Автореферат и диссертация по медицине (14.00.15) на тему:Морфологические критерии индивидуальной химиочувствительности рака яичников

министерство здравоохранения

и медицинской прошшшосгш россйяской,, фвдкрации

РОСТОВСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ

РГб од

На правах рукописи

ктдам Алексей Георгиевич

иоржологичвские критерии йщивидуашся хдоиочувзтвишшости рака яичников

14.00.15 - Патологическая анатомия

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

ростов -на - дону Т994 р.

Работа выполнена в Воронежской госотерствэнной медицинойоП : академии

НАУЧНЫЙ ШООДИТЕЛЬ:

- доктор медицинских наук, профессор Паокойа B.C.

Официальные оппоненты: /

-доктор медицинских наук, профессор СуТулов Ю.Л.

- кандидат медицинских наук, доцент Волошин В.В.

Ведущая органяаация: •

- Московский научно-исследовательский онкологический институт им. П.А. Герцена . •

Защита состоится "28". октября . 1994 г. в 12 часов на -заседании диссертационного совете К 084.53.01 при Ростовском государственном медицинском университете (344022, г.Ростбв-на-Дону, пер.НахйчеванскиЙ, 29).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке медицинского университета. ,

Автореферат разослан "27" сентября 1994 г.

Ученый секретарь диссертационного совета доцент

Ставскпя Е.А.

ОЕШАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

АКТУАЛЬНОТЬ ТЕИЫ

В настояшее время химиотерапевтическону лечению подвергается более 50z онкологических больных (Переводчикова н. п. 1986г. ). при этон наличие положительного эффекта лечения наблюдается только в 30-50?. случаев (Нечаева И. Л 1987г.. Youn« r. s. et al. 1974г. i. Результаты хиниотерапевтического лечения больных раком яичников за последние 30 лет практически не изменились (Краеская и. С. 197вг.. Kessineer A. et ai.. Barber й. J986r. >. а заболеваемость и снертиость от данной нозологическое формы постоянно растут (Нечаева И. Д. 19й7г. ).

Длительное "неное" начало и быстрое клиническое течение приводят к тому, что в tiQ-9'i'f- случаев (Нерабиявили Н. В. 19взг.. Barber н. J986r. 1 опухоли яичников диагноспируются иа 3-4 стадии опухолевого процесса, это требует обязательного ипользооакня химиопрепаратов • в комплексном лечения данных больных, а в далеко зайушенных случаях химиотерапия остается единственно возможный методом лечения Ютепановекая Г. К. 1965г.).

Одно» из причин недостаточной эффективности химиотерапии опухолей яичников, в частности, является тот Факт, что она осушествляется по стандартный схемах, которые ногут оказаться не только неэффективными для данной опухоли, а иногда даже когут. стимулировать ее рост а кетастлзироеаяие (Коновалова Н. П. 1992г. !.

Причина этого заключается в тон. что ог.ухоли, одинаковые по локализации и морфологии, выявляй- очень большие ин-кившгу-алькыг различия в чувствительности к прикеяяенкх в?е-заратан (Лзг:.п:г о.я 198^г.. ¿ияияяоеа П.к 1993г.).

- г -

На сегодняшний день в большинстве случаев химиотерапия проводится без учета индивидуальной чувствительности опухоли. Поэтому ока и спет быть эффективной только случайно. Чаше она является неэффективной, а в ряде случаев наносит больным вред и ускоряет их гибель. Поэтому в настоящее время крайне актуальный является вопрос о своевременной индивидуализапии химиотерапеатического лечения онкологических больных.

ЦЕЛЬ ИССЛЕДОВАНИЯ

Определение индивидуальной чувствительности опухолей яичников коакреяаа болья&х к определенным .химиопрепаратам для выбора наиболее Эффективных лекарственных средств в каждом конкретном сягчае. "то есть -для индивидуализации химио-терапевтического лечения онкологических больных.

ЗАДАЧИ ЕССЛЕДОВАШЯ

1. гистолоГйческое. Шс'тохйЯйЧеское Шс'вёйовате изучаемых опухолей.

tr исследование частоты ti "ИбрФологкй гроста дервйчныз культур блзстои яичников в диффузионных камерах IK vivo.

3. Исследование морфологии первичных культур опухолевьс клеток в диффузионных камерах после влияния химиопрс-паратов.

4. исследование продиФеративной активности опухолевы; клеток в первичных культурах, вырапенных в диффузионных ка мерах IH vivo.

5.. Изучение влияния конкретных химиопрепаратов на про лиФеративную ахтивность" опухолевых клеток, выращенных диффузионных камерах IN vivo.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА. РАБОТЫ

Впервые проведено исследование индивидуальной химиэч? вствителыгсти опухолей яичников конкретных больных к опре

деленным химиопрепаратам методой первичных культур. вш>а-шенных в диффузионных камерах 1Н vivo, с использование« ав- ' торадиограФии с Нз- тимидином. Это позволило судить о влиянии химиопреларатов на опухоль по степени подавления синтеза ДНК в ядрах опухолевых клеток. Впервые изучено влияние противоопухолевого антибиотика оливошаина на опухоли яичника.

