-лимфоцитов.

Роды, являясь стрессовым воздейстиком, способствуют напряге-о системы гомеостаза. Происходящий выброс п кровяное русло боль-го спектра биологически активных веществ не может нз отдаться на характере иммунных реакций.

'Таблица 2. •

Уровни спонтанной, ФГЛ-индуцированной пролиферации МНК и Н11К, отвечаемости лимфоцитов на ИЛ-1 и ИЛ-2 и продукции ИЛ-1 л ИЛ-2 у родильниц с неосложненным течением послеродового периода.

показатели Контрольная 1-е сутки 3-й сутки 5-7 сутки

Функциональной .груапа п •

активности /доноры/ ПОСЛ0 послэ после

лимфоцитов родов родов родов

МНК сл. 493*38 538±25 411*35 5870*758** '410*38

НЖ+ФГА 12993*2514 19981278х 6595*924*

ИС МНК 26,4*4 3,7*0,4 14,1*2 17,1*1,4

НПХ сп. 558+73. 800*17** 551*110 688*45° ,

НПК+ФГА 8867*956 3295*331*' 8108*590* 9762*1096'

ИС НПК 15,9*2 4,1*0,7 14,6*4,2 14,1*3

ИВ РБТЛ ИЛ-1 0,78 ¿0,1 0,4±0,04" 1,6*0,08 1,08*0,08

% 100 51,3 205 138,4

ИВ РБТЛ ИЛ-2 0,91 ±0,1 1,4*0,1* 1,7*0,1**- 1,6*0,1*

% 100 153,8 186,5 175,8 30,1*1,6 аЛ

ИС ИЛ-1 19,6*1,9 . 4,3*1,8х 16,6*1,9

% 100 21,4 84,6 153,5

ИС ИЛ-2 21,3*1,8 5,7*2 * . 26,2*2 31,2*1,9 *А

% 100 • 26,7 123 146,4

л- достоверность по сравнению.с группой доноров А- достоверность по сравнению с 1 сутками после родов в - достоверность по сравнению с МНК

Выраженное угнетение пролиферативного ответа МНК 'отмечено в .1-е сутки после родов /табл. 2/« В этот период моноциты обладают супрессорними активностями, т.к. их удаление из суспензии МНК приводило к увеличению как спонтанной, так и ФГА-индуцированной пролиферации лимфоцитов. Снижение пролиферативной активности МНК может обьясняться снижением продукции ИЛ-1 по сравнению с уровнем 1 доноров.Однако, уровень продукции ИЛ-1 в 1-е сутки после родов достоверно не отличался от уровня беременных Ш триместра /табл.1/.

Выявленное увеличение продукции ИЛ-2 не нашло отражения в изменении пролиферативного ответа иммуноцитов, по-видимому за счет отсутствия усиления экспрессии рецепторов ИЛ-1 и ИЛ-2 /табл. 2/.

Полученные данные свидетельствуют о тесной взаимосвязи имму-норегуляторних систем с процессами инволюции и репарации в организме родильницы.

В динамике неосложненного послеродового периода происходит ^становление сниженного уровня пролиферации ИКК в ответ на мито-ек к 5-7 суткам послеродового периода /табл. 2/. Удаление мзноци-ов из суспензии МНК приводит к достоверному увеличению пролифсра-дзи лимфоцитов на ФГА по сравнению с 1 сутками послеродового пери-да и достоверно не отличается от уровня пролиферации доноров. Вос-тановление пролиферативного ответа обеспечивается, вероятно, как а счет.увеличения продукции ИЛ-1 и ИЛ-2, так и усиления экснрес-ии рецепторов ИЛ-1 и ИЛ-2 /табл. 2/.

Повышенная склонность родильниц к гнойно-септическим заболева-иям частично может бить обьяснена описанными изменениями иммунного твета. Однако, инфекционные заболевания развиваются далеко не у сех родильниц. Возникновению гнойно-септических осложнений в пос-еродовом периоде, по-видимому, способствует ряд неблагоприятных акторов: наличие соматической патологии, хронических инфекций, ос-ожнения беременности и родов, госпитальное инфицирование и др., то в сочетании с особенностями иммунных реакций способно привести инфекционным осложнениям послеродового периода.

Изучение имунных реакций при иослеродовом эндометрите выявило начительние изменения пролиферативного ответа ИКК, Так, по сравнено с показателями 5-7 суток неосложненного нуэрперия, фГА-нндуци-ованная пролиферация МНК достоверно выше в группе родильниц с эн-' ' 3/.

