Автореферат и диссертация по медицине (14.00.32) на тему:Морфо-функциональные особенности регенерации эндотелия грудного протока

На правах рукописи

I (П ■.

\ СЕСОРОВА Ирина Сергеевна - •"/,,

МОРФО-ФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ ОСОБЕННОСТИ РЕГЕНЕРАЦИИ ЭНДОТЕЛИЯ ГРУДНОГО ПРОТОКА

(экспериментальное исследование)

(14.00.32 — гистология, цитология, эмбриология; 14.00.02 — анатомия человека)

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Москва 1995

Работа выполнена в Ивановской государственной медицинской академии.

Научные руководители: >

член-корреспондент АМТН, доктор медицинских наук, профессор А. А. Миронов,

доктор медицинских наук, профессор Г. В. Юдин.

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор В. В. Банин,

доктор медицинских наук, профессор В. В. Шилкин.

Ведущая организация — -

Российская медицинская академия постдипломного образования;-

Защита диссертации состоится « . . . » . . . . 1995 г.

в . . . часов на заседании диссертационного совета Д 084.14.04' при' Российском государственном медицинском университете по адресу: 117869, Москва, ул. Островитянино-ва, д. 1.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке РГМУ. Автореферат разослан « . . . »...... 1995 г.

Ученый секретарь диссертационного совета доктор медицинских наук,

профессор А. Н. ТИХОМИРОВ

ОЕШДЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

АКТУАЛЬНОСТЬ ПРОБЛЕМЫ. В последние два десятилетия весьма интенсивно развивается клиническая лкмфология, предусматривающая активное воздействие на лимфатическую систему (дренирование лимфатических протоков, эндолимфатическое и лимфотропное введение фармакологичесготх средств и т. д.) ( Левин Ю. М. 1987; Борисов A. R с соат. ,1995).

Травматичность ряда методов лнмфотерапии ( |сатетеризация грудного протока и крупных лимфатических сосудов), нередко возникающие осложнения (лимфостаз, тромбоз) и неудачи после проведения реконструктивных операций, применяющихся на лимфатических сосудах, делают необходимыми экспериментальные исследования, касажпщеся морфологии и закономерностей восстановления компонентов стенки лимфатических (соллекторов. В особенности это справедливо в отношении эндотелия, выстилаяцз-го лимфатические сосуды, его резистентности и потенциальных возможностей к восстановлению после различных повреждений.

Нужно отметить, что если в отношении артерий и вен эти аспекты достаточно полно освешаны в работах отечественных и зарубежных ученых ( Schwartz ам. et al. 1973, 1976, 1981; Babbiarii a et al 1979; Reidy MA. et al. 1931; Kfegari S. et aJ. 1887; Pool T.J. et al. 1991; Рехтер ЯД. с соавт. 1990, 1991), то сведения о механизмах резндотелизации лимфатически сосудов практически отсутствуют. Необходимость заполнения этого пробела в понимании общих закономерностей регенерации сосудистого эндотелия предполагает исследование конкретных механизмов восстановления эндотелия лимфатических коллекторов после повреждений.

ЦЕЛЬ И ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ. Целью работы явилось проведение морфо-функционального анализа механизмов репаративной регенерат™ эндотелия грудного протока.

Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

1) изучить, на модели локального повреждения (критодест-

рукцшО стенки грудного прото;са кошки, механизмы реэндотелиза-ции в условиях сохранения соединительнотканной структуры ло-дэндотелиального слоя.

2) исследовать динамику дифференцировки клеток в процессе восстановления эндотелиального монослоя.

3) проследить изменения параметров тканевой организации эндотелия в динамике регенерации и последующих адаптационных перестроек эндотелиального пласта.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА.

Впервые проведено комплексное исследование морфологии эндотелия грудного протока в условиях репаративной регенерации с использованием современных методов световой и электронной микроскопии.

Изучены временные характеристики процесса регенерации лимфатического эндотелия. Показано, что закрытие дефекта в эндотелии грудного протока происходит быстрее, чем в артериях и венах и завершается в течении трех суток.

Впервые прослежено влияние лимфокоагуляции на процесс закрытия дефекта эндотелиального монослоя лимфатического сосуда и взаимодействие клеток лимфы с раневой поверхностью и мигрирующими клетками эндотелиального пласта. Новыми являются данные о вовлеченности различных элементов цитоскелета эндотелиальных клеток грудного протока в обеспечении их миграции и пролиферации.

Выявлена динамика дифференцировки эндотелиальных клеток грудного протока после полной резндотелизации монослоя, заключаются в постепенной трансформации типовых характеристик эндотелия по мере созревания вновь образованного эндотелиального шнослоя. Показано, что особенностью реорганизации вновь образованного эндотелиального пласта является прогрессирующе увеличение упорядочности его организации.

ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИШСТЬ работы заключается в выявлении основных направлений реэндотелизации грудного протока и влияния на этот процесс факторов микроокружения.

Практическое значение имеют данные о потенциальных воз-

- б -

мощностях лимфатического эндотелия к репаравдл, а также полноценности регенерации эндотелиального монослоя после поврежде ний. Результаты работы могут быть использованы в клинической лимфологии при усовершенствовали лечебных манипуляций на лимфатических сосудах, а также могут создать основу для понимания патогенеза лимфостаза и лимфокоагуляцли.

Полученные данные внедрены в учебный процесс кафедры ана-■ томии и оперативной хирургии, патологической анатомии Ивановской медицинской академии и ка^дры физиологии человека и животных Ивановского государственного университета.

ОСНОВНЫЕ ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ.

1. Особенностью регенерации эндотелиального пласта грудного протока является отсутствие фазы формирования дефекта в зоне криоповреждения: процессы слущивания погибших и образования новых эндотелиальных клеток проходят одновременно.

2. Механизм ответа эндотелиального пласта на повреждение является принципиально общим для кровеносных и для лимфатических сосудов; он проявляется в миграции и пролиферации ближайших к зоне повреждения эндотелиальных клеток.

а Реэндотелизация зоны криодеструкции стенки грудного протока происходит через трое суток, т. е. гораздо быстрее, чем в артериальных и венозных сосудах. Окончательная дифференци-ровка эндотелиальных клеток и структурная реорганизация вновь сформированного монослоя завершается лишь через месяц после повреждения. <

■ АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ Основные полояения диссертации доложены на Всероссийской конференции по лимфологии в Москве в 1Я93г., на Ыехкафедераяьной конференции ЯГНА и НГМД в 1995г.

ПУБЛИКАЦИИ. По тема диссертации опубликовано 4 печатных работы.

ОБЪЕМ И СТРУКТУРА ДИССЕРТАЦИИ.

Диссертация изложена на (3*. страницах маяинописи, содержит

_страниц текста, _таблиц, _рисунков. Она вгеггчгюг

введение, обзор литературы, 2 раздела собственных исследований, обсуждение полученных результатов, выводы, злеаэатель ли-

- в -

тературы. Список использованной литературы состою из источников.

ООДЕИШШ£ РАБОТЫ.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

Эксперименты проводили на 75 беспородных кошках обоего пола массой 3,0-5,5 кг. Животные получали стандартное питание и воду для питья ad Ubitm

Под немОуталсвым наркозом (40 мг/ кг веса внутриплевраль-но) в стерильных условиях вскрывалась грудная клетка с помощью разреза третьего и четвертого межреберного хряща. После чего проводилась криодеструкция грудного протока (ГП) в месте пересечения последнего с дугой аорты с помощью медного аппликатора с основанием 3 мм, охлажденным в жидком азоте в течении 30 секунд. Зона повреждения метилась порошком активированного угля. Материал для исследования забирался через 12 часов, 1, 2, 3, 7, 14, 23 суток после операции. Все оперативные вмешательства производились в дневное время суток (14 -18 часов).