Установлено, что использованным в работе метод культивирования опухолей яичника в диффузионных камерах IK VIVO зозволяет получить первичные культуры опухолевых клеток у юои больных. Установлено, что опухоли яичников обладают шрахешюи индивидуальной химиочупствительносты?. что является одной из причин неудовлетворительных результатов .хими->терапии больных опухолями яичников в клинической практике.

Установлено, что в контрольных культурах опухолевых •леток имеются резкие индивидуальные колебания нитотического тдекса от О до Ш. .

Установлены достоверные различия интенсивности проли-ераиии в опухолевых культурах в зависимости от степени ифференаировки первичной опухоли, средний индекс метки в ультурзх высокодиФФеренаированных аденокараивом - 15.8 +-' .3; унерсннодиФФеренаироаанных аденокариинои - 14. Ч .35; низкедифференцированных аденокарнинон - 21. 5 0. 63.

Установлено, что чем выше пйолиферативная активность оитролькых культур опухолевых клеток, тем достоверно больпе х химночуЕствительность к приненяваинся химио препаратам.

Установлено, что наиболее эффективным препаратам по гепеки подавления пролиФеративгой активности культур опу-5леи яичникое оказался оливомиаин (в 100z прс5) . затем ви-5ласгиа (в ¿су- проб). затем ткоФосФания с76. 9у.), никлоФос-ш (69.¿-i я кетатрексат v45.9;<).

Установлены случаи стимуляции пролиферативной активности опухолевых клеток в культурах под влиянием хиниопрепа-»>атов, Чаше всего это обнаружилось иод влиянием нетотрексата (У 9 больных», реже под влиянием киклоФосФана (у б больных). тиофосФамида <у ч больных), и винбластина (у ч больных!. Только после влияния оливонипила не было ни одного случая повышения пролиферативной активности опухолевых клеток.

ПОЛОЖЕНИЯ. ИШОСИШЕ НА ЗАЩИТУ

1. Показано существование выраженной индивидуальной химиочувствктельности опухолей яичников, вследствие этого эффективная химиотерапия опухолей яичников возможна только на основании результатов предварительного исследования слияния данных химиопрепаратов на опухолевые клетки.

2. Исследование метода диффузионных камер IK vivo позволяет солгчать первичные культуры опухолевых клеток от ка' хлой вольной раком яичников, т. е. в ¡00* случаев.

3:' Наиболее информативным морфологическим критерием, возводящим ' градуировать степень индивидуальной химиочувствктельности опухолевых клеток, является индекс метки (ИМ-/. меченых клеток). определенный методом гистоавторадиограФки с использованием Нз- тимкаила.

4. Опухоли, имевшие более высокие показатели пролиферативной активности в контрольных культурах (более высокий индекс метки).- обладают в среднем более выраженной чувтсви-'тельностью к химиопрепаратам и наоборот.

5. Обнаружена юог- чувствительность опухолей яичника t противоопухолевому антибиотику оливомипину, ene не применяемому при данной локализасии. Следующим наиболее эффективны) препаратом оказался винбластин (SOX всех проб), затем тио

ЮсФанид (76,9У). гопслофосфан (69,2у.), на.последнем месте 1етат?ексат (45.9'/- всех проб).

ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ РАБОТЫ

До сих пор в клинической практике крайне редко прово-штся предварительное исследование индивидуальной чуестви-гельности опухолей конкретных онкологических больных с ди-гостатикам для выбора наиболее эффективного препарата. Это ¡вляется одним из основных факторов, приводящих к малой эффективности химиотерапия.

Данная работа показывает необходимость и возможность ¡редварительного исследования индивидуальной чувствительно-:ти опухолей к хишопрепаратам методом диффузионных камер IH rivo в сочетании с гистоавторадиограФией• с Нз- тимидином. 1роведение химиотерапии с учетом химиочувствительности опу-:оли позволит сократить сроки лечения больных, добиться Solee длительных ремиссий, избежать пагубного влияния на организм больного заведомо неэффективных химиопре паратов. Все геречисленное составляет социально-экономическую значимость >аботы.

Результаты исследования могут быть использованы в пластической работе онкогинекологов, а также в учебной процессе ia ка;сярах патологической анатомии, онкологии» акушерства и чотекологии высших медицинских учебных заведения.

АПРОБАЦИЯ МАТЕРИАЛОВ ДИССЕРТАЦИИ

Материалы диссертации доложены на конференциях молодых "гекых Воронежского Государственного медипянского института ! i ?88г.. 199Сг. > на межрегиональной конФсгенпи до проблеме :ими:терапии злокачественных опухолей <г. Воронеж 1989г.). на »бязспом обществе акгтзеров к гинекологов г. Воронежа

(1993г. ).

ПУБЛИКАЦИИ

По теме диссертации опубликовано 5 научных работ, сдань в . печать методические рекомендации по определению' индивидуальной чувствительности опухолей методом диффузионных камех IH vivo в сочетании с гистоавторадиограФиея.

ВНЕДРЕНИЕ В ПРАКТИКУ

Результаты исследования используются в учебно-педагогическом процессе на кафедрах патологической анатомии и онкологии Воронежской Государственной медицинской академии.

