Автореферат и диссертация по медицине (14.00.23) на тему:Морфологические изменение кожи животных при введении витамина А и цинка

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ И МЕДИЦИНСКОЙ ПРОМЫШЛЕННОСТИ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

МОСКОВСКАЯ МЕДИЦИНСКАЯ АКАДЕМИЯ им. И.М.СЕЧЕНОВА

РГ5 ОД

На правах рукописи УДК 612384.577.16546

СОЛОДОВА ЕЛЕНА КОНСТАНТИНОВНА

МОРФОЛОГИЧЕСКИЕ ИЗМЕНЕНИЯ КОЖИ ЖИВОТНЫХ ПРИ ВВЕДЕНИИ ВИТАМИНА А И ЦИНКА

14.00.23 - гистология, цитология, эмбриология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Москва 1994

Работа выполнена в Московской медицинской академии им И.М.Сеченова

Научные руководители: доктор медицинских наук,

профессор АФАНАСЬЕВ Ю.И.

доктор биологических наук, профессор КАЛЕТИНА Н.И.

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук, профессор ХЛЫСТОВА З.С.

доктор медицинских наук, профессор ГЕМАНОВ В.В.

Ведущее учреждение: Московский Государственный

Университет им. М.В.Ломоносова

Защита состоится «_»_1994 г. в_часов на

заседании специализированного совета Д 074.05.05 в Московской медицинской академии им. И.М.Сеченова (119435, г.Москва, Абрикосовский пер., д. 1).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Академии (г. Москва, Зубовская площадь, д. 1).

Автореферат разослан «_»_1994 г.

Ученый секретарь специализированного совета, доктор медицинских наук,

профессор В.А.Варшавский

<БШ ХАРАКТЕР ЙСТЙКА РАЕОШ

Актуальность _проблеш.Ксхе принадлежит важная роль г обмене микроэлементов и,в частности,цинка. Иапестно, что недостаток«. лое поступление ¡jzara ь оргиня?:л яяьсгнчх сказиваотся на кожа гз ее произвола ' supple» ai.al. »1958;. ТогЬе* п.а. ,

I960). Гистологическая карта:» козтих кг::8неи:г2 при дефиците цинка в срганяпус ьклззчает в себя глП'?рч«:>згиниоаиив, истснче-ппо эпидермиса,. атро£;;п еолосянмх $оллк»улов ( ЩсМ-иги. u,s I9&5; ott s.a.. at.al. ЛS6&). В настоя^зе врезд болызая часть ксследованяй поспящена п^нхдетглцагним состояния:!. Влияние избытка iv-iiixn. на коку изучено недостаточно полно, хота на наш взмил, эта проблема не мене^ актуальна в сзязя о ухудшениям зхологэтзскнх условий {».'Шфоэлсментнов загрязпош:г охругата'! сред;), а также п сглза с ¡гяроквм применен»:«? грепнр.^тои пкк.чп в клинике внутренних болезней (БЗг-нко Г.А. ДЧ;?.:-гтк2!!а Л.Ь.» 1371), я для лечэняя рядг. дбр^ятологзческс: ( arouni-

з.» l!aol-»oi 1.2. »1970; ai.al» Л&71; Згмы?-

Taloo 0. JS77).

Сегодня во воем пире придается болмсо« згпчонкэ еог^ангш а применению лекарств нового ткзп - б s* окоордЕнаиаониы* сосда-пений, в состав которых входят макроэлемент«. В частности, х такта соединениям относятся б.чего^плр.чен панка с органг'чееггте? лягачлгяк (амг.'ючислоть.чч, угловодш.и, r0f*.«0!'fMi!.

известными лекгрстрз!'Н!^ли •Jopsissm). Бгснемплексм цинга» з первую очередь могут бить попользованы ддп ус пленяя регечграцяоя-ras процессов при .гопеиия гноРно-воспалятелыпа заболеваний, сопровогдаюгахея понетением юмуиного статуса организма (Кс -s— тявл Н.И. ,1963}. Одним аз таких биокемплекеов иеяет Снть пктл-иин А, тая как известно о взажкем влаянии eztsjov.-». к г-

элемента цинка на метаболизм друг друга (Бауман В.К., Берзань Н.Л.,1976; ЬерЗИНЬ Н.И.,IS9I; Solomons N.W., Ruaael R.*. ,1980; skian D. at.ai.,1987), а также о значительном влиянии витамина А на метаболизм клеток эпидермиса (ГреСенаижошБ.И. и др., 1973;, Афанасьев Ю.И. и др. ,1983,1986,1990; wolf G. at.al. ,1983), который содержит клетки мишени к витамину А и его аналогам.

Цель и задачи исследования. Целью проведенных нами экспериментов явилось изучение морфологических изменений ком животных при сочетянном введения сульфата цинка и ретинол-пальмитата.

Для достижения указанной целя были поставлены я решены следующие задачи:

1. Изучить изменения в коже при длительном пероральном введении сульфата цинка.

2. Изучить изменения в коже при длительном одновременном введении сульфата цинка и ретинол-пальмитата.

3. Изучить изменения в коже при сочетакиом последовательном введении сульфата цинка и ретинол-пальиитата (в прямой в обратной последовательности).

Научная новизна исследования заключается в том, что.впервые определены морфологические а некоторые гистохимические показатели кс-и при раздельном в сочетанием введении сульфата сушка и витамина А.

