Автореферат и диссертация по медицине (14.01.12) на тему:Мутации гена BRCA1 5382 insC у больных раком яичников

На правах рукописи 005007254

ЛОБЕЙКО Оксана Сергеевна

МУТАЦИИ ГЕНА 1ШСА1 5382 ш$С У БОЛЬНЫХ РАКОМ ЯИЧНИКОВ

Специальности: 14.01.12 - онкология 03.01.04 - биохимия

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

1 2ЯНВ2012

Санкт-Петербург 2011г.

005007254

Работа выполнена в Федеральном Государственном Бюджетном Учреждении «Научно-исследовательский институт онкологии им. H.H. Петрова» Министерства здравоохранения и социального развития России

(директор института - д.м.н., профессор А,М. Беляев)

Научные руководители:

доктор медицинских наук, профессор Максимов Сергей Янович

доктор медицинских наук, профессор Иминитов Евгений Наумович Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор Топузов Эльдар Эскендерович

доктор биологических наук, профессор Комов Вадим Петрович

Ведущее учреждение: Государственное Бюджетное Образовательное Учреждение Высшего Профессионального Образования «Санкт-Петербургский государственный университет им. акад. И.П. Павлова» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации.

Защита диссертации состоится «24» января 2012 г. в 14 часов на заседании диссертационного совета №Д 208.052.01 при ФГБУ «НИИ онкологии им. H.H. Петрова» Минздравсоцразвития России по адресу: 197758, г. Санкт-Петербург, пос. Песочный, ул. Ленинградская, 68.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГБУ «ПИИ онкологии им. H.H. Петрова» Минздравсоцразвития России и на официальном сайте ВАК.

Автореферат разослан « » 2011г.

Ученый секретарь диссертационного совета

доктор медицинских наук БахидзеЕ.В.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность проблемы

Новообразования яичников занимают 6-е место в структуре онкологической заболеваемости у женщин - на их долю приходится примерно 5% всех зарегистрированных новообразований. Например, в 2008 году в России было выявлено 12761 новых случаев рака яичников (РЯ), в Северо-Западном федеральном округе - 1347. Наибольшее число РЯ приходится на возраст женщин от 45 до 75 лет с пиком заболеваемости в 55-59 лет. Показатели кумулятивного риска развития РЯ за период с 1998 по 2008 гг. выросли с 1,13% до 1,21%. РЯ является причиной смерти 3,3% женщин моложе 30 лет и 8,3% жительниц РФ в возрасте 40-59 лет [Чиссов В.И. и соавт., 2010].

Наиболее существенной клинической характеристикой РЯ представляется крайне низкая выявляемость данного заболевания на ранних стадиях, которая не превышает 30% в репродуктивном возрасте и составляет менее 15% у больных старше 60 лет. Небольшие, излечимые опухоли яичника практически не вызывают никаких симптомов и плохо обнаруживаются доступными инструментальными методами [Урманчеева А.Ф., 2003]. К сожалению, даже своевременное обнаружение РЯ не гарантирует его благополучный исход: высокий риск (до 30%) рецидивов и метастазов опухоли сохраняется даже при выявлении заболевания в I стадии и выполнении радикального лечения [Мерабишвили В.М., 2006].

Значимым событием онкологической гинекологии последних двух десятилетий явилось обнаружение генов наследственного рака молочной железы и яичника, В11СА1 и ВЯСА2. В США и Европе ВЯСА-ассоциированные РЯ составляют 5-20% всех случаев рака яичника. Вклад наследственных генных дефектов в заболеваемость РЯ в России практически не изучался. Настоящая работа направлена на изучение частоты и клинической значимости мутаций в гене ВЯСА1 и родственных генов у больных РЯ, проживающих на северо-западе Российской Федерации.

з

Цель и задачи исследования

Целью настоящего исследования является изучение мутаций гена В11СА15382тзС и их роли в заболеваемости раком яичников.

Задачи исследования:

1. Сформировать коллекцию ДНК в ретроспективной и проспективной группах пациенток, страдающих РЯ.

2. Проанализировать встречаемость носительства мутации гена В11СА1 5382тзС у больных РЯ.

3. Изучить ассоциации между присутствием мутации гена ВЯСА1 5382тБС и клиническими характеристиками (возраст больной, стадия заболевания, семейный онкологический анамнез, гистологический тип опухоли).

4. Сопоставить эффективность неоадьювантных платиносодержащих схем химиотерапии у больных с наследственным и спорадическим РЯ.

Положения, выносимые на защиту

1. У больных РЯ выявлена высокая частота мутации гена ВЯСА1 5382'шзС.

2. При оценке клинических особенностей РЯ, ассоциированного с дефектом гена ВЯСА1 5382и1бС не получено очевидной связи с семейным онкологическим анамнезом и молодым возрастом на момент манифестации заболевания.

Научная новизна

1. Продемонстрирована исключительно высокая встречаемость мутации В11СА1 5382тзС у больных РЯ, проживающих в Северо-Западном регионе Российской Федерации.

2. Проанализирована распространенность других повторяющихся мутаций в генах наследственного рака (ВЯСА1 4153ёе1А, ВЯСА1 185с1е1АС), В11СА2 6174с1е1Т, СНЕК2 110(Ме1С, СНЕК21УБ2+Ю>А, ШБ! 657с1е15).

3. Изучены клинические особенности наследственного РЯ.

Научно-практическая значимость

Выработаны рекомендации по отбору больных РЯ для медико-генетического консультирования.

Предложен алгоритм ДНК-диагностики наследственного РЯ.

Внедрение результатов исследования

Результаты исследования внедрены в практическую работу ФГБУ «НИИ онкологии им. H.H. Петрова» Минздравсоцразвития России.

Апробация работы

Материалы и основные результаты работы докладывались на Научном обществе онкологов Санкт-Петербурга и Ленинградской области (Санкт-Петербург, 2009), на заседании лаборатории молекулярной генетики ФГБУ «НИИ онкологии им. H.H. Петрова» Минздравсоцразвития России (Санкт-Петербург, 2009).

Объем и структура диссертации

Диссертация состоит из введения, 3 глав, выводов, практических рекомендаций и списка литературы. Диссертация изложена на Siстраницах машинописного текста, включает 2.0 таблиц, to рисунков, приложений. Список литературы состоит из 130 источников отечественных и зарубежных авторов.

Публикации охватывают все разделы работы. По теме диссертации опубликовано б статей в журналах, рекомендованных ВАК.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материалы и методы

Характеристика обследованных групп пациентов

В научной работе была использована первичная медицинская документация 410 первичных больных раком яичников I-IV стадии T1-4N0-1М0-1, проходивших лечение в отделении онкогинекологии ФГУ «НИИ онкологии им. H.H. Петрова Росмедтехнологий» с 1990 по 2009 годы (руководитель-д.м.н., проф. С.Я. Максимов).

В ретроспективную группу в ходе анализа первичной медицинской документации вошли данные о 290 пациентках с раком яичника в возрасте от 21 до 89 лег (средний возраст составил 53,3±3,1 лет). Исследуемый материал был отобран из архива патологоанатомической лаборатории ФГБУ «НИИ онкологии им. H.H. Петрова» Минздравсоцразвития России (руководитель -д.м.н., проф. Д.Е. Мацко) и представлял собой срезы парафиновых блоков удаленных опухолей больных РЯ в период с 1990 по 2006 годы. Вся ретроспективная группа тестировалась на предмет наличия 8 мутаций (BRCA1 5382insC, BRCA1 4153delA, BRCA1 185delAG, BRCA1 3001>G, BRCA2 6174delT, CHEK2 1 lOOdelC, CHEK2 IVS2+1G>A, NBS1 657del5).

В проспективную группу исследования были включены данные первичной медицинской документации 111 пациенток, получавших лечение в отделении онкогинекологии с 2006 по 2009 годы, с гистологически подтвержденным эпителиальным типом опухоли яичников. При отборе пациентов возрастной фактор и анамнез семейных историй не принимался во внимание. Для выделения ДНК осуществлялся забор венозной крови в вакуумные пробирки с ЭДТА. Кровь в маркированной пробирке отправлялась в лабораторию молекулярной онкологии (руководитель - д.м.н., проф. E.H. Имянитов). С учетом результатов ретроспективного исследования протокол генетического тестирования был сужен до 3 мутаций (BRCA1 5382insC, BRCA1 4153delA, СНЕК2 HOOdelC).

При анализе медицинской документации (истории болезни и амбулаторные карты) учитывались следующие клинические и морфологические данные: а) возраст пациенток; б) стадия заболевания (классификация Международного противоракового союза по системе TNM,

б

пересмотр 2004г.); в) гистологический тип опухоли; г) степень дифференцировки опухоли; д) наличие первично-множественных опухолей у пациентки (сочетание РЯ и рака молочной железы (РМЖ)); е) неоадьювантная химиотерапия с использованием препаратов платины и критерии эффекта по шкале RECIST (Response Evaluation Criteria In Solid Tumors); ж) наличие РЯ или РМЖ у родственников первой (матери, сестер) и второй степени родства.

Выделение ДНК из парафиновых срезов

С целью депарафинизации дважды проводилась инкубация срезов в ксилоле (500 мкл) при комнатной температуре или 37 градусах по Цельсию, а затем один раз - в 96% этаноле (20-30 мин). Тканевой лизис осуществлялся путем добавления 200 мкл лизирующего буфера: 1хТЕ (10 ммоль Tris-HCl (рН=8,0)), 0,1 ммоль ЭДТА, также 2% натрия додецилсульфата и 3,5 мкл протеинкиназы К при 60 градусах по Цельсию. Реакция продолжалась 16-20 часов до полного растворения ткани. Далее лизат очищался путем добавления 200 мкл нейтрального фенола и 60 мкл смеси хлороформ-изоамилового спирта, с последующим центрифугированием в течение 30 минут. В очищенный тканевой лизат, составляющий верхнюю фазу, добавлялся хлороформ (60 мкл). Повторно проводилось центрифугирование, вновь собиралась верхняя часть раствора и переносилась в чистые пробирки. После добавления 1/10 объема натрия ацетата, 1 объема изопропанола и 1 мкл гликогена тканевой лизат осаждался при -20 градусах по Цельсию в течение 2-4 часов. Осадок, полученный после центрифугирования, растворяли в 100 мкл дистиллированной воды при 60 градусах по Цельсию.

Выделение ДНК из лейкоцитов периферической крови

Выделение ДНК из лейкоцитов периферической крови осуществлялось с помощью модифицированного соль-хлороформного метода [Mullenbach et al., 1989]. Гипоосмолярный лизис эритроцитов крови проводился путем разбавления препарата в соотношении 1:3. Затем с помощью центрифугирования осаждались лейкоциты. Далее лейкоциты ресуспендировали в 1 мл Трис-HCL (рН=8,3), ImM ЭДТА. Для разрушения

7

мембраны клеток добавляли к полученной смеси «Тритон» до концентрации 1%. Ядра клеток осаждались при центрифугировании, ресуспендировались в 1 мл Трис-HCL (рН=8,3), 1шМ ЭДТА и лизировались при добавлении додецилсульфата натрия до концентрации 0,5 %. В течение 12 часов при температуре 65 градусов по Цельсию с помощью добавления протеиназы К (100 мкг/мл) проводился частичный протеолиз белков. Следующим этапом добавлялся физиологический раствор NaCl до конечной концентрации 1,5 M и равный объем хлороформа. Экстракция осуществлялась органическим растворителем в течение 30 минут при медленном покачивании, с целью удаления нерастворимых элементов клеток, белков и липидов. По окончании центрифугирования ДНК, содержащуюся в водяной фазе, осаждали двумя объемами 96 % С2Н50Н; осадок промывали 70% С2Н50Н, далее растворяли до концентрации 1 мкг/мкл в растворе ТЕ [Бит-Сава Е.М., 2005].

Полимеразная цепная реакция (ПЦР)

При анализе мутаций BRCA1 5382¡nsC, BRCA1 4153delA, BRCA1 185delAG, BRCA1 300T>G,BRCA2 6174delT, CHEK2 llOOdelC, CHEK2 IVS2+1 G>A, NBS1 657del5 использовались следующие локус-специфические праймеры и фрагменты:

Мутация BRCA1 5382insC

-brl - 4ws 5' - AAG CGA GCA AGA GAA TTC CAG - 3'

-brl - 5ms 5'- AGC GAG CAA GAG AAT TCC CA - 3'

-brl - 6a 5'- AGA ACC TGT GTG AAA GTA TCT AGc ACT G - 3'

Мутация BRCA1 4153delA

-brl - lws - 5' - AGC CCG TTC CTC TTT CTT С - 3'

-brl - 3ms - 5' - AGC CCG TTC CTC TTT CTC A - 3'

-brl - 4b - 5' - GAC TGC AAA TAC AAA CAC CCA - 3'

Мутация CHEK2 llOOdelC

-Chek2 - f - 5' - CTG АТС TAG CCT ACG TGT CT - 3' -Chek2 - wt - 5' - TTG GAG TGC CCA AAA TCA GT - 3' -Chek2 - mut - 5'- CTT GGA GTG CCC AAA АТС AT - 3'

Условия полимеразной цепной реакции (ПЦР)

Все реакции ПЦР проводились при соблюдении стандартных условий: 10 мкл ПЦР-смеси состоит из 50 нг геномной ДНК, 1 Ед полимеразы Taq, однократного ПЦР буфера (pH 8,3), 2,5 мМ MgC12, 200 мкМ дНТФ, 0,5 мкМ каждого олигонуклеотида и 0,5-кратного флуоресцентного красителя SYBR Green I.

Полимеразная цепная реакция амплификации выполнялась на приборе Mini Cycler (MJ Research) и состояла из 50 циклов, во время которых в течение 15 минут осуществлялась активация фермента при +95 градусах по Цельсию, фаза отжига при температуре +64 градуса по Цельсию, продолжительность которой 45 сек, фаза синтеза - при +72 градусах по Цельсию продолжительностью 1 мин, фаза денатурации в течение 30 секунд при температуре +95 градусов.

Электрофоретический анализ результатов ПЦР

ДНК-фрагменты анализировались с помощью вертикального электрофореза в 10% полиакриламидном геле (ПААГ) с их последующей визуализацией в УФ свете после окрашивания бромидом этидия. Состав ПААГ: 10% акриламид, 0,3% бисакриламид. Буфер - IxTBE (pH 7,0-7,4).

wt mut wt mut

нет мутации есть мутация

Рисунок 1. Пример анализа мутации BRCA1 5382insC посредством аллель-специфической ПЦР.

Анализ аллель-специфичсской ПЦР в режиме реального времени

Анализ результатов проводился с использованием термоциклера ¡Cycler iQ Real Time Detection System (Bio-Rad) и флуоресцентного красителя SYBR Green I, позволяющих проводить исследование аллель-специфической ПЦР в режиме реального времени (Real-time PCR).

BRCA1 5382 wt

Щ ■

ä «

\ 4 ";

oAg

Wt

/mut

5iS>-? iGO

BRCA1 5382insC

f. mut /wt

, g tc s: и M « го 32 й ь. га га тг и * я « к * * <з w я «и

) г * 4 з шктявлиаяазогижаадс«*«»»»

нет мутации есть мутация

Рисунок 2. Анализ мутации BRCA1 5382insC методом Real-time PCR.

Статистическая обработка информации

Вся информации об обследуемых группах пациентов фиксировалась в компьютерной базе данных Microsoft Access 2002. Для статистической обработки данных использовался пакет программ Statsoft Inc. Statistica 6.0.

Результаты и обсуждение

Ретроспективная группа

На первом этапе работы нами проводилось тестирование 8 мутаций у 290 пациенток с РЯ ретроспективной группы (BRCA1 5382insC, BRCA1 4153delA, BRCA1 185delAG, BRCA1 300T> G, BRCA2 6174delT, CHEK2 llOOdelC, CHEK2 1VS2 1 G> A, NBS1 657del5).

В результате было выявлено 36 (12,4%) случаев носительства генетических «поломок». Преобладающей по частоте в ретроспективной группе больных РЯ

была мутация ВЯСА1 5382шбС (28 случаев, 9,7%). Другие мутации были выявлены всего - у 8 (2.7%) обследованных пациенток (ВЯСА1 4153ёе1А - 2 (0,7%), ВЯСА1 185ае1АО - 3 (1,0%), ВЯСА2 6174ёе1Т - 1 (0,3%), СНЕК2 1100ае1С - 2 (0,7%)) (табл. 1).

Таблица 1.

Спектр генетических мутаций в ретроспективной группе больных РЯ (п = 290).

Тип мутации Ретроспективная фуппа (n = 290) %

BRCA1 5382insC 28 9,7

BRCA1 4153delA 2 0,7

BRCA1 185delAG 3 1,0

BRCA1 300T>G 0 0

BRCA2 6174delT 1 0,3

CHEK2 llOOdelC 2 0,7

CHEK2 IVS2+1G>A 0 0

NBS1 657del5 0 0

Всего 36 12,4

Проспективная группа

На втором, проспективном, этапе нашего исследования протокол генетического тестирования был Сужен до определения трех мутаций. 111 пациенток с подтвержденным эпителиальным РЯ были подвергнуты генотипированию на предмет присутствия аллелей BRCA1 5382insC, BRCA1 4153delA и СНЕК2 llOOdelC. Как видно из таблицы 2, у 12 (10,8%) пациенток

был обнаружен генетический дефект ВЯСА1 5382ЬвС, у 3 (2,7%) - мутация ВЯСА1 4153с1е1А, у 1 (0,9%) - аллель СНЕК2 1100с1е1С (табл.2).

Таблица 2.

Спектр генетических мутаций в проспективной группе больных РЯ.

Тип мутации Проспективная группа (п=1П) %

ВЯСА1 5382тБС 12 10,8

ВЯСА1 4153с1е1А 3 2,7

СНЕК2 НООаеЮ 1 0,9

Всего 16 14,4

На следующем этапе исследования мы объединили ретроспективную и проспективную группы исследования и проанализировали клинические особенности опухолей, развившихся у носительниц мутаций.

При оценке зависимости развития злокачественных новообразований яичников наследственной природы от возраста на момент установления диагноза РЯ было выявлено, что возрастной интервал 397 обследованных женщин колебался от 21 до 89 лет (средний возраст 53,2 лет). Как видно из таблицы 3, возраст манифестации заболевания не может являться критерием отбора для выполнения ДНК-тестирования.

Анализ клинических признаков семейного РЯ позволил выявить достоверные различия между носительницами мутации ВЯСА1 5382шзС и пациентками без мутации в отношения анамнеза пациенток с первично. множественными опухолями (7/40 (17,5%) уб. 14/349 (4,0%), р < 0,05). Не было обнаружено достоверной корреляции с возрастом больной <50 лет на момент

постановки диагноза или отягощенным семейным онкологическим анамнезом (табл.4).

Таблица 3.

Средний возраст больных раком яичников с наличием и без «горячих» мутаций ВЯСА1 и СНЕК2.

Тип мутации Число больных Средний возраст, лет

В11СА1 5382шзС 40 52,3

ВЯСА1 4153ёе1А 5 48,8

СНЕК2 1100ае1С 3 58,3

Без «горячих» мутаций в В11СА1 и СНЕК2 349 53,3

Всего 397 53,2

Таблица 5.

Частота клинических признаков семейного РЯ у носителей мутации ВЯСА1 5382тБС и пациентов без мутаций.

Клинические признаки семейного РЯ Носители мутации ВЯСА1 5382шбС (п=40) Пациенты без мутаций (п=349) Р

моложе 50 лет 20 (50,0%) 155 (44,4%) 0,61

наличиеПМО 7(17,5%) 14 (4,0%) <0,05

отягощенный семейный онкологический анамнез 6 (15,0%) 26 (7,4%) 0,18

Примечание: Ввиду сочетания у некоторых пациенток двух и более признаков, суммирование абсолютных чисел и процентов в вертикальных рядах невозможно.

Таблица 6.

Морфологические типы РЯ у носителей мутации В11СА1 5382шС и пациентов без мутаций.

Носители мутации ВЯСА1 5382тэС (п=40) Пациенты без мутаций (п=349)

тип опухоли Число случаев % Число случаев %

Серозная аденокарцинома 37 92,5 р<0,05 304 87,1 р<0,05

Муцинозная аденокарцинома 0 0 12 3,4

Эндометриоидная аденокарцинома 2 5.0 18 5,2

Светлоклеточная аденокарцинома 0 0 6 1,7

Смешанная аденокарцинома 1 2,5 9 2,6

Всего 40 100 349 100

Таблица 7.

Степень дифференцировки РЯ у носителей мутации ВЯСА1 5382тБС и пациентов без мутаций.

Степень дифференцировки РЯ Носители мутации В11СА1 5382шС Пациенты без мутаций

Количество наблюдений % Количество наблюдений %

Высокодифференцир ованная аденокарцинома 0 0 44 12,6

Умереннодифференц ированная аденокарцинома 8 20 92 26,4

Низкодифференциро ванная аденокарцинома 32 80 р<0,05 213 61,0

Всего 40 100 349 100

При изучении морфологических особенностей РЯ было выявлено, что

среди носителей мутации ВЯСА1 5382т5С преобладала серозная

аденокарцинома (37/40, 92,5%). В группе пациентов без мутаций спектр

выявленных гистологических разновидностей опухолей был несколько более

разнообразен, что, по-видимому, объясняется большим числом наблюдений

(табл. 6). Примечательно, что у носительниц мутаций ВЛСА1 5382н15С

15

наблюдалось резкое преобладание низкодифференцированных опухолей (32/40, 80%, р<0,05) (табл. 7).

При анализе распределения РЯ по стадиям заболевания было обнаружено, что у больных с мутацией ВЯСА1 53821шС заметно реже наблюдается 1 стадия опухолевого процесса (1/40,2,5%, р<0,05) (табл. 8).

Таблица 8.

Распределение по стадиям РЯ среди носителей мутации В11СА1 5382шбС и пациентов без мутаций.

Число случаев, % Всего

I стадия 11 стадия III стадия IV стадия

Носители мутации ВЯСА1 5382^0 1 (2,5%) 4 (10%) 21 (52,5%) 14 (35,0%) 40(100%)

Пациенты без мутаций 57 (16,3%) р<0,05 58 (16,6%) 142 (40,7%) 92 (26,4%) 349 (100%)

В ходе оценки статуса первичной опухоли Т1 выявлена среди пациенток

без мутации у 70 из 349 (20,1%) женщин и у 1 из 40 (2,5%) носительниц

дефекта ВЯСА1 5382шС (р<0,05), в то время как ТЗ, Т4 наоборот в группе

носителей мутации ВЯСА1 5382тзС были преобладающими по сравнению с

группой пациентов без мутации - 34 (85%) и 206 (59,0%) соответственно

(р<0,05). Другие показатели системы "ШМ (наличие регионарных или

16

отдаленных метастазов) среди исследуемых групп пациентов были сходными (табл. 9).

Таблица 9.

Распределение по системе ТЫМ РЯ среди носителей мутации ВЯСА1 5382'шзС и пациентов без мутаций.