Таблица 3.

ровни спонтанной, ФГА-ивдуцированной пролиферации МЕПС и Н1Ж, твечаеыости- лимфоцитов на ИЛ-1 и ИЛ-2 и продукции ИЛ-1 и ИЛ-2 родильниц с эндометритом после родов.

оказЗлели- 5-7 сутки Больные

!^™ЬН0Й после % с эндометритом Я

имфоцитов родов после родов

(Ж сп. 410±38 4811.16

НК+ФГА 6595±924 12338^.230хх

ЖЖ 17,1±1,4 25±3

[Ш сп. 688±45* 564*34

Ж+ФГА Э762±10% 3245±506хх

С нпк 14, 1±Э 5,8*1,1

В РБТЛ ИЛ-1 1,08+0,08 юсй 1,04*0,04 16*>

В РБТЛ ИЛ-2 1.€±0,1 100% 0,0+0,ио"СО""-

С РБТЛ ИЛ-1 30,1±1,6 100* 20,6+?.** С.с^

С РБТЛ ИЛ-2 31,2*1'.9 10$ 20, 4^2 Г 5*

- 10 -

достоверность различий к- с МНК

хх - по сравнению с группой контроля.

Снижение пролиферации лимфоцитов после удаления ПК из суспензии МНК указывает на активацию клеток макрофагально-моноцитарного ряда в период р: лгара клинической картины послеродового эндометрита в ответ на стимуляцию антигенами экзогенного / бактериального/ и эндогенного - за счет формирования зон« некроза и 'Процесса катаболизма белков, которые могут выполнять роль антигенов.

Продукция ЙЛ-1 не отличалась в группах осложненного эндометритом и неосложленного послеродового периода, в то время как при эндометрите выявлено достоверное снижение продукции ИЛ-2 до 50% на фоне снижонкя экспрессия рецепторов КЛ-1 и 'ЛЛ-2 /табл. 3/.

По данный отечественных и зарубежных авторов, характер иммунных реакций при послеродовом эндометрите может быть рассмотрен как вторичный иммунодефицит / Зак И.Р.,1991; Кудайбергенов К.К .1905; Лысенко 0.II., 1982; Петров F.B.' и др.1987; Степанковская Г.К. й др. 1987; Стрияаков А.Н. ,1991; Смекуна Ф.А. ,1987; О.Осорох, 1990;^ и.ле./зи; Ми^-аат, Л^-Ша, я-T. те; 4+ptr».$.г /т

Нарушения функциональной активности иммуноцитов могут создавать дисбаланс в иммунных реакциях. Угнетен®лролиферативного ответа лшлФоцитоз' в РБТЛ при стимуляции ФГА при послеродовом эндометрите совпадает с увеличением уровня глюкокортнкоидов, гистами-на и катехоламинов в крови, причем, снижение пролиферативной. активности Т-клеток не опосредуется Т-супрессор&ед, активность которых при эндометрите незысока.

Выявленное нарушение продукции 11ÎI-2 при сниженной якспрессии рецепторов ilJI-l и ИЛ-2, сопровождающееся снижением иролиферативно-го ответа лимфоцитов на ФГА отражает глубокий ;г{юкт системы иммунитета при послеродовом эндометрите. Определение данного дефекта мо»ет служить в клинике дополнительным дифференциально-диагностическим признаком.

Для оценки влияния на пролиферативную активность иммуноцитов препаратов иммуномодулирующего действия были использованы культуры МЖ и Ш1К, стимулированные субоптимальной дозой ФГА.

У здоровых доноров внесение в культуры иммунокомпетентных клеток иммуномодуляторов приводило к достоверному снижению фГА-инду-цированной пролиферации /рис. 1/.

В группе беременных Ш триместра иммуномодуляторы достоверно снижали пролиферативную активность МНК, но после удаления моноцитов, Миелопид и Тактивии достоверно повышали ИС НПК /рис. 1/.

Ш триместра

ИС КПК

Ш триместра.

Рис. 1. Изменение пролиферативного ответа /ИНК и НПК под влиянием иммуномодуляторов ¡¿г. ъЖъо .

- 12 -

• Наши опыты подтверждают гипотезу Таранова В.А. с соавт. / 1989г./ о том, что основным путем воздействия тишческях гор ионов на систему мононуклеарных клеток является активация Т-лимфоцитов. с последующей выработкой соответствующих медиаторов Увеличение пролиферативной активности лимфоцитов в ответ на воздействие шиелопида может быть объяснено регулирующим влиянк ем В-активина на особые популяция Т- и В-лямфоцитов, а также моноцитов, основной функцией которых является выработка меди? торов без клеточного деления / Ганковская Л.В. и др.,1989/.