Установлено, что введение животным витамина А, вызывает состояние гкпоцнккемиа, которое может Сьть скорректировано последующим введением сульфата цинка.

Установлено, что сочетанное внесение витамина А и сулъфа-

V

та цинка дает возможность в значительной стеаепя влгятъ на морфологические и гистохтааческке показатели ко&а.

- 3 -

Научно-практическая значимость работы.

Данные настоящего исследования могут быть учтены v-ул разработке вопросов, связанных с коррекцией микроэлементного состава организма при лечении различных заболеваний кожи, при которых иироко используется витамин А. Результаты исследования представляют значительный интерес, связанный с возможностью коррекции морфологических в гистохимических показателей клеток эпидермиса и дермы при различных патологических состояниях коки.

Апробация работы. Основные положения диссертация доложена на заседаниях кафедры гистологии, цитологии и эмбриологии ММА га.И.М.Сеченова (1992-1994 г.г.), на 2-й Всероссийской конферен-цел "Влияние антропогенных факторов на структурные преобразования органов, тканей, клеток человека и животных" (16-18 сентября 1993 г., г.Саратов) и на заседаниях КНОАГЭ (Москва,1993 г.).

Объем я структура диссертации.Диссертация язлохена на 131 ласте машинописного текста, кллзстрлровака 9 таблицами, 24 рс-сункаыа. Диссертация состоит ез ведения, обзора литератур«, глав собственных данных, выводов s списка литература, в который входят 215 литературных источнгха, из них 68 отечествешгых и 147 зарубежных.

Основные положения, выносимые на засату:

1. Пероральное введение кивотным сульфата пинка в дозэ I иг на 100 г •►¡accu способствует пакоялепга цзнха d кровз с герстз гквотных, вызывает увеличение тситгг.нш росткового п рсго-вого слоев эпкдар.'иса г увеличение тоязциш дерти, погашает аг;;-тетяческутз активность яератнноцитов.

2. Введение зивотныа ретгнол-палхнятата визнпасг с~стел-пке ггпощшкецли, прг котором также повивается толцгна .-плдер-миса я дермы животных, усиливается синтетическая актлвносгь о

кератиноцитах.

3. При одновременном и последовательном (в прямой и обратной последовательности) введении сульфата цинка г витамина А можно направленно изменять толщину эпидермиса, гистохимические показатели его клеток, а также клеточный состав дермы.

МАТЕРЛАЛЫ И ИВТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ Работа выполнена на 120 нышгя-саыца1 линии СБА весом 1820 г и включает 5 серий наслюдеиий:

I серия - животные, получавшие сульфат пиша.

II серия - животные, получавшие витамин А.

III серия - животные, получавшие одновременно сульфат цинка

и витамин А.

IV серая - животные, получаааша витай ил А ка фоне предваритель-

ного введения сульфата цинка. 7 серия - аивотные, получавшие сульфат цинка на фоне предварительного введения витамина А. Контрольным жшзоткш вводили воду.

Сульфат цйкка жавотниы вводили в виде водного раствора кз расчета I мг на 100 г массы. Ta.i&u доза сульфата цлнка соответствует терапевтической дозе втого препарата, используемого лдя лечения бгльимх с гнезднда облысением (ГаХлявлчув П,П., Кавлей-кайте И.А.,1&о6).

В .качестве овтшша А испольаоьала маслинный растэор рета-«ол-плльмитата, вводимого ежедневно яз расчета 2 мг на 100 г. маегы. Однократная дога ретинйл-пальыгтога в 20 раз нюге фармакологической доза, которая составляет 0,1-0,2 ЛЕЬО (Ноздран В.Н 1069).

СулМлт цинка, ретлнол-пальмягаг я веду зпод.-.ти «воткшг екедневно, перорально, зоидошги методо« в желудок в объеме 0,1

ил в течение 25 суток.

В 1У г У сериях эксперимента предварительную премедикацив соответственно сульфатом цинка а ретинол-пальмитатом осуществляли за 25 суток до основного эксперимента.

Сроки продолжительности эксперимента составили 3,7,15,25 суток. Спустя 24 часа после последнего введения вещества зиво^ тгх забивали катодом декапитацки. Для исследований брали когу епшш животного, кровь я версть. Для световой микроскопии кусочки кожи фиксировали а 10$ нейтральном формалине. После фаз опция а промывки материал обезвокявали в спиртах, возрастающей концентрации (70,55,100). Затеи заливали его в парафин по общепринятой методике. Парафиновые срезы приготовляла толщиной 6 мкм»

Толщину эпидермиса, соотноаениа рссткового а рогового сло~ ев в нем, а также толщину дермы просчитывали а препаратах, окрашенных гематоксалин-эозянои с помо я. и окуляр-микроиетра.

V

Для определения содержания РНК использовали препараты,скрашенные галлоцианан-хроиовыма квасц^мя по да Бер а Сарнакер о послецую^-зй цитофотометривй.

Для определения общего белка пепельзопалп прэпгратц, окраинные прочнш синим В по Еернстопу с псюледуздаЗ цитофотсав*-рией.

Концентрацию РЩ и общего белка определяла в цптоплаимэ глемя базальяого п богатого слоев эпедвр«яеа то-тк-, мем-дом ла цатофотсметре "Зетопан-Рейхерт" двухфазнозоянока Дся при дляне волш 567 гл, При анализе содеришня РНХ я »Йгэго Селаа испсхЕьзовалл зопд размером 0,5 таг.

