Автореферат и диссертация по медицине (14.01.21) на тему:Морфофункциональная характеристика периферического звена эритрона больных хроническими неспецифическими заболеванияи легких в динамике лечения

На правах рукописи

ЦЫБЖИТОВА ЭРЖЕНА БАИРОВ11А

МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ПЕРИФЕРИЧЕСКОГО ЗВЕНА ЭРИТРОНА БОЛЬНЫХ ХРОНИЧЕСКИМИ НЕСПЕЦИФИЧЕСКИМИ ЗАБОЛЕВАНИЯМИ ЛЕГКИХ В ДИНАМИКЕ

ЛЕЧЕНИЯ

14.01.21.-ГЕМАТОЛОГИЯ И ПЕРЕЛИВАНИЕ КРОВИ

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

^ 3 МАЙ 2010

Москва, 2010

004601176

Работа выполнена в Учреждении Российской Академии Медицинских Наук Гематологический Научный Центр РАМН, в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Российский государственный медицинский университет им. Н.И.Пирогова» Министерства здравоохранения и социального развития РФ

Научные руководители: Доктор медицинских наук Доктор медицинских наук, профессор

Официальные оппоненты:

Доктор медицинских наук Доктор медицинских наук, профессор

Сарычева Тереза Георгиевна Александров Олег Васильевич

Меликян Анаит Левоновна Василенко Ирина Анатольевна

Ведущее учреждение:

Федеральное государственное учреждение «Федеральный научно-клинически центр детской гематологии, онкологии и иммунологии» Министерств здравоохранения и социального развития РФ

Защита состоится «¡^.^ » 2010 года в /^/часов на заседание

Диссертационного Совета Д 001.042.01. при Учреждении Российской Академт Медицинских Наук Гематологический Научный Центр РАМН по адресу: 125167 г.Москва, Новый Зыковский проезд, д.4.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГНЦ РАМН

Автореферат разослан « »_2010 года

Ученый секретарь Диссертационного совета, кандидат медицинских наук

Е.Е. Зыбунова

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы:

Большое значение в развитии и прогрессировании хронических заболеваний легких придается структурно-функциональному состоянию эритроцитов. В норме эритроциты человека - безъядерные клетки с высоким содержанием дыхательного пигмента, гемоглобина, основной функцией которых является снабжение тканей кислородом и удаление продуктов метаболизма из органов и межклеточных пространств (Воробьев А.И.,2002). Основная масса эритроцитов в периферической крови представлена дискоцитами (около 90%). Благодаря дискоидной двояковогнутой форме они могут проходить через узкие капилляры (диаметром не более 4-5 мкм), проникать через стенки синусоидов селезенки, возвращаясь к исходным параметрам.

В настоящее время хронические болезни органов дыхания, в первую очередь хроническая обструктивная болезнь легких (ХОБЛ) и бронхиальная астма (БА), являются одними из наиболее распространенных во всем мире (GOLD, 2007; GINA, 2007) и одной из важных социально - медицинских проблем, что связано с неуклонным ростом заболеваемости и смертности от них, поскольку они ведут к нарушению основной функциональной роли органов дыхания - расстройству газообмена и развитию дыхательной недостаточности (А.Г. Чучалин, 2003, GOLD, 2007).

Среди ключевых патофизиологических факторов, определяющих особенности течения ХОБЛ и БА, важное место занимают изменения эритрона, являющиеся физиологическими механизмами адаптации к гипоксии. Компенсаторный эритроцитоз, полицитемия, повышение вязкости крови на фоне расстройств газообмена часто сочетается со структурно-функциональными изменениями эритроцитов. Уменьшается количество нормальных дискоцитов, преобладают дегенеративные формы эритроцитов с высоким содержанием холестерина на мембране, снижается их деформируемость, увеличивается агрегационная способность (О.Н.Ветчинникова, Г.В.Плаксина, 2002; A.C. Салихова, 2002; Ж.Е. Савицкая, 2000). И, как следствие, нарушается кислород-транспортная функция крови, в результате чего еще более возрастает гипоксия.

За последние годы наряду с разработкой и широким внедрением в клиническую практику новых эффективных медикаментозных препаратов, применяемых для лечения легочной патологии, в комплексном лечении получили признание немедикаментозные методы. Среди разнообразных физических средств эффективным действием обладает лазерная терапия. Квантовая энергия благотворно влияет на микроциркуляцию: ее улучшение обусловлено вазодилатацией и изменением реологических свойств крови за счет снижения ее вязкости, а также увеличением деформируемости эритроцитов и снижением их агрегационной способности (C.B. Москвин, 2003; Н.Н Кипншдзе и др., 1993; О.Н. Ветчинникова, Г.В.Плаксина, 2002;). По многочисленным экспериментальным данным показано, что гелий - неоновый лазер (ГНЛ) оказывает неоднозначное действие на эритроциты периферической крови. В целом лазерное облучение крови вызывает выраженный положительный терапевтический эффект на клиническое течение заболевания. Имеются данные о стимулирующем влиянии лазерного излучения на клеточное и гуморальное звено иммунитета, противовоспалительном действии, влиянии на процессы перскисного окисления липидов, антигипоксическом и детоксикационном эффектах при хронических заболеваниях легких (Н.Ф. Гамалея и др., 1991; C.B. Москвин, 2003; Е.В. Демичева, 1992; Н.В. Леонтьева, 2000). В доступной нам литературе не встретилось работ, посвященных оценке морфофункциональных особенностей периферического звена эритрона под воздействием лазерного облучения крови при хронических заболеваниях легких. Все вышеизложенное определяет актуальность проблемы и позволяет обозначить цель и задачи настоящего исследования. Цель исследования:

Целью данной работы является анализ и оценка морфофункционального состояния периферического звена эритрона у больных хроническими неспецифическими заболеваниями легких в динамике комплексного лечения. Задачи исследования:

1. Изучить эритроцитарные параметры у больных хроническими неспецифическими заболеваниями легких в динамике комплексного лечения

2. Дать морфологическую характеристику эритроцитов с помощью компьютерной морфометрии у больных хроническими неспецифическими заболеваниями легких в динамике комплексного лечения

3. Охарактеризовать изменения количественного и качественного состава ретикулоцитов у больных хроническими неспсцифическими заболеваниями легких в динамике комплексного лечения

4. Исследовать функциональное состояние мембраны эритроцитов методом цитоэлектрофореза у больных хроническими неспецифическими заболеваниями легких в динамике комплексного лечения

5. Провести сравнительное изучение морфологического и функционального состояния эритроцитов у больных хроническими неспецифическими заболеваниями легких в процессе комплексного лечения с применением и без применения внутривенного лазерного облучения крови

6. Оценить клиническое состояние больных хроническими неспецифическими заболеваниями легких в динамике комплексного лечения.

Научная новизна работы:

В работе дана комплексная морфофункциональная характеристика периферическому звену эритрона у больных хроническими неспецифическими заболеваниями легких в динамике медикаментозного лечения с применением и без применения внутривенного лазерного облучения крови. Оценен поверхностный заряд клеток методом цитоэлектрофореза, определены морфологические особенности эритроцитов на основании компьютерной морфометрии и выявлены косвенные признаки повышенной регенераторной способности костного мозга у этих больных.

Практическая значимость работы:

Компьютерная морфометрия и ретикулоцитометрия позволили оценить степень изменения морфологии эритроцитов периферической крови больных хронической обструктивной болезнью легких и бронхиальной астмой в динамике комплексного лечения.

Метод цитоэлектрофореза позволил оценить степень нарушения функционального состояния эритроцитов у больных хронической обструктивной болезнью легких и бронхиальной астмой и определить адекватность проведенного лечения.

Установленный факт улучшения показателей электрофоретической подвижности эритроцитов у больных хронической обструктивной болезнью легких и бронхиальной астмой может служить маркером эффективности эритропоэза.

Результаты настоящего исследования способствуют углублению имеющихся представлений о состоянии периферического звена эритрона у больных хронической обструктивной болезнью легких и бронхиальной астмой.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Хронические неспецифические заболевания легких характеризуются морфологическими и функциональными изменениями периферического звена эритрона

2. Изменение морфологических показателей эритроцитов больных хронической обструктивной болезнью легких и бронхиальной астмой сопровождается снижением их отрицательного поверхностного заряда

3. Снижение электрофоретической подвижности эритроцитов носит транзиторный характер, что свидетельствует о восстановлении полноценного функционирования мембраны эритроцитов после комплексного лечения

4. Внутривенное лазерное облучение крови вызывает положительные сдвиги со стороны эритроцитарных показателей у больных хронической обструктивной болезнью легких и бронхиальной астмой

Публикации

По теме диссертации опубликовано 7 печатных работ.

Апробация работы

Апробация диссертации состоялась на заседании проблемной комиссии Учреждения Российской Академии Медицинских Наук Гематологический научный центр «Гемопоэз, молекулярная биология, биотехнология, иммуногематология; гемобластозы и депрессии кроветворения» 01.03.2010 г.