Изменение уровня продукции ИЛ-1 и ИЛ-2 в ответ на возде! ствие доследуемыми препаратами показано на рис. 2. ИВ ИЛ-1

ИВ ИЛ-2

доноры

беременные Ш триместр

У/

У/,

без препарата

"Лапрот"

- +

Шелопид

+

Тактивин

Рис. 2. Влияние иммуномодуляторов на продукцию ИЛ-1 и ИЛ-2.

В группе непеременных женщин-доноров внесение в культуры ИКК преиарато иммуномодулирухмиего действия приводило к достоверному снижению продукции ИЛ-1 в присутствии "Лапрот" и Так-тивина, в то время как Миелошщ достоверно не изменял уровень продукции ИЛ-1. Продукция ИЛ-2 достоверно снижалась под действием всех исследуемых препаратов.

- 13В культурах ИКК беременных Ш триместра имело место достоверное увеличение продукции ИЛ-1 и ИЛ-2, однако, это но приводило к повышению пролиферативной активности МЯК под действием иммуномодулятороп ./ рис. 1/, в то время как повышение уровня продукции ИЛ-2 сочеталось о увеличением пролиферативного ответа лимфоцитов при воздействии Миелооида и Тактивина. Особый тип иммунных реакций выявлен при использовании "Лапрота". В группе доноров этот препарат достоверно снижал продукцию ИЛ-1 и ИЛ-2, что приводило к уменьшению пролиферативного ответа М1Ш и ШК, а в группе беременных - "Дапрот",.увеличивая продукцию ИЛ-1 и ИЛ-2, снижал .пролиферативный ответ МНК и не • влиял на пролиферацию лимфоцитов. По данным /&спле1

Яилсап I., рецепторы к лактоферрину имеются на моноцитах и лимфоцитах. В культуре ¡п гп£и? , по-видимому, на воздействие "Лапрота" главным образом реагируют клетки макрофагально-моноцитарного ряда, активация которых, сопровождающаяся изменениями их секреторной и регуляторной функций, приводит к разнонаправленному действию моноцитов на пролиферативную активность ИКК. Система интерлейкинов, особенно уровень экспрессии рецепторов ИЛ-1 и ИЛ-2, определяет специфичность иммунных реакций у беременных, направленных на выливание аллогенного плода и обеспечивает физиологическое течение гестации.

Анализ данных по влиянию иммуномодуляторов на пролиферативный ответ иммуноцитов в течение неосложненного послеродового периода показал, что "Лапрот" достоверно повышает сниженную в 1-е сутки послеродового периода пролиферацию ИКК, в то время, как Миелопид и Так-тивин еще более снижают уровень пролиферативной активности МПК и НПК.

На 3-й сутки после родов отмечается выраженное усиление прог -фвративного ответа МПК на все исследуеше препараты, однако, после удаления моноцитов пролиферативный ответ изменяется - "Лапрот" и Тактивин снижают пролиферативную активность НПК, а Миелопид ее достоверно повышает /рис. 3/.

На 5-е сутки неосложненного послеродового периода, когда продукция и рецепция эндогенных ИЛ-1 я ИЛ-2 приближаются к знг ениям доноров, иммуномодуляторн в культура т. гг&о угнетают пролиферативную активность ИКК родильниц.

ИЗ выше изложенного следует, что с целью профилактики гнойно-септических осложнений послеродового периода в комплекс мероприятий целесообразно в 1 и 3 сутки включать "Лапрот" и Миелопид для нормализации показателей пролиферативной активности ИКК и аг^ивации клеток макрофагально-моноцитарного ряда.

ш а а . &

без + ■ + +

препарата "Лакают" Миелопид Тактивин

рис. 3. Изменение пролиферативного ответа ИКК иод действием

ишуномодуляторов в неосложненном послеродовом периоде.

В динамике цеосдогшшшого послеродового периода выявлены особенности продукции ИЛ-1 и ЩЬ-2 под влиянием препаратов иммуно--модулирующего действия /рис„ 4/»

ИВ

ил-:

Л я •

/

/ //г /тД„

/ • % • % 9 • 9 • • • • 9 • • * • • « « • • t

и Т7Г' ' г

Y г / -h ff Ч/у/ »1/ ./ / KÍ/ •ksn/,,- ,v/?

