Моноаминергические механизмы регуляции кроветворения при цитостатических воздействиях

Минакова, Мария Юрьевна

Диссертации по медицине → Патологическая физиология

Автореферат и диссертация по медицине (14.00.16) на тему:Моноаминергические механизмы регуляции кроветворения при цитостатических воздействиях

ДИССЕРТАЦИЯ

АВТОРЕФЕРАТ

Минакова, Мария Юрьевна Томск 2009 г.

Ученая степень: доктора медицинских наук

ВАК РФ: 14.00.16

Автореферат диссертации по медицине на тему Моноаминергические механизмы регуляции кроветворения при цитостатических воздействиях

На правах рукописи

Минакова Мария Юрьевна

МОНОАМИНЕРГИЧЕСКИЕ МЕХАНИЗМЫ РЕГУЛЯЦИИ КРОВЕТВОРЕНИЯ ПРИ ЦИТОСТАТИЧЕСКИХ ВОЗДЕЙСТВИЯХ

14.00.16 - патологическая физиология

14.00.25 - фармакология, клиническая фармакология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук

Томск-2009

003466033

Работа выполнена в Учреждении Российской академии медицинских наук НИИ фармакологии Сибирского отделения РАМН

Научные консультанты:

доктор медицинских наук, профессор, академик РАМН,

заслуженный деятель науки РФ Дыгай Александр Михайлович

доктор медицинских наук Скурихин Евгений Германович

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор, академик РАМН,

заслуженный деятель науки РФ Новицкий Вячеслав Викторович

доктор медицинских наук Алиев Олег Ибрагимович

доктор медицинских наук,

профессор Кондакова Ирина Викторовна

Ведущая организация: НИИ физиологии СО РАМН (г. Новосибирск)

Защита состоится «_»_2009 г. в_ часов на заседании

диссертационного совета Д 001.031.01 при НИИ фармакологии СО РАМН (634028, г. Томск, пр. Ленина, 3)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке НИИ фармакологии СО

РАМН

Автореферат разослан «_»

2009 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, доктор биологических наук

Амосова Е.Н.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Изучение закономерностей функционирования системы крови в норме и при патологии является актуальной задачей современной экспериментальной гематологии и патофизиологии, решение которой создает предпосылки для разработки адекватных патогенетически обоснованных методов фармакологической профилактики и коррекции гемо-депрессивных состояний различной этиологии [Moore M.A.S., Warren D., 1987; Dexter T.M., Heyworth C.M., 1994; Carde P., 1994; Drize N. et al., 1996; Хлусов И .А. и др., 1997; Prow D., Vadhan-Raj S. , 1998; Дыгай A.M. и др., 1999; Жданов В.В. и др., 2000; Воробьев А.И., 2002; Гольдберг Е.Д. и др.,

2007]. В последние годы получены принципиально новые данные, позволившие во многом расшифровать механизмы локальной регуляции кроветворения в условиях миелоингибирующих воздействий [Дыгай A.M. и др., 1992; Жданов В.В. др., 1998; Гольдберг Е.Д. и др., 2001, 2007; Удут Е.В. и др.*

G.P., 2007; Xu YJ. et al., 2007]. Целесообразным подходом к созданию новых гемостимуляторов можно считать и поиск средств, обладающих способностью воздействовать на дистантные механизмы контроля процессов кроветворения. В частности, предложены и апробированы в клинике методы терапии цитостатических миелосупрессий с помощью лекарственных средств, модулирующих активность симпатического отдела вегетативной нервной системы (ВНС) [Гольдберг Е.Д. и др., 1997; Хлусов И.А. и др., 1997].

Между тем, накопленные к настоящему времени данные об участии нейромедиаторных систем в обеспечении гемопоэза указывают на то, что спектр нейрофармакологических средств, способных стимулировать процессы восстановления кроветворной ткани в условиях супрессирующих воздействий (в том числе при введении цитостатиков) гораздо шире [Chatelain С. et al., 1989; Yang M. et al., 1996; Maestroni G.J. et al., 1997; Tsao C.W. et al., 1997; Broome C.S., Miyan J.A., 2000; Devoino L. et al., 2001]. В пользу этого свидетельствует тот факт, что в паренхиме костного мозга помимо симпатических обнаружено наличие чувствительных, пуринергических и холинергических нервных окончаний [Yamazaki К., Alien T.D., 1990; Weihe Е. et al., 1991; Tabarowski Z. et al, 1996; Artico M. et al., 2002; Lakshmi С. et al., 2005; Aquila

H.L., 2006]. Прослежена секреция ими как адреналина и иорадреналина, так и дофамина, тахикининов и ряда других высокоактивных биологических веществ [Maestroni G.L., 2000; Захаров Ю.М., 2004]. Установлено, что кроветворные клетки-предшественники различной степени зрелости, равно как и морфологически распознаваемые гемопоэтические и стромальные клетки, способны нести на плазматической мембране рецепторы к различным лиган-

дам медиаторной природы (ацетилхолин, катехоламины, серотонин, субстанция Р, нейрокинины А и В, опиоиды и др.) [Morley A. et al., 1971; Bosing-Schneider R., Haug M., 1976; Brown J.E., Adamson J.W., 1977; Федоров H.A., 1979; Van Furth R., 1980; Depelchin A., Letesson J.J., 1981; Hall N.R., 1981; Miles К. et al., 1984; Mladenovic J., Adamson J.W., 1984; Setchenska M.S. et al., 1986; Zahniser N.R. et al., 1989; Харкевич Д.Д., 1989; Broome C.S., Miyan J.A., 2000]. Показано наличие прямого (рецепторного) и опосредованного через клеточные элементы гемопоэзиндуцирующего микроокружения (ГИМ) регулирующего влияния нейромедиаторов на процессы пролиферации и диффе-ренцировки коммитирированных прекурсоров гемопоэза [Mladenovic J., Adamson J.W., 1984; Setchenska M.S. et al., 1986; Maestroni G.L., Conti A., 1994; Захаров Ю.М., 2004; Yang M. et al, 2007]. Немаловажным обстоятельством выступает способность кроветворных клеток и клеточных элементов ГИМ не только синтезировать и секретировать нейротрансмиттеры, но и вовлекать их в ауторегуляцию [Marino F. et al., 1997, 1999]. Все эти и многие другие факты предполагают существование моноаминергического локального контроля процессов повреждения и регенерации кроветворной ткани в ответ на миелоингибирующие воздействия. Причем активность адренергиче-ских, дофаминергических и серотонергических механизмов в отношении различных клеточных популяций, скорее всего, носит специфический характер.

Согласно современным представлениям, для жизнедеятельности кроветворных клеток важнейшую роль играют гемопоэтические ростовые факторы и ингибиторы [DePace D.M., Weber R.H., 1974; Sieff CA. et al., 1987; Fibbe W.E. et al, 1989; Metealf D, 1989; Dorshkind K., 1990; Натан Д.Г., Зифф K.A., 1994; Carde P., 1994; Grassinger J. et al., 2006; Kertesz Z. et al., 2006]. Известна избирательная чувствительность стволовых мультипотентных клеток и более зрелых предшественников, включая морфологически распознаваемые, к определенным гемопоэтинам [Metealf D., 1989; Heyworth С.М. et al., 1992; Karger A.G., 1993; Натан Д.Г., Зифф KA., 1994; Carde P, 1994; Cross MA. et al., 1997; Возианов А.Ф. и др., 1998; Чертков И.Л., Дризе Н.И., 1998]. На уровне отдела коммитированных предшественников ярко выражен синергизм действия ростовых факторов и для оптимального ответа крайне важно наличие комбинации «ранних» и «поздних» цитокинов [Sieff С.А., 1987; Ikebuchi К. et al., 1987; Rennick D. et al., 1989; Tanaka R. et al., 1992; Ñecas E. et al., 1993; Cross M.A. et al., 1997; Воробьев А.И, 2002; Grassinger J. et al., 2006]. Установлено, что в экстремальных условиях (иммобилизация, введение цитоста-тиков, невротические воздействия и др.) эритроидные и гранулоцитарные прекурсоры приобретают чувствительность к катехоламинам и адренотроп-ным препаратам, на которые они способны отвечать и вне структур кроветворного микроокружения [Maestroni G.L. et al., 1997; Гольдберг Е.Д. и др., 1997, 2004]. В то же время ни в одном из известных нам экспериментов исследователи не рассматривают совместное влияние гемопоэтических факторов роста и лигандов адренергических, дофаминергических и серотонинер-гических рецепторов на предшественники кроветворения при патологических состояниях.

Другим аспектом рассматриваемой проблемы является вопрос о роли моноаминов центральной нервной системы (ЦНС) в регуляции гемогтоэза. Существуют сведения о возможности эффекторного воздействия различных нейромедиаторных систем мозга (адренергическая, дофаминергическая, се-ротонинергическая, М-холинергическая, ГАМК-ергическая) на клеточность отдельных ростков кроветворения при невротических воздействиях [Гольд-берг Е.Д. и др., 2002, 2004]. Активация центральных звеньев дофаминергиче-ской системы вызывает иммуностимуляцию, сопровождающуюся накоплением в костном мозге С134* Т-клеток, увеличением числа антителообразую-щих и розеткообразующих клеток в селезенке животных, отменой стресс-индуцированного угнетения иммунной реакции, а также усилением пролифе-ративного ответа Т-лимфоцитов к митогенам [Девойно Л.В., Ильюченок Р.Ю., 1993; Идова Г.В, 1994; Твао СЖ а а1., 1997; Идова Г.В. и др., 2001] . Однако представленные данные литературы не позволяют сформировать четкого представления о регуляторном влиянии моноаминов ЦНС на пул коммитированных клеток-предшественников гемопоэза, а также функции ГИМ в норме и при различных патологических состояниях (включая цито-статические гемодепрессии).

Принимая во внимание вышеизложенное, представляет несомненный интерес изучение роли центральных и периферических моноаминов в развитии миелосупрессии и последующей регенерации кроветворной ткани при цитостатических воздействиях, а также особенностей адренергического, до-фаминергического и серотонинергического контроля процессов пролиферации и дифференцировки гемопоэтических прекурсоров и функциональной активности гемопоэзиндуцирующего микроокружения. Исследование в данном контексте представляет не только теоретический, но и практический интерес, так как полученные результаты станут основой для разработки новых оригинальных методов коррекции гематологических нарушений при миело-супрессиях, вызванных введением противоопухолевых препаратов.

Цель исследования: изучить механизмы регуляторного влияния адре-нергической, дофаминергической и серотошшергической систем на кроветворную ткань при цитостатических миелосупрессиях.

Задачи исследования:

1. Оценить участие адренергической, дофаминергической и серотони-нергической систем в развитии нарушений в системе крови в условиях введения циклофосфана и 5-фторурацила.

2. Исследовать особенности моноаминергической регуляции деления и созревания кроветворных клеток-предшественников при назначении цито-статиков.

3. Вскрыть специфические для адренергической, дофаминергической и серотонинергической систем механизмы восстановления функциональной активности элементов гемопоэзиндуцирующего микроокружения при моделировании цитостатических миелосупрессий.

4. Оценить вклад моноаминергических систем в реализацию регулятор-ных эффектов гемопоэтинов (эритропоэтина, Г-КСФ) в условиях введения циклофосфана и 5-фторурацила.

5. Разработать патогенетически обоснованные методы коррекции нарушений в эритроидном и гранулоцитарном ростках кроветворения при цито-статических воздействиях, основанные на модуляции активности центральных и периферических моноаминергических структур.

Положения, выносимые на защиту:

1. При гипопластических состояниях, моделированных введением алки-лирующего агента (циклофосфан) или фторпиримидинового антиметаболита (5-фторурацил) в 1/3 МПД, пролиферация и дифференцировка коммитиро-ванных кроветворных предшественников и функциональная активность клеточных элементов ГИМ, системы КСФ и эритропоэтина находятся под контролем адренергической, дофаминергической и серотонинергической систем. При этом серотонинергическая система в большей степени ответственна за изменения со стороны эритрона, а адренергическая и дофаминергическая - в гранулоцитарном ростке кроветворения.

2. Основными причинами различных темпов и характера регенерации костномозговой ткани при назначении алкилирующего агента и фторпиримидинового антиметаболита выступают специфическая активность центральных адренергических, дофаминергических и серотонинергических структур и особенности их взаимодействия с гемопоэтическими прекурсорами и клетками ГИМ, а также избирательная чувствительность эритропоэтина и Г-КСФ к регуляторному влиянию моноаминов.

3. В условиях введения циклофосфана ингибирующее действие адренергической системы на гранулоцитарный и эригроидный ростки кроветворения опосредовано угнетением функциональной активности адгезирующих клеток ГИМ (образование ГО, продукция ЭПА) и снижением скорости деления гра-нуломоноцитарных предшественников (связанное с Г-КСФ и периферическими адренергическими механизмами). Ускорение процессов регенерации кроветворной ткани адренергической системой при назначении 5-фторурацила обусловлено формированием ГО, продукцией ЭПА неадгези-ругощими клетками ГИМ и увеличением уровня КСА в сыворотке крови. При этом стимуляция пролиферативной активности прекурсоров гемопоэза обусловлена КСФ, эритропоэтином, а- и |3-адренергическими структурами.

4. Дофаминергическая система углубляет нарушения структурно-функциональной организации преимущественно эритроидного компартмента кроветворения, вызванные алкилирующим агентом, что приводит к задержке регенерации эритропоэза и более выраженной ретикулоцитопении в периферической крови. При этом имеет место стимуляция Г-КСФ- и дофамин-зависимых механизмов контроля пролиферации грануломоноцитарных предшественников, препятствующая развитию нейтрофильной лейкопении.

5. При назначении 5-фторурацила дофаминергическая система, с одной стороны, увеличивает темпы регенерации эритрона (в силу роста уровня сы-

вороточной ЭПА и эритропоэтин-зависимой активации пролиферации КОЕ-Э), с другой стороны, задерживает восстановление гранулоцитарного ростка кроветворения (за счет снижения продукции КСА адгезирующими клетками ГИМ).

6. При цитостатических воздействиях серотонинергическая система усугубляет развитие депрессии эритропоэза: в условиях введения алкилирующе-го агента это связано с угнетением формирования эритроидных ГО и функциональной активности эритроидных предшественников (опосредованной системой эритропоэтина) и падением уровня ЭПА в биологически активных средах, при назначении фторпиримидинового антиметаболита - с уменьшением секреции ЭПА клетками адгезирующей фракции ГИМ. Вместе с тем, при использовании 5-фторурацила серотонин ЦНС увеличивает скорость регенерации гранулоцитарного ростка кроветворения путем усиления образования гранулоцитарных и смешанных ГО и стимуляции опосредованной системой КСФ деления и созревания грануломоноцитарных прекурсоров.

7. В условиях цнтостатической миелосупрессии, вызванной введением циклофосфана, истощение депо катехоламинов резерпином значительно увеличивает гранулоцитопоэзстимулирующую активность Г-КСФ за счет организации в костном мозге de novo гранулоцитарных и смешанных ГО. Нарушение серотониновой медиации в ЦНС ципрогептадином оказывает потенцирующее действие на эритропоэзстимулирующие эффекты эритропоэтина во многом благодаря восстановлению нарушенной антиметаболитом структурно-функциональной организации эритроидного компартмента кроветворения.

Научная новизна. В работе в сравнительном аспекте впервые изучена роль адренергической, дофаминергической и серотонинергической систем в развитии миелосупрессии и регенерации кроветворной ткани на моделях цитостатических воздействий, вызванных алкилирующим агентом и антиметаболитом. Продемонстрировано, что регулирующие эффекты центральных моноаминергических систем осуществляются через адренергические, дофа-минергические и серотонинергические структуры на коммитированных кроветворных предшественниках и клеточных элементах ГИМ, а также опосредовано - через системы эритропоэтина и КСФ.

Выявлено, что в условиях цитостатических воздействий чувствительность прекурсоров гемопоэза к прямому действию лигандов моноаминерги-ческой природы возрастает, однако в динамике развития гииопластического состояния прослеживается не только стимуляция деления и созревания КОЕ, но и ингибиция данных процессов. В культуре дофамин и серотонин оказывают супрессирующее влияние на опосредованную гемопоэтическими факторами роста пролиферативную активность кроветворных предшественников, в то же время адреномиметики повышают темпы роста КОЕ-ГМ (более при назначении циклофосфана) и угнетают выход КОЕ-Э в присутствии эритропоэтина.

In vitro показано, что N-ацетилнейраминовая кислота увеличивает способность подвергнутых прямому воздействию алкилирующего агента адгези-рующих клеток ГИМ связывать обработанные изадрином или серотонином предшественники зритропоэза.

Истощение депо катехоламинов (резерпин) препятствует развитию депрессии костномозгового гранулоцитопоэза и ускоряет восстановление гемо-поэтической ткани после назначения циклофосфана, что преимущественно связано с формированием de novo ГО в костном мозге и продукцией ЭПА ад-гезирующими нуклеарами. При этом возрастают сопряженные с Г-КСФ (период ингибиции) и адреноструктурами (период регенерации) деление и созревание грануломоноцитарных предшественников, а также эритропоэтин (период ингибиции) - и катехоламин (1-7-е сутки) - зависимая дифференцировка эритроидных клеток. Ингибиция симпатолитиком кроветворения в условиях введения антиметаболита вызвана, в первую очередь, нарушениями функций ГИМ (образования ГО и секреции ЭПА неадгезирующими миелокариоцита-ми) и снижением уровня сывороточного КСА, во вторую очередь, угнетением функциональной активности кроветворных предшественников: опосредованной гемопоэтинами и катехоламинами (период ингибиции) и (3-адренергическими структурами, эритропоэтином (период регенерации).

Фармакологическая блокада постсинаптических дофаминовых Д2 рецепторов (галоперидол) усугубляет гипоплазию гранулоцитопоэза в условиях введения алкилирующего агента, что обусловлено разрушением ГО грануло-цитарного и эритро-гранулоцитарного типов и сокращением пула пролифе-рирующих КОЕ-ГМ. В противоположность этому, галоперидол, повышая функциональную активность адгезирующих клеток, уровень ЭПА в сыворотке крови и интенсивность дифференцировки КОЕ-Э, увеличивает скорость регенерации зритропоэза. При назначении антиметаболита в основе стимуляции галоперидолом гранулоцитопоэза лежит возрастание секреции КСА адгезирующими клетками ГИМ и высокая пролиферативная активность предшественников грануломоноцитопоэза, опосредованная периферическими дофаминергическими механизмами и Г-КСФ, при этом ингибиция эри-трона сопряжена с угнетением деления и созревания эритроидных клеток, опосредованных эритропоэтином и дофаминергическими структурами.

Нарушение серотониновой медиации в ЦНС ципрогептадином до введения циклофосфана увеличивает уровень ЭПА в сыворотке крови и кондиционных средах адгезирующих миелокариоцитов в период ингибиции и угнетает периферические серотониновые механизмы регуляции эритроидных предшественников в сроки восстановления кроветворной ткани, что соответствующим образом отражается на содержании морфологически распознаваемых эритроидных клеток в системе крови (увеличение их числа в период депрессии эритрона и снижение - в сроки регенерации). При назначении 5-фторурацила основным условием ускорения антисеротониновым препаратом регенерации гемопоэза (преимущественно эритроидного ростка кроветворения) выступают стимуляция формирования de novo эритроидных и грануло-

цитарных ГО, а также серотониновых и цитокиновых механизмов контроля пролиферации грануломоноцитарных предшественников.

Впервые продемонстрировано, что в условиях введения циклофосфана уменьшение депо катехоламинов потенцирует гранулоцитопоэзстимули-рующий эффект Г-КСФ, а фармакологическая блокада постсинаптических серотониновых С2 рецепторов усиливает эритропоэзстимулируюшее действие эритропоэтина при применении 5-фторурацила, что связано с опережающим восстановлением структурно-функциональной организации костного мозга (формирование ГО).

В условиях оптимальной жизнедеятельности организма (интактные животные) in vitro установлена стимуляция дофамином роста колоний преимущественно грануломоноцитарного типа, серотонином - эритроидного типа.

Истощение in vivo депо катехоламинов приводит к уменьшению выхода КОЕ-ГМ под действием Г-КСФ, мезатона и изадрина, но стимулирует in vitro образование КОЕ-Э в культуре с эритропоэтином и адреномиметиками. Нарушение дофаминовой медиации в ЦНС избирательно уменьшает число гра-нулоцитарно-макрофагальных колоний (in vitro дофамин), фармакологическая блокада постсинаптических серотониновых С2 рецепторов мозга угнетает эритроидное колониеобразование (in vitro серотонин).

Практическое значение работы. Показана важная роль адренергиче-ской, дофаминергической и серотонинергической систем в развитии мнело-супрессии и регенерации костномозговой ткани в условиях цитостатических воздействий, выявлены основы регуляторного влияния центральных моно-аминергических структур на коммитированные кроветворные клетки-предшественники и гемопоэзиндуцирующее микроокружение. Полученные данные вносят существенный вклад в понимание специфических моноами-нергических механизмов контроля эритропоэза и гранулоцитопоэза при моделировании миелосупрессии введением цитостатиков с различным механизмом действия.

Результаты экспериментального исследования дают возможность определить патогенетически обоснованные методы фармакологической коррекции гипопластических состояний кроветворения с помощью лекарственных средств, модулирующих активность центральных и периферических моно-аминергических структур.

Материалы по доклиническому исследованию препарата гранулоци-тарного колонистимулирующего фактора нейтростима, разработанного НИИ фармакологии СО РАМН совместно с ФГУН ГНЦ ВБ «Вектор» (Новосибирск), были представлены в Фармакологический комитет МЗ и CP РФ, получено разрешение на его клиническое применение и производство (РУ № JICP-010185/08).

1996), конференции фармакологов Сибири и Дальнего Востока, посвященной 15-летию НИИ фармакологии ТНЦ СО РАМН (Томск, 1999), «Актуальные проблемы экспериментальной и клинической фармакологии» (Томск, 2001, 2002), «Актуальные проблемы фармакологии» (Томск, 2004); на V, VI, VIII, У1У Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 1998, 1999, 2001, 2002), на конференции молодых ученых СО РАМН "Фундаментальные и прикладные проблемы современной медицины" (Новосибирск, 2000); на Международной научной конференции "Поиск, разработка и внедрение новых лекарственных средств и организационных форм фармацевтической деятельности" (Томск, 2000); на XII международной конференции по космической биологии и авиакосмической медицине (Москва, 2002); на конференции "Актуальные вопросы экспериментальной и клинической морфологии" (Томск, 2002); на 4-ом съезде физиологов Сибири (Новосибирск, 2002); на XIX съезде Физиологического общества им. И.П. Павлова (Екатеринбург, 2004); на конференции «Фармакологическая регуляция стволовой клетки» (Томск, 2005); на 4-ой Международной конференции «Биологические основы индивидуальной чувствительности к психотропным средствам» (Москва, 2006); на Республиканской научной конференции «Создание новых лекарственных препаратов» (Томск, 2007); на конференции «Проблемы онкофармакологии» (Томск, 2008).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 60 работ, из них 21 -в журналах, рекомендованных «Перечнем ...» ВАК Минобрнауки России.

Получены патент (1Ш) № 2317541 «Способ изучения гемопоэза с учетом особенностей высшей нервной деятельности» (опубл. 20.02.2008 г., Бюл. № 5) и решение о выдаче патента «Средство, препятствующее развитию депрессии эритроидного ростка кроветворения при цитостатических миелодепрес-сиях» (№ 2007137872/15(041423) от 12.09.2008 г.).

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 492 страницах машинописного текста, иллюстирована 39 рисунками, 147 таблицами и состоит из введения, 4 глав, выводов, списка цитируемой литературы, включающего 650 источников, из них 222 отечественных и 428 зарубежных.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Эксперименты проведены на 4835 мышах-самцах линии СВА/СаЬас в возрасте 2-2,5 месяцев, массой 18-20 г. Животные 1 категории (конвенциональные линейные мыши) получены из коллекционного фонда отдела экспериментальных биологических моделей НИИ фармакологии СО РАМН (сертификат имеется).

Цитостатическую миелосупрессию моделировали однократным внутри-брюшинным введением алкилирующего агента циклофосфана («Биохимик», Саранск) либо фторпиримидинового антиметаболита 5-фторурацила (хим-фармобъединение «Дарница», Украина) в 1/3 максимально переносимой дозы (МПД), составившей по результатам пробит-анализа 83,3 и 76 мг/кг соот-

ветствснно. За 30 минут до цитостатичсского воздействия животным опытных групп однократно внутрибрюшинно вводили симпатолитик резерпин ("Polfa", Польша) в дозе 2 мг/кг, нейролептик галоперидол ("Gedeon Richter А.О.", Венгрия) - 3 мг/кг, антисеротониновый препарат дипрогептадин ("Serwa", Германия) - 30 мг/кг. На следующий день после введения цитоста-тиков 1 раз в сутки в течение 5 дней мышам подкожно вводили препарат не-гликозилированного гранулоцитарного колониестимулирующего фактора человека нейтростим (разработан НИИ фармакологии СО РАМН совместно с ФГУН ГНЦ ВБ «Вектор», Новосибирск) в дозе 100 мкг/кг и препарат эритро-поэтина эпоэтин-бета (рекормон, "Hoffman-La Roche Ltd.", Швейцария) - 10 ЕД на мышь массой 20 г. Конечная концентрация альфа-адреномиметика ме-затона (Опытный завод ГНЦЛС, Харьков, Украина), бета-адреномиметика изадрина («Sigma», США); серотонина («Sigma», США) и дофамина («Sigma», США) в полной культуральной среде составляла 10'8 М; Г-КСФ и рекормона - 10'8 М, 10"9 М.

Контрольным животным во всех сериях экспериментов в аналогичных условиях вводили эквивалентный объем (0,2 мл) физиологического раствора. Фоновые показатели получали при использовании интактных животных. Мышей забивали на I, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8,9, 10, 11 и 12-е сутки после введения цитостатиков методом дислокации шейных позвонков.

Показатели периферической крови и костномозгового кроветворения определяли общепринятыми методами [Гольдберг Е.Д. и др., 1992]. Содержание коммитированных клеток-предшественников эритропоэза (КОЕ-Э, КлОЕ-Э) и грануломоноцитопоэза (КОЕ-ГМ, КлОЕ-ГМ) в костном мозге изучали ш vitro методом клонирования миелокариоцитов в полувязкой культуральной среде. Интенсивность созревания эритроидных и гранулоцито-макрофагальных прекурсоров определяли по величине индекса созревания (отношение числа кластеров к количеству колоний, выросших в той же лунке). Исследование пролиферативной активности предшественников эритро- и грануломоноцитопоэза производили с помощью метода "клеточного самоубийства" с использованием гидроксимочевины. Структурно-функциональную организацию костного мозга исследовали путем ферментативного выделения гемопоэтических островков (ГО) и последующей оценки их количественного и качественного состава. Эритропоэтическую (ЭПА) и колониестимулирующую (КСА) активности тестировали микрометодом в 96-луночных планшетах. ЭПА и КСА выражали количеством выросших эритроидных и гранулоцито-макрофагальных колоний (на 105 миелокариоцитов) [Гольдберг Е.Д. и др., 1992]. Статистическую обработку полученных результатов проводили методами вариационной статистики с использованием программного обеспечения IBM. В случаях нормального распределения признаков для статистической оценки применяли параметрический t-критерий Стьюдепта. При больших отклонениях распределений признака от нормального вида для независимых выборок использовали непараматрический критерий Уилкоксона-Мавда-Уигни [УрбахВ.Ю., 1975;Гублер Е.В., 1978]. Для оценки степени связи между признаками использовался двумерный корреляционный

анализ. Влияние цитостатического воздействия либо препаратов (факторов) на изменения признака исследовали с помощью факторного анализа по критерию Фишера [Лакин Г.Ф., 1990; Мендрина Г.И. и др., 2004] и линейного пошагового дискриминантного анализа Фишера [Бегескшп Б.В. й а!., 1986; Мендрина Г.И. и др., 2004]. В работе использовался также интегральный показатель, характеризующий изменение показателей системы крови в определенный интервал времени [Новицкий В.В. и др., 1990; Гольдберг Е.Д. и др., 1997].

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

На первом этапе исследования изучались регенераторные возможности кроветворной ткани экспериментальных животных при назначении цитоста-тиков в 1/3 МП Д.

Однократное введение циклофосфана вызывало выраженное угнетение гемопоэза. Так, под влиянием алкилирующего агента отмечалось резкое уменьшение общего количества кариоцитов (ОКК) на 1-5-е сутки опыта с последующей нормализацией клеточности костного мозга (6, 7-е сутки). Динамика содержания незрелых и зрелых форм нейтрофильных гранулоцитов, лимфоидных и эритроидных элементов в целом соответствовала изменениям ОКК. Вместе с тем, интенсивность восстановления числа нейтрофилов в кроветворной ткани значительно опережала таковую лимфоцитов и эритрока-риоцитов. Миелосупрессия, вызванная введением алкилирующего агента, сопровождалась соответствующими изменениями в динамике содержания клеточных элементов изучаемых ростков в периферической крови. В частности, уже на 1-е сутки имело место статистически достоверное снижение количества палочкоядерных и сегментоядерных нейтрофильных лейкоцитов. Рост уровня палочкоядерных нейтрофилов регистрировался на 4-7-е сутки наблюдения, сегментоядерных нейтрофилов - на 6, 7-е сутки, причем на 4,5-е сутки опыта содержание молодых форм нейтрофильных гранулоцитов статистически достоверно превосходило исходные значения. На 1-5-е сутки после введения циклофосфана обнаруживалось развитие выраженной ретикулоци-топении в периферической крови, однако к 6-м суткам выявлялась тенденция к возрастанию числа незрелых эритроидных клеток, а на 7-е сутки их содержание не отличалось от уровня интактного контроля.

Для животных, получавших 5-фторурацил, была характерна более выраженная ингибиция костномозгового кроветворения, чем в случае назначения ЦФ. Так, статистически достоверное снижение числа незрелых и зрелых форм нейтрофильных гранулоцитов, моноцитов и лимфоцитов регистрировалось на 1-7-е сутки опыта. При этом наименьшее содержание указанных форм миелокариоцитов было выявлено на 2, 3,4-е сутки исследования. Вслед за периодом депрессии имело место накопление клеток системы мононукле-арпых фагоцитов и нейтрофильных гранулоцитов (8-12-е сутки). Увеличение числа лимфоидных элементов в кроветворной ткани на 8, 9, 10-е сутки опыта сменялось новым снижением их количества на И, 12-е сутки. В отличие от белой крови, угнетение эритропоэза наблюдалось на протяжении всего пе-

риода исследования. Отражением состояния костномозгового кроветворения при введении антиметаболита являлась картина периферической крови. Так, уменьшение содержания палочкоядерных (1-5, 7, 9-10-е сутки) и сегментоя-дерных (1, 3-8-е сутки) нейтрофилов, лимфоцитов (1-4, 8-10-е сутки) и моноцитов (1-4-е сутки) в периферической крови приводило к развитию выраженной лейкопении (1-5, 6-10-е сутки). Интенсивное увеличение клеточно-сти белой крови отмечалось на 11,12-е сутки эксперимента. Вслед за ретику-лоцитопенией (1-7-е сутки) и восстановлением содержания незрелых эрит-роидных клеток (8-10-е сутки) имело место падение числа ретикулоцитов (11-е сутки), которое вновь возрастало к окончанию исследования (12-е сутки).

Таким образом, однократное введение цитостатиков в 1/3 МПД вызывает развитие гипоплазии костного мозга, лейкопению и ретикулоцитопению в периферической крови у мышей линии СВА/СаЬас. Нарушения в гемопоэти-ческой ткани при инъекции 5-фторурацила более глубокие и продолжительные, чем в случае использования циклофосфана. Обращает на себя внимание различная чувствительность ростков кроветворения к действию цитостатиче-ских агентов. В частности, темпы регенерации эритропоэза в значительной степени уступают интенсивности восстановления клеточности гранулоци-тарного ростка кроветворения (табл. 1).

Таблица 1

Сроки ингибиции и регенерации костномозгового гемопоэза мышей линии CBA/CaLac при цитостатических воздействиях__

Циклос юсфан ' 5-фторурацил

Ингибиция Регенерация Ингибиция Регенерация

Гранулоцитопоэз 1-3-и сутки 4-7-е сутки 1-7-е сутки 8-12-е сутки

Эритропоэз 1-5-е сутки 6, 7-е сутки 1-11-е сутки 12-е сутки

При гипопластических состояниях (облучение, гипоксия, введение цитостатиков) глубина поражения и интенсивность процессов регенерации кроветворной ткани во многом определяется функциональной активностью коммутированных прекурсоров гемопоэза [Гольдберг Е.Д. и др., 1991, 2001, 2002, 2006, 2007]. С использованием культуральных методов проведено изучение воздействия in vitro а-адреномиметика мезатона, р-адреномиметика изадрина, дофамина и серотонина на темпы деления и созревания эритроид-ных и грануломоноцитарных предшественников мышей линии CBA/CaLac в условиях оптимальной жизнедеятельности и введения цитостатических препаратов в сравнении с препаратами эритропоэтина и гранулоцитарного КСФ.

Установлено, что периферические катехоламины и серотонин, наряду с эритропоэтином и гранулоцитарным КСФ, оказывают стимулирующее действие на формирование колоний эритроидного и гранулоцитарно-макрофагального типов в культуре неадгезирующих миелокариоцитов ин-тактных животных. При этом в рассматриваемой модели кроветворения степень индукции роста КОЕ гемопоэтическими факторами роста в концентрации близкой к физиологической (10's М) существенно превосходит таковую в тест-системах с адреномиметиками, дофамином либо серотоннном.

В условиях введения циклофосфана эритропоэтин и лиганды, действующие в области моноаминергических рецепторов, неоднозначно влияли на функциональную активность эритроидных предшественников in vitro. Так, добавление в культуру неадгезирующих миелокариоцитов ЭП (10'9 М) (контрольная группа) вызывало усиление образования КОЕ-Э на протяжении всего периода наблюдения. Рост эритроидных колоний в метилцеллюлозной среде с препаратами аминов регистрировался менее продолжительно (1, 3, 5-е сутки). В экспериментах с оксимочевиной было обнаружено, что при стимуляции p-адренергических структур интенсивность входа КОЕ-Э в S-фазу клеточного цикла в значительной степени превышала таковую в тест-системе с ЭП. В то же время в группах с мезатоном, дофамином и серотонином значение показателя было ниже, чем в контроле с эритропоэтином. Между тем, скорость созревания эритроидных клеток под влиянием лигандов моноами-нергической природы в разы превосходила темпы дифференцировки в случае внесения в метилцеллюлозную среду ЭП. При этом изадрин и мезатон оказывали более выраженное стимулирующее воздействие на указанный процесс по сравнению с серотонином и дофамином.

В условиях назначения 5-фторурацила препарат эритропоэтина in vitro статистически достоверно увеличивал митотическую активность прекурсоров эритропоэза (5, 7-е сутки). Существенное эритропоэзстимулирующее действие оказывал и изадрин. Интересно отметить, что на 1-е сутки функциональная активность прекурсоров эритропоэза в группе с 0-адреномиметиком превосходила таковую в контроле с ЭП. Дофамин статистически достоверно увеличивал число митотически активных КОЕ-Э на 1-е сутки, но уже к 5-м суткам величина показателя составила 33 % от исходной. В этой группе индекс созревания эритроидных клеток угнетался на протяжении всего периода исследования. Продолжительная ингибиция деления и дифференцировки предшественников эритропоэза была обнаружена в тест-системах с мезатоном и серотонином (3, 5,7-е сутки).

Несколько иные закономерности были выявлены при изучении прямого действия Г-КСФ и моноаминергических лигандов на пул грануломоноцитар-ных предшественников в условиях цитостатической миелосупрессии. Так, при введении алкилирующего агента физиологически активные вещества (за исключением дофамина) способствовали усилению формирования КОЕ-ГМ. В группах с цитокином и Р-адреномиметиком после ингибиции деления на 1-е сутки отмечалось значительное расширение пула находящихся в S-фазе клеточного цикла грануломоноцитарных предшественников. Серотонин, изадрин и дофамин также увеличивали пролиферативную активность клеток гранулоцитарного ряда, причем величина показателя значительно превосходила таковую в контроле с Г-КСФ. Скорость созревания грануломоноцитарных прекурсоров при внесении в культуру изадрина, дофамина и серотонина также возрастала. В то же время в тест-системе с мезатоном величина соотношения КлОЕ-ГМ/КОЕ-ГМ оказалась ниже исходного уровня на протяжении всего периода наблюдения. В группе с Г-КСФ падение индекса дифференцировки на 1-е сутки опыта сменялось его увеличением на 3, 5,7-е сутки.

В условиях назначения фторпиримидинового антиметаболита характер сдвигов изучаемых процессов в отделе прекурсоров грануломоноцитопоэза был отличен от обнаруженного при использовании циклофосфана. Так, формирование КОЕ-ГМ под влиянием Г-КСФ, изадрина и серотонина регистрировалось на 7-е сутки, а дофамина - на 5, 7-е сутки наблюдения. В этих условиях темпы деления предшественников грануломоноцитопоэза также возрастали, причем наиболее выражено при стимуляции дофаминовых структур. В контроле с цитокином индекс дифференцировки грануломоноцитарных клеток изменялся волнообразно: увеличение показателя на 3, 7-е сутки и снижение на 5-е сутки эксперимента. Стимуляция in vitro p-адренергических (7-е сутки), дофаминергических (3, 5-е сутки) и серотонинергических (3-й сутки) структур вызывала существенное возрастание индекса созревания. Отдельно в ряду исследуемых физиологически активных веществ стоял мезатон, так как его внесение в тест-систему угнетало функциональную активность гра-нулоцитарно-макрофагальных прекурсоров на протяжении всего периода исследования.

Таким образом, в культуре неприлипающих клеток костного мозга мышей линии CBA/CaLac, перенесших цитостатическое воздействие, мезатон, изадрин, дофамин и серотонин наряду с гемопоэтическими факторами роста оказывают влияние на интенсивность образования КОЕ, а также темпы деления и скорость созревания прекурсоров гемопоэза. Из этого следует, что периферические моноамины являются неотъемлемой частью системы локальной регуляции коммитированных кроветворных предшественников.

Обращает на себя внимание то обстоятельство, что в динамике развития цитостатической болезни уровень ответа кроветворных клеток при внесении в тест-систему физиологически активных веществ моноаминергической природы или Г-КСФ и ЭП меняется не только количественно, но и качественно. В этой связи, далее нами был рассмотрен вопрос об избирательной чувствительности процессов деления и созревания прекурсоров гемопоэза к тому или иному стимулу в динамике развития цитостатической болезни. При этом в качестве дополнительных методов обработки результатов использовались интегральный показатель (ИП) и методы многомерной статистики (факторный, дискриминантный и кластерный анализы), что, в конечном итоге, позволило дополнить изучаемые процессы новыми характеристиками.

При цитостатических миелосупрессиях ИПskoe-гм в группах с Г-КСФ, дофамином, изадрином и серотонином существенно превосходил интегральный показатель в соответствующих контрольных группах. Однако детальный анализ результатов культуральных исследований методами многомерной статистики позволил установить, что характер стимуляции пролиферации КОЕ-ГМ лигандами был различен. Так, использование метода К-средпих позволило обнаружить, что препараты формировали 3 кластера. В первый вошли цитокин и дофамин, длительно поддерживающие высокий темп деления гранулоцитарно-макрофагальных предшественников (3-7-е сутки). Второй образовали изадрин и серотонин, способствующие кратковременному усилению роста митотической активности КОЕ-ГМ (3-й сутки). Отдельно в ряду

исследуемых физиологически активных веществ стоял мезатон (кластер № 3), так как стимуляция а-адренергических структур in vitro приводила к падению числа КОЕ-ГМ в S-фазе клеточного цикла. Результаты факторного анализа позволили говорить о межмодельных различиях в действии колоние-стимулирующего фактора и моноаминергических лигандов, так как в случае ЦФ наибольший вклад в структуру первой компоненты вносил дофамин (к=0,901) (дофамин > мезатон > Г-КСФ, при этом не следует забывать об ин-гибирующем действии а-адреномиметика), а в условиях введения 5-ФУ -изадрин (к=0,955) (изадрин > Г-КСФ > серотонин > дофамин).

Ингибиция гранулоцитопоэза, вызванная ЦФ, сопровождалась избирательным увеличением дифференцировки в группах с Г-КСФ (ИПид-т'" """=350 %) и изадрином íym"u=\5() %). В период миелосупрессии,

вызванной введением 5-ФУ, отмечалась последовательная смена чувствительности созревания гранулоцитарно-макрофагальных прекурсоров к регу-ляторному влиянию физиологически активных веществ: при стимуляции се-ротонинергических структур показатель возрастал на 1-е сутки (№l№rw=200 %), в тест-системе с дофамином - на 3-5-е сутки (ИПед.™=183 %), под влиянием цитокина - на 5-е сутки (ИПвд./-а/=200 %). В сроки регенерации ростка при назначении алкилирующего агента практически все исследуемые препараты (исключение составил мезатон) увеличивали ИП. Как показал дискри-минантный анализ, по выраженности эффекта лиганды расположились в следующем порядке: дофамин > изадрин > Г-КСФ > серотонин. В случае антиметаболита \Шид-гм 'е сутш в группе с серотонином составил 200 %, а при стимуляции Р-адренергических структур - 266 %. Показательно то обстоятельство, что в обеих моделях миелосупрессии на фоне снижения ИПид-гм'7'*

при применении мезатона in vitro значения факторных нагрузок достаточно высоки (2 фактор). Вполне вероятно, что снижение скорости созревания прекурсоров грануломоноцитопоэза имеет ведущее значение в патогенезе нейтрофильной лейкопении (в силу усугубления катехоламинами токсического действия цитостатиков на кроветворные предшественники - а-адренергический механизм).

Как уже подчеркивалось выше, при цитостатических воздействиях изадрин, эригропоэтин и дофамин способны поддерживать высокие темпы деления эритроидных прекурсоров (Щ\шадрт > ИПЭл > ИПдофш,ш)- Однако по типу действия только препарат эритропоэтина и p-адреномиметик следует отнести к одной группе, так как внесение в тест-систему дофамина в конце исследования угнетало процесс. Различный характер стимуляции лигандами подтверждался методом К-средних: изадрин и ЭП входят в состав одного кластера. Метод главных компонент позволил установить, что в условиях введения алкилирующего агента пролиферация предшественников эритропоэза более изменчива при p-адренергической стимуляции, о чем свидетельствует превосходство факторных нагрузок в опыте с изадрином (2 фактор; к=0,952) над выявленными в контроле с эритропоэтином (2 фактор; к=0,828). Подобная картина была обнаружена при назначении фторпиримидинового антиме-

таболита. Итак, прямое воздействие на р-адренсргичсские структуры приводит к большей стимуляции деления эритроидных клеток, чем внесение ЭП.

Существенные межмодельные различия проявились в случае прямого действия мезатона и серотонина. Указанные лиганды избирательно угнетали пролиферативную активность эритроидных прекурсоров при назначении 5-фторурацила и не влияли на ИПЖ№:} при введении циклофосфана.

В условиях гипоплазии, вызванной ЦФ, эритропоэтин и лиганды моно-аминергической природы значительно увеличивали индекс созревания эритроидных клеток. По данным линейного пошагового дискриминантного анализа по эффективности действия стимуляторы расположились следующим образом: изадрин > мезатон > серотонин > дофамин > эритропоэтин. Причем адреномиметики и серотонин формируют кластер № 1, ЭП и дофамин вошли в состав кластера № 2. При назначении 5-ФУ стимуляция in vitro специфических а-адренергических, серотонинергических, дофаминергических и эри-тропоэтинчувствительных структур угнетала дифференцировку прекурсоров эритропоэза. Наиболее выраженная ингибиция наблюдалась при внесении в культуру дофамина и серотонина. При этом если значения факторных нагрузок для серотонина (1 фактор; к=0,984) и дофамина (1 фактор; к=0,929) были существенно высоки, то коэффициенты корреляции в группах с адреномиме-тиками и ЭП не прошли редукцию данных.

Итак, использование многомерного статистического анализа позволило установить, что реализация токсического действия цитостатиков на гемопо-этические прекурсоры во многом опосредована через периферические а-адренергические механизмы (табл. 2). При этом необходимо отметить способность серотонина и дофамина избирательно угнетать процессы в отделе предшественников эритропоэза (более выражено при введении фторпирими-динового антиметаболита).

Таблица 2

Лиганды, снижающие пролиферативную активность и интенсивность дифференци-

ровки кроветворных предшественников при цитостатических воздействиях

Циклофосфан 5-фторурацил

Ингибиция Т Регенерация Ингибиция 1 Регенерация

Грануломоноцитарные предшественники

Пролиферация Г-КСФ мезатон мезатон мезатон

Дифференцировка Г-КСФ, мезатон

Эритроидные предшественники

Пролиферация дофамин мезатон серотонин дофамин мезатон серотонин

Дифференцировка мезатон серотонин дофамин эритропоэтин мезатон серотонин дофамин мезатон серотонин дофамин

По-видимому, сокращение пула митотически активных КОЕ в сроки развития миелосупрессии является следствием усиления катехоламинами (а-адренергические и дофаминергические механизмы) и серотонином проапоп-

тозного действия алкилирующего агента и антиметаболита. Это предположение подтверждается результатами ряда исследований, свидетельствующих об индукции и/или модуляции апоптоза гемопоэтических клеток серотонином [Betten А. et al., 2001; Yang М. et al., 2007] и катехоламинами [Cioca D.P., Wa-tanabe N„ Isobe M„ 2000; Josefsson E. et al., 2000; Lang P.A. et al., 2005], в том числе дофамином [Sookhai S. et al., 1996; Barzilai A. et al., 2000; Colombo C. et al., 2003; Lakshmi C. et al., 2005]. Можно полагать, что Г-КСФ на 1-е сутки после введения циклофосфана обладает схожим механизмом действия.

В период регенерации "насыщение" гемопоэтической ткани зрелыми кроветворными клетками, вероятно, приводит к запуску аминергических механизмов, сдерживающих деление КОЕ. Следует заметить, что приведенная гипотеза не является абсолютной. Известно, что клетки костного мозга, имеющие фенотип Thy 1,2+, играют важную роль в контроле процессов репарации поврежденного цитостатиками (циклофосфан, 5-фторурацил, адриа-мицин) гемопоэза [Гольдберг Е.Д. и др., 1999, 2002]. Причем стимуляция Т-клетками роста кроветворных прекурсоров, как прямая, так и опосредованная взаимодействием с адгезирующими элементами, зависит не столько от количества клеток микроокружения в костном мозге экспериментальных животных, сколько от их функционального состояния. По всей видимости, лиганды а-адренергической, дофаминергической и серотонинергической природы способны модулировать активность лимфоцитов при гипопластических состояниях, которые наряду с кроветворными предшественниками представлены в супернатантах неадгезирующей фракции миелокариоцитов. Исходя из этого, правильнее говорить не только о прямом, но и о непрямом - через ин-гибирующие факторы лимфоидных клеток, супрессирующем действии меза-тона, дофамина и серотонина на гемопоэтические клетки. Веским подтверждением такового заключения служит обнаруженная рядом исследователей чувствительность лимфоцитов к катехоламинам [Bosing-Schneider R., Haug М„ 1976; Федоров H.A., 1979; Depelchin A., Letesson J.J., 1981; Miles К. et al., 1984; Харкевич Д.Д., 1989] и снижение их секреторной активности адреноб-локаторами [Гольдберг Е.Д.и др., 1997].

Отдельно следует остановиться на группе лигандов, способных увеличивать темпы деления эритроидных (изадрин, эритропоэтин) и гранулоцитарно-макрофагальных (дофамин, изадрин, серотонин, Г-КСФ) предшественников (табл. 3).

Таблица 3

Лиганды, стимулирующие пролиферативную активность и интенсивность дифферен-

Циклофосфан 5-фторурацил

Ингибиция | Регенерация Ингибиция | Регенерация

Грануломоноцитарные предшественники дофамин > изадрин > серотонин > Г-КСФ

Эритроидные предшественники изадрин > эритропоэтин > дофамин эритропоэтин дофамин

Феномен повышения чувствительности кроветворных клеток к физиологически активным веществам in vitro имеет место не только в сроки увеличения содержания морфологически распознаваемых нуклеаров в костном мозге и периферической крови, но и в период миелосупрессии. По-видимому, причину этого противоречия следует искать в нарушении функций клеточных элементов ГИМ, препятствующих реализации пролиферативно-дифференцировочного потенциала прекурсоров гемопоэза в рамках целостного организма. Кроме того, возможная супрессия цитостатиками периферической нейрональной секреции указанных аминов также способна задерживать репарацию кроветворной ткани.

В заключение этого раздела работы мы попытались объяснить разный тип реагирования (угнетение, стимуляция) прекурсоров на внесение в культуру препаратов аминов и ростовых факторов. Учитывая гетерогенность популяции коммитированных кроветворных предшественников [Натан Д.Г., Зифф К.А., 1994; Воробьев А.И., 2002], следует говорить о клетках чувствительных и резистентных к цитостатикам. Существование последних дает возможность реализации программы восстановления кроветворной ткани при чрезвычайных воздействиях. Выявленное в ходе исследования преимущество стимулирующих эффектов физиологически активных веществ in vitro в случае назначения алкилирующего агента над таковыми в условиях введения антиметаболита, указывает на то, что токсичность противоопухолевых препаратов во многом регламентирует величину популяций чувствительных и резистентных прекурсоров эритроидного и грануломоноцитарного типа, и, как следствие, скорость регенерации эритроидного и гранулоцитарного ростков кроветворения.

Следующий раздел работы был посвящен особенностям локальной регуляции кроветворения при цитостатических воздействиях.

Введение алкилирующего агента снижало общее количество ГО в костном мозге на 1-5, 7-е сутки исследования, что было связано с нарушением процессов формирования клеточных комплексов с центрально расположенным макрофагом (1-7-е сутки) и стромальной клеткой (1-5-е сутки). Анализ цитограмм позволил выявить снижение числа ассоциаций эритроидного типа на протяжении всего периода исследования. Дефицит смешанных ГО в кроветворной ткани сохранялся менее продолжительно: к 7-м суткам их содержание практически нормализовалось. Наиболее быстро восстанавливалось содержание гранулоцитарных клеточных комплексов.

Циклофосфан нарушал продукцию колониестимулирующей активности клетками кроветворного микроокружения на протяжении всего периода исследования. В то же время уровень сывороточной КСА возрастал на 1,3, 7-е сутки наблюдения, однако только на 1 -е сутки величина показателя в опыте статистически достоверно превосходила таковую в интактном контроле. Секреция эритропоэтической активности миелокариоцитами увеличивалась к 7-м суткам, тогда как изменения уровня ЭПА в сыворотке крови были незначительными.

Под влиянием фторпиримидинового антиметаболита отмечалось более выраженное, чем при ЦФ, угнетение процессов формирования ГО в костном мозге. Так, статистически достоверное уменьшение содержания клеточных комплексов с центрально расположенным макрофагом и стромальным элементом регистрировалось дважды: на 1-5-е и 8-10-е сутки опыта. На 6, 7-е и 12-е сутки исследования отмечалось увеличение абсолютного числа клеточных ассоциаций. Причем если в указанные сроки количество макрофагполо-жительных комплексов нормализовалось, то интенсивность формирования фибробластоидных ГО существенно превосходила исходный уровень. Динамика содержания эритроидных, гранулоцитарных и эритро-гранулоцитарных гемопоэтических островков в целом повторяла таковую в случае с макрофаги фибробластсодержащими ассоциациями. Обращало на себя внимание то обстоятельство, что интенсивность восстановления структурно-функциональной организации гранулоцитарного компартмента кроветворения значительно опережала скорость образования эритроидных ГО.

После назначения 5-фторурацила отмечалось резкое увеличение секреции эритропоэтической активности адгезирующими (1, 3-й сутки) и неадге-зирующими (1-е сутки) клетками кроветворного микроокружения. Продукция КСА миелокариоцитами в указанные сроки, напротив, нарушалась. Антиметаболит не влиял на уровень сывороточного ЭПА на протяжении всего периода исследования, но способствовал стимуляции гранулоцитарно-макрофагального колониеобразования гуморальными ростовыми факторами, полученными на 1-е сутки эксперимента.

Совокупность выявленных феноменов позволяет сделать вывод о том, что повреждение структурно-функциональной организации кроветворной ткани, нарушение продукции гемопоэтических факторов роста клеточными элементами ГИМ играют существенную роль в развитии депрессии костномозгового кроветворения, лейкопении и ретикулоцитопении в периферической крови мышей линии CBA/CaLac в условиях введения цитостатиков в 1/3 МПД. Более глубокая и продолжительная ингибиция гемопоэза у животных, получавших 5-фторурацил, обусловлена значительным токсическим действием антиметаболита на формирование ГО и секрецию КСА. Постцитостатиче-ская регенерация эритрона и белой крови связана с восстановлением функций стромальных и макрофагальных элементов ГИМ (образование ГО).

Дальнейшие эксперименты позволили расширить представления о взаимодействии аминов и клеток микроокружения в регуляции прекурсоров гемопоэза. ЦФ in vitro (20 мкг/мл) существенно снижал способность прилипающих клеток кроветворного микроокружения связывать интактные и обработанные эритропоэтином (10"9 М) эритроидные предшественники. Однако стимуляция Р-адренергических и серотонинергических структур соответственно изадрином и серотонином (10 М) на подвергнутых цитостатическому воздействию макрофагах препятствовала ингибиции эритроидного колониеобразования.

Известно, что при цитостатических воздействиях важная роль в регуляции гемопоэза принадлежит компонентам основного вещества соединитель-

ной ткани костного мозга (протеогликаны, гликозаминогликаны) [Дыгай A.M. и др., 1992; Гольдберг Е.Д. и др., 2007]. В связи с этим, нам представилось целесообразным изучить возможность восстановления подавленной ци-тостатиком функциональной активности адгезирующих клеток ГИМ N-ацетилнейраминовой кислотой, которая входит в состав гликозаминоглика-нов (ГАГ), в комбинации с лигандами моноаминергической природы.

Установлено, что в метилцеллюлозной среде N-ацетилнейраминовая кислота (50 мкг/мл) увеличивала способность подвергнутых прямому воздействию ЦФ (20 мкг/мл) прилипающих клеток ГИМ связывать обработанные изадрином или серотонином (10"8 М) эритроидные предшественники, что косвенно подтверждает участие сиаловой кислоты в периферических р-адренергических и серотонинергических механизмах индукции пролиферации предшественников эритропоэза.

На основании данных литературы и результатов собственных экспериментальных исследований нами предложена схема участия периферических моноаминов и специфических рецепторов в регуляции кровообразования при цитостатических воздействиях (рис. 1). Периферические моноамины (нейро-нальной природы) оказывают стимулирующее влияние на резистентные к цитостатикам предшественники кроветворения как путем прямого воздействия на соответствующие плазматические рецепторы, так и опосредованно через клеточные элементы ГИМ. При этом ГАГ потенцируют действие цитоки-нов. В то же время следует учитывать, что стимулы моноаминергической природы (в основном а-адренергические, серотонинергические) способны инициировать апоптическую гибель прекурсоров гемопоэза, чувствительных к цитостатикам.

Далее нами изучалась роль центральных адренергических, дофаминер-гических и серотонинергических структур в регуляции кроветворения. На первом этапе исследовалось регуляторное влияние моноаминов ЦНС на систему крови в условиях оптимальной жизнедеятельности мышей линии CBA/CaLac. Введение резерпина, галоперидола либо ципрогептадина вносило некоторые изменения в состояние костномозговой ткани и периферической крови экспериментальных животных. Однако обнаруженные сдвиги в подавляющем большинстве случаев статистически достоверно не отличались от соответствующих значений в интактном контроле.

Приведенные факты в целом подтверждают существующую точку зрения о том, что ЦНС не играет решающей роли в образовании клеток эритро-на и белой крови в условиях сбалансированного гемопоэза. В норме преимуществен локальный контроль кроветворения [Гольдберг Е.Д. и др., 1992, 1996, 1999, 2002]. Однако результаты собственных культуральных исследований позволяют внести некоторые коррективы в известное положение. Установлено, что введение резерпина снижало интенсивность роста КОЕ-ГМ и усиливало формирование КОЕ-Э в культуре неадгезирующих миелокариоци-тов. При этом в случае внесения в тест-систему адреномиметиков выраженность изменений величин показателей была более значительной, чем в опыте с эритропоэтином in vitro. Обращало на себя внимание избирательное угне-

ЦИТОСТАТИЧЕСКОЕ ВОЗДЕЙСТВИЕ

Рис. 1. Схема регуляции периферическими моноаминами кроветворных клеток-предшественников в услов цитостатических воздействий. Сплошной линией обозначена стимуляция, пунктирной - ингибиция.

тение антисеротониновым препаратом периферических ссротониновых механизмов контроля активности эритроидных предшественников, а нейролептиком - опосредованный дофаминергическими структурами рост КОЕ-ГМ. Как видно, в рассматриваемой модели кроветворения прослеживается троп-ность эритроидных клеток к регуляторному влиянию центрального серото-нина, а гранулоцитарно-макрофагальных прекурсоров - к дофаминовым структурам мозга.

Изучение зависимости восстановления подавленного цитостатиками костномозгового кроветворения от метаболизма катсхоламинов ЦНС позволило выявить, что в условиях введения циклофосфана резерпин препятствовал снижению числа нейтрофильных (3, 5-е сутки) гранулоцитов в костном мозге. При этом препарат не влиял на динамику содержания клеток СМФ на протяжении всего периода исследования и усугублял депрессию эритропоэза на 4-е сутки эксперимента. Следует отметить накопление лимфоцитов на 2, 3-й сутки опыта и падение величины показателя на 6-е сутки. Системное введение симпатолитика препятствовало развитию нейтрофильной лейкопении (2, 4-е сутки) и ретикулоцитопении (2—4-е сутки) в периферической крови. В противоположность этому, лимфопения на 4-е сутки исследования усугублялась.

При последовательном назначении резерпина и 5-фторурацила регистрировалось кратковременное (4-е сутки) увеличение числа нейтрофильных гранулоцитов и лимфоцитов в гемопоэтической ткани. Однако в сроки активного восстановления гемопоэза симпатолитик уменьшал количество практически всех исследуемых морфологически распознаваемых миелокариоци-тов: незрелых (8, 11-е сутки) и зрелых (11-е сутки) нейтрофилов, лимфоцитов (6, 9, 10-е сутки) и эритрокариоцитов (6, 9-11-е сутки). В периферической крови препарат уменьшал содержание сегментоядерных нейтрофилов (4, 11-е сутки), что приводило к усугублению нейтрофилопении на 4-е сутки эксперимента и отмене нейтрофилеза на 11-е сутки. Действие симпатолитика на периферическое звено лимфоидного ростка и эритрона было неоднозначно. Так, лимфопения на 1-е сутки и ретикулоцитопения на 1, 2, 6-е сутки в опыте были менее выражены, чем в цитостатическом контроле. С другой стороны, препарат усугублял лимфопению на 5, 8-11-е сутки и ретикулоцитопению на 8,12-е сутки.

Итак, резерпин способствует восстановлению кроветворной ткани (преимущественно гранулоцитопоэза) при назначении циклофосфана и задерживает регенерацию гемопоэза в условиях введения 5-фторурацила (более эрит-роидного ростка кроветворения).

Учитывая используемую в работе дозу и механизм действия резерпина (преимущественное истощение депо норадреналина, дофамина и незначительно - серотонина в ЦНС), можно предположить, что катехоламины мозга усиливают токсическое действие алкилирующего агента на гемопоэтические клетки (табл. 4). В противоположность этому, при назначении антиметаболита норадреналин и дофамин способствуют стимуляции процессов репарации эритроидного и гранулоцитарного ростков кроветворения.

Таблица 4

Регуляторное влияние катехоламинов на систему крови мышей линии СВА/СаЬас при цитостатических воздействиях (по результатам анализа ИП)_

Ц|Псло( >осфан 5-фторурацил

Ингибиция Регенерация Ингибиция Регенерация

Эритропоэз - 0 + +

Гранулоцитопоэз - - +

Примечание. Здесь и в таблицах 6, 8 увеличение количества клеток эритроидного и

гранулоцитарлого ростка кроветворения +, снижение изменений нет 0.

Как было продемонстрировано ранее, лиганды моноаминергической природы выступают в качестве элементов системы локальной регуляции ге-мопоэтических прекурсоров при цитостатических воздействиях. В этой связи, мы рассмотрели возможность действия резерпина на кроветворные клетки через периферические адренергические и дофаминергические структуры, систему КСФ и эритропоэтин.

В условиях назначения циклофосфана симпатолитик значительно снижал темпы деления прекурсоров эритропоэза. По чувствительности к супрес-сирующему действию резерпина периферические рецепторные механизмы, контролирующие активность процесса, расположились следующим образом: эритропоэтинчувствительные5, "е сутш > адренергические3,7"2 су""'" > дофамино-вые"-с сутк". При введении 5-фторурацила ЭПи7"е суши, дофамин'-*"сутк" и, в меньшей степени, а-адренергические'""сутк" механизмы участвовали в реализации ингибирующего влияния симпатолитика на деление КОЕ-Э. На обеих моделях цнтостатического воздействия резерпин угнетал (ЦФ > 5-ФУ) созревание эритроидных клеток в тест-системе с ЭП и изадрином (регенерация), а при назначении 5-фторурацила - дополнительно и в культуре с мезатоном {ингибиция).

Как это не парадоксально, но при цитостатических воздействиях фармакологическое истощение депо катехоламинов в ЦНС увеличивало интенсивность дифференцировки эритроидных клеток в группах с эритропоэтином, мезатоном и дофамином (преимущественно в период ингибиции), причем стимуляция процесса в случае с алкилирующим агентом превосходила таковую в условиях введения антиметаболита. В опыте с 5-ФУ регистрировался прирост в культуре с мезатоном5,7~есут>:" и изадрином3 "0'""'".

Симпатолитик неоднозначно влиял на периферические механизмы регуляции предшественников грануломоноцитопоэза при цитостатических воздействиях. Так, при назначении циклофосфана препарат оказывал преимущественно стимулирующее действие на пролиферацию (дофамин7"7"* су"":\ меза-тон'-^о""™, Г-КСФ/"'?""суши) и дифференцировку (мезато/"7"*сутт\ дофамин*7" сутт,^ г_КСф^ КОЕ-ГМ. В угнетении функциональной активности гра-нулоцитарно-макрофагальных прекурсоров оказались задействованы р-адренергические структуры и цитокин.

При применении 5-фторурацила резерпин снижал деление и созревание КОЕ-ГМ. В супрессирующем действии симпатолитика на прекурсоры участвовали дофаминергические структуры и Г-КСФ (весь период наблюдения) и адренергические механизмы {регенерация). Между тем, деструкция крове-

творной ткани сопровождалась ростом темпов деления и созревания примитивных предшественников, сопряженных с адренергическими структурами.

Исходя из представленных выше данных, можно сделать заключение о том, что при цитостатических воздействиях катехоламины оказывают как ин-гибирующее, так и стимулирующее влияние (табл. 5). В частности, при развитии миелосупрессии, вызванной назначением фторпиримидинового антиметаболита, в сокращении пула митотически активных КОЕ-Э и КОЕ-ГМ задействованы исключительно адренергические структуры. В условиях введения алкилирующего агента развитие гипоплазии кроветворной ткани во многом связано с ингибицией а-адренергических, дофаминергических и Г-КСФ-опосредованных механизмов регуляции прекурсоров грануломоноцитарного типа.

Таблица 5

Периферические механизмы ингибирующего и стимулирующего влияния катехо-ламинов на пролиферацию кроветворных предшественников при цитостатических

воздействиях (по данным ИП)

Рецепторные механизмы Циклофосфан 5-фторураннл

Ингибиция 1 Регенерация Ингибиция ) Регенерация

Грануломоноцитарные предшественники

система Г-КСФ -- + + + + +

а-адренергические - 0 -- +

(3-адренергические + + - - + +

дофаминергические - - + + L + +

Эритроидные предшественники

эритропоэтин + + + + + + + + + + +

а-адренергические 0 0 + -

(3-адренергические + + + - 0

дофаминергические + + 0 + + + 0

Примечание. Здесь и табл. 7, 9 увеличение темпов пролиферации гемопоэтических

прекурсоров +, снижение-, изменений нет 0.

Очевидно, что природа цитостатика во многом определяет характер взаимоотношения дистантных (катехоламины) и локальных (адренергические и дофаминергические структуры, ростовые факторы) механизмов, что, в свою очередь, регламентирует характер сдвигов в отделе прогениторных клеток крови.

Вместе с тем, ряд феноменов, обнаруженных в культуре, достаточно трудно интерпретировать: стимуляцию центральными катехоламинергиче-скими структурами деления гемопоэтических прекурсоров в условиях развития миелосупрессии и задержку входа КОЕ в S-фазу фазу в период регенерации костного мозга. Безусловно, создаваемые in vitro модели кроветворения не в состоянии воссоздать достоверной картины кроветворения в организме. Объяснение выявленным противоречиям, вероятно, находится, в том, что в рассматриваемые сроки клеточные элементы ГИМ (но не нейромедиаторные системы) являются ведущими структурами, определяющими активность прогениторных клеток.

Дальнейшие эксперименты были направлены на изучение действия резерпина на ГИМ. Показано, что в условиях назначения алкилирующего агента препарат способствовал восстановлению структурно-функциональной организации кроветворной ткани, о чем свидетельствовало увеличение количества макрофагпозитивных (1-5-е сутки), фибробластных (1-4-е сутки), гра-нулоцитарных (1-4-е сутки), эритроидных (1, 2, 4, 5-е сутки) и смешанных (1-5-е сутки) гемопоэтических островков в костном мозге. Симпатолитик отменял высокий уровень сывороточной КС А (1-е сутки). При этом регистрировалась стимуляция секреции ЭПА адгезирующими клетками костного мозга (5,7-е сутки).

Истощение депо катехоламинов препятствовало восстановлению структурно-функциональной организации костного мозга при назначении 5-фторурацила, о чем свидетельствовало уменьшение числа ГО с центрально расположенным макрофагом (6-8, 12-е сутки) и стромальным элементом (6, 7, 12-е сутки), а также клеточных ассоциаций гранулоцитарного (6, 7, 12-е сутки), эритроидного (6, 8, 9,12-е сутки) и эритро-гранулоцитарного (6, 7, 9, 10, 12-е сутки) типа. Резерпин снижал высокий уровень ЭПА в кондиционных средах неадгезирующих клеток ГИМ и КСА в сыворотке крови (1-е сутки). В то же время продукция ЭПА адгезирующими миелокариоцитами и способность сывороточных ростовых факторов стимулировать эритроидное колониеобразование возрастали.

Таким образом, при введении циклофосфана увеличение клеточности гранулоцитарного и эритроидного ростков под влиянием резерпина связано с формированием de novo гемопоэтических островков в костном мозге и продукцией факторов роста КОЕ-Э адгезирующими миелокариоцитами. По-видимому, на этой модели миелосупрессии катехоламины сдерживают активность стромальных элементов кроветворного микроокружения (макрофаги, фибробласты). При применении 5-фторурацила еще большее нарушение симпатолитиком процессов формирования ГО и падение уровня сывороточного КСА и ЭПА в кондиционных средах неадгезирующих клеток на фоне увеличения секреции ЭПА прилипающими миелокариоцитами и уровня ЭПА в крови свидетельствует об избирательной чувствительности элементов ГИМ к регуляторному влиянию центральных аминов. Очевидно, в этих условиях катехоламины оказывают стимулирующее действие на процессы образования ГО и продукцию гемопоэтических факторов роста неприлипающими клетками ГИМ, но угнетают секрецию стимулирующих эритропоэз цитокинов прилипающими миелокариоцитами.

При изучении влияния блокады постсинаптических дофаминовых Д2 рецепторов галоперидолом на подавленный цитостатиками гемопоэз было обнаружено, что в условиях введения циклофосфана препарат препятствовал снижению числа эритрокариоцитов (3, 4, 5-е сутки) и клеток моноцит-макрофагалыгого ряда (3, 5, 6-е сутки) в костном мозге. Действие нейролептика на гранулоцитарный росток было не столь однозначно. Если в ранние сроки наблюдения количество зрелых форм нейтрофильных гранулоцитов (1, 2, 3-й сутки) снижалось, то на 5,6-е сутки эксперимента, напротив, регистри-

ровалось увеличение их числа. В периферической крови галоперидол препятствовал развитию нейтрофилеза и ускорял выход ретикулоцитов из кроветворной ткани (6, 7-е сутки). Усугубление лимфопении на 1, 2-е сутки исследования сменялось на существенный прирост лимфоцитов на 7-е сутки.

В случае назначения 5-фторурацила системное введение нейролептика ускоряло восстановление гранулоцитопоэза и лимфопоэза, о чем свидетельствовало накопление в костном мозге нейгрофильных гранулоцитов и лимфоцитов на 5-е сутки исследования, а не на 6-е сутки, как в контрольной группе (без галоперидола). К концу исследования (6, 7-е сутки) интенсивность регенерации указанных ростков кроветворения в опыте падала и значительно уступала таковой в цитостатическом контроле. Действие галоперидола на эритроидный росток было ингибирующим, что подтверждалось отменой роста числа эритрокариоцитов на 6-е сутки исследования. В периферической крови блокада постсинаптических Д2 рецепторов в ЦНС препятствовала развитию нейтрофильной лейкопении на 2, 7-е сутки и увеличивала содержание ретикулоцитов на 5-7-е сутки после введения антиметаболита. В противоположность этому, представительство лимфоцитов в опыте снижалось (6, 7-е сутки).

Итак, галоперидол в условиях введения циклофосфана уменьшает кле-точность гранулоцитарного ростка кроветворения и увеличивает скорость регенерации эритрона, при назначении 5-фторурацила способствует восстановлению гранулоцитопоэза и усугубляет депрессию эритрона (табл. 6). Исходя из этого, вполне допустимо, что дофаминергические структуры тканей мозга препятствуют развитию ингибиции костномозгового гранулоцитопоэза и еще более снижают активность эритропоэза в условиях введения алкилирующего агента. В случае 5-фторурацила просматривается обратная закономерность.

Таблица 6

Регуляторное влияние дофаминергических структур ЦНС на систему крови мышей линии СВА/СаЬас при цитостатических воздействиях (по результатам анализа ИП)

Циклов юсфан 5-фторураиил

Ингибиция Регенерация Ингибиция Регенерация

Эритропоэз - - 0 +

Гранулоцитопоэз + 0 0 -

Фармакологическая блокада постсинаптических дофаминергических Д2 рецепторов вызывала существенные изменения активности процессов в отделе кроветворных предшественников мышей линии СВАУСаЬас, перенесших цитостатическое воздействие. Так, при введении ЦФ галоперидол снижал функциональную активность эритроидных предшественников в сроки развития миелосупрессии. В период регенерации кроветворной ткани пул митоти-чески активных КОЕ-Э продолжал сокращаться, при этом скорость созревания эритроидных клеток, напротив, возрастала. В условиях введения 5-фторурацила нейролептик угнетал пролиферативную активность и интенсивность дифференцировки прекурсоров, связанных с системой эритропоэтина,

и оказывал модулирующее (нормализующее) влияние на процессы, ассоциированные с периферическими дофаминергическими структурами.

Нейролептик уменьшал темпы деления гранулоцитарно-макрофагальных предшественников в сроки ингибиции гранулоцитопоэза и увеличивал их в период регенерации. При этом скорость созревания КОЕ-ГМ, сопряженная с системой КСФ, падала, а ассоциированная с дофамином - возрастала. При назначении 5-фторурацила нейролептик в целом задерживал цитокинзависи-мый рост темпов пролиферации и дифференцировки гранулоцитарно-макрофагальных прекурсоров, в опыте с дофамином стимуляция указанных процессов сменялась на умеренное снижение их активности.

Полученные данные позволяют утверждать, что при цитостатических воздействиях дофамин тканей мозга оказывает ингибирующее влияние на грануломоноцитарные клетки-предшественники (табл. 7). Причем если при назначении 5-фторурацила вход КОЕ-ГМ в Б-фазу митотического цикла (миелосупрессия) затрудняет исключительно дофаминергическая стимуляция, то в случае введения циклофосфана в падении пролиферативной активности грануломоноцитарных прекурсоров (регенерация) задействованы структуры к дофамину и Г-КСФ.

Таблица 7

Периферические механизмы ингибирующего и стимулирующего влияния дофами-нергической системы на пролиферацию кроветворных предшественников при ци-

тостатических воздействиях (по данным ИП)

Рецепторные механизмы Циклофосфан 5-фторурацил

Ингибиция |Регенерация Ингибиция | Регенерация

Грануломоноцитарные предшественники

система Г-КСФ + - + +

дофаминергические + - - +

Эритроидные предшественники

эритропоэтин + + + +

дофаминергические + + - + 0

Между тем, результатом взаимодействия дофаминергической системы с ЭП и системой КСФ может выступать увеличение темпов деления гемопо-этических прекурсоров (периферические дофаминергические структуры также не стали исключением). Подобное было обнаружено и при взаимодействии центральных катехоламинергических структур с гемопоэтическими факторами роста (эксперимент с резерпином): в случае назначения антиметаболита со стороны предшественников всех классов, при моделировании миело-супрессии алкилирующим агентом - КОЕ-Э. Во многом совпадают и сроки стимуляции деления катехоламинами в целом (эксперимент с резерпином) и дофамином в частности (эксперимент с галоперидолом). Сопоставление шзкое"1"""" И ш1$коеттер"дт выявило, что глубина сдвигов показателя в случае введения симпатолитика и нейролептика различна. В этой связи возникает вопрос о вкладе норадреналина и дофамина тканей мозга в регуляцию гемопоэтинзависимого входа КОЕ в Б-фазу митотического цикла. Анализ коэффициентов корреляции, прошедших редукцию данных (факторный ана-

лиз), позволил сделать следующие выводы. В условиях введения ЦФ выраженность эритропоэзстимулирующего эффекта дофамина превосходит активность адренергической системы в период развития миелосупрессии, но в сроки регенерации наблюдается обратное. При назначении 5-ФУ чувствительность системы КСФ к стимулирующему действию аминов расположилась следующим образом: дофамин > норадреналин. Со стороны пула эрит-роидных прекурсоров обнаруживается противоположная картина.

Введение нейролептика неоднозначно влияло на систему локальной регуляции кроветворения при цитостатических воздействиях. Препарат практически восстанавливал структурно-функциональную организацию гемопо-этической ткани на 1,2, 4, 6-е сутки после введения ЦФ, о чем свидетельствовал существенный прирост числа гемопоэтических островков всех типов в указанные сроки. Некоторое снижение содержания макрофагпозитивных, гранулоцитарных (3, 5-е сутки), эритроидных (1-е сутки) и смешанных (3-й сутки) клеточных ассоциаций не умаляло стимулирующий эффект препарата. Галоперидол увеличивал продукцию ЭПА прилипающими миелокариоцита-ми (7-е сутки) и выход КОЕ-Э в культуре интактных клеток костного мозга под влиянием сыворотки крови, полученной на 1, 3, 5-е сутки после введения цитостатика. Вместе с тем, уровни КСА в биологических средах опытных животных не отличались от таковых в цитостатическом контроле.

Блокада постсинаптических Д2 рецепторов вносила определенные изменения со стороны динамики содержания макрофагпозитивных, содержащих стромальную клетку, эритроидных, гранулоцитарных и эритро-гранулоцитарных клеточных ассоциаций в костном мозге при назначении 5-фторурацила: отмечались периоды как увеличения, так и уменьшения величин показателей. Однако в целом нарушения процессов формирования ГО сохранялись (преимущественно комплексов эритроидного и смешанного типа) и регистрировались в те же сроки, что и в цитостатическом контроле (16-е сутки). Причем к концу исследования - 7-е сутки, ситуация усугублялась по причине отмены галоперидолом восстановления до уровня интактного контроля числа гемопоэтических островков. В этих условиях высокий уровень ЭПА в супернатантах неадгезирующих миелокариоцитов и КСА в сыворотке крови снижался (1-е сутки). В противоположность этому, продукция факторов роста КОЕ-ГМ адгезирующими миелокариоцитами возрастала (7-е сутки).

Итак, галоперидол способствует восстановлению активности процессов формирования ГО, секреции ЭПА адгезирующими клетками ГИМ и уровня сывороточной эритропоэтической активности при введении циклофосфана. В противоположность этому, при использовании 5-фторурацила нейролептик углубляет нарушение функциональной активности клеточных элементов ГИМ и снижает концентрацию сывороточного КСА. Судя по всему, центральные дофаминергические структуры мозга усугубляют повреждающее действие алкилирующего агента на адгезирующие нуклеары ГИМ, но препятствуют развитию деструктивных изменений в кроветворной ткани мышей, получавших фторпиримидиновый антиметаболит.

Далее нами изучалась роль серотонинергических структур мозга в регуляции кроветворения при цитостатических воздействиях. Нарушение серото-ниновой медиации в ЦНС ципрогептадином не оказывало существенного влияния на динамику содержания гранулоцитов, клеток моноцит-макрофагального ряда и лимфоцитов в костном мозге животных в условиях введения ЦФ на протяжении всего периода исследования. Количество эрит-рокариоцитов возрастало на 5-е сутки опыта, но на 7-е сутки отмечалось усугубление депрессии эритропоэза. В периферической крови антисеротонино-вый препарат отменял нейтрофильную лейкопению на 6-е сутки эксперимента, но вызывал еще больший, чем в цитостатическом контроле, дефицит лимфоцитов (2, 4, 6-е сутки). В свою очередь, число ретикулоцитов увеличивалось на 3, 5-е сутки, но к концу наблюдения вновь снижалось (6, 7-е сутки).

При назначении 5-ФУ ципрогептадин ускорял процессы регенерации эритроидного ростка кроветворения, о чем свидетельствовало накопление эритрокариоцитов в костном мозге (4, 6, 7, 12-е сутки) и ретикулоцитов в периферической крови (2, 4, 5, 6,7, 12-е сутки). В то же время антисеротонино-вый препарат усугублял депрессию костномозгового гранулоцитопоэза на 3, 5, 7-е сутки опыта, а лимфопоэза - на 5-е сутки. В периферической крови имело место усугубление нейтрофильной лейкопении (2, 4, 5, 7-е сутки) и лимфопении (3-7, 12-е сутки). Следует отметить, что на 4, 6-е сутки эксперимента содержание нейтрофильных гранулоцитов и лимфоцитов в кроветворной ткани превосходило таковое в цитостатическом контроле.

Приведенные факты свидетельствуют о том, что при назначении цикло-фосфана ципрогептадин не оказывает существенного влияния на гранулоци-топоэз, при этом клеточность эритроидного ростка кроветворения в период миелосупрессии возрастает и падает в сроки регенерации. В условиях введения антиметаболита антисеротониновый препарат стимулирует эритропоэз, но снижает содержание нейтрофильных гранулоцитов в системе крови.

Учитывая механизм действия ципрогептадина, можно предположить, что серотонинергические структуры мозга способствуют развитию ингиби-ции костномозгового эритропоэза и ретикулоцитопении в периферической крови (более при назначении антиметаболита), но, вместе с тем, участвуют в процессах регенерации гранулоцитопоэза (преимущественно при введении 5-фторурацила) (табл. 8).

Таблица 8

Регуляторное влияние серотонинергических структур ЦНС на систему крови мышей линии СВА/СаЬас при цитостатических воздействиях (по результатам анализа ИП)

Циклос юсфан 5-фторурацил

Икгибиаия Регенерация Ингибиция Регенерация

Эритропоэз 0 - + - -

Гранулоцитопоэз 0 0 + - +

Ципрогептадин подавлял сопряженные с эритропоэтином деление и созревание предшественников эритропоэза при назначении циклофосфана и 5-фторурацила. После введения алкилирующего агента ингибиции подверга-

лись и ассоциированные с серотонинергичсскими структурами пролиферация и дифференцировка эритроидных клеток.

Антисеротониновый препарат в целом угнетал ассоциированные с Г-КСФ деление и созревание гранулоцитарно-макрофагальных клеток-предшественников (5-фторурацил > циклофосфан). Изменения активности процессов, сопряженных с периферическим серотонином, отличались от выявленных в тест-системе с цитокином. Если при введении антиметаболита падение индекса созревания КОЕ-ГМ сопровождалось ростом их пролифера-тивной активности, то в случае назначения алкилирующего агента ингибиция деления (лшелосупрессия) сменялась на увеличение функциональной активности прекурсоров грануломоноцитопоэза (регенерация).

Из полученных результатов можно сделать вывод о том, что регулятор-ное влияние центральных серотонинергических структур на кроветворные клетки-предшественники осуществляется через эритропоэтин, систему КСФ и периферические серотонинергические структуры (табл. 9). Обращает на себя внимание, что в условиях назначения фторпиримидинового антиметаболита с ростовыми факторами связано преимущественно увеличение темпов деления кроветворных клеток. Причем анализ ИП5А-о/"4"1"", ИПamГa,'0"c,'"aa, и Иу[ЖОЕЦи"р°?с>тади" позволил установить, что гемостимулирующий эффект се-ротонина превосходит таковой у катехоламинов. В противоположность этому, серотонинергические механизмы участвуют в ингибиции пролиферации КОЕ-ГМ.

Таблица 9

Периферические механизмы ингибирующего и стимулирующего влияния серото-ниновой системы на пролиферацию кроветворных предшественников при цитоста-тических воздействиях (по данным ИП)_____

Рецепторные механизмы Циклофосфан 5-фторурацил

Ингибиция | Регенерация Ингибиция | Регенерация

Грануломоноцитарные предшественники

система Г-КСФ + - + +

серотонинергические + - - 0

Эритроидные предшественники

эритропоэтин + 0 + +

серотонинергические + + 0 0

Между тем, в условиях введения алкилирующего агента расширению пула митотически активных КОЕ в период миелосупрессии способствуют не только эритропоэтин и Г-КСФ, но и серотонин. По выраженности эритропо-этинзависимой стимуляции роста колоний центральные серотонинергические структуры уступают дофаминергическим, но превосходят адренергические. В последующем регенерация кроветворной ткани, высокие темпы деления эритроидных клеток поддерживаются исключительно серотонинергическими механизмами, в то время как вход КОЕ-ГМ в Б-фазу клеточного цикла инги-бируется (этому содействует Г-КСФ и серотонин).

Фармакологическая блокада центральных постсинаптических С2 рецепторов существенно изменяла активность клеточных элементов системы ло-

кальной регуляции кроветворения при цитостатической болезни. Так, при назначении алкилирующего агента ципрогептадин способствовал восстановлению активности процессов формирования гемопоэтических островков, о чем свидетельствовало увеличение числа макрофагпозитивных (4, 7-е сутки) и содержащих стромальную клетку (4, 5, 7-е сутки) клеточных комплексов в костном мозге. При этом возрастали темпы формирования гранулоцитарных и, в меньшей степени, эритроидных и смешанных ГО (4, 5, 7-е сутки). Одновременно повышался уровень ЭПА (1-е сутки) и КС А (7-е сутки) в сыворотке крови, а также продукция факторов роста КОЕ-Э адгезирующими нуклеара-ми ГИМ (1-7-е сутки).

В условиях введения 5-фторурацила ципрогептадин препятствовал разрушению структурно-функциональной организации гемопоэтической ткани на 2-4, 6, 7, 12-е сутки исследования. Наиболее существенно увеличивалось содержание макрофагположительных и эритроидных ГО. На 5-е сутки опыта возрастала продукция эритропоэтической активности адгезирующими нук-леарами. Вместе с тем, высокий уровень ЭПА в супернатантах адгезирующих (1, 3-й сутки) и неадгезирующих (1-е сутки) миелокариоцитов и сывороточных ростовых факторов (1-е сутки), наблюдаемый в цитостатическом контроле, отменялся.

Таким образом, нарушение серотониновой медиации в ЦНС ципрогепта-дином стимулирует восстановление структурно-функциональной организации при цитостатических воздействиях (в случае с 5-фторурацилом преимущественно эритроидных ГО). При этом антисеротониновый препарат снижает активность секреции факторов роста КОЕ-Э клетками ГИМ при назначении антиметаболита, но увеличивает концентрацию ЭПА в супернатантах адгезирующих миелокариоцитов и сыворотке крови в условиях введения алкилирующего агента.

Исходя из результатов собственных экспериментов и данных литературы, следует признать, что развитие цитостатической миелосупрессии связано не только с угнетением и дискоординацией процессов деления и созревания кроветворных клеток-предшественников. Не последнюю роль в этом играют длительно сохраняющиеся деструктивные изменения структурно-функциональной организации кроветворной ткани (нарушения межклеточных взаимодействий и продукции клетками ГИМ гемопоэтических ростовых факторов). В клинической практике препараты рекомбинантного человеческого эритропоэтина и гранулоцитарного колониестимулирующего фактора используют для профилактики и лечения различных видов анемий и нейтро-пений, восстановления гемопоэза у онкологических больных, подвергающихся цитостатической химиотерапии [Asano S., 1991; Abels R.I., 1992; Schmitz N. et al., 1995; Bennet C.L. et al., 1996; Волкова M.A., 1998; Гершано-вич МЛ. и др., 1999; Воробьев П.А., 2001; Птушкин В.В., 2002; Переводчи-кова Н.И., 2005; Littlewood T.J., Collins G.P., 2007]. Между тем, применение ЭП и Г-КСФ во многом ограничено вследствие наличия у них достаточно большого спектра побочных эффектов [Jain К.К., 1994; Vial Т., Descotes J., 1995; de Wit R. et al., 1996; Alvarado Ibarra M.L. et al., 1999; Машковский

М.Д., 2006; Beutel G., Ganser A., 2007; Tiggue C.C. et al., 2007; Бигильдеев A.E. и др., 2008]. Обнаруженное нами увеличение темпов восстановления структурно-функциональной организации эритроидного компартмента при введении антисеротонинового препарата и формирование de novo содержащих гранулоциты ГО при назначении симпатолитика дает основание полагать, что восстановление нейрофармакологическими средствами функций ад-гезирующих клеточных элементов ГИМ будет существенно усиливать гемо-поэзстимулирующий эффект Г-КСФ и эритропоэтина.

В связи с вышеизложенным, в следующем разделе представлены результаты изучения возможности стимулирующего действия Г-КСФ на подавленный цитостатиками гранулоцитарный росток кроветворения в условиях истощения депо катехоламинов и эффективность стимуляции эритрона эритро-поэтином при снижении активности серотонинергической системы.

Прежде всего, была проведена оценка влияния курсового введения Г-КСФ на гранулоцитопоэз при цитостатических воздействиях. Цитокин ускорял процессы регенерации ростка при назначении циклофосфана, о чем свидетельствовало накопление незрелых (на 2, 3-й сутки) и зрелых (5-е сутки) форм нейтрофильных гранулоцитов в костном мозге. Существенный прирост сегментоядерных нейтрофилов наблюдался и в периферической крови на 2, 4, 5-е сутки эксперимента (вплоть до развития умеренного нейтрофильного лейкоцитоза на 4, 5-е сутки). Одновременно Г-КСФ увеличивал количество ГО, содержащих стромальную клетку, и гранулоцитарных клеточных комплексов (2, 3, 5-е сутки) (причем число последних уже на 3, 5-е сутки исследования восстанавливалось до уровня интактного контроля). В противоположность этому, содержание клеточных комплексов смешанного типа снижалось (4-7-е сутки).

В условиях введения 5-фторурацила Г-КСФ существенно усугублял депрессию гранулоцитопоэза (1-3, 6-е сутки), но начиная с 8-х суток наблюдалось резкое увеличение числа незрелых (10, 12-е сутки) и зрелых (8-12-е сутки) нейтрофилов в костном мозге. При этом снижалась активность восстановления числа макрофагнегативных (7, 9-е сутки), гранулоцитарных (7-е сутки) и эритро-гранулоцитарных (6, 7, 9-е сутки) ГО. В периферической крови цитокин не только отменял нейтрофильную лейкопению (1,8, 10-е сутки), но и задерживал выход зрелых гранулоцитов из кроветворной ткани (3, 4-е сутки).

Представленные выше данные свидетельствуют о том, что при цитостатических воздействиях гранулоцитопоэзсгимулирующее действие Г-КСФ обусловлено преимущественно непосредственной активацией пролиферации и созревания предшественников гранулоцитопоэза. Между тем, при назначении циклофосфана цитокин способствует увеличения скорости восстановления гранулоцитарных клеточных ассоциаций.

В условиях назначения алкилирующего агента интенсивность восстановления клеточности гранулоцитарного ростка кроветворения при последовательном истощении депо катехоламинов и введении Г-КСФ значительно превосходила выявленную в группах с Г-КСФ и симпатолитиком. Так, уже

на 3-й и 4-е сутки наблюдения содержание соответственно незрелых и зрелых нейтрофилов в костном мозге практически не отличалось от исходных величин, а на 6, 7-е сутки регистрировалась гиперплазия гранулоцитопоэза. Более активный выход сегментоядерных нейтрофилов в периферическую кровь при этом вызывал развитие выраженного лейкоцитоза на 4, 5, 7-е сутки. Последовательное введение симпатолитика и цитокина ускоряло восстановление структурно-функциональной организации гемопоэтической ткани, о чем свидетельствовало значительное увеличение числа макрофагнегатив-ных (1-3, 7-е сутки) и гранулоцитарных (1-3, 5-7-е сутки) клеточных комплексов. При этом клетки гранулоцитарных гемопоэтических островков были представлены преимущественно морфологически распознаваемыми гра-нулоцитами (сегментоядерными нейтрофилами). В контрольных группах (резерпин, Г-КСФ) количество нуклеаров в клеточных ассоциациях существенно уступало таковому в опыте. Следует отметить, что при последовательном введении резерпина и цитокина формирование дополнительных очагов гра-нулоцитарного кроветворения предшествовало развитию костномозговой гиперплазии и нейтрофильного лейкоцитоза в периферической крови.

В свою очередь, при назначении антиметаболита последовательное истощение депо катехоламинов и введение Г-КСФ увеличивало содержание нейтрофилов в костном мозге только к 7-м суткам эксперимента, чему предшествовало усугубление миелосупрессии на 1-3-и сутки. Сдвиги в содержании ГО были выявлены на 8, 9-е сутки опыта: в указанные сроки имело место усиление образования клеточных комплексов. В этих условиях характер изменения содержания нейтрофилов в периферической крови полностью совпадал с таковым в группе с цитокином.

Таким образом, резерпин значительно снижает токсическое действие катехоламинов на структурно-функциональную организацию костного мозга (гемопоэтические островки) в условиях введения циклофосфана, что усиливает стимулирующее влияние Г-КСФ на процессы регенерации гранулоци-тарного ростка кроветворения. Вместе с тем, при назначении 5-фторурацила элемент синхронизации формирования ГО и стимуляции кроветворных клеток-предшественников (и как следствие - увеличение скорости репарации костного мозга) под влиянием симпатолитика и цитокина отсутствует, напротив, просматривается усугубление ситуации в период ингибиции ростка, гиперплазия гранулоцитопоэза, наблюдаемая в группе с цитокином в сроки регенерации, отменяется.

Полученные результаты свидетельствуют о целесообразности избирательного использования для терапии цитостатических лейкопений наряду с препаратами Г-КСФ фармакологических агентов, снижающих ингибирующее действие катехоламинов.

Прежде чем изучить возможность потенцировать ципрогептадином стимулирующее влияние эритропоэтина был проведен сравнительный анализ эффектов гормона на эритрон в условиях введения цитостатиков с различным механизмом действия.

При назначении фторпиримидинового антиметаболита курсовое введение ЭП вызывало статистически достоверное увеличение числа эритроидных клеток в костном мозге (4, б, 7, 12-е сутки). В периферической крови существенный прирост ретикулоцитов обнаруживался уже на 2-е сутки и продолжался на протяжении всего периода наблюдений. Примечательно, что на 6, 7, 12-е сутки опыта клеточность эритроидного ростка кроветворения нормализовалась.

Стимулирующий эффект гормона в условиях введения алкилирующего агента регистрировался только в период регенерации эритрона. Безусловно, возрастание числа эритроидных элементов в системе крови связано с активацией функциональной активности предшественников эритропоэза. Тем более, что in vitro высокая реактивность прекурсоров к действию эритропоэти-на при цитостатических воздействиях сохраняется (смотри данные культу-ральных исследований). Веским подтверждением такого заключения служит тот факт, что при курсовом введении препарата эритропоэтина нарушения структурно-функциональной организации гемопоэтической ткани сохранялись на протяжении всего периода наблюдения.

При последовательной блокаде постсинаптических серогониновых С2 рецепторов и введении эритропоэтина в условиях применения 5-ФУ интенсивность восстановления клеточности эритроидного ростка значительно превосходила таковую в группах с эритропоэтином и ципрогептадином (3-12-е сутки). Так, уже на 4-е сутки наблюдения содержание эритроидных клеток в костном мозге практически не отличалось от исходных величин, а на 5-е сутки регистрировалась гиперплазия эритропоэза. При этом увеличение выхода ретикулоцитов в периферическую кровь приводило к развитию выраженного ретикулоцитоза на 6, 7-е сутки исследования.

При изучении локальных механизмов совместного применения ципро-гептадина и эритропоэтина было обнаружено активное восстановление структурно-функциональной целостности костного мозга у мышей, получавших антиметаболит. Препараты способствовали накоплению числа мак-рофагпозитивных (2, 4-7-е сутки), эритроидных (2-7-е сутки) и, в меньшей степени, эритро-гранулоцитарпых (2, 4, 6, 7, 12-е сутки) клеточных комплексов. Формирование дополнительных очагов эритроидного кроветворения предшествовало развитию гиперплазии костномозгового эритропоэза и ретикулоцитоза в крови. В дополнение следует отметить, что в опытной группе клетки эритроидных ГО были представлены средними и поздними полихро-матофильными нормобластами, оксифильными нормобластами, а также ре-тикулоцитами. Интересно, что в контрольных группах количество нуклеаров в клеточных комплексах значительно уступало таковому в опыте, причем в группе с ципрогептадином отсутствовали ретикулоциты.

В условиях введения алкилирующего агента применение ципрогептади-на и гормона не вызывало столь выраженного увеличения значений показателей, характеризующих костномозговой эритропоэз, как в случае антиметаболита. Исключение составили ретикулоциты периферической крови, восстановление содержания которых в опыте отмечалось гораздо раньше (4—6

сутки), чем в контрольных группах с ЭП (6-е сутки) и антисеротониновым препаратом (7-е сутки).

Таким образом, нарушение серотониновой медиации в ЦНС до моделирования цитостатической миелосупрессии 5-фторурацилом и последующее введение эритропоэтина отменяют депрессию костномозгового эритропоэза и способствуют интенсивному восстановлению содержания ретикулоцитов в периферической крови, вплоть до развития ретикулоцитоза. При этом скорость регенерации подавленного антиметаболитом эритропоэза в опыте (комбинация ципрогептадина с эритропоэтином) превосходит темпы его восстановления в контрольных группах с гормоном и ципрогептадином. При назначении циклофосфана препараты стимулируют только дифференцировку и выход зрелых эритроидных клеток в периферическую кровь.

Судя по полученным данным, в условиях введения фторпиримидинового антиметаболита серотонин ЦНС оказывает "деструктивное" действие на ге-мопоэтические островки. В предыдущих исследованиях нами было продемонстрировано супрессирующее влияние серотонина in vitro на митотиче-скую активность эритроидных предшественников животных при назначении 5-ФУ. С этих позиций мы пришли к заключению, что, вероятно, существует «серотониновый» механизм развития анемии при некоторых цитостатиче-ских воздействиях (в частности, при использовании антиметаболитов). Его реализация осуществляется на уровне коммитированных кроветворных предшественников и клеток ГИМ (формирование ГО). В этой связи представляется целесообразным использование в терапии цитостатических анемий препаратов, снижающих активность серотонинергической системы.

Результаты последней серии экспериментов дают основание считать, что в реализации эффектов ЭП и Г-КСФ при гипоплазии, вызванной введением цитостатиков, во многом задействованы центральные моноаминергические структуры. Между тем, не исключается возможность модуляции эффектов ростовых факторов на уровне локальной моноаминергической системы. Так, проведенные культуральные исследования позволили выявить, что ряд ли-гандов моноаминергической природы (мезатон, изадрин, дофамин, серотонин) сдерживали опосредованную эритропоэтином пролиферативную активность КОЕ-Э в культуре неадгезирующих клеток костного мозга мышей при назначении циклофосфана. Внесение моноаминов в 7-суточную культуру вызывало несколько иные сдвиги в активности Г-КСФ: серотонин и дофамин отменяли высокие темпы деления и скорость дифференцировки КОЕ-ГМ, под влиянием адреномиметиков (более изадрина) активность указанных процессов, напротив, возрастала.

При моделировании миелосупрессии введением 5-фторурацила моноаминергические лиганды in vitro отменяли ассоциированное с ростовыми факторами расширение пула митотически активных кроветворных прекурсоров. Исключение составил изадрин, который потенцировал стимулирующий эффект Г-КСФ. Адреномиметики и серотонин препятствовали увеличению величины соотношения КлОЕ/КОЕ, наблюдаемому в контроле с гормоном и цитокином. Аналогичное действие оказывал и дофамин в отношении диффе-

ренцировки клеток гранулоцитарного ряда, при этом индекс созревания прекурсоров эритропоэза, напротив, возрастал.

Таким образом, эффекторные аминергическис молекулы выступают в качестве модуляторов активности эритропоэтина и Г-КСФ. При этом характер действия моноаминов зависит от типа кроветворных прогениторных клеток и механизма токсического действия цитостатика. Вполне вероятно, что реализация программы линейного коммитирования кроветворных предшественников при цитостатических воздействиях невозможна без взаимодействия системы локальной аминергической регуляции гемопоэтических клеток и ростовых факторов.

Потенцирующее действие адреномиметиков в отношении Г-КСФ, а се-ротонина - в отношении ЭП продемонстрировано и в культуре неадгези-рующих миелокариоцитов интактных животных. По-видимому, в случае ал-килирующего агента модулирующая активность моноаминов менее подвержена токсическому действию цитостатика. Усугубление ситуации при назначении антиметаболита (наряду с развитием дефицита активных в отношении гемопоэтических клеток молекул), очевидно, связано с нарушением взаимодействия эритропоэтина и системы КСФ с периферическими моноаминерги-ческими механизмами.

В совокупности собственные результаты экспериментов и данные литературы легли в основу предложенных нами схем регуляторного влияния моноаминов на систему крови при гипопластических состояниях, вызванных введением циклофосфана либо 5-фторурацила (рис. 2).

Развитие миелосупрессии и последующее восстановление кроветворной ткани при цитостатических воздействиях находятся под контролем адренер-гической, серотонинергической и дофаминергической систем. Регуляторное влияние центральных моноаминергических структур на гемопоэз реализуется прямо через соответствующие рецепторы на коммитированных кроветворных клетках-предшественниках и опосредованно - через изменение функциональной активности клеточных элементов ГИМ (формирование ГО, продукция цитокинов). При цитостатических воздействиях велико значение центральных серотонинергических структур и катехоламинов в реализации ге-мостимулируюших эффектов ряда гемопоэтических факторов роста: эритропоэтина и гранулоцитарного колониестимулирующего фактора соответственно. Причем нами не исключается участие системы локальной моноами-нергической регуляции в восстановлении нарушенного антинеобластомными средствами оптимального соотношения физиологически активных веществ в межклеточном пространстве кроветворной ткани.

В условиях моделирования гипопластического состояния цитостатиками моноаминергические механизмы регенерации эритрона и белой крови существенно различаются. Так, если активность эритропоэза во многом связана с серотонином (формирование клеточных комплексов эритроидного типа и продукция ЭПА адгезирующими клетками ГИМ, увеличение активности дифференцировки эритроидных предшественников), то с катехоламинами сопряжено восстановление клеточности гранулоцитарного ростка (образова-

Система ЭП

Система КСФ

Т-клетки

Макрофаги

Фибробласты

,Е5рация

костный мозг

Адренергическая. дсфаминергическая, серотонинергическая системы

ПЕРИФЕРИЧЕСКАЯ V

КРОВЬ Щ %

Рис, 2. Схема регуляции моноаминами ЦНС коммитированных кроветворных клеток-предшественников при цитостатических воздействиях. Альфа (а)- и бета (р)-адренергические, дофаминергические (Д), серотонинергические (С) рецепторы.

ние гранулоцитарных ГО и продукция КСА клетками ГИМ, пролиферация и созревание грануломоноцитарных прекурсоров).

Наряду с общими принципами был обнаружен ряд существенных межмодельных различий в моноаминергической регуляции костномозгового ге-мопоэза. Так, центральные адренергические структуры усиливают токсическое действие алкилирующего агента как на гранулоцитарный (1-7-е сутки), так и на эритроидный ростки кроветворения (ангибиция) (рис. 3). Это связано с сокращением пула митотически активных КОЕ-ГМ (в период ингибиции опосредованное Г-КСФ и а-адренергическими структурами, в сроки регенерации - Р-адренергическими механизмами), нарушением структурно-функциональной организации кроветворной ткани (7-7-е сутки) и продукции ЭПА адгезирующими клетками ГИМ (регенерация). Между тем, в длительном ингибирующем действии дофаминергической системы на эритрон задействованы исключительно клеточные элементы ГИМ (угнетается образование ГО на 1-6-е сутки и секреция ЭПА на 7-е сутки). При этом дофамин тканей мозга снижает и высокий уровень сывороточной ЭПА (1-е сутки) В противоположность этому, в период миелосупрессии амин оказывает стимулирующее влияние на периферические Г-КСФ- и дофамин-зависимые механизмы контроля пролиферации грануломоноцитарных предшественников, что во многом препятствует развитию нейтрофильной лейкопении при назначении циклофосфана. В рассматриваемой моделе гемодепрессии регуляторное влияние серотонина ЦНС проявляется только в задержке репарации эритро-идного компартмента кроветворения, что, в первую очередь, связано с подавлением восстановления эритроидных клеточных комплексов, во вторую -со снижением функциональной активности эритроидных прекурсоров (механизмы сопряженные с эритропоэтином) и уровня ЭПА в сыворотке крови.

В условиях введения фторпиримидинового антиметаболита адренерги-ческая система препятствует развитию миелосупрессии и увеличивает скорость восстановления гемопоэза (рис. 4). В основе накопления нуклеаров в костном мозге и периферической крови лежат активация формирования ГО (регенерация), продукция ЭПА неадгезирующими клетками ГИМ и рост уровня сывороточного КСА (ингибиция). Центральные адренергические структуры стимулируют систему КСФ и ЭП (на протяжении всех сроков исследования). Значительный вклад в активацию гемопоэза вносят и периферические адренергические механизмы. Причем в период ингибиции высокие темпы деления и созревания в отделе эритроидных прекурсоров поддерживают исключительно а-адренергические структуры, в сроки регенерации рост функциональной активности в отделе грануломоноцитарных предшественников сопряжен с а- и Р-рецепторами.

Дофаминергическая система неоднозначно влияет на регенерацию отдельных ростков кроветворения при назначении 5-фторурацила. Так, в силу роста концентрации сывороточной ЭПА и эритропоэтин зависимой активации пролиферации КОЕ-Э скорость восстановления эритрона увеличивается. С нарушением продукции КСА адгезирующими клетками связано замедле-

цнс

|Серотонинергическая система

.................................................. ! Дофаминергическая

Адревергическая ; система

„ ,-Фибробласты КОЕ-ГМ_ V'

■о

'ация

КОСТНЫЙ МОЗГ

периферическая

•г* V*

кровь &

Рис. 3. Схема регуляции моноаминами ЦНС коммутированных кроветворных клеток-предшественников при введении циклофосфана. Альфа (а)- и бета (¡5)-адренергические, дофаминергические (Д), серотонинергические (С) рецепторы. Сплошной линией обозначена стимуляция, пунктирной - ингибиция.

цнс

Серотонинергическая система

I Адренергическая |

Дофаминергическая система

Макрофаги

,-Фибробласты КОЕ-ГМ V

.ь

1ерация

КОСТНЫЙ МОЗГ Продав

ЦЦ

ПЕРИФЕРИЧЕСКАЯ Г. , КРОВЬ Щ О

Рис. 4. Схема регуляции моноаминами ЦНС коммитированных кроветворных клеток-предшественников при введении 5-фторурацила. Альфа (а)- и бета (¡3)-адренергические, дофаминергические (Д), серотонинергические (С) рецепторы. Сплошной линией обозначена стимуляция, пунктирной - ингибиция.

ние восстановления содержания нейтрофильных гранулоцитов в системе крови.

Регуляторное влияние серотонинергической системы на гемопоэз было отличным от такового со стороны дофаминергических структур ЦНС. Так, снижая продукцию ЭПА клетками кроветворного микроокружения и уровень эритропоэтина в сыворотке крови, серотонин тканей мозга усугубляет депрессию эритропоэза, вызванную введением антиметаболита. При этом амин препятствует разрушению гранулоцитарных и смешанных ГО (ингабиция) и увеличивает опосредованную системой КСФ пролиферативную активность и интенсивность дифференцировки гранулоцитарно-макрофагальных предшественников (весь период исследования), что, в конечном итоге, приводит к увеличению скорости регенерации гранулоцитарного ростка кроветворения.

Как было показано выше, под влиянием резерпина, галоперидола и ци-прогептадина изменения величин переменных, характеризующих ГИМ и коммитированные кроветворные предшественники, в ряде случаев были противоположны реакциям костного мозга и периферической крови (содержание морфологически распознаваемых нуклеаров). Безусловно, этот факт вносит определенные сложности в объяснение механизмов регуляторного действия моноаминов на систему крови при цитостатических воздействиях. Однако выявленный феномен является весомым аргументом в пользу того, что токсическое действие алкилирующего и фторпиримидинового агентов проявляется не только в нарушении структурно-функциональной организации кроветворной ткани и функциональной активности гемопоэтических прекурсоров, но и в дисфункции моноаминергических систем, контролирующих кровообразование.

ВЫВОДЫ

1. Адренергическая, дофаминергическая и серотонинергическая системы участвуют в регуляции гемопоэза в условиях цитостатических миелосупрес-сий, вызванных алкилирующим агентом (циклофосфан) и антиметаболитом (5-фторурацил). Регуляторное влияние моноаминов ЦНС осуществляется через адренергические, дофаминергические и серотонинергические структуры на гемопоэтических прекурсорах и клетках гемопоэзиндуцирующего микроокружения (ГИМ), а также системы колониестимулирующих факторов и эритропоэтина.

2. В условиях введения алкилирующего агента регуляция гранулоцитарного ростка кроветворения сопряжена преимущественно с адренергической и дофаминергической системами, тогда как развитие изменений в эритроне при назначении антиметаболита в большей степени связано с серотонинергической системой.

3. Мезатон, изадрин, дофамин и серотонин оказывают стимулирующее действие на формирование колоний эритроидного и грануломоноцитарного типов в тест-системе неадгезирующих миелокариоцитов интактных животных. Степень индукции роста КОЕ лигандами моноаминергической природы существенно уступает таковой под влиянием эритропоэтина и Г-КСФ.

4. В условиях введения цитостатиков лиганды моноаминергичсской природы in vitro увеличивают темпы деления эритроидных (изадрин) и грануло-цитарно-макрофагальных (дофамин, изадрин, серотонин) предшественников, при этом гемостимулирующая активность (3-адреномиметика и дофамина превосходит выявленную в контроле с рекомбинантными гемопоэтическими ростовыми факторами. Вместе с тем, мезатон снижает пролиферативную активность и интенсивность дифференцировки КОЕ-Э и КОЕ-ГМ, а серотонин и дофамин избирательно угнетают процессы в отделе предшественников эритролоэза (более выражено при введении фторпиримидинового антимега-болита).

5. В культуре неадгезирующих миелокариоцитов интактных животных адреномиметики усиливают Г-КСФ-зависимую стимуляцию роста КОЕ-ГМ, а серотонин ускоряет сопряженное с эритропоэтином формирование КОЕ-Э. Если при моделировании миелосупрессии введением циклофосфана потенцирующее действие адреномиметиков и серотонина сохраняется, то при назначении 5-фторурацила моноаминергаческие лиганды, напротив, отменяют ассоциированные с гемопоэтическими факторами роста высокие темпы деления и созревания гемопоэтических прекурсоров.

6. N-ацетилнейраминовая кислота in vitro препятствует угнетению фидерной активности стромальных клеток костного мозга, подвергнутых воздействию циклофосфана, в отношении предварительно обработанных серо-тонином или изадрином предшественников эритролоэза.

7. Истощение депо катехоламинов (резерпин), блокада постсинаптнче-ских дофаминовых Д2 (галоперидол) и серотонииовых С2 (ципрогептадин) рецепторов не влияют на содержание морфологически распознаваемых нук-леаров в костном мозге и периферической крови интактных мышей. В то же время симпатолитик уменьшает содержание КОЕ-ГМ в культуре неадгезирующих миелокариоцитов с Г-КСФ, мезатоном и изадрином, но увеличивает число КОЕ-Э в тест-системе с эритропоэтином и адреномиметиками. Анти-серотониновый препарат избирательно снижает активность выхода КОЕ-Э {in vitro серотонин), а нейролептик - образование гранулоцитарно-макрофагальных колоний (ш vitro дофамин).

8. При назначении циклофосфана стимуляция восстановления гемопоэза резерпином (преимущественно гранулоцитарного ростка кроветворения) связана с формированием de novo гемопоэтических островков в костном мозге, продукцией ЭПА адгезирующими миелокариоцитами. При этом сопряженное с Г-КСФ {период ингибиции) и адреномиметиками {период регенерации) увеличение функциональной активности гранулоцитарно-макрофагальных предшественников, а также рост скорости созревания эритроидных прекурсоров, связанный с эритропоэтином {период ингибиции) и а-адренергическими структурами {1-7-е сутки), играют меньшую роль в развитии регенераторных процессов.

но-функциональной организации костного мозга (угнетение формирования ГО и секреции ЭПА неадгезирующими миелокариоцитами) и снижение уровня сывороточного КСА. В реализации ингибирующего влияния симпа-толитика на функциональную активность эритроидных прекурсоров участвуют эритропоэтин (весь период исследования) и адренергические структуры Опериод ингибиции), падение темпов деления КОЕ-ГМ и скорости их созревания происходит при участии Г-КСФ (период ингибиции) и преимущественно периферических р-адренергических механизмов (период регенерации).

10. Фармакологическая блокада постсинаптических дофаминовых рецепторов (галоперидол) при назначении циклофосфана увеличивает скорость регенерации эрйтропоэза за счет возрастания функциональной активности адгезирующих клеток ГИМ (образование макрофагпозитивных и эритроидных ГО, продукция ЭПА), повышения уровня сывороточной ЭПА и интенсивности дифференцировки эритроидных предшественников. В этих условиях нейролептик усугубляет ингибицию гранулоцитопоэза, что во многом обусловлено разрушением гранулоцитарных и смешанных клеточных комплексов и падением пролиферативной активности грануломоноцитарных прекурсоров.

11. При фармакологической блокаде постсинаптических Д2 рецепторов продукция КСА адгезирующими миелокариоцитами и высокие темпы деления грануломоноцитарных предшественников, ассоциированные с дофами-нергическими структурами и Г-КСФ, выступают основными механизмами, определяющими ускоренное восстановление гранулоцитопоэза в условиях введения 5-фторурацила. Ингибирующий эффект нейролептика на процессы регенерации эритроидного ростка кроветворения связан с угнетением пролиферативной активности и интенсивности дифференцировки прекурсоров эрйтропоэза, сопряженных с эритропоэтином и дофаминергическими структурами.

12. При моделировании миелосупрессии введением алкилирующего агента фармакологическая блокада серотониновых постсинаптических С2 рецепторов (ципрогептадин) препятствует развитию депрессии эритроидного ростка кроветворения, что связано с увеличением концентрации эритропоэз-стимулирующих факторов в сыворотке крови и кондиционных средах адгезирующих клеток ГИМ. Последующее снижение скорости регенерации эри-трона обусловлено супрессирующим действием антисеротонинового препарата на периферические серотониновые механизмы контроля эритроидных предшественников.

13. В условиях введения антиметаболита блокада серотониновых постсинаптических С2 рецепторов стимулирует формирование макрофагпозитивных, эритроидных и гранулоцитарных гемопоэтических островков, что приводит к ускорению восстановления гемопоэза (более - эритроидного ростка кроветворения). При этом расширяется пул грануломоноцитарных предшественников, находящихся в Б-фазе митотического цикла.

14. Истощение депо катехоламинов резерпином усиливает гранулоцито-поэзстимулирующее действие Г-КСФ при моделировании миелосупрессии

циклофосфаном за счет образования дополнительных очагов гранулоцитар-ного кроветворения в кроветворной ткани. В условиях назначения фторпи-римидинового антиметаболига последовательное введение симпатолитика и цитокина препятствует восстановлению структурно-функциональной организации костного мозга, следствием чего является снижение активности грану-лоцитопоэза.

15. При введении 5-фторурацила нарушение серотониновой медиации в ЦНС ципрогептадином потенцирует эритролоэзстимулирующее действие эритропоэтина во многом благодаря активному формированию de novo мак-рофагпозитивных и эритроидных ГО в костномозговой ткани. В свою очередь, последовательное назначение антисеротонинового препарата и эритропоэтина не влияет на эритроидный росток кроветворения в случае моделирования депрессии эритрона ачкилирующим агентом.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Характеристика состояния костномозгового пула Т-лимфоцитов мышей после введения 5-фторурацила // Труды молодых ученых института фармакологии ТНЦ РАМН. - Томск, 1995. - С. 16-18.

2. Итоги работ по созданию гемостимуляторов природного происхождения // Актуальные проблемы фармакологии и поиска новых лекарственных препаратов. - Томск, 1995. - Т.8. - С. 3-11 (соавт. Гольдберг Е.Д., Дыгай A.M., Агафонов В.И. и др.).

3. Содержание кроветворных предшественников в прилипающем слое костного мозга мышей после введения цитостатиков // Клинические и экспериментальные исследования молодых ученых Сибирского отделения РАМН. - Новосибирск, 1996. - С.81.

4. Механизмы изменений структурно-функциональной организации костного мозга при цитостатических миелосупрессиях // Проблемы экспериментальной и клинической медицины. - Томск, 1996.-Вып. 1.-С.З-5.

5. Значение связывающей способности клеток кроветворного микроокружения для восстановления отдельных ростков гемопоэза, подавленного ци-тостатиками // Бюл. эксперим. биол. и мед. - 1996. - Т. 122. - № 11. - С. 490-494 (соавт. Жданов В.В., Дыгай A.M., Кириенкова Е.В., Гольдберг Е.Д.).

6. Влияние цитостатиков на состояние стромальных элементов кроветворного микроокружения // Актуальные проблемы фармакологии и поиска новых лекарственных препаратов. - Томск, 1997. - Т.9. - С. 81-82.

7. Участие процессов связывания кроветворных клеток со стромальными элементами костного мозга в восстановлении гемопоэза при цитостатических миелосупрессиях // Гематол. и трансфузиол. - 1998. - Т. 43. - № 4. -С. 14-16 (соавт. Жданов В.В., Дыгай A.M., Гольдберг Е.Д.).

8. Создание лекарственных препаратов для терапии лучевых миелодепрес-сий // Вестник научной программы «Семипалатинский полигон - Алтай».

- 1997. - T.l. - № 13. - С. 96-100 (соавт. Гольдберг Е.Д., Дыгай A.M., Агафонов В.И. и др.).

9. Использование препаратов из лекарственных растений в терапии анемий и лейкопений различного генеза // Тезисы докладов V Российского национального конгресса «Человек и лекарство». - Москва, 1998. - С. 359 (соавт. Гольдберг Е.Д., Дыгай A.M., Жданов В.В. и др.).

Ю.Роль процессов пролиферации и дифференцировки кроветворных клеток-предшественников в восстановлении гемопоэза при цитостатических мие-лосупрессиях // Бюл. эксперим. биол. и мед. - 1997. - № 12. - С. 616-619 (соавт. Дыгай A.M., Жданов В.В., Рыжаков В.М., Гольдберг Е.Д.).

11.Участие процессов связывания кроветворных клеток со стромальными элементами костного мозга в восстановлении гемопоэза при цитостатических миелосупрессиях // Гематол. и трансфузиол. - 1998. - Т. 43. - № 4. -С. 14-16 (соавт. Жданов В.В., Дыгай A.M., Гольдберг Е.Д.).

12.Гемостимулирующие свойства рекомбинантного колониестимулирующе-го фактора и глицирама в условиях цитостатической миелосупрессии // Эксперим. и клинич. фармакология. - 1999. -№ 1. - С. 34-37 (соавт. Дыгай A.M., Жданов В.В., Масычева В.И. и др.).

13.0 роли центральных адренергических структур в регуляции кроветворения в условиях экспериментальных невротических воздействий // Бюл. эксперим. биол. и мед. - 1999. - Приложение 1. - С. 7-11 (соавт. Скури-хин Е.Г., Суслов Н.И., Провалова Н.В.).

14.Новые данные о механизмах развития цитостатической болезни // Актуальные проблемы фармакологии и поиска новых лекарственных препаратов. - Томск, 1999. - Том 10. - С. 35^12 (соавт. Жданов В.В., Симанина Е.В., Пушкарева Н.С. и др.).

15.Роль мононуклеарных фагоцитов костного мозга в регуляции кроветворения при цитостатических миелосупрессиях // Актуальные проблемы фармакологии и поиска новых лекарственных препаратов. - Томск, 1999. - С. 159-160.

16.Новые стимуляторы гранулоцитопоэза // Тезисы докладов VI Российского национального конгресса «Человек и лекарство». - Москва, 1999. - С. 399 (соавт. Гольдберг Е.Д., Дыгай A.M., Жданов В.В., Гольдберг В.Е.).

17.Новые подходы в создании гемостимуляторов для клинической практики // Тезисы докладов VII Российского национального конгресса «Человек и лекарство». - Москва, 2000. - С. 494 (соавт. Дыгай A.M., Гольдберг Е.Д., Жданов В.В. и др.).

18.Адренергические механизмы влияния адаптогенов на периферическую кровь в условиях иммобилизационного стресса // Фундаментальные и прикладные проблемы современной медицины (материалы молодежной научной конференции СО РАМН). - Новосибирск, 2000. - С. 110-112 (соавт. Скурихин Е.Г., Провалова Н.В.).

19.Гемостимулирующие свойства таблетированной формы рекомбинантного эритропоэтина человека в эксперименте // Фармакология системы крови.

- 2000. - Том 63. - № 5 - С. 37-40 (соавт. Дыгай A.M., Колокольцова Т.Д., Костина Н.Е. и др.).

20.Роль адгезирующих элементов кроветворного микроокружения в регенерации эритропоэза при цитостатических гемодепрессиях // Проблемы экспериментальной и клинической фармакологии. - Томск, 2ООО. - С. 25-26.

21.Коррекция адаптогенами изменений в системе крови при экспериментальных невротических воздействиях // Проблемы экспериментальной и клинической фармакологии. - Томск, 2000. - С. 34-36 (соавт. Провалова Н.В., Скурихин Е.Г., Зюзьков Г.Н., Пахомова A.B.).

22.Роль дофамин- и серотонинергических систем в регуляции кроветворения в условиях экспериментальных невротических воздействий // Проблемы экспериментальной и клинической фармакологии. - Томск, 2000. - С. 3941 (соавт, Скурихин Е.Г., Провалова Н.В., Зюзьков Г.Н., Пахомова A.B.).

23.Адренергические механизмы влияния препаратов природного происхождения на систему крови в условиях иммобилизационного стресса // Поиск, разработка и внедрение новых лекарственных средств и организационных форм фармацевтической деятельности (материалы международной научной конференции). - Томск, 2000. - С. 186-187 (соавт. Скурихин Е.Г., Суслов Н.И., Провалова Н.В. и др.).

24.Адренергические механизмы влияния адаптогенов на периферическую кровь в условиях иммобилизационного стресса // Бюд. СО РАМН. - № 2. -2000. - С. 86-92 (соавт. Скурихин Е.Г., Провалова Н.В.).

25.Новые лекарственные формы рекомбинантных цитокинов для лечения анемий и лейкопений различного генеза // Тезисы докладов VIII Российского национального конгресса «Человек и лекарство». - Москва, 2001. -С. 295 (соавт. Гольдберг Е.Д., Дыгай A.M., Жданов В.В. и др.).

26.Механизмы регуляции кроветворения в условиях экспериментальных невротических воздействий // Актуальные проблемы экспериментальной и клинической фармакологии. - Томск, 2001. - С. 138-141 (соавт. Скурихин Е.Г., Провалова Н.В., Першина О.В.).

27.Гемостимулирующие свойства нового препарата на основе Д-глюкуроновой кислоты // Тезисы докладов IX Российского национального конгресса «Человек и лекарство». - Москва, 2002. - С. 612 (соавт. Дыгай A.M., Симанина Е.В., Гольдберг В.Е.).

28.Механизмы действия адаптогенов на гранулоцитопоэз в условиях экспериментальных невротических воздействий // 4 съезд физиологов Сибири (тезисы). - Новосибирск, 2002. - С.58-59 (соавт. Гольдберг Е.Д., Дыгай A.M., Суслов Н.И. и др.).

29.Реакции системы крови в ответ на депривацию парадоксальной фазы сна при введении адаптогенов // Актуальные вопросы экспериментальной и клинической морфологии. - Томск, 2002. - С. 112-114 (соавт. Гольдберг Е.Д., Дыгай A.M., Суслов Н.И. и др.).

30.Влияние препаратов природного происхождения на развитие постгипок-сической энцефалопатии // Актуальные проблемы экспериментальной и

клинической фармакологии. - Томск, 2002. - С. 131-135 (соавт. Першина О.В., Провалова Н.В., Скурихин Е.Г.).

31 .Механизмы действия адаптогенов на эритропоэз в условиях депривации парадоксальной фазы сна // Актуальные проблемы экспериментальной и клинической фармакологии. - Томск, 2002. - С. 146-151 (соавт. Провалова Н.В., Скурихин Е.Г., Першина О.В.).

32.Механизмы локальной регуляции кроветворения в условиях гиподинамии // Материалы XII конференции по космической биологии и авиакосмической медицине. - Москва, 2002. - С. 113-114 (соавт. Гольдберг Е.Д., Ды-гай A.M., Жданов В.В., Шерстобоев Е.Ю.).

33.Механизмы действия адаптогенов на эритропоэз в условиях депривации парадоксальной фазы сна // Бюл. эксперим. биол. и мед. - 2002. - № 5. - С. 496-500 (соавт. Провалова Н.В., Скурихин Е.Г., Першина О.В. и др.).

34.Влияние препаратов природного происхождения на систему крови и когнитивные функции при гипоксическом воздействии // Бюл. эксперим. биол. и мед. - 2002. - Приложение 1. - С. 27-30 (соавт. Першина О.В., Суслов Н.И., Провалова Н.В. и др.).

35.Влияние препаратов природного происхождения на эритропоэз в условиях конфликтной ситуации и возможные механизмы их действия // Бюл. эксперим. биол. и мед. - 2003. - № 8. - С. 190-194 (соавт. Провалова Н.В., Скурихин Е.Г., Першина О.В.).

36.Механизмы регуляции кроветворения при невротических воздействиях // Бюл. эксперим. биол. и мед. - 2003. - Приложение № 2. - С. 76-84 (соавт. Гольдберг Е.Д., Дыгай A.M., Суслов Н.И.).

37.Локальные механизмы регуляторного действия кропанола на гемопоэз при депривации парадоксального сна // Бюл. эксперим. биол. и мед. - 2004. -Т. 137. - № 2. - С. 182-186 (соавт. Провалова Н.В., Скурихин Е.Г., Першина О.В. и др.).

38.Deer velvet products as new sources of nutrigenomic adaptogens: The Russian perspective - 1 //Advance in Antler Science and Product Technology. - 2004. - P. 189-192 (Letchamo W„ Shebalin A.S., Dygai A.M. et al.).

39.Механизмы регуляции кроветворения при экспериментальных неврозах // Актуальные проблемы фармакологии (материалы международной конференции). - Томск, 2004. - С. 77-78 (соавт. Скурихин Е.Г.).

40.Механизмы эриропоэзстимулирующего действия экстракта шлемника байкальского // Эксперим. и клин, фармакология. - 2005. - Т. 68. - № 4. -С. 43-45 (соавт. Удут Е.В., Жданов В.В., Гурьянцева JI.A., Дыгай A.M.).

41.К вопросу о механизмах регуляции эритропоэза при экспериментальных неврозах // Бюл. эксперим. биол. и мед. - 2005. - № 5. - С. 495-501 (соавт. Скурихин Е.Г., Дыгай A.M., Провалова Н.В., Суслов Н.И.).

42.Особенности реакций гранулоцитарного ростка кроветворения у мышей с различной способностью к обучению при неврозах // / Бюл. эксперим. биол. и мед. - 2005. - Том 140. - № 8. - С. 136-141 (соавт. Скурихин Е.Г., Першина О.В., Ставрова Л.А. и др.).

43.Механизмы регуляции гранулоцитарного ростка кроветворения в условиях конфликтной ситуации и при депривации парадоксального сна // Бюл. эксперим. биол. и мед. - 2005. - Приложение № 1. - С. 14-20 (соавт. Ску-рихин Е.Г., Першина О.В., Провалова Н.В. и др.).

44.Влияние кропанола на локальные механизмы регуляции гемопоэза в конфликтной ситуации // Бюл. эксперим. биол. и мед. - 2005. - Приложение № 1. - С. 21-25 (соавт. Провалова Н.В., Скурихин Е.Г., Суслов Н.И., Ды-гай A.M.).

45.Моноаминергическая регуляция пула стволовых клеток эритропоэза активных и пассивных мышей при экспериментальных неврозах // Клеточные технологии в биологии и медицине. - 2005. - № 4. - С. 248-254 (соавт. Скурихин Е.Г., Першина О.В.).

46.Кроветворные прекурсоры: механизмы регуляции в условиях хронического стресса // Клеточные технологии в биологии и медицине. - 2005. - № 4.

- С. 214-218 (соавт. Шерстобоев Е.Ю.).

47. Фармакологическая регуляция пула прекурсоров эритропоэза при экспериментальных неврозах // Клеточные технологии в биологии и медицине.

- 2005. - № 4. - С. 219-228 (соавт. Скурихин Е.Г., Провалова Н.В., Першина О.В.).

48. Особенности действия симпатолитика резерпина на эритропоэз активных и пассивных мышей при экспериментальных невротических воздействиях // Материалы 4-ой Международной конференции: Биологические основы индивидуальной чувствительности к психотропным средствам. - Москва,

2006. - С. 23 (соавт. Гольдберг Е.Д., Дыгай A.M., Скурихин Е.Г. и др.).

49.Моноаминергический контроль пролиферации и дифференцировки прекурсоров грануломоноцитопоэза при невротических воздействиях // Бюл. эксперим. биол. и мед. - 2006. - Том 141. - № 6. - С. 616-621 (соавт. Скурихин Е.Г., Першина О.В., Дыгай A.M., Гольдберг Е.Д.).

50. Роль серотонина в регуляции эритропоэза при цитостатических миелосу-прессиях // Вестник Уральской медицинской академической науки. - Екатеринбург, 2006. -№3-2 (15). -С. 41.

51. Дофаминергическая регуляция эритропоэза при моделировании миелосу-прессий циклофосфаном и 5-фторурацилом // Бюл. эксперим. биол. и мед.

- 2007. - Приложение 1. - С. 79-86 (соавт. Скурихин Е.Г., Першина О.В.).

52.Новый подход к фармакологической коррекции нарушений в эритроне при цитостатических воздействиях // Создание новых лекарственных препаратов (материалы конференции). - Томск, 2007. - С. 112-114 (соавт. Першина О.В., Скурихин Е.Г.).

53.Роль серотонинергической системы в регуляции эритропоэза при цитостатических миелосупрессиях // Бюл. эксперим. биол. и мед. - 2007. - Приложение 1. - С. 86-91 (соавт. Скурихин Е.Г., Першина О.В.).

54. Роль дофаминергической системы в регуляции гранулоцитопоэза при цитостатических миелосупрессиях // Актуальные проблемы экспериментальной и клинической фармакологии (материалы конференции) - Томск,

2007. - С. 55-57.

55. Роль серотонина в регуляции гранулоцитопоэза при цитостатических миелосупрессиях // Бюл. эксперим. биол. и мед. - 2007. - Т. 143 - № 5. -С. 501-507 (соавт. Скурихин Е.Г., Першина О.В., Дыгай A.M., Гольдберг Е.Д.).

56. Особенности дофаминергической регуляции гранулоцитопоэза при цитостатических миелосупрессиях // Бюл. эксперим. биол. и мед. - 2007. - Том 144. - № 9 - С. 253-259 (соавт. Скурихин Е.Г., Першина О.В., Дыгай A.M., Гольдберг Е.Д.).

57. Роль центральных адренергических структур в регуляции гранулоцитопоэза при цитостатических воздействиях // Бюл. эксперим. биол и мед. -2008. - Том 145. - № 4. - С. 383-388 (соавт. Дыгай A.M., Скурихин Е.Г., Першина О.В., Гольдберг Е.Д.).

58.Моноаминергические механизмы регуляции гемопоэза при миелоингиби-рующих воздействиях // Проблемы онкофармакологии (материалы конференции). - Томск, 2008 - С. 6-8 (соавт. Скурихин Е.Г., Першина О.В.).

59.Теория регуляции кроветворения и создание на ее основе новых препаратов для терапии патологии системы крови // Бюл. эксперим. биол. и мед. -2008. - Приложение 2. - С. 6-13 (соавт. Гольдберг Е.Д., Дыгай A.M., Жданов В.В. и др.).

60.06 адренергической регуляции эритропоэза при цитостатических миелосупрессиях // Бюл. эксперим. биол. и мед. - 2008. - № Ю. - с. 385-390 (соавт. Скурихин Е.Г., Першина О.В., Ермакова H.H. и др.).

СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМЫХ СОКРАЩЕНИЙ

ВНС - вегетативная нервная система

ГАГ - гликозаминогликаны

ГИМ - гемопоэзиндуцирующее микроокружение

Г-КСФ - гранулоцитарный колониестимулирующий фактор

ГО - гемопоэтический островок

КОЕ (КлОЕ)-ГМ - колониеобразующая (кластерообразующая) единица гра-нулоцитарно-макрофагальная

КОЕ (КлОЕ)-Э - колониеобразующая (кластерообразующая) единица эрит-роидная

КСА - колониестимулирующая активность КСФ - колониестимулирующий фактор МПД- максимально переносимая доза ОКК - общее количество миелокариоцитов ОКЛ - общее количество лейкоцитов СМФ - система мононуклеарных фагоцитов ЦНС - центральная нервная система ЦФ - циклофосфан ЭП - эритропоэтин ЭПА - эритропоэтическая активность 5-ФУ - 5-фторурацил

Тираж 140 экз. Заказ № 932. Отпечатано на участке оперативной полиграфии издательства «Печатная мануфактура». Тел./факс: (3822) 493-119. E-mail: pechat@lomxk.ru

Оглавление диссертации Минакова, Мария Юрьевна :: 2009 :: Томск

Стр.

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. ЭФФЕКТЫ И МЕХАНИЗМЫ ПОВРЕЖДАЮЩЕГО ДЕЙСТВИЯ ЦИТОСТАТИЧЕСКИХ ПРЕПАРАТОВ IIA 22 ! КРОВЕТВОРНУЮ ТКАНЬ

1.1.1. Влияние алкилирующих соединений на систему крови

1.1.2. Изменения процессов кроветворения после применения 33 антиметаболитов

1.2. СОВРЕМЕННЫЕ ПРЕДСТАВЛЕНИЯ:© 44 МЕХАНИЗМАХ РЕГУЛЯЦИИ ГЕМОПОЭЗА В УСЛОВИЯХ РАВНОВЕСНОГО СОСТОЯНИЯ И ПРИ ЦИТОСТАТИЧЕСКИХ ВОЗДЕЙСТВИЯХ ;

1.2.1. Гемопоэзиндуцирующее микроокружение

1.2.2. Нейроэндокринная система .

1.3. ПРИНЦИПЫ ФАРМАКОЛОГИЧЕСКОЙ КОРРЕКЦИИ НАРУШЕНИЙ В СИСТЕМЕ КРОВИ, ВЫЗВАННЫХ цитостатиками ' ^ ■ :

Введение диссертации по теме "Патологическая физиология", Минакова, Мария Юрьевна, автореферат

Актуальность проблемы. Изучение закономерностей функционирования системы крови в норме и при патологии является актуальной задачей современной экспериментальной гематологии и патофизиологии, решение которой создает предпосылки для разработки адекватных патогенетически обоснованных методов фармакологической профилактики и коррекции гемо-депрессивных состояний различной этиологии [Moore M.A.S., Warren D., 1987; Dexter T.M., Heyworth C.M., 1994; Carde P., 1994; Drize N. et al., 1996; Хлусов И.А. и др., 1997; Prow D., Vadhan-Raj S. , 1998; Дыгай A.M. и др., 1999; Жданов В.В. и др., 2000; Воробьев А.И., 2002; Гольдберг Е.Д. и др.,

2008], что, в свою очередь, послужило основанием для создания ряда высокоэффективных гемостимуляторов на основе производных гликозаминогли-канов и рекомбинантных форм цитокинов [Asano S. , 1991; Ruef С., Coleman D.L., 1991; Abels R.I., 1992; Ganser A., Hattori К. et al., 1996; Жданов B.B. и др., 1997; Steward W.P. et al., 1998; Дыгай A.M. и др., 1999; Gabrivole J., 2000; Зак К.П., Грыцюк С.Н., 2001; Птушкин В.В., 2002; Egrie J.C. et al., 2003; Гольдберг Е.Д. и др., 2007; Beutel G., Ganser А., 2007; Littlewood T.J., Collins G.P., 2007; Xu Y.J. et al., 2007]. Целесообразным подходом к созданию новых гемостимуляторов можно считать и поиск средств, обладающих способностью воздействовать на дистантные механизмы контроля процессов кроветворения. В частности, предложены и апробированы в клинике методы терапии цитостатических миелосупрессий с помощью лекарственных средств, модулирующих активность симпатического отдела вегетативной нервной системы (ВНС) [Гольдберг Е.Д. и др., 1997; Хлусов И.А. и др., 1997].

Между тем, накопленные к настоящему времени данные об участии ней-ромедиаторных систем в обеспечении гемопоэза указывают на то, что спектр нейрофармакологических средств, способных стимулировать процессы восстановления кроветворной ткани в условиях супрессирующих воздействий (в том числе при введении цитостатиков) гораздо шире [Chatelain С. et al., 1989; Yang М. et al., 1996; Maestroni G.J. et al., 1997; Tsao C.W. et al., 1997; Broome C.S., Miyan J.A., 2000; Devoino L. et al.5 2001]. В пользу этого свидетельствует тот факт, что в паренхиме костного мозга помимо симпатических обнаружено наличие чувствительных, пуринергических и холинергических нервных окончаний [Yamazaki К., Alien T.D., 1990; Weihe Е. et al., 1991; Tabarowski Z. et al., 1996; Artico M. et al., 2002; Lakshmi C. et al., 2005; Aquila H.L., 2006]. Прослежена секреция ими как адреналина и норадреналина, так и дофамина, тахикининов и ряда других высокоактивных биологических веществ [Maestroni G.L., 2000; Захаров Ю.М., 2004]. Установлено, что кроветворные клетки-предшественники различной степени зрелости, равно как и морфологически распознаваемые гемопоэтические и стромальные клетки, способны нести на плазматической мембране рецепторы к различным лигандам медиаторной природы (ацетилхолин, катехоламины, серотонин, субстанция Р, нейрокини-ны А и В, опиоиды и др.) [Morley А. et al., 1971; Bosing-Schneider R., Haug M., 1976; Brown J.E., Adamson J.W., 1977; Федоров H.A., 1979; Van Furth R., 1980; Depelchin A., Letesson J.J., 1981; Hall N.R., 1981; Miles К. et al., 1984; Mladenovic J., Adamson J.W., 1984; Setchenska M.S. et al., 1986; Zahniser N.R. et al., 1989; Харкевич Д.Д., 1989; Broome C.S., Miyan J.A., 2000]. Показано наличие прямого (рецепторного) и опосредованного через клеточные элементы гемопоэзиндуцирующего микроокружения (ГИМ) регулирующего влияния нейромедиаторов на процессы пролиферации и дифференцировки ком-митирированных прекурсоров гемопоэза [Mladenovic J., Adamson J.W., 1984; Setchenska M.S. et al., 1986; Maestroni G.L., Conti A., 1994; Захаров Ю.М., 2004; Yang M. et al., 2007]. Немаловажным обстоятельством выступает способность кроветворных клеток и клеточных элементов ГИМ не только синтезировать и секретировать нейротрансмиттеры, но и вовлекать их в ауторегу-ляцию [Marino F. et al., 1997, 1999]. Все эти и многие другие факты предполагают существование моноаминергического локального контроля процессов повреждения и регенерации кроветворной ткани в ответ на миелоингиби-рующие воздействия. Причем активность адренергических, дофаминергиче-ских и серотонергических механизмов в отношении различных клеточных популяций, скорее всего, носит специфический характер.

Согласно современным представлениям, для жизнедеятельности кроветворных клеток важнейшую роль играют гемопоэтические ростовые факторы и ингибиторы [DePace D.M., Weber R.H., 1974; Sieff CA. et al., 1987; Fibbe W.E. et al., 1989; Metealf D, 1989; Dorshkind K., 1990; Натан Д.Г., Зифф К.А., 1994; Carde P., 1994; Grassinger J. et al., 2006; Kertesz Z. et al., 2006]. Известна избирательная чувствительность стволовых мультипотентных клеток и более зрелых предшественников, включая морфологически распознаваемые, к определенным гемопоэтинам [Metealf D., 1989; Heyworth С.М. et al., 1992; Karger A.G., 1993; Натан Д.Г., Зифф К.А., 1994; Carde P., 1994; Cross MA. et al., 1997; Возианов А.Ф. и др., 1998; Чертков И.Л., Дризе Н.И., 1998]. На уровне отдела коммитированных предшественников ярко выражен синергизм действия ростовых факторов и для оптимального ответа крайне важно наличие комбинации «ранних» и «поздних» цитокинов [Sieff С.А., 1987; Ikebuchi К. et al., 1987; Rennick D. et al., 1989; Tanaka R. et al., 1992; Ñecas E. et al., 1993;. Cross M.A. et al., 1997; Воробьев А.И, 2002; Grassinger J. et al., 2006]. Установлено, что в экстремальных условиях (иммобилизация, введение цитоста-тиков, невротические воздействия и др.) эритроидные и гранулоцитарные прекурсоры приобретают чувствительность к катехоламинам и адренотроп-ным препаратам, на которые они способны отвечать и вне структур кроветворного микроокружения [Maestroni G.L. et al., 1997; Гольдберг Е.Д. и др., 1997, 2004]. В то же время ни в одном из известных нам экспериментов исследователи не рассматривают совместное влияние гемопоэтических факторов роста и лигандов адренергических, дофаминергических и серотонинер-гических рецепторов на предшественники кроветворения при патологических состояниях.

Другим аспектом рассматриваемой проблемы является вопрос о роли моноаминов центральной нервной системы (ЦНС) в регуляции гемопоэза. Существуют сведения о возможности эффекторного воздействия различных нейромедиаторных систем мозга (адренергическая, дофаминергическая, се-ротонинергическая, М-холинергическая, ГАМК-ергическая) на клеточность отдельных ростков кроветворения при невротических воздействиях [Гольд-берг Е.Д. и др., 2002, 2004]. Активация центральных звеньев дофаминергиче-ской системы вызывает иммуностимуляцию, сопровождающуюся накоплением в костном мозге С04+ Т-клеток, увеличением числа антителообразую-щих и розеткообразующих клеток в селезенке животных, отменой стресс-индуцированного угнетения иммунной реакции, а также усилением пролифе-ративного ответа Т-лимфоцитов к митогенам [Девойно Л.В., Ильюченок Р.Ю., 1993; Идова Г.В., 1994; Тэао СЖ & а1., 1997; Идова Г.В. и др., 2001] . Однако представленные данные литературы не позволяют сформировать четкого представления о регуляторном влиянии* центральных моноаминов на пул коммитированных клеток-предшественников гемопоэза, а также функции ГИМ в норме и при различных патологических состояниях (включая ци-тостатические гемодепрессии).

Цель исследования: изучить механизмы-регуляторного влияния адренергической, дофаминергической и серотонинергической систем на кроветворную ткань при цитостатических миелосупрессиях.

Задачи исследования:

1. Оценить участие адренергической, дофаминергической и серотонинергической систем в развитии нарушений в системе крови в условиях введения циклофосфана и 5-фторурацила.

5. Разработать патогенетически обоснованные методы коррекции нарушений в эритроидном и гранулоцитарном ростках кроветворения при цитостатических воздействиях, основанные на модуляции активности центральных и периферических моноаминергических структур.

Положения, выносимые на защиту:

1. При гипопластических состояниях, моделированных введением алки-лирующего агента (циклофосфан) или фторпиримидинового антиметаболита (5-фторурацил) в 1/3 МПД, пролиферация и дифференцировка коммитиро-ванных кроветворных предшественников и функциональная активность клеточных элементов ГИМ, системы КСФ и эритропоэтина находятся под контролем адренергической, дофаминергической и серотонинергической систем. При этом серотонинергическая система в большей степени ответственна за изменения со стороны эритрона, а адренергическая и дофаминергическая — в гранулоцитарном ростке кроветворения.

2. Основными причинами различных темпов и характера регенерации костномозговой ткани при назначении алкилирующего агента и фторпири-мидинового антиметаболита выступают специфическая, активность центральных адренергических, дофаминергических и серотонинергических структур и особенности их взаимодействия с гемопоэтическими прекурсорами и клетками ГИМ, а также избирательная-чувствительность эритропоэтина и Г-КСФ к регуляторному влиянию моноаминов. 3; В?-условиях введения циклофосфана ингибирующее действие адренер-гической системы на гранулоцитарный и эритроидный ростки кроветворения опосредовано угнетением функциональной активности адгезирующих клеток. ГИМ (образование ГО, продукция- ЭПА) и снижением- скорости деления гра-нуломоноцитарных предшественников (связанное: с Г-КСФ и пёрифериче-. скими адренергическими механизмами). Ускорение процессов регенерации^ кроветворной ткани адренерги ческой системой при назначении 5-фторурацила обусловлено- формированием ГО,- продукцией ЭПА неадгези-рующими клетками ГИМ и увеличением уровня КСА в сыворотке крови. При этом стимуляция пролиферативной активности прекурсоров; гемопоэза, обусловлена КСФ, эритропоэтином, а- и Р-адренергическими структурами.

4. Дофаминергическая система углубляет нарушения структурно-функциональной организации преимущественно эритроидного компартмента кроветворения, вызванные алкилирующим агентом, что приводит к задержке регенерации эритропоэза и более выраженной ретикулоцитопении в периферической крови. При этом имеет место стимуляция Г-КСФ- и дофамин-зависимых механизмов контроля- пролиферации грануломоноцитарных предшественников, препятствующая развитию нейтрофильной лейкопении.

5. При назначении 5-фторурацила дофаминергическая, система, с одной стороны, увеличивает темпы регенерации эритрона (в силу роста уровня сывороточной ЭПА и эритропоэтин-зависимой активации пролиферации КОЕ

Э), с другой стороны, задерживает восстановление гранулоцитарного ростка кроветворения (за счет снижения продукции КСА адгезирующими клетками ГИМ).

7. В условиях цитостатической миелосупрессии, вызванной введением циклофосфана, истощение депо катехоламинов резерпином значительно увеличивает гранулоцитопоэзстимулирующую активность Г-КСФ за счет организации в костном мозге de novo гранулоцитарных и смешанных ГО. Нарушение серотониновой медиации в ЦНС ципрогептадином оказывает потенцирующее действие на эритропоэзстимулирующие эффекты эритропоэтина во многом благодаря восстановлению нарушенной антиметаболитом структурно-функциональной организации эритроидного компартмента кроветворения.

Научная новизна. В работе в сравнительном аспекте впервые изучена роль адренергической, дофаминергической и серотонинергической систем в развитии миелосупрессии и регенерации кроветворной ткани на моделях цитостатических воздействий, вызванных алкилирующим агентом и антиметаболитом. Продемонстрировано, что регулирующие эффекты центральных моноаминергических систем осуществляются через адренергические, дофаминергические и серотонинергические структуры на коммитированных кроветворных предшественниках и клеточных элементах ГИМ, а также опосредовано - через системы эритропоэтина и КСФ.

Выявлено, что в условиях цитостатических воздействий чувствительность прекурсоров гемопоэза к прямому действию лигандов моноаминерги-ческой природы возрастает, однако в динамике развития гипопластического состояния прослеживается не только стимуляция деления и созревания КОЕ, но и ингибиция данных процессов. В культуре дофамин и серотонин оказывают супрессирующее влияние на опосредованную гемопоэтическими факторами роста пролиферативную активность кроветворных предшественников, в то же время адреномиметики повышают темпы роста КОЕ-ГМ (более при назначении циклофосфана) и угнетают выход КОЕ-Э в присутствии эритропоэтина.

In vitro показано, что N-ацетилнейраминовая кислота увеличивает свя- ' зывающую способность адгезирующих клеток ГИМ, подвергнутых воздействию алкилирующего агента, в отношении предварительно обработанных изадрином или серотонином предшественников эритропоэза.

Истощение депо катехоламинов (резерпин) препятствует развитию депрессии костномозгового гранулоцитопоэза и ускоряет восстановление гемо-поэтической ткани после назначения циклофосфана, что преимущественно связано с формированием de novo гемопоэтических островков в костном мозге и продукцией ЭПА адгезирующими нуклеарами. При этом возрастают сопряженные с Г-КСФ (период ингибиции) и адреноструктурами {период регенерации) деление и созревание грануломоноцитарных предшественников, а также эритропоэтин (период ингибиции) - и катехоламин {1-7-е сутки) - зависимая дифференцировка эритроидных клеток. Ингибиция симпатолитиком кроветворения в условиях введения антиметаболита вызвана, в первую очередь, нарушениями функций ГИМ (образования ГО и секреции ЭПА неадге-зирующими миелокариоцитами) и снижением уровня сывороточного КСА, во вторую очередь, угнетением функциональной активности кроветворных предшественников, опосредованной гемопоэтинами и катехоламинами {период ингибгщии) и Р-адренергическими структурами, эритропоэтином {период регенерации).

Фармакологическая блокада постсинаптических дофаминовых Д2 рецепторов (галоперидол) усугубляет гипоплазию гранулоцитопоэза в условиях введения алкилирующего агента, что обусловлено разрушением ГО грануло-цитарного и эритро-гранулоцитарного типов и сокращением пула пролифе-рирующихКОЕ-ГМ. В противоположность этому, галоперидол, повышая функциональную активность адгезирующих клеток, уровень ЭПА в сыворотке крови и интенсивность дифференцировки КОЕ-Э, увеличивает скорость регенерации эритропоэза. При назначении антиметаболита в основе стимуляции галоперидолом гранулоцитопоэза лежит возрастание секреции КСА адгезирующими клетками ГИМ и высокая пролиферативная активность предшественников грануломоноцитопоэза, опосредованная периферическими дофаминергическими механизмами и Г-КСФ, при этом ингибиция эри-трона сопряжена с угнетением деления и созревания эритроидных клеток, опосредованных эритропоэтином и дофаминергическими структурами.

Нарушение серотониновой медиации в ЦНС ципрогептадином увеличивает уровень ЭПА в сыворотке крови и кондиционных средах адгезирующих миелокариоцитов в период ингибиции и угнетает периферические серотони-новые механизмы регуляции эритроидных предшественников в сроки восстановления кроветворной ткани при назначении циклофосфана, что соответствующим образом отражается на содержании морфологически распознаваемых эритроидных клеток в системе крови (увеличение их числа в период депрессии эритрона и снижение - в сроки регенерации). При введении 5-фторурацила основным условием ускорения антисеротониновым препаратом регенерации гемопоэза (преимущественно эритроидного ростка кроветворения) выступают стимуляция формирования de novo эритроидных и грануло-цитарных ГО, а также серотониновых и цитокиновых механизмов контроля пролиферации грануломоноцитарных предшественников.

Впервые продемонстрировано, что в условиях введения циклофосфана уменьшение депо катехоламинов потенцирует гранулоцитопоэзстимули-рующий эффект Г-КСФ, а фармакологическая блокада постсинаптических серотониновых С2 рецепторов усиливает эритропоэзстимулирующее действие эритропоэтина при назначении 5-фторурацила, что связано с опережающим восстановлением структурно-функциональной организации костного мозга (формирование ГО).

Истощение in vivo депо катехоламинов приводит к уменьшению выхода КОЕ-ГМ под действием Г-КСФ, мезатона и изадрина, но стимулирует in vitro образование КОЕ-Э в культуре с эритропоэтином и адреномиметиками. Нарушение дофаминовой медиации в ЦНС избирательно уменьшает число гра-нулоцитарно-макрофагальных колоний {in vitro дофамин), фармакологическая блокада постсинаптических серотониновых С2 рецепторов мозга угнетает эритроидное колониеобразование {in vitro серотонин).

Практическое значение работы. Показана важная роль адренергиче-ской, дофаминергической и серотонинергической систем в развитии миело-супрессии и регенерации костномозговой ткани в условиях цитостатических воздействий, выявлены основы регуляторного влияния центральных моно-аминергических структур на коммитированные кроветворные клетки-предшественники и гемопоэзиндуцирующее микроокружение. Полученные данные вносят существенный вклад в понимание специфических моноами-нергических механизмов контроля эритропоэза и гранулоцитопоэза при моделировании миелосупрессии введением цитостатиков с различным механизмом действия.

Материалы по доклиническому исследованию препарата гранулоцитар-ного колонистимулирующего фактора нейтростима, разработанного НИИ фармакологии СО РАМН совместно с ФГУН ГНЦ ВБ «Вектор» (Новосибирск), представлены в Фармакологический комитет МЗ и CP РФ, получено разрешение на его клиническое применение и производство (РУ № ЛСР -010185/08).

Апробация работы. Материалы диссертационной работы докладывались и обсуждались на научных конференциях НИИ фармакологии ТНЦ СО РАМН: «Актуальные проблемы фармакологии и фармакотерапии» (Томск, 1996), конференции фармакологов Сибири и Дальнего Востока, посвященной 15-летию НИИ фармакологии ТНЦ СО PAMHf (Томск, 1999), «Актуальные проблемы экспериментальной и клинической фармакологии» (Томск, 2001, 2002), «Актуальные проблемы фармакологии» (Томск, 2004); на V, VI, VIII, VTV Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 1998, 1999, 2001, 2002), на конференции молодых ученых СО РАМН "Фундаментальные и прикладные проблемы современной медицины" (Новосибирск, 2000); на Международной научной конференции "Поиск, разработка и внедрение новых лекарственных средств и организационных форм фармацевтической деятельности" (Томск, 2000); на XII международной конференции по космической биологии и авиакосмической медицине (Москва, 2002); на конференции "Актуальные вопросы экспериментальной и клинической морфологии" (Томск, 2002); на 4-ом съезде физиологов Сибири (Новосибирск, 2002); на XIX съезде Физиологического общества им. И.П. Павлова (Екатеринбург, 2004); на конференции «Фармакологическая регуляция стволовой клетки» (Томск, 2005); на 4-ой Международной конференции «Биологические основы индивидуальной чувствительности к психотропным средствам» (Москва, 2006); на Республиканской научной конференции «Создание новых лекарственных препаратов» (Томск, 2007); на конференции «Проблемы онкофармакологии» (Томск, 2008).

Публикации. По теме диссертации опубликована 60 работ, из них 21 в журналах, рекомендованных «Перечнем .» ВАК Минобрнауки России.

Получен патент (1Ш) № 2317541 «Способ изучения гемопоэза с учетом особенностей высшей нервной деятельности» (опубл. 20.02.2008 г., Бюл. № 5); получено решение о выдаче патента (1Ш) «Средство, препятствующее развитию депрессии эритроидного ростка кроветворения при цитостатиче-ских миелодепрессиях» (№ 2007137872 от 12.09.2008 г.).

Заключение диссертационного исследования на тему "Моноаминергические механизмы регуляции кроветворения при цитостатических воздействиях"

267 ВЫВОДЫ

1. Адренергическая, дофаминергическая и серотонинергическая системы участвуют в регуляции гемопоэза в условиях цитостатических миелосупрес-сий, вызванных алкилирующим агентом (циклофосфан) и: антиметаболитом (5-фторурацил). Регуляторное влияние моноаминов ЦНС осуществляется через адренергические, дофаминергические и серотонинергические структуры на гемопоэтических прекурсорах и клетках гемопоэзиндуцирующего микроокружения (РИМ), а также системы колониестимулирующих факторов и эри-тропоэтина.

2. В условиях введения;алкилирующего агента регуляция гранулоцитар-ного ростка кроветворения сопряжена преимущественно с адренергической и дофаминергической- системами, тогда как развитие изменений в эритроне при назначении антиметаболита в большей степени- связано с серотонинергиче-ской системой.

3. Мезатон, изадрин, дофамин и серотонин оказывают стимулирующее действие на формирование колоний эритроидного и грануломоноцитарного типа в тест-системе неадгезирующих миелокариоцитов интактных животных. Степень индукции, роста КОЕ лигандами моноаминергической природы существенно уступает таковой под влиянием эритропоэгина и Г-КСФ.

4. В условиях введения цитостатиков лиганды моноаминергической природы in vitro увеличивают темпы деления эритроидных (изадрин) и гранул оцитарногмакрофагальных (дофамин, изадрин, серотонин) предшественников, при этом гемостимулирующая активность Р-адреномиметика и дофамина превосходит выявленную в контроле с рекомбинантными гемопоэтиче-скими ростовыми факторами. Вместе с тем, мезатон снижает пролифератив-ную активность и интенсивность дифференцировки КОЕ-Э и КОЕ-ГМ, а серотонин и дофамин избирательно угнетают процессы в отделе предшественников эритропоэза (более выражено при введении фторпиримидинового антиметаболита).

5. В культуре неадгезирующих миелокариоцитов интактных животных адреномиметики усиливают Г-КСФ-зависимую стимуляцию роста КОЕ-ГМ, а серотонин ускоряет сопряженное с эритропоэтином формирование КОЕ-Э. Если при моделировании миелосупрессии введением циклофосфана потенцирующее действие адреномиметиков и серотонина сохраняется, то при назначении 5-фторурацила моноаминергические лиганды, напротив, отменяют ассоциированные с гемопоэтическими факторами роста высокие темпы деления и созревания гемопоэтических прекурсоров.

6. N-ацетилнейраминовая кислота in vitro препятствует угнетению фидерной активности адгезирующих клеток костного мозга, подвергнутых воздействию циклофосфана, в отношении предварительно обработанных серо-тонином или изадрином предшественников эритропоэза.

7. Истощение депо катехоламинов (резерпин), блокада постсинаптиче-ских дофаминовых Д2 (галоперидол) и серотониновых С2 (ципрогептадин) рецепторов не влияют на содержание морфологически распознаваемых нук-леаров в костном мозге и периферической крови интактных мышей. В то же время симпатолитик уменьшает содержание КОЕ-ГМ в культуре неадгезирующих миелокариоцитов с Г-КСФ, мезатоном и изадрином, но увеличивает число КОЕ-Э в тест-системе с эритропоэтином и адреномиметиками. Анти-серотониновый препарат избирательно снижает активность выхода КОЕ-Э (in vitro серотонин), а нейролептик — образование гранулоцитарно-макрофагальных колоний (in vitro дофамин).

8. При назначении циклофосфана стимуляция восстановления гемопоэза резерпином (преимущественно гранулоцитарного ростка кроветворения) связана с формированием de novo гемопоэтических островков в костном мозге, продукцией ЭПА адгезирующими миелокариоцитами. При этом сопряженное с Г-КСФ (период ингибщии) и адреномиметиками (период регенерации) увеличение функциональной активности гранулоцитарно-макрофагальных предшественников, а также рост скорости созревания эритроидных прекурсоров, связанный с эритропоэтином (период ингибгщии) и аадренергическими структурами (1-7-е сутки), играют меньшую роль в развитии регенераторных процессов.

9. Основными причинами усугубления резерпином миелосупрессии и задержки восстановления гемопоэза (более - эритроидного ростка кроветворения) в условиях введения 5-фторурацила выступают нарушения структурно-функциональной организации костного мозга (угнетение формирования ГО и секреции ЭПА неадгезирующими миелокариоцитами) и снижение уровня сывороточного КСА. В реализации ингибирующего влияния симпа-толитика на функциональную активность эритроидных прекурсоров участвуют эритропоэтин (весь период исследования) и адренергические структуры (период ингибиции), падение темпов деления КОЕ-ГМ и скорости их созревания происходит при участии Г-КСФ (период ингибиции) и преимущественно периферических Р-адренергических механизмов (период регенерации).

10. Фармакологическая блокада постсинаптических дофаминовых рецепторов (галоперидол) при назначении циклофосфана увеличивает скорость регенерации эритропоэза за счет возрастания функциональной активности адгезирующих клеток ГИМ (образование макрофагпозитивных и эритроидных ГО, продукция ЭПА), повышения уровня сывороточной ЭПА и интенсивности дифференцировки эритроидных предшественников. В этих услови- < ях нейролептик усугубляет ингибицию гранулоцитопоэза, что во многом обусловлено разрушением гранулоцитарных и смешанных клеточных комплексов и падением пролиферативной активности грануломоноцитарных прекурсоров.

11. При фармакологической блокаде постсинаптических Д2 рецепторов продукция КСА адгезирующими миелокариоцитами и высокие темпы деления грануломоноцитарных предшественников, ассоциированные с дофами-нергическими структурами и Г-КСФ, выступают основными механизмами, определяющими ускоренное восстановление гранулоцитопоэза в условиях введения 5-фторурацила. Ингибирующий эффект нейролептика на процессы регенерации эритроидного ростка кроветворения связан с угнетением пролиферативной активности и интенсивности: дифференцировки прекурсоров эритропоэза, связанных с эритропоэтином и дофаминергическими структурами.

12. При моделировании миелосупрессии введением алкилирующего агента фармакологическая блокада серотониновых постсинаптических G2 рецепторов^(ципрогептадин) препятствует развитию депрессии эритроидного ростка кроветворения, что связано-с увеличением концентрации эритропоэз-стимулирующих факторов в. сыворотке крови и кондиционных средах адге-зирующих клеток ГИМ. Последующее снижение скорости регенерации эри-трона, обусловлено супрессирующим действием: антисеротонинового препарата: на периферические серотониновые механизмы контроля эритроидных предшественников;

13. В условиях введения антиметаболита1 блокада серотониновых постсинаптических С2 рецепторов: стимулирует формирование макрофашозитив-ных, эритроидных и гранулоцитарных гемопоэтических островков, что приводит к ускорению восстановления- гемопоэза (более эритроидного ростка кроветворения). При этом расширяется<пул грануломоноцитарных предшественников, находящихся-в S-фазе митотического цикла.

14. Истощение депо катехоламинов резерпином усиливает гранулоцито- • поэзстимулирующее действие Г-КСФ при моделировании, миелосупрессии циклофосфаном за счет образования дополнительных очагов гранулоцитар-ного кроветворения в кроветворной ткани. В условиях назначения; фторпи-римидинового антиметаболита последовательное введения симпатолитика и цитокина препятствует восстановлению структурно-функциональной организации костного мозга, следствием чего является снижение активности грану-лоцитопоэза.

15. При введении 5-фторурацила нарушение серотониновой медиации в ЦНС ципрогептадиноме потенцирует эритропоэзстимулирующее действие-эритропоэтина во многом благодаря активному формированию de novo мак-рофагпозитивных и эритроидных ГО в костномозговой ткани. В свою очередь последовательное назначение антисеротонинового препарата и эритро-поэтина не влияет на эритроидный росток кроветворения в случае моделирования депрессии эритрона алкилирующим агентом.

272

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Согласно современным представлениям регуляция кроветворения при экстремальных воздействиях осуществляется взаимодействием дистантных (нейроэндокринных) и локальных систем жизнеобеспечения организма. При этом нейроэндокринным механизмам принадлежит координирующая роль в реализации ответа системы на воздействие чрезвычайных раздражителей различной этиологии. Установлено наличие прямого (рецепторного) и опосредованного через элементы ГИМ (Т-лимфоциты, макрофаги, стромальные ме-ханоциты) регулирующего влияния катехоламинов и глюкокортикоидов на процессы пролиферации и дифференцировки коммитированых клеток-предшественников гемопоэза при цитостатических миелосупрессиях. Вместе с тем, в настоящее время накоплено большое количество данных, указывающих на то, что дистантный контроль кроветворения в указанных условиях не ограничивается вегетативными медиаторами и гормонами коры надпочечников. Существуют сведения о возможности эффекторного воздействия различных нейромедиаторных систем мозга (адренергическая, дофаминергиче-ская, серотонинергическая, М-холинергическая, ГАМК-ергическая) на кле-точность отдельных ростков кроветворения при невротических воздействиях. Однако имеющиеся в литературе данные о регулирующем влиянии моноаминов на гемопоэз отличаются фрагментарностью и недостаточны для понимания закономерностей и механизмов их участия в процессе контроля пролиферации и дифференцировки кроветворных клеток в экстремальных условиях, включая цитостатические воздействия. Следует отметить, что изучение роли моноаминергических систем в регуляции кроветворения в динамике развития цитостатической болезни имеет не только теоретический, но и практический интерес. Полученные в ходе такого исследования позволяют определить рациональные пути влияния на процессы регенерации поврежденной цитостатиками кроветворной ткани с использованием лекарственных средств, изменяющих активность моноаминергических систем.

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ 2.1. Материал исследования

До начала исследования экспериментальных животных выдерживали в течение недели на обычном пищевом режиме по 15-20 особей в пластиковых клетках. Мышей умерщвляли методом дислокации шейных позвонков под эфирным наркозом. С целью исключения сезонных колебаний изучаемых показателей все эксперименты были проведены в осенне-зимний период.

Распределение животных по сериям экспериментов в-соответствии с поставленными задачами, сроки забора материала для исследований в каждой серии отображены в таблице 1.

Список использованной литературы по медицине, диссертация 2009 года, Минакова, Мария Юрьевна

1. Абрамова Е.В. Влияние экстракта шлемника байкальского на процессы регенерации кроветворения в условиях химиотерапии: автореф. дисс. . канд. мед. наук. Томск, 1992. - 21 с.

2. Абрамов В.В. Взаимодействие иммунной и нервной системы. Новосибирск, 1988.- 166 с.

3. Агафонов В.И. О влиянии шлемника байкальского на регенерацию гемо-поэза, подавленного действием цитостатика // Актуальные проблемы фармакологии и поиска новых лекарственных препаратов. Томск, 1993. - Т. 6.-С. 3-6.

4. Агафонов В.И., Дыгай A.M., Шахов В.П., Гольдберг Е.Д. Роль гемопо-эзиндуцирующего микроокружения в постлучевой регенерации гемопоэза // Радиационная биология. Радиоэкология. 1994. - Том 34. - Вып. 1. — С. 111-116.

5. Адюшкин А.И: Изменения соотношения типов колоний, продуцированных КОЕс, в условиях многократного введения глюкокортикоидов в малых дозах // Гематол. и трансфузиол. 1983. - № 9. - С. 32-34.

6. Аксиненко С.Г. Роль симпатической нервной системы в регуляции кроветворения в условиях цитостатической гемодепрессии: автореф^ дисс.канд. мед. наук. Томск, 1994. - 19 с.

7. Алехин Е.К., Лазарева Д.Н., Сибиряк C.B. Иммунотропные свойства лекарственных средств. Уфа, 1993. - 208 с.

8. Алмазов В.А., Афанасьев Б.В., Зарицкий А.Ю., Шишков А.Л. Лейкопении.-Л.: Медицина, 1981.-240 с.

9. Аничков C.B. Нейрофармакология: (Руководство)/АМН СССР. -Л.Медицина, 1982. 384 с.

10. Ю.Антипов И.Г. Периферическая кровь и костномозговое кроветворение при разовом и курсовом введении имифоса здоровым морским свинкам // Вопросы радиобиологии и биологического действия цитостатических препаратов. Томск: Изд-во ТГУ, 1970. - С. 293-298.

11. Астрахан В.И., Гарин A.M., Личиницер М.Р. Общая характеристиак и классификация побочных действий проивоопухолевых препаратов // Побочные действия лекарственных средств. М.: Медицина, 1976. - С. 207213.

12. Бала Ю.М., Сидельникова В.И., Лифшиц'В.М. Механизмы тканеспецифи-ческой регуляции гранулоцитопоэза при воспалении. // Патологическая физиология и экспериментальная терапия. 1991. - № 4. - С. 60-61.

13. М.Балицкий К.П., Шмалько Ю.П. Стресс и; метастазирование злокачественных опухолей. Киев, 1987. - 248 с.

14. Белоусов.Ю.Б., Моисеев B.C., Лепахин В.К. Клиническая фармакология и фармакотерапия1. Руководство для врачей: 2-е изд., исп. и доп. М.: Универсум Паблишинг, 1997.

15. Белоусова А.К. Молекулярные механизмы действия алкилирующих агентов и антиметаболитов // В сб. Химиотерапия5 злокачественных опухолей / Под ред. H.H. Блохина, Медицина, М. 1977. - С. 61.

16. Блохин H.H., Переводчикова Н.И. Химиотерапия опухолевых заболеваний. -М.: Медицина, 1984. 303 с.

17. Болдышев Д. А. О механизмах стимулирующего влияния N-ацетилнейраминовой кислоты на процессы костномозгового кроветворения при цитостатических и лучевых миелодепрессиях: дис. . канд. мед. наук. Томск, 1993. - 178 с.

18. Бредер В.В., Горбунова В.А., Бесова Н.С. Анемия при злокачественных опухолях // Современная онкология. 2002. - Том 4. - № 3. - С. 12-18.

19. Булкина З.П. Противоопухолевые препараты. Киев: Наукова думка, 1991.-304 с.

20. Булкина З.П., Пивнюк В.М., Езерская Л.Я. Особенности действия 5-фторурацила на кроветворение // Вопросы радиобиологии и биологического действия цитостатических препаратов. Томск: Изд-во ТГУ, 1973. -С. 101-103

21. Бычков М.Б., Волкова A.M., Гарин A.M. и др. Противоопухолевая химиотерапия. М.: Медицина, 1993. - 223 с.

22. Владимирская Е.Б., Масчан A.A., Румянцев А.Г. Апоптоз и его роль в развитии опухолевого процесса // Гематол. и трансфузиол. 1997. - Т. 42. -№5.-С. 4-9.

23. Владимирская Е.Б. Механизмы действия ростовых факторов // Лабораторная медицина. 2002. - № 5. - С. 14-19.

24. Вогралик В.Г. Работы русских ученых по нервной регуляции системы'крови. — Горький, 1953. 64 с.

25. Возианов А.Ф., Бутенко А.К., Зак К.П. Цитокины. Биологические и противоопухолевые свойства. Киев, Наук думка, 1998. — 314 с.

26. Волкова М.А. Гранулоцитарный колониестимулирующий фактор граноцит и его клиническое применение // Тер. Архив. 1998. - № 4. - С. 80-84.

27. Воробьев А.И. Руководство по гематологии: в 3 т. Т. 1. Под ред. А.И. Воробьева. 3-е изд., перераб. и допол. М.: Ньюдиамед, 2002. - 280 с.

28. Воробьев П.А. Анемический синдром в клинической практике. М.: Ньюдиамед, 2001. - С. 28-35.

29. Вядро М.М. Иммуномодулирующие свойства противоопухолевых антибиотиков // Антибиотики и мед. биотехнология. 1987. - Т. 32. - № 8. - С. 611-617.

30. Гаврилов O.K., Файнштейн Ф.Э., Турбина Н.С. Депрессии кроветворения. М.: Медицина, 1987. - 256 с.

31. Гарин A.M. Современные тенденции развития химиотерапии опухолей // Вопросы онкологии. 1983. - № 11. - С. 93-98

32. Гарин A.M. Новые антимет'аболиты в онкологической практике // Новые цитостатики в лечении злокачественных опухолей. Под ред. В.А. Горбуновой.-М., 1998.-С. 41-60.

33. Гарин A.M., Хлебнов A.B. Справочник практической химиотерапии опухолей. -М., 1995.-304 с.

34. Гарин A.M., Хлебнов A.B., Табагари Д.З. Справочник по противоопухолевой лекарственной терапии. М.: Ультра-Мед, 1993. - 200с.

35. Гаузе Г.Ф., Дудник Ю.В. Справочник практической химиотерапии опухот лей. М., 1995.-304 с.

36. Гершанович M.JI. Осложнения при химо- и гормонотерапии злокачественных опухолей. М.: Медицина, 1982. - 224 с.

37. Гершанович М.Л., Филов В.А., Акимов М.А., Акимов A.A. Введение в; фармакотерапию злокачественных опухолей. Санкт-Петербург, 1999. -143 с.41 .Гольдберг Д.И. Очерки гематологии (Кроветворение и нервная система). -Томск, 1952. 232 с.

38. Гольдберг Д.И., Гольдберг Е.Д. Атлас микрофотограмм костного мозга при острой лучевой болезни и действии цитостатических препаратов. — М. Медицина, 1973. 143 с.

39. Гольдберг Е.Д., Дыгай A.M., Богдашин И.В. и др. Роль гемопоэзиндуци-рующего микроокружения при миелодепрессиях различного генеза // Бюл. ТНЦ АМН СССР. Томск, 1992. - Вып. 4. - С. 3-13.

40. Гольдберг Е.Д., Дыгай A.M., Гурьянцева JI.A. и др. Механизмы стимуляции миелопоэза при цитостатических миелодепрессиях пантогематогеном и гранулоцитарным колониестимулирующим фактором // Бюл. эксперим. биол. и мед. — 2000. — Т. 130.-№ 11.-С. 512-515.

41. Гольдберг Е.Д., Дыгай A.M., Жданов В.В. Механизмы цитостатического повреждения и регенерации кроветворной системы // Вестник РАМН. -1998. -№ Ю.-С. 6-10.

42. Гольдберг Е.Д., Дыгай A.M., Жданов В.В. Роль гемопоэзиндуцирующего микроокружения в регуляции кроветворения при цитостатических миело- , супрессиях. Изд-во STT, Томск, 1999. - 114 с.

43. Гольдберг Е.Д., Дыгай A.M., Жданов В.В. Динамическая теория регуляции кроветворения и роль цитокинов в регуляции гемопоэза // Медицинская иммунология. 2001. - Т. 3. - № 4. - С. 487-498.

44. Гольдберг Е.Д., Дыгай A.M., Жданов В.В. Механизмы дизрегуляции системы крови при патологии / Дизрегуляционная патология: Руководство для врачей и биологов / Под ред. Г.Н.Крыжановского. М.: Медицина, 2002.-С. 386-394.

45. Гольдберг Е.Д., Дыгай A.M., Жданов В.В. Механизмы регуляции системы крови при миелосупрессирующих воздействиях // Бюл. Сибирской медицины. 2002. - Том 1. -№ 2. - С. 7-15.

46. Гольдберг Е.Д., Дыгай A.M., Жданов В.В. Современные взгляды на проблему стволовых клеток и возможности их использования в медицине // Клеточные технологии в биологии и медицине. 2005. - № 4. - С. 184— 189.

47. Гольдберг Е.Д., Дыгай A.M., Жданов В.В. и др. Механизмы дейсвтия гра-нулоцитарного колониестимулирующего фактора на гемопоэз // Бюл. эксперим. биол. и мед. -2005. Прил. 1. - С. 5-13.

48. Гольдберг Е.Д., Дыгай A.M., Жданов В.В. и др. Фармакологическая регуляция системы крови при экспериментальных невротических воздействиях. — Томск, Изд-во ТГУ, 2007. 155 с.

49. Гольдберг Е.Д., Дыгай A.M., Жданов В.В., Хлусов И.А. Динамическая теория регуляции кроветворения // Бюл. эксперим. биол. и мед. 1999. -Т. 127. - № 5. - С. 484—494.

50. Гольдберг Е.Д., Дыгай A.M., Захарова О.Ю. Роль опиоидных пептидов в регуляции гемопоэза. Томск, 1990. - 140 с.

51. Гольдберг Е.Д., Дыгай A.M., Зюзьков Г.Н. Гипоксия-и система крови. -Томск: Изд-во ТГУ, 2006. 140 с.

52. Гольдберг Е.Д., Дыгай A.M., Карпова Г.В: Роль лимфоцитов в регуляции гемопоэза. Томск: Изд-во ТГУ, 1983. - 160 с.

53. Гольдберг Е.Д., Дыгай A.M., Провалова Н.В. и др. Роль нервной системы в регуляции кроветворения. Томск: Изд-во Том. Ун-та, 2004. - 146 с.

54. Гольдберг Е.Д., Дыгай A.M., Скурихин Е.Г. и др. Адренергические и хо-линергические механизмы регуляции кроветворения в условиях экспериментальных невротических воздействий // Бюл. эксперим. биол. и мед. -2000.-Т. 129.-№4.-С. 381-385.

55. Гольдберг Е.Д, Дыгай A.M., Удут В.В. и др. Закономерности структурнойорганизации систем жизнеобеспечения в норме и при развитии патологического процесса. Томск: Изд-во ТГУ, 1996. - 282 с.

56. Гольдберг Е.Д., Дыгай A.M., Хлусов И.А. Роль вегетативной нервной системы в регуляции гемопоэза. Томск: Изд-во ТГУ, 1997. - 218 с.

57. Гольдберг Е.Д., Дыгай A.M., Хлусов И.А. и др. Продукция костномозговыми клетками гуморальных факторов при экстремальных воздействиях различного генеза // Бюл. эксперим. биол. и мед. 1993. - № 9. - С. 244246.

58. Гольдберг Е.Д., Дыгай A.M., Шахов В.П. Механизмы формирования адаптивных реакций в системе крови при стрессе // Механизмы патологических реакций. Томск, 1986. - Т. 6. - С. 3-9.

59. Гольдберг Е.Д., Дыгай A.M., Шахов В.П. Роль макрофагов в развитии феномена стимуляции костномозгового кроветворения при стрессе // Патол. физиология и эксперим. терапия. 1988. - № 5. - С. 32-34.

60. Гольдберг Е.Д., Дыгай A.M., Шахов В.П. Методы культуры ткани в гематологии. Томск, 1992. - 264 с.

61. Гольдберг Е.Д., Дыгай A.M., Шахов В.П., Кириенкова Е.В. и др. Роль ней-роэндокринной системы и гемопоэзиндуцирующего микроокружения в регуляции кроветворения при стрессе // Механизмы патологических реакций. Омск, 1988. - С. 12-14.

62. Гольдберг Е.Д., Дыгай A.M., Шерстобоев Е.Ю. Механизмы локальной регуляции кроветворения. Изд-во STT, Томск, 2000. - 147 с.

63. Гольдберг Д.И., Запускалов В.И. Механизмы острой лейкоцитарной реакции. — Томск, 1957. 150 с.

64. Гольдберг Е.Д., Карпова Г.В., Далингер Л.М'. и др. Реакции системы крови при введении* нового противоопухолевого препарата фопурина // Вопросы радиобиологии и биологического действия цитостатических препаратов. Томск: Изд-во ТГУ, 1978. - С. 15-21.

65. Горбачева Л.Б., Горьков В.А., Чернов В.А., Шнятая O.K. Химиотерапия злокачественных новообразований // Итоги науки и техники. ВИНИТИ. Сер. Онкология. 1982. - Т. 12. - 320 с.

66. Горбунова В.А. Фармарубицин в клинической практике // Современная онкология.-2005.-Том 7. № 2. - С. 28-35.

67. Горизонтов П.Д., Белоусова О.И., Федотова М.И. Лучевое поражение и восстановление кроветворения / Восстановительные и компенсаторные процессы при лучевых поражениях. Л., 1982. - 50 с.

68. Горизонтов П.Д., Белоусова О^И., Федотова М.И. Стресс и система крови / АМН СССР. -М.': Медицина, 1983. 240 с.

69. Губина H.A., Морщакова Е.Ф. // Молекулярные аспекты регуляции эри-тропоэза / Под ред. А.Д. Павлова. Рязань, 1974.— С. 119-125.

70. Гублер Е.В. Вычислительные методы анализа и распознавания патологических процессов. Л.: Медицина, 1978. - 193 с.

71. Гудцова К.В., Кукушкина Г.В., Горбачева Л.Б. и др. Противоопухолевая активность и механизм действия нового препарата из класса алкилнитро-зомочевины // Химико-фармацевтический журнал. М., 1991. - № 9. - С. 10-15.

72. Давыдов М.И., Барышников А.Ю. Экспериментальная онкология на рубеже веков. — Москва, 2003. 552 с.

73. Девойно Л.В., Идова Г.В., Альперина Е.Л. и др. Нейромедиаторные системы мозга в модуляции иммунной реакции (дофамин, серотонин, ГАМК) // Нейроиммунология. 2005. - Т. 3. - № 1. - С. 11-18.

74. Девойно Л.В., Ильюченок Р.Ю. Нейромедиаторные системы в психоим-мунномодуляции: допамин, серотонин, ГАМК, нейропептиды. Новосибирск, изд-во ЦЭРИС, 1993. - 240 с.280

75. Дедова Л.С.,.Гримберг Л.Г. Костномозговое кроветворение при однократном; введении массивных доз циклофосфана в эксперименте // Биологическое действие цитостатических препаратов. Томск: Изд-во ТТУ, 1968.-С. 35-41

76. Дыгай А.М;,. Жданов В.В.,. Богдашин И:В., Гольдбёрг Е.Д. Роль гемопо-эзиндуцирующего микроокружения в механизмах регенерации кроветворения: после цитостатического: воздействия // Биологические науки. -1992.-№9.-С. 109-116.

77. Дыгай А.М- , Жданов. В.В., Масычева-В.-И; и др. Темостимулирующие свойства рекомбинантного колониестимулирующего фактора и глицирама в условиях цитостатической миелосупрессии // Эксперим. и.клин, фармакология. 1999. - Т. 62. - № 1. - С. 34-37.

78. Дыгай А.М., Жданов В.В., Минакова М.Ю., Гольдбёрг Е.Д; Участие гуморальных факторов в регуляции кроветворения при цитостатических мие-лосупрессиях // Бюл. эксперим. биол. и мед. 1997. - Т. 124. - № 8 - С. 161-165.

79. Дыгай A.M., Жданов В.В., Хлусов И.А. и др. О регулирующем влиянии гемопоэзиндуцирующего микроокружения на процессы кроветворения при действии цитостатических препаратов // Гематол. и трансфузиол. — 1995.-Т. 40.-№5.-С. 11-15.

80. Дыгай A.M., Клименко H.A. Воспаление и гемопоэз. Томск: Изд-во ТГУ, 1992.-276 с.

81. Дыгай A.M., Колокольцева Т.Д., Костина Н.Е. и др. Гемостимулирующие свойства таблетированной формы рекомбинантного эритропоэтина человека в эксперименте // Эксперим. и клинич. фармакология. 2000. - Том 63, - № 5. - С. 37-40.

82. Дыгай А.М:, Шахов В.П. Роль межклеточных взаимодействий в регуляции гемопоэза. Томск: Изд-во ТГУ, 1989. - 224 с.

83. Дыгай A.M., Шахов В.П., Кириенкова Е.В. и др. Роль глюкокортикоидов в развитии феномена стимуляции костномозгового кроветворения при стрессе / // Биологические науки. 1990. - № 12. - С. 71-76.

84. Дыгай A.M., Шерстобоев Е.Ю., Гольдберг Е.Д. Роль SC-1+ и Thy-1+ клеток в регуляции продукции цитокинов клетками костного мозга, регенерирующего после цитостатического воздействия // Бюлл. эксперим. биол. и мед. 1998. - № 4 - С. 374-377.

85. Евтушенко О.М. Влияние антибиотиков антрациклинового ряда на поглотительную способность клеток системы мононуклеарных фагоцитов // Актуальные проблемы фармакологии и поиска новых лекарственных препаратов. Томск, 1992. - С. 12-16.

86. Евтушенко О.М., Жданов В.В. Состояние секреторной и цитотоксической активности клеток системы мононуклеарных фагоцитов под действием адриамицина // Актуальные проблемы фармакологии и поиска новых лекарственных препаратов. Томск, 1992. - С. 16-19.

87. Жданов В.В. Роль гемопоэзиндуцирующего микроокружения в регуляции* кроветворения при гемодепрессии, вызванной введением адриамицина: дисс. . канд.мед.наук. Томск, 1990. - 173 с.

88. Жданов» В.В., Аксиненко С.Г., Дыгай A.M., Гольдберг Е.Д. Роль Thyl,2+-клеток в регуляции кроветворения при цитостатических гемодепрессиях // Бюл. эксперим. биол. и мед. 1998. - Т. 125. - № 5. - С. 509-513.

89. Жданов В.В., Гольдберг В.Е., Хричкова Т.Ю. и др. Гемостимулирую-щие свойства кропанола при цитостатической миелосупрессии // Эксперим. и клинич. фармакология. 2002. - Т. 65. - № 6. - С. 37-40.

90. Жданов В.В., Любавина П.А., Кириенкова Е.В. и др. О механизмах ге-мостимулирующего эффекта глицирама // Бюл. эксперим. биол. и мед. -1997. Т. 123. - № 5. - С. 555-559.

91. Жданов В.В., Масычева.В.И:, Минакова М.Ю. и др. Гемостимулирую- . щие свойства рекомбинантного колониестимулирующего фактора и глицирама в условиях цитостатической миелосупрессии // Эксперим. и клинич. фармакология. 1999. - Том- 63. - № 1. - С. 34-37.

92. Зайцев Г.Н. Математическая статистика в экспериментальной ботани-. ке. Л.: Наука, 1984. - 425 с.

93. Зайцев C.B., Ярыгин К.Н., Варфоломеев С.Д. Наркомания. Нейропеп-тид-морфиновые рецепторы. М.: Изд-во MFy, 1993, - С. 52-66.

94. Зак К.П., Грыцюк С.Н. Эритропоэтины в онкологии // Онкология. — Том 3. № 2-3. - 2001. - С. 107-110.

95. Закенфельд Г.К. К механизму иммуномодулирующего действия зимо-зана // Неспецифические стимуляторы в иммунотерапии опухолей. Рига, 1985.-С. 80-103.

96. Захаров Ю.М. Лекции по физиологии системы крови // Мед. вестник. -Челябинск, 1998. -№ 19. 152 с.

97. Захаров Ю.М. О роли нервной системы и ингибиторов кроветворения в его регуляции // Российский физиологический журн. им. И.М. Сеченова. -2004. Том 90. - № 8. - С. 987-1000.

98. Захаров Ю.М., Рассохин А.Г. Эритробластический островок М.: Медицина, 2002. - 280 с. илл.

99. Захаров Ю.М., Тишевская Н.В. Об особенностях ассоциации клеток моноцитарной, эритроидной и гранулоцитарной линий в кроветворной ткани // Медицинский академический журнал. 2003. - Том 3. - № 2. - С. 11-18.

100. Зидермане A.A. Механизм биологического действия фторированных производных пиримидина // Итоги науки и техники. ВИНИТИ. Сер. Онкология М., 1973. - Т.6. -С. 5-47.

101. Зидермане A.A. Фторпиримидины в химиотерапии опухолей. Рига: Зинатне, 1982.- 174 с.

102. Зидермане A.A., Дауварте А.Ж., Балоде Л.Л., Раудзепа Л.А. Воздействие однократного введения циклофосфана на гемопоэз крыс и мышей // Циклофосфан: Сборник статей. Рига: Зинатне, 1965. - С. 51-59.

103. Зингер Г.В., Михайлова Т.Н., Шубина Т.С. и др. Характеристика имму-нодепрессивных свойств фопурина // Вопросы радиобиологии и биологического действия цитостатических препаратов. Томск: Изд-во ТГУ, 1978.-С. 28-32

104. Идова Г.В:, Чейдо М.А., Жукова-Е.Н. и др. Влияние агониста серото-ниновых рецепторов 1-А-типа' 8-ОН-ДИАТ на иммунный ответ //Бюл. эксперим. биол. и мед. 2001. - Т. 132. - № 10.-С. 432-433.

105. Карпова Г.В., Евтушенко О.М:, Дунаева Н.Ю. Морфофункционалыюе состояние клеток СМФ после введения цитостатических противоопухолевых препаратов с различным механизмом;действия // Механизмы патологических реакций.-Иркутск, 1991.-С. 46-47^

106. Кинетические.аспекты гемопоэза / Под ред. Г.П. Козинца и Е.Д. Гольд-берга; -Томск: ИздгВо ТГУ, 1982. 311 с:

107. Князышн И.В., Цыган В.Н. Апоптоз в онкоурологии. СПб.: Наука-2007.-240 с.

108. Койфман Э;К. Дальнейшие наблюдения за изменениями костномозгового кроветворения при введении тио-ТЭФа в эксперименте // Биологическое действие цитостатических препаратов. Томск: Изд-во ТГУ, 1968. -С. 88-93.

109. Константинова М.М. Новые: поддерживающие средства (противорвот-ные, бисфосфонаты, колониестимулирующие факторы) // Практическая онкология; 2002. - ТомЗ.- № 4. - С. 310-319.

110. Корман Д.Б. Клиническое применение фторированных пиримидинов // Итоги науки и техники. ВИНИТИ. Сер; Онкология. М., 1973: - Т.6. - С. 47-414.

111. Кравченко И.М., Зидермане A.A., Зилбере A.M. Фторафур новое противоопухолевое средство // Экспериментальная и клиническая фармакотерапия. - Рига: Зинатне, 1970.-Вып. 1.-93-103.

112. Куценко С.А. Основы токсикологии // Российский биомедицинский журнал. 2003. - № 5. - С. 119.

113. Лакин Г.Ф. Биометрия. М., 1990. - 352 с.

114. Лазарева Д.Н. Влияние циклофосфана на поглотительную способность макрофагов // Лекарственные воздействия на воспалительные процессы, трофические и иммунные процессы. Уфа, 1980. - С. 14.

115. Ляховская И.Г., Лапотников В.А., Алмазов В.А., Русанов A.M. К механизму действия 6-меркаптопурина на лейкопоэз при остром лейкозе // Вопросы радиобиологии и биологического действия цитостатических препаратов. Томск: Изд-во ТГУ, 1977. - С. 86-90.

116. Макаров A.C. Костномозговое кроветворение у крыс при введении бен-зо-ТЭФа // Биологические действие цитостатических препаратов. Томск: Изд-во ТГУ, 1968. - С. 93-97.

117. Малайцев В.В., Богданова И.М., Сухих Г.Т. Современные представления о биологии стволовой клетки // Архив патологии. — 2002. Т. 64. — № 4.-С. 7-11.

118. Машковский М.Д. Лекарственные средства. 15-е изд., переработ., испр. и доп. - М.: «Новая волна», 2006. - 1206 с.

119. Маянский Д.И. Клетка Купфера и система мононуклеарных фагоцитов. -Новосибирск: Наука, 1981. 168 с.

120. Мелик-Гайказян Е.В. О роли лимфоцитов в регенерации гемопоэза при гипоплазиях кроветворения, вызванных цитостатическими препаратами: Автореф. дисс. канд. мед. наук. Томск, 1980. - 18 с.

121. Мендрина Г.И., