Автореферат и диссертация по медицине (14.00.15) на тему:Морфогенез тканевых реакций в лимфоидных органах печени и кишечной стенке обезьян макака резус при пероральном заражении вирусами клещевого энцефалита с различной биологической активностью (экспериментальное исследование)

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ ЧЕЛЯБИНСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ ИНСТИТУТ

На правах рукописи

ГЛАДЫШЕ0 Сергей Павлович

МОРФОГЕНЕЗ ТКАНЕВЫХ РЕАКЦИЙ В ЛИМФОИДНЫХ ОРГАНАХ, ПЕЧЕНИ И КИШЕЧНОЙ СТЕНКЕ ОБЕЗЬЯН МАКАКА РЕЗУС ПРИ ПЕРОРАЛЬНОМ ЗАРАЖЕНИИ ВИРУСАМИ КЛЕЩЕВОГО ЭНЦЕФАЛИТА С РАЗЛИЧНОЙ БИОЛОГИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТЬЮ

(экспериментальное исследование]

14.00.15. — патологическая анатомия

Диссертация

на соискание ученой степени кандидата медицинских наук (в форме на; > доклада]

Челябинск—1994

Работа выполнена в Тюменском государственном медицинском институте и Тюменском НИИ краевой инфекционное патологии.

Научный руководитель: доктор медицинских наук, про

фессор, член-корреспондент АИЬ В. Г. Бычков.

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, про

фессор Б. Л. Ерман.

доктор медицинских наук, про фессор П. А. Самохин.

Ведущее учреждение: Российский государственный меди

цинский Университет.

Защита состоится «-» _ 1994 г. в - часо

на заседании специализированного совета К.084.04.04. пр Челябинском государственном медицинском институте (454091 г. Челябинск, ул. Воровского, 64).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Чел$ бинского медицинского института.

Автореферат разослан «_» _ 1994 г.

Ученый секретарь специализированного Совета к. м. н. Л. М. Синельникова

Актуальность темы. Клещевой энцефали* (КЭ) является нейровирусным заболеванием, широко распространенным во многих странах мира. Несмотря на большое количество исследований, посвященных клинике, диагностике и профилактике КЭ заболеваемость не имеет тенденции к снижению (Смо-родинцев А. А., Дубов А. В., 1986). Ежегодно регистрируются случаи летальных исходов заболевания или развития тяжелых остаточных явлений вплоть до инвалидизации. В связи с этим, проблема КЭ приобретает медико-социальную значимость. Одним из путей профилактики заболевания является создание широкой иммунной прослойки среди населения, проживающего в эндемичных очагах. Однако, используемые в настоящее время средства специфической профилактики имеют ряд существенных недостатков: так, гаммаглобулин эффективен только в первые двое суток после укуса клеща (Злобин В. И., 1988) и обладает депрессивным влиянием на клеточный и гуморальный иммунитет (Конев В. П., 1982). Убитые вакцины против КЭ формируют лишь гуморальный иммунитет (Смородинцев А. А., 1981; Никонова Л. Н. с соавт., 1989), слабо стимулируют клеточный иммунитет (Камалов И. И. с соавт., 1989) и совершенно не влияют на неспецифические факторы защиты, такие как, ингибиторы вируса крови и ин-терферонообразование (Карпов С. П., Федоров Ю. В., 1969; Смородинцев А. А. с соавт., 1975). Учет этих особенностей, а также формирование стойкого, пожизненного иммунитета у лиц, перенесших КЭ, дает теоретические предпосылки для создания живой вакцины, как наиболее эффективного препарата специфической профилактики этой инфекции (Смородинцев А. А., 1976). Виоус КЭ, используемый для живой вакцины не должен обладать нейровирулентностью, вызывать клинические проявления болезни и морфологические изменения в центральной и периферической нервной системе при сохранении высокой степени иммуногенности (Дубов А. В., Смородинцев А. А., 1980).

Теним возможным кандидатом в пакцинные явился естественно осгобленный вирус КЭ штамм Еланцев. Как известно заражение при КЭ происходит не только трансмиссивным, но и алиментарным путем при употреблении в пищу сырого молока коз, инфицированных вирусом КЭ (Погодина В. В., 1958). При этом происходит естественная иммунизация населения в природных очагах без развития заболевания у людей (Карпов С. П., Федоров Ю. В., 1963; Попов В. Ф., 1963; Розмэн Г. М., 1977), Работами А. Я. Дубовой (1971) доказана эффективность защиты линейных мышей, перорально инфицированных вирусом. КЭ штамм Еланцев от последующего заражения не только вирулентным вирусом КЭ штамм Абсеттаров, но и вирусами других арбовирусных инфекций.

Цель и задачи исследования. Целью данной работы яви-"е:сь резреботка морфологического обоснования иммуноген-гссти ослабленного вируса КЭ штамм Еланцев кпон 15—20/3 исг.о7 ьз-; емого для создания живой вакцины против КЭ и пе-рпра; ы:ого способа иммунизации живой вакциной.

Для достижения данной цели были поставлены следующие задачи:

1. Изучить характер распределения вирусного антигена и ; ^/лфоидных органах ч в стенке кишечника животных.

2. Исследовать динамику тканевых реакций пчмфоузлои IV,з: ичных групп, небных миндалин, селезенки, вилочковой жг.'сзы, печени и лимфоидных образозаний желудочно-ки-ш« ч;ого тракта сбезьян прч алиментарном заражении ослабленным вирусом КЭ штамм Еланцеи и вирулентным вирусом КЭ штамм Абсеттарсв.

3. Пропесги когичесгвенную оценку оепепи развития кле-'счимх и тконезых реакций исследуемых органов обезьян, пс-|.)срс1; ыю зараженных вирусами КЭ с различной биологической аюивнсстыо.

«1. Определить реи личин и характере, степени и динамике к юч о-1 гигег.ых реакций иммунокомпе 1ен тых органоп ибс.|,'1н и о'Г-с| но введении ослабленного и сирулснпюго пиругрг КЭ.

Ог«-»»п::».1е !го*»о!!:с|!»я, пымо; )м адщкту:

1. I ||;ч г.'педеи'.'ч чс:ре,т рем обезьянам макака розу: оамб-ги""ог(г и вирулентного КЭ вирусный антиген обнаруживался г, сте;:;'.е тонкой и толстой кишок, в небных миндалинах, в лимфоузлах всех исследуемых групп, в селезенке и непостоянно выявлялся в вилочковой железе.

2. Вирусы КЭ обоих штаммов вызывали в периферической лимфатической системе качественно однотипные тканевые реакции, являющиеся отражением антигенной стимуляции с нарастанием гиперпластических процессов, узеличением-коли-чества мекрофагов и плазматических клеток, с усилением кук/.еиьовсго, белкового и углеводного обменов и появлением клеток, синтезирующих специфические антитела.

3. Пероральное заражение обезьян вирусами КЭ с раз-ичь.ои биологической ак-идностью выязило -различия в ди-

камике накопления вирусов и Еы.ведения их из орг.аноз .животных, а также некоторые различия в степени и сроках -развития этих тканевых реакций. . ■.....

