НАДФН-оксидазная активность клеток иммунной системы и ее роль в глюкокортикоид-зависимом апоптозе тимоцитов

Персиянова, Вера Олеговна

Диссертации по медицине → Аллергология и иммулология

Автореферат и диссертация по медицине (14.00.36) на тему:НАДФН-оксидазная активность клеток иммунной системы и ее роль в глюкокортикоид-зависимом апоптозе тимоцитов

ДИССЕРТАЦИЯ

АВТОРЕФЕРАТ

Персиянова, Вера Олеговна Новосибирск 2003 г.

Ученая степень: кандидата медицинских наук

ВАК РФ: 14.00.36

Автореферат диссертации по медицине на тему НАДФН-оксидазная активность клеток иммунной системы и ее роль в глюкокортикоид-зависимом апоптозе тимоцитов

На правах рукописи

Г" {-з

'/ . .■ 1:;!; .

ПЕРСИЯНОВА Вера Олеговна

НАДФН-оксидазная активность клеток иммунной системы и ее роль в глюкокортикоид-зависимом апоптозе тимоцитов

14.00.36 - Аллергология и иммунология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Новосибирск 2003

Работа выполнена в ГУ НИИ клинической иммунологии Сибирского отделения РАМН

Научный руководитель:

академик РАМН, д.м.н., профессор В.А. Козлов

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор B.C. Ширинский

доктор медицинских наук М.И. Душкин

Ведущая организация: ГУ НИИ клинической и экспериментальной лимфологии СО РАМН

Защита состоится " " у ¿/^ 2003 г. в ^ часов на заседании диссертационного совета Д 001.001.01 ГУ НИИ клинической иммунологии СО РАМН по адресу:

630091, г. Новосибирск, ул. Ядринцевская, 14

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГУ НИИ клинической иммунологии СО РАМН

Автореферат разослан 2003 г.

Ученый секретарь диссертационного совета .

л/ А

кандидат биологических наук О.Т. Кудаева

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Изучение регуляторных механизмов иммунных реакций является одной из важнейших задач современной иммунологии, поскольку понимание этих процессов позволяет судить о функционировании иммунной системы и дает ключи к правильному применению экзогенных модулирующих воздействий. Одними из основных естественных физиологических регуляторов иммунной системы являются глюкокортикоидные гормоны (ГК), которые способны регулировать множество иммунных реакций, в том числе такие процессы, как пролиферация и апоптоз клеток иммунной системы, что в свою очередь определяет дальнейшее развитие иммунного ответа как по клеточному, так и по гуморальному типу.

Не смотря на то, что ГК-зависимый апоптоз интенсивно изучается на протяжении многих лет, его механизм до сих пор окончательно не выяснен. Согласно общепринятой концепции стероидные гормоны осуществляют свое воздействие через клеточный геном, но неизвестно, какие именно гены являются ответственными за выполнение программы ГК-индуцированного апоптоза. В литературе обсуждаются экстрагеномные эффекты стероидных гормонов, в том числе их участие в индукции апоптоза. Но среди этих эффектов не описано влияние ГК на продукцию клетками активированных кислородных метаболитов (АКМ), в частности супероксид-аниона (02") и перекиси водорода. Считается, что ГК подавляют этот вид клеточной активности, при этом влияние гормонов объясняется подавлением экспрессии генов НАДФН-оксидазы, ферментного комплекса, ответственного за быструю продукцию АКМ в ответ на внешние стимулы. В 1986 году было показано стимулирующее влияние ГК на продукцию АКМ фагоцитами селезенки, и был предположен экстрагеномный механизм обнаруженного эффекта [Вольский H.H. и др., 1986]. Однако в литературе нет экспериментальных работ, прямо подтверждающих это предположение. Исходя из

вышеприведенных данных, актуальность выполненной работы связана не только с исследованием предполагаемого экстрагеномного механизма влияния ГК на продукцию АКМ клетками иммунной системы, но и с изучением роли этого свойства ГК в реализации иммунорегуляторных эффектов, в частности апоптоза клеток иммунной системы.

Цель работы и задачи исследования. Исходя из вышеизложенного, целью нашей работы было исследование механизма стимулирующего влияния ГК на 02~-генерирующую активность клеток иммунной системы и роли этого свойства ГК в ГК-индуцированном апоптозе тимоцитов.

Для достижения этой цели были поставлены следующие задачи:

1. Исследовать возможность стимулирующего влияния ГК на 02"-генерирующую активность клеток иммунной системы в условиях, исключающих участие генетического аппарата клеток в опосредовании этого влияния (в бесклеточной системе).

2. Охарактеризовать стимулирующий эффект ГК на НАДФН-оксидазу в зависимости от концентрации гормонов, температуры и срока инкубации, исходного состояния клеток.

3. Изучить возможное участие АКМ в ГК-индуцированном апоптозе тимоцитов путем удаления АКМ из среды культивирования, а также определить конкретный тип АКМ, индуцирующий запуск этой клеточной программы.

4. Изучить влияние ингибиторов НАДФН-оксидазы на интенсивность ГК-индуцированного апоптоза тимоцитов, и таким образом определить роль стимуляции этого фермента гормонами в механизме индукции апоптоза.

Научная новизна. Впервые в экспериментах in vitro было продемонстрировано активирующее влияние ГК на генерацию 02" НАДФН-оксидазой перитонеальных макрофагов в бесклеточной системе, что свидетельствует об их прямом влиянии на активность фермента.

Кроме того доказано участие стимулированной глюкокортикоидами продукции АКМ в механизме ГК-индуцированного апоптоза тимоцитов мыши.

Теоретическая и практическая значимость работы.

Полученные данные приводят к новому "пониманию^механизма-ГК1 индуцированного апоптоза, а также позволяют предположить участие этого свойства ГК в реализации других эффектов ГК на иммунную систему. Стимуляция продукции АКМ и смещение редокс-баланса клеток в сторону окислительного стресса на ранних этапах воздействия ГК должно учитываться при практическом применении этих гормонов в качестве терапевтических средств. В частности, резистентность некоторых лимфоидных опухолей к лечению глюкокортикоидами может быть связана с повышенной активностью антиоксидантных систем клетки.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. ГК прямо влияют на активность НАДФН-оксидазы клеток иммунной системы, стимулируя генерацию АКМ в бесклеточной системе.

2. Стимулирующее влияние ГК на НАДФН-оксидазу клеток иммунной системы является важным звеном в механизме ГК-индуцированного апоптоза тимоцитов.

Апробация работы. Материалы диссертации доложены и обсуждены на: 4-й и 5-й отчетных сессиях ИКИ СО РАМН (Новосибирск, 1996 и 2000 гг.), на 10-ом международном конгрессе иммунологов (Дели, 1998 г.), на II Всероссийском симпозиуме " Хроническое воспаление" (Новосибирск, 2000 г.), на семинаре экспериментального отдела ИКИ СО РАМН (Новосибирск, 2002 г.).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 9 работ.

Объем и структура работы. Диссертация изложена на пч страницах машинописного текста, включающего 29 рисунков, и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования; трех глав, содержащих результаты собственных

исследований, обсуждения, заключения и выводов. Прилагаемая библиография содержит ссылки на 284 источника, из них 15 на русском языке.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Экспериментальные исследования проводились на гибридных мышах-самцах (CBAxC57Bl)F,. Животных получали из питомника клиники животных СО РАМН (пос. Нижняя Ельцовка, г. Новосибирск) и использовали в возрасте от 2 до 6 месяцев. Содержание животных до и в период поведения экспериментов осуществлялось в соответствии с правилами, принятыми Европейской конвенцией по защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и иных научных целей (Страсбург, 1986).

Для получения бесклеточной системы свежевыделенные перитонеальные макрофаги разрушали в гомогенизаторе со стеклянным порошком на льду, полученную смесь центрифугировали и в надосадочной жидкости определяли содержание белка методом Лоури [Кочетов Г.А., 1971]

Активность НАД(Ф)Н-оксидазы определяли двумя стандартными методами, основанными на спектрофотометрической оценке скорости восстановления супероксидным анионом нитросинего тетразолия (HCT, результаты выражали в условных единицах ODxlOOO/lO7 клеток либо на 100 мкг белка) [Вольский H.H., 1987] и СОД-ингибируемого восстановления цитохрома с (результаты выражались в пмоль/мин/107 клеток, используя для пересчета коэффициент абсорбции е = 21,1 шМ*1 cm'1) [Clark R.А., 1987].

Тимоциты культивировались в стандартной культуральной среде, содержащей 5% эмбриональной телячьей сыворотки (5% С02, 37° С). В данных экспериментальных условиях исследовалось влияние на жизнеспособность тимоцитов дексаметазона (KRKA, Словения), каталазы (Serva, USA), дифенилениодониума (Sigma, USA), кромолина (Rhone-

Poulenc, France-USA).

После окончания культивирования жизнеспособность клеток определялась с помощью окрашивания трипановым синим (0,1% раствор). Интенсивность апоптоза определялась с помощью МТТ-теста [Казанский

Д.Б., 1995] и на проточном цитофлюориметре (FACScan, Beston Dickinson) с помощью двойного окрашивания клеток флюоресцеин диацетатом (ФДА) и пропидиум иодидом (ПИ) (ICN, USA) [Kawano М.М., 1995, Ross D.D., 1989]. Принцип последнего метода заключается в различном окрашивании живых, мертвых и апоптозных клеток ФДА и ПИ. Живые клетки окрашиваются только ФДА, так как способны переводить его из нефлюоресцирующей формы во флюоресцирующую благодаря активности внутриклеточных эстераз. Мертвые клетки окрашиваются только ПИ, поскольку ПИ проникает внутрь клетки через повреждения в мембране. Апоптозные клетки не окрашиваются ни ФДА, ни ПИ. Таким образом, данный метод позволяет отдельно оценить количество живых, мертвых и апоптозных клеток в пробе.

Статистическую оценку значимости различий между группами оценивали с помощью непараметрического критерия Вилкоксона-Манна-Уитни, используя программу "Statistica 5.0"

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

Исследование влияния ГК на скорость генерации 02"

мембранной НАДФН-оксидазой клеток в условиях бесклеточной системы.

В наших опытах как гидрокортизон, так и преднизолон

достоверно повышали скорость генерации 02" в бесклеточной системе из перитонеальных макрофагов мыши (Рис. 1). Это увеличение составляло от 52 до 186% в различных экспериментах. Весь прирост скорости генерации 02~ под действием ГК снимался добавлением Cu(Lys)2, хелата меди с супероксидцисмутазной активностью, что свидетельствует о супероксид-

зависимом характере этого процесса (Рис. 2).

Контроль Преднизолон Гидрокортизон

Рисунок 1. Влияние глюкокортикоидных гормонов на продукцию 02" в бесклеточной системе из перитонеальных макрофагов мыши. Преднизолон - 400 цМ, гидрокортизон - 400 цМ. Время инкубации 40 минут. Метод определения: восстановление

нет.

* достоверное отличие от контроля (р < 0,05).

2 4

г к

2 2

О 1

Без Пр. Без Пр.+Си(Ьу5)2

Пр.

Пр.+Си(ЬУ5)2

Рисунок 2. Влияние Си(Ьу5)2 (100 цМ) на скорость продукции 02' в бесклеточной системе из перитонеальных макрофагов мыши. Пр. - 400 цМ преднизолона. Время инкубации - 15 минут. Метод определения: восстановление НСТ.

* достоверное отличие от соответствующего контроля (р < 0,05).