Для всего комплекса морфологических исследований применялась стандартная процедура перфузионной фиксации. Под нембута-ловым наркозом производили обнажение cisterna enyli. Затем ГП канюлироаали, в течение 30 сек отмывали от лимфы путем перфузии средой 199 с добавлением гепарина (10 Ед/мл; рН-7,4; t-37 С ) под среднефизиологическим давлением, соответствующим скорости истечения перфуаируемого раствора 3-5 мл/мин, после чего ГП перфузировали в течение 5 минут 2,ЬХ раствором глутарового альдегида ("Reanal" ЧДА) на среде 109 (pH-7,4;t=37 С). Сегмент ГП протяженностью 2-3 см иссекали и подвергали иммерсионной фиксации в 2,5 I растворе глутарового альдегида не менее суток.

Выбор методов морфологического исследования определялся поставленными задачами.

СВЕТOOI1TИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ включал изучение полутонких срезов, пленочных и нмпрегнированных препаратов.

Для приготовления ПОЛУТОНКИХ СРЕЗОВ (СМ ПС) отрезки ГП постфиксировали в IX растворе четырехокиси осмия в течение 1 час, обрабатывали 17. раствором танниновой кислоты (Polysciences, США) в течение 40 мин. После отмывки в дистиллированной воде образцы обезвоживали в спиртах восходящая кон центрации и абсолютном ацетоне, и заливали в аралдит (Fluka, Швейцария). После полимеризации на ультрамикрстоме LKB-III (Швеция) готовили полутонкие срезы (1,5-2 мкм), перпендикулярные оси сосуда, которые 01сраяшвали метиленовым синим и просматривали в микроскопе МЕИ15 (ЛОУО, Россия).

Для изучения формы клеток изготавливали ПЛЕНОЧНЫЕ ПРЕПАРАТЫ (СМ ПП) по методике Sehvartz and Benditt (1973) в модификации IL Д. Рехтера и соавт. (1391). После фиксации, разрезанные вдоль отрезки ГП обезвоживали в серии спиртов восходящей концентраций. Обезвоженные образцы погружали на несколько секунд в целлоидин (20Х раствор в смеси абсолютного спирта и диэтило-вого эфира 1: 1), затем помещали на предметные стекла, предварительно покрытые целлоидином (субэндотелиальной стороной к стеклу) и держали под прессом 15-20 мин. После этого пресс снимали и стекло с прикрепленным кусочком помещали на 30 сек. в 301 спирт для набухания целлоидина Затем кусочки отделяли пинцетом от стекла. В результате на стекле оставалась целлоидиновая пленка с прикрепленным к ней монослоем субзндотелкаяь-кых i слеток. Пленочные препараты окрашвали гематоксилином и просматривали в микроскопе МЕИ-15 (ЛОISO, Россия).

Для оценки ультраструктурных изменений в эндотелии ГП применяли метод ПРОСВЕЧИВАЩЕЯ ЭЛЕКТРОННОЙ МИКРОСКОПИИ (ПЭМ) ультратонких срезов. Блоки, с которых предварительно готовили полутонкие срезы (как описано выше), прицельно затачивали я ультратомировали на ультрамикротоме LKB - III. Ультратонкие срезы контрастировали уранилацетатом и цитратом свинца (Ушам, 1975) и просматривали в просвечивающем электронном микроскопе ЭМВ - 100 АК. (НТО "Электрон", Сумы, Украина).

Для исследования рельефа эндотелиальной поверхности ГП использовали мэтод СКАНИРУЮЩЕЙ ЭЛЕКТРОННОЙ МИКРОСКОПИИ HATЯВНЫХ ПРЕПАРАТОВ (СЭМ). Препараты для СЭМ НП готовили по oöqsn-ринятой методшоз (Волкова О. а и др., 1S37). Пэсле перфузискной

фиксации образцы в течение суток хранили в 2,5Х растворе глу-тарового альдегида Затем, твдтельно отмыв в изотоническом фосфатном буфере, постфиксировали в IX четырехокиси осмия в течение часа, вновь отмывали в изотоническом фосфатном буфере, образцы обрабатывали IX раствором таннпновой кислоты в течение 40 пил. Все операции проводились при комнатной температуре. После отмывки в дистиллированной воде препараты обезвоживали в серии спиртов восходящей концентрации и абсолютном ацетоне. Обезвоженные препараты высушивали путем перехода через крити-ческуи точку из жидкой углекислоты в установке НСР-2 (Hitachi, Япония), монтировали на столики, напыляли платиной в аппарате JFC -1100 (Hit.ac.hi, Япония). ■ Анализ объектов проводили в микроскопе S-570 (Hitachi, Япония) при ускоряющем напряжении 20 кв.

Для изучения особенностей строения цитоскелета ЗК в процессе ренаративной регенерации использовался метод СКАНИРУЮЩЕЙ ЭЛЕКТРОННОЙ МИКРОСКОПИИ ДЕТЕРГЕНТНО ЭКСТРАГИРОВАННЫХ ПРЕПАРАТОВ (ОЭЫ ДЗП.) (Караганов ЯЛ. с соавт. 1983). Грудной проток в течении 30 сек. отмывали средой 199, затем 5 мил. перфузирова-ли 1 7. раствором Тритона Х-100 на цитоскелетстабилизирующем буфере (Tindall, Sve-ndsc-n 1982). Далее приводилась перфузия 2, 5 X раствором глутароаого альдегида в течении 2 мин. , Затем препараты готовились для СЗМ.

Для визуализации мзжклаточних границ применяли метод СКА-НИРУОДЙЯ ЭЛЕКТРОННОЙ МИКРОСКОПИИ ИШ'ЕГКИРОПАНШХ ПРЕПАРАТОВ (СЭМ ИЛ). После лерфуэионной фиксация ГП отмывался в течение 1 мин. 5Х раствором глюкозы. Затем через сссуд последовательно перфузировали 0,15 X раствор A¿N0 (0,3 мин.), БХ раствор глюкозы (1 мин.), 3% СоВг и 1 X NH Вг (0,5 мил.), 57. раствор глюкозы (1 мин.) и 2,5Х раствор глухароьсго альдегида (1 мин.). Участки грудного протока иссекали, разрезали вдоль оси сосуда, после чего образцы готовили ддл СЭМ по стандартной методике.

ЮЬКЖТРИЧЕОКНЯ АНАЛИЗ.

С цельи объективизации обнаруженных тенденций структурной перестройки как отдельных эндотелиоцитси, так и экдотелиально-го пласта в целом при ренаратив-'Ой регенерации были выбраны

- s -

следующие морфологические показатели: средняя толнзгна эндотелия, численная плотность и удельный объем органелл цитоплазмы (свободных и связанных пиноцитозных везикул, митохондрий,ГЭС), средняя площдь ЭК, степень связности ( т. е. число смежных с данным эндотелиоцитом клеток), длина, ширина и периметр ЭК. Количественный анализ полненных проведен в соответствии с принципами случайности и репрезентативности выборки. Параметры ЭК определяли путем проецирования негативов, полученных при СМ ИП или при СЭМ ИП, на квадратную морфометрическую решетку с шагом 5 мм. На полученных "картах" для каждой клетки определяли степень связности, площадь клетки, периметр границы, длину и ширину.

Контролем в эксперименте служили интшстные животные (п=5).

С целью изучения влияния на структуру грудного протока самой процедуры оперативного вмешательства исследовались сосуды 6 лолиооперированных кошек. Забор материала производился через 12 часов, а далее через 1, 2, 3, 7 и 28 суток после операции. Образцы готовились для сканирующей и просвечивающей электронной микроскопии ультратонких срезов.

РЕЗУЛЬТАТЫ РАБОТ H И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ.

В качестве модели репаративиоЯ регенерации лимфатичесгаэго эндотелия мы использовали криодеструкцига межклапанного сегмента ГП кошки. Криодеструкция, локально повреждая эндотелий, минимально травмирует суОэндотелиальный соединительнотканный слой (Рэхтер М.Д. 1991), свойства которого, как известно , играют важную роль в процессе миграции эедотелиальных клеток (ЭК) (Jackman R. У. 1982). Кроме того, данная модель позволила пренебречь модифицирующим влиянием гладких миоцитов средней оболочки, которые могут существенно влиять на процессы миграции и пролиферации зпдотелиоцитов (Hauclenschild С. С. et al.1979, Wagner V. H. et al. 1983). Преимусрством приманенного нами способа является также строгая стандартизация повреждений, что трудно достижимо при прочих способа* деэндотолзгаации.

Подобная модель использовалась для изучения репаративных процессов в артериях ( Уиронов Л. Л. 1986; Рехтер IL Д. 1987) и

вонах (Еялов С. Л. 1983), что дало возможность объективного сравнения особенностей, а также сроков восстановления эндотелия различных сосудов после повреждения.

Из литературных данных известно, что характер регенерации ЭК артерий изменяется в зависимости от особенностей локальной гемодинамики (Куприянов В. В. с ссавт. , 1993). Поэтому для интерпретации полученных данных ыи использовали в качестве обь-

1

екта исследования только ыежклапанный сегмент ГЛ.

Проведенные нами исследования показали, что механизмы восстановления лимфатического эндотелия на повреждение сходны с репарацией артериального и венозного эндотелия и проявляются в миграции и пролиферации интактных эндотелиоцитов, прилежащих к зоне повреждения, а также в их последующи дифферекцировке. Однако нам удалось выявить ряд существенных особенностей в регенерации эндотелия ГП, которые способствуют восстановлению непрерывности пласта в значительно белее короткие сроки, чем в кровеносных сосудах.

Первая особенность регенерации лимфатического эндотелия состоит в том, что в первые часы, в отличие от артериального и венозного эндотелия не наблюдается образования ограниченного дефекта за счет слущивания эндотелиальных клеток.

Если при криоповреждении артерий и вен ЭК слущиваются в течение 2-3 часов, а деэндотелизированная область покрывается монослоем тромбоцитов, то поврежденные ЭК грудного протока, постепенно разрушаясь, еиэ в течении суток остаются прикрепленными к субэндотелию.

Эндотелиальные клетки при этом силы!о сокращаются. Шжду их боковыми поверхностями формируются цит о; I лаз мат и че с ки е ирли. Лшинальная плазмалеша становится' складчатой и покрывается вздутиями. Она часто имеет в себе разрывы, через которые клеточные органеллы попадают в просвет сосуда. В цитоплазме обнаруживаются большие деструктивные зоны, набухшие митохондрии, мембранные профили.

Разрушение и случиьание эндотелиоцитов происходит также при участии адгезированных к их поверхности многочисленных лейкоцитов и мигрирующих с периферии ЭК. При этом активная ведущая ламеллоплазма лидирующих гчдотелиоцитов внедряется под

фибриновую пленку, отщепляя ее от поверхности сосуда и вытесняя погиОщнв ЭК. -

Одним из ключевых механизмов восстановления целостности эндотелиального монослоя является миграция интактных эндотели-альных клеток граничащих с повреждением. Наши исследования показали, что последовательность двигательных реакций эндотелия ГП в ответ на криоповреждение монослоя в условиях сохранения соединительнотканных волокон подэндотелиального слоя, мало отличается от таковой у эндотелия артерий (Миронов А. А. 1935; Рехтер М.Д. 1987) и вен (Бялов С. Л 1989). Дзрвш признаки миграции эндотелиального пласта мы обнаружили уже через 12 часов после криодеструкции. Они проявились, в распластывании краевых ЗК с формированием структурированной ламеллоплазмы. '¡араз сутки мы регистрируем движение пласта в целом. Эндотелиоциты вытягиваются по направлению движения и приобретают веретено-видную форму. В ЭК резко возрастает густота микрофибриллярной решетки. Околоконтактные сгущэния мнкрофиламентов выражены слабо. Фронт мигрирующего эндотелия имеет неровную границу и характеризуется большим количеством клеток - лидеров.

Численная плотность клеток по сравнению с контролем снижается на 40,7 X. (Рис.1) и сохранялась сниженной вплоть до 2-х суток.

Средняя плоцрдь эндотелиоцитов на краю повреждения увеличивается более чем в 3 раза к концу первых суток (Рис. 2), что происходит, по-нашему мнению, как за счет распластывания ЭК, так и за счет образования 2-х и многолдерных клеток.

