Автореферат и диссертация по медицине (14.00.16) на тему:Морфо-функциональное состояние эритрона при острой постгеморрагической анемии

РОССИЙСКАЯ АКАДШЯ ШДВДШЕЯИХ НАУК ТОМСКИЯ нлучеья ЦЕНТР

научш- ксслгдордткльскга инстигп шшкожгии

ЦЭРвО-вУНКЦИЭНАЛЬЮЕ СОСТОЯНИЕ ЭНШОЯА ПРИ ОСТРОЙ ПОСТШОРРАПГЧКСКОЯ АНШИ

14.00.16. -патофизиология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на ссискатю ученой степе»« кандидата мэдицинских наук

* о ОД

2 а СЕН

на правах рукипкси.

Сайфутдино^а Галина Борисовна

ТОЮ - 1991

Работа выполнена на кафедре патофизиологии Сибирского Государственного медицинского университета и в Шучно-иссладо-вательском институте фармакологии ТНЦ РАМН

. ИДУЧНЬЙ РУКОВОДИТЕЛЬ академик РАШ В. Д. Гольдберг

ОФИЦШШКЬЕ ОПШЯЕНГЫ члая-корраспондеет РАШ А, К Дыгай * кандидат шдицинсгаог наук, ассистент И. Д. Евтушенко

шдатщ УЧРЕ1ЩЕНИЕ Каучяо-иеслвдоватвльский институт онкологии ТЩ РАМН

Защита состоится " " 1ЭЭ4г. в 14. ТО часов на эаседа-

нот специализированного Ученого Совета К 001. 33. 01. при НИИ фармакология ТЩ РАШ по адресу: 634028, г. Томск, пр. Лэнина, 3.

С диссертацией мэжю ознакомиться в библиотеке НИИ фармакологии ТЩ РАМН

Автореферат разослал 094г.

Ученый секретарь

специализированного совета А

кандидат биологических наук• В. К Горшкова

• (Г'

Актуальность проблемы. Современная гематология особоь внимание удаляет изучению механизмов регуляции системы крови яа разных уровнях ей организации как а физиологических условии*, так и гтри действии на организм чрезвычайных факторов, среди - них - острая кровопотеря," занимался важное место в экппзришнташг-яой гематологии я часто встречающаяся в клинической медицина.

К настоящему врешни накоплено достаточное количество фаа-тичйского материала о картине крови при острой крогопотврв а сроках развития острой гсостгеморрагической анемии (Т.Н.дэбеде-ва, 1940; Г. Е Головин,U. 5. Рахимова, 1972; Е К. Кидырмавв, 1973; Г. Г. Старшова с сдавт. ,1991 и другие). Изучены штаболяческие сдвиги в периферической кровн, костном мозге и других органах (А. IL Ястребов, 1986; Н А. Горбунова, 1991; Г. С. Левин, 1981 я другие) , состояние системы гемостаза (Б. А. Серебряная с соавт., 1985), шрфо-функциональное состояние клеток некоторых органов и систем (Е а Береиков, 1987; Р. Ludwig et al. ,1088; Г. Ф. Лескова, 19S0). Имеются данные об изменении шрфо-фуикщв-нального состояния эритроцита при острой постгемзррагичаской анемии, но эти сведения противоречивы (С. Я Рябов, 1971; R В. raw эякова.аг. Холостова, 1979; Р. О. Malbörg et al. ,1979; Ь Г. Грина-тейн с соавт. ,1983). Практически не изучались процессы геыогло-бияизации эритроцитов при острой кровопотере. Слабя изучена реакция пула клеток-предшественников эритрспоэаа, связь ее с динамикой эрнтропозтичэской активности- Крайне недостаточен к противоречивы сведения о состоянии эритрона при повышенной путём ограничения плацдарма кроветворения нагрузке на костный шаг.

Цель исследования. Вскрыть мекаяизиы реганорации и нарушения юрфо-функцюнальяых характеристик зритрсна при острой постгедаррагкческой аяемка. '

Основные задачи, постззлздюе а работа.

1. Изучить ттяшт, ейэяккззв?» s периферической крови ц органах краветворзккя в года развития острой постгешррагй-ческой анемии.

г. Исгтледоват! состояние процессов пролиферации и дифференцировав на уровне клеток-предоественвикоа эритрошээа и геюпо-атических островков.

а Изучить связь между состоянием регенераторнш провесов я уровнем эрятрояоагичес кой активности.

4. Оценить некоторые морфо-функциоиальнда особенности эритроцитов после острой кровопотери и в процессе регенерации системы крови.

5. Изучить эффективность процессов гемоглобинизации эритроцитов при острой постгеюррагической анемии.

6. Изучить мпрфо-функциональное состояние эритрояа в условиях дополнительной нагрузки на костный мозг (сшюнэкгоиии).

7. Выявить зависимость процессов кроветворения от доза кровопотери.