ОБЪЕМ И СТРУКТУРА ДИССЕРТАЦИИ

Диссертация выполнена на 173 страницах кашинописноп т.-кста, состоит из введения, обзора литературы, описани материала и негодов исследования. 6-ти глав собственных ис следования, обсуждения собственных данных, выводов, указателя литературы, в котором приведены ¿55 источников, в то числе 165 отечественных и ¡00 иностранных, приложения. Ра бота иллюстрирована 40 рисунками и 10 таблшшш.

НАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Катериадом исследования послужила ткань операгкг;: удаленных опухолей яичника человека, полученная ог 41 боль ной, возраст которых колебался от 18 до 76 лет.

Исследуемые опухоли имели различное гистологически строение. Наиболее многочисленной оказалась группа серознь опухолей. Она была представлена 32 больными (3 пограничны пролиферируюшие опухоли. 16 высоко-, ю умеренно-. 4 низке дифференцированные аденокарциномы). Светлоклеточяых. граш лезоклеточных и зндометриоидных опухолей было во две. Куш

нозиал аденокаршшома, тубулярная андробластона, дисгерми-яома были представлены единичными случаями.

Для морфологического исследования первичных опухолей из • периферических отделов, вырезали кусочки ткани, фиксировали их в юн нейтральном Формалине. обезвоживали в спиртах восходящей концентрации и заливали в парафин до общепринятой методике. Гистологические срезы толщиной 5-7 микрон окрашивали синцоеым гематоксилином йайера. алышановым синим, эозином и ПИКРОфУКСИНОМ.

Опухолевую ткань для культивирования брали непосредствен в операционной. с соблюдениеи стерильности. Периферические кусочки опухоли помешали в. среду 199 с добавлением го/., инактавирозанной нагреванием, сыворотки крови крупного рогатого скота и антибиотиков. Затеи опухолевую ткань транспортировали в лабораторию, где в стерильных боксах ее механически измельчали и по 3-4 кусочка помешали в диффузионные камеры (предложенные AUlre Y.H. et al. (1964г.)). Для из- ' готовления диффузионных камер использовали Фторопластовые кольца и ниллипороЕые Фильтры "СЫНГОР" (ЧМР) с диаметром пор 0. ЗЗмкм. опухоль каждой больной культивировали в 36-45 ДХ в бришои полости 10-14 крыс-самок <по ч-б камер на каждое животное). в работе использованы 1319 ж к 503 крыс весок 150-200гр.

Первичные культуры опухолевых клеток в диффузионных яамегах IH vivo били использованы для определения индивидуальной чувствительности с^ухолей конкретных больных к 5 хи-■шопрепаратам. из которых диклофосфан. тиоФосФамид. метст--ексат и винбластап- б и.: и рекомендованы Минздравом для ле-;;-Н1'л ог.-.-золгй данной локализации. Противоопухолевый антибиотик сливсми-лн. не используксиися при лечении рака лич-

ников. был применен по рекомендации клиницистов, так как он является наиболее напятим препаратом по отношению к гемопо-ззу больных.

Всех животных с диффузионными камерами делали на контрольную группу 12-3 крысы, соответственно 6-15 дк) и опытную группу (все остальные животные). Контрольным животным вводили по 1нл Физраствора, каждому опытному животному вводили один из исследуеных препаратов, разведенных в жл физраствора. Введение хкмаопрепаратов и Физраствора производили однократно внутрибршинно на- б-ые сутки культивирования опухолевых клеток в дозе, соответствуюшеа о. в ЛД (пиклофос-Фан- гоо кг/кг. тиофосфаиид- 12.о мг/кг. метотрексат- ю. с мг/кг, винбластин- 4,0 иг/кг, оливоиишш- 40.0 иг/кг). ут1 дозы зквигоксичны терапевтической дозировке, рассчитанно5 согласно козФФидиенту. приведенному в работе СоФьиной 3. П. < соавт. (19аог.).

После суточного воздействия хиниопрепарата диФФузионн» камеры, *• извлекали из организма животных, инкубировали в те чение часа в питательной среде 199 с добавлением в нее нз ттаошша <3,7 х 100 тыс. КХ/мл). после чего, ниллипоровы фильтры с культурами опухолевых клеток наклеивали клеек БФ-на предметные стекла. Нанесение фотоэмульсии на культут клеток производили в темной комнате при красном светофильт ре. экспонирование проводилось в течении 7 суток при г 4'< Проявление гистоавтограФов проводили амидоловым проявителе! полученные препараты окрашивали гемотоксилинон найера, сб> звоживали и заключали в канадский бальзам под покровн стекло.

при поноси светового микроскопа изучали зону роста определяли следуюгша параметры пролиферации:

1) Нититотическнй индекс <ИН) - число митозов : на tooo ítok

2) Яндекс метки сии> -у- меченных клеток

3) интенсивность синтеза ДНК. определенную по среднему шчеству зерен серебра на одно интерфазное ядро (ИС ДНК).