Возникновение уда в первый день после криодеструкции в области зоны повреждения многоядерных ЭК является ещэ одной особенностью регенерации эндотелия грудного протока. Эти клетки имеют суц^ственно большую плогцадь поверхности и способны быстро суи^ствлять замену погибших одноядерных эндотелиоцитоа (Иванова Е Ф. 1984). подобный фенемен был обнаружен при регенерации артериального эндотелия после многократных повреждений (Рехтер и. Д. 1987).

На вторые сутки после повреждения средняя плоь^здь зндоге-лиальных клеток грудного протока на границе дефекта начинает уменьшиться а их количество (численная плотность) напротив,

возрастает (Рис. 1). Это может свидетельствовать о преобладании процессов пролиферации над миграцией ЭК в зоне криодеструкции. На третьи сутки, после замещения дефекта вновь сформированным зндотелиальным пластом, средняя площадь клеток становится существенно ниже контрольных значений. Интересно, что к этому времени в зоне дефекта и граничащих с ней участках практически исчезают многоядерные клетки. Это позволяет предположить, что по крайней мере в некоторых ЭК процесс митоза "растянут" во времени: вначале образуются многоядерные клетки, а в последующем происходит цитотомия.

Пролиферация ЭК является одним из основных механизмов восстановления повреждений больших размеров. Первые единичные митозы были обнаружены в эндстелиальном пласте к концу первых суток после повреждения. Характерно, что процесс митотического деления часто происходит без изменения формы распластанных клеток в виде, так называемого, " плоского митоза". Подобные особенности не типичны для артериального эндотелия, но встречаются в стенках вен.

Ультраструктурная организация эндотелиоцитов в зонах, прилежащих к повреждению характерна для активно мигрирующих и лрилиферирующих клеток. Отмечается хорошо развитая гранулярная эндоплазматическая сеть, средняя объемная фракция которой достигала максимального значения ко 2-му дню после повреждения и составляет 1,52+ 0,37 7. (Р< 0,01). Крупные, длиной до 0,64 мкм, округлые или овальной формы митохондрии локализуются, как правило, скоплениями в районах развитой эндоплазматической сети. Их объемная плотность ко 2-му дню составила 20,2+ 038 (Р <0,01). В клетках отмечается значительное количество свободных рибосом и полисом.

Численная плотность микровезикул в 1-й день после криодеструкции увеличивается почти вдвое (32,02+0,83) Р<0,05, а к 3-му дню наблюдается их снижение на 13 X по сравнению с контролем (Р<0,05).

Особенностью восстановления целостности стенки ГП является и то, что все репаративные процессы происходят под фибриновой пленкой различной тодшины. которая появляется в первые сутки после криодеструкции над зоной повреждения. Уже к второму дню

фибрин покрывает густой пеленой и регенерирующий эндотелий. Кроме фиОриновой пленки в зоне деЗвкта встречаются конгломераты фибрина в областях обнажившегося субэндотелиального матрик-са Здесь же можно видеть фрагменты и дериваты мембран, многочисленные адгеяированныа лейкоциты и их скопления, а в единичных случаях плотные тромботические наложения, препятствующие регенерации эндотелиального пласта СиОрин чаще всего лизиру-ется к концу 3-х суток после повреждения, т.е. к моменту полного закрытия дефекта лейкоцитами и эндотелиальниыи клетками. Повышенная адгезия лейкоцитов к поверхности эндотелия наблюдз-ется на протя.шнии всего процесса резндотелпзации и морфологических перестроек новообразованного эндотелиального пласта и постепенно уменьшается с течением времени.

Через трое суток после криоалллшсацпи дефект мемслаланного сегмента ГП, равный 3 мм, полностью резндотелизируется. Процесс реэндотелизацми в лимфатическом сосуде протекает, таким образом, быстрее, чем при аналогичном повреждении в аорте (7 -14 дней .Рехтер Ц. Д. 1987) и нижней полей вене (3-7 дней, Валов С. Л. 1939).

