Морфофункциональные аспекты посттравматической регенерации кожи в условиях воздействия хитозаном

Довгилева, Ольга Михайловна

Диссертации по медицине → Фармакология, клиническая фармакология

Автореферат и диссертация по медицине (14.00.25) на тему:Морфофункциональные аспекты посттравматической регенерации кожи в условиях воздействия хитозаном

ДИССЕРТАЦИЯ

АВТОРЕФЕРАТ

Довгилева, Ольга Михайловна 0 г.

Ученая степень: кандидата медицинских наук

ВАК РФ: 14.00.25

Автореферат диссертации по медицине на тему Морфофункциональные аспекты посттравматической регенерации кожи в условиях воздействия хитозаном

На правах рукописи

ДОВГИЛЕВА Ольга Михайловна

МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ АСПЕКТЫ ПОСТТРАВМАТИЧЕСКОЙ РЕГЕНЕРАЦИИ КОЖИ В УСЛОВИЯХ ВОЗДЕЙСТВИЯ ХИТОЗАНОМ

14 00 25 - фармакология, клиническая фармакология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Купавна, 2007

003070537

Работа выполнена на кафедре фундаментальной и клинической фармакологии в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Тверская государственная медицинская академия Росздрава»

Научный руководитель

доктор медицинских наук, профессор Г Л Базанов

Официальные оппоненты

доктор биологических наук, профессор Н М Митрохин доктор медицинских наук, профессор К М Резников

Ведущая организация ГУ НИИ фармакологии им В В Закусова РАМН

Защита диссертации состоится 2007 года в часов на

заседании Диссертационного совета Д 217 004 01 ВНЦ БАВ (142450, Московская обл , пос Старая Купавна, ул Кирова, 23)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ВНЦ БАВ и. ко, ¿ОъТе. ^^ упс-Ьа^. ги)

Автореферат разослан «23» апреля 2007 года

Ученый секретарь диссертационного совета доктор биологических наук, профессор Корольченко

Л.В.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы

На современном этапе развития медицины оптимизация заживления повреждений, вызванных механическими воздействиями (ссадины, раны, оперативные вмешательства), действием крайних температур (ожоги, обморожения) и другими повреждающими факторами (гнойно-воспалительные процессы, потертости, опрелости, дистрофические нарушения), остается актуальной научно-практической задачей В связи с тем, что исскуственно синтезированным лекарственным средствам свойственны различные проявления побочных эффектов, в последние годы возник теоретический и практический интерес к веществам биогенного происхождения, в том числе и хитозану (R A A Muzarelh 1986, Ю Ф Коваль и соавт 1992)

Хитозан - уникальный природный биополимер, который был впервые получен из хитина ракообразных в 1859 (С Rouget), но свое современное название приобрел лишь в 1894 (F. Hoppe-Seyler). В последующие годы Р Karrer (1929) провел деградацию хитина с помощью хитиназ, a WH. Howorth (1939) установил абсолютную конфигурацию этого глюкозамина. Хитозан разрушается в организме человека и животных до обычных веществ N-ацетилглюкозамин или глюкозамин (К Г Скрябин, ГА. Вихорева, В П Варламов, 2002) и обладает иммуномодулирующим, противомикробным фунгистатическим, радиозащитаым,

противовоспалительным, гипохолестеринемическим, гемостатическим действиями(Т Ф Соловьева 1994,НС Н Чирков2002,Tozakietal 1999).

В литературе имеются лишь единичные исследования, посвященные изучению влияния хитозана на процессы посправматической регенерации кожи Известно (Muzzarelh R А А 1977, I Jabbalgill et al 1998), что данный биополимер активирует нейтрофильные лейкоциты и макрофаги, усиливая при этом их функциональную активность (синтез цитокинов и супероксидная продукция) В исследованиях С A Stone et al (2000), F L Mi et al (2001) показано увеличение количества фибробластов в ране и синтеза коллагена в дерме под влиянием хитозана, что приводит к ускорению течения пролиферативной стадии заживления В работе Т А. Khan, К К Peh (2003) изучено благоприятное действие хитозана на процессы эпителизации раны. Однако, изучение влияния хитозана на процессы посттравматической регенерации в динамике на всех уровнях структурной организации до сих пор не проводилось.

Особое значение, наряду с морфологическими изменениями в условиях применения хитозана, имеет изучение динамики биохимических показателей, в частности, фосфатидилинозитов и их фосфорилированных форм- соединений, принимающих непосредственное участие в реализации различных этапов заживления ран кожи

Цель настоящей работы

Определить класс токсичности хитозана, изучить скорость, характер, способы посттравматической регенерации кожи у животных и динамику фосфоинозитидного обмена при заживлении ран кожи в условиях применения хитозана

Задачи исследования

1 Определить ЬО50 для хитозана

2 Изучить влияние хитозана на скорость, способы и характер репаративного процесса в коже

3 Провести анализ изменений цитологического состава раневого эксудата при воздействии хитозаном

4 Выявить морфологические изменения и характеристику регенерирующих структур полнослойных ран кожи при использовании хитозана

5 Исследовать ультраструктурную организацию фибробластов грануляционной ткани в условиях применения хитозана

6 Определить динамику содержания фосфатидилинозитов и их фосфорилированных форм в крови и грануляционной ткани на различных этапах заживления ран под влиянием хитозана

7 Обосновать возможную перспективу дальнейшего изучения суспензии хитозана на льняном масле для использования его в качестве средства, стимулирующего заживление ран кожи

Научная новизна

Определены значения острой токсичности и класс опасности для хитозана С помощью комплекса методик впервые установлено стимулирующее влияние хитозана на течение различных этапов репаративного процесса На основе подученных материалов впервые дана морфологическая характеристика стимулирующего влияния хитозана на заживление ран кожи у животных на субклеточном, клеточном и органном уровне структурной организации Нами впервые изучена динамика содержания фосфатидилинозитов и их фосфорилированных форм (фосфатидилинозит-3-фосфатов, фосфатидилинозит-4-фосфатов) в цельной крови и грануляционной ткани на различных этапах заживления ран под влиянием хитозана Впервые установлены морфофункциональные критерии стимулирующего влияния вещества, их характеристика на различных этапах заживления, способы регенерации в условиях воздействия хитозаном

Теоретическое и практическое значение работы

Выполненные комплексные исследования характеризуют морфобиохимические изменения в процессе репаративной регенерации в условиях применения хитозана Представленные материалы могут быть использованы в качестве обоснования для дальнейшего исследования суспензии хитозана на льняном масле и создания лекарственного вещества- стимулятора репаративной регенерации кожи

Положения, выносимые на защиту

1 Хитозан относится к классу «малотоксичных» веществ, что существенно расширяет возможности его клинического использования

2 Суспензия хитозана на льняном масле уменьшает сроки заживления экспериментальных ран кожи у животных на 3 дня, что выражается в сокращении всех этапов посттравматической регенерации при сохранении последовательности их осуществ тения

3 Хитозан обладает выраженным противовоспалительным действием при заживлении полнослойных ран кожи

4 Хитозан активирует не только пролиферативные процессы в регенерирующих тканях, но и изменяет способы заживления ран кожи

5 В условиях применения хшозана содержание фосфатидилинозитов и их производных форм изменяется в цельной крови и грануляционной ткани в соответствии с последовательными этапами репаративного процесса

6 Суспензия хитозана на льняном масле является перспективным веществом для дальнейшего его изучения на предмет создания нового лекарственного средства-стимулятора репаративной регенерации кожи

Апробация работы

Материалы и основные положения диссертации доложены и обсуждены на заседании кафедры фундаментальной и клинической фармакологии, посвященном 75-летию профессора Г Н Четверикова (Тверь, 2003), на конференции, посвященной 80-летию Заслуженного работника Высшей школы РФ, профессора Г В Хомулло (Тверь, 2004), на заседании кафедр фундаментальной и клинической фармакологии, биологии Тверской государственной медицинской академии (Тверь, 20062007), на расширенном межкафедральном заседании ГОУ ВПО Тверской ГМА Росздрава (Тверь, 2007)

Публикации

По теме диссертации опубликовано 11 научных работ

Объем и структура диссертации

Диссертация изложена на 158 границах машинописного текста и состоит из введения, глав «Обзор литературы», «Материалы и методы исследования», трех глав собственных исследований, «Обсуждения результатов», выводов и списка литературы, включающего 288 источников, из которых 149 отечественных и 139 иностранных Работа иллюстрирована 13 таблицами, содержит 48 рисунка (микрофотографии, гистограммы, диаграммы и графики)

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Острую токсичность хитозана определяли на 112 белых нелинейных мышах обоего пола средним весом 21 грамма при внутрижелудочном

введении Каждую дозу хитозана вводили группе из четырех животных в 5% растворе крахмала, объем которого не превышал 3,5 мл Хитозан вводили животным однократно в дозах 1000-1300-1600-2000-2500-32004000-5000-6400 мг/кг LD50 определяли табличным методом по таблице В Б Прозоровского (1980) Наблюдение за внешним видом, поведенческими реакциями и выживаемостью животных проводили непрерывно в течение двух недель (JIН Серпов, В В Гацура, 2000) Класс опасности соединений устанавливали по ГОСТу 12 1 007-76 (ИВ Березовская, 2003)

Морфологические и биохимические исследования выполнены на 252 беспородных белых крысах - самцах средним весом 152 грамма Выделялись три группы животных I - контрольная, на раны животных применялось вазелиновое масло, II — животные, на область повреждения которым использовали льняное масло, III - крысы, которым на раны применяли хитозан Ультраструктурное изучение фибробластов новообразованной ткани проводилось также при нанесении раны верхнего века у 5 кроликов (10 глаз), средней массой 2840 грамма Вещество использовалось в виде 1% суспензии на льняном масле, что составило 0,02% от LD50

Для изучения цитологической характеристики воспалительной фазы репаративного процесса использовали методику мазков-отпечатков, предложенную М П Покровской и М С Макаровым Мазки брались с поверхности раны через 6, 12 и 24 часа после операции, подсушивались на воздухе, фиксировались в спиртах и окрашивались гемаюксилином — эозином по методике Романовского Изучались под световым микроскопом, подсчитывалось количество клеток раневого эксудата, а их величина (нейтрофильных лейкоцитов и макрофагов) измерялась с помощью окулярного микрометра в микрометрах (мкм)

Для сравнительного анализа микроскопических изменений при заживлении ран использовали метод гистологического изучения Биоптаты краев раны брались через 5, 10 и 15 дней после нанесения повреждения Изготавливали срезы толщиной 6-7-микрон, окрашивали их гематоксилином с эозином Препараты изучались под световым микроскопом, и с помощью окулярного микрометра определялась величина новообразованных структур заживающей раны высота струпа, лейкоцитарного вала, грануляционной ткани, пограничной зоны молодого эпителия с неповрежденной кожей и протяженность эпителиального регенерата

Для изучения особенностей ультраструктурной организации фибробластов использовали метод электронномикроскопического анализа Биоптаты новообразованной ткани брались через 5 и 10 дней после нанесения ран кожи У кроликов брали биоптаты через 5 и 10 дней после операции на верхнем веке Ультратонкие срезы изготавливались на ультратоме УМТП-6, наносились на медные сеточки, изучались и фотографировались на пленку в электронном микроскопе ЭВМ - 100К при ускоряющем напряжении 75 киловольт

Фосфоинозитиды входят в состав всех плазматических мембран, а продукты их метаболизма оказывают влияние на активность и пролиферацию клеточных элементов в процессе заживления ран кожи (МБ Петрова 1993, В Г Шестакова 3996) Изменения содержания фосфатидилинозитов и их фосфорилированных форм в регенерирующей ткани и цельной крови могут характеризовать восстановительные процессы при репаративной регенерации кожи Для определения количества фосфоинозшидов в цельной крови и грануляционной ткани использовали метод проточной горизонтальной хроматографии Материал (цельная кровь, навеска грануляционной ткани) у животных всех серий брали через 5, 10 и 15 дней после нанесения травмы Для этого из бедренной артерии брали 5-7 мл крови и навеску грануляционной ткани (500 мг), из которых экстрагировали липиды Содержание фосфатидилинозитов (ФИ), и их фосфорилированных форм фосфотидилинозит-3-фосфатов (ФИФ1), фосфатидилинозит-4-фосфатов (ФИФ) выражали в нмолях фосфора соответствующего фосфоинозитидам (ФИН) на 1 мг белка, а для гкани - в нг на грамм гкани