; сгмсьа ксссдссаг-хя. Е работе вперз'ые проведено сравнительное морфологическое изучение тканевых реакций им-мунокомпетентных органов обезьян макака резус на'перорапь-ное введение ослабленного штамма .Еланцез клон 115-20'3 и Еиру;ектного штамма Абсеттеров вирусов КЭ. '

Прс!стическая ценность. Проведенные исследования подтверждают выраженный висцеротропизм ослабленного, зиру-са КЭ штамм Еланцев клон 15-20/3 с распространением и накоплением его при алиментарном заражении во всех, исследуемых лимфоузлах, е стенке тонкого и толстого кишечника, с селезенке, печени без инвазии в вещество головного мозга. Развитие в лимфоидных органах тканевых реакций, характерных дг,я иммунного ответа на антигенный стимул с по'язг.е-¡-.ием .з креем специфических антител при бессимптомном те-чен'щ инфекционного процесса, отсутствии клинических, вирусологических и морфологических признаков поражения ЦНС /лсх<с*7 характеризовать дзнкь:й штамм вируса КЗ, как иммуиогеиный, с дальнейшим изучением его для создания ;;<м-г. с ьа!';;:" : ; ? порор^п.ный пч-ь езодекия г'..рус а ».*г>"" г Сыгь рекомендован кок один т возможных способов - имму-I изации живой вакциной.

Мс1 оды и резуль.-гпы работы использозамы и вирус о.-огнческой лаборатории Тюменского НИИ краевой ин-фскц^осчсй плголог л-.\ при изучении влияния на орг^ им э". 'г.е пи ?лс!!с л ь; (мх кисетных атте;1уирсваннь:х шгаммез сн-ру<~л КЭ с различными путями введения (подкожным, и:пр:5.■ |,.^-рсбрпяьным и пирорлпьпым), л также используются га и.ь

Л.ре патологической анатомии Тюменского госудсрстсепно-го л-ельцинского икстичута в преподавании иммунопатологических процессов человека.

Апробация работы. Материалы исследования доложены:

— на III Пленуме координационного Совета СФ АМН СССР по латентным и хроническим вирусным инфекциям (Томск, 1975);

— X симпозиуме «Экология вирусов» (Баку, 1976);

— VI Всесоюзном съезде патологоанатомов (Иваново, 1977);

— V Пленуме координационного Совета СФ АМН СССР По латентным и хроническим вирусным инфекциям (Томск. 1977);

— областной научно-практической конференции «Компенсаторно-приспособительные изменения внутренних органов и головного мозга в норме, патологии и эксперименте» (Тюмень, 1982);

— обществе патологоанатомов Тюменской области (1979 1985, 1993, 1994);

— V-ом Украинском съезде патологоанатомов (Чернигов, 1993).

Материалы исследования опубликованы в 13 печатных работах.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Работа выполнена' на 45 обезьянах макака резус массой 2,5—3 кг после 2—3 недельной адаптации животных к местным климатическим условиям и изменению характера пищи при отсутствии у них каких-либо признаков заболеваний. Для морфологического контроля трем обезьянам через рот была введена мозговая суспензия, не содержащая вирусов КЭ. Двадцати одному животному пероральным путем был введен 1 мл мозговой суспензии, содержащей 8,0 — 0,25 lg LD 50/мл ослабленного вируса КЭ штамм Еланцев клон 15-20/3 (I группа опыта). Обезьянам второй группы (21) аналогичным путем был введен 1 мл мозговой суспензии, содержащей 8,8±0,01 lg LD 50/мл вирулентного вируса КЭ штамм Абсет-таров. Данная работа явилась частью комплексного изучения иммуногенности и нейровирулентности ослабленного вируса КЭ штамм Еланцев клон 15-20/3 для создания на его основе живой вакцины против КЭ. В связи с этим у всех животных опытных групп совместно с аспирантом лаборатории арбови-русных инфекций Тюменского НИИ краевой инфекционной патологии А. С. Загинайко проводились клинические, вирусо-

огические и иммунологические исследования с определени-м титра специфических антител в крови.

Обезьяны забиты через 1, 3, 6, 10, 15, 30 и 90 суток после аражения. Морфологическому исследованию подвергались ебные миндалины, стенка желудка, тонкой и толстой кишок, имфоузлы подчелюстные, окологлоточные, околопищевод-ые, брыжейки тонкой и толстой кишок, подмышечные, пахо-ые, печень, селезенка и вилочковая железа. Материал фик-ировался в 10% нейтральном формалине и в смеси Карнуа последующей заливкой объектов в парафин.

Иммунофлуоресцентное исследование. Вирусный антиген пределялся прямым методом Кунса в парафиновых срезах ебных миндалин, стенки тонкой и толстой кишок, лимфоуз-ов подчелюстных, подмышечных, брыжейки тонкой и тол-той кишок, селезенки после проводки кусочков при темпера-уре +4°С и заливки в парафин по методу Santa Mari. В ряде лучаев в лимфоузлах и селезенке непрямым методом Кунса ыявля/.ись антитела к вирусу КЭ.

Гистологические и гистохимические методы исследования, истологические препараты окрашивались гематоксилином и озином. Парафиновые срезы лимфоузлов, селезенки и ви-очковой железы после дополнительного хромирования окашивались азуром 2-эозином по Романовскому-Гимза. Фиб-ин и фибриноид выявлялись окраской хромотроп 2Б-водным злубым по Слинченко, нуклеиновые кислоты — по методу раше с контролем кристаллической рибонуклеазой. ДНК в имфоузлах, селезенке и вилочковой железе определялась о Фелыену. Гликоген и полисахариды выявлялись реакти-ом Шиффа по Мак-Манусу и Шабадашу с контролем панк-еатической амилазой. Для выявления гликозамингликанов и гчных клеток срезы окрашивались толуидиновым синим на осфатно-цитратном буфете с рН= 1,0—4,0 и 6,0. Суммарен белок определялся реакцией тетразониевого сочетания прочным синим В, сульфгидрильные группы — 2,2-диокси-6 динафтилдисульфидом и прочным синим В по прописи грнетта и Залигмана. Щелочная фосфатаза (ЩФ) определяюсь кальций-кобальтовым методом по Гомори с параллель-л!м температурным контролем. Выявление кислой фосфата-.1 (КФ) проводилось в срезах из замороженной ткани всех зучаемых органов методом азосочетания по Берстону с.наф-злом AS-MX и прочным красным RC. В ряде случаев в ку-зчках из нефиксированных тканей лимфоузлов, селезенки лечени определялась сукцинатдегидрогеназа (СДГ) нитро-

синим тетразолием по Нахласу с последующей заливкой кусочков в парафин и приготовлением парафиновых срезов. В срезах из замороженной ткани лимфоузлов и селезенки выявлялась оксидазная зернистость сс-нафтолом и сафранином по Гольдману-Маргогину. Для объективизации оценки тканевых и клеточных реакций с помощью измерительной сетки окуляр-микрометра определялся диаметр лимфоидных фолликулов и их реактивных центров в лимфоузлах и селезенке, подсчитывалось количество митозов в лимфоидных фолли-кугах, плазматических клеток в мозгозом слое лимфоузлов и красной пульпе селезенки, макрофагов с положительной реакцией на КФ в фолликулах и синусах лимфоузлов, в красной и белой пульпе селезенки в 10 полях зрения при увеличении микроскопа хбЗО. Аналогичным способом определяли число купферовских клеток печени с активностью КФ в цито-пгазме. Результаты подсчета подвергались статистической обработке с определением критерия Стьюдента. В випочковой железе определялись ширина коркового и мозгового слоев дс-ек, диаметр и количество телец Гассаля в последнем.

Резугьтаты исследования и обсуждение.

Динамика распределения вируса и тканевых реакций у сбсзьян, зараженных перорально ослабленным вирусом КЭ штамм Еланцев.

В первые сутки после заражения вирус и вирусный антиген обнаруживались в лимфоузлах подчелюстных, окологлоточных, околепищеводных, подмышечных, брыжейки тонкой и толстой кишок, в небных миндалинах, печени, стенке тонкого и толстого кишечника и в крови (табл. 1).

| |ммунофлуоресцентное свечение отмечалось в цитоплаз-л'е крупных клеток макрофагальной природы в мозговом и корковом слоях исследуемых лимфоузлов. Аналогичные 1'готки выявлялись под покровным эпителием, в лимфоидных фоггикупах и межфопликулярных зонах небных миндалин, в стромо ворсинок тонкой кишки и слизистого слоя толстой кишки. При _>том, п лимфоидных фолликулах кишечных С1СНОк I о ячество ¿ипигенсодержащих клеток было явно больше, чем I) проми.'ьных элементах. Б покровном эпителии и в клетках кишсч:.ых желез вирусный антиген методом Кунса ни р одном случае не был выявлен. В стенке желудка, тонкой и толстой кишок сохранялась обычная структура. Как и в контрольной группе, отмечалась высокая активность ЩФ в лимфоидных

Таблица 1

'езупьтаты титрования вируса из тканей обезьян, зараженных вирусом КЭ штамм Еланцев (в 50/мл)

Сроки наблюдения (сутки)

Исследуемые ткани 1 3 6 10 15 30 90

Кора гол. мозга 0 0 0 0 0 0 0

~1одкорковые узлы 0 0 0 0 0 0 0

Заролиев мост 0 0 0 0 0 0 0

уГозжечок 0 0 а 0 0 0 0

Чродолг. мозг 0 0 0 0 0 0 0

Нейный отд. с/мозга 0 0 0 0 0 0 0

"рудной отд. с/мозга 0 0 0 0 0 0 0

Тоясничный отд. с/мозга 0 0 0 0 0 0 0

<ровь 2.1 2,1 0 0 0 0 0

"1ечень 2,2 0 2,5 0 2,1 2,1 0

"елезенка 0 2,8 2,9 0 2,1 0 0

Чищевод 0 0 а 0 0 0 0

Утенка тонкой к-ки 2,5 3,2 0 3,3 3,0 2,1 0

Утенка толстой к-ки 2,5 2,3 3,0 3,5 2,8 2,1 0

"Годчелюстной л/узел 2,5 2,5 2,9 2,3 2,8 0 0

Окологлоточный л/узел 3,0 2,5 2,1 2,1 0 0 0

Зколопищеводныи л/узел 2,1 2,1 2,1 2,1 0 0 0

\/узел брыж. тонкой к-кн 2,3 2,8 0 3,2 2,1 0 0

\-узел брыж. толстой к-ки 2Д 2,5 2,8 3,6 0 0 0

Тод'мьгшечный л/узел 2,1 2,1 2,1 3,0 2,1 2,1 0

1ебные миндалины 2,1 2,1 2,1 0 0 0 0

Слизистая полости рта 0 0 0 0 0 0 0

ролликулах кишечной стенки и в небных миндалинах, что, юроятно, связано с постоянной антигенной стимуляцией этих >бразований. Однако, в реактивных центрах фолликулов реакция на фермент была всегда отрицательной. Содержание (Ф и СДГ в клетках этих органов через 1 сутки после заражения было невысоким и мало отличалось от такового у конт-юльной группы. Лимфоузлы всех исследуемых групп сохра-

няги обычное соотношение коры, паракортикальной зоны и мозгового слоя. В большинстве из них преобладало диффузное строение лимфоидной ткани, либо намечалось формирование небольших лимфоидных фолликулов без четких наружных контуров. Т-зона лимфоузлов была относительно широкой с неравномерной плотностью расположения лимфоцитов. В промежуточных синусах преобладали малые лимфоциты, в небольшом количестве определялись гистиоциты, сегменто-ядерные лейкоциты, единичные плазмобласты и незрелые плазматические клетки. В мякотных шнурах количество плазматических клеток не превышало 3,0 — 0,3 в поле зрения. Диаметр лимфоидных фолликулов и их светлых центров не отличался от контроля (табл. 2).

Таблица 2

Дивметр лимфоидных фолликулов и их реактивных центров в лимфоузлах и селезенке обезьян, зараженных вирусом КЭ

штамм Еланцев.

1 Подмышечный Лимфоузел брыжейки тонкой кишки Селезенка

| лимфоузел

Сроки опыта | диаметр в мм диаметр в мм диаметр в мм

фоллику-' светлые фоллику- светлые фоллику- светлые

1 лы | центры лы центры лы центры

Контроль 1,1 ±0,05 0,2 ±0,04 1,2 1:0,04 0,2 ± 0,02 1,2 ±0,04 0,1 ±0,03

1 сутки 1,0± 0,05 0,1 ±0,04 1,2 ±0,06 0,2 ±0,04 1,2±0,05 0,1 ±0,03

3 сучок 1,4 -' 0,07 0,0 ±0,06 1,4 ±0,02 0,7 ±0.02 1,6 ±0,09 0,7 ±0,09

б суток 1,7 ±0,05 1,2 ±0,05 I,И ±0,02 1,2:1.0,02 1,а±о,ю 1,0 ±0,04

10 суток 1,0 ±0,00 1,0±0,05 1,» 1 0,05 1,1 ±0,02 1,а ±0,05 1,0 ±0,05

15 суток 1,7 ..'.0,07 1,2 1:0,02 1,9±0,02 1,2 ±0,02 2,1 ±0,08 1,3 ±^07

ПО суток 1,0 ±0,02 1,1 ± 0,02 1,8 ±0,05 1,1 ±!0,05 2,0 ±0,06 1,3 ±0,07

90 суток 1,0 г 0,02 1,0 ±0,05 1,8 ±0,02 1,1 ±0,02 2,1 ±0,06 1,3 ±0,07

Одпоко, количество долящихся кпоюк в нчх возросло уже р /\0с; роза (тс)бл. 3). С первых суток опыта отмечалось сниже-гие содержания ЩФ в лимфоидных клетках коры и поракзр-тикагьмой зоны, которая выявлялась преимущественно лишь в эндотелии разветвленной капиллярной сети. К этому сроку возрастало количество макрофагов с высокой активностью

КФ в цитоплазме, локализующихся как в-фолликулах, так и в синусех лимфоузлов (табл. 4).

Таблица 3

Количество митозов в лимфоидных фолликулах лимфоузла брыжейки тонкой кишки и селезенки обезьян, перорально зараженных вирусом КЭ штамм Еланцев клон 15-20/3

Сроки опыта Кол-во митозов в фоузле брыжейки кой кишки лим-! тон-1 Р К-по митозов в селезенке Р

Контроль 0,9 ± 0,03 1,1—0,04

1 сутки 1,8 + 0,04 <0,05 1,5 ±0,02 <0,05

3 суток 4,5±0,08 <0,001 2,0 ±0,08 <0,05

0 суток 5,6 = 0,09 <0,001 3,9±о;15 .<0,01

10 суток 3,1+0,1 <0,001 2,7 ±0,09 <0,001

15 суток 5,0 + 0,09 <0,001 4,2 ±0,12 <0,001

30 суток 3,2 ±0,08 <0,001 4,5±0,04 <0,001

90 суток 2,В — 0,0В <0,001 3,7 + 0,08 <0,001

Р-показатег;ь достоверности различий в сравнении с контролем

Таблица 4

Количество макрофагов с положительной реакцией на КФ а лимфоузлах и селезенке обезьян, зараженных вирусом КЭ

штамм Еланцев.

Сроки опыта

Контроль 1 сутки 3 суток (1 сут< >к 10 суток 15 суток 30 суток 90 суток

Подмышечный

лимфоузел

фолликулы

синусы

1,0 » 0,1 4,5-':0,3

2,4 ±0,3 4,3 + 0,4

7.4 ±0,5 8,3 ±0,5 П,2 ' 0,5 8,3 + 0,7 7,9:' 0,4 13,1 + 1,4 10,0 + 0,0 22,9+1,1

7.5 + 0,3 10,2 0,9 3,0 ±0,3 5,4 ±0,0

Лимфоузел брыжейки топкой кишки

Селезенка

фолликулы

сицугы

фолликул!.I

красная пу \ьпа

1,9' 0,4 1,0±0,2 1,3:' 0,2 1,0 '. 0,2

3,5 ! 0,3 4,4 + 0,3 Г,,5±0,0 3,9.'"0,4

8,2 1 0,0 7,0 > 0,5 8,8 0,0 11,7 '-0,8

5,7 ' 0,7 0,7 + 0,4 8,8 + 0,4 11,2 +0,7

0,2 + 0,4 12,8± 1,0 10,9 ±0,4 18,7 1,0

1(1,0 + 0,5 15,0+1,3 10,7.' 0,4 20,20,0

5.0 ±0,5 9,1 ±0,5 0,3 ±0,5 10,3 ±0,5

2.1 ±0,3 5,8±0,5 2,5±0,2 5,5 + 0,2

Параллельно увеличивалось и количество клеток с высо ким содержанием СДГ в цитоплазме, имеющих ту же локали зацию, что и фосфатазоположительные макрофаги. Обща; структура селезенки не отличалась от таковой контрольно» группы. Фолликулы ее сохраняли небольшие размеры (табл

2) и состояли из лимфоцитов с довольно высоким содержа нием ЩФ+ + . Реактивные центры фолликулов были выраже ны слабо, либо не определялись совсем. Однако, в них уж< намечалось повышение митотической активности клеток (табл

3). Более отчетливо выявлялось нарастание макрофагально> реакции в красной пульпе и, особенно, в фолликулах с высо ким содержанием КФ и СДГ в фагоцитах. Красная пульп« селезенки имела обычный клеточный состав. В фолликула: ее появлялись единичные крупные клетки с гранулами РН> в цитоплазме. Вилочковая железа сохраняла дольчатое строе ние с отчетливым разделением долек на корковый и мозго вой слои. Тимоциты коркового слоя отличались более высо ким содержанием ДНК в ядрах.

Среди них определялись в умеренном количестве митозь и немногочисленные клетки макрофагальной природы с по ложительной реакцией на КФ. Тельца Гассаля были представ лены концентрически расположенным ретикулоэпителием базофильными включениями в его цитоплазму. Некоторые и: них содержали секрет с положительной реакцией на белок I полисахариды. Количество телец Гассаля не превышало дву в дольке. Вокруг долек железы встречались немногочислен ные тучные клетки, дающие метахромазию с толуидиновы/ синим. Структура печени не изменена, но в ней уже с первы суток увеличивалось количество купферовских клеток с высо кой активностью КФ с 1,3±0,2 до 3,4±0,4 (р<0,01).

К 3—6 суткам опыта увеличивалось количество антигет содержащих клеток в лимфоузлах, в лимфоидных фоллику лах стенки тонкой и толстой кишок, в небных миндалинах, также в селезенке. Окраской по Берстону в этих органах вь являлось большое количество макрофагов с высокой актив ностью КФ и СДГ в цитоплазме (табл. 4). С этого срока лимфоузлах и селезенке отчетливо нарастала гиперплази лимфоидных фолликулов (табл. 2) с усилением в них митоти ческой активности (табл. 3) и появлением иммунобластов выраженной пиронинофилией ядрышка и цитоплазмы, исчс зающей при предварительной обработке срезов рибонуклег зой. В мякотных шнурах преобладали лимфоциты с появлс нием среди них до 4,5±0,4 в поле зрения преимущественн

незрелых плазматических клеток. Параллельно убеличению В-зоны в лимфоузлах отмечалось уменьшение их паракорти-кагькой зоны. В мозговом слое лимфоузлов промежуточные синусы были расширены с явлениями отека, гистиоцитоза и усилением макрофагальной реакции (табл. 4). Структура ви-;'очксвой железы не отличалась от таковой у животных предыдущей группы. В печени значительно увеличивалось количестве звездчатых к/еток с высоким содержанием КФ с 1,30,2 до 5,0-0,5 (р<0,001), что указывало на усиление их макрофагальной функции.

Максимального развития эти клеточно-тканевые изменения достигали к 10—15 суткам после заражения и характеризовались увеличением содержания вирусного антигена, опреде-; явшегося в крупных клетках мозгового слоя лимфоуз;.оз, лимфоидных фолликулов и стромы кишечной стенки, ткани небных миндалин. Аналогичную локализацию имели и макрофаги с высокой активностью КФ и СДГ в цитоплазме. Окраской Гольдмана-Марголина в промежуточных синусах лимфоузлов выявлялось большое количество оксидазоположитель-ных клеток. Гиперпластические процессы с повышением ми-тотической активности клеточных элементоз и реакцией бг асттрансформации в лимфоидных фолликулах лимфоузлов сохранялись на высоком уровне. В мякотных шнурах и промежуточных синусах увеличивалось количество плазматических клеток с явным преобладанием среди них незрелых форм, с бо'.ее высоким содержанием белка и сульфгидриль-сых групп. В паракортикальной зоне и з мякотных шнурах лимфоузлов нарастала активность ЩФ до ! ! и < I ■ . В этот период, как и во °сс предшествующие и последующие сроки опыта, некротических изменений, признаков гиперергической реакции в лимфоидмых органах не было выявлено. В сь*ге-зенке изменения также достигали неизысшего своего ргони-гия со статистически достоверным увеличением (р 0,05) диаметра лимфоидных фолликулов и их реактивных центров (табл. 2), со значительным повышением митэтчческой эктиз-иости (табл. 3), количества макрофагальных элементов (табл. 4), локализующихся преимущественно в красной пульпе, вокруг филг.икугов и в центре их. Подобную локализацию имз-кгетки с положительной реакцией на оксидазу. В печени при сохранении обычной структуры отмечалось максимальное увеличение количества купферовских клеток с зысокой активностью КФ до 6,8-0,5 (р'0,001). В вилочковой железа отмечалось некоторое преобладание мозгового слоя. Толы 1.1

Гассаля отличались высоким содержанием белка и наличи ем базофильных включений в виде небольших обломков яде| клеточных элементов. В корковом слое железы среди тимо Цитов выявлялось довольно большое количество митозов I наличие единичных крупных клеток с пиронинофильной цито плазмой, хотя зрелых плазматических клеток ни в одном слу чае не было выявлено. В клетках коры тимуса повышалас активность ЩФ, и в обоих слоях долек увеличивалось коли чество макрофагов с высоким содержанием КФ.

К 30 суткам опыта вирус сохранялся только в стенке тон кого кишечника, непостоянно — в печени, селезенке и под мышечном лимфоузле (табл. 1). В крови обезьян к этому сро ку появлялись специфические антитела, выявленные в РТГА РН и РСК.

В лимфоузлах острые явления отека и синусового гистио цитоза стихали, в них явно уменьшалось количество макрофа гальных элементов с положительной реакцией на КФ и СД1 (тебл. 4). Оксидазоположительные клетки локализовалиа преимущественно на границе синусов и мякотных шнуров. I последних увеличивалось количество плазматических клеток плазмобластов, незрелых и зрелых форм. Общее количест во плазматических клеток достигало 18,7-1,2 (р<0,001) в по ле зрения. Непрямой реакцией Кунса выявлялись клетки син тезирующие антитела к вирусу КЭ. Параллельно плазматиза ции в мякотных шнурах нарастало содержание суммарной белка и ЩФ (+ + + ). В корковом слое отчетливо сохранялас гиперплазия фолликулов и их светлых центров (табл. 2) с не которым уменьшением числа делящихся клеток (табл. 3). Ре активные центры фолликулов были окружены неравномерно! ширины лимфоидным пояском, клеточные элементы которо го отличались высокой активностью ЩФ до + + и + + +. I селезенке к этому сроку также отмечалась гиперплазия лим фоидных фолликулов, в которых продолжала нарастать мито тическая активность клеточных элементов (табл. 3). Реакцие! Браше в светлых центрах фолликулов выявлялось большо' количество бластных клеток с выраженной пиронинофилие! цитоплазмы и ядрышка, свидетельствующей об усилении син теза РНК. Вокруг светлых центров фолликулов всегда бы, виден лимфоидный поясок, клетки которого отличались высо ким содержанием ЩФ и ДНК. Количество макрофагов с вы сокой активностью КФ снижалось как в фолликулах, так и красной пульпе. Уменьшалось и число клеток с высоким со держанием СДГ, оксидазы в цитоплазме. В тимусе сохранялос

обычное соотношение коркового и мозгового слоев с наличием 3—4 телец Гассаля в последнем. Печень отличалась высокой активностью ЩФ в синусоидных капиллярах и снижением количества звездчатых клеток с положительной реакцией на КФ до 5,2-0,5 (р<0,001).

На протяжении опыта у всех животных I группы не было отмечено наличия лихорадки, признаков поражения центральной и периферической нервной системы, инвазии вируса в" вещество головного и спинного мозга (табл. 1). К концу опыта (90 суток) вирус и вирусный антиген полностью исчезали из всех исследуемых органов. В лимфоузлах и селезенке по-прежнему сохранялась гиперплазия фолликулов и их светлых центров (табл, 2). Митотическая активность и пиронинофилия клеток в них, хотя и снижались, но исходного уровня не достигали (табл. 3). Более отчетливо прослеживались межфолликулярная и паракортикальная зоны с высокой активностью ЩФ до + + +. В мякотных шнурах среди преобладающих лим-фоидных клеток встречались и плазматические клетки до 5,8± 0,5 в поле зрения с непостоянным преобладанием зрелых форм. В селезенке степень плазматизации была выражена слабее, количество плазматических клеток в красной пульпе не превышало 3,1 ±0,4 в поле зрения. В вилочковой железе, как и во все предыдущие сроки, статистически достоверных изменений соотношения коркового и мозгового слоев, количества телец Гассаля и их размеров не быпо выявлено. Тимоциты коркового слоя долек железы^ сохраняли высокое содержание ЩФ + +и ДНК. В печени отмечена нормализация активности ЩФ в синусоидных капиллярах и уменьшение количества купферовских «леток с положительной реакцией на КФ, хотя общее количество таких к теток все же в 3 раза превышало контрольный показатель (3,Я - 0,4; р 0,05).

Динамика распределения вируса и тканезык реакций у обезьян, перорально зараженных вирулентным иирусом КЭ

штамм Абссттаров.

В первые сутки после заражения вирус и вирусный антиген обнаруживались в большинстве исследуемых лимфоузлов, селезенке, печени, небных миндалинах, стенке тонкой и толстой кишок. Из крови вирус выделялся постоянно с 1 по 15 сутки опыта. В ряде случлеп он проникал п спинной мозг (табл. 5).

Таблица 5

Результаты титрования вируса из тканей обезьян, зараженных перорально вирулентным вирусом КЭ штамм Абсеттаров (в ЬЭ 50/мл).

Сроки наблюдения (сутки)

Исследуемые ткани 1 3 6 10 15 30 90

Кора головного мозга 0 0 0 0 3,0 0 2,1

Подкорковые узлы 0 0 0 0 0 2,1 2,1

Варолиев •мост 0 0 0 0 2,1 2,1 2,1

Мозжечок 0 0 0 0 0 2,1 0

Продолговатый мозг 0 0 0 0 0 2,1 0

Шейный отд. с/мозга 2,1 2,8 0 0 0 0 0

Грудной отд. с/мозга 0 2,2 0 2,1 2,1 2,1 0

Поясничный отд. с/мозга 0 2,2 0 0 0 2,1 2,1

Кровь 2,5 2,1 2,2 2,1 2,1 0 0

Печень 2,1 2,8 2,2 2,2 0 2,1 2,1

Селезенка 2,2 2,1 2,1 2,1 0 2,1 2,1

Пищевод 0 2,1 0 0 0 0 0

Степка тонкой к-кн 3,7 3,0 3,0 2,5 0 2,5 0

Стенка толстой к-ки 3,0 2,1 2,7 2,5 3,0 2,7 2,1

Подчелюстной л/узел 2,5 2,8 2,1 2,1 0 2,7 2,8

Окологлоточный л/узел 3,5 3,0 3,0 3,0 0 2,7 2,8

Околоппщеводный л/узел 3,0 2,5 2,1 2,1 2,1 0 0

Лимфоузел брыж. тонк. к-кл 2,1 2,2 2,1 2,5 3,0 2,1 0

Д/узел брыж. толстой к-кн 2,2 3,0 2,1 0 0 0 0

П о дм ы ш сш [ ый л /узел 0 2,2 2,2 2,1 0 0 0

Небные миндалины 3,0 2,5 3,2 2,5 0 2,1 2,1

Слизистая полости рта 0 2,1 2,1 0 0 0 0

Морфологическая характеристика тканевых изменений в исследуемых органах была аналогична таковым у животных

I группы. Структура небных миндалин, стенки желудк'о, тонкой и толстой кишок не была изменена. Вирусный антиген локализовался в клетках стромы слизистого слоя кишок и з его лимфоидных фолликулах. В этих же зонах кишеч;юй стенки

определялось скопление макрофагов с высокой активностью КФ. Динамика содержания ЩФ в лимфоидных образованиях кишечной стенки отчетливо не прослеживалось, т. к. активность ее в лимфоидных клетках была неизменно высокой во все сроки наблюдения. Аналогичная картина наблюдалась и в небных миндалинах, в которых вирусный антиген определялся до 10 суток в виде довольно значительного количества светящихся клеток, расположенных под покровным эпителием в фолликулах и межфолликулярной зоне. Подобную локализацию имели и макрофаги с положительной реакцией на КФ. Выявление ЩФ в лимфоидной ткани миндалин давало всегда высокую интенсивность окраски до + + +, за исключением реактивных центров фоликулов. В лимфоузлах вирус и вирусный антиген определялись в течение длительного времени. Из большинства лимфоузлов вирус выделялся на протяжении всего срока наблюдения (табл. 5). В первые сутки после заражения диаметр лимфоидных фолликулов и их реактивных центров в лимфоузлах всех исследуемых групп и селезенке не отличался от контроля (табл. 6).

Межфолликулярная и паракортикальная зоны были хорошо выраженными и содержали ЩФ с плотностью окраски до

Таблица й

Диаметр лимфоидных фоликулов и их реактивных центров в лимфоузлах и селезенке обезьян, зараженных вирусом КЭ

штамм Абсеттаров. V

Подмышечный лимфоузел Лимфоузел брыжейки тоик. к-ки Селез енхп

Сроки опыта диаметр п мм диаметр в мм диаметр в мм

фолликулы спстлые центры фолликул-, ,1 светлые центры фолликулы спетлыо центры

Контроль 1 сутки 3 суток 0 суток 10 суток 15 суток 30 суток 90 суток

1,1 ±0,05 0,2 ±0,04

1,1 ±0,06 0,2 ±0,01

1.4 ±0,02 0,6 ±0,06 1,5±0,02 1,0±0,05

1.5 ±0,02 1,0 ±0,05

1.6 ±0,02 1,1 ±0,06 1,7 ±0,05 1,0 ± 0,04 1,7 — 0,05 1,0 ±0,04

2 0,04 0,2 ±0,02 1,2±0,04 0,1 ±0,03

3±0,05 0,2 ±0,04 1,2 ±0,06 0,1 ±0,04

5 ±0,06 0,0 ± 0,02 1,5 ±0,00 0,Г>±0,09

6 ±0,08 0,7 ±0,02 1,6 ±0,06' 0,8 ±0,06 6±0,06 0,9 ± 0,02 1,9±0,09 1,0±0,08

7 ±0,06 1,0 ±0,02 2,1 ±0,08 1,3 ±0,06 9±0,08 1,1 ±0,02 1,9±0,1 1,2±0,08 9±0,08 1,1 ±0,02 1,9—0,1 1,2±0,08 15

+ +. Мякотные шнуры состояли преимущественно из малых лимфоцитов с наличием среди них плазматических клеток до 3,3±0,3. Митотическая активность повышалась в лимфоузлах, оставаясь неизменной в фолликулах селезенки (табл. 7). В то время, как количество макрофагов с высокой активностью

Таблица 7

Количество митозов в клетках лимфоидных фолликулов брыжеечных лимфоузлов и селезенки обезьян, зараженных вирулентным вирусом КЭ штамм Абсеттаров.

Сроки опыта Количество митозов в 1 поле зрения (Ув. хбЗО)

брыжеечного лимфоузла Р | селезенки Р

Контроль 0,9 ±0,03 * 1,1±0,04

1 сутки 1,8 ±0,04 <0,05 1,1 ±0,03 —

3 суток 2,9±0,05 <0,001 1,8 ±0,03 <0,05

Г> суток 2,8 ±0,04 <0,001 1,4 ±0,02 >0,05

10 суток 3,5±0,05 <0,001 1,4 ± 0,02 >0,05

15 суток 4,2±0,06 <0,001 1,4 ±0,02 >0,05

30 суток 3,2±0,09 <0,001 3,2±0,02 <0,001

90 суток 3,2 ±0,04 <0,001 3,4±0,04 <0,001

Р—показатель достоверности различий в сравнении с конт

ролем.

Таблица В

Количество макрофагов с положительной реакцией ка КФ в лимфоузлах и селезенке обезьян, зараженных вирусом КЭ

штамм Абсеттаров.

Сроки опыта Подмышечный лимфоузел фолли- ^ синусы кули Лимфоузел брыжейки тонк. к-кн Селезенка

фоллн-кулы синусы фолликулы 1 красная ! пульпа

Контроль 1,0:1:0,1 4,5±0,3 1,9 ±0,4 1,0 ±0,2 1,3 ± 0,2 1,0 ±0,2

1 сутки 2,7 ±0,3 4,7 ±0,2 2,0 — 0,2 3,6±0,2 3,4 ± 0,4 4,0 ±0,4

3 суток С,5±0,7 4,8 ±0,0 4,4 ± 0,4 5,2 ±0,3 5,0 ±0,3 5,2±0,2

Г: суток 4,0 ±0,6 5,1 ± 1,0 4,1 ±0,4 5,0 ±0,8 4,9±0,5 0,9 ±0,0

10 суток 5,0 ±0,5 12,5± 1,2 5,8:1 0,0 10,8± 1,0 8,2 ±0,0 15,1 ±0,9

15 суток 5,0 ±0,5 20,8±2,1 0,!5±0,9 17,9± 1,0 9,3 ±0,7 15,0 ±0,9

30 суток 2,8 ±0,4 6,7 ±0,3 3,8 ± 0,3 7,4 ± 0,5 4,0±0,5 9,0±0,0

90 суток 2,4 ±0,3 4,0±0,2 2,2 == 0,2 2,5±0,3 2,1 ±0,4 5,1 ±0,2

16 ■

КФ в цитоплазме к этому сроку увеличивалось преимущественно в селезенке и в лимфоузлах брыжейки тонкой кишки (табл. 8).

Более выраженные морфологические изменения в лимфоузлах и селезенке начали проявляться с 3 суток после за-рг "ения и характеризовались увеличением диаметра лимфо-идных фолликулов, особенно, реактивных центров, с повышением в них митотической активности клеток и нарастанием макрофагальной реакции. Максимального развития эти изменения достигали к 10—15 суткам опыта. При этом отчетливо выявлялась гиперплазия лимфоидных фолликулов с увеличением количества и многорядным их расположением, с вытеснением Т-зоны лимфоузлов, с усилением нуклеиновое белкового обменов, с развитием реакции бласттрансформа-ции в реактивных центрах и околофолликулярных зонах кор-ксссгс слоя. В мякотных шнурах к этому сроку нарастала пгазмокгеточная реакция с появлением до 1 8,3 — 1,5 клеток поге зрения, с преобладанием среди них незрелых форм и п.'азмоблзстов. В коре, паракортикальной зоне и мякотных шнурах отмечено постепенное нарастание активности ЩФ. В промежуточных синусах лимфоузлов, как и у животных I группы. выявлялись отек, расширение, гистиоцитоз с усилением фзгоцитарной активности в виде эритрофагии, пиноцитоза захвата сегментоядерных лейкоцитов. Количество активных мекрофагов с высоким содержанием КФ максимально возрастало в фолликулах, синусах лимфоузлов и красной пульпе сегезенки к 15 суткам. Однако, у животных этой группы зо псе сроки опыта имелась статистически достоверная более низкая степень выраженности макрофагальной реакции по rpr.ni ению с обезьянами, зараженными ослабленным вирусом КЭ штамм Еланцев (р<0,001).

Гкпс-рпгастические процессы в лимфоузлах и селезенке текже сохранялись до 30 и 90 суток опыта. При этом, наиболее выраженные изменения претерпевали реактивные центры фолликулов, диаметр которых в 5—10 раз превышал исходные показетели. Митотическая активность в фолликулах, хотя и имела тенденцию к снижению, но гак и не нормализовалось до комцз наблюдения. Повышенным оставался покдзет-гй' I, количества микрофагов с положительной реакцией на КФ и СДГ. В кроеной пульпе селезенки, вокруг ее фолликулов и кровеносных сосудсз, в промежуточных синусах лимфоузлов сохранялось умеренное количество оксидазополо-жительных клеток. Однако, «острые» явления в этих органах

к этому сроку стихали. Уменьшались размеры промежуточных синусов лимфоузлов, исчезли явления отека и выраженного гистиоцитоза. Среди клеток синусов в умеренном количестве появлялись лимфоциты с единичными незрелыми плазматическими клетками. Вокруг светлых центров фолликулов лимфоузлов и селезенки отчетливо прослеживалась широкая зона лимфоидного пояска с повышенной активностью ЩФ в его клетках. Интенсивность окраски на ЩФ в клеточных элементах мякотных шнуров достигала ++ и даже + + + . В мозговом слое появлялись вторичные, более мелкие лимфоид-ные фолликулы с высоким содержанием ЩФ. Нарастала кле-точность мякотных шнуров с преобладанием лимфоцитов и появлением плазматических клеток до 21,2 — 1,8 в поле зрения. При исследовании лимфоузлов, селезенки и других органов обезьян, зараженных вирулентным вирусом КЭ штамм Абсеттеров ни в одном случае не было выявлено некрозов и признаков гиперергической воспалительной реакции.

В виг.очковой железе вирусный антиген выявлялся непостоянно. В период от 3 до 10 суток в корковом слое долек наблюдалось свечение единичных клеток овальной или полигональной формы. Реакция на КФ выявляла значительно большее количество клеток, локализующихся, как в корковом, так и мозговом слоях. Выраженной динамики структурных изменений тимуса не выявлено. Дольки железы имели различную величину с неодинаковым соотношением коркового и мозгового слоев. Клетки мозгового слоя характеризовались более низкими показателями митотической активности и содержания ДИК. В мозговом слое долек определялось от 3 до 6 тепец Гассаля слоистого строения, без кистозного расширения. Многие из них содержали белковый, Шик-позитивный секрет. ЩФ в мозговом слое не выявлялась. В корковом слое всегда отмечалось большое количество фигур деления клеток и гагичис единичных плазмобластов с выраженной пиронино-филией ядрышек и цитоплазмы. Активность ЩФ коркового слоя долек снижалась с 1—3 суток после заражения с последующим усилением с 10—15 суток до конца опыта. По периферии долек выявлялись тучные клетки, количество которых быго неизменно большим, чем в других органах. В печени сирус обнаруживался на протяжении всего периода наблюдения. Однако, общая структура ее у всех животных не была изменена. Ферментохимиче£кие исследования выявили активность ЩФ в эндотелии синусоидных капилляров преимущественно центральных отделов долек, содержание которой на-

растало к 10—15 суткам после заражения, снижалось к 30-ти суточному сроку и нормализовалось к концу опыта. Высоким содержанием КФ отличались купферовские клетки печени ко/.ичество которых нарастало с 3 по 15 сутки опыта (с 4,1— 0,3 до 6,5^0,5; р<0,001) с последующим снижением, но без нормализации этого показателя до конца наблюдения (2,4--С 2, р - 0,001).

Исследование гуморального иммунитета показало наличие в крови животных этой группы циркулирующих антител в РТГА и РСК с 15 суток после введения вируса. Антитела обнаруживались в крови до конца опыта в концентрациях больших, чем у обезьян, зараженных ослабленным вирусом КЭ штс-мм Еланцев.

ОБСУЖДЕНИЕ

Таким образом, ослабленный вирус КЭ штамм Еланцев кгок 15-20 3 при перорагьном заражении обезьян с перзых суток расселялся во всех лимфоидных органах, стенке тонкого и толстого кишечника и печени. В течение 3 суток он циркулировал в крови и полностью исчезал из всех исследуемых органов к концу наблюдения. Вирус не был обнаружен ни в одном случае в веществе головного и спинного мозга и не вызывал в нем морфологических изменений, характерных для КЭ, а также клинических проявлений болезни (Дубов с соавт. 1975), Вирулентный вирус КЭ штамм Абсеттаров активнее на-гепгипался во всех исследуемых органах, непостоянно обнаруживался в вигочковой железе и проникал в ЦНС, выделяясь из вещества головного и спинного мозга до конца опыта вызывая в нем сосудисто-глиальные реакции (Дубов А. В. с соовт., 1975). При этом у части обезьян отмечался кратковременный подъем температуры без развития неврологических признаков болезни. В лимфоидных органах вирусы обоих штаммов вызывали качественно однотипные тканевые изменения, характеризующие ответ на антигенный стимул. Эти изменения сопровождались усилением мекрофагальной реакции во всех лимфоузлах и селезенке, нарастающей с 1 суток, достигающей максич^апьного развития к 15 суткам, стихающей с .'0-тч суточного срока, но так и не нормализующейся к концу .опыта. Подобная реакция с участием макрофагальчых эле-ментсз, вероятно, является закрномерной и отмечена при экспериментальном заражении различных видов животных (обезьян, морских свинок, линейных и беспородных мышей) как

вирулентными, так и аттенуированными штаммами вирусов КЭ (Ларина Г. И., Левкович Е. Н., 1981). Учитывая особенности противовирусного иммунитета, при котором Гуморальные антитега имеют меньшее значение в специфической резистентности организма ввиду неспособности их оказывать внутриклеточное влияние на вирус (Васильев Н. В. с соавт., 1989), роль макрофагов повышается не только как индукторов ан-титегообразования, но и как важного источника синтеза вирусных ингибиторов и интерферона (Смородинцев А. А. с соавт., 1975). При этом макрофагальная реакция сопровождалась активацией лизосомального фермента КФ, которая может быть косвенным маркером фагоцитов. Параллелизм между усилением фагоцитарной активности макрофагов и повышением содержания в них КФ отмечен многими исследователями (Роговин В. В., 1967; Брауде А. И. с соавт., 1970; Лямперт И. М., Тодер В. А., 1970; Учитель И. Я. 1970 и др.).

Иммуноморфологические изменения в лимфоидных органах сопровождались гиперплазией лимфоидных фолликулов и их реактивных центров с повышением митотической активности клеток, с усилением обмена РНК и белка. В ходе этой перестройки в лимфоузлах наблюдалось преобладание мозгового слоя с расширением промежуточных синусов, отеком и гистиоцитозом. Параллельно гиперпластическому процессу в лимфоузлах уменьшалась межфолликулярная и паракорти-ксльная зокы, что свидетельствует о преобладании иммунного ответа по гуморальному типу с активацией клеток В-за-висимых зон. Аналогичные результаты были получены у лю-Лсй, больных КЭ, у которых в крови количество Т-пимфоцитов уменьшалось при возрастании количества В-пимфоцитов (Кветкова Э. А. с соавт., 1978, 1981). В первые сутки после заражения в лимфоузлах различных групп отмечено уменьшение содержания ЩФ, что по мнению Таташвили Н. И. и Бак-радзе И. Д. (1966) может быть обусловлено общим адаптационным синдромом. Последующее возрастание ее активности свидетельствует об усилении клеточного метаболизма, т. к. ЩФ, катализируя гидролиз эфиров фосфорной кислоты обеспечивает энергетический процесс нуклеинового, белкового и углеводного обменов (Стоянов Д. П., 1966). При разои-гми острой формы экспериментального КЭ у мышей и сирийских хомяков рядом исследователей были выявлены очаги некроза Т-зависимых зон лимфоузлов с массовым распадом лимфоцитов, угнетением их митотической активности и миграции, с возникновением клеточного иммунодефицита (Ко-

нев В. П., 1982; Кармышева В. Я., Погодина В. В., 1987; Рынков А. А., 1992). Однако, при пероральном заражении обезьян макака резус вирусами КЭ некротических изменений в лим-фоидной ткани не возникало. Митотическая активность клеточных элементов ее возрастала с 1—3 суток параллельно гиперплазии рективных центров и не нормализовалась к 90 суткам опыта. При однотипности клеточных и тканевых реакций в лимфоидных органах обезьян, перорально зараженных вирусами КЭ с различной биологической активностью, степень и динамика этих изменений были различными. Так, количество макрофагальных элементов с положительной реакцией на КФ в различных зонах лимфоузлов и селезенки, а также диаметр лимфоидных фолликулов и их светлых центров у животных I группы были выше, чем у животных 2 группы (р<0,001). Но более выражены были различия по уровню митотической активности в лимфоидных фолликулах. У обезьян, зараженных вирулентным вирусом КЭ штамм Абсеттаров, количество митозов к 6 и 15 суткам опыта резко отставало от такого показателя у обезьян, зараженных ослабленным вирусом штамм Еланцев клон 15-20/3.