Действие каждого исследуемого препарата оценивали в гге по отношение к контролю, по z-иу изменению показателей. >лаФерашет клеток. -

Эффективным для лечения данной опухоли считали препа-г. который снижал исследуемый параметр пролиФерзсии на 30 ¡олее г. по сравнению с контролем, случая повышения проли->ативной активности опухоли под действием гимиопрепаратов рассматривали как отсутствие эффекта и такие опухоли ггали нечувствительными к применяемым шгтостатикам.

При обработке получанных данных бшш использованы ста-' ipraue статистические метод» определения средник вглвгаш я гтоверности пря Р< 0.05 (Авташшлов Г.Г. 1990Г. >. .

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЯ I КХ ОБСУЖДЯМПЕ

*

Проведено исследование опгхояевой ткани 41 больных ра-i яичников, опухоли ¡смели характерное морфологическое >оекие и в соответствия с гистологической классификацией ! <197Тг.) были распределены ва следгаге группы: серозные •ходи были представлены зг наблоаениями. онк состояли из з •раянчных пролифелкрукгях опухолей. 15 высоко- . ю уие-яо- и ч-х кизкодифференпированнык аденок^.тайном. Среди : обнаружено два случая диморфных опухолей, состояамх из 'озного ч мушшозного эпител-'я. активно вырабатывающего ■пиан-положительную слизь. Данные опухоли - отнесены в ппу серозных новообразований по преобладанию эпителиаль-о компонента {Загольская Ей. 1990г.).

в опухолевой ткани исследованных серозных новообразс ваний отмечена различная степень выраженности лимФоиднс янфильтрашш, некротических изменений и отложения солей из вести.

Другим' представителем эпителиальных опухолей яички* явилась высокодиФФеренпированная псевдомудинозная аденокаг пинома с хорошо выраженным сосочковым строением и интен сивным слизеобразованиен. Зндометриоидные раки были преде тавлены г наблюдениями, они имели четкие железистые струя туры.

Светлоклеточные опухоли <2 наблюдения) имели выражении колебания соотношения стромального и эпителиального компс нента.

Обнаруженные у 2 больных гранулезоклеточные опухол представляли иикроФолликулярный вариант строения и содержал Колл-Экснеровские тельпа.

Единичными наблюдениями были представлены губулллрка андробластома и дисгерминома.

При культивировании опухолевой ткани раков яичника диффузионных камерах первичные культуры клеток были получен от каждой исследуемой больной, т.е. в юох случаев. Резуль тативность культивирования ногла широко колебаться - о 47, бх у дисгерминомы до юоя у ряда серозных опухолей, а среднем для всех опухолей она составила вз. 1'л. При этом ре зультативность культивирования не зависела от гистологичес кой форны и степени дифференакровки опухоли. На отсутствл роста клеток в диффузионной камере влияли трансплантапи некротизкрованного. или инфицированного опухолевого матери ала, а также нарушение целостности ниллипорового Фильтра.

и -

Полученные в ДК первичные культуры опухолевых клеток ¡ели следующий вид: на листке ниллипорового Фильтра распо-. гался трансплантированный кусочек опухолевой ткани в сос-янии некроза, а по его периферии выла видна зона роста зличной ширины. Яри узкой зоне роста клетки, как правило, сполагались равномерно по поверхности Фильтра в один, а ихе к кусочку в г-3 слоя. При широкой зоне роста на Фоне вномерно расположенных клеток, образовывались многослойные руктуры в виде "языков* тяжей, направляющихся от трансп-нтированного кусочка к периферии. В некоторых культурах еди участков равномерного распределения клеток встречались руглые. многослойные скопления в виде своеобразных "сФе-идов*. Формирование подобных зон роста описывалось ранее и культивировании рака яичников <н. 1Лпк£игя 1973.. и. нестап 19б9г. ). рака желудка <жеро с. А - 1943г.. Кормая д. Б. -взг.). рака легких (Потапов ПН. - 19в4г.). неданоки вятухин н.ф. - 197чг. ) и т. д. •

В первичных культурах 'эшггедиальякх опухолей яичника ?еделялись 4 вида клеток: эпителиальные« Ф.зробластоподо-хе. гистиошгты и димфошгты.

'В большинстве случаев в культурах преобладал эпители-•>кыя компонент.

Описанные особенности роста опухолевых клеток были ха-<теркы для всех первичных культур. Опухоли определимой гтологической Формы и степени дифференсировки имели свои збенности роста. Так, к ".пример, пограничные серозные иис-;еиокы. сосочковые раки высокой и тхерелной степени диФ-?енпировки образовывали в культурах клеток соссч.сообразкш; 'уктуры. В группе первичных культур высоко- и умеренно-Мерекипровзяных опухолей иногда Формировались железистые

структуры с четкое выстилкой кубическим или килиндричеа эпителием, в которые иногда обнаруживалось накопление о рета.

Об образовании тканесдепиФических структур в культу; опухолевых клеток рака хедудка. легких, молочной железы ' обвали жеро С, А (1985г. ь Потапов с. н. (1985г.). Евгень Т.П. (1970г.) и другие, по их мнению, образование тканес пифических структур лишний раз говорит об идентичности ловий роста опухолей в Д и организме человека, а так ж сохранении опухолевыми клетками культуры своих биологичес особенностей. .