Неотъемлемым составляющим процесса репаративной регенерации эндотелия служит дк-Меронцировка ЭК и дальнейшая структурная перестройка вновь сформированного эндотелиального ыонослоя (Саложпикова Л. Р. 1037; Рехтер и. Д. 1990). Вновь образованный эндотелиальный монослой характеризуется высокой численной плотностью клеток, преЕкалюирй контрольные значения более чем в 2 рала, низкой средней пловддью эндотелиоцитси, а таклу незначительным количеством мжродефектов.

Показателем ингенсишюсти реорганизации вновь сфорыпрован-ного пласта ЭК и их упорядоченности, молет быть степень связанности клеток, т. е. число клеток - "соседей". Анализ гистограмм распределения значения степени связанности показал преобладание к 3-м суткам зндотелиальшге клеток с иецтагонадыюй симметрией (Рис 3). Около -10 X клеток контактирует с пятью соседями, а средняя степень связности клеток в пласто составляет 5,баю.04, что ниже контрольных значений. Иятнктный эндотелий характеризуете;! ге'сснгоналтий симметрией. Если магеьлгичсохчэ ожидание задисьмогти пленили ЭК грудного протона от етег.'ЛШ

связности в норме имеет линейный характер (Шишло В. К. с соавт. 1386), то в данном случае оно описывается параболической кривой (Рис. 3).

Через 7 суток после повреждения эндотелиальный пласт характеризуется полиморфным строением; встречается кластеры мелких, округлых клеток; расположенных в виде розеток, состоящих из эндотелия самых различных форм, размеров и ориентации.

В составе эндотелиального монослоя встречаются вакуолизи-рованные эндотелиоциты и клетки с злектронноплотной цитоплазмой. На импрегнированных препаратах обнаруживаются аргенто-фильные ЭК. Все это свидетельствует о гибели части клеток вновь образованного эндотелиального пласта. Отщепление нежизнеспособных ЭК происходит без обнажения по дэндотелиального слоя за счет распластывания соседних клеток. При этом увеличивается средняя площадь клеток в пласте (Рис. 2.), которая на 7 сутки возрастает на 45 I (р <0,05), по сравнению с предыдущим сроком, в то время как численная плотность клеток в пласте уменьшается . Она достигает контрольных значений лишь к 28 дню после криодеструкции.

На 7 сутки средняя степень связности клеток равняется 5,75 -»0,06. Гистограмма распределения клеток по степени связности имеет максимум в точке б, т. е. значительное число клеток приобретает гексакгонеальную симметрию. График зависимости площади клеток от степени связности близок к прямой (Рис.3), что свидетельствует о тенденции к повышению упорядочности расположения клеток в монослое на фоне имеющзгося гетероморфизма.

Дальнейшая перестройка вновь образованного монослоя сопровождается нормализацией организации тканевых мозаик и снижением полиморфизма эндотелия. Через 14 дней средняя степень связности |да>ток в пласте составляет 5,88+0,01, а к 28 дню 5,92+0, 02, что близко к контрольным значениям (5,08+0,04). Линейная зависимость средних величин площадей от степени связности клеток свидетельствует об относительно высокой упорядочности упаковки клеток в пласте уже к 14 дню. К 28 дню после повреждения адаптационнги перестройка эндотелиального шнослоя практически заяергоаются. к атому сроку восстанавливаются антикоагулянтные свойства эндотелиального пласта. Весьма редко обнаруживается

адгезия одиночных лейкоцитов к новообразованному эндотелии

Степень ди4ф?ренцироБки эндотелиоцитов определяется врепеней, прошедший после деления. Шые ЭК в состава вновь сформированного монослоя в центре бывшего дефекта через 3 дня после повреждения характеризуется развитым биосинтетичесюш аппаратом и сниженной объемной плотностью микровезгасул.