ВЫВОДЫ.

1. Вирусы КЭ с различной биологической активностью при пероральном заражении обезьян макака резус с первых дней заселяли все лимфоидные органы, стенку тонкого и толстого кишечника, печень, вызывая в них однотипные морфологические изменения, отличающиеся лишь по степени и динамике развития.

2. Ослабленный вирус КЭ штамм Еланцев клон 15-20/3 быстрее выводился из организма и полностью исчезал из всех органов к 90 суткам опыта. В лимфоидных органах он индуцировал более выраженные макрофагальную реакцию, гиперпластические процессы и митотическую активность клеток.

3. Вирулентный вирус КЭ штамм Абсеттаров. активнее накапливался во всех исследуемых органах и не исчезал из них до конца наблюдения.

4. Пероральное заражение обезьян вирусами КЭ штамм Еланцев и штамм Абсеттаров обуславливало развитие гуморального иммунитета с появлением в крови специфических антител и латентное течзние вирусной инфекции.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Учитывая особенности патогенеза развития латентной вирусной инфекции при пероральном заражении обезьян ослабленным вирусом КЭ щтамм Еланцев, отсутствие инвазии его в ЦНС, более быструю элиминацию из организма, /ложно рекомендовать данный штамм для дальнейшего изучения с целью создания на его основе живой вакцины против КЭ.

2. В связи с развитием в лимфоидных органах морфологических реакций, характерных для ответа на антигенную стимуляцию, с формированием гуморального иммунитета при отсутствии клинических проявлений КЭ при пероральном заражении как ослабленным, так и вирулентным вирусами КЭ, данный способ иммунизации живой вакциной можно рекомендовать как более адекватный.

3. Морфологический метод изучения иммунокомпетонт-ной системы у экспериментальных жизотных можно рекомендовать как один из критериев при комплексной оценке им-муногенности вакцинных штаммов вирусов КЭ.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Патогенетические особенности латентной инфекции у обезьян л^кака резус при алиментарном введении вируса клещевого энцефалита с различными биологическими свойствами //Матер. III Пленуму координационного совета СФ АМН СССР по латентным и хроническим вирусным инфекциям. — Томе«, 1975. — С. 28—31 (соавт. Дубов А. В., Загинайко А. С. и др.).

2. Гистохимическое изучение кислей фосфатазы в органах обезьян, зараженных перорально вирусол* комплекса к лотового энцефалита //Эпидемиология, патогенез и профилактика кнещевого энцефалита. — Ленинград, 1975. — С. 33 --37.

3. Сравнительная морфология иммунного процесса у обезьян макака резус при различных путях введения вируса комплекса клещевого энцефалита штамм Еланцев //Эпидемиология, патогенез и профилактика клещевого энцефалита. — Ленинград, 1975. — С. 19—23 (соавт. Дубов А. В.).

4. Соотношение маркеров нейрозирулентности и висцеро-трог.изма с иммуногенной и антигенной активностью атташированных штаммов вирусов ККЭ //Эпидемиология, патог-нэз и профилактика клзш.езого энцефалита. — Ленинград, 1975,

— С. 14—18 (соавт. Дубов А. В., Дубова А. Я., Молотилов Б. А. и др.).

5. Гистохимическое изучение активности некоторых ферментов в процессе иммунопатогенеза у обезьян, перорально зараженных вирусами комплекса клещевого энцефалита //Вопросы вирусологии. — М., 1976. — № 3. — С. 337—341 (соавт. Дубов А. В.).

6. Иммуноморфологическое изучение латентной инфекции у обезьян, перорально зараженных вирусами комплекса кгещевого энцефалита /Материалы X симпозиума «Экология вирусов». — Баку, 1976. — С. 171 —172 (соавт. Дубов А. В. Загинайко А. С.).

7. Тканевая реакция иммунокомпетентной системы при латентной вирусной инфекции //Природно-очаговые заболевания s зон«"х освоения Сибири и Крайнего Севера: Тез. докл. |.с:.ф. — Новосибирск, 1977. — С. 103—108 (соавт. Дубов А. В., Загинайко А. С.).

8. К иммуноморфологии инфекционного процесса, вызванного вирулентными и ослабленными штаммами вируса комплекса клещевого энцефалита //Тез. докл. VI Всесоюзного съезда патологоанатомов. — Москва, 1977. — с. 188 (со-^вт. Ярославский В. Е., Дубов А. В., Гире Б. К. и др.).

9. Морфологическое и гистохимическое изучение макро-фагальной реакции в органах обезьян, перорально зараженных вирусами комплекса клещевого энцефалита //Вопросы краевой инфекционной патологии. — Ленинград, 1977. — С. 51 52.

10. вопросы патогенеза экспериментальной инфекции, вы-ой штеммами вируса комплекса клещевого энцефалиту с: различными биологическими свойствами //«Патогенез хронических и ."гпептных неировирусных инфекций»: Матер. V Пленума научно-координационного сотета СФ АМН СССР.

— Томск, 1977. -- С. 33--36 (соавт. Ярославский В. Е., Дубоз А. Г-., Гмрс Б. К. и др.).

11. Характеристика некоторых количсопонпо-качсстг-сж-нмх; показа тлей иммуноморфологичоской перестройки ор-гонизмл г. условиях латентной вирусной инфекции //«Компенс-i-горнс-приспособитсг,ьиые изменения внутренних органов и гогопного мозга п норме, патогогич и эксперимент.";1): Тол. док,', научно-практической конф. — Тюмень, 1902.—С. 65—66.

I ?.. Иммуноморфологическое изучение инфекционного пронес.ci; при пероральнзм заражении обезьян вирусами комплекса клещевого энцефалита с различной биологической ак-

тивностью //Экологическая и инфекционная патология: актуальные патологоанатомические аспекты: V конгресс патологоанатомов Украины: Тез. докл. — Чернигов, 1993. — С 83— 84 (соавт. Загинайко А. С., Колесникова А. А.).

13. Морфологическое изучение иммунной перестройки в организме обезьян макака резус при пероральном заражении вирусами комплекса клещевого энцефалита с различной биологической активностью //Комплексное изучение медико-биологических проблем здоровья населения Тюменской области: Сб. науч. трудов, посвященных 30-ти летию Тюменского государственного медицинского института. — Тюмень, 1993. — С. 67—69.

Формат 60X84 1/16. Усл. иеч. л. 1. Зак. 432, тир. 100. Типография ХОЗО УВД