1-е оутки после родов

1-е оутки после родов

3-й сутки после родов

5-7 сутки после родов

3-я сутки после родов

5-7 сутки после родов

без препарата

"Лапрот"

+

Мяелоиид

+

Тактивин

Pao. 4. Вляяпне иммуномодуляторов на продукцию ИЛ-1 и ИЛ-2 в пеоолояснепном послэродовом периоде.

В 1-е сутки после родов наблюдается снижение продукции ИЛ-1, по в присутствия "Лапрота" п Шалопида продукция ыонокина увеличивается / рас. 4/, а Тактивин достоверно не изменяет продукции ИЛ-1. В присутствии Миалоппда и Тактивина снижается продукция М-2, которая достоверно не изменяется в присутствии "Лапрота". Поскольку, экспрессия рецепторов ИЛ-1 и ИЛ-2 в 1-е сутки послеродового

периода онижена по сравнению с группой доноров /табл. 2/, 'го увеличение продукции этих цитокинов под влиянием иммуномодулирующих препаратов может не иметь решающего значения в регуляции пролифератив-ной активности ИКК.

На 3-й сутки неосложненного пуэрперия все исследуемые препараты достоверно увеличивают продукцию ИЛ-1: Продукция М-2 не изменяется под влиянием "Лапрота", увеличивается в присутствии Миеиопида и достоверно снижается Тактивином. К 3-м суткам после родов экспрессия рецепторов ИЛ-1 и ИЛ-2 достигает уровня доноров, поатому увеличение продукции иммуноцитокинов Миелопидом, сопровождающееся усилением пролиферативной активности иммуноцитов и, особенно, клеток мак-рофагально-мочоцитарного ряда, имеет положительное значение в профилактике гнойно-септических осложнений послеродового периода.

IIa 5-7 сутки после родов все иммуномодуляторы в наших исследованиях снижали продукцию ИЛ-1. "Лапрот" и Миелопид достоверно не изменяли уровень продукции ИЛ-2,'а Тактивин его достоверно снижал. Поскольку в этот период отмечается высокая экспрессия рецопторов ИЛ-1 и ИЛ-2 /табл. 3/, снижение уровней продукции цитокинов представляется нежелательный! Поэтому, основываясь на к/льтуралыых исследованиях, не рекомендуется профилактика гнойно-септических заболеваний "Лапротом", Миелопидом и Тактивином на 5-7 сутки послеродового периода.

При развитии послеродового эндометрита .отмечается активация клеток макрофагально-моноцитарного ряда, что находит подтверждение в высоком уровне пролиферативной активности WIK на -WA /табл. 3/. Внесение в культуру МНК иымуномодуляторов приводит к снижений пролиферативной активности мононуклеарных клеток /рис, 5/.

При стимуляции оцтимачьиой лозой мятогена впяилено состояние угнетения пролиферации лш.роцитов родильниц, страдающих эндометритом /табл. з/. Однако, на субоптимальну» стимуляцию лимфоциты больных отвечают более активно, чем лимфоциты здоровых родильниц /рис.5/, что указывает на состояние предактивацаи лимфоцитов, опосредованное как повышенным уровнем продукции ИЛ-1, так я антигенной стимуляцией, на стадии разгара болезни - с одной стороны, антигенами бактериального происхождения, с другой - продуктами катаболизма белков зоны некроза в эндометрии.

Лимфоциты родильниц с эндометритом отвечают на внесение в культуру "Лапрота" и Миелопида повышением пролиферативной активности / рис. 5/. Тактивин достоверно не изменяет пролиферацию лимфоцитов.

ИС ШК

без . + + +

препарата "Яапрот" Миелопид Тактивин

>ио. 5. Влияние нммуномодуляторов на пролиферативный ответ ИКК при послеродовом эндометрите.

Уровни продукции ИЛ-1 у здоровых родильниц и больных о эндометритом достоверно не различались, но были на 30$ выше, чем у здоровых небеременных женщин /табл. 2, ЗЛ При эндометрите после родов "Лапрот" поддерживает высокий уровень продукции.ИЛ-1 и повышает сниженный ИЛ-2. Миелопид и Тактивин достоверно снижают продукцию ИЛ-1 при эндометрита, не изменяя продукции ИЛ-2 /рис.б/о

Ш щ Ш ' ш

без + + • + I

препарата "Лапрот" Миелопвд Тактивин

Рис. 6. Влияние иммуномодулятороЬ на продукцию ИЛ-1 и ШГ-2 яри послеродовом эндометрите.