Новизна я практическая значимость работы. Впервые комплексно исследованы показатели морфо-функциокадького состояния эритрона при острой постгеморрагической аяешк. 1Ъкйязло, что функциональная недостаточность периферической крэ?*: ¡три острой постгеморрагической анемии может быт» обусловлена я? только изменением количественных показателей,ко я кгызнакяеа качества циркулирущях эритроцитов.

Установлено,что изменения показателей периферической крови связаны с усилен»?« процессов пролиферации и дкДерекцировки ¡««ток в органах креттвордняя на уровне КОЕ-Э и Согэе дифференцируемых элементов, _ Причем сгегень рпилэиия дани« процессов зависят от .глубины и условий акэмиза5$м.

Показано,что активация зритропоэза связана,во-первых, со птрукгурно-фу%арю83Льщлг.1 изменениями гемопоэзивдуцирутерго микролкруаввия, что подтверждается увеличением количества геш-поятичеекгаг островков в кроветворной ткани,усилением продукции зритропоятяческой активности клеточными элементами ГШ, во-вто~ рьа, с увеличены урояня эритргяочтичеекпй активности сыяорот-■'х периферической крзаи.

Получерны- р*рудп,татн вносят вклад в изучение мехаиизмзз кроветшрвой ткани при вкптгзмзльянзг воз-

действиях

Публикации. ГЬ тема диссертации опубликовано 6 печатных работ.

Объем и структура работа Диссертация иалолена на 181 страницах машинописного текста и состоит из введения, «»Túpes глав, списка литературы. Работа иллюстрирована 4 рисуикаыя я 26 таблицами. Библиографический указатель 'включает 313 источников, из них 200 отечественных и 113 иностранных.

МАТЕРИАЛ к даодьг

Эксперименты были проведены на 540 мываг-саыцах линия СШ массой 20-26 г (питомник "Рассвет"; г. Томск). Шред началом исследований мыле ¡i выдерживали в течение 10-14 суток па обшвои пищевом рационе в пластиковых клетках. Все зксперкивЕга были проведены в осекна-аимякй период.

Острая кровопотеря вызывалась путём кровопуйкзяия 20 адн ■40* ОЦК. Сшгензгсгомгя производилась за месяц до потери 402 ОЦК путём вскрытия бршной стенка и тупого удаления сехааеш<л, Изучение показателей длилось 14 суток: сроки псогедовагот посла кровопускания кнтаетпых мышей - 1, 6, 12 часы, 1, 2, 3, В, 7, 10, 14 сутки, спленэктоиировашшх - 12 час, 1, 2, Б, 7, 14 сутки; показатели периферической крови у силепзктоимроЕшшых заветных были исследованы дополнительно через 1, 6 и 12 чассз после кровопотери.

Шкааатели периферической крозя изучались с вош^я об-п^принятыг геыатодагкческих методов. Шрфологичас.тай состав костного мозга я селезенки устанавливался путем исследован:« миело- и сплекогрзш. Ведаланиа гаиопоэтических островков га костного мззга осуиэствляли по ыэтоду Crocker, Gordon (5035). Насчитывалось общ»е количество ГО. содержание-среди ши.аакро-фагпологительных и макр«$ага?р-лц-«:ельвкх ГО. Ка спаи^гадька приготовленных препаратах ГО дш|форзнцйроЕаш!сь на аритрзидныэ, гранулоцитарныв и сшсияние. Полнч&стао гииток-прадщзстаэянкка? зрктропозэа в костном loare л селевен:« ируч&ес^ъ с исзодьзовя.-НИ8М КЛШШрОЕШГСЯ 1П Vitro (Tacove, íiióter, Ui Г.* fill Vil t~r.

1374). ЭПД клеток костного мозга и селезенки ммзей определялась такта с пошщьо клояальйого метода ( ifetcair, 1977).

йчрфэ-функциональяое состояние эритроцитов изучалось посредством определения концентрации липопротеияового комплекса (Barenbaum, 1956) и SH-rpyim (Chevremont, Frederick, 1043). Креме того, определялась сухая масса эритроцитов методом интерференционной микроскопии.

РЕЗУЛЬТАТЫ И Щ ОБСУЖДЕНИЕ Вслед за кровопотерей развивалась острая постгеморрагическая анемия, харакгеряаущаяся рядом сдвигов показателей периферической крови. Ухо с первого часа наблюдения после потери у интакткых мыаей £0 и 40Х ОДЙ были достоверно снижены содержание гемоглобина и гематокритше число. , При этом 40%-я кровопо-теря характеризовалась более глубоким и длительным снижением показатржй, не воссгаяавливаюсднсси к истодным эначэкяям к концу прока эксперимента.

У сшгевзктояироБаяякг животных бшго несколько сньянао содержанке гедаггобина и повыдаяо кшгчрсгво эритроцитов ш сравнения с иггакгвнми. Этот факт свидетельствует об исходной ги-похромаи кгэток, что подтвердилось в дальнейшем исследованием путей массы аритроцптов. Следует отштять, что повшвршгаа количество эрктро^ггов в крет кмв вьггь связано с отсутствием се~ лезевки как органа, уч-гтвушргс в раярушния непсяясцоягп-я зритроцвтов ( К Барта, 1S75).

При сравнении развития острой пос тге моррагиче с ко й авешш после 40%-й кровопотйри у интакпшх и еллэяэкгошгроваяякх мшай содержание гемигдобина, количество эритроцитов и гекатокриткое число у бегседаэёкочных жпвотяых снижались . раяьго и сильнее, 'Зго, очевидно, связано с утратой селезёнки как органа - депо ■фитра!?г?ов.

В период г.осстаяовлвния показателей различая мэддг содер-«.'=!s=u '•^могдал^га, количество:* эрвтроцктов и гекатокритиьм -•;;.'лг}м г '"1?,-еш-?проваяннк интготшк и спленэктомироваикнх шлей , гтрлнпю ужглятпея. В некоторые сроки, например, на К сут-

Б -

1

геи, содержание гемоглобина и эритроцитов посла потери 4QX ОЦК у спленэктомированаыг мший было дагз несколько выше. Очевидно,' ход восстановления показателей периферической крови после кровопотери у мнпей с сохраненной селээёпкой определяется процессами продукции, деструкции эритроцитов и, возможно, влияниеи селезёнки на костномозговое кроветворение. На фоне спленэкгошш острая постгеиоррагическая анемия характеризуется Солее ровным восстановлением показателей периферической крови. '

Кривая подъёма количества ретикулоцитов в периферической крови после кровопотери имела два пика: первый, небольшой (1-е часы), обусловлен выходом депонированных ретикулоцитов из кроветворных органов; второй, высокий (2-10 сутки) ^ увеличением и ускорением продукции эритроидных клеток в постном мозге и селезёнке. Увеличение содержания ретикулоцитов в периферической крови спленэктошфованных мышей менее выраиено, чем у интагсгных мышей с равным объёмом кровопотери. Это свидетельствует об ограничении количества ретикулоцитов продукцией их только в костном мозге, о выпадении участия селезёнки в эритропоззе.

При анализе гемограмм отмечались аяизо- и шйкилоцитоэ эритроцитов, анизохромия, появление единичных норыобластов в крови иа высоте острой постгеморрагической анемии, что указывает на изменение морфо-функционального состояния эритроцитов периферической крови.

Анализ гемограш также позволил установить наличие лейко- 1 цитоза со сдвигом формулы влево в различные сроки наблюдении у всех трех групп мышей, известного а литературе под названием "постгеморрагического" (V. Mohsenin, А. В. Du Bois, 1983; A. U. Волжская с соавт., 1989). Развитие лейкоцитоза происходило аа счет увеличения лимфоцитов,монацитов, нейтроф-шш при потере 20 и 401 ОЦК. В начальный период механизм лейкоцитоза перераспределительный, о чем свидетельствует данные литературы (А. 11 Волжская с соавт., 1989), а также анализ миелограмм. В более поздние сроки,лейкоцитоз, очевидна, обусловлен повышением продукция данного вида клеток в органах кроветворения. Так, а костном мозге в эти сроки отмечалось повышение шпотйческой ак-

тявюстя шгелоидннзс клэток, боле» вырадаэяяое- при потере ЕОХ ОЦК, Следует отметить, что активность лейкапозва в селезёнке, судя по количеству незрелы* я зрелы* лайтрофядьных клаток при 20£-й кровопотере Сига гораздо значительнее и дольше, чем при потере 401 ОЦК, что соответствует гемограмме. С обв^биодогн-чзской точки зрения вполне оправдан тот факт, что при мвяъией кровопотере организм «квотного дажег "позволить себе тратить" часть энаргорэсурсов на миелопозз, в то время как пря потерэ 40Х ОЩ прежде всего нообзгодкш восстановить вшкайщув функции дыхания, вдаоляяеыув зритроидниьи клетками.

Яри анализа геиограш у сплэяэкгомировалньсг гештнда отмечалось некоторое увеличение общрго количества лейкоцжгов, около жеиш популяции кейтрофилов по сравнении с кнтактшода итзани. Лейкоцитоз ка 12 час после кровопотери.Сыл обусловлен, очевидно, перераспределением лейкоцитов. Со 2 суток наряду с лейкоцитозом в периферической крови отмечалось увеличение количества «итогов г иждоидгая клетках газетного мозга.

Исследоа&яие миелограш доказывает варалинную активацию эрктропаэаа. Увеличение количества зретроидныг клеток после кровопотерк отмечалось как в костном мозге, так и а селеаёяке.

ВЬ если в костном мозге анешзированнш: швей количество эркт-

*

роидяыг клеток увеличиваюсь максимум в 2-3 раза, то в селезёнке в разгар анемии содержание зрятрокариоцитов в 10-20 раз превышало исходный уровень. Эти результаты подтверждает ямэпцаеся мнение об активном участии селезёнки а эритрспоэзе у мызей (Д. йГольдбарг, Е. Д ГольдОерг, К Г. В^бин, 1973), особенное условита анемии.