Статистическую обработку полученных результатов проводили методами вариационнои статистики, достоверность результатов оценивали с помощью метода «%7» и t-критерия Стыодента (Сернов JI Н , Гацура В В , 2000) с применением стандартного пакета программ на персональном компьютере IBM- Pentium III-500 при помощи Microsoft EXCEL ХР (версия 7,0) За достоверные принимали отличия при уровне вероятности р< 0,05

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ 1. Определение острой токсичности хитозана

При изучении острой токсичности хитозана было выявлено, чш он относится к 4 классу по ГОСТу 12 1 007-76 (ИВ Березовская, 2003) -«малотоксичное» вещество, значение LDso составляет 6600-U200 (при р=0,05)

2. Цитологические изменения при регенерации кожи в условиях применения хитозана

Собственный экспериментальный материал свидетельствует о том, что в условиях воздействия хитозаном процесс воспаления значительно ускоряется, но проходит все характерные фазы Через 6 часов после операции у животных, на раны которым наносился хитозан, отмечается выраженная лейкоцитарная реакция, характеризующаяся усиленной, по сравнению, с контролем, миграцией нейтрофильных лейкоцитов в очаг повреждения (табл 1) Их количество составляет 261 2±17,2 против 107,3+19,5 в контроле в 10 полях зрения Они располагаются в раневом отделяемом скоплениями и характеризуются значительной фагоцитарной

Таблица 1

Количество (в 10 полях зрения) и диаметр (в микрометрах) клеток раневого эксудата через 6 часов после операции

Серии М±т Нейтрофилы Количество Диаметр Макрофаги Количество Диаметр

М 107 3 182 1 8 22,5

Контроль ±т 19,5 2,7 02 4,4

Льняное масло М 227 1* 18 8 4,3 24,4

+т 14,8 3,1 2,1 3 4

М 261,2* 19,9 7,1* 29,8

Хитозан ±га 17,2 57 1,8 5 6

Примечание * - р < 0,05 В таблице 1 и во всех последующих таблицах графиках и рисунках «контроль» означает применение вазелинового масла, «льняное масло»-растворитель для хитозана, «хитозан»-1% суспензия на льняном масле активностью Наибольшего развития в этих условиях достигает макрофагальная фаза, обусловленная высокой активностью нейтрофилов, которые выделяют цитокины способствующие стимуляции миграции моноцитов и последующей дифференцировки их в макрофаги

Через 12 часов после операции у животных третьей серии продолжается активный выход нейтрофильных лейкоцитов в очаг повреждения Подавляющее большинство их находится в состоянии физиологической дегенерации Ядра клеток становятся гомогенными, а отдельные се1 менты утрачивают связь друг с другом В этот срок отчетливо проявляется реакция со стороны макрофагов, содержание которых в мазках-отпечатках почти в 5 раз превышает контрольные показатели (табл 2) Это самые крупные клетки раневого эксудата, в цитоплазме которых содержится большое количество пищеварительных вакуолей (рис 1) Увеличение количества и усиление функциональной активности нейтрофитьных лейкоцитов и макрофагов в условиях применения хитозана подтверждается данными других исследователей (К МзЫтига е.Х а1 1984, 1986, V Уи ШаНп е1 а1 1994) Напротив, в мазках-отпечатках у животных первой серии преобладают нейтрофильные лейкоциты (рис 2)

Известно, что макрофаги играют значительную роль в процессе репарагивной регенерации, выделяя биологически активные вещества (интерлейкин-1 интерфероны, фибронектин фактор стимуляции фибробластов), способствующие в дальнейшем активизации пролиферации элементов фибробластического ряда, изменению характера образования грануляционной ткани и сокращению сроков заживчения

Таблица 2

Количество (и 10 нолях зрения) и диаметр (в микрометрах) клеток раневого эксудата через 12 часов после операции

Цейтрофилы Макрофаги

Серии М-'л Количество Диаметр Количество Диаметр

М 299,7 20.2 3.1 20.4

Контроль ±т 17,4 4,2 0,6 2.8

Льняное масло М 366,9* 29,1 9,6* 28,8

Гт 15,2 4,4 2,4 4,1

М 354,6* 35.2* 15,2* 30,2*

Хитозаи т т 18,3 5,8 2,2 3,8

Примечание: ;> - р ^ 0,05

Изучение тип о грамм через 24 часа после операции показало, что у животных, которым на раны применяли х и тот пи, происходит значительное уменьшение количества нейтрофильпых лейкоцитов по сравнению с контролем и предыдущим сроком, что свидетельствует о завершении воспалительного процесса. Количество макрофагов у крыс данной серии в 4.9 раза больше, чем и контроле и в 1,3 раза превышает этот показатель у крыс, получавших льняное масло (табл. 3),

Рис. 1. Крупные макрофаги с множественными вакуолями в цитоплазме через 12 часов после операции. Хитозаи. Окраска по Романовскому. 11 ООх.

Рис. 2. Мит о логическая картина раненого эксудата животного через 12 часов после травмы. Контроль. Окраска по Романовскому 11ООх,

Таблица 3

Количество (в 10 полях зрения) и диаметр (в микрометрах) клеток раневого эксудата через 24 часов после операции

Серии М±т Нейтрофилы Количество Диаметр Макрофаги Количество Диаметр

М 421,1 21,8 4,9 34,8

Контроль +т 13,2 10,2 2,6 14,4

Льняное масло М 389,6 24,2 18,6* 31,1

±т 15,2 7,1 3,6 13,3

М 306,6* 24,7 24,2* 28,7

Хитозан ±т 16,6 6,7 5,2 12,7

Примечание * - р < 0,05

Макрофаги сохраняют типичное строение и характеризуются высокой фагоцитарной активностью Об этом свидетельствует слияние вакуолей, которые приобретают вид ажурного слабо окрашиваемого кружева

Таким образом, изучение цитологической картины раневого эксудата свидетельствует о том, что в условиях применения хитозана наблюдается высокая активность и лейкоцитарной и макрофагальной реакций, в результате чего воспалительный процесс по сравнению с другими сериями осуществляется быстрее

3. Морфофункциональная характеристика репаративиой регенерации кожи в условиях применения хитозана

При визуальном наблюдении за раной у животных, находившихся в условиях применения хитозана, отмечается небольшое количество серозного отделяемого, а к концу первых суток рана становится чистой и сухой, в то время как у животных контрольной серии наблюдается выраженная эксудативно-воспалительная реакция.

Результаты наших исследований показали, что применение хитозана создает благоприятные условия для последовательного осуществления всех этапов посттравматической регенерации Оптимизирующее действие вещества на процесс репарации проявляется в сокращении общих сроков заживления ран у животных на 3 дня по сравнению с контролем (рис 3)

-•- контроль

(Ч

| 250 -^ 200-I 150 -

200 -

о 50 -

1 2 3 4 5 б 7 8 9 10 11 12 13 14 15 сроки заживления (в днях)

Рис 3 Площадь ран на последовательных этапах заживления (в мм 2)

Ускорение фазы воспаления в условиях использования хитозана приводит к быстрому очищению раны, создавая тем самым благоприятные условия для раннего формирования грануляционной ткани Через 5 дней после операции она занимает значительно большую площадь, чем у животных других серий 955,7+37,2 против 711,8±33,5 в контроле (табл 4) Новообразованная ткань характеризуется мощным развитием микроциркуляторного русла Многочисленные кровеносные сосуды обнаруживаются преимущественно в верхних слоях молодой грануляционной ткани, располагаются перпендикулярно поверхности раны, полнокровны, в них хорошо различимы отдельные эритроциты

В грануляционной ткани у крыс третьей серии, через 10 дней после нанесения травмы, отмечается полиморфизм клеточных элементов различного генеза, среди которых преобладают молодые и высоко дифференцированные элементы фибробластического ряда, образующие слой горизонтально ориентированных фибробластов Напротив, у крыс контрольной серии новообразованная ткань заполняет не всю область повреждения, а в центре бывшего дефекта она представлена жировыми клетками

Формирование специфического количественного и качественного состава грануляционной ткани под влиянием хитозана определяет особенности эпителизации ран Молодой эпителий на границе с повреждением сильно гипертрофируется, формирует многослойный пласт, а эпителиальный регенерат в 1,6 раза превышает соответствующий показатель в контроле (табл 5)

Через 15 дней у животных, на раны которых наносили хитозан, наступает полная эпителизация Базальная мембрана молодого эпителия образует выросты в подлежащую соединительную ткань различной величины и протяженности, в которой формируются волосяные фолликулы и сальные железы, что приводит к образованию органоспецифического регенерата (рис 4) Напротив, у крыс контрольной группы эпителиальный регенерат имеет вид многослойного пласта с

неровной Базальлой мембраной (рис, 5), Одновременно с активизацией процессов пролиферации, при использовании хитозана усиливается контракция раны, обусловленная активным развитием И функционированием миофибробластов.

Таблица 4

Величина различных структур (в мкм) заживающих ран через 5 дней после

операции

Серил М ±т Струн Лейко- питарньп вал 1 раиуля-цииоииая ткань Эгапслий на границе I олишна регенерата Протяженность рС1 еперата

М 322,3 96,6 711,8 131.4 71.5 482,7

Контроль ±П1 24,5 5,5 33.5 12,7 6,7 29,9

Льняное М 2Й1.4 75,1 896,9* 158,1 96.3 798.5 *

масло ±т 32,1 6,3 38.8 17,3 7,1 57,6

М 228,9 69,6 955,7* 197Д* 103,8 835,8*

Хитозан +т 16,9 5,1 37.2 14,3 я,з 55.3

Примечание: *р<0,05

Таблица 5

Величина различных структур (в мкм) заживающих ран через 10 дней

после операции

Лейко- 1 рануля- Эпителий Толщина \ 1рсггяжепность

Серии Струп питарпы? циоппан на границе ре г -еперата регенерата

±т вал ткань

М 207,6 59,9 819.9 150.Х 78,2 569,3

Контроль 1.11! 18,6 2,5 24,3 19,8 3,6 43,2

Льняное м 152,1 27 5* 1103,5* 196,4* 308.9* 863,6*

масло ±т 17,6 5,3 33.6 16,2 6,5 45.2

М НО.} 24.7* 1229,9* 246.2* 120,2* 546,5 *

Хитозан ±т 13,4 8,5 51,4 23,4 9,9 53,4

Примечание: *р<0,05

Рис, 4. Образованный органоепенифический регенерат в области повреждения. Хитозан. 15 дней. I сматоксилин-эозии. 75х.

Рис. 5. Эпителиальный регенерат в области бывшей раны. Контроль. 15 дней. Гематоксилин- эозин. 75х.

4. Ультрасгруктурная организация фибробластов грануляционной тканы при заживлении ран кожи под влиянием хитозанз

Л на.!] из результатов улырасгруктурного исследования фибробластов показал сходство заживления ран кожи двух разных локализаций: на спинной стороне и верхнем веке животных. Электрон но.микроскопия ее кое изучение фибробластои у животных, находившихся в условиях использования хитозана, выявило существенные различия в их структуре. В электронно ¡рам мах животных данной серии выделяются три вида фибробластов: молодые, зрелые фибробласты и фиброциты.

Молодые формы фибробластов через 10 дней после операции находятся в состоянии функциональной активности, о чем свидетельствую! округлые крупные ядра богатые хроматином, с четким разделением па эу- и гетерохроматин, хорошо выраженным перинуклеарным пространством и порами в кариолемме. Цитоплазма таких клеток мнимает околоядерное расположение и содержит нсболыное количество органе л л.

Наряду с описанными молодыми формами фибробластов н ткани животных третьей серии встречаются и более зрелые клетки с ярко выраженной коллагенсинтезирующей функцией и ультраструктурными признаками ускоренной такуаши продуктов синтеза и межклеточное пространство.

Зрелые фибробласты характеризуются особым развитием гранулярного ретикулума, который представлен системой узких канальцев и цистерн с фиксированными рибосомами, компонентов пластинчатого комплекса, а также наличием множества везикулярных структур. В цитоплазме располагается значительное количество крупных митохондрии, содержащих множественные, параллельно расположенными кристы и электроштоплотный матрикс. В межклеточном веществе новообразованной ткани располагаются широкие ноля зрелых коллаген о шх волокон с характерной поперечной испорченностью. Волокна агрегируются и пучки, которые имеют упорядоченную направленность (рис. 6).

Рис. 6. Обширные поля правильно ориентированных коллагашвых волокон в межклеточном пространстве, Хитозан. 10 ;Шей. 20000х.

Напротив, у животных первой серии, в этот срок встречаются незрелые формы фибропластов. Это небольшие, веретсновидные клетки, с незначительным объемом цитоплазмы, в центре которых располагается овальной или округлой формы ядро. Оно окружено гладкой двухконтурной кариолеммой с хорошо выраженным перинуклеарном пространством. Характерной особенностью фибробластов контрольной серии является незначительное разви тие органелл и цитоплазме.

В условиях воздействия хитозан ом ультра структурная организация фибробластов претерпевает значительные изменения, которые свидетельствуют об активном синтезе, накоплений, выведении проколлагепа в межклеточное пространство и образованием коллагаювых волокон.

5. Динамика содержании фосфнянозитнцов а цельной кропи и грануляционной ткани па различных :наиах заживлении ран в условиях применения хитозана

Для исследования содержания фосфоинозитидов в цельной крови и грануляционной ткани нами дополнительно использовалась интактная серия животных, которым травма не наносилась.

Анализ полученных данных позволил установить, что ¡1 условиях применения к птоза на в цельной крови и ]рануяяциониой ткани отмечались существенные различия м содержании фосфатидилинозитов (ФИ) и их фосфорилировапных форм (ФИФ, ФИФЗ) в различные сроки заживления рап кожи.

Изучение содержания фосфоинозитидов в цельной крови позволило уста копить, что в результате воздействия хитозан ом происходят значительные изменения показателей лигшдного обмена по сравнению с животными сравниваемых серий. Так, на начальных этапах заживления ран, в период выраженной воспалительной реакции, количество ФИ и ФИФ1 у животных, получавших хитозан, увеличивается 15 2,02 и 1,7 раза соответственно по сравнению с интактной серией крыс и в 1,7 и 1,4 раза

превышает соответствующий показатель в контроле (рис. 7,8)- В последующие сроки заживления наблюдается усилегггге гидролиза фосфатиди л и нозито в, что проявляется в снижении их показателей, а в период эпителизации раны, через 15 дней после нанесения повреждения, значения ФИ и ФИФ восстанавливаются до исходного уровня интактных животных (рис. 7,9),

0,5 ■ 0,4 ■ 0.3 ■ 0,2 0,1 0

5 дней 10 дней 15 дней

дни

□ интактная Я контроль □ льняное масло О хитозэн

Рис. 7, Содержание ФИ в цельной крови на различных этапах заживления ран кожи (нмоль фосфора ФИ на 1 мг белка).

Рис. 8. Содержание ФИФ! в целиной крови я процессе регенерации ран кожи {нмоль фосфора ФИ па 1 мг белка).

Исследование динамики фосфоинозитидного обмена в грануляционной ткани на начальных этапах заживления ран кожи показало, что у животных, находившихся в условиях применения хит слана, отмечается снижение ФИ в 0,6 и 0,8 рана по сравнению с контролем и интактной сериями. В последующем, на более поздних стадиях репарации, наблюдается восстановление их исходных значений, что подтверждается восстановлением целостности различных мембранных компонентов клетки (рис. 10). Вместе с тем, изменения количества фосфорилированных форы ФИ носят противоположный характер (рис. 11,12). Максимальное увеличение уровня ФИФ! и ФИФ наблюдается на стадии воспалительной реакции (3,910,12 и 5,11+0,1 против 2,65+0,2 и 3,47+0,1 в контроле). В дальнейшем происходит постепенное снижение их значений, и на стадии эпителизации раневого дефекта их количество составляет 3,3г0,14 и 4,11+0,16 против 3,1+0,1 и 3,87+0,1 в контроле.

Нами установлено, что в условиях применения хитозана, соотношение я количественное содержание фосфзтвдилинозитов и продуктов их метаболизма восстанавливались быстрее, чем в контроле. Известно (К.А. Коуас5,1995; .!.Р. Вга<1к1га\у,1996), что при гидролизе фосфоинозитидов могут образовываться различные вторичные мессснджеры-инозитол 1,3,4-грифосфаты и инозитол-1,4,5,-трифосфаты, которые способны изменять функциональную активность клеток крови. Этот фаю может свидетельствовать о возможной активации клеточных элементов,

участвующих в осуществлении начальной стадии реиаративного процесса, а также стимуляции пролиферации клеток в процессе посттравматичсской регенерации кожи ( К. Н. Miche.il 1982; II. [о/ак| с! а1. 1999).

5 дней

10 дней

15 дней

О и-г-з'с-гзя Б контроль О пьнзнсе мэслс □ хитоэан

З^ке;1.

10 дней дни

':5днгй

□ интаГгйя я контроль о льняное масло о хгазан

Рис. 9. Содержание ФИФ в цельной кропи ]1 различные сроки заживления ран кожи (имоль фосфора ФИ на I мг белка).

Рис. 50. Содержание ФИ в грануляционной ткани на различных штагах заживления ран кожи (нмоль фосфора ФИ на 1 мг белка).

дни

□ интактная а контроль Ольняни масло □ хитаззн

Рис. 1). Содержание ФИФ] и грануляционной ткани при репаратииной регенерации ран кожи (нмоль фосфора ФИ на 1 мг белка).

Рис. 12. Содержание ФИФ в грануляционной ткани в различные сроки заживления ран кожи (нмоль фосфора ФИ на 1 мг белка).

Полученные нами результаты об изменении обмена ФИ и их фосфорилированных форм н цельной крови характеризуют репарзтивный процесс не только как локальную реакцию на повреждение, но и как комплекс сложнейших процессов, осуществляющихся на уровне организма.

ВЫВОДЫ

1 Изучение острой токсичности хитозана показало, что вещество относится к малотоксичным веществам и является перспективным для его применения в клинической практике

2 Местное применение 1% суспензии хитозана на льняном масле (составляющее 0,02% от ЬО50) оказывает выраженное стимулирующее действие на процесс регенерации кожи

3 В условиях применения хитозана происходит ускоренная смена всех фаз репаративного процесса и тем самым сокращаются общие сроки заживления ран кожи у экспериментальных животных на 3 дня

4 Под влиянием хитозана значительно сокращается продолжительность воспалительной реакции, в результате активизации лейкоцитарной и макрофагической фазы воспаления, что проявляется выраженным накоплением клеточных элементов в раневом эксудате, усилением их функциональной активности и дифференцировки в макрофаги

5 При заживлении ран кожи под влиянием хитозана происходит быстрое формирование грануляционной ткани с развитым микроциркуляторным руслом, обилием и полиморфизмом клеток и волокнистых структур Ускорение процессов дифференцировки тканевых элементов способствует образованию слоя горизонтально ориентированных фибробластов, ранней ее трансформации в соединительную, усилением процессов эпителизации и контракции ран, что приводит к образованию органоспецифического регенерата

6 Хигозан обладает стимулирующим влиянием на развитие фибробластов, что подтверждается увеличением их размеров и количества в новообразованной ткани, а также ультраструктурной организацией клеток Увеличение суммарной протяженности канальцев гранулярного цитоплазматического ретикулума и количества фиксированных рибосом, увеличение количества и размеров митохондрий, обилие везикулярных элементов, гипертрофия пластинчатого комплекса, образование в экстрацеллюлярном пространстве коллагеновых волокон свидетельствует

06 ускорении процессов коллагено- и фибриллогенеза

7 Суспензия хитозана на льняном масле оказывает существенное влияние на фосфоинозитидный обмен в цельной крови и грануляционной ткани на всех этапах посттравматической регенерации кожи В период воспалительной реакции количество фосфоинозитидов в цельной крови увеличивается в 1,7 раза по сравнению с контролем, а содержание ФИ в грануляционной ткани в этот срок снижается в 0,6 раза по сравнению с животными контрольной серией На стадии эпителизации ран значения ФИН достигают исходного уровня, что подтверждается восстановлением целостности различных мембранных компонентов клетки

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

Проведенные нами комплексные исследования по применению суспензии хитозана на льняном масле с целью стимуляции репаративного процесса в коже могут служить обоснованием для дальнейшего доклинического изучения этого вещества

СПИСОК ПУБЛИКАЦИЙ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Особенности течения неспецифического воспаления в области хирургической раны в условиях применения льняного масла // ХЬУШ Межвузовская научная студенческая конференция Тезисы докладов Тверь, 2002 - С 6-7 (соавторы Довгилев Н В , Перевалова А К , Мамкина ЕБ)

2 Льняное масло в ряду стимуляторов репаративной регенерации //Вопросы фармакологии и фармакотерапии Сборник научных трудов, посвященный 75-летию профессора Г Н Четверикова Тверь, 2003 - С 9498 (соавторы Базанов Г А , Хомулло Г В , Базанова Е.М , Паркасевич И.В , Симонов Д А, Огурцова Ю Ю )

3 Льняное масло как стимулятор репаративной регенерации // Современные способы стимуляции репаративных процессов Сборник научных работ, посвященный 80-летию Заслуженного работника Высшей школы РФ, профессора Г В Хомулло Тверь, 2004 - С 89-92 (соавторы Базанов Г А, Базанова Е М , Куцоля М А)

4 Морфофункциональные особенности заживления экспериментальных ран кожи в условиях применения хитозана // 50 Юбилейная Межвузовская научная студенческая конференция Тезисы докладов Тверь, 2004 - С 1213

5 Хитозан и песпективы его применения в медицинской практике // Современные способы стимуляции репаративных процессов Сборник научных работ, посвященный 80-летию Заслуженного работника Высшей школы РФ, профессора Г В. Хомулло. Тверь, 2004 - С 93-106

6 Морфофункциональные особенности заживления экспериментальных ран верхнего века в условиях применения хитозана //51 Межвузовская научная студенческая конференция Тезисы докладов Тверь, 2005 - С 1213

7 Морфофункциональные особенности заживления экспериментальных ран верхнего века в условиях применения хитозана П Вестник Оренбургского Государственного Университета, специальный выпуск Оренбург, сентябрь, 2005 - С 23-26 (соавторы. Голычев В Н., Попов ПН)

8 Морфологическая характеристика заживления экспериментальных ран кожи в условиях применения хитозана // Вестник РГМУ №2 (49), Москва, 2006-С 361.

9 Ультраструктурная организация фибробластов при заживлении экспериментальных ран верхнего века в условиях применения хитозана // Морфология, Санкт- Петербург, №5, 2006 - С 41-42

10 Функциональная морфология заживления экспериментальных ран верхнего века и хитозан // Верхневолжский медицинский журнал Спецвыпуск, Тверь, 2006 - С 19-21.

11 Цитологические изменения раневого эксудата в результате применения хитозана в условиях эксперимента //Вестник Уральской Медицинской Академической Науки, 3-1(14), Екатеринбург, 2006 - С 5254

Список сокращений

ФИН — фосфоинозитиды

ФИ - фосфатидилинозиты

ФИФ1 - фосфатидилинозит-3-фосфаты

ФИФ - фосфатидилинозит-4-фосфаты

Отпечатано в ЗАО "Фаэтон", гТверь, уи Советская, 21 № заказа 23 Тираж 100 экз 20 04 2007

Оглавление диссертации Довгилева, Ольга Михайловна :: 0 ::

ОГЛАВЛЕНИЕ.

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Получение, структура, физико-химический свойства и применение хитозана.

1.2. Основные закономерности репаративной регенерации кожи.

1.3. Метаболизм фосфоинозитидов и их роль в процессах посттравматической регенерации.

1.4. Влияние хитозана на процессы регенерации и клеточный метаболизм.

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1. Уход и содержание подопытных животных.

2.2. Методика изучения острой токсичности хитозана.

2.3. Техника нанесения полнослойных ран кожи.

2.4. Методика нанесения хитозана на раневую поверхность.

2.5. Цитологическое изучение раневого эксудата.

2.6. Микроскопическое исследование биопсированного материала.

2.7. Ультраструктурное изучение фибробластов грануляционной ткани.

2.8. Определение содержания фосфоинозитидов в цельной крови и грануляционной ткани.

2.9. Статистическая оценка результатов эксперимента.

ГЛАВА 3. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОСТРОЙ ТОКСИЧНОСТИ ХИТОЗАНА.

ГЛАВА 4. МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РЕПАРАТИВНОЙ РЕГЕНЕРАЦИИ КОЖИ В УСЛОВИЯХ ПРИМЕНЕНИЯ ХИТОЗАНА.

4.1. Влияние хитозана на цитологический состав раневого эксудата.

4.2. Морфологические изменения и характеристика регенерирующих структур полнослойных ран кожи при воздействии хитозаном.

4.3. Ультраструктурная характеристика фибробластов грануляционной ткани в условиях использования хитозана.

ГЛАВА 5. ДИНАМИКА СОДЕРЖАНИЯ ФОСФОИНОЗИТИДОВ НА РАЗЛИЧНЫХ ЭТАПАХ ЗАЖИВЛЕНИЯ РАН КОЖИ В УСЛОВИЯХ ВОЗДЕЙСТВИЯ ХИТОЗАНОМ.

5.1. Изучение динамики фосфоинозитидов в цельной крови на различных этапах посттравматической регенерации кожи при применении хитозана.

5.2. Изменение содержания фосфоинозитидов в грануляционной ткани на различных этапах репарации ран кожи при использовании хитозана.

ГЛАВА 6. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ.

ВЫВОДЫ.

Введение диссертации по теме "Фармакология, клиническая фармакология", Довгилева, Ольга Михайловна, автореферат

Актуальность проблемы

На современном этапе развития медицины оптимизация заживления повреждений, вызванных механическими воздействиями (ссадины, раны, оперативные вмешательства), действием крайних температур (ожоги, обморожения) и другими повреждающими факторами (гнойно-воспалительные процессы, потертости, опрелости, дистрофические нарушения), остается актуальной научно-практической задачей. В связи с тем, что исскуственно синтезированным лекарственным средствам свойственны различные проявления побочных эффектов, в последние годы возник теоретический и практический интерес к веществам биогенного происхождения, в том числе и хитозану (58,61,62).

Хитозан - уникальный природный биополимер, полученный впервые из хитина ракообразных в 1859 году. Хитозан разрушается в организме человека и животных до обычных для них веществ: Ы-ацетилглюкозамин или глюкозамин (133) и обладает иммуномодулирующим, противомикробным фунгистатическим, радиозащитным, противовоспалительным, гипохолестеринемическим, гемостатическим действиями (4,18,51,226). Однако, изучение влияния хитозана на процессы посттравматической регенерации на всех уровнях структурной организации до сих пор не проводилось.

Особое значение, наряду с морфологическими изменениями в условиях применения хитозана, имеет изучение динамики биохимических показателей, в частности, фосфатидилинозитов и их фосфорилированных форм-соединений, принимающих непосредственное участие в реализации различных этапов заживления ран кожи, которые могут отражаться не только их изменениями в регенерирующей ткани, но и цельной крови.

Цель и задачи исследования

Цель настоящей работы — определить класс токсичности хитозана, изучить скорость, характер, способы посттравматической регенерации кожи у животных и динамику фосфоинозитидного обмена при заживлении ран в условиях применения хитозана.

В соответствии с этим были поставлены следующие задачи:

1. Определить 1Ю5о для хитозана.

2. Изучить влияние хитозана на скорость, способы и характер репаративного процесса.

3. Провести анализ изменений цитологического состава раневого эксудата при воздействии хитозаном.

4. Выявить морфологические изменения и характеристику регенерирующих структур полнослойных ран кожи при использовании хитозана.

5. Исследовать ультраструктурную организацию фибробластов грануляционной ткани в условиях применения хитозана.

6. Определить динамику содержания фосфатидилинозитов и их фосфорилированных форм в крови и грануляционной ткани на различных этапах заживления ран под влиянием хитозана.

7. Обосновать возможную перспективу дальнейшего изучения суспензии хитозана на льняном масле для использования его в качестве средства, стимулирующего заживление ран кожи.

Научная новизна

Определены значения острой токсичности и класс опасноти для хитозана. С помощью комплекса методик впервые установлено стимулирующее влияние хитозана на течение различных этапов репаративного процесса. На основе полученных материалов впервые дана морфологическая характеристика стимулирующего влияния хитозана на заживление ран кожи у животных на субклеточном, клеточном и органном уровне структурной организации. Нами впервые изучена динамика содержания фосфатидилинозитов и их фосфорилированных форм (фосфатидилинозит-3-фосфатов, фосфатидилинозит-4-фосфатов) в цельной крови и грануляционной ткани на различных этапах заживления ран под влиянием хитозана. Нами впервые установлены морфофункциональные критерии, их характеристика на различных этапах заживления ран кожи, способы регенерации в условиях воздействия хитозаном.

Научно-практическое значение работы Выполненные комплексные исследования характеризуют морфобиохимические изменения в процессе репаративной регенерации в условиях применения хитозана. Представленные материалы могут быть использованы в качестве обоснования для дальнейшего исследования суспензии хитозана на льняном масле и создания лекарственного препарата-стимулятора репаративной регенерации кожи.

Апробация работы Основные результаты и положения диссертации доложены и обсуждены на: заседании кафедры фундаментальной и клинической фармакологии, посвященном 75-летию профессора Г.Н. Четверикова (Тверь, 2003); на конференции, посвященной 80-летию Заслуженного работника Высшей школы РФ, профессора Г.В. Хомулло (Тверь, 2004); на заседании кафедр фундаментальной и клинической фармакологии, биологии Тверской государственной медицинской академии (Тверь, 2006-2007), на расширенном межкафедральном заседании ГОУ ВПО Тверской ГМА Росздрава (Тверь, 2007).

Публикации

По теме диссертации опубликовано 11 научных работ.

Заключение диссертационного исследования на тему "Морфофункциональные аспекты посттравматической регенерации кожи в условиях воздействия хитозаном"

ВЫВОДЫ

1. Изучение острой токсичности хитозана, показало, что данный биополимер относится к 4 классу и считается «малотоксичным» веществом, что является перспективным для его применения в клинической практике. 2 Местное применение 1% суспензии хитозана на льняном масле (составляющее 0,02% от ЬО50) оказывает выраженное стимулирующее действие на процесс регенерации кожи.

3. В условиях применения хитозана происходит ускоренная смена всех фаз репаративного процесса и тем самым сокращаются общие сроки заживления ран кожи у экспериментальных животных на 3 дня.

4. Под влиянием хитозана значительно сокращается продолжительность воспалительной реакции, в результате активизации лейкоцитарной и макрофагической фазы воспаления, что проявляется выраженным накоплением клеточных элементов в раневом эксудате, усилением их функциональной активности и дифференцировки в макрофаги.

5. При заживлении ран кожи под влиянием хитозана происходит быстрое формирование грануляционной ткани с развитым микроциркуляторным руслом, обилием и полиморфизмом клеток и волокнистых структур. Ускорение процессов дифференцировки тканевых элементов способствует образованию слоя горизонтально ориентированных фибробластов, ранней ее трансформации в соединительную, усилением процессов эпителизации и контракции ран, что приводит к образованию органоспецифического регенерата.

6. Хитозан обладает стимулирующим влиянием на развитие фибробластов, что подтверждается увеличением их размеров и количества в новообразованной ткани, а также ультраструктурной организацией клеток. Увеличение суммарной протяженности канальцев гранулярного цитоплазматического ретикулума и количества фиксированных рибосом, увеличение количества и размеров митохондрий, обилие везикулярных элементов, гипертрофия пластинчатого комплекса, образование в экстрацеллюлярном пространстве коллагеновых волокон свидетельствует об ускорении процессов коллагено- и фибриллогенеза. 7. Суспензия хитозана на льняном масле оказывает существенное влияние на фосфоинозитидный обмен в цельной крови и грануляционной ткани на всех этапах посттравматической регенерации кожи. В период воспалительной реакции количество фосфоинозитидов в цельной крови увеличивается в 1,7 раза по сравнению с контролем, а содержание ФИ в грануляционной ткани в этот срок снижается в 0,6 раза по сравнению с животными контрольной серией. На стадии эпителизации ран значения ФИН достигают исходного уровня, что подтверждается восстановлением целостности различных мембранных компонентов клетки.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

Список использованной литературы по медицине, диссертация 0 года, Довгилева, Ольга Михайловна

1. Ажгихин, И. С. Биоформация и простагландины / И. С. Ажгихин, Гандель В. Г. // Некоторые проблемы биоформации и фармакокинетики / под ред. И. С. Ажгихина. -М.: б. и., 1972.- Гл. 5.-С. 138-141.

2. Алексеенко, А. В. Структурно-функциональные аспекты репликации и репарации ДНК / А. В. Алексеенко.- Пущино. : б. и., 1983. 86 с. -Библиогр. : с. 84-85.

3. Аллергия / под ред. В. А. Адо, Л. А. Горячкиной, Д. Н. Маянского. -Новосибирск : б.и., 1981. 112 с.

4. Аспиз, М. Е. О регенерации кожных желез и волос у некоторых млекопитающих / М. Е. Аспиз // Труды Института морфологии животных. -1954. -№ 11.-С. 35-37.

5. Бабак, В. Г. Коллоидные свойства производных хитина и хитозана. Теория и практическое применение / В. Г. Бабак // под ред. К. Г. Скрябина, Г. А. Вихоревой, В. П. Варламова. М. : Наука, 2002. - Гл. 4. - С. 201-214.

6. Бабенко, Н. А. Направленное изменение жирнокислотного спектра липидов ядерных структур и функциональное состояние клеточного генома / Н. А. Бабенко // Укр. биохим. журн. 1986.- Т. 58, № 3. - С. 40-47.

7. Березовская, И. В. Классификация химических веществ по параметрам острой токсичности при парентеральных способах введения / И. В. Березовская // Химико-фармацевтический журнал. 2003. - Т. 37, № 3. - С. 3234.

8. Берридж, М. Д. Молекулярные основы внутриклеточной коммуникации / М. Д. Берридж // В мире науки. 1985. - № 12. - С. 98-99.

9. Биологические мембраны / под ред. Дж. Финдлея, У. Эванза, А.Д. Виноградова. Москва: Мир, 1990. - 424 с.

10. Богданов, В. Д. Структурообразователи и рыбные композиции / В. Д. Богданов, Т. М. Сафронова. М. : ВНИРО, 1993. - 177 с. - Библиогр. : с. 173176.

11. Болобан, Л. Г. Масло льняное наше здоровье сегодня, завтра и всегда / Л. Г. Болобан - Краснодар-Москва-Тверь : б.и., 1998. - 34 с. - Библиогр. : с. 3334.

12. Большаков, И. Н. Использование хитозана и его продуктов при воспалительных заболеваниях желудочно-кишечного тракта / И. Н. Большаков, С. Н. Насибов, Е. Ю. Куклин, А. А. Приходько // под ред. К. Г.

13. Скрябина, Г. А. Вихоревой, В. П. Варламова. М. : Наука, 2002. - Гл. 6. - С. 280-298.

14. Браун, JI. А. О полноте восстановления кожи при ее посттравматической регенерации у теплокровных животных / JI. А. Браун, Е. А. Ефимов // Бюлл. эксп. биол. и мед. 1971.- Т. 71, № 3. - С. 82-86.

15. Букина, Т. В. Перестройка кожных рубцов на спине крыс / Т. В. Букина // Бюлл. эксп. биол. и мед. 1991.- Т. 112, № 8. - С. 217-219.

16. Булегенов, К. Е., Содержание холестерина в мембранах эритроцитов при злокачественном росте / К. Е. Булегенов, Б. С. Баллуханов // Изв. АН КазССР. -Сер. биол. 1989. - № 5. - С. 78-82.

17. Быкова, В. М. Сырьевые источники и способы получения хитина и хитозана / В. М. Быкова, С. В. Немцев // Хитин и хитозан / под ред. К. П Скрябина, Г. А. Вихоревой, В. П. Варламова. М. : Наука, 2002. - Гл. 1. - С. 723.

18. Варпаховская, И. И. Хитин и хитозан / И. И. Варпаховская // Рос. Аптеки. -2000.-№8.-С. 26-28.

19. Вельтищев, Ю. Е. Фосфолипиды человека в норме и патологии / Ю. Е. Вельтищев, Э. Ф. Юрьева, М. А. Мусаев // Вопр. мед. химии. 1981. - Т. 27, № 7. - С. 991-994.

20. Вихорева, Г. А. Пленки и волокна на основе хитина и его производных / Г. А. Вихорева, Л. С. Гальбрайх // под ред. К. Г. Скрябина, Г. А. Вихоревой, В. П. Варламова. М. : Наука, 2002. - Гл. 5. - С. 254-277.

21. Вишневский, А. А. Фосфоинозитидный ответ и изменения в супраоптико-нейрогипофизарной системе при индивидуальной резистентности крыс к гипоксии / А. А. Вишневский, Э. Я. Янгалычева, В. М. Яковлев // Вопр. мед. химии. 1995. - Т. 41, №. 4. - С. 1-12.

22. Влияние хитозана на индукцию иммунного ответа на эритроциты барана в сингенной и аллогенной системах переноса «иммунных» макрофагов / В. Ю. Скворцов и др. // Иммунология. 1985.- № 5. - С. 79-81.

23. Влияние хитозана на электрофоретическую подвижность тимоцитов / А. М. Сапожников и др. // Биофизика. 1984. - № 29 (2).-С. 272-275.

24. Войно-Ясенецкий, М. В. Биология и патология инфекционных процессов / М. В. Войно-Ясенецкий. Л. : Медицина, 1981. - 207 с. - Библиогр. : с. 205207.

25. Вопросы фармакологии и фармакотерапии : сб. науч. тр., посвящ. 75-летию проф. Г. Н. Четверикова / Твер. гос. мед. акад. Тверь : Г. А. Базанов, 2003. -111с.

26. Воспаление. Руководство для врачей / под. ред. В. В. Серова и В. С. Паукова. М. : Медицина, 1995. - 640 с.

27. Гамзазаде, А. И. Структурная неоднородность как фактор изменчивости свойств хитина и хитозана / А. И. Гамзазаде, А. М. Скляр, С. В. Рогожин // Высокомолекулярное соединение. 1985. - Т. 27, № 6. - С. 1179-1184.

28. Геворкян, Э. С. Действие эстрадиола на состав фосфоинозитидов в синапсах головного мозга крыс / Э. С. Геворкян, Ж. В. Яворян , И. Г. Арцруни // Вопр. мед. химии. 1995. - Т. 41, № 5 - С. 35-37.

29. Генералов, И. И. Антитела как универсальные биорегуляторы / И. И. Генералов, К. С. Азаренок // Физиологические и биохимические аспекты патологических процессов / под ред. К. С. Азаренок. — Смоленск, 1990. Гл. 3 -С. 106-110.

30. Герасимов, А. М. Биохимическая диагностика в травматологии и ортопедии / А. М. Герасимов, Л. Н. Фурцева. М. : Медицина, 1986. - 234 с. -Библиогр.: с. 231-233.

31. Даманский, В. Ю. Содержание фосфатидилинозитидов в крови онкологически больных / В. Ю. Даманский, А. В. Каргаполов, Н. Н. Слюсарь // Вопросы онкологии. 1990. - № 7. - С. 838-841.

32. Даценко, Б. М. Местное лечение гнойных ран. / Б. М. Даценко, Б. М. Костюченок // Хирургия. 1984. - № 1. - С. 136-141.

33. Даценко, Б. М. Современные возможности и перспективы местного медикаментозного лечения гнойных ран. / Б. М. Даценко, Л. А. Блатун, И. М. Перцев, А. М. Светухин, Т. И. Тамм // Материалы Всесоюзной конференции «Местное лечение ран». М., 1991. С. 20-23.

34. Достовалова, А. И. Лечение больных с ожогами лица 11-111 А степени* гелем хитозана : автореф. дис. . канд. мед. наук : 14. 00. 27. / Достовалова Антонина Ивановна ; Новосибирск, мед. инст.. Новосибирск, 2004. - 121 с. -Библиогр.: с. 103-121.

35. Евдокимов, Ю. М. Нуклеиновые кислоты и хитозан / Ю. М. Евдокимов // под ред. К. Г. Скрябина, Г. А. Вихоревой, В. П. Варламова. М.: Наука, 2002. -Гл. 4. - С. 178-200.

36. Ефимов, В. А. Кожа / В. А. Ефимов // Структурные основы адаптации и компенсации нарушенных функций / под ред. В. И. Саркисова. М., 1987. -Гл. 5.-С. 84-100.

37. Изменение адгезии клеток эпидермиса в процессе заживления кожных ран у крыс / под ред. Т. В. Ершова, П. П. Иванищук. М.: Иваново, 1991. - 102 с.

38. Изменения фибробластов грануляционной ткани при заживлении огнестрельных ран / Е. И. Чумасов и др. //Военно-медицинский журнал. -1986.-№4. С. 16-19.

39. Изучение катаболизма фосфоинозитидов под действием опиоидного агониста фенаридина и его антогониста в синапсах головного мозга белых крыс in vitro / Г. С. Вартанян и др. // Бюлл. эксп. биол. и мед. 1990. - Т. 122, № 10.-С. 405-406.

40. Изучение сорбции органических веществ на хитине, хитозане и некоторых химических производных данных биополимеров. Производство и применение хитина и хитозана : тез. докл. 4-й Всеросс. конф. / Москва : ВНИРО, 1995. -177 с.

41. Ильина, А. В. Энзимология синтеза и деградации хитина и хитозана / А. В. Ильина, В. П. Варламов // Хитин и хитозан / под ред. К. Г. Скрябина, Г. А. Вихоревой, В. П. Варламова. М. : Наука, 2002. - Гл. 2. - С. 79-89.

42. Использование продуктов пчеловодства в биотехнологии / С. В. Немцев и др. // Пчеловодство. 2001. - №5. - С. 50-51.

43. Карагезян, К. Г. Окислительные процессы и обмен фосфолипидов в мембранных структурах гепатоцитов при аллоксановом диабете / К. Г. Карагезян, Л. М. Овсенян, К. Г. Адонц // Вопр. мед. химии. 1990. -Т. 36, № 2. -С. 10-12.

44. Каргаполов, А. В. Анализ липидного состава митохондриальных и эндоплазматических мембран с помощью проточной горизонтальной хроматографии / А. В. Каргаполов // Биохимия. 1981. -Т. 46, № 4. - С. 691698.

45. Каргаполов, А. В. Влияние разобщителей на фосфолипидный состав митохондрий / А. В. Каргаполов, Л. С. Ягужинский // Биохимия. 1978. -Т. 43, № 12.-С. 2150-2153.

46. Kapp, Я. Макрофаги / Я. Kapp. М. : Медицина, 1978. - 187 с. - Библиогр. : с. 186-187.

47. Коваль, Ю. Ф. Изучение биологической активности препаратов хитина и хитозана / Ю. Ф. Коваль и др. // сб. материалов 1 съезда иммунологов в России (23-25 июня 1992). Новосибирск, 1992. - С. 219.

48. Ковешников, В. Г. Пролиферативные процессы при экспериментальном введении дипала и антиоксидантной терапии токоферолом / В. Г. Ковешников, В. С. Пикалюк // Морфология. 1993. - т. 104, Вып. 3Л. - С. 34-39.

49. Кожа: (Строение, функция, общая патология и терапия) / под. ред. А. М; Чернуха, Е.П. Фролова. М.: Медицина, 1982. - 336 с.

50. Константинов, Н. В., Изучение роли фибробластов как основного фактора дифференцировки эпителия. / Н. В. Константинов, Р. Д. Урсо, Н. Г. Короткий /£ Бюлл. эксп. биол. и мед. 1996. - № 1. - С. 80-84.

51. Костюченок, Б. М. Активное лечение гнойной раны / Б. М. Костюченок, В. А. Карлов, И. М. Медетбеков. Нукус: Каракалпакистан , 1981 - 207 с.

52. Куприна, Е. Э. Способы получения и активации хитина и хитозана / Е. Э. Куприна, С. В. Водолажская // Хитин и хитозан / под ред. К. Г. Скрябина, Г. А. Вихоревой, В. П. Варламова. М.: Наука, 2002. - Гл. 1.- С. 44-63.

53. Лекарственные средства / М. Д. Машковского. М.: Новая волна , 2005. -1206 с.

54. Лимфоциты: выделение, фракционирование и характеристика / под ред. Дж. Б. Натвига, X. Вигзеля, П. Перлманна. М. : Медицина, 1980. - 280 с.

55. Ляшенко, В. А. Механизмы активации иммунокомпетентных клеток / В. А. Ляшенко, В. А. Дроженников, И. М. Молотковская. М. : Медицина, 1998. -г 240 с. - Библиогр.: с. 235-239.

56. Марквичева, Е. А. Хитозан и его производные в биоинкапсулировании / Е. А. Марквичева // под ред. К. Г. Скрябина, Г. А. Вихоревой, В. П. Варламова. М.: Наука, 2002. Гл. 6. - С. 315-324.

57. Материалы по новым перспективам в исследовании хитина и хитозана : материалы II междунар. конф. / под ред. Л. А. Крафта, О. Р. Гартман, А. Г. Костюченко. Москва . : ВНИРО, 1992. - 354 с.

58. Материалы по новым перспективам в исследовании хитина и хитозана материалы VI междунар. конф. / под ред. В. В. Недосекова. Москва . ВНИРО, 2001.-456 с.

59. Маянский, А. Н. Клинические аспекты фагоцитоза / А. Н. Маянский, О. И. Пикуза . Казань : Магариф, 1993. - 190 с. - Библиогр.: с. 178-191.

60. Маянский, А. Н. Очерки о нейрофиле и макрофаге / А. Н. Маянский, Д. Н. Маянский . Новосибирск. : Наука, 1989. - 343 с. - Библиогр. : с. 328-341.

61. Маянский, Д. Н. Хроническое воспаление / Д. Н. Маянский . М.: Наука, 1991. - 272 с. - Библиогр. : с. 259-271.

62. Микроскопические и гистохимические изменения в тканях раны у животных при нарушении высшей нервной деятельности : науч. труды : Гистогенез и регенерация тканей / Калинин, гос. мед. инст. Калинин : Г. В. Хомулло., 1970.-211 с.

63. Миоинозит и фосфоинозитиды / В. И. Швец и др.. Москва: Наука, 1987. - 248 с. - Библиогр. : с. 245-247.

64. Михайленко, А. А. Аллергия и аллергические заболевания / А. А. Михайленко, Г. А. Базанов, М. Н. Калинкин. Москва-Тверь : б.и., 2002. -175 с.

65. Модифицирование хитозана включением его в интерполиэликтролитный комплекс с эудрагитом Ь / Химико-фармацевтический журнал. 2006. - № 6. -С. 35-37.

66. Морфогенез сосудистой и нервной систем / под ред. М. С. Спирова. Киев : Здоровье, 1967. - 218 с.

67. Морфофункциональные аспекты заживления ран кожи в условиях стимуляции / Г. В. Хомулло и др. // Морфология. 1996. - Т. 109 , № 2. - С. 101.

68. Музыкант, JI. И. Морфология заживления ожоговых ран при различных методах лечения. / JI. И. Музыкант, Р. И. Каем, А. К. Бадикова // Архив патологии. 1984. - №3. - С. 52-59.

69. Никитин, В. Н. Возрастная и эволюционная биохимия коллагеновых структур / В. Н. Никитин, Е. Э. Перский, J1. А. Утевская. Киев : Наукова думка, 1977. - 280 с. - Библиогр.: с. 278-279.

70. Никитин, В. Н. Системы биосинтеза белка и механизмы регуляции« функций в онтогенезе / В. Н. Никитин, Н. А. Бабенко, JI. Я. Попова. Киев : Наукова думка, 1985. - 236 с. - Библиогр. : с. 231-234.

71. Николаев, А. Я. Биологическая химия / А. Я. Николаев. Москва. : Медицинское информационное агентство, 2001. - 496 с. - Библиогр. : с. 491495.

72. Новгородцева, О. Е. Фосфолипиды сыворотки крови больных ишемической болезнью сердца на этапе сенсорной реабилитации / О. Е. Новгородцева, М. Н. Жданова // Лабораторное дело. 1989. - № 1. - С. 15-19.

73. Новые перспективы в исследовании хитина и хитозана : материалы пятой конф./ под ред. П. Ф. Кайминыпа. Москва. : ВНИРО, 1999. - 304 с.

74. Нудьга, Л. А. Получение хитозана и изучение его фракционного состава /Л. А. Нудьга, Е. А. Плиско, С. Н. Данилов // Журнал общей химии. 1971. - № 11(41).-С. 555-558.

75. Нудьга, Л. А. Природные биополимеры / Л. А. Нудьга, Е. А. Плиско, С. Н. Данилов//ЖОХ.- 1971.- Т. 41.- С. 2555-2558.

76. Нудьга, Л. А. Производные хитина и хитозана и их свойства / Л. А. Нудьга // под ред. К. Г. Скрябина, Г. А. Вихоревой, В. П. Варламова. М.: Наука, 2002. -Гл. 4.-С. 141-176.

77. Общая патология человека / под ред. Давыдовского И. В. М. : Медицина, 1969.-611 с.

78. Окислительные процессы в регенерирующих тканях при введении тиреоидина и 6- метилурацила: тезисы XI Всесоюзного съезда анатомов, гистологов и эмбриологов. Минск : «Наука и техника», 1981.- 476 с.

79. Олейникова, Е. А., К методике изучения и оценке фагоцитоза / Е. А Олейникова, О. В. Миловидова, Л.В . Новикова // Лабораторное дело.- 1975.-Вып.6.- С. 363-367.

80. Очерки гнойной хирургии / под ред. В. Ф. Войно-Ясенецкий. М.: Бином, 2000. - 704 с.

81. Очерки по проблемам регенерации / под ред. А. Н. Краевского, Л. Д. Лиознера. М. : Медицина, 1996. - 212 с.

82. Петров, В. Г. О заживлении ран / В. Г. Петров, С. Е. Козлов //Клиническая хирургия. 1986. - № 1. - С. 67.

83. Пинчук, В. Г. 15-й Международный противораковый конгресс / В. Г. Пинчук, Г. И. Кулик, Г. И. Осинский // Экспер. онкология. 1991. - Т. 13, № 2. -С. 73-80.

84. Полякова, А. В. Морфология заживления гнойных ран / А. В. Полякова, А. Г. Гитлина //Актуальные вопросы гнойной челюстно-лицевой хирургии / под ред. А. В. Поляковой . Красноярск, 1988. - Гл. 4. - С. 94-102.

85. Прозоровский, В.Б. Табличный метод определения ЕД50 (LD50) веществ с низкой биологической активностью / В.Б. Прозоровский, М.П. Прозоровская // Фармакол. и токсикол. 1980.- Т.43, № 6.-С. 733-735.

86. Производство и использование хитина и хитозана из панциря криля и других ракообразных : тез. докл. первой науч. всесоюз. конф. / Дальрыбвтуз. — Владивосток : б.и., 1983. 234 с.

87. Производство и применение хитина и хитозана : тез. докл. IV Всеросс. конф. / ВНИРО-Москва : б.и., 1995. -250 с.

88. Простагландины / под ред. И. С. Ажгихина. М. : Медицина, 1978. - 416 с.

89. Профилактическая иммунология : монография / А. А. Михайленко и др.. — М.: [б.и.], 2004. 447 с. - Библиогр. : с. 444-447.

90. Пфафрод, JI. Р. Цитологическое исследование ран (обзор литературы) / JI. Р. Пфафрод, JI. И. Слуцкий // Лабораторное дело. 1984. - № 1. - С. 3-6.

91. Рабинович Э. 3. Ранозаживляющие покрытия на основе хитозан -коллагенового комплекса / Э. 3. Рабинович // Человек и лекарство : материалы первого Рос. Нац. Конгресса. Москва, 1992. - С. 229.

92. Раневые покрытия / Вирник А. Д. и др. // Прикл. биохим. и микробиол.-1996.- Т. 32, №1.- С. 615-619.

93. Раны и раневая инфекция / под ред. М. И. Кузина, Б. М. Костюченок . -М.: Медицина, 1990. - 592 с.

94. Регенерация органов у млекопитающих / под ред. Л. Д. Лиознера. М. : Медиз, 1960.-392 с.

95. Роль нейро-эндокринной регуляции в процессе регенерации различных тканей : труды Калинин, гос. мед. инст. / Калинин, гос. мед. инст. Москва: Г. В. Хомулло., 1965. - 195 с.

96. Роль радикалов в свойствах хитиновых соединений / С. В. Роговина и др. // Высокомолекулярные соединения. 1997. - Т. 39, № 6. - С. 941-946.

97. Сафронова, Т. М. Применение хитозана в производстве пищевых продуктов / Т. М. Сафронова // под ред. К. Г. Скрябина, Г. А. Вихоревой, В. П. Варламова. М. : Наука, 2002. - Гл. 6. - С. 346-357.

98. Сернов, Л.Н. Элементы экспериментальной фармакологии. / Л.Н. Сернов, В.В. Гацура.- Москва, 2000.- 352с.- Библиогр.: с. 346-352.

99. Серов, В. В. Воспаление, иммунитет, гиперчувствительность / В. В. Серов // Архив патологии. 1983. - № 11.- С.13-14.

100. Серов, В. В. Соединительная ткань / В. В. Серов, А. Б. Шехтер. М.: Медицина, 1981.-312 с. - Библиогр. : с. 295 - 312.

101. Серов, В. В. Соединительная ткань как единая система / В. В. Серов // Терапевтический архив. 1984. - Т. 56, № 5. - С. 6.

102. Слуцкий, JI. И. Биохимия и механохимия соединительной ткани: значение для хирургии, травматологии и ортопедии / JI. И. Слуцкий. Рига : б.и., 1988. - 36 с. -Библиогр. : с. 31-36.

103. Слюсарь, Н. Н. Показатели динамики быстрых изменений фосфолипидов в изучении молекулярных механизмов развития злокачественной опухолиженских половых органов / Н. Н. Слюсарь, М. М. Дамиров, JI. П. Бакулева // МРЖ. -1991. № 3. - С. 579.

104. Совершенствование производства хитина и хитозана из панцирьсодержащих отходов криля и пути их использования : материалы 111 конф. / под ред. В. А. Петрова, Г. А. Тарасенко. Москва. : ВНИРО, 1992. -356 с.

105. Современные способы стимуляции репаративных процессов : сб. науч. работ, посвящ. 80-летию проф. Г. В. Хомулло / Твер. гос. мед. акад. Тверь : О. М. Довгилева, 2004. - 215 с.

106. Соколова, Г. П. Жирнокислотный состав различных органов и тканей / Г. П. Соколова, Ю. А. Блюздин, А. Г. Виноградов // Нервная система. 1973. - Т. 13, № 1. - С. 69-71.

107. Соловьева, Т. Ф. Водорастворимый комплекс липополисахарид хитозан и его влияние на агрегацию тромбоцитов / Т. Ф. Соловьева // Биол. мембраны. - 1994. -Т. 11, № 5. - С. 496-500.

108. Состояние системы гиалуроновая кислота-гиалуронидаза-антигиалуронидаза и микроциркуляция у больных гипертонической болезнью / под ред. С. М. Назарова. Фрунзе. : НИИ Кирг. Кардиологии, 1990. - 25 с.

109. Спирин, А. С. Молекулярная биология: структура и биосинтез нуклеиновых кислот / А. С. Спирин. М. : Высшая школа, 1990. - 352 с.-Библиогр.: с. 350-352.

110. Спирин, А. С. Рибосома / А. С. Спирин, Л. П. Гаврилова. М. : Наука, 1971.- 170 с. -Библиогр.: с. 198-170.

111. Стимулирующий эффект хитозана на иммунный ответ на эритроциты барана у мышей разных линий / В. Ю. Скворцов и др. // Иммунология. -1984.-№2.-С. 22-25.

112. Стимуляция регенеративных процессов при заживлении ран. Морфология раневого процесса : тез. докл. конф. / С-Пб. воен. мед. акад. Санкт-Петербург : б.и., 1992. - 94 с.

113. Теоретические и практические аспекты заживления ран / П. И. Толстых и др. // Хирургия. 1975. - № 12. - С. 98-105.

114. Фенчин, К. М. Заживление ран / К. М. Фенчин. Киев: Здоровье, - 1979. -173 с. - Библиограф. : с. 163-172.

115. Феофилова, Е. П. Ключевая роль хитина в образовании клеточной стенки грибов / Е. П. Феофилова // Приклад, биохим. микробиол. 1984. - Т. 20, № 2. -С. 147-160.

116. Феофилова, Е. П. Ключевая роль хитина в образовании клеточной стенки грибов / Е. П. Феофилова // Хитин и хитозан. Получение, свойства и применение / под ред. К. Г. Скрябина, Г. А. Вихоревой, В. П. Варламова. —М., 2002.-Гл. 2.-С. 91-100.

117. Феофилова, Е. П. Хитин грибов : распространение, биосинтез, физико-химические свойства и перспективы их использования / Е. П. Феофилова, В. М. Терешина , С. А. Менорская // Микробиология. 1995. - Т. 64, № 1. - С. 2630.

118. Фролов, В. А. Патофизиология клетки / В. А. Фролов. М. : б.и., 1989. -34 с. - Библиогр. : с. 31-32.

119. Фукс, Б. Б. Очерки морфологии и биохимии соединительной ткани / Б. Б. Фукс, Б. И. Фукс. JI. : Медицина, 1968. - 215 с. - Библиогр. с. 196-213.

120. Хилова, Ю. К. К вопросу о субпопуляциях макрофагов грануляционной ткани / Ю. К. Хилова // Морфология раневого процесса / под ред. 3. С. Хлыстовой С-Пет., 1992. - Гл. 3. - С. 43.

121. Хитин и хитозан / под ред. К. Г. Скрябина, Г.А. Вихоревой, В. П. Варламова. М.: Наука, 2002.- 365 с.

122. Хлыстова, 3. С. Кожа как орган иммуногенеза / 3. С. Хлыстова, И. И. Калинина, В. X. Хавинсон // Морфология раневого процесса / под ред. 3. С. Хлыстовой. С-Пет., 1992. - Гл. 3. - С. 44-46.

123. Хомулло, Г. В. Гисто-цитологические изменения в ране при разном-уровне основного обмена / Г. В. Хомулло // Доклады АН СССР. 1954. - Т. 98, № 4. - С. 685-686.

124. Хомулло, Г. В. Регенерация тканей в различных условиях нейро-эндокринной регуляции : материалы конф. по вопросу регенерации и клеточного размножения / под ред. В. В. Серова Москва ., 1964. - 248 с.

125. Хомулло, Г. В. Формообразование в коже при регенерации в условиях различного уровня обмена веществ / Г. В. Хомулло // Доклады АН СССР. -1953.-Т. 90, №2.-С. 313-316.

126. Хомулло, Г. В. Цитология раневого экссудата в условиях различной обогащенности организма тиреодином / Г. В. Хомулло // Научные известия Казахского мед. ин-та. 1952. - № 11. - С. 68-79.

127. Хрущев, Н. Г. Гистогенез соединительной ткани / Н. Г. Хрущев. М. 1 Наука, 1976. - 117 с. - Библиогр. : с. 115-117.

128. Чернух, А. М. Воспаление / А. М. Чернух. М. : Медицина, 1979. - 448 с. -Библиогр.: с. 416-444.

129. Чернух, А. М. Кожа / А. М. Чернух. М.: б.и., 1982. - 445 с. - Библиогр. : с. 443-445.

130. Чирков, С. Н. Противовирусные свойства хитозана / С. Н. Чирков // под ред. К. Г. Скрябина, Г. А. Вихоревой, В. П. Варламова. М. : Наука, 2002. -Гл. 7. - С. 327-335.

131. Шехтер, А. Б. Некоторые вопросы фибрилогенеза при репаративном росте соединительной ткани у человека / А. Б. Шехтер, Г. Н. Берченко // Актуальные проблемы клинической морфологии / под ред. А.Б. Шехтер . М., 1982. - Гл. З.-С. 58-61.

132. Юданова, Т. Н. Современные раневые покрытия: получения и свойства (обзор) / Т. Н. Юданова, И. В. Решетов // Химико-фармацевтический журнал. — 2006.-№2.-С. 24-31.

133. Юданова, Т. Н. Современные раневые покрытия : получения и свойства. 11 Раневые покрытия с иммобилизованными ферментами / Т. Н. Юданова, И. В. Решетов // Химико-фармацевтический журнал. 2006. - № 8. - С. 24-28.

134. Abdel- Latif, A. A. Metabolism of phosphoinositides // Handbook of neurochemistry. New-York. - 1983. - V. 3, № 15. - P. 91-131.

135. Activity natural polymers and bioorganic preparations / W. Bashong et al. // SOFW-journal. 1999. - V. 125. - P.87-96.

136. Actual questions of biochemistry / K. Inoue, K. Yoshizuka, K. Ohto // Anal, kirn. Acta. 1999. - V.338, № 1-2. - P. 209-219.

137. Actual problems of biotechnology / G. A. Ameer et.al. // Biotechnol. Bioeng. 1999.-V. 62.-P. 602-608.

138. Allergy / M. Kumar et al. // J. Clin. Imunol. 2001V. 107, № 2. - P. 822.

139. Alvarez, O. A. Experimental oncology / O. A. Alvarez, G.A. Zimmerman // Med. Pediatr. Oncol. 2000.- - V. 34. - P. 200-205.

140. A new branch of biotechnology-wound-healing substances based on polyaminosaccharides / E. P. Feofilova et al. // Mikrobiologya. 1999. - V. 68, № 6. - P. 834-837.

141. An investigation on skin wound healing in mice with a taurine-chitosan gel formulation / Z. Degim et al. // Amino Acids. 2002. - V. 22, № 2. - P. 187-198.

142. An experimental study on the repair of full skin loss of rabbits with composite chitosan artificial skin / Y. Lu et al. // Zhonghua Shao Shang Za Zhi. 2002. - V. 18,№ l.-P. 19-22.

143. Arora, S. The role of prostaglandin El in inflammatory process in the rat / S. Arora, P. K. Lahiri, R. K. Sanyal // Int. Apch. Allergy. 1970. - V.39. - P.186-191.

144. Babak V. G. Identification chitin polymers / V. G. Babak, G. A. Vikhoreva,I. G. Lukina // Physicochem. And Eng. Aspekt. 1997. - V. 128, N 1-3. - P. 75-89.

145. Babak V. G., Kildeeva N.R., Merkovich E.A., et al. // Euforum "Biopolymers: Food and Cosmetic Aplications" (polymerix 2000), Rennes France. P. 27-38.

146. Babak, V. G. New properties of the natural polymers / V. G. Babak, E. A. Merkovich, L. S. Galbraikh // Mendeleev Commun. 2000. - V. 3. - P. 94-95.

147. Baginski, E. S. Microdetermination of inorganic phosphate in biological materials / E. S. Baginski, R. P. Foa, B. K. Zak // Clinical chemistry .- 1967.-V. 13.-P. 326-332.

148. Berridge, M. J. Inositol phosphates and cell signaling / M. J. Berridge, R. F. Irvine // Nature. 1989. - V. 341, № 6239. - P. 197-20.

149. Berridge, M. J. Oncogenes, inositol lipids and cellular proliferation / M. J. Berridge // Biotechnol. 1984. - V.2, N 6. - P. 541-546.

150. Biagini, G. Wound management with N-carboxybutyl chitosan / G. Biagini et al. // Biomaterials. 1991. - V. 12, №> 3. . p. 281-286.

151. Biodégradation of chitin / Y. M. Kim, K. S. Choi // Pollimo. 1985. - V. 9, № 5.-P. 417-434.

152. Biological evaluation of chitosan nanofiber membrane for regeneration. / I. Jabbalgill et al. // Vaccine. 1998. - V. 16, № 20. - P. 2039-2046.

153. Biotechnology / H. G. Yoon et al. // Biosci. Biotechnol. Biochem. 2001. - V. 65.-P. 802-809.

154. Blan K. H. Prostaglandis and the skin / K. H. Blan // International Congress of Dermatology. Amsterdam, 1972. - P. 2-19.

155. Bone repair in radii and tibias of rabbits with phosphorylated chitosan reinforced calcium phosphate cements / X. Wang et al. // Biomaterials 2002. V. 23,№21. -P. 4167-4176.

156. Capitani, S. Effect of phospholipid vesicle on endogenaus RNA polymerase activity of isolated rat lives nuclei / S. Capitani, E. Caramrlli // Physiol. Chem. and Phys. 1981. - V. 13, № 2. - P.153-158.

157. Carbohydrate latest research / G. A. Vikhoreva et al. // Polymer Science Ser. -1997.-V. 39.-P. 139-148.

158. Carbohydrate research / S. Nishimura et al. // Naturforsch . 1998. - V. 306, № 3. - P. 427-433.

159. Chemical degradation natural polymers / R. A. A. Muzzarelli et al. I I Carbohidr. Res. 1984. - V. 126. - P. 225-331.

160. Chemistry new preparations / E. E. Evan, S. P. Kent // J. Histochem. Cytochem. 1962.-V. 10.-P. 24-28.

161. Chitin and chitosan / K. Nishimura et al. // Vaccine. 1986. - V. 4. -P. 151156.

162. Chitin and Chitosan. Sources, chemistry, biochemistry, phycical properties and applications / J. Krapczuk et al.. London - New-York: [w.p.], 1990. - 231 p. -Bibliogr. : p. 229-231.

163. Chitin in nature and technology / K. Nishimura, et al. //. Plenum press. N. -Y. -London.- 1986. -N30.-P.7.

164. Chitin in nature and technology / Nishimura K. et al. //. Plenum press. N. -Y. -London.- 1986.-V.34.- P.477-483.

165. Chitin in nature and technology / S.-I. Nishimura et al. // Chem/ Lett. 1993. -V. 9.-P. 1623-1628.

166. Chitin polymers / V. G. Babak et al. // Materials of 5th World Surfactants Congress Firenze: CESIO. 2000. - V. 1. - P. 657-663.

167. Chitosan accelerates the production of osteopontin from polymorphonuclear leukocytes / H. Ueno et al. // Biomaterials. 2001.- V. 22, № 2. - P. 165-173.

168. Chitosan-alginate PEC membrane as a wound dressing: assessment of incisional wound healing / L. Wang et al. // J. Biomed Mater Res. 2002. - V. 63, №5.-P. 610-618.

169. Chitosan oligosaccharide and chromosomal abberation/ T. Kasaka et al. // J. Vet. Med. Sci. 1996.- V. 58, № 10. - P. 963-967.

170. Chitosan properties / J. Desbrieres et al. // Polymers. Bull. 1997. - V. 39. - P. 209-215.

171. Chitosan the different 1 arginine metabolic conduction paths in strain-relief crystallization and inflammatory macrophages boosts / C. Porporatto et al. // Biochem Biophys Res Commun. - 2003. - V. 304, № 2. - P. 266-272.

172. Controlled release of platelet-derived growth factor-BB from chondroitin sulfate-chitosan sponge for guided bone regeneration / Y. J. Park // J. Control Release. 2000. - V. 67, № 2-3. - P. 385-394.

173. Cytological properties of the new polymers / I. D. Bianco et al. // Cancer lett. 2000.- V. 159, № 2.-P. 189-195.

174. Diethyl methyl chitosan as an intestinal paracellular enhancer: ex vivo and invivo studies / Avadi M. R., et al. // Int J. Pharm. 2005. - V. 293, № 1-2. - P. 83-89.

175. Effect of chitosan film containing basic fibroblast growth factor on wound healing in genetically diabetic mice / K. Mizuno et al. // J. Biomed Mater Res A. -2003.-V. 64, № l.-P. 177-181.

176. Eight-week histological analysis on the effect of chitosan on surgically created one-wall intrabony defects in beagle dogs / J. S. Park et al. // J. Clin Periodontol. -2003. V.30, № 5. - P. 443-453.

177. Evaluation effects of chitosan for the extracellular matrix production by fibroblasts and the growth factors production by macrophages / H. Ueno et al. // Biomaterials. 2001. - V. 22, № 15. - P. 2125-2130.

178. Evaluation of chitin and chitosan on open would healing in dogs / Y. Okamoto et al. // J. Vet. Med. Sei. 1995. - V. 57, № 5. - P. 851-854.

179. Evaluation of the usefulness of dressings made from chitosan and lyophilized human placenta on wound healing / P. Drenda et al. // Wiad Lek. 1997. - V. 50, № 2. - P. 252-256.

180. Experimental pharm. activity natural polymers / K. Suzuki et al. // Chem. harm. Bull. 1985. - V. 20. - P. 1359-1372.

181. Experimental research the structure of chitosan / F. L. Mi et al. // J. Biomed. Mater. Res.- 2002. № 59(3). - C. 438-449.

182. Fabrication and characterization of a sponge-like asymmetric chitosan membrane as a wound dressing / F. L. Mi et al. // Biomaterials. 2001. - V. 22, №2.-P. 165-173.

183. Farese, R. V. Phospholipids as intermediates in hormone action / R. V. Farese, S. P. Kent // Mol. And cell Endocrinol. 1984. - V. 35, № 1. - P.l-14.

184. Ghalayini, A. J. Light adaptation of bovine retinas in citu stimulates phosphatidylinositol synthesis in rod outer segments in vitro / A. J. Ghalayini, R. E. Anderson // Curr. Eye. Res. 1995. - V. 14, № 11. - P. 1025-1029.

185. Gingras, M. Nerve regeneration in a collagen-chitosan tissue-engineered skin transplanted on nude mice / M. Gingras, I. Paradis , F. Berthod // Biomaterials. -2003. — V.24, № 9. P. 1653-1661.

186. Glassberg, E. Collagen Synthesis on polyribosomes of cultured mammalion fibroblasts / E. Glassberg // Laser Surg.Med. 1988. - V.8. -P. 186.

187. Godwin, M. Effect of litnium on muscarinic cholinoceptor-stimulated phosphoinositide-specific phospholipase C substrate selectivity in CHO-ml cells / M. Godwin, S. Jenkinson , S. R. Nahorski // Biocyem.Soc.Trans. -1995. V. 23, №3.-P. 421.

188. Growth factor releasing porous poly (epsilon-caprolactone)-chitosan matrices for enhanced bone regenerative therapy / S. Y. Im et al. // Arch Pharm Res. 2003. -V. 26, № l.-p. 76-82.

189. Guber, S. Origin of fibroblasts in wound healing / S. Guber, R. Rudolph // Surgery, Gynecol., Obstet. 1978. - V. 146, № 4. - P. 641-649.

190. Gurr, M. I. Lipid metabolism in man / M. I. Gurr, R. Rudolph // Proc. Nutr. Soc. 1988. - V. 47, № 3. - P. 277-285.

191. Healing at skin graft donor sites dressed with chitosan / C. A. Stone et al. // Br. J. Plast Surg. 2000. - V. 53, № 7. - P. 601-606.

192. Hitzermann, R.H. Effects of nicotine on brain l-phosphatidylinositol-3,4,-biphosphate synthesis and metabolism-possible relatinship to nicotine-induced behaviors / R. H. Hitzermann, H. H. Loh // Bichem.Pharmacol. 1978. - V. 27, № 21. - P.2519-2573.

193. Hodge, H. C. Am. Industr. Hyg. Ass. Anart. / H. C. Hodge, L. H. Sterner / Chem.- 2005. Sep. 21, V. 53, № 19. - p. 7579-85.

194. Holub, B. J. Inositides lipid research / B. J. Holub, A. Kuksis, W. Thompson // Biomacromolecules. 1981. - V. 11, № 6. - P. 558-564.

195. Hyaluronic acid modulated acute and chronic inflammation / A. Ialenti, M. DiRosa // Biochem. 1994. - V.43, №1.-P. 44-47.

196. Hyaluronic acid and role in phosphoinositide metabolism / B. R. Seckel et al. // J. Neurosci. Res. 1995. V. 40. № 3. . p.324-335.

197. Immobilized thrombin receptor agonist peptide accelerates wound healing in mice / S. M. Strukova et al. //Clin Appl Thromb Hemost. 2001. - V. 7, № 4 - P. 325-329.

198. Infection and Immunity / A. Bacon et al. //J.Sci 2000. - V. 68, № 10. - P. 5764-5770.

199. Iseli, B. Chitosan activity / B. Iseli, T. Boiler, J.- M Neuhaus // In: Chitin Enzymology / ed. by R. A. A. Muzzarelli, Atec Edizioni. Italy, 1996. - V. 2. - P. 135-142.

200. Kajiakava, K. Electron microscopic studies on skin fibroblasts of the mouse with special reference to the fibrillogenesis in connective tissue / K. Kajiakava, T. Tanii, R. Hirono // Fata Path. Jap. 1989. - V.9, № 6. - 61-68.