Исследуемый эффект ГК был дозозависимым и проявлялся сразу после добавления гормонов в систему, без какого-либо лаг-периода. (Рис.

3).

£ I400 ф ^

3 §300 = ё £ ^ 200 8 -

I й 100

£ 3

< § О

Рисунок 3. Влияние различных концентраций стероидов (рМ) на скорость продукции 02" в бесклеточной системе из перитонеальных макрофагов мыши. Гладкоокрашенные столбы -пробы с предннзолоном, заштрихованные - пробы с гидрокортизоном. Время инкубации - 40 минут. Метод определения: восстановление

нет.

* достоверное отличие от контроля (р < 0,05).

Поскольку эксперименты проводились в условиях, позволяющих полностью исключить эффекты ГК, опосредованные через клеточный геном, было сделано заключение, что способность ГК стимулировать Ог"-генерирующую активность клеток относится к экстрагеномным эффектам ГК. Продукция 0{ в бесклеточной системе прямо зависела от концентрации белка в пробах, от температуры среды, наличия восстановительных эквивалентов (НАДФН или НАДН), а также от исходного функционального состояния клеток.

Дексаметазон, синтетический аналог ГК, широко используемый в

Контроль 50 100 200 400

Концентрации гормонов, мкМ

экспериментах для индукции апоптоза различных клеток, в том числе тимоцитов, в наших экспериментах в концентрации 100 цМ повышал продукцию 02" как в целых клетках, так и в бесклеточной системе из тимоцитов мыши (Рис. 4а, 46).

•л X

о о о

т< а о

160 140 120 100 80 60 40 20 0

Без Оех

Оех

Рисунок 4а. Влияние дексаметазона (100 цМ) на скорость продукции 02" в целых клетках тимуса мыши. Метод определения: восстановление НСТ.

* достоверное отличие от контроля (р < 0,05).

200 150 100 50 0

Рисунок 4 . Влияние дексаметазона (100 цМ) на скорость продукции 02" в бесклеточной системе из тимоцитов мыши. За 100% принята скорость генерации 02" в гомогенате в отсутствие гормона. Метод определения: СОД-ингибируемое восстановление цитохрома с.

* достоверное отличие от контроля (р < 0,02).

Без Бех

Бех

Продукция 02" составила 270 пмоль/мин/107 клеток в бесклеточной системе из интактных клеток; и 460 пмоль/мин/107 клеток при стимуляции дексаметазоном.

Таким-образом,-впервые-было- показано,-----что - способность----------

глюкокортикоидов повышать 02~-генерирующую активность в бесклеточной системе как из перитонеальных макрофагов, так и из тимоцитов мыши, относится к экстрагеномным эффектам глюкокортикоидных гормонов.

Роль перекиси водорода в дексаметазон-индуцированном апоптозе тимоцитов мыши. Защитный эффект каталазы.

Согласно нашему предположению, свойство ГК стимулировать продукцию АКМ клетками может опосредовать, по крайней мере частично, иммунорегуляторные эффекты этих гормонов. В наших экспериментах добавление каталазы, фермента, удаляющего из среды культивирования перекись водорода, достоверно ингибировало дексаметазон-индуцированный апоптоз тимоцитов мыши. (Рис. 5, 6)

о4

е100 рп

* 80 _•

I 60

¡40- * :

1 20- Г~~1 S

О , .......

т о ---,---,---.---

¡^ Контроль Дексаметазон Каталаза Кат+Декс

Рисунок 5. Влияние каталазы (100 U/ml) на ГК-индуцированный апоптоз тимоцитов мыши. Концентрация дексаметазона - 100 цМ. Время инкубации - б часов. За 100% принято количество живых клеток в контроле. Определение на проточном цитофлюориметре с помощью двойного окрашивания.

* достоверное отличие от контроля (р < 0,05).

Время, часы

Рисунок 6. Влияние каталазы на интенсивность апоптоза тимоцитов мыши, индуцированного дексаметазоном. 1 - контроль, 2 -тимоциты + 100 цМ дексаметазона, 3 - тимоциты + 500 U/ml каталазы, 4 - тимоциты + 100 цМ дексаметазона + 500 U/ml каталазы. За 100% принято количество жизнеспособных клеток в контроле сразу после выделения. Метод определения: восстановление МТТ жизнеспособными клетками.,

* достоверное отличие от соответствующего контроля (р < 0,05) ** достоверное отличие от соответствующего контроля (р < 0,001)

Поскольку содержание сыворотки в культуральной среде было снижено до 5%, в контрольных пробах происходил интенсивный спонтанный апоптоз тимоцитов. Добавление каталазы к пробам без гормона достоверно ингибировало этот вид клеточной гибели. То, что каталаза защищала клетки как при гормон-индуцированном, так и при спонтанном апоптозе убедительно свидетельствует об участии перекиси водорода в этих процессах. Таким образом, описанные эксперименты доказывают зависимость ГК-индуцированного апоптоза от присутствия в среде инкубации АКМ, в частности, Н202.

Влияние ингибиторов НАДФН-оксидазы на дексаметазон-индуцированный апоптоз тимоцитов мыши.

Как описано выше, было показано, что:

1) ГК стимулируют АКМ-продуцирующую активность клеток, в том числе клеток тимуса мыши. 7

2) Удаление Н202 из среды инкубации резко ингибирует глюкокортикоид-зависимый апоптоз.

Для того, чтобы доказать, что эти факты являются звеньями единого механизма, опосредующего индукцию апоптоза тимоцитов гормонами, было исследовано влияние ингибиторов НАДФН-оксидазы, на интенсивность ГК-зависимого апоптоза тимоцитов мыши. Было показано, что блокада этого фермента ингибиторами дифенилениодониумом и кромолином вызывает достоверное (р < 0,01) снижение интенсивности дексаметазон-индуцированного апоптоза, причем классический ингибитор НАДФН-оксидазы дифенилениодониум в концентрации 2 цМ полностью подавлял ГК-зависимый апоптоз клеток, снижая количество апоптозных клеток до контрольных значений (Рис. 7, 8)

Таким образом, полученные в данной работе экспериментальные результаты убедительно свидетельствуют, что стимулирующее влияние ГК на НАДФН-оксидазный ферментный комплекс является ключевым звеном в механизме индукции этими гормонами апоптоза. Это позволяет предположить участие данного свойства ГК в регуляции различных иммуннных реакций и, следовательно, предлагает новые подходы к модуляции влияния ГК на иммунную систему.

Коетроль Дексаметазон

мертвье мертвые

алогтгоз 1уа 6%

16% лЧЯИ алогтгоз живые

иивье

77%

Ш 0,1 >кМ мертвые ало1тгоз 4у0 живые 77% 1)1 ОД мкМ+Оех мертвые 8% алолтоз — живые ^---62%

ЕНО^лкМ мертвые апоптоз 8,4 жнеье 76% К 0,5 мс№0« мертвье апоптог 5% 21% „,м хмвые 74%

М 2«сМ I* 2**сМЧ)ех

апоптоз 13% £ мертвье 7% мертвье алоптоз 4«/в

С; г_ и«вые живье

80% 81%

Рисунок 7. Влияние различных концентраций дифенилениодониума на интенсивность ГК-индуцированного апоптоза тимоцитов мыши. Концентрация дексаметазона - 100 цМ. Время инкубации - 6 часов. Определение на проточном цитофлюориметре с помощью двойного окрашивания.

Контроль

Дексяметзэон

мертвые ТА

Кромолин Дексаметазон +

Кромолин

мертвьс мертвые

апоптоз 6°/о 10%

апоптоз 25%

здме 65%

80%

Рисунок 8. Влияние кромолина (50 цМ) на интенсивность ГК-индуцированного апоптоза тимоцитов мыши. Концентрация дексаметазона -100 рМ. Время инкубации - 6 часов. Определение на проточном цитофлюориметре с помощью двойного окрашивания.

ВЫВОДЫ

1. Глюкокортикоидные гормоны, в частности, гидрокортизон, и их синтетические аналоги, преднизолон и дексаметазон, оказывают стимулирующее влияние на мембранную НАДФН-оксидазу перитонеальных макрофагов и макрофагов тимуса мыши в бесклеточной системе, увеличивая скорость генерации супероксидного аниона, что свидетельствует о прямом действии гормонов на активность фермента.

2. Каталаза, разлагая перекись водорода, ингибирует индуцированный дексаметазоном апоптоз тимоцитов мыши, что доказывает участие Н202 в механизме глюкокортикоид-зависимого апоптоза.

3. Перекись водорода участвует в механизме спонтанного апоптоза тимоцитов мыши in vitro, что подтверждается ингибирующим влиянием каталазы на этот процесс.

4. Стимуляция пнекокортикоидными гормонами НАДФН-оксидазы является необходимым звеном в механизме индукции апоптоза тимоцитов пнекокортикоидами, поскольку ингибирование активности этого фермента как дифенилениодониумом, так и кромолином подавляет апоптоз, индуцированный дексаметазоном.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Persijanova V.O., Volsky N.N., Kozlov V.A. Glucocorticoids increase NADPH oxidase activity in cell-free system // 27th Scand. Soc. Immunol. Meet. Abstracts. - Turku, 1996. - p. 731

2. Персиянова В.О., Вольский Н.Н. Стимулирующее влияние пнекокортикоидов на активность НАД(Ф)Н-оксидазы макрофагов мыши в бесклеточной системе // Клинические и экспериментальные исследования молодых ученых СО РАМН. Сборник тезисов. - Новосибирск. - 1996. - с. 93

3. Персиянова В.О. Участие активированных кислородных метаболитов в апоптозе тимоцитов, индуцированном пнекокортикоидными гормонами // ИКИ СО РАМН. Научный отчет 1996. - Новосибирск. - 1997. - с. 42

4. Вольский Н.Н., Персиянова В.О., Гребенщиков А.Ю., Козлов В.А. Участие АКМ в индуцированном глюкокортикоидами апоптозе тимоцитов мыши // Иммунология. - 1998. - N 5. - с. 44-46

5. Persianova V.O., Volsky N.N., Grebenschikov A.Yu., Kozlov V.A. The involvement of reactive oxygen species in glucocorticoid-induced apoptosis of lymphocytes // 10th Intern. Congr. Immunol. - The immunologist. -1998.-Suppl. I.-p. 543

6. Вольский H.H., Персиянова B.O., Козлов В.А. Ингибитор НАДФН-оксидазы дифенилениодониум подавляет апоптоз тимоцитов,

индуцированный глюкокортикоидами // II съезд иммунологов России. Сочи, 1999. - Russ. J. Immunol. - 1999. - v. 4. - Suppl. 1. - с. 31

7. Вольский H.H., Персиянова В.О. Глюкокортикоидные гормоны и окислительный стресс // Фундаментальные и клинические аспекты

хронического воспаления. Тезисы докладов II Всероссийского--------

симпозиума "Хроническое воспаление". - Новосибирск. - 2000. - с. 87

8. Персиянова В.О., Вольский Н.Н., Киселев С.В. Ключевая роль НАД(Ф)Н-оксидазы в индукции апоптоза тимоцитов глюкокортикоидными гормонами // ИКИ СО РАМН. Научный отчет 2000. - Новосибирск. - 2000 - с. 99

9. Volsky N.N., Persijanova V.O., Kozlov V.A. Membrane NADPH oxidase and hormonal regulation of the immunocompetent cell functional activity. //Russ. J. Immunol. - 2001. - v. 6. - N 2. - p. 148-156

Оглавление диссертации Персиянова, Вера Олеговна :: 2003 :: Новосибирск

Список сокращений.