После потери 20 я 40* ОДК увеличивалось количество всех видов морфологически дифференцируема? пралфрярярщп , клеток зригрона и костном мозге. Количество эритробластов при кровопо-тере (при £0Х-й - статистически незначимо, а при 40Х-Й - достоверно) бьют увеличено по сравнению с тггактяыми ливотныия уже в первый час после воздействия, что говорит о быстрой реакции пула эритрояоэтинчувствительных клеток (ЭЧК) ка повывение эрнтро-активности (ЗПА) .в сыворотке, кров» н юндициояиой

среде клеток костного иозга и переходе юс в разряд более -дифференцированных клеток зритроиа ( А, Д. Павлов, Е. Ф. Моршркова, 1987). Количество эритрокариоцитов всех степеней зрелости в раагар анешш было выше у . животных с 202-й кровопотерей по сравнению с потерей 402 ОЩ как в костном мозге, так и в селезенке. В то же время, по полученным данным, регикулоцнтоэ у иы-шй с большей кровопотерей был значительнее, ' и, следовательно, можно говорить о более высокой эффективности эритропоэза у данной группы мышей. (И. Барта, 1975). Исходя из аффектов эритропо-атина и полученных в работе результатов о более высоком уровне ЭПА в сыворотке и супернагантах клеток костного мозга мышей с 402-й кровопотерей можно предположить у них меньшую выраженность неэффективного эритропоэза, повышенное количество перескоков деления, большую скорость выхода эритроцитЬв и ротику- • лоцитов из органов эритропоэза, чем у животных с меньшей по объёму кровопотерей..

Подтверждением и дополнением к сказанному является анализ индексов согревания нормобластов при Z0 и 40£.потере крови. Более значительное снижение индекса созревания при 40Х-Й кровопо-тере может свидетельствовать, во-первых, о более быстрой диффе-ренцировке полихроштофильных нордаОластов в ретикулоцкты и ускоренном выходе последних в кровь, во-вторых, об увеличении дефицита железа и в связи с этим увеличении бааофильности эрет- ■ роидных клеток (Е. Б. Владимирская, 1993), в-третьих, повышеказ доли ранних форм нормобластов может быть обусловлено ускоренными процессами пролиферации я дкффэ ранжировки клеток-предшественников эритропоэза (А. Д.Павлов, Е. б. Шзрв^июва, 1987).

Анализируя миелограмш у сплеиэктомированных шшвй, следует отметить у них исходно повышенное количество баэофильных нормобластов по сравнению с кятзктнши животными. Интересно, что ЭПА снзоротки крови л кондиционной среды костного мозга у сплензктошровагагых мышей была вше, чем у интактных. Обцеэ количество зритроидиих клеток костного мозга после кровоштеря увеличивалось более чем в 4 раза на б сутки эксперимента. Srro увеличение значительнее, чем в костном мозге акешзировант«

мышей с сохраненной селезёнкой. ПЬ-видякаыу, удаление селезёнки как органа, • активно учаетвухщего в репродукции эритроцитов, по-. выдает нагрузку на костный мозг в период острой постгеморрагической анемии. Интересно, что индекс созревания нсрмобластов, будучи исходно ниже у спленэкгоь-йраааняыг мшей (по сравнения с интактяыыи), не изменялся в ходе острой постгеморрагической анемии у них. Очевидно, сыграли роль большая стабильность проницаемости барьера шдду кровью и костным мозгам, уравновешенность процессов активации пролиферации и двфферэяциравки кеаду клетками-прзджзствэпяиками аритропоэза и более арэльаш аритро-йдшйго злздактами вследствие менее выраженного увеличения уровня ЭПА и, возможно, изменённой чувствительности ЭЧВ, в ходе развития острой постгедаррагической аяекйз.

Развитие эритровдной гиперплазии-ксатяого мзвга связало со стимуляцией пролиферации к дифферанцирсзкя клеток-предшественников эрктропоэза типа КОЕ-Э. Ее количество а костном мозге возрастало в ответ на потери 20 к 40% ОГЩ уяе через 1 час после воздействия. Динамика иашнэния содеркаггая KOS-Э в кост;::ы mds-гэ, как и ряда другиз пойазатэлей, вссзла фав:;г«й характер, что определяется, по-видяшму, регуягдаей по кринципу "обратной связи", характерной для гормональной рэгулящм физиологически* процессов, В во«&и к» десяти изучаемых сроков большая кровопо-твря выйывала более йнататчхьное увеличение (или тенденции к нему) количества еритроидякх прекурсоров в частном шзге (табл. 1).

Особенно вкразюняая ективация spBTpanasss на уровне E0S-3 прослазкззаяз^ь в седааётса в отвпт на кровопотери, что подтверждает аетквное участие селезёнки в регенерации крови. Потеря 402 ОЩС вызывала более значительное тзызггдае содержания КСК-Э в селезёнке, чем потеря 202 015? (табл. 2);

Костный мозг сплензктокярова'шк жтотшх характеризовался ' исходной тенденцией к ловьяюнио содержания КОК-Э по сравяевюо с интмтплят мшяш! . .Учитывая зтог IJwci, а также то, что в юст-ном угзге епданэкгомиреяаяида яюсгннх сгиев индекс созревания тсгмгг.'иптоя при тмтнкпг количеств« ба&сфдотос водоФ-

ластов, можно говорить об усилении эритропоээа в костном етггэ через месяц после сплензктомии. Поскольку количество ретккуло-цитов в периферической крови в пределах такового у ютактяых

Таблица 1

Кроветворные клетки-предшественники (на миелокзрисцитов) зритропоаза костного мозга интактных и сплензктошфсва>ш« мышей линии-СВА после астрой потери ZO и 40Х ОЦК (X*m,f\)

сроки ИССЛ9Д0- ваяия, сутки К 0 Е - Э Р1 К 0 В - э Р2

после потери 202 ОЦН после потери 401 ОЦК после потери iCX ОЦК на фоне сплеязкто-мии

контроль 0,38*0,18 0,38*0,18 - 0,63*0,18 >о,об

1 час 1,88*0,30*** 1,00*0,18 * СО,05 - -

В чао 0,50*0,19 1,71*0,36 ** <0,01 -

12 час 0,71*0,29 1,75*0,37 ** <0,05 2,75*0,37*** >0,05

1 • 1,00*0,31 0,80*0,40 >0,05 1,88*0,35 ** <0,03

г 2,38*0,32*** 3,38*0,42*** >0,05 2,88*0,30*** >0,С® '

3 2,57*0,37*** 4, оо*о,зг*** <0,0?: - -

5 1,00*0,33 3,83*0,38 ** <0,01 г,00*0;27АЛ* <0,01

г7 0,63*0,18 1,25*0,37 >0,05 8,55*0,31*** >0,05

10 1,50*0,30 ** 2,67*0,45*** <0,05 - -

14 . 0,25*0,13 0,40*0,15 >0,03 1,38*0,£0 * <0,01

Примечание: в этой и других габлт^а* зэроятяость случайного отличия от контроля-отмечена стгаоази

* - Р<0,05; •** - Р<0,01; *** - Р<0,001. Р1 - вероятность случайного отличгя между показателями при 20 и 402 кровопотере; Р2 - погагателякй при 40Х крозопотэ-

рв у интактных и сплеяэктоийро*вяямг животных:

- 10 -

животных, возмолио, имеет место неэффективный эритрошэа.

В ответ на потери 40Z ОЦК у спленэктомированных животных в костном мозге наблюдалось стойкое повышение количества КОЕ-Э, обеспечввавдэе зритраидную гиперплазию постного мозга (табл.1).

05 активации процессов пролиферации и дифференцировки зритроадных прекурсоров при острой постгедаррагической анемии свидетельствует и факт увеличения в костном мозге числа гемош-зткчэскиг островков (ГО) - шрфз-функциональных- единиц геюпоэ-sa;

. Таблица 2

Кроветворные кветки-предкептвенники эритротааа (на10 клеток) селезёнки ыишй после острой потери 20 и 401 ОЦК (X*4,Pt)

Сроки КОЕ-Э при потере КОЕ-3 при потере Р1

исследо- 20% ОЦК 40% ОЦК

ьашк,

сутки

контроль 0,76*0,30 0,76*0,30 >с,и

1 час 4,83*0,46*** 4,67*0,58*** >0,05

6 час 2,60*0,22*** 2,83*0,31*** >0,05

12 «ас: 2,2S*q,75 л 5,13*0,35*** <0,01

1 2,25*0,25 ** i,,33*Q,42 ** >0,05

2 * £,В7<*0,42 А-А . 4,17*0,57*** >0,05

3 2,00*0,41 * 7,40*0, i'J»**

^ о,аа*о,4о 4,75*0,, <0,00!

7 2,15*0,23 ** 3,63*0,32*** <0,01

10 2,00*0,40 а 2,в0-«0,37*** >0.05

14 i, SCU0,27 2,аа*о,зо***. <0.01

Б »аде развития постгеюррг^йчбсшй аяедаи иайльдалось ушньшэ- • шю ьятшс1ь& арнтрокдвых сс-гровкоа в первв=» часа посла сотерн :

'. - u -

крови у всех групп опытних животных, что является результатом ускоренной дпффереятртровю! и пьогада в периферическую кровь эритроидных кпеток. Дальнейшее увеличения количества эрвтрозд-ных ГО с превышением исходных значений с 1 суток острой зп^мяч объясняет наблвдавшуюся эритроиднуто гиперплазию костного мпггя. • Для повышенного количества, эритроидных кокютптровак!!.'« пред-шественнтков требуется повяленное количество гсмопозтичегких структур, обеспечивающих их дальнейшую дифферепцировку. Причем при 40Х-й кроропотере, в отличив от 20%-й, до ¡сотр. срока зяб-людения количество эригроидякх ГО быловыта исходного уровня. Содержание гранулоцитарных • и сметанных ГО в течении 14 суток было меньше или не отламалось от исходного уровня. По-видимому, данного их количества было достаточно для обеспечения кзрткяы постгеморрагического лейкоцитоз* п периферической крови.