Для ез ученая двдшц тучных хдетоа э д?рк8„ гепадг. препараты, екрасекние азур-г-ооэетса. Здаегету л^фецлтоз з дериисе а дермз одамваля з препаратах, «фампнга гямтокс-ия».

8оэином* Количество тучных клеток и лимфоцитов считали в 30 полях зрения.

Сравниваемый материал обрабатывали методом вариационной статистики по Монцювичюте-Эрингене (Кононский Л.И.,1976). Результаты считали достоверными при Р < 0,05.

Количественное содержание цинка в крови и шерсти экспериментальных животных определяли методом атомно-эмиссионной спектрометрии с индуктивной плазмой (АЗыС с Ш1) на плазменном спектрометре I СЛР-ЭОСО.

РЕЗУЛЬТАТУ ИССЛЕДОВАНИЯ •

Методом АЭмС с №¡11, как показано в таблице I, было установлено, что введение животным сульфата цинка способствуот накоплению цинка в крови. Так, уже на 3-й сутки эксперимента его содержание в крови превышает показатели контроля в 7 раз. Ь после дугщем, концентрация цинка крови постепенно снижается, однако, .к концу эксперимента (25-е сутки) еще в 4 раза превышает контрольные значения. Ретинол-пальыитат уже через 7 суток вызывает снижение концентрации цшжа в крови. При одновременном введении сульфата цшша и р е тин ад-пальм итата концентрация цинка е крови ка Ь-и и 15-е сутки эксперимента практически не отличается от показателей контроля. На 7-е к 26-е сутки эксперимента происходит дс, товерное увеличение концентрации иинка в крови а 1,5 раза. Если ретинол-пальмита? вводить на 1:оне предварительного введения сульфата цинка, то через 3 суток содержание цинка в кропи резка снижается, а в последующие сроки нормализуется. Прк введении яе сульфата цинка на $оне предварительного введения р&-тинол-палы.штата резкого увеличения цинка в крови не происходит. Концентрация цшша в крови животных У серии прогрессивно возрастает, начиная с 7-х суток, и к концу эксперимента она р

7 -

1 -fi

I

a

ci

.4 ft

О

ta

к

5 «

с

а «

к р<

и

я ы о

о< а ю н а а н

. ÎS

s

ы ц

я ч

о «

о. о

* *

03 §

а

о,

о g

о

о ж

I

I •

I см I I I

( О

im

I t

I

1 о ít-I I t

I .

CO

u\ Si

«1 lit

at .

О) о

ai

ю si см

gl

ra o|

a #

mi о

di ю gj-1

Si 3'

cd . • СЧ о н

£V

a>

ai

Si

i

•ô

I со

» я H К X

К GJ

о. g ai si О es,

-i» ст>

tt

о

Я

о

сг>

о t,

»

CT «

о и>

m о

Й СМ

Ä

<х>

СМ

СО

ft W

Sí

Ii t-

t-H

0}

Tf

ti

Щ

coa"

■n»

СЧ

о

00 CM

1

M

ä

s %

ft CO

я.

uD

Ю ft

S

Tto

f—i

CD tt

CO ■Ä

cm

«С

Й t/i

о inj

m о

(О

ft

c-

CO ft

83

n

f> ft

cv

S

о

а

to о

А

ъ

о о

ft

СО

со

Ht

о о

(Л» M

а)

о \

СМ IM

с-

ft

в

см

t>-

ft f» СП 01

сг>

I

Г; «

Ю сч

ti ft ti Ä

s

CM

lu

Г-

4

CM

s

*L

ft 01

s

to

I> «

о

t см

0.1

ri *e «O H

um ts T «

со

со +t

со

л CM

tt

M Ы

q

ft

со CM

■a

со t> Ol

%

A-

1 i—1

o> со

ft о

XJ1

ю

■Ч1

ЧЬ

I-

о

:М

i

О

<3 ,.

К X ы >>

»Я 00

га

m о

со

•а с«-

С1

»4

ft

1 ю ft

•G t—(

ю %

из см

•Ъ

ft

ю о

со см

ь

— tEf i»

Q,<V.» ЙО д ащ ш _ œ о Л es

t* о

—

я

ä

а &

5

w

сЗ о.

о

Oí ю

о о

о о lo V

СО • с

(D Ы

- 8 -

4,5 раза превышает показатели контроля.

Исследование шерсти животных методом АЭыС с ИнП показало, что изменение концентрации цинка в шерсти отмечается лишь в двух сериях эксперимента: I) при введении животным сульфата цинка (концентрация цинка в шерстя достоверно превышает показатели контроля в 1,5 раза на 3, 7-е сутки); 2) при введении сульфата цинка на фоне предварительного введения ретинол-пальыитата (концентрация цинка в шерсти достоверно превышает показатели контроля в 1,5 раза на 15, 25-е сутки исследования).