По системе ТЫМ Носители мутации В11СА1 53821П5С (п=40) Пациенты без мутаций (п=349)

Число случаев % Число случаев %

Статус первичной опухоли Т1 1 2,5 70 20,1 р<0,05

Т2 5 12,5 73 20,9

ТЗ+Т4 34 85,0 р<0,05 206 59.0

Наличие регионарных метастазов № 17 42,5 133 38,1

N0 18 45,0 162 46,4

N1 5 12,5 54 15,5

Наличие отдаленных метастазов Мх 5 12,5 17 4,9

МО 21 52,5 240 68,8

М1 14 35,0 92 26,3

Для изучения эффективности платиносодержащей полихимиотерапии в неоадьювантном режиме нами были отобраны 7 пациенток РЯ из 40,

17

являющихся носителями мутации гена BRCA1 5382 insC. 3 пациентки были моложе 50 лет (42, 46, 47 лет), 4 - старше 50 лет (52, 57, 63, 66 лет). Исследуемая группа имела III и IV стадию опухолевого процесса. Серозная аденокарцинома являлась преобладающей - у 6 больных, у 1 -эндометриоидная аденокарцинома. Всем пациентам неоадьювантно проводилось от 2 до 3 циклов ПХТ с использованием препаратов платины по схемам: циклофосфан + цисплатин, циклофосфан + цисплатин + адриобластин, циклофосфан + карбоплатин, с последующей оценкой эффективности лечения по шкале RECIST, согласно которой у 5 пациенток достигнута стабилизация процесса, у 2 - частичный регресс. После выполнения хирургического этапа лечения адьювантно была продолжена платиносодержащая ПХТ. Время до прогрессирования опухоли составило от 5 до 32 месяцев.

В качестве контрольной группы была отобрана 21 пациентка, которая полуЧала платиносодержащую полихимиотерапию в неоадьювантном режиме. При обследовании ДНК на генетические поломки мутации гена BRCA1 5382 insC выявлено не было. В исследуемой группе пациенток 9 были моложе 50 лет (от 37 до 49 лет), у 12 пациенток возраст колебался от 51 года до 69 лет, у И женщин была III стадия опухолевого процесса, у 10 - IV стадия. Для пеоадьювантной полихимиотерапии использовалась схема «СР» (цисплатин + циклофосфан) или «САР» (цисплатин + циклофосфан + адриобластин) от 1 до 4 циклов, после проведения которой при оценке эффективности по шкале RECIST у 12 пациенток была достигнута стабилизация опухолевого процесса, у 8 - частичный регресс и у 1 пациентки на фоне проводимой полихимиотерапии отмечено прогрессирование процесса. Как и в основной группе, опухоль была представлена серозной аденокарциномой - у 20 пациенток, у 1 -эндометриоидная аденокарцинома с участками светлоклеточного строения. После выполнения хирургического лечения основная часть пациенток (17 женщин) продолжила получать адьювантную полихимиотерапию, 2 пациенткам схема химиотерапевтического лечения была изменена в связи с прогрессированием опухолевого процесса и 2 пациенткам в дальнейшем проведении ПХТ было отказано. Время до прогрессирования в исследуемой

18

группе составило от 6 до 29 месяцев.

20 10 О

П -10 § -20 -30

с

° -40 о

о -50 Р. <3 -60 Л

-70 -80

Наблюдения

Рисунок 3. Эффективность лечения в зависимости от ВЯСА1 -статуса.

В группе больных с мутацией у всех отмечалось уменьшение размеров опухоли, у пациенток без мутаций в 4 случаях наблюдалось увеличение размера опухоли (рис. 3).

Выводы

1. У пациенток, страдающих раком яичника (РЯ), наблюдается высокая встречаемость мутации В11СА1 5382ювС: этот аллель выявлен у 40 (10,1%) из 397 обследованных больных.

2. У носительниц мутации ВЯСА! 53821пзС значительно чаще выявляются первично-множественные онкологические заболевания (7/40 (17,5%) уб. 14/349 (4,0%), р< 0,05).

3. Присутствие аплеля ВЯСА1 5382т5С не ассоциируется с молодым возрастом манифестации рака яичника или семейным онкологическим анамнезом пациенток.

111(11 □0 - «¿£- ——жЦ- .-«Й. ----------—--

«Й :фт:

ООО

4. Анализ частоты ответов на неоадъювантную терапию у больных РЯ не выявил значимых различий между носительницами мутации BRCA1 5382insC и пациентками со спорадическим РЯ. Стабилизация и частичный регресс новообразования наблюдались у всех (7/7, 100%) больных с аллелем BRCA1 5382insC, в то время как в контрольной группе 17/21 (81,0%) (р>0,1).

5. Больные РЯ характеризуются низкой частотой мутаций в гене СНЕК2 1 lOOdelC (3/397 (0.8%)).

6. Из 397 обследованных пациенток не выявлено ни одного случая носительства мутации гена NBS1 657del5.

Практические рекомендации

Все больные с раком яичников должны проходить тестирование на наличие мутации BRCA1 5382insC, а также, по возможности, на присутствие более редких мутаций в гене BRCAl 4153delA и 185delAG.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Соколенке А.П., Лобейко P.C., Крылова Н.Ю., Максимов СЛ., Урманчеева А.Ф., Мацко Д.Е., Никонов A.A., Суспицин E.H., Кулигина Е.Ш., Иевлева А.Г., Улыбина Ю.М., Митюшкина Н.В., Розанов М.Е., Порханова Н.В., Шиманска-Пастернак Й., Любииски Я., Того A.B., Имянитов E.H. Ассоциация между полиморфизмом I157T гена CHER2 и риском пограничных серозных опухолей яичника у жительниц России. // Сибирский онкологический журнал. - 2006. - №4. - С. 12-15.

2. Krylova N.Y., Lobevko O.S., lyevleva A.G., Rozanov M.E., Mitiushkina N.V., Gergova M.M., Porhanova T.V., Urmancheyeva A.F., Maximov S. Y., Togo A.V., Imyanitov E.N. BRCAl 4153 delA founder mutation in Russian ovarian cancer pacients. // Hered. Cancer Clin. Pract - 2006. - V. 4. - №4. - P. 193-196.

3. Szymanska-Pasternak J., Szymanska A., Medrek 1С, Imyanitov E.N., Cybulski C., Gorski В., Magnowski P., Dziuba I., Gugala K., Debniak В., A. Sokolenko A.P., Krylova N.Y., Lobevko O.S., Narod S.A., Lubinski J. CHEC2

variants predispose to benign, borderline and low-grade invasive ovarian tumors. // Gynecol. Oncol. - 2006. - V. 102. - P. 429-431.

4. Krylova N.Y., Ponomariova D.N., Sherina N.Y., Ogorodnikova N.Y., Logvinov D.A., Porhanova T.V., Lobeyko O.S.. Urmancheyeva A.F., Maximov

5.Y., Togo A.V., Suspitsin E.N., Imyanitov E.N. CHER2 1100 deIC mutation in Russian ovaryan cancer patients. // Hered. Cancer Clin. Pract - 2007. - V. 5. -№3. - P. 153-156.

5. Suspitsin E.N., Sherina N.Y., Ponomariova D.N., Sokolenko A.P., Iycvleva A.G., Gorodnova T.V., Zaitseva O.A., Yatsuk O.S., Togo A.V., Tkachenko N.N., Shiyanov G.A., Lobeiko O.S., Krylova N.Y., Matsko D.E., Maximov S.Y., Urmancheyeva A.F., Porhanova N.V., Imyanitov E.N. High frequency of BRCA1, but not CHEK2 or NBS1 (NBN), founder mutations in Russian ovarian cancer patients. // Hered. Cancer Clin. Pract. - 2009. - V. 7. - P. 5.

6. Moiseyenco V.M., Protsenko S.A., Brezhnev N.V., Maximov S.Y., Gershveld E.D., Hudyakova M.A., Lobeiko O.S., Gergova M.M., Krzhivitskiy P.I., Semionov I.I., Matsko D.E. High sensitivity of BRCA 1-associated tumors to cisplatin monotherapy: report of two cases. // Cancer Genetics and Cytogenetics. - 2010. - V. 197. - №1. - P. 91-94.

Подписано в печать 13 декабря 2011г. формат 60x84/16

Бумага офсетная. Печать офсетная.

Усл. печ. л. 1. Тираж 100 экз. Заказ 1553/11

Полиграфическая мастерская.

(Адрес: 196084, Санкт-Петербург, Б. Смоленский пр., 12)