Введение.

Глава 1. Обзор литературы.

1.1. Индукция апоптоза как один из путей регуляторных влияний ГКГ на иммунную систему. Механизм глюкокортикоид-зависимого апоптоза - концепции и противоречия.

1.2. Активные кислородные метаболиты. Антиоксидантные системы клетки. Окислительный стресс.

1.3. Источники АКМ в клетке. НАДФН-оксидаза плазматической мембраны, структура и регуляция.

1.4. НАДФН-оксидаза нефагоцитирующих клеток. АКМ как вторичные мессенджеры.

1.5. Роль АКМ в пролиферативных процессах.

1.6. Роль АКМ в различных видах апоптоза.

1.7. Роль АКМ в глюкокортикоид-зависимом апоптозе.

Глава 2. Материалы и методы.

Глава 3. Результаты собственных исследований.

3.1 Исследование влияния ГКГ на скорость генерации Ог" мембранной НАДФН-оксидазой клеток в условиях бесклеточной системы.

3.2 Роль перекиси водорода в механизме дексаметазон-индуцированного апоптоза тимоцитов мыши. Защитный эффект каталазы.

3.3 Влияние ингибиторов НАДФН-оксидазы на дексаметазон-индуцированный апоптоз тимоцитов мыши.

Глава 4. Обсуждение полученных результатов. 73 Заключение. 89 Выводы. 94 Литература.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

БНЕА - дегидроэпиандростерон

РС8 - эмбриональная телячья сыворотка

Ог - супероксидный радикал

ТвР- трансформирующий ростовой фактор

АКМ - активные кислородные метаболиты

ГКГ - глюкокортикоидные гормоны

ДФИ - дифенилениодониум

ИЛ - интерлейкин

ИФН - интерферон

Кон А - конканавалин А

ЛПС - липополисахарид

ПОЛ - перекисное окисление липидов

РТПХ - реакция трансплантат против хозяина

СКЛ - смешанная культура лимфоцитов

СОД - супероксиддисмутаза

ФГА - фитогемагглютинин

ФМА - форбол миристат ацетат

ФНО - фактор некроза опухоли

Введение диссертации по теме "Аллергология и иммулология", Персиянова, Вера Олеговна, автореферат

Иммунная система, в связи с ее сложной структурой и разнообразными функциями, предполагает наличие сложной и многоуровневой регуляции. Исходя из этого, изучение регуляторных механизмов является одной из важнейших задач современной иммунологии, поскольку понимание этих процессов позволяет судить о функционировании иммунной системы и дает ключи к правильному применению экзогенных модулирующих воздействий.

Среди довольно большего перечня клеточных реакций особое значение имеет баланс таких процессов, как пролиферация и апоптоз клеток иммунной системы, так как именно эти процессы определяют дальнейшее развитие иммунного ответа как по клеточному, так и по гуморальному типу. И если регуляции пролиферативных процессов посвящается огромное количество работ на протяжении нескольких десятков лет, то интенсивное изучение регуляции и механизмов апоптоза началось сравнительно недавно. И только в последние несколько лет большой интерес исследователей стал привлекать тот факт, что как апоптоз, так и пролиферативные реакции являются звеньями одного процесса - они представляют собой различные программы клеточного ответа на активацию. Исходя из этой концепции становится понятным, почему один и тот же стимул может индуцировать оба эти процесса. В связи с этим особое внимание уделяется регуляторным механизмам, лежащим в основании выбора клеткой способа реагирования на стимул.

С этой точки зрения взгляд на роль в этих процессах АКМ претерпел значительные изменения. Если раньше эти соединения рассматривались в основном как побочные продукты жизнедеятельности клеток, способные вызывать различные повреждения, и, пожалуй, только в случае клеток-фагоцитов находили свое полезное применение в уничтожении патогенных микроорганизмов, то на сегодняшний день АКМ отводится важная роль вторичных мессенджеров в пролиферации, дифференцировке и апоптозе клеток иммунной системы [226].

В последние годы все большее значение придается редокс-состоянию клеток на момент воздействия каких-либо регуляторных факторов, а также изменению этого баланса под влиянием различных агентов. Например, высказывается предположение, что при смещении внутриклеточного редокс-баланса в сторону преобладания антиоксидантов клетки лимфомы могут быть резистентными к химиотерапии [260], и наоборот. Поскольку многие противораковые препараты убивают опухолевые клетки посредством индукции апоптоза [105], это свидетельство является еще одним доводом в пользу регуляторной роли АКМ в механизме запрограммированной клеточной гибели.

Особое место в регуляции иммунной системы занимают гормоны коры надпочечников - кортикостероиды. ГКГ являются одним из важнейших классов иммунорегуляторных и противоопухолевых препаратов, поскольку обладают свойством индуцировать апоптоз различных типов клеток. Еще в 1968 году было отмечено, что изменения в ядрах лимфоцитов после воздействия кортизола идентичны реакции лимфоцитов на ионизирующую радиацию [271]. Как выяснилось впоследствии, оба эти агента способны вызывать апоптоз. И в тоже время механизм индуцированного ГКГ апоптоза остается до конца неясным, несмотря на то, что известно более десятка генов, задействованных в этом виде апоптоза. До сих пор во вступлении к большинству статей по данной теме авторы отмечают, что события, происходящие после транслокации рецептор/стероидного комплекса в ядро и перед совершением клеткой "самоубийства" остаются до конца неясными [260].

Имеющиеся в литературе на настоящий момент данные о ключевом вопросе нашей работы - взаимоотношении ГКГ с АКМ -весьма противоречивы, и в основном касаются прямого йнгибирующего воздействия [265], либо опосредованного через подавление экспрессии генов НАДФН-оксидазы [72, 159] (ферментного комплекса, ответственного за быструю генерацию АКМ в ответ на внешние стимулы) снижения этой активности, то есть антиоксидантных свойств ГКГ. В последние годы параллельно с этой точкой зрения стали появляться работы, касающиеся непрямого влияния ГКГ на редокс-баланс клеток путем подавления антиоксидантных систем, что сдвигает этот баланс в сторону преобладания прооксидантов, то есть окислительного стресса, и обсуждается участие этого эффекта в механизме ГК-индуцированного апоптоза. В 1986 году в нашей лаборатории были получены экспериментальные данные, свидетельствующие о стимуляции ГКГ Ог'-генерирующей активности клеток [1, 2]. Так как гидрокортизон в экспериментах in vitro повышал продукцию АКМ клетками-фагоцитами селезенки в ранние сроки, наблюдаемый феномен не укладывался в общепринятое понимание механизмов действия ГКГ, и в связи с этим было сделано предположение об экстрагеномной природе наблюдаемого эффекта. С тех пор каких-либо сведений, касающихся этого свойства ГКГ, в литературе обнаружить не удалось, хотя появилось множество публикаций, описывающих АКМ в роли вторичных мессенджеров в различных иммунофизиологических реакциях [101, 169, 177, 183, 186, 188, 199, 231]. При внимательном изучении этих работ можно обнаружить, что АКМ и ГКГ довольно тесно связаны, так как принимают участие в регуляции одних и тех же процессов, и обнаруженное свойство ГКГ стимулировать продукцию клетками АКМ не только не противоречит имеющемуся на сегодняшний день пониманию вызываемых ГКГ реакций, но скорее дополняет его, объясняя некоторые "белые пятна". Б связи с этим актуальность выполненной работы связана не только с исследованием предполагаемого экстрагеномного механизма влияния ГКГ на продукцию АКМ клетками иммунной системы, но и с изучением роли этого свойства ГКГ в реализации иммунорегуляторных эффектов, в частности апоптоза клеток иммунной системы.

Целью данной работы является исследование механизма стимулирующего влияния ГКГ на Ог'-генерирующую активность клеток иммунной системы и роли этого свойства ГКГ в ГК-индуцированном апоптозе тимоцитов.

Для достижения этой цели были поставлены следующие задачи:

1. Исследовать возможность стимулирующего влияния ГКГ на О2" -генерирующую активность клеток иммунной системы в условиях, исключающих участие генетического аппарата клеток в опосредовании этого влияния (в бесклеточной системе).

Научная новизна полученных данных состоит в том, что впервые в экспериментах in vitro было продемонстрировано активирующее влияние ГКГ на генерацию 02" НАДФН-оксидазой перитонеальных макрофагов в бесклеточной системе, что свидетельствует об их прямом влиянии на активность фермента. Кроме того доказано участие стимулированной глюкокортикоидами продукции АКМ в механизме ГК-индуцированного апоптоза тимоцитов мыши.

Теоретическая и практическая значимость. Полученные данные приводят к новому пониманию механизма ГК-индуцированного апоптоза, а также позволяют предположить участие обнаруженного свойства ГКГ в реализации других эффектов ГКГ на иммунную систему. Стимуляция продукции АКМ и смещение редокс-баланса клеток в сторону окислительного стресса на ранних этапах воздействия ГКГ должно учитываться при практическом применении этих гормонов в качестве терапевтических средств. В частности, резистентность некоторых лимфоидных опухолей к лечению глюкокортикоидами может быть связана с повышенной активностью антиоксидантных систем клетки.

Положения, выносимые на защиту:

- ГКГ прямо влияют на активность НАДФН-оксидазы клеток иммунной системы, стимулируя генерацию АКМ в бесклеточной системе.

- Стимулирующее влияние ГКГ на НАДФН-оксидазу клеток иммунной системы является важным звеном в механизме ГК-индуцированного апоптоза тимоцитов.

Заключение диссертационного исследования на тему "НАДФН-оксидазная активность клеток иммунной системы и ее роль в глюкокортикоид-зависимом апоптозе тимоцитов"

ВЫВОДЫ

1. Глюкокортикоидные гормоны, в частности, гидрокортизон, и их синтетические аналоги, преднизолон и дексаметазон, оказывают стимулирующее влияние на мембранную НАДФН-оксидазу перигонеальных макрофагов и макрофагов тимуса мыши в бесклеточной системе, увеличивая скорость генерации супероксидного аниона, что свидетельствует о прямом действии гормонов на активность фермента.

2. Каталаза, разлагая перекись водорода, ингибирует индуцирозанный дексаметазоном апоптоз тимоцитов мыши, что доказывает участие Н2О2 в механизме глюкокортикоид-зависимого апоптоза.

4, Стимуляция глюкокортикоидными гормонами НАДФН-оксидазы является необходимым звеном в механизме индукции апоптоза тимоцитов глюкокортикоидами, поскольку ингибирование активности этого фермента как дифенилениодониумом, так и кромолином подавляет апоптоз, индуцированный дексаметазоном.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Исследования, проведенные в рамках данной работы, можно разделить на два этапа. Эксперименты первого этапа были направлены на доказательство экстрагеномной природы стимулирующего влияния ГКГ на активность НАДФН-оксидазы клеток иммунной системы. Далее изучалось участие этого свойства глюкокортикоидов в механизме индукции ими апоптоза тимоцитов мыши. С этой целью эксперименты, описанные в первой главе, проводились в условиях in vitro в бесклеточной системе, что позволяло полностью исключить механизмы действия стероидных гормонов через генетический аппарат клетки.

Поскольку выбранный нами вариант бесклеточной системы отличался от аналогов, используемых в большинстве работ сходной тематики, известных нам из литературы, в первую очередь были исследованы свойства нашей экспериментальной системы и доказана адекватность ее использования для оценки стимулирующего влияния

ГКГ на генерацию СЬ в бесклеточной системе.

Проведенные эксперименты показали, что все исследованные глюкокортикоидные гормоны - гидрокортизон и его синтетические водорастворимые аналоги преднизолон и дексаметазон - повышают генерацию СЬ на 52 - 187% как в бесклеточной системе из клеток перитонеального экссудата, так и в бесклеточной системе из тимоцитов мыши. Полученные данные свидетельствуют о том, что:

1. Исследуемое свойство ГКГ относится к экстрагеномным эффектам стероидных гормонов;

2. Клетки тимуса способны отвечать усилением генерации СЬ на внешние стимулирующие воздействия, что, в свою очер^ть, позволяет предположить участие АКМ в ГК-индуцированном апоптозе тимоцитов.

Стимулирующее влияние ГКГ было дозозависимым и возникало сразу после добавления гормонов в систему, без какого-либо лаг-периода, что является дополнительным свидетельством экстрагеномной природы этого эффекта. Еще одним доводом в пользу того, что ГКГ действуют именно на НАДФН-оксидазу клеток, послужили результаты экспериментов с бесклеточной системой из активированных перитонеальных макрофагов, которые показали, что относительное увеличение скорости продукции СЬ в бесклеточной системе из активированных клеток было меньше (57%), чем в бесклеточной системе из интактных макрофагов (166%). Этот факт свидетельствует, что предварительно активированный фермент хуже поддается дополнительной стимуляции.

Наблюдаемое влияние ГКГ на увеличение скорости восстановления НСТ и цитохрома с, с помощью которых мы оценивали скорость продукции О2 в наших опытах, происходило именно за счет О2, поскольку полностью ингибировалось Си(Ьуз)2, хелатом меди с супероксиддисмутазной активностью.

Таким образом, на первом этапе исследований было показано, что ГКГ на ранних сроках воздействия повышают продукцию клетками СЬ , стимулируя активность НАДФН-оксидазы, и впервые доказан экстрагеномный механизм этого явления.

Следующий этап работы был посвящен изучению роли стимулированной ГКГ продукции АКМ клетками в ГК-зависимом апоптозе тимоцитов в клеточнс-й культуре. В опытах с использованием каталазы в качестве антиоксиданта, удаляющего перекись водорода из среды культивирования, было обнаружено, что каталаза достоверно ингибирует дексаметазон-индуцированный апоптоз тимоцитов мыши при различных концентрациях дексаметазона. Этот эффект каталазы был показан разными методами определения жизнеспособности и апоптотический гибели клеток - с использованием трипанового синего, восстановления МТТ и на проточном цитофлюориметре с помощью двойного окрашивания. Защитное свойство каталазы в пробах с дексаметазоном проявлялось уже через 4 часа от начала инкубации, и сохранялось в течение суток.

Чтобы устранить нежелательные для наших экспериментов защитные свойства сыворотки, была использована низкая концентрация РСБ в культуральной среде. В свя">и с этим клетки в контрольных пробах подвергались спонтанному апоптозу. Этот вид апоптоза также регистрировался уже через 4 часа от начала инкубации и ингибировался с помощью каталазы, что доказывает участие в его механизме перекиси водорода. Результаты этой серии экспериментов свидетельствуют, что :

1. Стимулированная ГКГ продукция АКМ клетками играет ключевую роль в дексаметазон-индуцированном апоптозе тимоцитов.

2. Именно перекись водорода является медиатором этого вида клеточной гибели.

Поскольку мы показали, что ГКГ способны стимулировать генерацию СЬ клетками, и доказали участие АКМ в ГК-зависимом апоптозе, логично было предположить, что блокада самого НАДФН-оксидазного комплекса должна отменить, или по меньшей мере снизить интенсивность ГК-индуцированного апоптоза тимоцитов.

В опытах с использованием ингибиторов НАДФН-оксидазы было показано, что дифенилениодониум и кромолин достоверно снижают интенсивность дексаметазон-индуцированного апоптоза тимоцитов. Основаниями для выбора именно этих игнибиторов были следующие -дифенилениодониум является классическим ингибитором НАДФН-оксидазы и используется в большинстве известных нам работ по этой теме. Кромолин, или кромогликат натрия, является не только ингибитором сборки НАДФН-оксидазного комплекса, но и официнальным лекарственным препаратом, используемым в клинике при лечении бронхиальной астмы. Влияние дифенилениодониума было дозозависимым, и в концентрации 2 цМ он полностью блокировал ГКГ-зависимый апоптоз тимоцитов, влияние кромолина было менее выраженным.

Исходя из того, что блокада ферментного комплекса, ответственного за быструю генерацию АКМ в ответ на внешние воздействия, полностью отменяет ГК-зависимый апоптоз тимоцитов, было сделано заключение, что в механизме индукции ГКГ апоптоза их способность стимулировать активность НАДФН-оксидазы клеток играет ключевую роль.

Таким образом, полученные в нашей работе данные о прямом, экстрагеномном механизме активации глюкокортикоидами НАДФН-оксидазного комплекса клеток иммунной системы, и о роли этого механизма в ГК-зависимом апоптозе тимоцитов мыши, позволяют предположить участие этого свойства ГКГ в регуляции других иммунологических феноменов и, следовательно, предлагают новые подходы к модуляции эффектов ГКГ на иммунную систему.

Список использованной литературы по медицине, диссертация 2003 года, Персиянова, Вера Олеговна

1. Вольский H.H. Продукция супероксидного радикала фагоцитирующими клетками селезенки и ее связь с гуморальным иммунным ответом // Автореферат на соискание ученой степени кандидата мед. наук. Новосибирск, 1987

2. Вольский H.H., Козлов В.А., Лозовой В.П. Влияние гидрокортизона на продукцию супероксидного радикала фагоцитирующими клетками селезенки // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 1987. - Т. 103. - N 6. -с. 694-696

3. Гамалей И.А., Клюбин И.В. Перекись водороде как сигнальная молекула // Цитология. 1996. - Т. 38, N 12. - с. 1233-1247

4. Гамалей И.А., Клюбин И.В., Арнаутова И.П., Кирпичникова K.M. Пострецепторное образование активных форм кислорода в клетках, не являющихся профессиональными фагоцитами // Цитология. 1999. - т. 41. - № 5. - с. 394-399

5. Зенков Н.К., Ланкин В.З., Меньщикова Е.Б. Окислительный стресс. Биохимический и патофизиологический аспекты. // Москва, МАИК "Наука/интерпериодика", 2001. 343 с.

6. Карсонова М.И., Пинегин Б.В. Хемилюминесценция спленоцитов под влиянием различных митогенных стимулов // Молекулярная генетика, микробиология и вирусология. 1985. - N. 9. - с. 36-38

7. Клюбин И.В., Гамалей И.А. НАДФН-оксидаза специализированный ферментативный комплекс для образования активных метаболитов кислорода // Цитология. 1997. - Т. 39. -N. 4/5. - с. 320-340

8. Клюбин И.В., Кирпичникова K.M., Арцыбашева И.И., Гамалей И.А. Зависимость изменения мембранного потенциалафибробластов при действии перекиси водорода от ее внутриклеточной концентрации // Цитология. 1999. - т. 41. - № 3/4. - с. 279

9. Маянский А.Н., Маянский Д.Н. Очерки о нейтрофиле и макрофаге. Новосибирск: Наука, 1989.

10. Меньщикова Е.Б., Зенков Н.К., Шергин С.М. Биохимия окислительного стресса. Оксиданты и антиоксиданты // Новосибирск: Изд. СО РАМН, 1994. 203 с.

11. Селятицкая В.Г., Обухова JI.A. Эндокринно-лимфоидные отношения в динамике адаптивных процессов // Новосибирск, СО РАМН.-2001.- 168 с.

12. Сергеев П.В., Духанин А.С. Роль мембранотропных эффектов глюкокортикоидов в реализации их фармакологической активности // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 2002. - Т. 134. - N 9. - с.244-253

13. Скардс И.В. Активация лейкоцитов. Рига: Зинатне. 1968

14. Abate С., Patel L., Rauscher F.J., Curran Т. Redox regulation of fos and jun DNA-binding activity in vitro // Science. 1990. - V. 249. - p. 1157-1161

15. Abe N., Okamura N., Ishibashi S. Properties of NADPH oxidase in specific granule-rich fraction prepared from guinea pig neutrophils // Biol Pharm Bull. 2000. - May;23(5). - p. 537-541

16. Abid M.R., Kachra Z., Spokes K.C., Aird W.C. NADPH oxidase activity is required for endothelial cell proliferation and migration // FEBS Lett. 2000. - V. 486. - p. 252-256.

17. Abramson S.L., Gallin J.I. IL-4 inhibits superoxide production by human mononuclear phagocytes // J Immunol. 1990. - Jan 15; 144(2).- p. 625-630

18. Alam K., Ali A., Ali R. The effect of hydroxyl radical on the antigenicity of DNA // FEBS Lett. 1993. - Vol. 319. - p. 66-70

19. Albers D.S., Beal M.F. Mitochondrial dysfunction and oxidative stress in aging and neurodegenerative diseases // J. Neural. Transm. Suppl. 2000. - V. 59. - p. 133-154

20. Allan I.M., Lunec J., Salmon M., Bacon P.A. Reactive oxygen species selectively deplete normal T lymphocytes via a hydroxyl radical dependent mechanism // Scand J Immunol. 1987. - V. 26( 1).- p. 47-53

21. Allen R.C., Yevich S.J., Orth R.W., Steele R.H. The superoxide anion and singlet molecular oxygen: their role in the microbicidal activity of the polymorphonuclear leukocyte // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1974. - V. 6. - N 3. - p. 909-917

22. Amstad P.A., Liu H., Ichimiya M., Berezesky I.K., Trump B.F., Buhimschi I.A., Gutierrez P.L. BCL-2 is involved in preventing oxidant-induced cell death and in decreasing oxygen radical production // Redox. Rep. 2001. - V. 6(6). - p. 351-362

23. Andreau K., Lemaire C., Souvannavong V., Adam A. Induction of apoptosis by dexamethasone in the B cell lineage // Immunopharmacology. 1998. - Jul;40(l). - p. 67-76

24. Anneren S. Measurement of nitric oxide in biological models // FASEB J. 1993. - Vol. 7. - p. 349-360

25. Aragno M., Namagno E., Gatto V., Brignardello E., Parola S., Danni O., Boccuzzi G. Dehydroepiandrosterone protects of streptozotocin-treated rats against oxidative stress // Free Radic Biol Med. 1999. -V. 26.-N11-12.-p. 1467-1474

26. Arai Y., Nakamura Y., Inoue F., Yamamoto K., Saito K., Furusawa S. Glucocorticoid-induced apoptotic pathways in eosinophils: comparison with glucocorticoid-sensitive leukemia cells // Int J Hematol. 2000. - Jun;71(4). - p. 340-349

27. Araneo B., Daynes R. Dehydroepiandrosterone functions as more than an antiglucocorticoid in preserving immunocompetence after thermal injury // Endocrinology. 1995. - V. 136 N 2. - p. 393-401

28. Arnal J.F., Tack I., Besombes J.P., Pipy B., Negre-Salvayre A. Nitric oxide and superoxide anion production during endothelial cell proliferation // Am. J. Physiol. 1996. - Nov;271(5 Pt 1). - p. 1521-1526

29. Ashraf J., Thompson E.B. Identification of the activation-labile gene: a single point mutation in the human glucocorticoid receptor presents as two distinct receptor phenotypes //Mol. Endocrinol. 1993. -May;7(5). - p. 631-642

30. Ashwell J.D., Lu F.W., Vacchio M.S. Glucocorticoids in T cell development and function // Annu. Rev. Immunol. 2000. - V. 18. -p. 309-345

31. Baehner R.L., Murrmann S.K., Davis J., Johnoton R.B. The role of superoxide anion and hydrogene peroxide in phagocytosis-associated oxidative metabolic reactions // J. Clin. Invest. 1975. - V. 56. - N 3. -p. 571-576

32. Baeuerle P.A., Baltimore D. Molecular aspekts of Cellular Regulation, Hormonal Control Regulation of Gene Transcription. // In Cohen P. and Foulker J.G. (eds). 1991. - Elsevier/North Holland Biomedical Press, Amsterdam. - p. 409-432

33. Baker A., Payne C.M., Briehl M.M., Powis G. Thioredoxin, a gene found overexpressed in human cancer, inhibits apoptosis in vitro and in vivo // Cancer. Res. 1997.- Nov 15;57(22). - p. 5162-5167

34. Baughman G., Harrigan M., Campbell N., Nurrish S., Bourgeois S. Genes newly identified as regulated by glucocorticoids in murine thymocytes // Mol. Endocrinol. 1991. - V. 5. - p. 637-644

35. Baughman G., Lesley J., Trotter J., Hyman R., Bourgeois S. Tcl-30, A new T cell-specific gene expressed in immature glucocorticoid-sensitive thymocytes //J. immunol. 1992. - V. 149. - p. 1488-1496

36. Berger C.E., Horrocks B.R., Datta H.K. Direct non-genomic effect of steroid hormones on superoxide anion generation in the bone resorbing osteoclasts // Mol. Cell. Endocrinol. 1999. - Mar 25; 149(1-2). - p. 53-59

37. Bhaskaran G., Nii A., Sone S., Ogura T.J. Differential effects of interleukin-4 on superoxide anion production by human alveolar macrophages stimulated with lipopolysaccharide and interferon-gamma // Leukoc, Biol. 1992. - Aug;52(2). - p. 218-223

38. Blotta M.H., DeKruyff R.H., Umetsu D.T. Corticosteroids inhibit IL-12 production in human monocytes and enhance their capacity to induce IL-4 synthesis in CD4+ lymphocytes // J Immunol. 1997. -Jun 15;158(12). - p. 5589-5595

39. Bonnefont-Rousselot D., Lacomblez L., Jaudon M., Lepage S., Salachas F., Bensimon G., Bizard C., Doppler V., Delattre J., Meininger V. Blood oxidative stress in amyotrophic lateral sclerosis // J. Neurol. Sci. 2000. - V. 178(1). - p. 57-62

40. Borski R.J. Nongenomic membrane actions of glucocorticoids in vertebrates // Trends Endocrinol. Metab. 2000. - Dec;ll(10). - p. 427-436

41. Bras A., Albar J.P., Leonardo E., de Buitrago G.G., Martinez-A C. Ceramide-induced cell death is independent of the Fas/Fas ligand pathway and is prevented by Nur77 overexpression in A20 B cells. // Cell. Death. Differ. 2000. - Mar;7(3). - p. 262-271

42. Briehl M. M., Baker A.F. Modulation of the antioxidant defence as a factor in apoptosis // Death and Differentiation. 1996. - V. 3. - p. 6370

43. Briehl M.M., Baker A.F., Siemankowski L.M., Morreale J. Modulation of antioxidant defenses during apoptosis // Oncol. Res. -1997.-V. 9(6-7).-p. 281-285

44. Burdon R.H., Rice-Evans C. Free radicals and the regulation of mammalian cell proliferation // Free Radic. Res. Commun. 1989. -V. 6.-p. 345-358

45. Bustamante J., Slater A.F., Orrenius S. Antioxidant inhibition of thymocyte apoptosis by dihydrolipoic acid // Free Radic. Biol. Med. -1995.-V. 19(3).-p. 339-347

46. Bustamante J., Tovar A., Montero G., Boveris A. Early redox changes during rat thymocytes apoptosis // Arch. Biochem. Biophys. -1997.-V. 337.-p. 121-128

47. Buttgereit F. Mechanisms and clinical relevance of nongenomic glucocorticoid actions // Z. Rheumatol. 2000. - 59 Suppl 2:11/. - p. 119-123.

48. Buttgereit F., Scheffold A. Rapid glucocorticoid effects on immune cells 11 Steroids. 2002. - V. 67(6). - p. 529-534

49. Buttke T.M., Sandstrom P. A. Oxidative stress as a mediator of apoptosis // Immunol. Today. 1994. - V. 15. - p. 7-10

50. Byczkowski J. Z., Gessner T. Biological role of superoxide ion-radical // Int. J. Biochem. 1988. - Vol. 20. - p. 569-580.

51. Canning M.O., Grotenhuis K., de Wit H.J., Drexhage H.A. Opposing effects of dehydroepiandrosterone and dexametasone on the generation of monocyte-derived dendritic cells // Eur. J. Endocrinol. -2000.-V. 143.-N5.-p. 687-695

52. Caron-Leslie L., Cidlowski J. Evaluation of the role of protein sinthesis inhibition in apoptosis in glucocorticoid sensitive and glucocorticoid resistant S49 cells // Endocr. J. 1994. - V. 2. - p. 4752

53. Chetty M., Thrasher A.J., Abo A., Casimir C.M. Low NADPH oxidase activity in Epstein-Barr-virus-immortalized B-lymphocytes is due to a post-transcriptional block in expression of cytochrome b558 // Biochem. J. 1995. - V. 306. - p. 141-145

54. Chiaramonte R., Bartolini E., Riso P., Calzavara E., Erba D., Testolin G., Comi P., Sherbet G.V. Oxidative stress signalling in the apoptosis of Jurkat T-lymphocytes // J. Cell. Biochem. 2001. - V. 82(3). - p. 437-344

55. Chini C.C.S., Chini E.N., Williams J.M. et al. Formation of reactive oxygen metabolites in glomeruli is suppressed by inhibition of cAMP phosphodiesterase isozime type IV // Kidney Int. 1994. - Vol. 46. - p. 28-36

56. Claman H.N., Moorhead J.W., Benner W.H. Corticosteroids and lymphoid cells in vitro. I. Hydrocortisone lysis of human, guinea pig,and mouse thymus cells // The Journal of Laboratory and Clinical Medicine. -1971. V. 78. - N 4. - p. 499-507

57. Clark R.A., Leidal K.G., Pearson D.W., Nauseef W.M. NADPH oxidase of human neutrophils. Subcellular localization and characterization of an arachidonate-activable superoxide generating system // J. Biol. Chem. 1987. - V. 262. - p. 4065-4074

58. Cohn J.J., Duke R.C. Glucocorticoid activation of a calcium-dependent endonuclease in thymocyte nuclei leads to cell death // The Journal of Immunology. 1984. - V. 132. - N. 1. - p. 38-42

59. Comhair S.A., Bhathena P.R., Dweik R.A., Kavuru M., Erzurum S.C. Rapid loss of superoxide dismutase activity during antigen-induced asthmatic response // Lancet. 2000. - V.3 - p. 477-483

60. Cross A.R., Jones O.T.G. The effect of the inhibitor diphenylene iodonium on the superoxide-generating system of neutrophils // Biochem. J. 1986. - V. 237. - p. 111-116

61. Darden A.G., Ries W.L., Wolf W.C., Rodriguiz R.M., Key L.L. Osteoclastic superoxide production and bone resorption stimulation and inhibition by modulators of NADPH oxidase // J. Bone Mineral Res. 1996.-V. 11.-p. 671-675

62. Daynes R.A., Araneo B.A., Dowell T.A., Huang K., Dudley D. Regulation of murine lymphokine production in vivo. III. The lymphoid tissue microenvironment exerts regulatory influences over T helper cell function. J. Exp. Med. 1990. - V. 171. - p. 979-996

63. De A., Blotta H.M., Mamoni R.L., Louzada P., Bertolo M.B., Foss N.T., Moreira A.C., Castro M. Effects of dexamethasone on lymphocyte proliferation and cytokine production in rheumatoid arthritis // J. Rheumatol. 2002. - V. 29(1). - p. 46-51

64. Debono D.P., Yang W.D. Exposure to low concentration of hydrogen peroxide causes delayed endothelial cell death and inhibits proliferation of surviving cells // Atherosclerosis. 1995. - Vol. 114. -p. 235-245

65. Deby C., Goutier R. New perspectives on the biochemistry of superoxide anion and the efficiency of superoxide dismutases // Biochem. Pharmacol. 1990. - Vol. 39. - p. 399-405

66. DeKruyff R.H., Fang Y., Umetsu D.T. Corticosteroids Enhance the Capacity of Macrophages to Induce Th2 Cytokine Synthesis in CD4 1 Lymphocytes by Inhibiting IL-12 Production // The Journal of Immunology. 1998. - V. 160. - p. 2231-2237

67. DeLeo F.R., Quinn M.T. Assembly of the phagocyte NADPH oxidase: molecular interaction of oxidase proteins // Journal of Leukocyte Biology. 1996. - V. 60. - p. 677-691

68. Deme D., Doussiere J., De Sandro V., Dupuy C., Pommier J., Virion A. The Ca /NADPH-dependent H202generator in thyroid plasma membrane: inhibition by diphenileneiodonium // Biochem. J. 1994. -V. 301.-p. 75-81

69. Dieken E.S., Miesfeld R.L. Transcriptional transactivation functions localized to the glucocorticoid receptor N terminus are necessary for steroid induction of lymphocyte apoptosis // Mol. Cell. Biol. 1992. -V. 12(2). -p. 589-597

70. Distelhorst C.W., Dubyak G. Role of calcium in glucocorticosteroid-induced apoptosis of thymocytes and lymphoma cells: resurrection of old theories by new findings // Blood. 1998. - V. 91. - p. 731-736

71. Dizdaroglu M., Olinski R., Doroshow J. H., Akman S.A. Modification of DNA bases in chromatin of intact target human cells by activated human polymorphonuclear leukocytes // Cancer Res.1993.-Vol. 53.-p. 1269-1272

72. Dougherty T.,F., White A. Effect of pituitary adrenotropic hormone on lymphoid tissue // Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 1943. - 53:132

73. Dowd D., MacDonald P., Komrn B., Haussler M., Miesfeld R. Evidence for early induction of cakmodulin gene expression in lymphocytes undergoing glucocorticoid-mediated apoptosis // J. Biol. Chem. 1991. - V. 266. - p. 18423-18426

74. Eaton J.W. Catalases and peroxidases and glutathione and hydrogen peroxide: Mysteries of the bestiary // J. Lab. and Clin. Med. 1991. -V. 118.-p. 3-4

75. Ehrengruber M.U., Geiser T., Deranleau D.A. Activation of human neutrophils by C3a and C5a. Comparison of the effects on shape changes, chemotaxis, secretion, and recpiratory burst // FEBS Lett.1994.-V. 346.-p. 181-184

76. Eisenberg W.C., Taylor K., Guerrero R.R. Cytogenetic effects of singlet oxygen // J. Photochem. and Photobiol. 1992. - V. 16. - p. 381-384

77. Fabiani R., De Bartolomeo A., Rosignoli P., Morozzi G. Antioxidants prevent the lymphocyte DNA damage induced by PMA-stimulated monocytes.//Nutr. Cancer. 2001. - V. 39(2). - p. 284-291

78. Falkenstein E., Tillmann H.C., Christ M., Feuring M., Wehling M. Multiple actions of steroid hormones—a focus on rapid, nongenomic effects // Pharmacol. Rev. 2000. - V. 52(4). - p. 513-556