При анализе культур раков яичника различной степ диФФеренаировки хочется отметить, что появление тканеспе Фических структур, т.е. признаков гистогенетическоя прин аехвости'бщо характерно Только для пограничных, высоко-умереннодиФФеренпироваюшх опухолей. При росте в диффу онных камерах низкодиФФереноированных серозных опухолей злокачественных новообразований другого гистологинеза т неспепиФические структуры, как правило, не образовывались некоторых культурах в группе серозных низкодифференди ванных опухолей происходило образование компактных округ структур, капокинахвих сфероиды, образование которых, i можно, связано с сохранением этими клетками де сносом.-

После воздействия химиопрепаратов. в зоне Роста опьп культур можно было обнаружить некротические, некробиоттг кие. дистрофические изменения опухолевых клеток, прояви шеся в виде деФормаяии ядер, кариопикноза. кариолиз! появления клеток-теней, глыбчатости хроматана. Обнаруж] лись также изменения числа митозов (чаше снижение), влиянием винбластина происходило увеличение числа пагод-

ческих китозов. степень выраженности акстро*ическкз гФоа»с-сов варьировала от опухоли к опухоли. в пределах культур одной опухоли и в разных участвах одной культю?«. Существование выраженного запаздывания в появлении первых достоверных морфологических признаков, шбедл клеток после воздействия химиопрепаратов (Иржанов С к. 1982г.. Серов С. В. 1981 г.) не позволяет использовать эти признаки для своевременной правильной оаеики эффективности влияния хихиопреаа-рата яа данную опухоль. Поэтому в нашей исследовании для опенки влияния химиопрепаратов на опухолевые клетки км основное внимание уделили морфометрическин показателям, отражающим изменения продиферативноя активности клеток

при опенки пролиферативной активности яо КИ и яс ДНК в соответствии с данными литературы (Казаичева Я. А. 19в 1 г.. Котельников В. Д. 1989г.) была обнарожена более низкая достоверность этих показателей по сравнению с ИМ - х меченных клеток, т.е. У- клеток. находякихся в Фаз*» ск *еза ЯШ (см. табл. N11. Показания ии позволили увидеть не только индивидуальность кажлся опухоли, но и обнаружить достоверные различия между средними значениями пролиферативной активности контрольных культур серозяих опухолей разной степени диФФеренпировки <при р < О.ОН,

При анализе пролиферативной активности опухолей друг;--: гистологических групп обращает на себя внимание нудсвис-зиачс'ния ин у гранулезоклеточной и тубуяяггюя аидробластомы при наличии выраженной зоны роста, мйжзю высказать предположение. что применение метода дк для культиьировзкйя опухолей стромы полового тяжа затруднено из-?а сбалансированного влияния женских половы;' гормонов животного - реаипиги-та.

Таблица н 1

Пройиферативиая активность опухолевых клеток в первичных культурах

Я/И: Номер : Иитотический Индекс Интенсивность

: протокола : индекс : метки синтеза

(НИ) (ИН) • ДНК

1 : 2 3 : 4 5

V. Пограничные серозные опухоли

1 13 4, 3 22. 30 44. 00

г га ■ г. о 37.40 7, 51

3 43 13.0 35. 00 18. 30

Средние величины: 6,4 31. 60 23.40

6-0.245 6-0,465 6-18.60

М-0. 45 м-0. 85 И-10,30

\ Высокоитсреншрс ванные серозные

аденокаршшоны

» 1 4.0 2.1 0.23

2 3 2.0 в,9 З.'5в

3 7 1.0 -.5 0.26

4 в 2.0 9.6 2,07

3 10 . 0.0 23.0 20.70

6 24 в. в 24.6 9. 20

т 23 2.0 Т. 1 4.95

в 29 0.0 7.0 4. 33

9 30 11.0 19.6 6. 42

10 31 2.9 4.32 0.51

п 32 0.0 4.5 0. 60

12 39 0.0 в.О 3. 10

»3 42 1.0 16.6 43.66

14 44 0.0 53.09 17.49

13 45 3. 92 Й. 95 2. И

Средние величины: г.6 15.5 5.00

6-0.158 6-0. 365 6-6.40

-0. 13 М-0. 3 Н-1.70

3. Умеренногкмерениорованкые серозные

аденокаршшоки

1 4 4.0 13.2 6. 16

г в 4.0 26.7 9. 00

3 ! 1 0,0 14.4 4. 56

4 14 0.0 19.02 21,06

5 2,0 14.5 б. 90

6 26 10.0 13.6 4. 70

33 3,0 г. 5 0, 26

б 36 0.0 17. 9 4. 64

9 4? 2. 0 9. 5 7. 10

1С чб 0.0 12.5 4.СЗ

гел^чч'.кы: 2.5 14.4 5. 30

6-0, 155 6-0. 351 6-2.4"

М-0,16 К-О.35 М-О, 8 г*.

