Автореферат и диссертация по медицине (14.00.13) на тему:Морфофункциональное состояние иммунокомпетентных клеток крови в дифференциальной диагностике рассеянного склероза

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ ПЕРМСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ ИНСТИТУТ

РГ6 од

о На Правах рукописи

УДК 616.832-004.2-07:616.155.3

МАКАРОВ Сергей Владимирович

■ ИОРФСФУНКЦИОНАЛЬНОЕ СОСТОЯНИЕ И.ШНШ0Ш1ЕТЕНТНЫХ КЛЕТОК КРОВИ В ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНОЙ ДИАГНОСТИКЕ РАССЕЯННОГО СКЛЕРОЗА

14.00.13 - нервные болезни

14,00.23 - гистология, цитология, эмбриология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Пермь 1993

• -4 / У б м

Работа выполнена на кафедре нервных болезней и нейрохирургии и Центральной научно-исследовательской лаборатории при Самарском медицинском институте им. Д.И.Ульянова.

Научные руководители: доктор медицинских наук, профессор В.В.Скупченко; доктор медицинских наук, профессор М.В.Углова.

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, профессор Ю.И.Кравцов; кандидат медицинских наук, доцент В.А.Четвертных.

Ведущая организация: Военно-медицинская Академия им.С.М.Кирова.

Защита состоится октября 1993 года в часов на заседании специализированного совета К 084.09.03 Пермского Государственного медицинского института по адресу: Пермь, 614000, ул.Куйбышева, 39.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Пермского Государственного медицинского института.

Автореферат разослан ' 1993 г.

Ученый секретарь специализированного совета доцент

Л.Е.Леонова

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Рассеянный склероз - хроническое прогрессирующее заболевание нервной системы, протекающее с обострениями и ремиссиями или неуклонно прогредиентно, с множественными очагами поражения, рано приводящее к инвалидности людей молодого и трудоспособного возраста. Рассеянный склероз (PC) занимает видное место среди органических поражений нервной системы (от 4,7 до 10,5$) в разных странах (И.А.Завалишин, А.П.Хохлов и соавт.,1990; Д.А.Марков, А.Л.Леонович и соавт., 1976; Н.И.Гра-щенков и соавт., I960). За последние двадцать лет заболеваемость в некоторых регионах возросла в два раза (BaueirH.J. , 1987; Eoaati G. , 1987), что обусловливает большие социально-экономические потери. Возможно проблема этого заболевания стала бы менее актуальной, если бы своевременная диагностика и адекватная терапия заняли прочное место в арсенале клиницистов.

Выраженный клинический полиморфизм и синдромологическое сходство рассеянного склероза с некоторыми заболеваниями нервной системы, в частности опухолями мозга, спиноцеребеллярньши атаксиями (СЦА) и другими вызывает серьезные трудности в проведении дифференциальной диагностики. Отсутствие патогномоничных клинических, лабораторных признаков рассеянного склероза, недостаточная информативность параклинических методов исследования (О.А.Хоедкариан и соавт., 1987; Е.И.Гусев я соавт., 1990; Sola P. efc al, 1989; Iasac C.et al. , 1988) делают проблему диагностики и дифференциальной диагностики рассеянного склероза чрезвычайно актуальной.

Необходимо отметить, что решение диагностических проблем существенно улучпится при исследовании иммунореактивности организма у больных с различными типами патологических процессов, где иммунопатологические реакции имеют важное значение в их патогенезе. В этом плане интегральная оценка морфофункционального состояния (МФС) иммунекомпетентных клеток может дать важную информацию, позволяющую оптимизировать дифференциальную диагностику рассеянного склероза с оцухолями мозга и СЦА, а также создает предпосылки для адекватной индивидуальной иммунокоррекции.

Цель работы: Определить морфофункциональное состояние иммуно-компетентных клеток крови (ИКК) у больных с заболеваниями нервной системы и разработать на основе их интегральной оценки тесты для дифференциальной диагностики PC.

Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи исследования:

1. Клиническая оценка и подбор групп больных с РС и клинически сходных с ним заболеваний (опухоли мозга, спиноцеребеллярные атаксии).

2. Используя комплекс морфологических, морфометрических, иммунологических методов, изучить в сравнительном аспекте состояние иммунокомпетентных клеток крови у больных РС, СЦА, оцухоля-ми мозга.

3. Определить состояние отдельных популяций лимфоцитов по чувствительности к биогенным аминам у неврологических больных и оценить их информативно-диагностическую роль в развитии иммунопатологического процесса.

4. Используя системный многофакторный анализ провести математическое моделирование для оценки морфофункционального состояния иммунокомпетентных клеток крови у больных РС и дифференцируемых с ним заболеваний.

5. На основе разницы интегральных показателей разработать программу для микро-ЭВМ по их вычислении индивидуально у обследуемых больных для оптимизации диагностического процесса.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА РАБОТЫ

1. Совокупность морфологических, морфометричеЬких, иммунологических методов с использованием математического моделирования позволяет комплексно оценить М$С ИКК, что оптимизирует дифференциальную диагностику РС и открывает в перспективе новые возможности для адекватной иммунокоррекции заболеваний нервной системы.

2. Впервые, на основе системного многофакторного анализа выявлены наиболее информативные для оценки М$С ИКК тесты н разработаны для практического использования математические модели МФС ИКК: рассеянного склероза с различным типом течения заболевания, опухолями мозга, спиноцеребеллярными атаксиями, позволяющими проводить диагностику и дифференциальную диагностику РС.

3. На основании изучения свойств мембраны лимфоцитов впервые выявлен дефект чувствительности Т-лимфоцитов к биогенным аминам: серотонину, гистамину, адреналину по их рецепторнш свойствам у больных РС, что имеет практическое и методологическое значение в изучении патогенеза, клинике и диагностике этого заболевания»

4. Впервые, согласно клинико-лабораторным данным, выявленным при исследовании влияния биогенных аминов на лимфоциты, выделена группа больных РС с транзиторныы аминоинвертированным состоянием лимфоцитов.

5. Установлено, что изменение аминочувствительности лимфоцитов у больных с опухолями мозга и СЦА имеют иной характер, чем у больных РС, что объясняется различием механизмов дисфункции иммунной системы и может быть использовано в дифференциальной диагностике РС.

6. На основании изучения влияния препарата ЭНКАД на ИКН, показан различный характер чувствительности лимфоцитов больных РС в зависимости от типа течения заболевания.

7. Впервые, с помощью нового в неврологической практике электрооптического способа регистрации реакции взаимодействия антигена с антителом, выявлены высокие уровни антител к белкам миелина в сыворотке крови больных с ыенингососудистыми опухолями и СЦА.

ПРАКТИЧЕСКАЯ ЦЕННОСТЬ РАБОТЫ

1. Разработан комплекс информативных; морфометрических, иммунологических методов исследования для оценки течения РС и дифференцируемых с ним заболеваний нервной системы: опухолей мозга, СЦА.

2. Предложена технология исследования иимунокомпетентных клеток крови, которая доступна для большинства клинических лабораторий и позволяет оценить иммунный статус организма больного, проследить динамику иммунопатологического процесса, что необходимо для своевременной диагностики, адекватной иммунокоррекции.

3. Разработана и предложена для практического здравоохранения программа и микро-ЭВМ по вычисление интегральных показателей, характеризующих МФС ИКК как у больных РС с различными тишми течения заболевания, так и у дифференцируемых с ними болезнями нервной системы - опухолями мозга, СЦА.

4. На основе клинико-лабораторных данных выделена группа больных РС с аминоинвертированным состоянием лимфоцитов, как имеющая особенности течения заболевания, чго необходимо учитывать при диспансеризации больных.

5. Отдельные формы СЦА, прежде всего ОПЦА, часто протекают с аутоиммунным синдромом, деструкцией белков миелина, что необходимо учитывать при разработке тактики лечения и диспансерном на-

блюдении этих больных. Для регистрации аутоиммунных реакций рекомендуется определять уровень антител к белкам миелина на ЭОП в динамике, количество сенсибилизированных к белкам миелина лимфо цитов.

На основании анализа полученных данных на защиту выносятся следующие положения.

1. Комплекс морфологических, ыорфометрических, иммунологических методов позволил эффективно оценить морфофункциональное состояние лимфоцитов, моноцитов, нейтрофилоцитов у больных рассеянным склерозом, что использовано в дифференциальной диагностике с опухолями мозга, спиноцеребеллярными атаксиями.

2. На основании вычисленных интегральных показателей созданы и предложены для практического применения математические модели морфофункционального состояния иммунокомпетентннх клеток крови, оптимизирующие дифференциальную диагностику рассеянного склероза,

Апробация работы. Материалы диссертации доложены и обсуждены на: обществе невропатологов и нейрохирургов Самарской области (1991); итоговой годичной конференции ЦНЙЛ Куйбышевского медицинского института км. Д.И.Ульянова (Куйбышев, 1988, 1989, 1990); межвузовской научной конференции "Методологические проблемы совр< менного научного знания" (Куйбышев, 1990); первой Самарской конференции невропатологов и нейрохирургов "Новые технологии в невр( логии и нейрохирургии" (Самара, 1992); научной конференции, посвященной памяти заел.деятеля науки РСФСР академика АМН СССР Б.С.Дойникова (Ленинград, 1991); на рабочем совещании "Клиническая нейроиммунология на пороге XXI века" с международным участие! (Санкт-Петербург, 1992, 1993); научно-практической конференции "Номпенсаторно-приспособительные механизмы внутренних органов и головного мозга в норме, патологии и эксперименте" (Тюмень,1991) ХХ1У-ХХУ итоговой научной конференции профессорско-преподаватель ского состава военно-медицинского факультета при Куйбышевском ме дицинском институте им. Д.И.Ульянова (1991, 1992).

Публикации по теме диссертации. По теме диссертации опубликовано 17 работ, из них 10 в центральной печати и одна за рубежом. Получено 4 удостоверения на рационализаторские предложения.

Структура и объем работы. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания методов исследования, 4 глав собственных исследований, заключения, выводов, списка использованной литературы.

Текст работы изложен на 199 страницах, диссертация иллюстрирована 26 таблицами и 13 рисунками, 4 фотографиями. Список литературы включает 280 работ отечественных и зарубежных авторов.

СОДЕРЖАНИЕ РАБ01Ы

Материал и методы исследования. Работа основана на результатах обследования 1?4 больных с различными неврологическими заболеваниями, из них 90 мужчин и 84 женщины. У 95 человек диагностирован рассеянный склероз, 34 пациента имели опухоли нервной системы различной локализации, у 45 больных диагностирована спино-церебеллярная атаксия. Часть больных обследована не однократно, в результате чего общее количество наблюдений составило 269. Возраст больных колебался от 16 до 56 лет, в среднем 39 + 8 лет. Отмечена различная длительность заболевания, определённая в зависимости от вида патологии от одного месяца до 20 лет. К моменту исследования средняя длительность заболевания составляла: 5 лет -у больных рассеянным склерозом, 10 лет - у пациентов с СЦА, 1,5 года - у больных с' опухолями мозга. Больные с рассеянным склерозом группировались по типу течения заболевания.

Обследование больных включало изучение неврологического и общесоматического статусов, а также различные параклинические методы, применённые для подтверждения диагноза: нейроофтальмологи-ческое и отоневрологическое исследования, краниография, спонцило-графия, зяектромиография, электроэнцефалография, компьютерная томография, магнитнорезонансное исследование мозга и ангиография. Особенность групп больных состояла в том, что на определённом этапе заболевания возникала необходимость проведения дифференциальной диагностики с клинически сходной патологией нервной системы, в том числе: рассеянным склерозом, опухолями мозга, СЦА. Отбор больных производился по полисимптомному и сивдромологическо-му сходству с учётом признака прогредиентности развития заболевания.

Исходя из поставленной цели и задач исследования, нами был применен комплексный подход для изучения МФС ИНК с использованием морфологических, морфометрических, иммунологических методов, системного многофакторного анализа и математического моделирования.

Материалом для лабораторных исследований являлась кровь доноров и больных с неврологическими заболеваниями. У всех обсле.цуе-

-б -

мых определялась лейкограмма периферической крови общепринятым методом. Мазки, к которым предъявлялись высокие требования в отношении толщины, окрашивали по Романовскому-Гимза. В препаратах, окрашенных по Романовскому -Гимза, изучалась формула крови с вычислением процентного соотношения и абсолютных показателей лимфоцитов, моноцитов, нейтрофилов. В этих же препаратах в дальнейшем исследовались иммунокомпегентные клетки.

I. ИССЛЕДОВАНИЕ ЛИМФОЦИТОВ Морфометрия лимфоцитов. Измерение размеров клеток производилось с соблюдением правил случайной выборки. Полученные данные подвергались математической обработке для вычисления стереометрических показателей (объем ядра, объем клетки), их цитоплазмо-ядерных отношений по разработанной программе для микрокалькулятора "БЗ-34". Лимфоциты разделялись на три группы: малые, средние, большие, согласно рекомендациям В.Г.Елисеева и соавт. (1983). Измерения производили винтовым окуляр-микрометром МОВ—1-15 х. Стереометрические данные клеток вычислялись по формуле:

7 = х УСа2 х Ь

где а - малая ось клетки, ядра, Ъ - большая ось клетки, ядра,

V - объем клетки, ядра.

Цитоплазмо-ядерные отношения вычислялись по формуле:

V - V ук 'я

где VK - объем клетки; 4R - объем ядра.

Иммунологические методы исследования. Фракция мононуклеарных клеток выделялась по А.Воуии (1968) с использованием градиента плотности фиколл-верографин. Применялся фиколл фирмы "Pharmacia chemical ", Uppsala , Sweden . В качестве антикоагулянта использовался 2,7$ раствор ЭДТА в 0,15 М растворе хлорида натрия. Для количественного изучения Т-лимфоцитов применялся метод спонтанного розеткообразования (Е-РОЛ) по M.loDdal (1972). Число В-лимфоцитов определялось методом комплементарного розеткообразования (EAC-PQJ1) по N.P.liend.es et al. (1974).

Для глубокой оценки морфофункционального состояния иммунекомпетентных клеток изучалась функциональная активность мембран лимфоцитов с применением теста угнетения Е-розетКообразования лимфоцитов под влиянием моноаминов гистамина, адреналина, серо-

тонина (Cock De V. efc al., 1978, в модификации И.П.Балмасовой, С.В.Макарова, М.В.Угловой, 1990) и теста розеткообраэования Т-лимфоцитов с нагрузкой белками миелина и препаратом дрожжевой РНК - ЭНКАДом. Оценка результатов производилась также по индексу сдвига (ИС) для кавдого исследуемого амина и ЭНКАДа по формуле:

ИС%= % ¿-РОЛ без амина - % Е-РСШ в присутствии амина х цуу^

% S-РОЛ без амина Тест розеткообраэования с нагрузкой белками миелина использовался для определения количества сенсибилизированных к белкам миелина лимфоцитов. Результаты оценивали в процентах лимфоцитов, присоединивших три и более эритроцита. Реакция учитывалась, если в контрольных мазках было не более 1% розеткообразутощих лимфоцитов. Функциональное состояние В-лимфоцитов оценивалось по количеству иммуноглобулинов и уровню антител к белкам миелина в сыворотке крови. В качестве гуморальных факторов иммунитета исследовались иммуноглобулины класса А, И, G в сыворотке крови по G.Manchini at al.(I965). Уровень антител к белк.'м миелина определялся электрооптическим методом, превосходящим по специфичности и экс-прессности другие методы, где используются реакции осадочного типа. Данный метод предусматривает использование устройства для измерения абсорбции на суспензионных частицах (А.И.Сирота, А.с. № 626399, бюллетень № 36, 1978 г.).

2. ИССЛЕДОВАНИЕ МОНОЦИТОВ И НЕЙТРОФИЛОЦИТОВ

В препаратах крови, окрашенных по Романовскоыу-Гимз а, определяли абсолютное и относительное содержание моноцитов, нейтро-филоцитов. С помощью окуляр-микрометра М0В-1-15х проводили ыорфо-ыетрию моноцитов с последующим вычислением стереометрических показателей - объема клетки, объема ядра, цитоплаэмо-ядерных отношений по формулам, применяемым при исследовании лимфоцитов. Морфометриа нейтрофилов проводили с использованием рисовального аппарата PA-I и планиметра.

Цитохимические методы исследования нейтрофилов. Кровь брали из пальца. Гликоген выявлялся ШИК-реакцией, РНК - галлоцианином, пероксидазу бензиднновыы методом, липиды по Sheehan and storey (1947).

Определение фагоцитарной активности нейтрофилов. С целью получения наиболее полного представления о состоянии иммунной сис-

теш изучали фагоцитарный процесс (фагоцитоз). Определялись показатели фагоцитарной активности нейтрофилов (фагоцитарный показатель, фагоцитарное число, показатель завершенности фагоцитоза). Для постановки реакции использовался стандартный набор реактивов НПКО "Реакомплекс".

Цитоспектрофотометрический метод позволяет выявить концентрацию химических веществ в клетках путем измерения их оптической плотности в условных единицах в проходящем монохроматическом свете видимой части спеи^ра. Использовался прибор цитоспектрофото-метр, изготовленный в ЦНИЯ Самарского медицинского института им. Д.И.Ульянова.

Статистическая обработка результатов исследований проводилась с помощью методов вариационной статистики:

1. Определение среднеарифметических значений (X) показателей и их среднеквадратичных отклонений (&).

2. Оценка значимости результатов исследования с заданной вероятностью Р = 0,95 и доцустимой ошибкой измерения € = 0,05.

3. Вычисление стереометрических показателей иммунокомпетент-ных клеток.

4. Проведение корреляционного анализа и системного многофакторного анализа с целью получения математических моделей.

Подробное описание этих методов содержится в работах М.В.Угловой и соавг. (1982, 1985).

Выражаю глубокую благодарность сотрудникам Самарского медицинского института им. Д.И.Ульянова: доктору медицинских наук, профессору И.П.Еалмасовой и кандидату биологических наук, доценту А.И.Сироте за консультативную помощь, оказанную при подготовке диссертации.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Клинический анализ обследованных групп больных подтвердил сходство ряда симптомов, таких как нарушение глубоких видов чувствительности, координаторная дисфункция, спастические парезы, нистагм, психические расстройства, часто встречающиеся как у больных РС в развернутой стадии заболевания, так и у больных СЦА и опухолями мозга. В дебюте РС у большинства больных доминировал спастико-атактический синдром, требующий дифференциальной диагностики с клинически сходными заболеваниями нервной системы.

Особенностьв нейроонкологических больных с субтенториальной локализацией опухоли в дебюте заболевания было развитие коорди-наторных нарушений и пирамидной недостаточности, что также осложняло дифференциальную диагностику с PC при отсутствии гипер-тензионного синдрома.

При обследовании больных с СЦА отмечена мультисистемность поражения мозга, нередко встречались спорадические варианты развития заболевания, что создавало объективные предпосылки для гипердиагностики PC.

В работе предпринята попытка, на основе изучения морфофункцио-нального состояния ИКК, расширить спектр лабораторно-диагности-ческих исследований, которые позволили бы улучшить дифференциальную диагностику PC. С этой целью был использован комплекс методов: морфометрический, иммунологических, морфологических, характеризующих морфологическое и функциональное состояние иммуно-компетентных клеток крови и вполне доступных для использования в клинике.

Ыорфометрические данные популяции малых лимфоцитов показали, что она характеризовалась меньшими показателями объема клетки, объема ядра и ЦЯО в сравнении с аналогичными показателями доноров, больных СЦА и опухолями мозга. Это свидетельствует о выраженном изменении МФС малых лимфоцитов у больных PC, однако высокие значения ЦЯО по данным С.И.Щелкунова (1959), А.А.Клишова (1966) могут определять достаточные компенсаторные возможности клеток. Наблюдавшиеся у больных СЦА минимальные значения показателя ЦЯО лимфоцитов (0,12 + 0,003) в сравнении с донорами и больными PC, свидетельствует о стойком нарушении морфофункцио-нального состояния клеток и их компенсаторно-приспособительных механизмов.

Популяция средних лимфоцитов по стереометрическим данным характеризовалась большей стабильностью, чем другие популяции у обследованных неврологических больных, что явилось предпосылкой для использования юс при математическом моделировании МФС ИКК. Дифференцируемые с PC заболевания нервной системы: оцухоли мозга, СЦА, имели довольно низкие значения ЦЯО средних лимфоцитов (0,1 + 0,005), свидетельствующие о выраженном снижении функциональных возможностей этих клеток. Среди изученных типов течения PC, наилучшими компенсаторными возможностями обладали сред-

- ю -

ние лимфоциты больных с ремит-тирующим течением в стадии обострения, где морфометрические показатели клеток были наиболее близки к донорским без признаков снижения ЦЯО.

Стереометрические данные больших лимфоцитов характеризовались выраженной вариабильностыэ у всех групп неврологических больных, что, вероятно, обусловлено активным образованием незрелых, властных форм клеток в данной популяции и затрудняло оценку полученных результатов.

Наибольшим изменениям были подвержены объемы клеток и ядер лимфоцитов с определенными характеристиками, присущими отдельным группам обследованных. Так, больные СЦА имели статистически значимые наиболее высокие результаты объема клетки и ядра малых лимфоцитов при самых низких значениях ЦЯО всех поцуляций лимфоцитов. Низкие показатели ЦЯО лимфоцитов больных СЦА свидетельствуют о стойком нарушении ШС этих клеток. Возможно, это связано с характерными для указанных больных генетическими дефектами не только нервной системы, но и других регуляторных систем. У больных опухолями мозга отмечались низкие показатели объема клеток и ЦЯО средних лимфоцитов, что можно расценивать как неблагоприятный прогностический признак в восстановлении адекватного иммунного ответа этой поцуляции лимфоцитов, являющейся ведущей в реализации иммунных реакций. У больных РС отмечались определенные изменения МФС ИНК, присущие для этой патологии. Так, в стадии ремиссии при ремигтирующем течении заболевания наблюдались наиболее низкие стереометрические показатели больших лимфоцитов с признаками снижения морфофункциональной активности. В стадии обострения наблюдались Самые высокие среди больных РС стереометрические показатели средних лимфоцитов, также выявлены характерные для этой формы заболевания низкие значения объема клетки и ядра малых лимфоцитов при очень высоком показателе ЦЯО, в 2 раза превышающем аналогичные данные доноров. Больным РС с АИСЛ присущи низкие показатели объема клетки и ядра средних лимфоцитов.

Одним из информативных лабораторных тестов при дифференциальной диагностике РС можно считать индекс соотношения процентного содержания малых лимфоцитов к большим в мазках крови, отражающий процесс депонирования клеток в органах иммуногенеза, который колеблется от 1,8 до 1,9 у больных с СЦА и опухолями мозга

- II -

и превышает 4,0% за счет сдвига лиыфофорыулы у больных РС в зависимости от течения заболевания. На высокую информативность данного показателя ссылаются в своих работах В.И.Гозалго с со-авт. (1987, 1988); И.Д.Левит, Е.А.Крашенинникова (1981) и другие, исследовавшие иммунокомпетентные клетки больных с патологией внутренних органов.

При сравнении групп неврологических больных, наибольшим из-мненияи в комплексе иммунологических данных были подвержены следующие показатели: чувствительность лимфоцитов к биогенным аминам, уровень иммуноглобулинов А, М,в и антител к белкам миелина в сыворотке крови, а также количество сенсибилизированных к белкам миелина лимфоцитов. Эти гесты и легли в основу иынуно-диагностических исследований. Высокий уровень сенсибилизированных к белкам миелина лимфоцитов был характерен для всех групп больных РС и существенно отличался от такового больных с опухолями мозга и СЦА. Наибольшие величины были отмечены при обострении РС и у больных с АИСЛ.

Нами был использован электрооптический способ регистрации антител к белкам миелина, впервые примененный в неврологических исследованиях. В обследуемых группах больных РС выявлены максимально высокие и разные уровни антител к белкам миелина, зарегистрированные по первичной реакции взаимодействия антигена с антителом, сочетавшиеся с активацией других факторов гуморального звена иммунитета: высокие уровни иммуноглобулинов Б , М ; увеличенные показатели Е-АС. Эти признаки отражают интенсивность развития аутоиммунных реакций, характерных для РС.

Выявлен высокий уровень, по отношению к донорам, миелин-гемагглютинирующих лимфоцитов и антител к белкам миелина у больных с СЦА (12,9 ± 1,756; 28,8 ¿4,7 у.е.), опухолями мозга (8,9 + 1,156; 21,5 + 3,6 у.е.). Следует отметить, что аутоиммунные реакции на белки миелнна наблюдались более интенсивными в подгруппе больных с ОГЦА, что ранее не было отражено в научной литературе. Зарегистрированы высокие уровни антител к белкам миелина более 16 у.е. у больных с менингососудистыыи опухолями.

Исследования ыорфофунационального состояния ИКК проводились по оценке функционального состояния мембран лимфоцитов под влиянием биогенных аминов - одних из наиболее универсальных регуляторов цитологического статуса организма.

Показано» что изменение ыорфофункционального состояния иммуно-компетентных клеток, связанное с патологическим процессом в нервной системе, влечет за собой нарушение ыоноаыинергического баланса этих клеток, что может быть использовано для диагностики и поиска коррегируших средств в терапии заболеваний нервной системы. Имеющиеся данные убедительно свидетельствуют о рецзптирова-нии биогенных аминов отдельными субпопуляциями лимфоцитов. Так, рецепторы к гистаиину экспрессируются на дифференцирующихся Т и В-лимфоцитах (Saxon к,et al., 1977; Беег D.J.et al. , 1984; Ro-cklin R.B.et al., 1980) и особенно на Т-супрессорах, цитотокси-ческнх лимфоцитах. Известно, что адреналин действует на Т-клетки

стимулируя реакцию гиперчувствительности замедленного типа (iiircheva J. et al. , 1988). Взаимодействие биогенных аминов с рецепторами клеток приводит к накоплению циклических нукяеотидов, изменению пролиферативной активности и процесса кэппинга-латераль-ной подвижности отдельных молекул клеточной мембраны (ВиЪшап В.Т. et al, , 1981; Балаж А., 1987 и другие).

Количественные показатели чувствительности лимфоцитов к биогенным аминам у больных PC были вариабильны. Следует отметить статистически значимый наиболее низкий показатель уровня адрено-чувствитзльньпс лимфоцитов в крови у больных PC в стадии обострения (29,4 + 5,0%). Определялась умеренная отрицательная корреляционная связь мевду Ис адреналина и средними лимфоцитами (г = 0,65 н - 0,38) при различном течении PC предполагающая повышение активности ь количества рецепторов к адреналину этих ИКК.

Нарушения обмена серотонина, гистаиина (Markianos ы.,Sfagoa S. , 1988; Старостенко Л.И., 1972; Сааков Б.А. и соавт., 1977; Ефремова Е.§., 1986 и др.) определяются не только в ткани ыозга, крови при декиелинизирущей патологии, но и у ИКК, о чем свидетельствуют выявленные изменения функции аминорегуляторных популяций лимфоцитов и устойчивые корреляционные взаимосвязи между показателями аминсчувствительности к ыорфоиетркческкмн параметрами клеток, характеризующими в первую очередь дисфункцию мекбра; этих клеток при разякчнон течении PC.

Изменения чувствительности лимфоцитов к биогенные сминай у больных PC позволили выделить группу больных с вминоинвертиро-чанным состоянием лвафоцнтов и определенным клгнико-лабораторныу. снмптоиокеглиексои. Ешо показано, что признак аминоинвертирован

ности носил транэиторный характер, а по совокупности морфологических, морфометрических, иммунологических показателей ИКК этих больных занимают промежуточное положение мевду аналогичными результатами ИКК других групп больных РС. Полагаем, что нарушение аминорегуляторных свойств ИКК у больных РС является качественно особьм состоянием, определяющим динамику развития заболевания.

Изменение МФС аданочувствительньгх лимфоцитов отмечено также и у больных с опухолями мозга и СЦА. У больных с опухолями мозга наблюдалось наиболее низкое содержание гистаминчувствительных лимфоцитов. Количество серотонинчувствительных лимфоцитов было наибольшим, что отразилось на показателях индекса сдвига биогенных аминов. Выявленные изменения чувствительности лимфоцитов к гистамину, серотонину могут объясняться нарушением соотношения и функциональной активности субпопуляций Т-лимфоцитов-супрессоров, цитотоксических лимфоцитов, имеющими место при опухолях мозга (С. йе Мссо , 1989 ;С.Ноя а! еЪ а1, 1987;Н.Соа№аа , 1984 и др.).

У больных СЦА отмечался наименьший ИС гистаыина при нормальном содержании гисгаминчувствительных лимфоцитов в периферической крови. Высокий показатель ИС серотонина у этих больных сочетался с признаками диссоциации данных по уровню серотонинчувствитель-ьих лимфоцитов в крови (41,2 + 5,5% и 0,82 + 0,08 х Ю9/л), констатирующий наруиение МФС этих клеток. Также отмечена умеренная корреляционная связь мевду показателями аминочувствительности лимфоцитов к адреналину, гнетамину и объемом клеток малых лимфоцитов (г = 0,33 - 0,4), свидетельствующих о влиянии указанных биогенных аминов на процесс дифференцнровки малых лимфоцитов у больных с СЦА.

Таким образом, по изменению МФС аминорегуляторных популяций лимфоцитов как у различных групп больных РС, так и дифференцируемых с ним заболеваний нервной системы создаются предпосылки для реаения вопроса о роли иммунопатологического процесса в развитии этих заболеваний и идентификации их.

Нагрузочный тест, с энкадом, по даннш наших наблюдений дополняет и более полно раскрывает функциональные возможности клеток. Явление прироста Е-РОЛ после инкубации с энкадом у больных РС в стации обострения может быть связано с известными фактами устранения модификации мембраны Т-клеток, вызванной действием блокирующих субстанций, накошенных в крови при данном заболевании.

- 14 -

Таким образом, как показали наши исследования, для каждой группы больных были характерны определенные изменения иммунологических параметров. Так, у больных РС в стадии ремиссии кроме наименьших значений показателя чувствительности лимфоцитов к энкаду,'определялся более чем в 3 раза сниженный по отношению к норме ИС адреналина. В стадии обострения ИС адреналина, наоборот был наиболее высоким среди всех групп больных с максимальными значениями уровня антител :: белкам миелина - 42,1 + 8,? у.е. Прогредиентное течение РС характеризовалось активацией отдельных гуморальных факторов иммунитета, - высокими значениями иммуноглобулинов всех классов. Для больных РС с АИСЛ присущи довольно большие показатели миелингеммагглютинирующих лимфоцитов и отрицательные ИС биогенных аминов. У больных СЦА отмечался наибольший процент гистаминчувствительных лимфоцитов. Вольные с опухолями мозга имели наиболее высокий уровень ИС гистамина при низких показателях ИС серотонина и миелингемагглютинирующих лимфоцитов.

При исследовании моноцитов выявлены разнообразные показатели МФС данных клеток, свидетельствующие об активации их (увеличение или уменьшение объема ядра, клетки), изменение количественных данных содержания в крови не только между группами неврологических больных, но и у пациентов с РС различного типа течения заболевания. Это дает основание использовать полученные результаты в клинической диагностике.

Больные РС с ремиттирующим течением, с АИСЛ и СЦА имели наиболее низкое содержание моноцитов в крови. В целом у больных РС наблюдались признаки моноцитопении. При морфометрическом исследовании моноцитов выявлены глубокие изменения МФС указанных ИНК у больных РС в стадии обострения ремиттирующего течения, с АИСЛ, с прогредиентным типом течения, а также с опухолями мозга и СЦА. Достаточные компенсаторные возможности моноцитов отмечались у больных РС в стадии ремиссии, что подтверждается наиболее высокими показателями объема клетки и ядра, превышающими донорские в 1,5 раза.

Наряду с достаточными компенсаторными возможностями моноцитов у больных РС в стадии ремиссии отмечались близкие к донорским значения гистохимических показателей нейтрофнлов и фагоцитоза, что в целом характеризует моноцитарно-фагоцитарную систему У этой

группы больных как стабильно функционирующую с показателями МФС этой системы. По совокупности гистохимических, морфометрических показателей и данных, характеризующих фагоцитарную активность нейтрофилов можно отметить', что морфофункциональная активность этих ИКК наиболее высока у больных РС в стадии обострения заболевания. Низкие показатели ЦЯО нейтрофилов у больных с прогре-диентным течением РС свидетельствует о выраженных изменениях МФС этих клеток.

Несмотря на глубокие изменения МФС моноцитов, выявленные у больных с одухолями мозга, нейтрофил как система у этих больных отличается от других групп обследованных самыми высокими морфо-метрическими, энзиматическими показателями: гликоген - 2,59 + + 0,04, липиды - 2,14 + 0,04 с фагоцитарной активностью, приближающейся к результатам доноров. Это свидетельствует о наиболее высокой морфофункциональной активности клеток и может быть использовано для диагностики нейроонкологических больных. Для нейтрофилов больных (ДА, как показали исследования, также как и для моноцитов характерны глубокие изменения МФС этих клеток, выражающиеся в низких ЦЯО, энзиматических нарушениях при достаточно высоких показателях фагоцитарной активности.

Системный многофакторный анализ МФС нейтрофильных лейкоцитов показал низкие весовые коэффициенты полученных гистохимических, морфометрических, имцунологических результатов, что свидетельствует о меньпей значимости этого звена моноцитарно-фагоцитар-ной системы в реализации иммунопатологического процесса у обследованных групп больных. Это исключало необходимость разработки математической модели МФС этих ИКК.

Многочисленные морфологические, морфометрические и иммунологические показатели, характеризующие МФС лимфоцитов нуждались в интеграции, определении их наибольшей значимости, презентирую-щих лимфоцит и моноцит как систему. С этой целью был применен системный многофакторный анализ.

Наибольшее отклонение интегрального показателя от нормы, характеризующего степень изменения МФС лимфоцитов отмечено у больных РС с АИСЛ. В меньшей степени интегральный показатель МФС лимфоцитов отклонен у больных РС с ремиттирующим течением, а самое высокое его значение наблюдалось у больных с прогредиентным течением РС. Колебание значения интегрального показателя от -

0,12 до - 0,18 у больных РС в зависимости от типа течения свидетельствует о выраженных изменениях и стойкости иммунопатологического процесса у этих больных. В то же время при СЦА и опухолях мозга интегральный показатель МФС лимфоцитов значительно отличался и был отклонен в меньшей степени, чем у больных РС, что позволяет предполагать иной характер дисфункции иммунного статуса при этих заболеваниях нервной системы и использовать полученную информацию в дифференциальной диагностике РС.

Оценка .МФС лимфоцитов с помощью СМА по коэффициентам влияния позволила выявить наиболее значимые морфометрические и иммунологические лабораторные тесты; объем клетки и ядра средних лимфоцитов, индексы сдвига гистамина, адреналина, энкада. По результатам этих данных вычислен интегральный показатель МФС лимфоцитов у различных групп неврологических больных для практического использования. Интегральные показатели МФС лимфоцитов, используемые для вычисления математических моделей МФС этих клеток для практического применения, оказались одинаковыми по направленности изменений с интегральными значениями их аналогов, определенных по большой выборке показателей. Это позволяет использовать полученные данные в виде математических моделей при дифференциальной диагностике РС.

Вычисленные интегральные показатели, характеризующие степень изменения МФС моноцитов, оказались не одинаковыми как мекду группами больных РС, так и у больных с СЦА, опухолями мозга. Это свидетельствует о различных морфологических и функциональных изменениях этих клеток, что необходимо использовать для дифференциальной диагностики РС. Были выявлены наиболее значимые показатели по коэффициентам влияния, характеризующие моноцит как систему: объем клетки, ядра, абсолютное количество в периферической крови. По результатам этих данных вычислены интегральные показатели МФС моноцитов у обследованных групп неврологических больных для практического цэименения.

Следует отметить, что совмещенные значения интегральных показателей у больных с прогредиентным течением РС и нейроонколо-гическими больными могут свидетельствовать о сходстве морфо-функциональных свойств моноцитов у этих больных. Отмеченные различия интегральных показателей МФС моноцитов позволяют использовать математические модели для дифференциальной диагностики РС в практике.

Нами разработаны по математическим моделям диагностические матрицы МФС лимфоцитов и моноцитов при рассеянном склерозе, опухолях мозга, СЦА (рисЛ, 2). Проецирование значения интегрального показателя, вычисленного по программе для микро-ЭВМ у конкретного больного,на поле матриц поможет клиницисту в установлении диагноза.

Разраббтанные на основе СМА математические модели МФС ИКК позволили оптимизировать процесс дифференциальной диагностики РС и создали предпосылки для нового подхода к решению проблем диагностики с позиций изучения иммунного гомеостаза как системы, отражающей защитные и компенсаторные возможности как всего организма, так и его тканей, являющихся точкой приложения действия патологического процесса.

ВЫВОДЫ

1. Морфометрические исследования лимфоцитов позволили дифференцированно оценить ьюрфофункциональное состояние малых, средних, больших лимфоцитов и выявить различную степень выраженности этих изменений у больных РС, опухолями мозга, спикзцеребеллярны-ми атаксиями. Наиболее значимые изменения ыорфофункционального состояния как системы отмечались у средних лимфоцитов всех групп неврологических больных.

2. Индекс соотношения процента малых лимфоцитов к большим является информативны?* диагностическим критерием, отражающим изменение иммунореактивноети. Для больных РС он составляет более 4,0$, а при опухолях мозга и СЦА равен 1,8 - 1,95?.

3. Комплексное клиннко-нммунологнческое исследование показало, что наибольшее диагностическое значение в обследованных группах больных имеют такие показатели,, как чувствительность лимфоцитов к биогенным аминам и энкаду, уровень иммуноглобулинов А, М, в , и антител к белкам миелина в сыворотке крови, а также количество сенсибилизированных к белкам миелина лимфоцитов, позволяющих в частности, выявить выраженность аутоиммунных реакций не только при различных типах течения РС, но и у больных с опухолями мозга, СЦА.

4. При исследовании свойств мембран лимфоцитов в зависимости от их чувствительности к биогенным аминам, била выделена группа больных РС с транзиторнын аыиноинвертированнчи состоянием лимфоцитов, характеризующимся клннико-лабораторныа снмптомокомплек-

ЕЗ -Опухши ШС И -СЦА

В -РС.ПГОГРШЕНТНОЕ ТЕ^СНЕ 0 -РС.РЕЖТ.ТЕЧЕНЕ. СТ.ОЬООТЕНКЯ В -РС.АЮ Н -РС.РЕЖТ.ТЕЧНе. Ст.РЕМИСОИ

Хм

-а.00 -0.02 -0.04 -0.06 -0.08 -0.10 -0.12 -0.14 -0.16

Рис.1. Матрица интегральных показателей для оценки морфофункционапьного состояния лимфоцитов больных

В -СЦА В -РС.Протедалнсе течение

К -РС.Ренит.течеше. ст.обострен« И -Огнями ЦНС 0 -РС.АИС/1 3 -РС.РЕЖТ.течеяе. СТ.ремюз«

Ряс.2. Матрица интегральных показателей для оценки морфофункционального состояния моноцитов больных

сом, включающим парадоксальную реакцию на гистамин, адреналин, серотонин с проявлением определенных неврологических симптомов. Аминоинвертированное состояние лимфоцитов является качественно особым состоянием, связанным с динамикой развития заболевания.

5. Выявлена взаимосвязь морфометрических показателей лимфоцитов и ряда иммунологических параметров. Наиболее высокие корреляционные связи ( г = 0,65 и -0,38) наблюдались между морфо-метрическиыи данными средних лимфоцитов и индексами сдвигов биогенных аминов, в частности адреналина, гистамина у больных с различным типом течения РС, что указывает на дисфункцию мембран лимфоцитов у больных этой клинической группы.

6. Результаты комплексного изучения морфометрических (объем клетки и ядра, ЦЯО), гистохимических, количественных показателей моноцитарно-фагоцитарного звена иммунитета указывают на наличие глубоких изменений морфофункционального состояния этих клеток крови как у больных РС с различным типом течения заболевания, так и у больных (ДА, опухолями мозга, что свидетельствует о существенно различном характере участия этих клеток в реализации иммунологического процесса при заболевании нервной системы.

7. При проведении системного многофакторного анализа выявлены высокоинформативные показатели, отражающие морфофункциональное состояние лимфоцитов (объем клетки и ядра средних лимфоцитов, индексы сдвига гистамина, адреналина, энкада) и моноцитов (объем клетки и ядра, абсолютное количество в периферической крови).

На основании полученных данных вычислены интегральные показатели ыорфофункционального состояния иммунокомпетентных клеток крови, позволяющие повысить точность диагностики РС, оптимизировать дифференциально-диагностический процесс и в перспективе более эффективно осуществлять контроль за проводимым лечением.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. С целью повышения эффективности диагностики РС с опухолями мозга, СЦА и определения типа течения РС целесообразно вычисление интегральных показателей МФС иммунокомпетентных клеток крови индивидуально у больного с использованием разработанной программы для микро-ЭВМ и матриц математических моделей МФС ИКК.

2. При вычислении интегральных показателей морфофункционального состояния лимфоцитов наиболее информативно определение

объема клетки и ядра среднего лимфоцита, индексов сдвига гиста-мина, адреналина, ЭНКАДА; а для МФС моноцита: объем клетки и ядра, абсолютное количество в периферической крови. Исследование морфометрических и иммунологических данных целесообразно проводить в динамике.

3. Рекомендуется использовать новый для неврологической практики экспрессный высокочувствительный электрооптический метод для регистрации в биологических жидкостях уровня антител к белкам миелина.

4. В настоящее время у больных рассеянным склерозом, спино-церебеллярными атаксиями в диагностике аутоиммунного процесса и оценке динамики его развития возможно применение следующих высокочувствительных лабораторных тестов: определение уровня антител к белкам миелина в сыворотке крови на ЭОП и количества сенсибилизированных к белкам миелина лимфоцитов в тесте розеткообразова-ния.

5. В качестве иммунодиагностического препарата может быть использован препарат ЭНКАД.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО МАТЕРИАЛАМ ДИССЕРТАЦИИ

1. Макаров C.B. Некоторые экспериментальные предпосылки патогенетической терапии рассеянного склероза: обзор литературы // Морфогенез, реактивность, регенерация органов и тканей в норме

и эксперименте.- Куйбышев, 1988. - С.145-148. Деп. в ВИНИТИ 03.11.88, » 7881 - В88.

2. Макаров C.B. Гносеологические аспекты диагностики рассеянного склероза // Методологические проблемы современного -научного знания: Тез.докл. межвуз. науч.конф. 15-16 мая 1990 г. - Куйбышев, 1990. - С.II5-II6.

3. Макаров C.B., Балмасова И.П. Аминочувствительность лимфоцитов периферической крови у больных рассеянным склерозом // Сб. науч.тр. по материалам итоговой годичной конференции ЦНИЛ. -Куйбышев, 1990. - С.21-24. - Деп. в ВНИИМИ 01.09.90, » 20702.

4. Макаров C.B. Клиническая характеристика и реакция иммуно-компетентных клеток к биогенным аминам в диагностике демиелини-зирующих заболеваний нервной системы // Дойниковские чтения: Тез.докл. науч. конф. - Л., 1991. - С.21-22.

5. Макаров C.B., Сирота А.И. Факторы гуморального иммунитета при демиелинизирующем и недемиелинизирующих заболеваниях нервной системы // Сб.науч.тр. по материалам итоговой годичной конф. ЦНИЛ. - Куйбышев, 1991. - С. 162-166. - Деп. в ВНИШИ 07.08.91,

* 2I67I.

6. Богданова Л.Л., Макаров. C.B. Результаты клинико-электро-миографического исследования больных рассеянным склерозом // Дой никовские чтения: Тез. докл. науч.конф. - Л., 1991. - C.I2.

7. Макаров C.B., Андреянова Л.В., Токмаков И.П., Богданова

Л.П. Течение компенсаторно-приспособительного процесса в нейтро-фильных лейкоцитах у больных с различными вариантами рассеянного склероза // Компенсаторно-приспособительные механизмы внутренних органов и головного мозга в норме, патологии и эксперименте: Матер, науч.практ. конф. 19-20 декабря 1991 г. - Тюмень, 1991,-С.124-126.

8. Макаров C.B., Углова М.В. Морфологическая характеристика лимфоцитов в дифференциальной диагностике некоторых неврологических заболеваний // Сб. науч.работ / Матер. ХХ1У итоговой науч конф. профессорско-преподавательского состава ВМФ при Куйбышевском мед.ин-те им. Д.И.Ульянова. - 1991. - Вып.Х1Х. - C.I65-I69.

9. Макаров C.B. Клинические и иммунологические особенности сшноцеребедлярных дегенераций // Нейроыоторные днскинезии / Сб. науч.тр., Самар. мед.ин-т им. Д.И.Ульянова. - 1991. - С.59-63.

10. Макаров C.B., Липина Л.Н., Вологдина H.H., Шабанова М.Е. Применение препарата ЭНКАД в терапии демиелинизирующего процесса // Клинич. нейроимцунология на пороге XXI века: Матер, рабочего совещания 27-29 мая 1992 г. - СПб., 1992. - С.43-44.

11. Балыасова И.П., Макаров C.B., Реиетникова В.П., Танаева Н.И. Большие гранулярные лимфоциты при рассеянном склерозе // Клинич, нейроиммунология на пороге XXI века: Матер, рабочего совещания 27-29 мая 1992 г. - СПб., 1992. - С.3-9.

•12. Махаров C.B., Углова М.В. Математическое моделирование морфофункционального состояния тшуноконпетентных клеток крови в дифференциальной диагностике рассеянного склероза // Клинич. нейроиммунология ж пороге XXI веха: Матер, рабочего совещания 27-29 мая 1992 г. - СПб., 1992. - С.44-47.

13. Макаров C.B., Углова М.В. Изменения показателей морфомет-рии агрещудоцитов у больных с опухолями центральной нервной

системы // Сб. науч.работ / Матер. ХХУ итоговой науч.конф. профессорско-преподавательского состава ВМФ при Самар. мед.ин-те им. Д.И.Ульянова. - 1992. - Вып. XX. - С.230-232.

14. Скупченко В.В., Макаров C.B., Ергунова Г.А., Макарова И.В. Аминоинвертированное состояние в течении рассеянного склероза

// Новые технологии в неврологии и нейрохирургии: Тез. докл. I Самарской конференции невропатологов и нейрохирургов. - Самара, 199.2. - С Л 55-161.

15. Макаров C.B., Сирота А.И., Макарова И.В. Электрооптический метод.регистрации антител к белкам миелина у неврологических больных // Клинич. нейроиммунологмя на пороге XXI века: Материалы II рабочего совещания с мевдународнш участием 27-29 мая 1993 г. - СПб., 1993. - С.36-41.

16. Макаров C.B., Снупченко В.В. Феномен изменения аминочув-ствительности икыунохоыпетентных клеток крови при различных невр< логических заболеваниях // Там se. - С. 41-46.

17. tiakarov S.V. Reflexotherapy in complex treatneat of patienta TSith multiple acleroois in oase of inmunodeficiency // Acupunbtur Theorie und Praxis. - 199Г. - Ii 19. - P.I4-I.

Рационализаторские предложения

1. Прогнозирование эффективности иммунотерапии препаратом ЭНКАД по чувствительности к нему лимфоцитов периферической крови больных рассеянным энцефаломиелитом /Макаров C.B., Шабанова М.Е., Липина Л.Н., Юшкова З.А.. Удостоверение № 87 выдано Куйбышевским медицинским институтом им.Д.И.Ульянова (1990).

2. Прогнозирование эффективности иммунотерапии спленином по чувствительности к нему лимфоцитов крови / Макаров C.B., Липина Л.Н., Ергунова Г.А. Удостоверение К 86 выдано Куйбышевским медицинским институтом иы. Д.И.Ульянова (1989).

3. Электрооптический способ определения антител к белкам миелина в сыворотке крови / Макаров C.B., Сирота А.И., Ергунова Г.А. Удостоверение № 112 выдано Куйбышевским медицинским институтом им.Д.И.Ульянова (1990).

4. Метод выявления сенсибилизированных к миелину лимфоцитов в реакции розеткообраэования / Макаров C.B. Удостоверение № III вьщано Куйбшевским медицинским институтом им.Д.И.Ульянова (1990).