По мере повышения диффэренцировки клеток набявдалось постепенное снижение объемной плотности гранулярной зндоплазмати-ческой сети и митохондрий и повышение соответствующего показателя для микровезикул. Параллельно идет формирование сгузцэний ыикрофиламентов в зонах контактов эндотелиальных клеток шжду собой и с подэндотелиальныы слоем. Подобная динамика характерна для дифференцировки не только эндотелиальных, но и некоторых других, например гладкомыпечных, Iслеток. Шлодые, активно синтезируицие ЭК' ("синтетический"фенотип) постепенно трансформируются в зрелые дефинитивные формы, характерные для соответствующих сосудистых сегментов. Таким образом, в грудном протоке процесс репарации эндотелиального дефекта и дифференцировки ЭК в составе реорганиэуацвгося эндотелиального пласта полностью завершается через иесяц посла повреждения.

Рис.1. Средняя плотность клеток эндотелиального пласта в различные сроки после повреждения. К - контроль. Рис. 2. Изменение площади эндотелиоцитоа межклапанного сегмента грудного протока в динамике репаративной регенерации. К -контроль.

Рис. а А - распределение зндотелиальных клеток по степени

С&ЯЗЧ

ВЫВОДЫ.

1. Регенерация поврежденной эндотелиальной выстилки в грудном протоке происходит в целом быстрее, чем в артериях и венах.

2. Криоповреждение эндотелия грудного протока не сопровождается формированием обширной деэндотелиэированной зоны. Разрушение и слущивание поврежденных ЭК осун^эствляется под пленкой фибрина с участием адгезированных к эндотелиальной поверхности лейкоцитов и зндотелиоцитов, мигрирующих из пограничных зон.

а Восстановление целостности эндотелиального монослоя происходит в течение трех суток за счет миграции и пролиферации интактных ЭК, располагающихся на границе криоповреждения, а также за счет образования многоядерных ЭК.

4. Дифференцировка ЭК после восстановления целостности эндотелиального пласта проявляется в снижении, удельного объема органелл биосинтетического и биоэнергетического аппарата, повышении удельного объема микровезикул, формировании околскон-тактных микрофиламентов.

5. Параллельно с ди№>ренцировкой эндотелиоцитоа их численная плотность в регенерате снижается за счет гибели и деск-вамации части клеток и распластывания соседних ЭК. К концу месяца после повреждения восстанавливается упорядоченность организации клеток в пласте.

6. Через месяц после повреждения основные морфофункцио-нальные и топологические характеристики эндотелиального пласта, покрывающего зону деструкции, близки к характеристикам эндотелия интактной стенки грудного протока.

РЕКОМЕНДАЦИИ, ПО ИСПОЛЬЗОВАНИЮ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ.

Получение? и работе давние о закономерностях востановле-ния эндотелия грудного протока целесообразно использовать а учебном процессе при изложении курса гистологии, методические разработки - в работе лабораторий электронной микроаюпии и экспериментальной лимфодопш.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ;

1. Сесорова И. С.. Банных С. И., Миронов А. А. Механизмы регенерации эндотелия грудного протока. - В кн: Новое в лимфологии: клиника, теория, эксперимент. Тезисы Всероссийской конференции. М.- ЦИУВ - 199а- С. 98-99.

2. Полянская JL И., Сесорова И. С. Новые методы исследования лимфатической системы. - В кн: Вопросы клинической лимфологии. Тезисы III- межрегиональной научно-практической конференции. Андижан. - 1993. - С.

3. Bannich S. I., Bannich ÜN., Sesorova I. S. .Mironov A. A. Regeneralion оГ the endothelium оГ thoraclc duct //Microscopía Electrónica 14 (2).- Supp. 1. -1993. - P. 199-200.

4. Сесорова И. С., Сесоров В. Е , Полянская 1L И., Миронов А. А. Клеточный механизм регенерации эндотелия грудного протока после криодеструкции. // Ангиология и сосудистая хирургия. -N. 2. - 1995. -С. 89.

Подписано к печати 19.07.1995 г. формат бумаги 60x84 1/16. Печ.л. 1,0. Усл.п.л. 0,93. Тираж 75 экз. Заказ 2039/р.

Типография ГУ №К Минтопэнерго РФ, г.Иваново, ул.Ермака, 41