Объем и структура диссертации

Диссертация изложена на 121 страницах машинописного текста и состоит из следующих разделов: введение, обзор литературы, материал и методы, результаты собственных исследований, заключение, выводы и указатель литературы, включающий 112 отечественных и 38 зарубежных источника. Диссертация содержит 33 таблицы и 10 рисунков.

СОДЕРЖАНИЕ ДИССЕРТАЦИИ Материалы и методы исследования

В основу работы положены результаты клинико-лабораторного исследования 88 пациентов в возрасте от 22 до 80 лет. Среди них 45 пациентов страдали бронхиальной астмой (БА), 43 пациента - хронической обструкгивной болезнью легких (ХОБЛ). Работа проводилась в лаборатории гемоцитологии ГНЦ РАМН (заведующий лабораторией - профессор, д.м.н. В.М. Погорелов), на кафедре внутренних болезней МБФ ГУ ВПО РГМУ (заведующий кафедрой - профессор, д.м.н. О.В. Александров), в Центральной клинической больнице РАН (главный врач - профессор Н.Г. Гончаров).

Клиническая диагностика заболеваний и определение тяжести течения осуществлялись на основании клинических и лабораторно-инструментальных данных, а также на основе международных программ GOLD (2003г.) и GINA (2002г.), согласно с которыми в нашем исследовании преобладали больные со средней степенью тяжести заболеваний. Все обследуемые больные были разделены на 2 группы в зависимости от проводимой терапии. В первую (I) группу были включены 42 пациента, получавших только традиционную медикаментозную терапию. Во вторую группу (II) - 46 пациентов, которым проводилось комплексное лечение (традиционная медикаментозная терапия с включением внутривенного лазерного облучения крови). Распределение больных в группах представлено в таблице 1.

Таблица 1. Распределение больных в группах

Группы ХОБЛ абс.ч.(%) БА абс.ч.(%) Всего абе.ч.(%)

Первая 22(51) 20 (44) 42 (48)

Вторая 21 (49) 25 (56) 46 (52)

Всего 43 (49) 45 (51) 88 (100)

Медикаментозная базисная терапия проводилась у всех больных ХОБЛ и БА в соответствии со стандартами лечения и включала в себя: Ь-агонисты короткого и длительного действия, комбинированные бронхолитики, метилксантины. Все больные получали отхаркивающие средства. У больных БА применялись ингаляционные глюкокортикостероиды. Также в терапии больных БА применялись нестероидные противовоспалительные средства. В 14 (33%) случаях для лечения

5

больных с тяжелым течением ХОБЛ, у которых применение других способов лечения оказалось неэффективным, были назначены ингаляционные глюкокортикостероиды. При обострении воспалительного процесса в бронхиальном дереве проводилось также антибактериальное лечение. Наиболее часто применялись аминопенициллины, цефалоспорины, макролиды. Подбор антибактериальных средств осуществлялся с учетом клинических, бактериологических данных. Продолжительность антибактериальной терапии колебалась от 7 до 14 дней.

Внутривенное лазерное облучение крови (BJIOK) производили низкоэнергетическим гелий-неоновым лазером через одноразовые внутривенные световоды с применением аппарата «AJIOK-1» с мощностью излучения 1-1,5 мВТ и длиной волны 630 нм. Световод вводили путем пункции в одну из периферических вен (локтевую) через просвет инъекционной иглы на глубину 5-10 см. Курс состоял из 10 процедур, проводимых ежедневно, продолжительностью воздействия 30 минут. Забор крови осуществлялся из локтевой вены с противоположной стороны для определения морфофункциональных показателей эритроцитов у больных первой группы до и после двух недель медикаментозной терапии; у больных второй группы -до, после 5-го и 10-го сеансов лазеротерапии.

Помимо общепринятых лабораторных и инструментальных методов всем больным до и после лечения проводили специальные методы исследования:

1. определение эритроцитарных параметров на гематологическом анализаторе МЕК 8222 J/K фирмы «ЭКО-МЕД-СМ». Материалом для исследования являлась периферическая кровь, взятая из вены с использованием в качестве консерванта ЭДТА - «МОНОВЕТ» (SARSTEDT).

2. проведение компьютерной морфометрии на автоматизированной установке, разработанной в лаборатории гемоцитологии Гематологического научного центра РАМН для определения «формулы» эритроцитов, т.е. процентного содержания клеток разных типов и их геометрических параметров. Анализ эритроцитов при компьютерной морфометрии проводился на сухих неокрашенных мазках периферической крови.

3. морфология ретикулоцитов с использованием светового микроскопа для определения активности эритрона и его способности к регенерации, «формулы» ретикулоцитов (процентное содержание клеток разных

классов). Окраска препарата проводилась бриллиантовым крезиловым синим фирмы ДИАХИМ (Санкт-Петербург).

4. метод цитоэлектрофореза в постоянном электрическом поле с определением электрофоретической подвижности эритроцитов для оценки функционального состояния мембраны клетки. Материалом для исследования ЭФП служила периферическая кровь, взятая из вены больного на стабилизаторе (3,8% раствор цитрата натрия) в соотношении растворов 1:4 (1 мл консерванта:4 мл крови).

Статистический анализ проводился с использованием программы 81а11з11са 6,0. Применялись методы описательной статистики, непараметрические методы. Статистическая значимость показателей была определена как р < 0,05.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

В работе представлены результаты сравнительного анализа количественного и качественного состава периферического звена эритрона больных хроническими неспецифическими заболеваниями легких до и после медикаментозного лечения с применением и без применения внутривенного лазерного облучения крови.

Морфофункциональная характеристика периферического звена эритрона больных хроническими неспецифическими заболеваниями легких до лечения.

Сравнительный анализ эритроцитарных параметров показал, что до лечения у больных ХОБЛ и БА количество эритроцитов, гемоглобина, среднего содержания гемоглобина в эритроците (МСН) достоверно не различались с показателями здоровых людей, однако наблюдалась тенденция к увеличению среднего объема эритроцитов (МСУ) и уровня гематокрита (таблица 2).

При проведении компьютерной морфометрии было выявлено, что у исследованных больных до лечения наблюдались выраженные морфологические изменения эритроцитов в сравнении с показателями здоровых людей. Распределение морфологических форм эритроцитов представлено в таблице 3. Анализ данных компьютерной морфометрии показал, что у больных ХОБЛ и БА по сравнению с показателями здоровых людей отмечается статистически достоверное увеличение

уровня дегенеративных форм (эхиноцитов, каплевидных, мишеневидных, овалоцитов, сфероцитов) на фоне снижения количества дискоцитов (р<0,05).

Таблица 2. Эритроцитарные параметры больных ХОБЛ и БА до лечения

Эр, х1012/л НЪ,г/л Ht,% MCV, фл МСН, пг МСНС, г/л

Здоровые люди 4,68±0,07 141±4,7 39±1,1 84±1,6 30±0,8 356±2,7

Больные ХОБЛ 4,85±0,09 144±3,1 42±1,0* 87±1,4 30±0,4 340±4,3*

Больные БА 4,70±0,07 143±2,3 41,3±0,7 89+0,8* 31 ±0,3 344±3,7*

* статистически значимые различия по сравнению с показателями здоровых людей (р<0,05)

Сравнительный анализ показателей, отражающих геометрические характеристики

эритроцитов больных ХОБЛ и БА, выявил достоверное увеличение среднего диаметра эритроцитов и доли макроцитов по сравнению с показателями здоровых людей (р<0,05), а также недостоверно увеличивалось число микроцитов (таблица 4).

Изменения морфологии эритроцитов связаны с физико-химическими нарушениями их поверхностной мембраны. Для оценки функциональной активности мембраны эритроцитов больных хроническими неспецифическими заболеваниями легких была изучена их электрофоретическая подвижность. В результате исследования у больных ХОБЛ и БА до начала комплексной терапии было выявлено значимое снижение ЭФПЭ по сравнению с уровнем здоровых людей (рисунок 1).