Установлено, что введение животным сульфата цинка (I серия) уже через 3-е суток вызывает увеличение толашгы эпидермиса. К 7-и суткам толщина эпидермиса еще более возрастает в до конца исследования находится на практически неизменном уровне (рис.1). Увеличение толщины эпидермиса связано с увеличением толщины каа росткового, так и рогового слоев эпидермиса. Пра введении животным ретинол-пальмитата утолнение эпидермиса происходит в более поздние сроки (15,25 сут.) и это связано с увеличением преимущественно толщины его росткового слоя. При одновреыакяса введении сульфата цинка в ретииол-оалькятата незначительно« у&олз-чение толщины эпидермиса отаечается чарез 7 сутох п праятичесжв но меняется до конца исследования (25 сут.). При этом увелэтв-вастся ростковый слой яавдеруяса. Введение животным ретйксл-паль-митата на фоне предварительного введения суль4ятг. цкнка, приводит к достоверному снижении толляны апндеркаса на 3-я сутжа эксперимента.'На 7-е сутки исследования толшкна эпадерккса жавотных &70й серий практически на отличается от показателей кош-роля« но в последующем вновь возрастает. При этом через 3 суто/. скшает-ся относительная толкипа pocrsnsoro в рогового слоев эсигермв-са, затем ж 15-« суткам увелячавается толщина росткового с лат.

Am»*

/з «

И

о

с /г в

7

ff

-Л . f

3 ' 4Т

Рис.1. Изменение толедни эпидермиса при вг фэта цинка п рстинол-пальмитата

здениз кявотным суль-

По оси абсцисс - срок» введенкл сульфата цинк« и ретг-нол-пальыктата (сутки).

По оси ординат - толщина эпидермиса (мгаО,

о - при введения сульфата цинга (I серия);

о - при введении ретпнал-иаяьмятата (II счрия);

л - при одновременном зягден:г.1 суль!ата n"i:::a а ретл-нол-палькЬтатз (III cepi-n);

пои введении ретинол-пол?,чтат.« на & тельного Ейеде;им сульфата цкнкл (IJ

зне предвпра-серся);

при зведенна сульфата цштка на Фоне пренк отельного введения ретнн0ч-пал1*ллтата (У серия)

а к 2&-м суткам достоверно возрастает толдана обоих слоев эпидермиса животных. Изменение толщины эпидермиса у животных, получавших оуль^т цинка после длительного (25 сут.) введения ретинол-пальмитата происходит следующим образом: на 3-й сутки толщина дермпса превыдает показатели контроля, что вызвано увеличением ot-носительно толщины росткового слоя эпидермиса; к 7-м суткам толщина эпидермиса снижается и практически не отличается от контрольных значений, а в последующе сроки возрастает, достигая максимальных показателей на 15-е сутки исследования. Увеличение толщины эпидермиса при этом связано с увеличением относительной толщины росткового и рогового слоев.

Проведенные гистохимические исследования показали (таблица 2), что при раздельном введении кивотным сульфата цинка и ретинол-пальыитата в обо ¡я случаях с 7-х суток эксперимента отмечается достоверное по сравнению с контролем увеличение концентрации РНК в клетках базального и шиповатого слоев эпидермиса. Одновременное введение сульфата цинка и ретинол-пальмитате приводит к незначительному увеличению концентрации РНК в клетках базального слоя эпидермиса в поздние сроки исследования (15,25 сут.). В клетках сиповатого слон эпидермиса у животных этой серии, достоверное , но незначительное повышение уровня Р1К отыечается во все сроки исследования, При введении ретинол-пальмитата на $оне гипорцинкемли, резкое увеличение концентрации PiiK d клетках базального и шиповатого слоев эпидермиса отмечается у ьнвотных через Ъ суток. Однако, в клетках аяповатого слоя значительное увеличение уровня PhK отмечается лишь на протяжении первых 7 суток, а в последующе сроки (Ii, 25 сут.) концентрации VliK несколько снижается, но остается вь'м контрольных значений. Введение жияотнка сульфата цинка на .*оне длз-тельпого предварительного введения ретанол-пальмктата, приводит к

Таблица. 2

Изменение концентрация РНК в клетках базального (БС) и ипаозатого слоев (ШС) »пидермиса коал при введения сульфата цинка (I мг/100 г) а реткнол-палкштата (2 мг/100 г)

Серии экспе-________Концентрация РКК 1У£л..еД>1_______ ____________ ™ „

римента ______________________________

B.c. Ш.с. B.c. Ш.з, b.c. Ш.с. B.c. Ш.с

Контроль 11,2*0,5 17,1*0,47 11,9*0,38 16,6*0,47 11,2*0,4 18,0*0,45 12,3*0,31 18,2*0,31 I серия

(2) 13,0*0,4 19,8*0,39 16,4*0,37'' 22,4*0,4Ss 19,5*0,39* 26,6*0,С51* 18,7*0,33* 26,2*0,7^ XI сория

(вит.А) 11,2*0,27 15,6*0,3 15,1*0,36" 19,15,3*0,4й 21,5*0,49я 18,3*0,31* 26,0*0,68я

III серия

вит.А) 13,2*0,37 20,5*0,44 14,6*0,23 21,0*0,3'* 15,5*0,33" 22,8*0,363i 15,6*0,28® 21,5*0,36ä

IV серия ...

(вит.А на фо- 24,0*0,36 29,5*0,55* 23,5*0,51" 31,0*0,5Г* 17,0*0,55* 22,6*0,8® 23,0*0,63» 24,2*1,07й не 2л Isov )

V серия _

на 00-19,4*0.43* 25,8*0,5" 20,&*0,83л 27,9*0,33х 15,4*0,36й 19,6*0,29 10,5*0,37 15,0*0,44й не вит.А)

я достоверно в сравнении с коягрольпцил хлаотнкж

значительному веляченяю концентрации РШ в клетках базального п шиповатого слоев эпидермиса на ранних сроках эксперимента (3,7 сут,). В последующем, концентрация РШ у х и вот них У серил в клетках росткового слоя снижается, а (в клетках шиповатого слоя) на 25-е сутки эксперимента даже становится ниже нормальных значений. Сульфат цинка приводит к увеличению концентрации белка в клетках базального и шиповатого слоев эпидермиса (таблица 3).

При введении ретинол-пальмитата увеличение уровня белка в клетках базального и шиповатого слоев отмечается у кивотних леиь иа 25-е сутки эксперимента. При одновременном пероральноы введении указанных препаратов концентрация белка в клетках росткового слоя впидермиса увеличивается на 7-е сутки ш достигает ыаксргмаль-ншс значений на 15-е суткп после начала эксперимента.

У кивотных, получавших ретинол-пальмитат на фоне гиперци»-кемии, концентрация белка в клетках базального и аиповатого слоев эпидермиса превышает нормальные значения на всех сроках эксперимента. Достоверно увеличивается этот показатель на 3, 7-е сутки и у животных при введении сульфата цлнка на фоне гипоцинкемии, вызванной предварительным введением ретинол-пальмитата. В последующи« срок!' (15,26 сут.) уровень белка в клетках росткового слоя животных этой серии снижается и практически не отличается от показателей контроля.

Проведенные нами ксследоваьля показали, что у иаотных пра раздельном и сочетинном введении сульфата цинка и ретянол-паяьук-тата, изменяется но только толщ-''а эпидермиса, но и толщина дермы. Одновременное введение сульфата ц/.нка и ретинол-пальмитата вызывает достоверное по ср-чзнении с контролем увеличение толщины дермы уже на 3, 7-е сутки исследования, к 15-ы суткам толд/на дермы снижается а вновь незначительно возрастает к 25-« суткам эксперимента. Ретинол-пальмитат, вводикчЯ на фоне пшериггуемни, вн-

.о о

i: ti

Î-*

<3

а

п

а

га

н

Я

>.

о

а

s

с?

<У

Я)

»

я

о.

с

s и

о

о

и

я

и ч

гз и

я г«

а.

0J С J

«

я

а а)

о

—

И Р

«

о

о i

ч

о о

о

н

о о

Í-*

2

"S 41

й и

I

а

а) Ч1 с- 1Ü -% ж ю ю q

о ч о и о й о tt о о ti

0> >-t о СМ гм с-см со см о см

из « ж сО -З1 » ^ s

о ti о Й о tt 41 « о +4 ы о ч

л ы Cl »-4 ь-Í см оТ H F? M Í-4

t>-л Я! ч >-4 сл IÏ с- - « СП из см

о ч о а ы о А о 44 о 44 M о +4 CÏ»

СП О СО о см я С^ см см

о СО « <-£> СО -г . СО * <Х> IS. со

о ч О <4 ►н о £ о ч о ч о ч

Oí ►—< СМ ■4« ■Ч1 СМ со 1—1

t> in со «> о 1Л

о ti О ■Ч £> о -n M о 44 . СП о 44 ►н о 44 ►-« i в

Cv »-» м СМ CT n см СМ о СО СО см о a

Ч. Ъ .О CO ■Í ^ тг % .о •Ч1 M M

о ч О •м H о 4 О ч о ч о сЬ a

Oí НН о- со чэ »-* v-H Oí а> »-H о.

о -г

о

ti

о и

3!

о>

л

о о & ti

о ti

3

о -м

(М

о ti

ю .4

о •Н

%

1> о .Ä

о

ä

со CM

о -H

t> CM

о ■n

f-1

о

'.M

1 1

i

cv<

Il •

о t»

CJO U'1 ■<

"M

M N M*—' 3*

M •

Гв ». rft-

d s -a

cl-«: do о • í

O^M о^Я

t; о *

>> fü о ы ¿ъ

•а о f* о

о -<

V

Л

Q

зивает увеличение толщины дермы через 3-е к 25 суток от начала введения. У животных, получавших сульфат цинка после предварительной премедикации ретинол-сальмитатом, увеличение толщины дер-' мы отмечается практически на всех сроках наблюдения. Изменения толщины дермы сопровождается у экспериментальных кявотных изменением количества тучных клеток и процессов их дегрануляцик. Так, при раздельном введении сульфата цинка и ретинол-пальмитата (I, II серия), уже через 7 суток количество дегранулкровакных тучких клеток в дерме увеличивается. При одновременная введения сульфата цинка и ретинол-пальмитата количество дегранулированных тучных клеток в дерие увеличивается практически во все сроки наблюдения, но особенно на 15,25-е сутки эксперимента. Если ретяпол-пальматат вводить на $оне гилерцинкемиа, то ухе через 3 суток наблюдается значительное увеличение количества дегранулированных тучных клеток в дерме животных. К 7,15-« суткам количество тучных клеток в коже ек^отнях нормализуется, а к 25-м суткам резко возрастает. При этом увеличивается количество дец)анудированкых тучных клеток. Введение аивотныы сульфата цинка на фоне предварительного введения ретинол-пальмитата сопровождается увеличением относительного количества дегранулированных тучных клеток в дерме практически на всех сроках наблюдения..

В наших экспериментах оценивалась динамика численности внут-риэпидермальНсЕс лимфоцитов и лимфоцитов дермы. При раздельном . введении сульфата цинка я ретинол-пальмитата количество лимфоци-. тов в эпидермисе и дерме практически не меняется. Длительное (25 сут.) одномоментное введение указанных препаратов приводят к достоверному увеличению количества лимфоцитов в эпидермисе к дерме животных. При введении животным ретинол-пальмитата на фоте пред-

верительного введения сульфата цинка количество лимфоцитов в эпидермисе кивотных"достоверно, но незначительно пропивает показателя контроля на 15, 25-е сутки эксперимента. В дерме яивотних этоЭ серии уже на 7-е сутки эксперимента отмечается резкое повышение количества лимфоцитов, которое практически не меняется до 15-х суток, а к 25-м суткам еке более возрастает, достигая максимальных значения. При введении животным сульфата цинка на фоне предварительного введения ретинол-оельмктата увеличение количества лимфоцитов в эпздерулсе и дер:,:е животных отмечается на 7, 25-« • сутки исследования.

Обсуждение результатов собственных ксслепованиЯ Проведенные нами эксперименты показали, что персральнос введение животным сульфата цотка приводит к накоплению микроэлемента г. крот, особенно в течение первых 3 суток. Однако, в последующие сроки (7, 15, 25-е сутки) уровень цинка в кроал постепенно снижается, но тем не менее значительно превышает нормальные значенал. Это снятомле, на пая взгляд, связано с адаптацией энтв-роцлтоз кишечника к повышенному согер=а!:;:г) в ней цинка, так как известно, что при увеличении концентрация цинка в к;п:ечнакс усиливается сантез металлотг.онег.ноз з энтероцктах, которые связчва-вт внутриклеточный цинк, препятствуя переносу элемента через ба-золатеральную чеубумну я плазму (Герзкнь Н.И.,1С91), лср'ологг-■тсск'.'о исследования ком вквотных ползали, что при ввезена:; ая-зог!'щ| суль'лта цпчка отмечается увеличение толкани росткового £ рогезого слоев эпидерм/са практ/ческа во все сроки псслепсвя-над. Поьькение концентраций ?НК я oCsero белка в клетках Сазаль-ааго ч оюпктого слс?в эшце;.'/-¡ел »лвотяых при вредеияя сульфата ютка зСглснлетсч тем, что инкро?7ег/ент цагас прчнгхает активное учету? в е'уе.че нухлеино:"« кислот п белков, так как пока-

тает активность рибонуклеази ( Cheaters J,К., Sill и. I98I)„ PRC- и ДИК-полкиеразы, в состав которых он входит (Берэинь Н.И., 1991).

В условиях гиперцюжемяк, вызванной введением сульфата цки-ка происходит увеличение толщгны не только эпидермиса, но и увеличение толщины дермы животных. Не исключено, что одной из причин увеличения толщины дермы у экспериментальных кявотных является изменение проницаемости межклеточного вещества соединительной ткани дермы, вызванное биологически активными веществами, ос-вобогдавщкися при дегрануляции тучных клеток (Хрущов Н.Г. ,1979, Ервна H.A., Радостина А.И.,IS90; Gain S.J. ,1987). Haas исследования показали, что в условиях гиперцинкемии, вызванной хроническим введением сульфата цинка, количество дегранулкрСЕак-ных тучных клеток в соединительнотканной частя kose возрастает.

При введении хшвотным реткнол-пальмитата отмечается состояние гипоцинкеши (уровень цанка в крови примерно в 1,5 раза насе контрольных значений практически во все сроки исследования). Аналогичное снижение концентрации цинка в кроЕЯ при избытке витамина к в рационе отмечает О.О.Еаган (1967). Сниаение уровня цинка в крова при введении ретинол-пальмитата можно объяснить тсы, что избыток витамина А в организме, приводит к сниженяв выработки к&тал-лотиоиеинов в печени, осуи^ствяязащях транспорт цинка в кровяной русле ( Sklan a. at.ai. ,1907). В условиях гипоцинкемии, вызванной хроническим-введением ретинол-пальнгтата, на 15,2Ь-с- сутки исследования происходит увеличение толе^шы эпидермиса животных, преимущественно за счет увеличения толщины его росткового слоя. Sro увеличение по всей вероятности связано с тем, .что эктералыюе и па-рэ.чтеральное введение эксперте;! талышч животным у^ерекно-поьышзы-ных доз витамина А сопровождается ахтйвацней способности апителг-

альных клеток к делению (Афанасьев В.И. и др.,1983).

Увеличение концентрации РЖ в клетках базального и шиповатого слоев эпидермиса под влиянием витамина А можно объяснить тем, что обмен нуклепротеидов, является одной из основных мишеней действия витамина А (Еапот B.C.,1975; Шарманов Т.Ш.,1979). Известно, что умеренно-повышенные дозы витамина А усиливают сип-тез нуклеиновых кислот ( Зрогп a.v. at.ai. ,1973). Концентрация общего белка в клетках базального и виноватого слоев эпидермиса аивотных при введении ретинол-пальматата резко возрастает лига, •на 25-е сутки эксперимента.

7 нивотпых этой сериа общее количество тучных клеток, а гакке относительное число дегранулированных тучных клеток в дер-?;3 увеличивается более значительно, чём у кавотных I сериа во гее сроки зсследования." Возможно это связано с влиянием витамина А на выработку интерлеЗкина -2 Т-хелпераыа ( Ohlrigoa !i.i., T.il=ad/5e J.s. ,IS65), которые в своп очередь стимулируют выработку многообразных гуморальнкх медиаторов, активирующих тучны» алетк^.

Талки образе»«, з итоге проведенных вышеуказанных сергЯ екс-перЕментсв обнаружено, что состояние пшерцанкемиа, вызванное гроняческот введением сульфата цкнка а состояние гилоцинкеыия, шзванное хроническим вгодекзем витамина А, сопрозоядается азме-тсеялна эпгдеркяса в первом случае за счет узелзче-

язя талзтян росткового а рогового слогз, а so эторса - пренууда-етг-енно üri. счет увеличен к.« тслщзна рэстяэвого слоя эпяцермпса. У?гл1пенке то-тгшу sepiru хаз прз введения сульфата цчнка, гак я irpa гзе:е 'яп ретвяэл-падьыгтзга возуогпо связано с лзленилиз ото-гш, обусловленного деграяудяаиай тучных клеток. Полазало, что

атгагиа А способствует активация сякт-'тцческих процесс

- 1В -

сов б клетках эпидермиса на Солее поздишс сроках к вирагбио ые-нае значительно, чей при введении сульфата цинка.

При одновременном введении сульфата цинка п ретшюл-паль-ыитата изменение концентрации цишса в крови носит фазовый характер: превышает контрольное значения на 7, 25-е сутки експсрииен-та. Это связано по-видимому, с тем, что при совместной одномоментной введении указанных веществ витамина А вносит корректирующий эффект на процессы транспорта микроэлемента цинк в кровь, препятствуя его накоплении, особенно в течение первых двух недель. Однако, в конце эксперимента (25-е сутки) гппоцинкемический эффект витамина А проявляется слабо: концентрация цинка в крови превышает норкалыше значения, хотя остается ниае, чем у животных, получавших оульфдт цинка.

Увеличение толщины эпидермиса при одновременном введения сульфата цинка с ретинол-пальмитата совпадает по времени с начался/, накопления цинка в крови кивотных. В отличие от первых двух серий, при одновременном введений сульфата цинка к ретинол-паль-китата, концентрация РШ в клетках сиповатого слоя зпвдерыиса увеличивается по сравнению с контролем ухе через 3 суток и остается на неизменном высоком уровне до конца эксперимента. В клетках базального слоя увеличение концентрации РНК наблюдается лееь на 15, 25-е сутки, примерно в тех ко пределах, что п при раздельном введении витамина А и сульфата цинка.' Увеличение концентрация белка в .клетках росткового слоя эпидермиса происходит в тех ьс пределах,'что и у животных, получавшие один сульфат цинка.Увеличение толщины дерма животных при одновременном введения указанных препаратов коррелирует с увеличением количества деграиулиро-впнных Тучных клеток в соединительнотканной части коек.

Как известно, на ииогочяелстше актЕгскяце раздракения реаги-

— IS -

руют иммунопсмпетентные клетки кожи н клетка неслецифяческой резистентности организма (макра'^аги, клетки Лангерганса я др.) ( Thorbecke Q.J. at.al. ,19Б0). Прл этом в передаче антигенного раздражения к ишунокомпетентным клеткам принимают участие кера-тинсцити ( Robert ь.к. aj.al. ,1965). Одной из клеточных реак-цкЗ компенсаторно-приспособительного характера, приводящей к повышении защитных свойств кожи является изменение количества ям» фоцитов в эпидермисе а дерме зявотных на 25-е сутки эксперимента отмечается при одновременном введении сульфата ц;шка и ретинол-пальмптата. Следовательно, при одновременном введении указанных веществ з течение 25-и суток отмечается явная активация иммунного ответа, играющего очевидно немаловажную роль в поддержании популяционно-клеточного гомеостлза. •

Как показала исследования, длительное введение глвотным сульфата цинка вызывает состояние гнперцилкемпг.. При введении так,;м животным ретинол-пальмитата нормализуется содержание цдароэлемен-та а крови, тогда как введение витамина А интактнка аявотшас, вызывает у н;« состояние гяпоцннксмпи.

У анвотных, получавших сульфат цянка отмечается увелдчешгз толщины росткового л рогового слоев эпидермиса а увеличение концентрация PfK я обшего белка я клетках росткового слоя эпядерьо-са. Осследугпес пведенае такта животным ретннол-пальмитата (1У серм) приводит к смирения эпидермиса до лоруальнкх зна-

чений, а такте способствует еце Солее значительному поаи^енша концентрации РЖ л oaiaero Селка з клетг.ах базалыюго я c;tn о гл того злоеа эпидермиса.

Толиша дермы у жязотслпс при гапсракнкемип, вызванной введением сульфата цинга значительно превышает нормальные значения. Нагрузка витамина А э этггх условиях приводит к ууеныгенкэ гол-«

икни церии до нормальных значений после 7-суточного его введения. Снижение толщины дермы у животных 17 серии коррелирует с уыеньке-нвсы числа дегранулированных тучных клеток в соединмтельноткаи-hoZ части ком, Кроые того, у животных этой серии увеличивается на 15, 25-е сутки эксперимента количество лимфоцлтов в эпидермисе я дерме животных.

Введение животным сульфата цинка на фоне предварительного введения ретинол-пальмятата (У серая) способствует прогрессивному увеличению цинка в крови и увеличению концентрации цинка в шерсти.

Длительное пероральное введение животным витамина к приводит к увеличению толщины эпидермиса. Последующее введение гакик животным сульфата цинка (У серия) в течение 7 суток снижает толацшу эпидермиса до нормальных значений, а в последующем приво-. дит к увеличению его толдаш, преимущественно за счет увеличения росткового слоя эпидермиса, тогда как введение сульфата цюцса без предварительного введения витамина А вызывает увеличение как росткового, так и рогового слоев эпидермиса.

Введение сульфата цинка способствует прогрессивному увеличению концентрации РНК и общего белка в клетках росткового слоя эпидермиса. В условиях гипоцинкемии, вызванной предварительные введением ретинол-пальмитата, сульфат цинка (У серия) вызывает прогрессивное снижение уровня РНК к общего белка в клетках Сазал ного я шиповатого слоев эпидермиса до нормальных значений на 15, 25-е су.ки исследования.

Увеличение толщины дермы у животных У серил коррелирует с повышением количества дегранулированных тучных клетс« в сое дин к-тельнотканной части коже. Количество лгмфоцитов в эпидермисе к дерме животных при введения сульфата цинка на фоне предварите*

«

- 21 -

я oit) введения ратянол-пальмятата резко возрастает на 7, 25-е сутки исследования.

В итога проведенных нами экспериментов показано, что при использования двух препаратов (сульфата цинка а ретинол-пальмя-тата) можно в значительной степени влиять на морфофушшяоналышв показатели кожи (изменять толщину эпидермиса п целсм н соотношение слоев в нем, толщину дермы, влиять на белковый обмен клеток эпидермиса). При этом э>5«кт этих препаратов будет различен п зависимости от способа их введения (одномоментное или последовательное). В настоящее время трудно дать объяснение этому фактору. С одной стороны это может быть связано с взаимным влиянию суль'дта цинка а витамина А на систему транспортных белков (Бауман В.К., Еерзинь Н.И. ,1976; Еерзинь Н.И. ,1991; Зо1олопз ¡{.г., Rue sel n.U. ,I9o0j 3klan 0. at. si. ,1967). Вместе о rott не исключено образование каких-то трансмембранных продуктов вх взалдодействия, особенно при одномоментном пероральнсм введения препаратов. Решение этих вопросов во многом зависит так ка от изучения механизмов рецепции ri трансмембрапного переноса пжка я витамина А и их взажоае^стг!;!и на клеточном уровне, д атя вопросы в настоящее вреь-л изучены педоста~тшо я это затрудняет однородную трактсьху полученных санных,

ВЫВОДЫ

1. Ссстачнае гиперциихемг.я, вызванное хронически введением сульфата пинка в дозе I кг на 100- г «accu животного, приводит к увеличению толщины росткорого и рогозого слоев эпидермиса, ус иле "гю срнтетячеоко!! энтгпнэста ке^атянопитов, певчее кдз гол-еины дермы.

2. Введение аи?стн-.;ч ретинол-пальмитата п дозе 2 мг на ¡00 г v!C~u es з к »ют состояние глгоцгняемии, при котором taxai

происходит увеличение толщины эпидермиса, преимущественно за счет увеличения толщины росткового его слоя, отмечается усиление синтетической активности кератилоцитов и увеличение толщины дермы.

3. Ретинод-пальмитат вводимый на фоне ггперцгнкемии, вызванной предварительным введение« сульфата цинка, снижает содержание • цинка в крови я персти животных до нормальных значений. При этом толщина эпидермиса и дермы нормализуется, сохраняется высокая синтетическая активность клеток, сопровождавшееся явлениями гилерхера-тиназация,

4. Введение сульфата цинка на фоне пшоцилкемии споаобствуе? накоплению цинка в крови и серсти животных, вызывает увеличение относительной толщины росткового слоя эпидермиса при снижении синтетической активности его клеток.

5; Одновременное введение сульфата цинка в ретшшл-пальиита-та, а также их последовательное введение (в прямо? в обратной последовательности приводит к увеличению количества лимфоцитов в эпидермисе и дерме животных.

6. Введение сульфата цанка после- преиедикации ретинол-паль-митатоы приводит к увеличения количества тучных клеток в дерме к активизирует процессы их деградуляция.

СПИСОК. РАБОТ, ОПУЕ1КлОЗАНШХ ПО ТЬУ.Е Д'ЛСЯРТАЦИИ

1. Влияние сочетанного введения цинка и витамина А на белковый об-иен в клетках эпидермиса кожи.//Аат.2-й Всероссийской конф.: "Влияние антропогенных факторов на структурные преобразования органов, тканей, клеток человека и животных", Саратов,1853.-С.ЬЗ (соавт.Ю.И.Афанасьев, Л.Г.Гарстукова,Н.И.Кадетина,Л.П.Ла-аурина).

2. Реактивные изменения кожи животных при введения сульфата цишш и ретннол-пяльмитата./Диалогические науки, 1594.-4» 3. (соавт.

- 23 +

О.И.Афанасьев, Н. И. Калетика, Л.Г.Гврстукова, 1.П.Лазурина). 3. Ыорфофуккционалъные изменения котя при сочетанием пероральном введении сульфата цинка а витамина А.//Тезиса 3-й научное конференция морфологов Украинн:"УорфофункционадьниЗ статус млекопитающих и птиц". Симферополь, 1955. (соавт. Е.И.Афанасьев, Н.И.Калетина, Л.Г.Гарстукова) (принято в печать). '

Размножено.;.ча ротапринте в Типографии "РС>?йлО" зак. 744, тара* "О акз. ^чсаг-^аа, оэ.