. Таким образом, полученные данные свидетельствуют о важн(}й роли «шмуноцитокииов в регуляции илзолютивных процессов в организме родильницы в раннем послеродовом периоде и участии ИЛ-1 и ИЛ-2 в патогенезе эндометрита после родов. Активация клеток мак-рофагально-моноцитарного ряца не обеспечивает адекватность иммунных реакций.при развитии эндометрита после родов, когда выявляется грубый дефект в виде снижения продукции ИЛ-2 и уменьшения проли-феративпой активности лимфоцитов в ответ, на стимуляцию митогеном.

С учетом показателей пролиферативной активности иммуноцятов и продукции Vолмуноцитокинов, коррекция выявленных нарушений и профилактика гнойно-септических■осложнений послеродового периода возможна в 1 и 3 сутки послеродового периода препаратами "Лапрот" и Миелопвд.

- 19 -ВШШ:

При физиологическом точении беременности в Ш триместре отмечается угнетение пролиферативной активности иммунокомпетантных кле- " ток на фоне снижения продукции ИЛ-1 и уменьшения отвечаемости лимфоцитов беременных на ИЛ-2, что указывает на специфичность иммунных реакций во время гестащш»

В 1-е сутки после родов вшвлоно снижение пролиферативной активности МНК на ФГА, увеличение спонтанной и ФГА-индуцироваиной пролиферации лимфоцитов. При этом уровень продукции ИЛ-1 не отличался от уровня беременных Ш триместра, а увеличение продукции.ИЛ-2 на приводило к изменению яролиферагивной активности иммуноцитов, • ло-ввдимому, за <су&т епушит рецепции к интерлейкинам 1 и 2. Яря физиологической течении послеродового пёриода происходит восстановление пролиферативного ответа иммуноцитов, повышение продукции и отвечаемости М-1 й ИЛ-2 на 5-7 сутки после родов. При развитии послеродового эндометрита наблюдается состоянио активации меток макрофагально-моноцитарного ряда а снижение пролиферативной активности лимфоцитов на митоген. На фоне высокого урбв- . ня продукции ИЛ-1 отмечается снижение продукции ИЛ-2 и отвечаемости лимфоцитов на ИЛ-1 и ИЛ-2, что является основанием для проведения иммунокоррагирующей терапии.

"Лапрот" и Миелопид в культуре ш- гл1го оказывают иммуномодулирующее Д(>,*-г;'пиб как за счет влияния на рецепторный аппарат клетки, так и за счет изменения продукции иммуноцитокинов и могут быть рекомендованы для профилактики гнойно-септических осложнений послеродового периода и включаться в комплекс терапия послеродового эндометрита.

№;»лунологические исследования имеют важное диагностическое и прогностическое значение у родильниц с послеродовыми гнойно-септическими осложнениями и в комплексе с другими методами могут быть рекомендованы для применения в акушерской клинике.

ПРАКТИЗДЩ , МРМВДДЦВД. Летоды оценки продукции иммуноцитокинов могут быть использованы в шушерской клинике с дифференциально-диагностической целью 1 в ка-юстве дополнительного метода для оценки эффективности проводимой 'ораяии при послеродовых гнойно-септических осложнениях. !а 1 и 3 сутки после родов в комплекс профилактических мер целесооб->азно включать "Лапрот" и Миелопид, учитывая их иммунорегуляторные ¡войства.

читывая шлмунопатогенез при эндометрите показано назначение "Ланита" и Миелоплда.

- 20 -

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ СО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ.

1. С обенности секреторной фушодш нейтрофилов при различных формах гнойно-соптичвских осложнениях у родильниц.// В сб. "Пути профилактики материнской и перинатальной заболеваемости и смертности' .- Пермь.-1991.-С. 19-23. Соавт. Дюгеев А.Н., Ши-пулин A.H.Немцова Е.Р.t Якубовская Р.И.

2. Значение систем« ЙЛ-1 и ЙЛ-2 в пролиферации лимфоцитов женщин. // 1-й съезд иммунологов Россия. Тез. докл.- Новосибирск.- 1992. С. 460-''61. Соавт. Стрижом Н.В., Ковальчук Л.В., Старцева Н.м. Павлюк A.C.

Подписано к печати- 5.II.92 г. Тираж 100. зак. 929 Типография МО РФ