1,1 1,08 1,06 1,04 1,02 1

0,98

Здоровые Больные ХОБЛ Больные БА

Рисунок 1.ЭФП эритроцитов больных ХОБЛ и БА до лечения

/Ч

/

р<0,05

М

i=F¡

ШЭФПЭ

Таблица 3. Морфологические формы эритроцитов больных ХОБЛ и БА до лечения

Формула эритроцитов, %

Дискоциты Эхиноциты Эллиптоциты Каплевидные Мишеневидные Овалоциты Сфероциты Прочие формы

Здоровые люди 83,0±4,6 0,0 0,3±0,04 0,1 ±0,02 0,1 ±0,09 0,1±0,0 15,2±4,4 1,2±0,2

Больные ХОБЛ 65,0±2,1 * 0,95±0,1* 0,45±0,05 0,5±0,1 * 0,9±0,3* 0,5±0,06* 27,4±3,0* 4,3±0,8*

Больные БА 63,7±1,9* 0,9±0,2* 0,3±0,04 0,4±0,07* 0,4±0,06* 0,5±0,07* 29,8±2,2* 4,0±0,3*

Таблица 4. Геометрические характеристики эритроцитов больных ХОБЛ и БА до лечения

Средний диаметр эритроцитов, мкм Доля микроцитов (6,5 мкм), % Доля макроцитов (8,5 мкм), %

Здоровые люди 7,18 ±0,03 1,8 ±0,8 0,08 ± 0,02

Больные ХОБЛ 7,61±0,03* 3,1±0,3 2,4±0,4*

Больные БА 7,60±0,03* 2,7±0,3 2,3±0,6*

*статистически значимые различия по сравнению с показателями здоровых людей (р<0,05)

При исследовании морфологии ретикулоцитов у данных больных было выявлено статистически значимое увеличение как общего их количества, так и на каждой стадии дифференцировки клеток по сравнению с показателями здоровых людей, то есть наблюдалось появление ретикулоцитов I и II класса, что возможно является косвенным признаком повышенной регенераторной способности эритроидных клеток костного мозга (таблица 5).

Таблица 5. Морфология ретикулоцитов у больных ХОБЛ и БА до лечения

Ретикулоциты, %о

0 класс I класс II класс III класс IV класс Общее количество

Здоровые люди - - 0,7±0,1 1,3±0,2 2,8±0,4 4,8±0,7

Больные ХОБЛ - 1,5±0,2* 2,9±0,5* 5,0±0,6* 2,9±0,3 12,3±1,6*

Больные БА - 1,2±0,2* 2,5±0,6* 6,6±0,6* 3,6±0,3 13,9±1,3*

* статистически значимые различия по сравнению с показателями здоровых людей (р<0,05)

Таким образом, у больных ХОБЛ и БА до комплексной терапии были выявлены морфологическая неоднородность и ускорение эритропоэза в виде увеличения доли переходных и необратимо измененных форм эритроцитов, ретикулоцитоза и левого сдвига ретикулоцитарного ряда, а также функциональной неполноценности поверхностной мембраны эритроцитов.

Морфофункциональиая характеристика периферического звена эритрона больных хронической обструктивной болезнью легких в динамике комплексного лечения.

У больных ХОБЛ I группы отмечалось незначительное снижение количества эритроцитов с 4,85 до 4,60><1012/л, уровня гемоглобина с 144 до 139 г/л и гематокрита с 42 до 40,3%. Статистически значимой разницы между показателями до и после курса медикаментозного лечения не отмечалось (р>0,05) (таблица 6).

Аиализ данных компьютерной морфометрии показал, что у больных I группы после медикаментозного лечения количество эхиноцитов, каплевидных форм и овалоцитов оставалось на том же уровне, что и до медикаментозной терапии (р<0,05). Также было выявлено незначительное повышение числа дискоцитов, уменьшение количества сфероцитов и мишеневидных форм эритроцитов (р>0,05) (таблица 7).

Геометрические характеристики эритроцитов больных ХОБЛ до и после медикаментозной терапии практически были одинаковы (таблица 8). Статистически достоверной разницы между показателями до и после проведенной терапии не было выявлено (р>0,05).

После проведенной базисной медикаментозной терапии отмечалось увеличение электрофоретической подвижности эритроцитов с 1,03 до 1,06 мкм-см'ЕГ' с"1, но при сравнении с показателем здоровых людей уровень ЭФП достоверно оставался пониженным (р<0,05).

Количество ретикулоцитов и их морфологическая характеристика у больных I группы оставались практически одинаковыми до и после проведения медикаментозной терапии (р>0,05) (таблица 9).

Итак, после курса медикаментозной терапии морфологические изменения эритроцитов сохранялись в виде повышенного количества доли переходных и необратимо измененных форм, пониженного уровня дискоцитов, также наблюдалось повышение ЭФПЭ.

Больным ХОБЛ II группы дополнительно к традиционной медикаментозной терапии проводили курс внутривенного лазерного облучения крови (БЛОК), состоящего из 10-ти сеансов. После 10-го дня курса БЛОК было выявлено статистически незначимое увеличение числа эритроцитов (с 4,85 до 4,90 х10и/л), гемоглобина (с 144 до 149 г/л), МСУ (с 87 до 89 фл) по сравнению с данными до начала лечения (р>0,05) (таблица 6). При сравнительном анализе количество эритроцитов, гематокрита, МСУ и МСНС у больных ХОБЛ после курса комплексного лечения с включением лазеротерапии достоверно не отличались от нормальных значений (р>0,05).

Таблица 6. Эритроцитарные параметры больных ХОБЛ в динамике комплексного

лечения

Эр, х10п/л НЬ.г/л №,% МСУ, фл МСН, пг МСНС, г/л

До лечения 4,85±0,09 144±3,1 42±1,0* 87±1,4 30±0,4 340±4,3*

После медик.леч. 4,60±0,09 139±4,0 40,3±1,0 86±1,3 30±0,4 341±4,5*

После 5-го дня ВЛОК 4,74±0,1 144,8±6,7 42,9±2,3 89±2,7 30,6±0,7 341±11,3

После 10-го дня ВЛОК 4,90±0,1* 149±3,7 43±1,0* 89±2,2* 30,5±0,8 344±3,7*

*статистически значимые различия по сравнению с показателями здоровых людей (р<0,05)

**статистически значимые различия показателей до и после курса лечения (р<0,05

Комплексная терапия с применением БЛОК вызвала положительные сдвиги со стороны морфологии эритроцитов. Они проявлялись в увеличении общего количества дискоцитов, число которых приближалось к нормальным значениям к концу 10-го дня лазеротерапии (р<0,05). Это происходит, вероятно, за счет обратной трансформации эхиноцитов (р<0,05), снижения необратимо измененных форм эритроцитов: каплевидных (р<0,05), мишеневидных, овалоцитов и сфероцитов (р<0,05) (таблица 7). При сравнении с показателями здоровых людей содержание эхиноцитов, каплевидных, мишеневидных и овалоцитов было достоверно выше (р<0,05).

После лазеротерапии у больных II группы также отмечалось уменьшение среднего диаметра эритроцитов (с 7,61 до 7,59 мкм) и доли макроцитов (с 2,4 до 1,6 %) по сравнению с показателями до лечения, значения которых статистически между собой не различались (таблица 8). После 5-го дня ВЛОК наблюдалось статистически не достоверное увеличение доли микроцитов (с 3,1 до 4,9%).

Таблица 7. Морфологические формы эритроцитов больных ХОБЛ в динамике комплексного лечения

Формула эритроцитов, %

Дискоциты Эхиноциты Эллиптоциты Каплевидные Мишеневидные Овапоциты Сфсроциты Прочие формы

До лечения 65,0±2,1 * 0,95±0,1* 0,45±0,05 0,5±0,1* 0,9±0,3* 0,5±0,06* 27,4±3,0* 4,3±0,8*

После медик, леч. 68,6±1,8* 0,9±0,1 * 0,4±0,09 0,5±0,03* 0,8±0,4 0,6±0,04* 24,7±2,5 3,5±0,3*

После 5-го дня ВЛОК 68,0±4,5* 0,5±0,1* ** 0,4±0,1 0,4±0,07* 0,8±0,5 0,4±0,07* 26,1±5,0* 3,4±0,3*

После 10-го дня ВЛОК 78±2,6** 0,2±0,04* ** 0,3±0,07 0,2±0,04* ** 0,5±0,2* 0,3±0,04* ** 18,2±3,2* 2,3±0,2* **

Таблица 8. Геометрические характеристики эритроцитов больных ХОБЛ в динамике комплексного лечения

Показатель До лечения После медик, леч. После ВЛОК

5-й день 10-й день

Средний диаметр эритроцитов, мкм 7,61 ± 0,03* 7,56±0,06* 7,51 ±0,06* 7,59 ± 0,04*

Доля микроцитов (6,5 мкм), % 3,1 ±0,3 2,8±0,5 4,9 ±1,6 3,4 ± 0,7

Доля макроцитов (8,5 мкм), % 2,4 ± 0,4* 2,5±0,4* 1,7 ±0,5* 1,6 ±0,3*

1 статистически значимые различия по сравнению с показателями здоровых людей (р<0,05) **статистически значимые различия показателей до и после курса лечения (р<0,05)

В результате комплексной терапии наблюдалось повышение ЭФП эритроцитов с 1,03 до 1,06 мкм см В"'-с"' после 5-го сеанса БЛОК (р<0,05), но при сравнении с показателем здоровых людей этот показатель достоверно оставался пониженным (р<0,05). После 10-ти дневного курса ВЛОК имело место статистически значимое увеличение ЭФПЭ, уровень которого соответствовал нормальным значениям 1,10 икм см-В^-с"1 (р<0,05) (рисунок 2).