79. Flescher E., Fingrut O. Suppression of interleukin 2 biosynthesis by three modes of oxidative cellular stress: selective prevention by N-acetyl cysteine // Cytokine. 2000. - V.12(5). - p. 495-498

80. Flomerfelt F.A., Briehl M.M., Dowd D.R., Dieken E.S., Miesfeld R.L. Elrvated glutatione S-transferase gene expression is an early event during steroid-induced lymphocyte apoptosis // J. Cell. Physiol. 1993.-V. 154.-p. 573-581

81. Freed B.M., Rapoport R., Lempert N. Inhibition of early events in the human T-lymphocyte response to mitigens and alloantigens by hydrogen peroxide // Archives of Surgery. 1987. - V. 122. - N. 1. - p. 99-104

82. Fridovich I. Superoxide dismutases //J Biol. Chem. 1989. - V. 54. -p. SI 113-S1118

83. Fridovich I. Superoxide radical: an endogenous toxicant // Ann. Rev. Pharmacol. Toxicol. 1983. - Vol. 23. - p. 239-257

84. Fulop T.Jr. Varga Z., Nagy J.T., Foris G. Studies on opsonized zymozan, FMLP, carbachol, PMA and A23187 stimulated respiratory burst of human PMNLs // Biochem. Int. 1988. - V. 17(3). - p. 419426

85. Gabbita S.P., Robinson K.A., Stewart C.A., Floyd R.A., Hensley k. Resox regulatory mechanisms of cellular signal transduction // Archives of Biochemistry and Biophysics. 2000. - V. 376. - N. 1. - p. 1-13

86. Gille G., Sigler K. Oxidative stress and living cells // Folia Microbiology. 1995. - V. 40, N 2. - p. 131 -152

87. Goldin H., Keisari Y. Increased oxidative burst potential exhibited by macrophages during graft-versus-host reaction in mice // Transplantation. 1986. - V. 41. - N. - 6. - p. 755-758

88. Gorman A., McGowan A., Cotter T.G. Role of peroxide and superoxide anion during tumor cell apoptosis // FEBS Letters. 1997. - V. 404. - p.27-33

89. Greenstein S., Ghias K., Krett N.L., Rosen S.T. Mechanisms of Glucocorticoid-mediated Apoptosis in Hematological Malignancies // Clin. Cancer. Res. 2002. - V. 8(6). - p. 681-694

90. Hala M., Hartmann B.L., Bock G., Geley S., Kofler R. Glucocorticoid-receptor-gene defects and resistance to glucocorticoidinduced apoptosis in human leukemic cell lines // Int. J. Cancer. 1996,-V. 27;68(5). p. 663-668

91. Halliwell B., Vasil M., Grootveid M. The antioxidants of human extracellular fluids // Arch. Biochem. and Biophys. 1990. - V. 280. -p. 1-8

92. Hamilton C.A., Brosnan M.J., Al-Benna S., Berg G., Dominiczak A.F. NAD(P)H oxidase inhibition improves endothelial function in rat and human blood vessels // Hypertension. 2002. - V.40(5). - p. 755762

93. Hansson M., Asea A., Ersson U. et al. Induction of apoptosis ib NK cells by monocyte-derived reactive oxygen metebolites // J. Immunol. 1995.-V. 156.-p. 42-47

94. Hechter O., Grossman A., Chatterton R.T., Jr. Relationship of dehydroepiandrosterone and Cortisol in disease // Med. Hypotheses.1997.-V. 49.-N l.-p. 85-91

95. Heilman R.R., Kendall E.C. The influence of 11 -dehydro-17-hydroxy-corticosterone (compound E) on the growth of a malignant tumor in the mouse // Endocrinology . 1944. - V. 34. - p. 416-420

96. Heinecke J.W. Superoxide-mediated oxidation of low density lipoprotein by thiols // Oxy-Radicals in Molecular Biology end Pathology. N.Y.: Liss, 1988. - p. 443-457

97. Hem E. Modulation by macrophages of lymphocyte responses to phytogaemagglutinin, concanavalin A and semiallogeneic cells // Acta Path, microbiol. scand. Sect. C . 1979. - V. 87. - p. 17-21

98. Hildeman D.A., Mitchell T., Teague T.K., Henson P., Day B.J., Kappler J., Marrack P.C. Reactive oxygen species regulate activation-induced T cell apoptosis // Immunity. 1999. - V. 10(6). - p. 735-44

99. Hockenberry D., Zutter M., Hickey W., Nahm N., Korsmeyer S. Bcl-2 protein is topographically restricted in tissues characterized by apoptotic cell death // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1991. - V. 88. - p. 6961-6965

100. Hockenbery D.M., Oltvai Z.N., Yin X.M., Milliman C.L., Korsmeyer S.J. Bcl-2 functions in an antioxidant pathway to prevent apoptosis // Cell. 1993. - Oct 22;75(2). - p. 41-51

101. Holland H.A., Pritchard K.A., Pappolla M.A. et al. Bradykinin induces superoxide anion release from human endothelial cells // J. Cell. Physiol. 1990. - V. 143. - p. 21-25

102. Holland J.A., O'Donnell R.W., Chang M.M., Johnson D.K., Ziegler L.M. Endothelial cell oxidant production: effect of NADPH oxidase inhibitors // Endothelium. 2000. - V. 7(2). - p. 109-119

103. Iuliano L., Pedersen J.Z.,Pratico D. et al. Role of hydroxyl radicals in the activation of human platelets //Eur. J. Biochem. 1994. - V. 221.-p. 695-704

104. Jain A.P., Mohan A., Gupta O.P., Jajoo U.N., Kalantri S.P., Srivastava L.M. Role of oxygen free radicals in causing endothelial damage in acute myocardial infarction // J. Assoc. Physicians India. -2000. V. 48(5). - p. 478-480

105. Jakus V. The role of free radicals, oxidative stress and antioxidant systems in diabetic vascular disease // Bratisl. Lek. Listy. 2000 . - V. 101(10)-p. 541-551

106. Jones O.T., Hancock J.T., Henderson L.M. Oxygen radical production by transformed B lymphocytes // Mol. Aspects. Med. -1991.-V. 12.-p. 87-92

107. Jones O.T.G., Hancock J.T., Jones S.A. Mechanisms of superoxide formation by neutrophils and other cell types // Biol. Chem./Hoppe-Seyler. 1992. - V. 373.-p. 737

108. Kahlos K., Soini Y., Paakko P., Saily M., Linnainmaa K., Kinnula V.L. Proliferation, apoptosis, and manganese superoxide dismutase in malignant mesothelioma // Int. J. Cancer. 2000. - V. 88(1). - p. 37-43

109. Kalluri R., Cantley L.G., Kerjaschki D., Neilson E.G. Reactive oxygen species expose cryptic epitopes associated with autoimmune goodpasture syndrome // J. Biol. Chem. 2000. - V. 275(26). - p. 20027-20032

110. Kameshwar-Rao A.S., Gil S., Richter-Landsberg C., Givol D., Yavin E. H202-induced apoptotic death in serum-deprived cultures of oligodendroglia origin is linked to cell differentiation // J. Neurosci. Res. 1999. - V. 56(5). - p. 447-456

111. Kaminski K., Bonda T., Korecki J., Musial W. Oxidative stress and neutrophil activation-the two keystones of ischemia/reperfusion injury.//Int J Cardiol. 2002.- Nov;86(l):41.

112. Kannan K., Jain S.K. Oxidative stress and apoptosis // Pathophysiology. 2000. - V. 7(3). - p. 153-163

113. Kanno S., Ishikawa M., Takayanagi M., Takayanagi Y., Sasaki K. Characterization of hydrogen peroxide-induced apoptosis in mouse primary cultured hepatocytes // Biol. Pharm. Bull. 2000. -V. 23(1). -p. 37-42

114. Kawano M.M., Michara K., Huang N., Tsujimoto T., Kuramoto A. Differentiation of early plasma cells on bone marrow stromal cell requires IL-6 for escaping from apoptosis // Blood. 1995. -V. 85. - N 2. - p. 487- 494

115. Kilpatrick L.E., Jakabovics E., McCawley L.J., Kane L.H., Korchak H.M. Cromolyn inhibits assembly of the NADPH oxidase and superoxide anion generation by human neutrophils // The Journal of Immunology. 1995. - V.154. - p. 3429-3436

116. Kim D.K., Cho E.S., Um H.D. Caspase-dependent and -independent events in apoptosis induced by hydrogen peroxide // Exp. Cell. Res. -2000.-V. 257(1).-p. 82-88

117. Kobayaschi S., Imajon-Ohmi S., Nakamura M., Kanegasaki S. Occurrence cytochrome b in B558 cell lineage of human lymphocytes // Blood. 1990. - V. 75. - p. 458-461

118. Kobayashi T., Saito N., Takemori N. et al. Ultrastructural localization of superoxide dismutase in human skin // Acta Derm, and Venerol. 1993. - Vol. 73. - p. 41-45

119. Kobayashi T., Seguchi H. Novel insights into current models of NADPH oxidase regulation, assembly and localization in human polymorphonuclearnleukocytes // Histol. and Histopathol. 1999. -Vol. 14.-p. 1295-1308

120. Krieger Brauer H.I., Kather H. The stimulus-sensitive H202-generating system present in human fat cell plasma membranes is multireceptor-linked and under antagonistic control by hrmones and cytokines // Biochem. J. 1995. - V. 307. - p. 543-548

121. Kruisbeek A.M., Hees M. Role of macrophages in the tumor-induced supression of mitogen responses in rats // J. Natl. Cancer Inst. 1977. - V. 58. - N 6. - p. 1653-1660

122. Laakko T., Fraker P. Rapid changes in the lymphopoietic and granulopoietic compartments of the marrow caused by stress levels of corticosterone // Immunology. 2002. - V. 105(1). - p. 111-119

123. Leca G., Benichou G., Bensussan A et.al. Respiratory burst in human B lymphocytes. Triggering of surface Ig receptors induces modulation of chemiluminescence signal // J. Immunol. 1991. - V. 146.-p. 3542-3549

124. Lee K.W., Meyer N., Ortwerth B.J. Chromatographic comparison of the UVA sensitizers present in brunescent cataracts and in calf lens proteins ascorbylated in vitro.// Exp. Eye Res. 1999. - V. 69(4). - p. 375-384

125. Lehn M., Weiser W.Y., Engelhorn S., Gillis S., Remold H.G. IL-4 inhibits H202 production and antileishmanial capacity of human cultured monocytes mediated by IFN-gamma // J. Immunol. 1989. -V. 143(9).-p. 3020-3024

126. Lennon S.V., Martin S.J., Cotter T.J. Dose-dependent induction of apoptosis in human tumor cell lines by widely diverging stimuli // Cell. Prolif. 1991. - V. 24. - p. 203-214

127. Liu R., Buettner G.R., Oberley L.W. Oxygen free radicals mediate the induction of manganese superoxide dismutase gene expression by TNF-alpha // Free. Radic. Bio.l Med. 2000. - V. 28(8). - p. 11971205

128. Lovaas E. Free radical generation and coupled thiol oxidation by lactoperoxidase/SCN-/H202 // Free Radical Biol, and Med. 1992. -V. 13.-p. 187-195

129. Lunec J., Herbert K., Blount S., Griffiths H.R., Emery P. 8-Hydroxydeoxyguanosine. A marker of oxidative DNA damage in systemic lupus erythematosus // FEBS Lett. 1994. - V. 348(2). - p. 131-138