Табли'на Я 1 (продолжение)

Я/Я: Нонер Нитогическия Индекс : Интеясионостъ

: протокола : индекс метай синтеза

(НИ; . (ИИ) днх

1:2 : * 4 щ

4. Низкодифференяированные серозные аденокараиноны

1 2 10, 0 24.4 48. 80

г 9 0. 0 44.0 1. "0

3 16 10.0 16.2 12. 12

4 27 6.0 1. 34 0. 72

Средние величины: 6. 5 2!. 3 16.00

5-0. 247 б-О. 43 6-22.60

м-0. 39 м-0. 68 М-11,30

Обшие средние 3. 1 14. 7 8. 23

величины по всем б-О. !в б-О. 43 б-б. 3

серозным опухолям м-0. 14 м-0. 4 М-4, 3

3. Эндокетриодные аденокараиноны

1 18 0.0 2.91 0. 97

г 21 4.0 12. в 3.77

Средние величины: г. о 7.83 г. 37

б. Светлоклеточные аденокарпин"мы

1 23 2.0 3, 5 4.39

2 34 0.0 3. Зв 0, 48

Средние величины: 1.0 4.34 г. зз

7. Гранулезоклеточные опухоли

1 17 0.0 0.0 0,0

2 37 0. 0 0. 3 0, 02

Средние величины: 0.0 0. 15 0. 1

8. Псевдомупинозяая аденокаршшонл

1 12 1, 0 з, г 0. 34

9. Тубуляриая алдрсбластоиа

2 13 0.0 0,0 0.0

з . го

10. Дисгерминоиа ч. о

ь

Данные хюоючгвствктедьнос - л культур опухолевых клеток

f

вредстаадеяи в тамнае I г в виде г изменения ЯК вод влия-внем хюоюпрепаратов по савнени» с контролем. Как видно из таблицы. действие гкмиопрепаратов на опухолевые клетки моглб вызывать как снижение пролиферативноя активности клеток, так s резкое ее совшекне. При этом о-гиечена крайняя индивидуальность чувствительности опухолей к. каждому из исследованных препаратсв.

Проведение данного исследования позволило нач разделить серозные опухоли на группы химиочувствителькых (чувствительность •• 4-а препаратам» в хикиорезистентных (резистентность к г и более препаратам) опухолей. При сравнении этих групп бшш Обнаружены достоверные • различия (прк р*0. 03) аролхФеративаэя активности контрольных культур. Так ин хи-мночувстжвтмыая серозных опухолей раьеа ib. «»-о,28. а хи-торезмсккпшх- 7.а«-о.гб. т.е. имеется двойное превшею» одного показателя над других, о суиествованик подобной тек-деншш говсрвдк оря яссдедовашш рака легких Потапов с. к. (19вЗр.) к »ака юршюеов C.R Scbindier ишг.). Это возводит говорить о. потенциально более высокой химиочувстви-TtJibsocTR опухолей, обдадасеих более высокими показателями вродябердтшввоа активное«. очень важны обнаруженные «акты парадоксального декствкя хкхиспрепаратов на культуры опуходя - тестя подавленна роста опухолевых клеток отмечена стиму-дкгшд их роста. Подобные случаи бшш выявлены во всех гистологических группах раков кроме пограничных серозных опухолей. Стимуляция синтеза ДНК под влиянием химиопрепаратов обнаружена г 13 больных ¿из 41 исследование;:!. Часе это снисходило псле влияния метотягкеата и диклофосфава 19 и б раз соответственно).

- IT -

Тазлиаа Н 2 *

ХимиочуЕствительнось опухолевых клеток, выраженная процентом подавления ИМ по отновению к контролю

H/N: Номер : Цикпо- : Тиофос-: Нетот- : Винб- :Оливо-:протокола: ФосФан : Ф.чмид : рехсат : ластии ;мииин

1. Серозные пограничные опухоли

1 13 58. 3 94. г 97. 3 9». 4 99. 1

г 28 93. 1 О. О 71. 7 65. 0 79. б

3 43 95. 1 96. в 90. 1. 9в. 3 100. 0

2. ВысокоаиФФеренцированные серозные аленокараиноны

1 1« 0.0 60.0 9" - - -

г 5« 0,0 0» 0. 0 0.0 -

3 7« 0» 0» 0« 0.0 -

4 8 0.0 0 87. 5 37.0 -

5 10 60.5 32. 7 79. в 38.7 -

6 гч 94, 0 95. 5 SOO.O 98, 1 100,0

7 25. 94. 3 74. 7 0« 88. 0 вв. г

8 29" 91, 4 70.0 0» 0« 97, 1

9 30 в!. 6 69, Ч 98.0 93.0 93.9

10 31 0,0 0,0 0. 0 0.0 81.5

11 32 95.6 74. 9 аа. 9 too.o 100,0

12 39 99.8 95, 0 0,0 99,9 100.0

13 42» 0« 0» 0.0 93,5 100.0

14 44 0.0 95. 6 89. в 57, 3 93, 9

15 45» 35, 5 91.4 0« 0« 74. 1

3. УмереннодиФФереипированные серозные ааенокаракноки

1 4 1С? 77. 3 0.0 - -

2 6 8S. Ч 99.0 0.0 98.2 -

3 11 79. 7 1С0, 0 0.0 96. 5 -

4 14 39. 5 100,0 100.0 100. 0 100. 0

5 22 0. 0 60,0 - 93. в 97.2

6 26 92. 7 74,3 83,8 100,0 97. 1

7 33« 0" 72.0 0. 0 72.0 84,0

3 36 86. -5 63. t lOO. 0 100.0 100,0

9 41 54.8 75.7 0.0 90.3 100.0

10 46 76.5 76. 3 65. 3 97.6 93.4

4. низкодифференпированные серозные ааеноюрииисии

1 г» 0» 0.0 0,0 - -

г 9 68. 0 86.Ч 54, 5 100.0 -

3 16 93. 3 38.9 74. 1 82.7 90,1

4 27- 0» 0» 0« 0» 55.2

5. Эняометриоидкне раки

1 18' 89. 7 85. 3 0» ее. з 39.7

2 21 86. 7 92.2 89.8 - . 94.2

Таблица К 2 (продолжение)

Н/.Ч: Номер Никло- : : Т1"":ос- : Кстот- : Еинб- :Оливо-

;протокола: фосфан : : «анид : гексат : : ластин : мишш

1 : 2 : 3 4 : 5 : б : 7

б. Светлоклеточные раки

1 23« 61. 1 67.0 С» 53.4 71.7

2 34 65.0 91.1 76.3 67,5 92. &

7. Ггаи'/лсдоклеточные опухоли

1 17 метка не обнаружена

2 37« 0« 0.0 0,0 0« 100.0

8. Пссвяомуцкнозиая аленакаршшоиа

1 1С 56.0 63,3 О.С бб, 3 81.0

9. Тусулярнзя андробластоиа

2 15 метка не обнара^енз

10. Дисгернинома

3 ' 20 77.5 93,2 - 96.2

I

Прпнечатее: Снижением Км тле. чем на _ 50>- считалось

нечувствительностью опухоли к х;:>:иопрсл1рагу и сбегнзч,!Л?сь как "О":

"«"- обозначены случаи повышение ИМ по сгаонс:::!» с контролем

. Т№4ссФам;и и вии&ластки поврали КН по 4 раза. Под влиянием оливсмишшл таких случаев обнаружено не было.

Суммируя полученные данные, мы можем окенить степень зиективности ксученных химиопрелагатос лги опухолях яичника в среднем. На первом месте оказался сливсмппнн. сн показал ?Мекп!РН-.Ч"ть у 100" исследованных опухолей. Ка втором месте - ранедлотин - зисктиснесть 50"''. опухолей. Затек !!д;т тио-¿76.?"!. ипкг.о !с 169.3"). Какгслее з»}скткекь»1 сказался нетстрексат - сн г.одлвл-.л гост клетск в 45.9 ис-слс-,свс:;::->:>: ос:>:сс.с

Таким образен, метод культивирования опухолевых клеток рака яичника в диффузионных камерах, помешенных в «ровную полость лабораторных животных, с последуигим воздействием цитостгтаксв. имеет ряд существенных преимуществ перед другими методами культивигования и исследования химиочувстви-тельности спухолоп. эта методика дает высокий процент госта (до 100* больных), позволяет сохранить биологические свойства первичной опухоли, ¡з частности воспроизводят в культурах клеток морфологические структуры, характерные для первичной опухоли, осушествляет воздействие хиниопрепагатов на опухолевые клетки не только непосредственно, но и опосредованно через организм лабораторного животного, а определение хими-очувствительности опухоли методом гистолвторадиографии с использованием Из- тиииди»а позволяет получать достоверный результат.

Важность данной работы заключается я а том. что на группе больких опухолями яичникоп показана ррзко • ¡раженная индивидуальность химиочувствительности опухолевых клеток, то есть оказалось, что только при предварительной определении химиочувствительности опухоли каждой сольной может бить обеспечена ее эффективная химиотерапия. Это тен более акту-, гльно. что каких-либо достоверных морфологических критерием, солеряаякхся в ткани первичной оп/ходи, пропюзкртгих чу ствительность этой опухоли, к химиопрспаратам пока не обнаружено.

вывола

1. использование метода ДК iri vivo для культивирования опухолей яичника в дл}фузнош!г:х. позволило получить клеточные культуры из опухоли кахлся больной (в 100/. случаев). При этой рост первичных культур отмечен в ЮЭ2 из 1319 ДК. т.е. в 83.1*.

2. Зона госта первичных культур опухолей яичников имели черты сходства, и различия в зависимости от морфологии первичной опухоли. Везде наблюдался рост эпителиальных клеток и Фибробластоп с единичными гистиоаитлми. лимфоцитами. В культуглх всех опухолей имелись поля монослоя, многослойные клеточные тяжи, и округлые многослойные скопления клеток в

- V (1

виде "сфероидов". В культурах высокоди.гсреицироваиных опухолей дополнительно образовывались сосочковые и железистые

стгуктуры.

I

3. Пги воздействии на первичные культуры в опухолевой ткани противоопухолевых препаратов в течения суток обнаружены дистрофические и некротические процессы в опухолевых клеток, но не обнаружено заметных изменений морфологии зоны роста. Пги этом визуальные морфологические параметры оказались мало информативными для ггадапни степени действия противоопухолевых препаратов на опухолевые клетки.

4. Обнаружены резкие колебания митотического индекса в контрольных культуглх опухолей яичников (от 0 до 13). Серо-зныо- высоко- и уиегеннодиФФерениированные аденокарштомы выявили близкий уровень мктогического юиекса (2. 6»-0.13 и 2. 5*-0,1Р соответственно). в серозных по:ганнчкых опухолях и кизкодиМегенгнгсганнкх адекгклггикоьах мйтотичееккп индекс гапетао бсльге (6.4--С.4: и &.5*-0. 3 соответственно) " бли-зс:с пс значгкикз.

«

5. Онаружены выраженные индивидуальные колебания интенсивности синтеза лик на одно яд* о в группе серозных опухо-¡ей (от О до 4а. й). средние значенил ИС ДНК на одно ядро по руппам опухолей были следушими: для пограничных серозных пухолей -23,ц• -¡0.3; для высокодифферениированних серозных денокарцином - 5.о*-1.7; для УмереннсдиФФе?енаированных ерозных аденокдриинои - 5, 3«;0.32. для кизкодифференпиг -анных адеиокаршнюн - 16.о*-I1.3. Пгн этом различия между руппами имели только тенденцию к достоверности.

6. Обнаружены достоверные различия средних цифр индекса етки (по Из- тиниаииа) между культурами серозных опухолей ичника. отличагсихся по степени дифференшпчэвки; (15. 8»-0. 5

высокодиФФегениированных- н. ч»-0,35 г умереннодифферен-ированных и 21. 5« -О, 68 у низкодифферениированиых серозных денокариинон). Это позволяет говорить о существовании дое-оверной связи между степенью диффереипировки я иятенсивио-тью про.шФеративных реакций в первичных опухолях.

7. Обнаружена наиболее высокая достоверность индекса етки (определяемого автогадиограФически с Нз-тиикдином) в венки питотоксического действия химиопрепаратов на культуры пухолевых клеток по сравнению с Митотическян индексом, ин-енсивность» синтеза ДНК. дистрофическими я некротическими ропессами в опухолевых культурах.

а. Обнаружена достоверно более высокая аголифератявная ктивность <по КИ) б контрольных культурах в группе более имиочувствительных опухолей яичника по сравнения с группой енее хкниочувствителькых :ЯН Солее хкху.очуветттмьюа ультур в контроле равен н=15,4 0,28. ия менее хиииочув-тхгитедьннх культур в контроле равен й-7. 8 »- 0.26),

- гг -

9. На первом местс го э-К ктивксстн ¡шмиотерапевтичес-кого влияния на опухоли яичников. (по угнетению ИМ в первичных культурах), ог.азгпся ояйеоккиш (в 100* случаев), на втогон месте - виибластии (в 60/. проб), на третьей тиоФос-4 амид <76.9* проб), на четвергом циклоФосФат (69,3?: проб) и на последней место нстотрексат (45, 9я проб).

Ю. Обнаружены Факта стимуляции пролифератнвной активности клеток первичных культур под влиянием противоопухолевых препаратов. Чаае всего это происходило под влиянием метотгаксата (9 опухолсш, рехе пол влиянием ииклоФосФана (6 опухолей), -иоФосФамиаа (4 опухоли). и винбластииа (ч опухоли). Гюсле воздействия оливомисина не обнаружено ни одного случая повышения яголиферативной активности опухолевых клеток.

11. Шраженнзя индивидуальность химиочувствительностн опухолеа'янчников. при отсутствии морфологических маркеров чувствительности' в первичных опухолях, является одной из ппгаш кеудовлетрогитолькых результатов химиотерапии. Поэтому выбор химиопгепагата для эффективного лечения конкретной больной возможен только после предварительного исследования влияния этого пгепарата на данные опухолевые клетки.

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ ПО TEHE ДИССЕРТАЦИЯ: •

1. Метод культивирования опухолсеых клеток в диффузионных камерах ;;ак способ уточнения их гистогенеза и индивидуализации химиотерапии опухолевых больных (Плякова С. С.. Филилова л. А. ) - //D сб. Современные методы норфолсгического исследования в теоретической и практической онкологии. Тбилиси - 19S8r. С. 142- из..

2. Исследование индивидуальной хиииочувствительности опухолей яичников у больных (Павкова B.c., филилова да. ). -//деп. в винити.-таг. s д. - ta<»i5.

3. Пути погыяеяиа эффективности лекарственной терапии через определение индивидуальной чувствительности опухолей к химиопрепаратам (Паакова в. с.. Потапов с. н.. Филиппова ДА.). -// в сб. Химиотерапия злокачественных опухолей. -Вороне1* 1989г. с. 3-ю.

4. Чувствительность серозных аденокарпином яичника различной степени катапдазим к килирушнм препарата (Пааковд B.c., «илипова л. А., гулиев Е г. >. - // в сб. Химиотерапия злокачественных опухолей. - Воронеж. -1969г. С. 17-20.

5. Возможность применения оливоиишша при лечении раков яичников. (Пашкова B.C. . Коеальчук C.B. ). -// в сб. Актуальные вопросы потологическоя анотомии. Харьков. -1990г.

169-172.