ВЛОК дня ВЛОК

Рисунок 2. Динамика ЭФПЭ больных ХОБЛ в динамике комплексного лечения При изучении морфологии ретикулоцитов у пациентов II группы было обнаружено как увеличение их общего количества, так и клеток I - IV классов. Средние значения ретикулоцитов приведены в таблице 9.

Таблица 9. Морфология ретикулоцитов больных ХОБЛ в динамике комплексного лечения

Ретикулоциты, %а

0 класс I класс II класс III класс IV класс Общее количество

До лечения - 1,5±0,2* 2,9±0,5* 5,0±0,6* 2,9±0,3 12,3±1,6*

После медик, леч. - 1,5±0,2* 3,0±0,4* 6,Ш,3* 2,9±0,3 13,5±1,5*

После 5-го дня ВЛОК 1,0±0,0 3,6±1,2 8,6±1,5* 4,2±0,7 17,4±3,4*

После 10-го дня ВЛОК 2,0±0,3* ** 5,7±1,5* 10,8±1,2* ** 5,7±1,1* 24,2±4,1* **

* статистически значимые различия по сравнению с показателями здоровых людей (р<0,05)

** статистически значимые различия показателей до и после курса лечения (р<0,05)

Как видно из таблицы, в исследуемой группе отмечались признаки ускоренного эритропоэза, проявившегося увеличением общего количества ретикулоцитов до 24,296о (р<0,05). При этом наблюдался значительный сдвиг ретикулоцитарного ряда в сторону более молодых форм (р<0,05).

Морфофункциональная характеристика периферического звена эритрона больных бронхиальной астмой в динамике комплексного лечения.

При анализе эритроцитарных параметров у больных бронхиальной астмой I группы было выявлено, что до и после курса медикаментозного лечения количество эритроцитов, гемоглобина, МСУ, МСН, МСНС и уровень гематокрита достоверно не различались между собой (р>0,05) (таблица 10).

Компьютерная морфометрия эритроцитов у больных БА, леченных медикаментозно, выявила статистически значимое повышение доли дискоцитов (с 63,7 до 69,7%), число которых достоверно не достигало нормальных значений (р<0,05). Также было отмечено снижение сфероцитов (с 29,8 до 24,4%). Процентное содержание эхиноцитов, каплевидных, мишеневидных, овалоцитов и прочих форм эритроцитов статистически не различалось с данными до лечения (р>0,05) (таблица 11).

При сравнении геометрических характеристик эритроцитов больных I группы до и после медикаментозной терапии статистически значимой разницы в содержании микро- ,макроцитов и в среднем диаметре эритроцитов не было выявлено (р>0,05) (таблица 12).

При проведении цитоэлсктрофорсза эритроцитов после курса медикаментозной терапии было отмечено недостоверное повышение их электрофоретической подвижности (с 1,04 до 1,06 мкмсм-В"'-с~'). Однако значение ЭФПЭ больных БА после медикаментозного лечения остается достоверно пониженным по сравнению с показателем здоровых людей (р<0,05).

При подсчете количества ретикулоцитов в исследуемой группе больных наблюдалась тенденция к снижению как общего их количества, так и снижение в каждом ряду дифференцировки клеток по сравнению с показателями до лечения (р>0,05) (таблица 13).

У больных БА II группы после проведенной лазеротерапии эритроцитарные параметры практически оставались без изменений и достоверно не различались с показателями до начала лечения (р>0,05) (таблица 10).

Таблица 10. Эритроцитарные параметры больных БА в динамике комплексного

лечения

Эр, *1012/л НЬ,г/л Ш,% МО/, фл МСН, пг МСНС, г/л

До лечения 4,70±0,07 143±2,3 41,3±0,7 89±0,8* 31±0,3 344±3,7*

После медик.леч. 4,63±0,1 144±3,2 41±1,4 87±1,5 30±0,4 342±5,8*

После 5-го дня БЛОК 4,67±0,1 140±3,9 41,6±1,0 89,8±1,3* 30,0±0,3 336±5,5*

После 10-го дня БЛОК 4,68±0,1 141±3,4 41±1,0 90,3±1,1* 31,3±0,6 346±5,5

* статистически значимые различия по сравнению с показателями здоровых людей (р<0,05)

**статистически значимые различия показателей до и после курса лечения (р<0,05

Распределение морфологических форм эритроцитов в динамике комплексного лечения представлено в таблице И, К концу курса медикаментозного лечения с применением БЛОК было выявлено статистически достоверное повышение числа дискоцитов (с 63,7 до 79,6%) на фоне значимого снижения эхиноцитов (с 0,9 до 0,3%), каплевидных (с 0,4 до 0,2%), сфероцитов (с 29,8 до 16,8%) и прочих форм (с 4,0 до 2,2%) (р<0,05). Также незначительно уменьшалось количество эллиптоцитов, мишеневидных и овалоцитов по сравнению с исходными данными (р>0,05).

При анализе показателей эритроцитометрии, а именно среднего диаметра, микро-и макроцитов были получены следующие данные. Как видно из таблицы 12, в ходе комплексного лечения с включением БЛОК средний диаметр эритроцитов не различается с показателем до лечения (р>0,05). После 10-го дня лазеротерапии наблюдалось статистически незначимое повышение доли микроцитов (с 2,7 до 3,6%) и макроцитов (с 2,3 до 3,4%) (р>0,05).

Таблица 11. Морфологические формы эритроцитов больных БА в динамике комплексного лечения

Формула эритроцитов, %

Дискоциты Эхииоциты Эллиптоциты Каплевидные Мишеневидные Овалоциты Сфероциты Прочие формы

До лечения 63,7±1,9* 0,9±0,2* 0,3±0,04 0,4±0,07* 0,4±0,06* 0,5±0,07* 29,8±2,2* 4,0±0,3*

После медик, леч. 69,7±2,3* *# 0,65±0,2* 0,35±0,07 0,5±0,1* 0,5±0,1* 0,4±0,1* 24,4±2,9* 3,5±0,4*

После 5-го дня БЛОК 68,8±3,6* 0,3±0,05* ** 0,4±0,1 0,4±0,1* 0,3±0,04* 0,5±0,09* 26,3±3,5* 3,0^0,3*

После 10-го дня БЛОК 79,6±1,8** 0,3±0,05* ** 0,2±0,04 0,2±0,08** 0,3±0,05* 0,4±0,1 * 16,8±1,7** 2,2±0,2* **

Таблица 12. Геометрические характеристики эритроцитов больных БА в динамике комплексного лечения

Показатель До лечения После медик, леч. После БЛОК

5-й день 10-й день

Средний диаметр эритроцитов, мкм 7,60±0,03* 7,59±0,04* 7,59±0,05* 7,60±0,04*

Доля микроцитов (6,5 мкм), % 2,7±0,3 2,5±0,3 3,3±0,7 3,6±0,4*

Доля макроцитов (8,5 мкм), % 2,3±0,6* 2,0±0,3* 3,0±1,1* 3,4±0,9*

* статистически значимые различия по сравнению с показателями здоровых людей (р<0,05)

**статистически значимые различия показателей до и после курса лечения (р<0,05)

На рисунке 3 видно, что у больных II группы после 5-го сеанса отмечалось повышение ЭФГ1 эритроцитов с 1,04 до 1,07 мкм-см-В"'-с"' (р<0,05), но при сравнении с показателем здоровых людей он достоверно оставался пониженным (р<0,05). К концу курса ВЛОК имело место статистически значимое увеличение ЭФПЭ до 1,09 мкм-см-В'Ч"1 (р<0,05), уровень которого достоверно не различался с нормальным значением здоровых людей (р>0,05).

1,12 1,1 1,081,06 1,04 1,02 1

■-

"1707^

Здоровые До лечения После 5-го После 10-го дня ВЛОК дня ВЛОК

□ ЭФПЭ

Рисунок 3. Динамика ЭФПЭ больных БА в динамике комплексного лечения Морфологические характеристики ретикулоцитов в динамике комплексного лечения с включением ВЛОК представлены в таблице 13. Статистически достоверной разницы между значениями ретикулоцитов до и после курсов лазеротерапии не было выявлено (р>0,05).

Таблица 13. Морфология ретикулоцитов больных БА в динамике комплексного

Ретикулоциты, %о

0 класс I класс 11 класс III класс IV класс Общее количество

До лечения - 1,2±0,2* 2,5±0,6* 6,6±0,6* 3,6±0,3 13,9±1,3*

После медик, леч. - - 2,1±0,4* 4,9±0,7* 2,7±0,3 9,7±1,0*

После 5-го дня ВЛОК 2,0±0,0* 3,1±0,9* 6,5±0,8* 3,9±0,6 15,5±2,1*

После 10-го дня ВЛОК 2,0±0,0* 4,3±0,9* 7,6±1,8* 4,5±0,5* 18,4±2,2*

* статистически значимые различия по сравнению с показателями здоровых людей (р<0,05)

При подсчете количества ретикулоцитов после 5-го и 10-го дня лазеротерапии было выявлено недостоверное увеличение общего числа ретикулоцитов, клеток III класса и IV класса по сравнению с данными до лечения (р>0,05). Как видно из таблицы 13, количество молодых форм ретикулоцитов после комплексного лечения оставалось повышенным, что косвенно говорит о раздражении красного ростка костного мозга и усиленной продукции клеток.

Сравнительный анализ клинической картины больных хроническими неспецифнческими заболеваниями легких в процессе комплексного лечения с применением н без применения лазеротерапии

Клиническая эффективность проведенного лечения оценивалась по данным динамики основных симптомов и физикального обследования, определения показателей функции внешнего дыхания (ФВД) и газового состава крови.

В результате нашего исследования было отмечено, что у больных II группы, которым проводилась медикаментозная терапия с включением ВЛОК, наблюдалась более выраженная положительная динамика в отношении клинических симптомов (характера и интенсивности кашля, количества отделяемой мокроты, выраженности одышки) и данных физикального обследования по сравнению с данными больных I группы.

При оценке состояния функции внешнего дыхания (ФВД) у больных ХОБЛ II группы после комплексного лечения с включением ВЛОК было выявлено достоверное увеличение ОФВ! (с 62,4 до 75,3%), ОФВ[/ФЖЕЛ (с 65 до 73,5%), СОС 25-73% (С 49 до 57%) по сравнению с данными до лечения (р<0,05). После медикаментозной терапии все параметры бронхиальной проходимости также изменялись в положительную сторону, но они были менее выраженными и статистически не различались с данными до начала лечения (р>0,05). Так, у больных ХОБЛ I группы отмечалось незначительное увеличение ОФВ[ (с 63,8 до 67%), ОФВ1/ФЖЕЛ (с 67 до 71,4%), СО С 23-75% (с 47 до 58,3%), ЖЕЛ (с 74.8 до 79,7%).

У больных БА второй группы также наблюдалась тенденция к более выраженному улучшению бронхиальной проходимости по сравнению с первой группой. После сеансов ВЛОК отмечалось статистически значимое увеличение функциональных показателей ФВД, а именно ОФВ1 (с 68,5 до 80%), СОС 25-75% (с 44

" до 50%), ПОС (с 65,9 до 78,6%), ФЖЕЛ (с 79 до 92%), ЖЕЛ (с 84 до 90,9%) по сравнению с данными до лечения (р<0,05). После медикаментозной терапии все параметры бронхиальной проходимости также улучшались: ОФВ1 (с 68,2 до 73,5%), СОС 25-75% (с 42,3 до 48,7%), ПОС (с 64,4 до 74%), ФЖЕЛ (с 78,9 до 86,7%), но статистически достоверной разницы по сравнению с показателями до лечения не выявлялось (р>0,05).

Эффективность комплексной терапии у больных ХНЗЛ отмечали также с помощью лабораторных тестов. У больных ХОБЛ и БА второй группы после курса комплексного лечения с применением БЛОК наблюдались более выраженные изменения лабораторных показателей воспалительного синдрома в положительную сторону по сравнению с первой группой больных. Так, у больных ХОБЛ после курса комплексного лечения с применением БЛОК снижалось количество лейкоцитов (с 11,4 до 8,0х109 /л), СРБ (с 14 до 5,5 мг/л), фибриногена (с 4,49 до 3,5 г/л) по сравнению с данными до лечения (р<0,05). В ходе медикаментозного лечения наблюдалась тенденция к снижению показателей воспаления (р>0,05). После курсов лазерного облучения крови у больных ХОБЛ и БА отмечалась достоверная положительная динамика показателей газового состава крови в виде статистически значимого увеличения парциального давления кислорода (р02) и сатурации кислорода, а также уменьшения парциального давления углекислой кислоты (рС02) по сравнению с данными до лечения (р<0,05). Так, у больных ХОБЛ в динамике комплексного лечения было выявлено увеличение р02 (с 60 до 70,8 мм.рт.ст.), з02 (с 88 до 93%) и снижение уровня рС02 (с 44 до 39 мм.рт.ст) (р<0,05). После медикаментозной терапии также наблюдалась тенденция к улучшению газового состава крови, однако статистически достоверной разницы до и после лечения не выявлялось (р>0,05). Проведение корреляционного анализа не выявило зависимости между функциональными изменениями мембраны эритроцитов и уровнем р02, рС02, б02 у больных ХОБЛ и БА (р>0,05).

Итак, результаты сравнительного анализа свидетельствуют о преимуществах комплексного лечения с включением БЛОК у больных ХОБЛ и БА в виде улучшения клинико-лабораторной картины, купирования основных симптомов, повышения уровня парциального давления кислорода в крови, нормализации показателей воспалительного синдрома и уменьшения степени обструкции дыхательных путей.

Таким образом, медикаментозная терапия с применением внутривенного лазерного облучения крови вызывала положительные сдвиги со стороны морфологии и функции эритроцитов по сравнению со стандартной медикаментозной терапией. Они проявлялись в увеличении общего количества дискоцитов, число которых соответствовало нормальным значениям к концу курса лазеротерапии, и снижения процента переходных и необратимо измененных форм эритроцитов. Также после комплексного лечения имело место восстановление электрофоретической подвижности эритроцитов до нормы, что является подтверждением полноценного функционирования мембраны эритроцита. Увеличение общего количества ретикулоцитов и их молодых форм указывало на омоложение пула периферического эритрона и, тем самым, на ускорение эритропоэза.

ВЫВОДЫ

1. У больных хроническими неспецифичсскими заболеваниями легких были выявлены выраженные изменения в «формуле» эритроцитов - увеличение числа дегенеративных форм (эхиноцитов, каплевидных, мишеневидных, овалоцитов и сфероцитов) на фоне снижения количества дискоцитов. Эритроцитарные параметры до и после комплексного лечения оставались практически без изменений и не отличались от показателей здоровых людей.

2. После проведенного комплексного лечения была отмечена положительная динамика, наиболее выраженная со стороны морфологических показателей эритроцитов больных хронической обструкгивной болезнью легких и бронхиальной астмой в виде снижения доли переходных и необратимо измененных форм и увеличения числа дискоцитов.

3. На фоне медикаментозного лечения с включением внутривенного лазерного облучения крови у больных хронической обструктивной болезнью легких и бронхиальной астмой были выявлены косвенные признаки повышенной стимуляции эритропоэза, а именно увеличение общего количества ретикулоцитов и их незрелых форм.

4. Эритроциты периферической крови больных хронической обструктивной болезнью легких и бронхиальной астмой характеризуются сниженными показателями электрофоретической подвижности, которые после комплексного

лечения нормализуются, что свидетельствует о восстановлении функции мембраны эритроцитов.

5. Комплексное лечение больных хронической обструктивной болезнью легких и бронхиальной астмой, включающее медикаментозное лечение с применением внутривенного лазерного облучения крови, по сравнению со стандартной медикаментозной терапией оказывает более выраженное нормализующее воздействие на показатели бронхиальной проходимости, уменьшается степень гипоксемии и способствует улучшению клинической картины заболеваний.

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Т.Г. Сарычева, Э.Б. Цыбжитова, О.В. Попова, О.В. Александров. Морфометрия и электрофоретическая подвижность эритроцитов больных бронхиальной астмой при лечении внутривенным лазерным облучением крови.//Клиническая лабораторная диагностика - 2009-№3 - с.13-14.

2. Э.Б. Цыбжитова, Т.Г. Сарычева, О.В. Попова, О.В. Александров. Структурно-функциональная характеристика эритроцитов больных хронической обструктивной болезнью легких на фоне лечения внутривенным лазерным облучением крови.//Научно-практическая конференция «Лабораторная медицина в свете Концепции развития здравоохранения России до 2020 года» -Москва - 2009г- с.320-321.

3. Э.Б. Цыбжитова, Т.Г. Сарычева, О.В. Попова. Электрофоретическая подвижность эритроцитов у больных с хроническими заболеваниями легких.//Клиническая лабораторная диагностика - 2008 - №9 - с.74.

4. Э.Б. Цыбжитова. Т.Г Сарычева. Морфометрическая характеристика эритроцитов периферической крови больных хронической обструктивной болезнью легких при лазерном облучении крови. II Московская региональная научно-практическая конференция (с международным участием) «Цитоморфометрия в медицине и биологии: фундаментальные и прикладные аспекты» - Москва - 2009 - с.94-95.

5. Э.Б. Цыбжитова, Т.Г. Сарычева, О.В. Попова, И.С. Ежова, О.В. Александров. Влияние низкоинтенсивного лазерного облучения крови на

морфофункциональную характеристику эритроцитов у больных бронхиальной астмой. Сборник материалов «III национальный конгресс терапевтов» - Москва -2008-С.259.