130. Macho A., Hirsch T., Marzo I., Marchetti P., Dallaporta B., Susin S.A., Zamzami N., Kroemer G. Glutathione depletion is an early and calcium elevation is a late event of thymocyte apoptosis // J. Immunol.- 1997. V. 158(10). -p. 4612-4619

131. Majori M., Vachier I., Godard P., Farce M., Bousquet J., Chanez P. Superoxide anion production by monocytes of corticosteroid-treated asthmatic patients // European Respir. Journal. 1998. - V. 11. - N. 1.- p. 133-138

132. Maly F.E., Cross A.R., Jones O.T.G. et al. The superoxide generating system of B cell lines. Syructural gomology with the phagocyte oxidase and triggering via surface Ig // J. Immunol. 1988. -V. 140.-p. 2334-2339

133. Maresca M., Colao C., Leoncini G. Generation of hydrogen peroxide in resting and activated platelets // Cell Biochem. Funct. -1992.-V. 10.-p. 79-85

134. Marumo T., Schini-Kerth V.B., Brandes R.P., Busse R. Glucocorticoids Inhibit Superoxide Anion Production and p22 Phox mRNA Expression in Human Aortic Smooth Muscle Cells // Hypertension. 1998. - V. 32. - p. 1083-1088

135. Matsubara T., Ziff M. Increased superoxide anion release from human endothelial cells in response to cytokines // J. Immunol. -1986.-V. 137.-p. 3295-3298

136. May M., Holmes E., Rogers W.M., Poth M. Protection from glucocorticoid induced thymic involution by dehydroepiandrosterone // Life Sci. 1990. - V. 46. - p. 1627-1631

137. McCombs C., Michalski J.P., Talal N. Cellular interactions in lymphocyte proliferation: effect of syngeneic and xenogeneic macrophages // Cellular Immunology. 1976. - V. 23. - p. 1976

138. McIntosh M., Bao H., Lee C. Opposing action of dehydroepiandrosterone and corticosterone in rats // Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 1999. - V. 221. - N 3. - p. 198-206

139. McLaughlin K.A., Osborne B.A., Goldsby R.A. The role of oxygen in thymocyte apoptosis // Eur. J. Immunol. 1996. - V. 26(5). - p. 1170-1174

140. Meier B. Formation of reactive oxygen intermediates by human fibroblasts // Biol. Chem. Hoppe Seyler. 1992. - V. 373. p. 744-745

141. Meier B., Radeke H.H., Selle S. et al. Human fibroblasts release reactive oxygen species in response to interleukin-1 or tumor necrosis factor-alpha// Biochemical J. 1989. - V. 263. - p. 539-545

142. Meyer J.W., Holland J.A., Zeigler L.M. et al. Identification of a functional leukocyte-type NADPH oxidase in human endothelial cells:a potential atherogenic source of reactive oxygen species // Endothelium. 1999. - V. 7. - p. 11-22

143. Meyer M., Schreck R., Baueurle P.A. H202 and antioxidants have opposite effects on activation of NF-kB and AP-1 in intact cells: AP-1 as secondary antioxidant-responsive factor // The EMBO Journal. -1993. V. 12. - N. 5. - p. 2005-20015

144. Miesel R., Kurpisz M., Kroger H. Suppression of inflammatory arthritis by simultaneous inhibition of nitric oxide synthase and NADPH oxidase // Free Radic. Biol. Med. 1996. - V. 20(1). - p.75-81

145. Miesel R., Sanocka D., Kurpisz M., Kroger H. Antiinflammatory effects of NADPH oxidase inhibitors // Inflammation . -1995 V. 19(3).- p. 347-362

146. Miesfeld R.L. The structure and function of steroid receptor proteins // Crit. Rev. Biochem. Mol. Biol. 1989. - V. 24. - p. 101-117

147. Miyashita T., Reed J. bcl-2 gene transfer increases relative resistance of S49.1 and WEHI7.2 lymphoid cells to cell death and DNA fragmentation induced by glucocorticoids and multiple chemotherapeutic drugs // Cancer Res. 1993. - V. 52. - p. 5407-5411

148. Miyoshi H., Ohki M., Nakagawa T., Honma Y. Glucocorticoids induce apoptosis in acute myeloid leukemia cell lines with At(8;21) chromosome translocation // Leuk. Res. 1997. - V. 21( 1). - p. 45-50

149. Mohan P.F., Jacobson M.S. Inhibition of macrophage superoxide generation by dehydroepiandrosterone // Am. J. Med. Sci. 1993. - V. 306.-N 1.-p. 10-15

150. Montague J.W., Cidlowski J.A. Glucocorticoid-induced death of immune cells: Mechanisms of action // in: Apoptosis in Immunology.- Springer-Verlag. Berlin 1995. - Eds.: Kraemer G., Martines A.C.

151. Morel Y., Barouk R. Repression of gene expression by oxidative stress // Biochemical Journal. 1999. - V. 342. - p. 481-496

152. Muller F., Svardal A.M., Nordoy I., Berge R.K., Aukrust P., Froland S.S. Virological and immunological effects of antioxidant treatment in patients with HIV infection // Eur. J. Clin. Invest. 2000. - V. 30(10). -p. 905-914

153. Murrell G., Bromley F.N. Modelanion of fibroblast proliferation by oxygen free radicals //Biochem. J. 1990. - Vol. 265. - p. 659-665 (122)

154. Nauseef W.M. The NADPH-oxidase of phagocytes // Proc. Ass. Amer. Physicians. 1999. - Vol. 111. - p. 373-382

155. Niwa Y., Somiya K., Miyachi Y., Kanoh T., Sakane T. Luminol-independent chemiluminescence by phagocytes is markedly enhanced by dexamethasone, not by other glucocorticosteroids // Inflammation. 1987.- V. 11(2).-p.163-174

156. Pagano P.J., Ito Y., Tornheiem K. et al. An NADPH oxidase superoxide-generating system in the rabbit aorta // Amer. J. Physiol. -1995. V. 36. - p. H2274-H2280

157. Pahl H.L., Baeuerle P.A. Oxigen and control of gene Expression // BioEssey. 1994. - V. 16. - N. 7. - p.497-502

158. Pahlavani M.A., Harris M.D. Effect of in vitro generation of oxygen free radicals on T cell function in young and old rats // Free Radic. Biol. Med. 1998. - V. 25(8). - p. 903-913

159. Patel R.P., Moellering D., Murphy-Ullrich J., Jo H., Beckman J.S., Darley-Usmar V.M. Cell signaling by reactive nitrogen and oxygen species in atherosclerosis // Free Radic. Biol. Med. 2000. - V. 28(12).-p. 1780-1794

160. Patriarca P., Cramer R., Moncalvo S., Rossi F., Romeo D. Enzymatic basis of metabolic stimulation in leukocytes during phagocytosis: The role of activated NADPH oxidase // Archives Boichem. Biophis. 1971.-V. 145.-N 1.-p. 255-262

161. Patterson D.A., Rapoport R., Patterson M.A., Freed B.M., Lempert N. Hydrogen peroxide-mediated inhibition of T-cell response to mitogens is a result of direct action on T cells // Arch Surg. 1988. -V. 123(3).-p. 300-304

162. Pearson O.H., Eliel L.P., Rawson R.W., Dobriner K., Rhoads C.P. ACTH- and cortisone-induced regression of lymphoid tumors in man: A preliminary report // Cancer. 1949. - V. 2. - p. 943

163. Pereira B., Bechara E.J., Mendonca J.R., Curi R. Superoxide dismutase, catalase and glutathione peroxidase activities in the lymphoid organs and skeletal muscles of rats treated with dexamethasone // Cell. Biochem. Funct. 1999. - V. 17(1). - p. 15-19

164. Pereira B., Rosa L.F., Safi D.A., Bechara E.J., Curi R. Hormonal regulation of superoxide dismutase, catalase, and glutathioneperoxidase activities in rat macrophages // Biochem. Pharmacol. 1995. - V. 50(12). - p. 2093-2098

165. Persijanova V.O., Volsky N.N., Kozlov V.A. Glucocorticoidstkincrease NADPH oxidase activity in cell-free system // in: "27 Scand Soc for Immunology Meet. Turku May 24-27 1996. Abstracts". p. 731

166. Peus D., Meves A., Vasa R.A., Beyerle A., O'Brien T., Pittelkow M.R. H202 is required for UVB-induced EGF receptor and downstream signaling pathway activation // Free Radic. Biol. Med.1999. V. 27(11-12). - p. 1197-1202

167. Preeta R., Nair R.R. Superoxide anions mediate proliferative response in cardiac fibroblasts // Indian Journal of Medical Research.2000. -V. 111.-p. 127-132

168. Quinn M.T., Mullen M.L., Jesaitis A.J. Human neutrophil cytochrome b contains multiple hemes. Evidence for heme associated with both subunits // J. Biol. Chem. 1992. - V. 267. - p. 7303-7309

169. Radeke H.H., Meier B., Topley N., Floge J., Habermehi G.G., Resch K. Interleukin 1-alpha and tumor necrosis factor-aloha induce oxygen radical production in mesangial cells // Kidney Int. 1990. - V. 37. - p. 767-775

170. Rainwater R., Parks D., Anderson M.E., Tegtmeyer P., Mann K. Role of cysteine residues in regulation of p53 function // Mol. Cell. Biol. 1995. - V. 15. - p. 3892-3903

171. Rao G.N., Berc B.C. Active oxygen species stimulate vascular smooth muscle cell growth and proto-oncogene expression // Circ Res. 1992.-V. 70.-p. 593-599

172. Reed J. BCL-2 and the regulation of programmed cell death // J. Cell. Biol. 1994.-V. 124.-p. 1-6

173. Reichardt H.M., Kaestner K.H., Tuckermann J., Kretz O., Wessely O., Bock R., Gass P., Schmid W., Herrlich P., Angel P., Schutz G.