201. Khan, T. A. A preliminary investigation of chitosan film as dressing for punch biopsy wounds in rats / T. A. Khan, K. K. Peh // J Pharm Pharm Sci. 2003. - V. 6, № 1. - P. 6-20.

202. Kovacs, K. A. Ethanol inhibits muscarinic receptor stimulated phosphoinositide metabolism and calcium mobilization in rat primary cortical cultures / K. Kovacs, T. J. Kavanagh, L. G. Costa // Neurochem.Res. 1995. - V. 20, № 8. - P. 939-949.

203. Kweon, D. K. Preparation of water-soluble chitosan/heparin complex and its application as wound healing accelerator / D. K. Kweon, S. B. Song, Y. Y. Park // Biomaterials. 2003. - V. 24, № 9. - P. 1595-1601.

204. Lipid-DNA interactions / F. A. Manzoli et al. // Biochim. Et. biophys. acta. -1974.-V. 370, № 1.-P. 1-5.

205. Local investigations of the tendency reparation / R. Levine, M. Agren, P. Mertz // J. Cut. Med. Surg. 1998. - V. 2. - P. 193-198.

206. Marcwell, M. A. A modification of the Lowry procedure to simplify protein determination in membrane and lipoprotein samples / M. A. Marcwell, Haas S. M. // Anal, biochemistry. 1978. - V. 87, №1.-P. 206-210.

207. Mattioli Belmonte M., Biagini G., Castaldini C. Osteoconductive properties of methylpyrrolidinone chitosan in an animal model / R. A. A. Muzzarelli et al. // Biomaterials. 1993. - V. 14, № 12. - P. 925-929.

208. Mechanism of antimicrobial resistance chitin polymers / H. Tozaki et al. // J. Pharm. Pharmacol. 1999.- V. 51,№ 10.-P. 1107-1112.

209. Mediators of inflammation / ed. by G. Weisman. New-York-London : w.p., 1974.-204 P.

210. Michell, R. H. Is phosphatidylinositil really out of the calcium gate? / R. H. Michell // Nature. 1982. - V. 296, № 5857. - P. 492-493.

211. Microencapsulating / M. Ramadas et al. // J.Chem. sei. 2000. -V. 17, № 4. -P. 405-411.

212. Mistry, K. J. Sygnal transduction mechanism in response to aflatoxin B1 exposure: phosphatidylinositol metabolism / K. J. Mistry, M. Krishna, R. K. Bhattacharya // Chem. Biol. Interact. 1995. - V. 17, № 98(2). - P. 145-152.

213. Models of experimental studies / P. L. Lopez de Alba et al. // Biol. Soc. Chil. Quirn. 1987. - V. 32, № 2. - P. 81-87.

214. Murper R.J., Rolland A. Chitosan- related compositions and methods for delivery of nucleic acids into a cell. PCT Int. Appl. 1997 WO. 9742975.

215. Muzzarelli, R. A. A. Chitin / R. A. A. Muzarelli. Oxford: Pergamon Press.-1977-. P. 309.

216. Muzarelli, R. A. A. Chitin in nature and technology / R. A. A. Muzarelli, C. Jeuniaux, G. W. Gooday // Plenum Press., New York. 1986. -№ 11.- P. 420.

217. Muzzarelli, R. A. A. Chitin in nature and technology / R. A. A. Muzarelli, F. Tanfani, M. Emanuelli // Carbohydr. Polym. 1984. - V. 4, № 2. - P. 137-151.

218. Muzarelli, R. A. A. Natural chelating polymers / R. A. A. Muzarelli. Oxford : Pergamon Press, 1973. - 383 p.- Bibliogr.: p. 381-383.v

219. Muzzarelli, R. A. A. / Natural polymers // R. A. A. Muzarelli, G. Gracomelli // Carbohydrate Polymers. 1987. - V. 7(2). - P. 87-96.

220. Nakamura, S. Lipid mediators and protein kinase C activation for the intracellular signaling network / S. Nakamura, Y. Nishisuka // J.Biochem. -1994. -V. 1156.-P. 1029-1034.

221. Nanotechnology / T. Arakawa et al. // Appl. Enthomol. 2001. - V. 135, № 3. -P. 165-167.

222. Neutron difraction reveals the orientation of the headgroup of inositol lipids in model membranes / J. P. Bradshaw et al. // Nat. Struct. Biol. 1996. - V. 3 ,№ 2. -P. 125-127.

223. New investigations polymers using / M. Bradley et al. // Health Technol. Assess. 1999. - V. 3. - P. 90-103.

224. New methods chitosan activation / A. Gamzazade et al. // Carbohydrate Polymers. 1997. - V. 34. - P.l 13-116.

225. New technology : Int. Conf. "New Dev. Ion Exch." / ed. by Baba Yoshinari,-Tokyo: Kodansha, 1991 .-204 p.

226. Nigg, E. A. Mechanisms of signal tranduction to the cell nucleus / E. A. Nigg // Advance in cancer research. 1990. - V. 55. - P. 271-310.

227. PDGF-dependent tyrosine phosphorilation stimulates production of novel polyphosphoinositides in intact cells / K. R. Auger et al. //Cell. 1989. - V. 57, N1. - P.167-175.

228. Pharmacology activity natural polymers / H. Hayatsu et al. // Chem. Pharm. Bull. 1997. - V. 45. - P. 1363-1368.

229. Pharmacology of biopolymers. / M. Ramadas et al. // J. Pharm. Pharmacol. -1999.-V. 51,№ 10.-P. 405-411.

230. Polymers and mitosis / M. Hasegawa et al. // Jpn. J. Cancer Res. 2001. - V. 92, № 4. - P. 459-466.

231. Polymers wound using / T. Mori et al. // Biomaterials. 1997. - V. 18, № 13. -P. 405-411.

232. Procedings second intern / Suzuki S. et al. // Conf. on chitin and chitosan. -Sapporo, 1982. P. 210-212.•T

233. Prostaglandins in the skin / L. Sterin Bonda et al. // Br. J. Pharmacol. 1995. -V. 115, №8.-P. 1525-1531.

234. Putney, J. W. The role of phosphoinositide metabolism in signal transduction in secretory cells / J. W. Putney // J.Experim.Biol. 1988. - V. 139. - P. 135-150.

235. Rebecchi, M. J. Thyroliberin stimulated rapid hydrolysis transduction in secretory cells / M. J. Rebecchi, M. C. Gershengorn // J. Experim. Biol. 1988. - V. 139. - P.135-150.

236. Regan M.C., Barbul A. // Wound healing / Ed. G. Schlag and H. Redl. N. Y. -Berlin-Heidelberg : Springer Verlang, 1994. P. 3-17.

237. Robertas, J. D. The role polymers in blood system / J. D. Robertus, A. F. Monzingo // Exs. 1999. - V. 87. - P. 125-135.

238. Ross, R. Connective tissue cells, cell proliferation and synthesis of extra cellular matrix-a review / R. Ross // Philos. Trans. R. Sos. Lond. (Biol.) 1975. - V. 271 , № 912 - P.247-259.

239. Ross, R. Human wound repair. Inflammatory cells epithelial- mesenchymal interrelations and fibrogenesis / R. Ross, J. Oldland // S. Cell. Biol. 1968. - V. 39, № 1,-P. 152-168.

240. Ross, R. The fibroblast and wound repair / R. Ross // Biol. Rev. (Cambr.). -1988. V. 43, № 1. - P.51-95.

241. Ross, R. Wound healing and collagen formation / R. Ross, E. P. Benditt // J. Cell. Biol. 1965. - V. 27, № 1. - P.83-106.

242. Sail, K. N. Influencing chitosan on a corneal wound repair / K. N. Sail, J. K. Kreter, R H. Keates // An ophthalmol. 1987. - V. 19, № 1. - P. 31-33.

243. Shahabuddin, M. Metabolic activity chitosan / M. Shahabuddin, J. M. Vinetz // Exs. 1999. - V. 87. - P. 223-234.

244. Soukur, J. F. Cholinegic stimulation of polyphosphoinositide metabolism in brain in vivo / J. F. Soukur, R. O. Fridel // Biochem. Pharmacol. 1978. - V. 27, № 8.-P. 1239-1243.

245. Studies polymers using / K. A. Janes et al. // J. Control Released. 2001. - V. 15,№73 (2-3).-P. 225-267.

246. Sumrall, A. J. The origin of dermal fibrocytes in wound repair / A. J. Sumrall, W. C. Jonson // Dermatology (Basel). 1993. - V. 146, № 2. - P. 107-114.

247. Synthesis and characterization of thermo sensitive chitosan copolymer as a novel biomaterial / J. W. Lee et al.// J. Biomater Sci Polym. Ed. 2004. - V. 15, №8.-P. 1065-1079.

248. Tally, F. P. Mechanism of antimicrobial resistance and resístanse transfer in anaerobic bacteria / F. P. Tally, M. H. Molomy // Scand.J.Infect.Dis. 1982. - V. 14, Suppl. 35. - P. 37-44.

249. Tendon chitosan tubes covalently coupled with synthesized laminin peptides facilitate nerve regeneration in vivo / M. Suzuki et al. // J. Neurosci Res. 2003. -V. 72, № 5. - P. 646-659.

250. The bone regenerative effect of platelet-derived growth factor-BB delivered with a chitosan/tricalcium phosphate sponge carrier / Y. M. Lee et al. // J. Periodontal. 2000. - V. 71, № 3. - P. 418-424.

251. The different polymers experimental using / W. G. Seo et al. // Canser Lett. -2000.-V. 159, №2.-P. 189-195.

252. The effect of chitin and chitosan on fibroblast-populated collagen lattice contraction / G. I. Howling et al. // Biotechnol Appl Biochem. 2002. - V. 36, № 3.-P. 247-253.

253. The effect of chitin and chitosan on the proliferation of human skin fibroblasts and keratinocytes in vitro / G. I. Howling et al. //Biomaterials. 2001. - V.22, № 22 - P. 2959-2966.

254. The effects of Pva/chitosan/fibroin (PCF)-blended spongy sheets on wound healing in rats / J. H. Yeo et al. // Biol Pharm Bull. 2000. - V. 23, № 10. - P. 1220-1223.

255. The first international conference of the European chitin society; A. Razdan, D. Petterson. Brest-France. : Abstracts Book, 1995.-221 p. t

256. The latest investigations chitosan models / G. Peluso et al. // Biomaterials. -1994.-V. 15, № 15.-P. 1215-1220.

257. The new natural polymers / V. G. Babak et al. // Polymers Bulletin. 2000. -V.45.-P. 77-81.

258. The position of activity polymers / K. H. Bodek // Acta Pol. Pharm. 2001. - V. 58, №3.-P. 185-194.

259. Therapeutic properties biopolymers / M. G. Petronio et al. //Chemotherapy. -1997.-V. 43, №3. P. 211-217.

260. The role of hyaluronan in tumour neovascularization / P. Rooney // Int.J.Cancer. 1995. - V. 60, № 5. - P.632-636.

261. The use of chitosan as a condensing agent to enhance emulsion-mediated gene transfer / S. B. Jing et al. // J. Pharm. Pharmacol. 1997. - V. 49, № 7. - P. 721723.

262. Trimethylated chitosans as non-viral gene delivery vectors / H. Lebnanec et al. // Biomedicine and Pharmacotherapy. 2001. - V. 55, № 6. - P. 316-320.

263. Ueno, H. Topical formulations and wound healing applications of chitosan / H. Ueno, T. Mori, T. Fujinaga // Adv. Drug. Deliv. Rev. 2001. - V. 52, № 2. - P. 105115.

264. Using colloids preparations / V. G. Babak et al. // Physiochemical. and Eng. Asp. 1999. - V. 147. - P. 139-148.

265. Valone F.H. Regulation of leukocytes function// N.Y.Plenum press.-1984.-V. 13,№5.-P. 155.

266. Veterinary practice with chitin and chitosan / S. Minami et al. // EXS. 1999. - V. 87. - P. 265-277.

267. Zhongguo, H. Influencing chitosan of a membrane on tendinous soldering and curing / H. Zhongguo, Z. J. Sheng, C. L. Hou // Zhongguo Xiu Fu Chong Jian Wai Ke Za Zhi. 1999. - V. 13, № 6. - P. 382-385.

268. Ziboh, V. A. Die role der Prostaglandine in der Haut / V. Ziboh, H. Blank // Hautartz. 1973. - № 24. - P.519-522.