6. Э.Б. Цыбжитова, И.С. Ежова, О.В. Александров. Влияние лазерного облучения крови на электрофорстическую подвижность эритроцитов у больных с хроническими неспецифическими заболеваниями легких. Сборник материалов научно-практической конференции молодых ученых и специалистов «Актуальные вопросы клинической и экспериментальной медицины» - Санкт -Петербург - 2008 - с.70.

7. Т.Г. Сарычева, И.Н. Наумова, О.В. Попова, Э.Б. Цыбжитова, O.A. Дягилева, C.B. Варламова, Г.И. Козинец. Морфофункциональная характеристика клеток крови доноров на современном этапе заготовки крови и ее компонентов. Материалы научно-практической конференции «Актуальные вопросы гематологии и трансфузиологии» - Санкт - Петербург - 2009 - с.56.

Автор приносит искреннюю благодарность за помощь и совместную работу:

Г.И. Козинцу, В.М. Погорелову, Т.Г. Сарычевой, О.В. Александрову, И.С. Ежовой, О.В. Поповой, И.Н. Наумовой, Д.А. Шмарову, O.A. Дягилевой, B.C. Каталиной, A.B. Красникову, В.В. Троицкой, сотрудникам лаборатории гемоцитологии и других подразделений ГНЦ РАМН, Е.В. Григоренко, В.Н. Азерокович, С.А. Корвякову, Т.А. Полетаевой и всем сотрудникам 2-го терапевтического отделения и клинико-диагностической лаборатории ЦКБ РАН, сотрудникам кафедры внутренних болезней МБФ ГОУ ВПО РГМУ.

Подписано в печать:

22.04.2010

Заказ № 3598 Тираж -100 экз. Печать трафаретная. Типография «11-й ФОРМАТ» ИНН 7726330900 115230, Москва, Варшавское ш., 36 (499) 788-78-56 www.autoreferat.ru

Актуальность темы

Большое значение в развитии и прогрессировании хронических заболеваний легких придается структурно-функциональному состоянию эритроцитов. В норме эритроциты человека - безъядерные клетки с высоким содержанием дыхательного пигмента, гемоглобина, основной функцией которых является снабжение тканей кислородом и удаление продуктов метаболизма из органов и межклеточных пространств (А.И. Воробьев, 2002). Основная масса эритроцитов в периферической крови представлена дискоцитами (около 90%). Благодаря дискоидной двояковогнутой форме они могут проходить через узкие капилляры (диаметром не более 4-5 мкм), проникать через стенки синусоидов селезенки, возвращаясь к исходным параметрам.

В настоящее время хронические болезни органов дыхания, в первую очередь хроническая обструктивная болезнь легких (ХОБЛ) и бронхиальная астма (БА), являются одними из наиболее распространенных во всем мире (GOLD, 2007; GINA, 2007) и одной из важных социально-медицинских проблем, что связано с неуклонным ростом заболеваемости и смертности от них, поскольку они ведут к нарушению основной функциональной роли органов дыхания - расстройству газообмена и развитию дыхательной недостаточности (А.Г. Чучалин, 2003, GOLD, 2007).

Среди ключевых патофизиологических факторов, определяющих особенности течения ХОБЛ и БА, важное место занимают изменения эритрона, являющиеся физиологическими механизмами адаптации к гипоксии. Компенсаторный эритроцитоз, полицитемия, повышение вязкости крови на фоне расстройств газообмена часто сочетается со структурно-функциональными изменениями эритроцитов. Уменьшается количество нормальных дискоцитов, преобладают дегенеративные формы эритроцитов с высоким содержанием холестерина на мембране, снижается их деформируемость, увеличивается агрегационная способность (О.Н. Ветчинникова, Г.В.Плаксина, 2002; A.C. Салихова, 2002; Ж.Е. Савицкая, 2000). И, как следствие, нарушается кислород-транспортная функция крови, в результате чего еще более возрастает гипоксия.

За последние годы наряду с разработкой и широким внедрением в клиническую практику новых эффективных медикаментозных препаратов, применяемых для лечения легочной патологии, в комплексном лечении получили признание немедикаментозные методы. Среди разнообразных физических средств эффективным действием обладает лазерная терапия. Квантовая энергия благотворно влияет на микроциркуляцию: ее улучшение обусловлено вазодилатацией и изменением реологических свойств крови за счет снижения ее вязкости, а также увеличением деформируемости эритроцитов и снижением их агрегационной способности (C.B. Москвин, 2003; Н.Н Кипшидзе и др., 1993; О.Н. Ветчинникова, Г.В.Плаксина, 2002;). По многочисленным экспериментальным данным показано, что гелий -неоновый лазер (ГНЛ) оказывает неоднозначное действие на эритроциты периферической крови. В целом лазерное облучение крови вызывает выраженный положительный терапевтический эффект на клиническое течение заболевания. Имеются данные о стимулирующем влиянии лазерного излучения на клеточное и гуморальное звено иммунитета, противовоспалительном действии, влиянии на процессы перекисного окисления липидов, антигипоксическом и детоксикационном эффектах при хронических заболеваниях легких (Н.Ф. Гамалея и др., 1991; C.B. Москвин, 2003; Е.В. Демичева, 1992; Н.В. Леонтьева, 2000). В доступной нам литературе не встретилось работ, посвященных оценке морфо-функциональных особенностей периферического звена эритрона под воздействием лазерного облучения крови при хронических заболеваниях легких. Все вышеизложенное определяет актуальность проблемы и позволяет обозначить цель и задачи настоящего исследования.

Цель исследования:

Целью данной работы является анализ и оценка морфофункционального состояния периферического звена эритрона у больных хроническими неспецифическими заболеваниями легких в динамике комплексного лечения.

Задачи исследования:

1. Изучить эритроцитарные параметры у больных хроническими неспецифическими заболеваниями легких в динамике комплексного лечения

2. Дать морфологическую характеристику эритроцитов с помощью компьютерной морфометрии у больных хроническими неспецифическими заболеваниями легких в динамике комплексного лечения

3. Охарактеризовать изменения количественного и качественного состава ретикулоцитов у больных хроническими неспецифическими заболеваниями легких в динамике комплексного лечения

4. Исследовать функциональное состояние мембраны эритроцитов методом цитоэлектрофореза у больных хроническими неспецифическими заболеваниями легких в динамике комплексного лечения

5. Провести сравнительное изучение морфологического и функционального состояния эритроцитов у больных хроническими неспецифическими заболеваниями легких в процессе комплексного лечения с применением и без применения внутривенного лазерного облучения крови

6. Оценить клиническое состояние больных хроническими неспецифическими заболеваниями легких в динамике комплексного лечения.

Научная новизна работы:

В работе дана комплексная морфофункциональная характеристика периферическому звену эритрона у больных хроническими неспецифическими заболеваниями легких в динамике медикаментозного лечения с применением и без применения внутривенного лазерного облучения крови. Оценен поверхностный заряд клеток методом цитоэлектрофореза, определены морфологические особенности эритроцитов на основании компьютерной морфометрии и выявлены косвенные признаки повышенной регенераторной способности костного мозга у этих больных.

Практическая значимость работы:

Компьютерная морфометрия и ретикулоцитометрия позволили оценить степень изменения морфологии эритроцитов периферической крови больных хронической обструктивной болезнью легких и бронхиальной астмой в динамике комплексного лечения.

Метод цитоэлектрофореза позволил оценить степень нарушения функционального состояния эритроцитов у больных хронической обструктивной болезнью легких и бронхиальной астмой и определить адекватность проведенного лечения.

Установленный факт улучшения показателей электрофоретической подвижности эритроцитов у больных хронической обструктивной болезнью легких и бронхиальной астмой может служить маркером эффективности эритропоэза.

Результаты настоящего исследования способствуют углублению имеющихся представлений о состоянии периферического звена эритрона у больных хронической обструктивной болезнью легких и бронхиальной астмой.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Хронические неспецифические заболевания легких характеризуются морфологическими и функциональными изменениями периферического звена эритрона

2. Изменение морфологических показателей эритроцитов больных хронической обструктивной болезнью легких и бронхиальной астмой сопровождается снижением их отрицательного поверхностного заряда

3. Снижение электрофоретической подвижности эритроцитов носит транзиторный характер, что свидетельствует о восстановлении полноценного функционирования мембраны эритроцитов после комплексного лечения

4. Внутривенное лазерное облучение крови вызывает положительные сдвиги со стороны эритроцитарных показателей у больных хронической обструктивной болезнью легких и бронхиальной астмой

Публикации

По теме диссертации опубликовано 7 печатных работ.

Объем и структура диссертации

выводы

1. У больных хроническими неспецифическими заболеваниями легких были выявлены выраженные изменения в «формуле» эритроцитов -увеличение числа дегенеративных форм (эхиноцитов, каплевидных, мишеневидных, овалоцитов и сфероцитов) на фоне снижения количества дискоцитов. Эритроцитарные параметры до и после комплексного лечения оставались практически без изменений и не отличались от показателей здоровых людей.

2. После проведенного комплексного лечения была отмечена положительная динамика, наиболее выраженная со стороны морфологических показателей эритроцитов больных хронической обструктивной болезнью легких и бронхиальной астмой в виде снижения доли переходных и необратимо измененных форм и увеличения числа дискоцитов.

3. Эритроциты периферической крови больных хронической обструктивной болезнью легких и бронхиальной астмой характеризуются сниженными показателями электрофоретической подвижности, которые после комплексного лечения нормализуются, что свидетельствует о восстановлении функции мембраны эритроцитов.

4. На фоне медикаментозного лечения с включением внутривенного лазерного облучения крови у больных хронической обструктивной болезнью легких и бронхиальной астмой были выявлены косвенные признаки повышенной стимуляции эритропоэза, а именно увеличение общего количества ретикулоцитов и их незрелых форм.

5. Комплексное лечение больных хронической обструктивной болезнью легких и бронхиальной астмой, включающее медикаментозное лечение с применением внутривенного лазерного облучения крови, по сравнению со стандартной медикаментозной терапией оказывает более выраженное нормализующее воздействие на показатели бронхиальной проходимости, уменьшается степень гипоксемии и способствует улучшению клинической картины заболеваний.

ГЛАВА 4. ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Развитие бронхолегочного процесса сопровождается стойке^^и изменениями периферического звена эритрона, что усугубляет призы: гипоксии и определяет течение патологического процесса (3, 65, 85) g условиях гипоксии и воспалительного процесса в эритроцитах появлшс^-тся нарушения как метаболического, так и биофизического характера^ с изменениями физико-химических свойств их мембраны, что определяет трансформацию эритроцитов в различные патологические формы (93 s 95 101,103,118, 146).

Проведенные исследования в данной работе показали выражерз:11Ь1е морфофункциональные изменения эритроцитов периферической ьсрови пациентов с хроническими неспецифическими заболеваниями легких. Х1ри исследовании эритроцитарных параметров у больных ХОБЛ и БА колич^ство эритроцитов, гемоглобина, среднего содержания гемоглобина в эритро;ците (МСН) достоверно не различались с показателями здоровых людей, од^ако наблюдалась тенденция к увеличению среднего объема эритроцитов (МСу^ и уровня гематокрита (р>0,05).

Известно, что в условиях гипоксии, ацидоза снижается деформируемость эритроцитов, повышается жесткость клеточной мембраны и вязкость внутреннего содержания эритроцитов, что обуславливает изменение структуры клетки (3, 45, 65, 102). По результатам нашего исследования было выявлено, что у больных ХОБЛ и БА при компьютерной морфометрии до лечения наблюдались выраженные изменения стру^ТурЫ эритроцитов в виде статистически значимого снижения количества дискоцитов, увеличения доли переходных и необратимо измененных форм эритроцитов, а именно эхиноцитов, каплевидных, мишеневидных овалоцитов, сфероцитов и прочих форм. Следовательно, морфологическая картина эритроцитов подтвердила полученные данные об изменении структуры мембран эритроцитов.

Сравнительный анализ показателей, отражающих геометрические характеристики эритроцитов больных ХОБЛ и БА, выявил достоверное увеличение среднего диаметра эритроцитов и доли макроцитов по сравнению с показателями здоровых людей (р<0,05). Также недостоверно увеличивалось число микроцитов. Наши данные подтверждаются исследованием В.Н. Минеева (1990), который наблюдал у больных БА достоверное повышение содержания микроцитов в периферической крови. И, по мнению автора, такое перераспределение эритроцитов по диаметру может увеличивать скорость насыщения гемоглобина кислородом (76).

Выраженный пойкилоцитоз эритроцитов крови, проявлявшийся в увеличении содержания переходных и необратимо измененных эритроцитов, по-видимому, может быть связан с изменениями эритроцитарной мембраны, возможно цитоскелета, на фоне эндогенной интоксикации (50, 66, 82) Для оценки функциональной активности мембраны нами была изучена их электрофоретическая подвижность, которая отражает-поверхностный заряд мембраны эритроцитов. В результате исследования у больных ХОБЛ и Б А было выявлено значимое снижение ЭФПЭ по сравнению с уровнем здоровых людей (р<0,05). Снижение поверхностного заряда эритроцитов может быть связано с длительным воздействием гипоксического стимула при заболеваниях легких, что вызывает перестройку поверхностной мембраны эритроцитов и неполноценность её функционирования (50), и как следствие происходят изменения формы эритроцитов, поэтому мы изучали корреляционную зависимость ЭФПЭ с показателями газового состава крови. Проведение корреляционного анализа не выявило зависимости между функциональными изменениями мембраны эритроцитов и уровнем р02, рС02, Б02у больных ХОБЛ и БА (р>0,05).

Таким образом, мы подтверждаем мнение авторов (50, 57, 102, 110), которые считают, что изменения морфологии эритроцитов связаны с физико-химическими нарушениями их поверхностной мембраны.

Интенсивность эритропоэза существенно зависит от выраженности дыхательных нарушений. Так, А.В. Леонтьев (1991) показал, что при прогрессировании вентиляционных нарушений средние показатели общего количества ретикулоцитов в периферической крови у больных с хроническим бронхитом увеличиваются (65). По результатам нашего исследования при ретикулоцитометрии у больных ХОБЛ и БА было выявлено статистически значимое увеличение показателей всех групп клеток по классификации Гейльмейера и, соответственно, их общего количества по сравнению с показателями здоровых людей (р<0,05). Также наблюдался левый сдвиг ретикулоцитарного ряда: появление ретикулоцитов I и II класса, что является косвенным признаком повышенной регенераторной способности костного мозга.

В процессе лечения у больных ХОБЛ и БА первой группы, которым проводилось только медикаментозное лечение, эритроцитарные показатели практически не различались с параметрами до лечения (р>0,05).

Проведение традиционной медикаментозной терапии существенно не изменяло количественную характеристику различных морфологических типов эритроцитов, по-прежнему, указывая на напряженную эритрокинетику с повышенной деструкцией эритроцитов. Так, у больных ХОБЛ после курса медикаментозной терапии наблюдалась тенденция к снижению доли переходных и необратимо измененных форм по сравнению с показателями до лечения, однако их уровень достоверно оставался выше нормальных значений (р<0,05). Таюке было выявлено незначительное повышение числа дискоцитов по сравнению с исходными данными (р>0,05). При анализе формулы эритроцитов больных бронхиальной астмой после медикаментозного лечения статистически значимой разницы с исходными морфологическими типами не было выявлено, кроме повышения числа дискоцитов. Средние значения показателей эритроцитометрии (средний диаметр эритроцитов, доля микроцитов и макроцитов) у больных первой группы статистически не различались с данными до лечения и оставались выше показателей здоровых людей (р>0,05).

При оценке функционального состояния мембраны эритроцитов больных ХОБЛ и БА, которым проводилось только медикаментозное лечение, была отмечена тенденция к повышению ЭФП, но полученные данные являлись статистически недостоверными (р>0,05). При корреляционном анализе нами не было выявлено влияния показателей газового состава крови на ЭФП эритроцитов у больных ХОБЛ и БА (р>0,05).

При подсчете ретикулоцитов у больных ХОБЛ и БА в процессе медикаментозного лечения отмечалось незначительное снижение их общего количества и незрелых клеток I и II классов по сравнению с исходными данными (р>0,05).

Многочисленные экспериментальные наблюдения свидетельствуют о том, что при воздействии низкоинтенсивного лазерного излучения происходят регенеративно-пролиферативные и количественные изменения периферического звена эритрона: ретикулоцитоз, увеличение количества эритроцитов с повышением их резистентности, ускорение фильтруемости (деформируемости) и снижение агрегации эритроцитов (41, 45, 63, 134, 141). Данные клинических исследований об изменениях эритроцитов периферической крови после БЛОК не однозначны. Так, в ряде исследований было выявлено, что после внутривенного лазерного облучения крови у относительно здоровых людей достоверно увеличивалось количество эритроцитов через 4 часа после облучения, а к концу суток количество на 15% превышает исходные значения (26). Параллельно отмечалось повышенное содержание гемоглобина и уровень гематокрита (26, 140). В литературе также имеются сведения, что после сеансов лазерной терапии отмечалось падение гематокрита (на 12%) и уменьшение вязкости крови (на 11%) (27).