174. DNA binding of the glucocorticoid receptor is not essential for survival // Cell. 1998. - V. 93(4). - p. 531-541

175. Reichardt H.M., Tuckermann J.P., Gottlicher M., Vujic M., Weih F., Angel P., Herrlich P., Schutz G. Repression of inflammatory responses in the absence of DNA binding by the glucocorticoid receptor // EMBO J. 2001. - V. 20(24). - p. 7168-7173

176. Resch K., Heckmann B., Schober I., Barlin E., Gemsa D. The role of macrophages in the activation of T-lymphocytes by concanavalin A. II. Macrophage-independent activation // European Journal of Immunology. 1981. - V. 11. - p. 120-126

177. Robinzon B., Culoto M. Should dehydroepiandrosterone replacement therapy be provided with glucocorticoids? // Reumatology (Oxford). 1999. - V. 38. - N 6. - p. 488-495

178. Rockson D., Lilliehaak B., Larsson R., Johansson T., Bucht A. Differential anti-inflammatory an anti-oxidative effects of dexamethasone and N-acetylcycteine in endotoxin-induced lung inflammation // Clin. Exp. Immunol. 2000. - V. 122. - p. 249

179. Rojas M., Rugeles M.T., Gil D.P., Patino P. Differential modulation of apoptosis and necrosis by antioxidants in immunosuppressed human lymphocytes // Toxicol. Appl. Pharmacol. 2002. - V. 180(2). - p. 67-73

180. Rom W.N., Harkin T. Dehydroepiandrosterone inhibits the spontaneous release of superoxide radical by alveolar macrophages in vitro in asbestosis // Environ. Res. 1991. - V. 55. - N 2. - p. 145-156

181. Rook A.W., Hernandez-Pando R., Lightman S.L. Hormones, peripherally activated prohormones and regulation of the Thl/Th2 balance // Immunology Today. 1994. - V. 15. - N 7. - p. 301-303

182. Ross D.D., Joneckis C.C., Ordonez L.V., Sisk A.M., Wu R.K., Hamburger A.W. Estimation of cell survival by flow cytometricquantificayion of fluorescein diacetate/propidium iodide viable cell number // Cancer Research. 1989. - V. 49 - p. 3776

183. Rotman B., Papermaster B.W. Membrane properties of living cells as studied by enzymatic hydrolysis of fluorogenic esters // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1966. - V. 55. - p. 134

184. Rubin R., Farber J.L. Mechanism of the filling of cultured hepatocytes by hydrogen peroxide // Arch. Biochem. and Biophys. -1984. -V. 228.-p. 450-459

185. Ruiz-Gines J.A., Lopez-Ongil S., Gonzalez-Rubio M., Gonzalea-Santiago L., Rodriguez-Puyol M., Rodriguez-Puyol D. Reactive oxygen species induce proliferation of bovine aortic endothelial cells //J. Cardiovasc. Pharmacol. 2000. - V. 35. - p. 109-113

186. Sagone A.L. Jr, Husney R., Guter H., Clark L. Effect of catalase on the proliferation of human lymphocytes to phorbol myristate acetatc // J Immunol. 1984. - V. 133(3). - p. 1488-1494

187. Salisbury S.M., Calhoun W.J. Modulation of human peripheral blood monocyte superoxide release by interferon-gamma and 1 ipopolysaccharide // Wis. Med. J. 1990. - V. 89(6). - p. 271-274

188. Sandstrom P.A., Buttke T.M. Autocrine production of extracellular catalase prevents apoptosis of the human CEM T-cell line in serumfree medium // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1993. - V. 90(10). - p. 4708-4712

189. Saton J., Rikiishi H., Nagahashi M., Ohuchi E., Kumagai K. Mitogen responsiveness of various immune tissues: heterogeneity of accessory cells and susceptibility to suppression by macrophages // Cellular Immunology. 1980. - V. 56. - p. 1-15

190. Sattler M., Winkler T., Verma S., Byrne C.H., Shrinkhande G., Salgia R., Griffin J.D. Hematopoietic growth factor signal through theformation of reactive oxygen species I I Blood. 1999. - V. 93. - p. 2928-2935

191. Sauer H., Wartenberg M., Hescheler J. Reactive oxygen species as intracellular messengers during cell growth and differentiation // Cell Physiol Biochem. 2001. - V. 11(4). - p. 173-186

192. Schmidt J., Lindstaedt R., Szelenyi I. Characterization of platalet-activating factor induced superoxide anion generetion by guinea-pig alveolar macrophages // J. Lipid. Mediat. 1992. - V. 5. - p. 13-22

193. Schmidt K.N., Amstad P., Cerutti P., Baeuerle P.A. The roles of hydrogen peroxide and superoxide as messengers in the activation of transcription factor NF-kappa B // Chem. Biol . 1995. - V. 2(1). - p. 13-22

194. Schmidt M., Pauels H.G., Lugering N., Lugering A., Domschke W., Kucharzik T. Glucocorticoids induce apoptosis in human monocytes: potential role of IL-lbeta// J. Immunol. 1999. - V. 163(6). - p. 34843490

195. Schmielau J., Finn O.J. Activated granulocytes and granulocyte-derived hydrogen peroxide are the underlying mechanism of suppression of t-cell function in advanced cancer patients // Cancer Res. 2001. - V. 61(12). - p. 4756-4760

196. Schreck R., Albermann K., Baeuerle P. Nuclear factor kb: an oxidative stress-responsive transkription factor of eukaryotic cells (A review) // Free Radic. Res. Commun. 1992. - V. 17. - N 4. - p. 221 -237

197. Schreck R., Rieber P., Baeuerle P.A. Reactive oxygen intermediates as apparently widely used messengers in the activation of the NF-kappa B transcription factor and HIV-1 // EMBO J. 1991. - V. 10. -p. 2247-2258

198. Schwartzman R.A., Cidlowski j,A. Glucocorticoid-induced apoptosis of lymphoid cells // Int. Arch. Allergy Immunol. 1994. -V. 105.- p. 347-354

199. Segal A.W. The NADPH-oxidase of phagocytic cells is an electron pump that alkalinises the phagocytic vacuole // Protoplasma. 1995. -V. 184.- p. 86-103

200. Stimulation of GATA-2 as a mechanism of hydrogen peroxide suppression in hypoxia-induced erythropoietin gene expression. // J. Cell. Physiol. 2001. - V. 186(2). - p. 260-267

201. Tammariello S.P., Quinn M.T., Estus S. NADPH Oxidase Contributes Directly to Oxidative Stress and Apoptosis in Nerve Growth Factor-Deprived Sympathetic Neurons // The Journal of Neuroscience. 2000. - V. 20. - p. 1-5

202. Tatla S., Woodhead V., Foreman J.C., Chain B.M. The role of reactive oxygen species in triggering proliferation and IL-2 secretion in T cells // Free Radic Biol Med. 1999. - V. 26(1-2). - p. 14-24

203. Tatsuzawa H., Maruyama T., Hori K. et al. Singlet oxygen ('Ag O2) as a principal oxidant in myeloperoxidase-mediated bacterial killing in neutrophil phagosome // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1999. -V. 262. - p. 647-650

204. Thannickal V.J., Hassoun P.M., White A.C., Fanburg B.L. Enhanced rate of H202 release from bovine pulmonary artery endothelialcells induced by TGF-beta 1 // Am. J. Physiol. 1993. - V. 265. - p. L622-L626

205. Tolando R., Jovanovic A., Brigellus-Flohe R., Ursini F., Maiorino M. Reactive oxygen species and proinflammatory cytokine signaling in endothelial cells: effect of selenium supplementation /7 Free Radic. Biol. Med. 2000. - V. 28. - p. 979-986

206. Tome M.E., Baker A.F., Powis G., Payne C.M., Briehl M.M. Catalase-overexpressing thymocytes are resistant to glucocorticoid-induced apoptosis and exhibit increased net tumor growth // Cancer Res. 2001.- V. 61(6).-p. 2766-2773

207. Tome M.E., Briehl M.M. Thymocytes selected for resistance to hydrogen peroxide show altered antioxidant enzyme profiles and resistance to dexamethasone-induced apoptosis // Cell. Death Differ. -2001.- V. 8(9).-p. 953-961

208. Umeki S. Mechanisms for the activation/electron transfer of neutrophil NADPH-oxidase complex and molecular pathology of chronic granulomatous disease // Annual Hematology. 1993. - V. 68.- p. 267-277

209. Umeki S., Soejima R. Hydrocortisone inhibits the respiratory burst oxidase from human neutrophils in whole-cell and cell-free systems // Biochim. Biophys. Acta. 1990. - V. 1052(1). - p. 211-215

210. Vacchio M.S., Ashwell J.D. Thymus-derived glucocorticoids regulate antigen-specific positive selection // J. Exp. Med. 1997. - V. 185(11).-p. 2033-2038

211. Vanasbeck B.S. Involvement of oxygen radicals and blood cells in the pathogenesis of ARDS by endotoxin and hyperoxia // Appl. Cardiopulm. and Pathophysiol. 1991. - V. 4. - p. 127-138

212. Vaux D., Cory S., Adams J. Bcl-2 gene promotes haemopoietic cell survival and cooperates with c-myc to immortalize pre-B cells // Nature. 1988. - V. 335. - p. 440-442

213. Whitacre C.M., Cathcart M.K. Oxygen free radical generation and regulation of proliferative activity of human mononuclear cells responding to different mitogens //Cell. Immunol. 1992. - V. 144(2).- p. 287-295

214. Whitfield J., Perris A., Youdale T. Destruction of the nuclear morphology of thymic lymphocytes by the corticosteroid Cortisol // Exp. Cell. Res. 1968. - V. 52. - p. 349-362

215. Wiegers G.J., Stec I.E., Klinkert W.E., Linthorst A.C., Reul J.M. Bidirectional effects of corticosterone on splenic T-cell activation:critical role of cell density and culture time // Neuroendocrinology. -2001.-V. 73(2).-p. 139-148

216. Williams M.S., Henkart P.A. Role of reactive oxygen intermediates in TCR-induced death of T cell blasts and hybridomas // The Journal of Immunology. 1996. - V. 157. - p. 2395-2402

217. Wolfe J.T., Ross D., Cohen G.M. A role for metals and free radicals in the induction of apoptosis in thymocytes // FEBS Lett. 1994. - V. 352(1). - p. 58-62

218. Wyllie A.H. Glucocorticoid-induced thymocyte apoptosis is associated with endog-enous endonuclease activation // Nature (Lond.). 1980. - V. 284. - p. 555-556

219. Yan C.H., Jiang X.F., Pei X., Dai Y.R. The in vitro antiapoptotic effect of dehydroepiandrosterone sulfate in mouse thymocytes and its relation to caspase-3/caspase-6 // Cell. Mol. Life. Sci. 1999. - V. 56(5-6). - p. 543-547

220. Yang K.D., Shaio M.-F. Hydroxyl radical as an early signal involved in phorbol ester-induced monocyte differentiation of HL60 cells // Biochem. and Biophys. Res. Commun. 1994. - V. 200. - p. 1650-1657

221. Yu L., Quinn M.T., Cross A.R., Dinauer M.C. Gp91(phox) is the heme binding subunit of the superoxide-generating NADPH-oxidase // Proc. Natl. Acad.Sci. USA. 1998. - Vol. 95. - p. 7993-7998

222. Zafari A.M., Ushio-Fukai M., Akers M., Yin Q., Shah A., Harrison D.G., Taylor W.R., Griendling K.K: Role of N ADH/N ADPH oxidase-derived H2O2 in angiotensin II-induced vascular hypertrophy // Hypertension. 1998. - V. 32. - p. 488-495

223. Zanma A. Conjugares of superoxide dismutase with the Fc fragment of immunoglobulin G // J. Biochem. 1991. - V. 110. - p. 868-872

224. Zhang H., Schmeisser A., Garlichs C.D. et al. Angiotensin II-induced superoxide anion generation in human vascular endothelial cells: role of membrane-bound NADH/NADPH-oxidases // Cerdiovasc. Res. 1999. - V. 44. - p. 215-222

225. Zhang X., Moilanen E., Kankaanranta H. Enhancement of human eosinophil apoptosis by fluticasone propionate, budesonide, and beclomethasone // Eur. J. Pharmacol. 2000. - V. 406(3). - p. 325-332

Автореферат и диссертация по медицине (14.00.36) на тему:НАДФН-оксидазная активность клеток иммунной системы и ее роль в глюкокортикоид-зависимом апоптозе тимоцитов

Автореферат диссертации по медицине на тему НАДФН-оксидазная активность клеток иммунной системы и ее роль в глюкокортикоид-зависимом апоптозе тимоцитов

Оглавление диссертации Персиянова, Вера Олеговна :: 2003 :: Новосибирск

Введение диссертации по теме "Аллергология и иммулология", Персиянова, Вера Олеговна, автореферат

Заключение диссертационного исследования на тему "НАДФН-оксидазная активность клеток иммунной системы и ее роль в глюкокортикоид-зависимом апоптозе тимоцитов"

Список использованной литературы по медицине, диссертация 2003 года, Персиянова, Вера Олеговна

Похожие научные работы

Каталог диссертаций