Фазный характер увеличения количества эритроидшх ГО у-сплензетомированных ммпей после кровопотери связал, очевидно, как с усилением процессов пролиферации и дифферет^ровге! эрпт-роидякх клеток, так и с ускоренным выходом их в периферическую кровь. Так, наблюдаемая на 1 и 2 сутки после потери 40% ОЦК гиперплазия эритроидных ГО а костном мозге сменялась отданием их количества до исходного уровня на 5 и 7 сутки, когда в кроги этих животных наблюдался пис ретикулоцигоза, Ka 1 • сутки отмечалось повышение количества смепаиниг ГО, гага© учзстяугщих я репродукции эритроидных клеток (чего не яяОлядалось в других группах анемляироваяных мышей). Возкжно, tro в гиперплазия этого вида ГО принимали участие другие регугопт-рнш мехакяямм по сравнению с эритроядными ГО.

Как я' следовало оютдать исходя из литературных далны* (Н. А.вЭдоров, М. Г,Еахетелилзе, 1973; А. Д. Павлов, 1030),' осгрпр постгеморрагяческая анемия сспрсясчцдаяась пояьакяязм уровня ЭПД; в большинстве сроков экстрг.м?ята ЗПА сыворотки крови и кондиционной среда клеток костного да? г а снли более bstm-wh (или ишли такую тенденцию) при потере ДОГ. ov;*., ч>?м при 20»-й кровогготере (тарл. Э, 4). Полученные результаты в цзлпм сгг дясуггся СО сведениям! о том, что продукция арпТрОГОЗТта* г»а

ьлсит от глубины анемизацаи и величины гематокрита (Е Г. Тяжело-вз, И. Г. Акоев, 1985). Более устойчивое повышение уровня ЗПА в исследованных биологических хидкостах при потере АОХ ОЦК соответствовало более стойкому снижен»» показателей периферического авена аритрона.

Исключение составляла динамика уровня ЭПА в сыворотке кро-ек' и кондиционной среде костномозговых клеток сплензктомировав-

Таблица 3 •

Зритропоэтйческая активность (число колоний/101кариоцитов) сыворотки крови интактннх и спленэкт'омирован&ых мыдай линии СБА после острой кровопотери ()

Сроки после ' после после

исследо- потери потери Р1 потери Р2

вании, 202 ОЦК 402 ОЩ 402 ОЦК

сутки на фоне сглэкгк- томйя

контроль 1,00*0,17 1,00*0,17 - 3,33*0,94 <0,06

1 час 2,63*0,26** 3,50*0,30*** <0,05 - -

8 час 1,00*0,43 2,00*0,38 * >0,05 - -

12 час 2,75*0,65 * 7,76*0,82*** <0,01 2,08*0,74 <0,001

1 3,00*0,71 * 3,60*0,60*** >о,ое 7,03*1,30* <0,05

2 1,83*0,68 2,25*0,32 ** >0,03 0,83*0,56* <0,05

3 1,50*0,46 1,76*0,25 * >о,ш - . »

5 2,68*0,31 >и,1Ъ 0,63*0,63* <0,05 ,

? 5, <0*0,30. 0,75*0,25 >0,05 1,00*0,66 >0,05

10 0,62*0,11 . 1,13*0,35 >0,05 - -

и 0,87*0,го 2,25*0,49 * со,05 0,84*0,£6* >0,06

ныз ктотют а ответ ыа потери 401 ОЦК. Значительна подъем ЭПА

- 13 - .

в сыворотке крови отмечался лгаяь яа 1 сутки, а в суперяагантах клеток костного мозга - лишь на 12 час тослэ кровопотери. Учитывая то, что ЭПД обусловлена присутствием эритропоэтина (Б. ЗакаЬа, У. Епок1, И-Цвйа, 1992; ТапеЬв Мазэги еЬ а1., 1992), а зритролозтин необходим для пролиферации я диф$еренцяровки эритроидиых предшественников, следовала бы ожидать, что гиперплазии в костном мозге сплэнэктомированных животных в ответ яа

Таблица 4

Эритропоэтическая активность супернатантов миелокарио-цитов (число шлояий/105миелокаршцетов) штатных и сплеяакгомярованянх мышей линии СВА после острой кровопотери (5Счя,Р<)

сроки после после после

исследо- потери потери Р1 потери Р2

вания, 202 ОЦК 401 ОЦК 4050Ш5

сутки на фат спленэк- тоиии

контроль 0,25*0,25 0,25*0,25 - 0,83*0,11 ■ <0,05

1 час 3,25*0,43*** 1,00*0,41 <0,01 - -

б час 1,25*0,63 2,25*0,48 ** >0,05 - -

12 час 2,75*0,48 ** 4,00*0,41*** >0,05 1,81*0,43* <0,01

1 0,50*0,23 1,25*0,25 * >0,05 0,83*0,38 >0,05

2 0,50*0,29 0,25*0,25 >0,05 0,93*0,29 >0,05

3 1,00*0,41 2,25*0,41 ** <0,05 - -

Б 0,75*0,43 1,75*0,25 ** >0,05 0,69*0,24 <0,01

1,60*0,29. 0,75*0,48 >0,05 0, ЯЗЮ, 25 >0,05

10 2,25*0,48 <* 2,25*0,85 >0,05 -

14 1,25*0,43 2,00*0,41 ** >0,05 1,25*0,41 >0,05

крояггютерв должно сопутствовать или предшествовать лоти'гтг

- и -

ЭПА в сыворотке крови и кондиционной среде мшлокарюцитов, по длительности и уровни не в гак, чем у интаетныг животных в ответ на рзЕНоцэккув по объёму кровопотерю. ш полусонные результаты не подтвердила ожидаемые-.

Известно, что ЭЧК способны менять чувствительность к эрит-рошзтину путэа, к примеру, увеличения количества мает связывания зритропоэгЕна на своей поверхности (I.Basiu, L. Ivanof, 1938; Akafcsne Kouichi fct al.f 1939; T.U Dexter et al. , 1990). Возможно, .что при массивной кревопотере на Зоне спланзктомвд изменена чувствительность ЭЧК к зритропоэтину. Во-вторых, яе искличено, что резервы эритропоэтинпродуцвдтагих систем исчерпывается усиленным функционированием как в ответ на саму спле-нэктомзю (через месяц после удаления селезенки ЗПА в сыворотке крови и конд$пдооннай среде клеток костного шзга значительно повышена по сравнению с интакгныыи животными), tax и в ответ на кровопотерп в первые часы развития острой постгешррзгической анйызш. Крош того, наблюдаемого уровяя ЭПА, возюжно, достаточно для пролиферации и диф4зрс-ицяравки ЭЧК, увеличивших чувствительность к зритропоэтину. Удаление селэабкки, предположительно участвующая в выработка ингибитора эриграпозтина (Р. А. Дышлц, ю. М. Захаров, 1S72), так« иогяо оказать влияние на повышнаую ."фр^ктсБНОь'ть наблюдав is Tina доз зритрозпэтияз.

■ Интересные результаты были получана при исследовании мор-4й-фХН1ЗДшальяого состояния эритроцитов периферический крови анекигировакных животных. Шслд' кровопотери у иьшай отшчалось снижение концентрации 3}-г.рутт до 2-3 суток а ллпопротеидов в йольшгпгтве сроков наблюдения. Ее;ключениз составил!! 3, Б сутки после крлвэпотери, когда концентрация 5И-групп и летопро-твидов ji:8o не отличалась, либо была выше по одного уровня. Ог-кпч.шшй фшт можно объяснить наЯлюдаемнм в эти сроки пико« уг..;пвчйняа количества ретикулгддатов, характертауваихся повьг-Ясннной клкцантрацшй изучаемы-* компонентов (ЕЕ Гимзякова с , 13С7). Hjи вегегв £0 к 4ГД ОЦК концентрата Sll-груш ¿.•: c-ft.-'.aAsimaia.ib к 7-П сугиш; у спяс-взвтпмировзнннх животных <Ч'>. -J . - - й кхлбопо'.ь-ге к концу срока "ваблцддага восстановления

• - 15 -

концентрации тиолпвн* лрупп я эритроцитах не наблюдалось. Концентрация дипопротеидов в эритроцита* периферической крени аяе-мизироваянюг мшей всех тр&зг групп не восстанавливалась. Полученные результаты свидетельствуют о нарушении морфо-функционального состояния эритроцитов периферической кровп, более значительном при анемии на фоне спленэктомии.

Исследование сухой массн эритроцитов подтверждает предположение об изменении шрфз-футсцгояаль того состояния зритроцп-тов. Как гох-я, так и 4ОХ-я потеря крови вызывали значительное с нижние сухой массы эритроцитов периферической крови мшпей, не восстанавливаоцейся к концу- срока наблюдения. ' Среда вогшлшых механизмов снижения сухой массы следует выделить меыбрзннш нарушения эритроцитов под влиянием метаболических сдвигов (аг.куниплн с соавт., 1979; 3. И. Шкаиинович, В.Й.Шэпоти-новский, 1088; В. Д. Ератусь, 1991), структурные изменения гемоглобина при острой кровопотере (Е А. Трошкая с сопят.', 1974; а К Наяареяко, И. й. Старо дуб, КН. Коробов, 1991), изменение качества эритроцитов, продуцированных- в условиях напряженного зритропозэа (]. А.СоШпз, I. Гйег#мпЬег{», 1979; я. И, Мйкавзтаовкч, Ц. И.ПЬпотивовский, 1979).

Слденэктомироьмные животные, по сравкетт с интакгитм, характеризовались более визгам содержанием сухой шссн яритро-цитов (13,03*0,18 против 10,59*0,75 гг у интшстннзг). .УЧитшпя, что срок жизни эритроцитов у мняей - Г.О- 40 дней, через месяц после сплезэетомия в крови мняеЯ циркул)ц>ую? болмкй чаптья эритроциты, продуцироваинда более нагруженным клстякм тягом. Эритроциты испнгывагг влияние псгыиенннх дов эритропоятаиа и различных метаболитов. Причём, ■ функционально ячполммумюдо эритроциты не разрушаются я селегёикя, Глубокая анемдаацкя ?ы-зывала больше снижение сухой массн эритроцитов, хотя оно и менее заметно на фоне низких исходных значений.

Следует отметать, что если в перш.» -псы измене икр «-г-р-фл-фуккциоиаякяого состояния яритроцитов, я^рпетнл, пу-г^гя ется действием на них факторов периферической ьр~>ри, то ■ > Г " суток средние актант концентрации тволпянх групп п ^п'п-'ч

- 16 - ■

10ядов, сухой массы зависят от эритроцитов, продуцируемых органами зритропозва.

ВЫВОДЫ.

1. Острая кровоютеря сопровождается выраженными изменениями со стороны системы крови. Если в начальный период острой постгеморрагической анемии в формировании картина крови- участвуют процессы перераспределения эритроцитов, а которых ляачи-те^нус роль игрзэт селезёнка, то псзяа наблл^зется активация аритропоээа.

2. Раввэтие эритроидной гиперплазии костного мозга и селезенки обеспечивается стимуляцией процессов пролиферации и дифференцировки кроветворных клеток-предшественников эритропо-ээа типа КОЕ-Э.

3. Сэлеэйнка отвечает на крозопотер» Солее выраженной активацией эритропоаэа, чем костный мозг.

4. Активация зригропоэва в костном мозге при острой псс-т-гэморрагкческой анемии обусловлена стимул цжй функциональной активности геиопозвиндуцируюврго мякроокруй&н»ш: увеличивайте« количество зритроидных гемшоатичвекггх: островкоз, продукта эритропоатической активности миелокариоцетаак. Увеличение зритропозтической активности сыворотки крошг такш по,вдергивает активацию эритропсээа.

Бч При потере 40,? ОЦК сдвиги в шрфа-фушецшнаяьном состоянии эритроьа вырашны ярче, • «¿и пря 20%-« кровосотере. Значительная депрьссиа показателей периферической крови при 40"-й кровопотерэ Екзавает Салае выражению повышение уровне ЗШ в сыворотке крови и кондиционной среде костного мовга, активацию процессов пролиферации к диффер&нцьроЕки эригрокарио-датов и клаток-предЕественздакса гритропозза з костном мозге и селезенке. ■ При атом 405-я кровопотерп характеризуется значительны« увеличением скорости твршагальней ян^форавцвровки и Еьаюда зритрокднщс элементов в кровь.

б. ч?рза 1 месяц по еда солвнэктомия изменяется шрфо|?кк-'еостсааке арнтроаа Увеличенной эрихропаэтичбсиоа

активности в сыворотке'крови и кондиционной срэде косгясшягп-вкх кариоцитов соответствует более вапрявйянкй эритрипсзи, уменьшение эффективности гемоглоСтяэацкп эритроците*.

7. При острой постгеморрапгческой анемии у сплензг.тодаро-ванных зтовотных повышение эритропозтической активности нпблг-дается только в первые сулаг после кровопотеря. Среди возмпп ных механизмов, регенерации системы крови в последущне с рога -изменение чувствительности■ЭЧК к эритроппэтину, снижение уровня ингибиторов эритропоэтина.

8. Активация зритропозаа при кровопотере сопровождается изменением морфо-функцяогшьного состояния эритроцитов периферической крови: снижается содержание гемоглобина в эритроцитах, волнообразно изменяется концентрация 5Н-групп и лкпопро-теинового комплекся в них. .

СШСОЯ РАБОТ, ОПУБЛИКОВАНИЯ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Эритроидныэ ,клетки-предшественники костного мозга и селезен-

ки при острой кровопотере // Бюллетень Томского научного центра АМН СССР.- Томск, 1992.- вып.4,- с. 12П.

2. Влияние массивного кровопускания на показателя селезенки у

мышей // Бюллетень Томского научнбго центра АМН СССР. -Томск, 1992.- вып. 4. - с. 121.

3. Адаптивные реакции структурно-функциональных единиц костного

мозга - гемогозтических островков при острой постгеморрагической анемии // Актуальные проблемы фармакологии» и поиски новых лекарственных препаратов. - Томск, 1992.- т. 5.- с. Ш (соавт. ЕЕ Шахов).

4. Механизмы адаптации кроветворной ткани к острой кроволотер*

у иятактных и сплеяактсмирояаяных животных // Актуальна проблемы фармакологии и поиска новых лекарственных препаратов. - Томск, 1993. - т. 6. - с. 70-75.

5. Влияние острой кровопотери ;гч функциональную активность г<-

мопоэтпческих островков у интлктных и егшмтзкгпугр^р-и:;;'-'-зшвотных // №хашгямы развития пчтолипрпоттх прг.';.--":гг. Кмррояо, 1994. - с. 93-95.