По результатам нашего исследования в динамике комплексного медикаментозного лечения с включением БЛОК наблюдались следующие данные: у больных ХОБЛ была выявлена тенденция к повышению количества эритроцитов, гемоглобина, гематокрита, МСУ и МСНС по сравнению с исходными данными. При сравнительном анализе количество эритроцитов, гематокрита, МСУ и МСНС у больных ХОБЛ после курса лазеротерапии достоверно были выше нормальных показателей (р<0,05). Эритроцитарные параметры у больных с БА практически оставались без изменений и достоверно не различались с показателями до начала лазеротерапии (р>0,05).

Анализ данных компьютерной морфометрии показал, что у больных ХОБЛ и БА второй группы после курса внутривенного лазерного облучения крови в комплексе с традиционной медикаментозной терапией отмечались более выраженные улучшения в формуле эритроцитов по сравнению с результатами проведенного только медикаментозного лечения. К середине курса ВЛОК, независимо от нозологии, у больных начинала улучшаться формула эритроцитов в виде недостоверного повышения доли дискоцитов правильной конфигурации. Также наблюдалась тенденция к снижению переходных и необратимо измененных форм эритроцитов.

После 10-го сеанса лазеротерапии были выявлены наиболее выраженные положительные сдвиги в формуле эритроцитов. Полученные нами данные свидетельствуют об увеличении в периферической крови больных ХОБЛ и БА содержания дискоцитов, количество которых приблизилось к норме (р<0,05). Это происходит, вероятно, за счет обратной трансформации эхиноцитов (р<0,05), снижения необратимо измененных форм эритроцитов: каплевидных, мишеневидных, овалоцитов и сфероцитов.

При эритроцитометрии у больных ХОБЛ наблюдалось недостоверное снижение доли макроцитов и увеличение микроцитов, а средний диаметр эритроцитов в динамике комплексного лечения с применением лазеротерапии не отличался от исходных данных. У больных БА в процессе комплексного лечения была выявлена тенденция к увеличению доли микрои макроцитов, значение среднего диаметра не различалось с показателем до лечения.

Ультраструктурные изменения эритроцитов, выражающиеся в тенденции к приобретению ими нормальной конфигурации за счет увеличения количества дискоцитов и уменьшения числа эхиноцитов, каплевидных, мишеневидных, овалоцитов и сфероцитов, возможно, свидетельствуют о воздействии лазерного излучения на поверхностную мембрану клеток, что согласуется с экспериментальными данными об изменении эритроцитарной мембраны в результате прямого воздействия низкоинтенсивного лазера на клетку (45, 65, 98, 100,136).

Изменения морфологических свойств эритроцитов сопровождаются изменением их ЭФП, свидетельствующего о величине мембранного потенциала. При оценке функционального состояния мембраны эритроцитов у больных ХОБЛ и БА было выявлено, что уже после 5-ти сеансов ВЛОК имело место увеличение ЭФП, значение которого не достигало показателя здоровых людей. После 10-го сеанса уровень ЭФП эритроцитов становился существенно выше и достоверно приближался к нормальным значениям, что является подтверждением полноценного функционирования мембраны эритроцита (р<0,05). При корреляционном анализе нами не было выявлено влияния показателей газового состава крови на ЭФП эритроцитов у больных ХОБЛ и БА (р>0,05).

Увеличение ЭФП в процессе лечения, возможно, связано с ростом числа молодых эритроцитов, которые имеют более высокий электрический заряд (57), при этом корреляции ЭФП с общим количеством ретикулоцитов нами не было отмечено (р>0,05).

В процессе комплексного лечения с применением ВЛОК были выявлены косвенные признаки активации эритропоэза и усиленной продукции клеток. Так, согласно данным исследования морфологии ретикулоцитов у больных ХОБЛ и БА после курса лазеротерапии отмечалось повышение всех классов ретикулоцитов по классификации Гейльмейера и их общего количества (р<0,05) по сравнению с исходными данными, что свидетельствует об активности костномозгового кроветворения.

Проведенные нами исследования показывают, что лазеротерапия приводит к положительным морфофункциональным сдвигам, позволяющим рекомендовать включение ВЛОК в комплексную терапию ХНЗЛ. Характерное для больных ХОБЛ и БА увеличение числа ретикулоцитов и их молодых форм указывало на омоложение пула периферического эритрона и, тем самым, на повышение продукции эритроцитов. Эти изменения, по-видимому, обусловлены адекватной и компенсаторно повышенной продукцией эритроцитов вследствие первичной дыхательной гипоксии.

Эффективность комплексной медикаментозной терапии с применением ВЛОК достоверно превышает эффективность традиционной медикаментозной терапии, как в отношении улучшения формулы эритроцитов, так и в отношении функции мембраны эритроцитов. Возможно механизмом положительного действия лазерного излучения, по мнению одних авторов, является непосредственное влияние на поверхностную мембрану клеток и обратная трансформация измененных форм эритроцитов в результате прямого облучения на клетку или вследствие фотоинициации свободнорадикального окисления в эритроцитах (21, 45, 51, 100). Другие авторы предполагают, что под действием гелий-неонового лазера происходит раздражение костного мозга и органов, депонирующих элементы крови, продуктами распада старых эритроцитов, в результате чего происходит усиленный выброс дискоцитов в кровоток (22, 43).

Таким образом, результаты сравнительного анализа свидетельствуют о преимуществах комплексного лечения с включением ВЛОК по влиянию на структуру и функцию эритроцитов у больных ХОБЛ и БА, а именно на полноценное функционирование поверхностной мембраны клеток и омоложение пула периферического эритрона и, тем самым, на повышение продукции эритроцитов. Применение только базисной медикаментозной терапии для лечения БА и ХОБЛ не оказывало существенного влияния на количественный и качественный состав эритроцитов и их функциональную активность.

Накопленные клинические наблюдения убедительно свидетельствуют о благоприятном действии внутривенного лазерного облучения крови на течение различных заболеваний легких. Широкий спектр лечебного эффекта низкоинтенсивного гелий - неонового лазерного излучения патогенетически обосновывает применение метода при ХНЗЛ, поскольку он оказывает иммунокорригирующее действие, улучшает кислород-транспортную функцию крови, влияет на гемореологические свойства крови, способствует восстановлению в системе ПОЛ-антиоксиданты (7, 16, 26,37, 68 69, 87, 124).

Результаты наших наблюдений подтверждают, что у больных ХОБЛ и БА на фоне медикаментозного лечения с включением внутривенного лазерного облучения крови в более короткие сроки нормализовалась температура тела, уменьшались интенсивность кашля и одышки, усиливалось отхождение мокроты, сократилась продолжительность и частота приступов удушья, исчезал акроцианоз. Положительная аускультативная картина характеризовалась исчезновением или уменьшением сухих и влажных хрипов.

Клиническая эффективность комплексного лечения с применением лазеротерапии также подтверждалась динамикой показателей функции внешнего дыхания: у больных ХОБЛ и БА после лазеротерапии наблюдалась тенденция к улучшению бронхиальной проходимости, отмечалось статистически значимое увеличение ОФВь ОФВ]/ФЖЕЛ, СОС 25-75%, ПОС, ФЖЕЛ по сравнению с показателями больных первой группы, которым проводилось только медикаментозное лечение (р<0,05). После медикаментозной терапии все параметры бронхиальной проходимости также изменялись в положительную сторону, но статистически значимых различий не было выявлено (р>0,05).

Исходные нарушения газов крови укладывались в типичную, характерную для данных патологий картину гипоксемии, степень которой после сеансов БЛОК в комплексе с базисной медикаментозной терапией существенно уменьшалась. Так, при исследовании показателей газового состава крови после комплексного лечения отмечалось статистически значимое увеличение парциального напряжения кислорода (рОг) и сатурации кислорода, а также уменьшения парциального напряжения углекислой кислоты (рСОг) (р<0,05). После проведения только медикаментозной терапии также наблюдалась тенденция к улучшению газового состава крови, однако статистически достоверной разницы не выявлялось (р>0,05). Увеличение р02 после сеансов лазерного облучения связано, по-видимому, не только с улучшением бронхиальной проходимости, но и количественными и качественными изменениями периферического звена эритрона у больных ХОБЛ и БА.

Эффективность комплексной терапии с использованием БЛОК у больных ХОБЛ и БА отмечали с помощью лабораторных тестов. Так, наиболее выраженное понижение показателей воспалительного синдрома, а именно уровня лейкоцитов, СОЭ, СРБ, фибриногена по сравнению с исходными данными было выявлено в группе пациентов, которым проводилась комплексная терапия с включением БЛОК (р<0,05). В ходе медикаментозного лечения наблюдалась тенденция к снижению показателей воспаления, но статистически не значимые (р>0,05).

Таким образом, у больных ХОБЛ и БА, получивших курс внутривенного лазерного облучения крови в комплексе с традиционной медикаментозной терапией, наблюдалось достоверное улучшение клинико-лабораторной картины в виде купирования основных симптомов, повышения уровня парциального напряжения кислорода в крови, нормализации показателей воспалительного синдрома и уменьшения степени обструкции дыхательных путей.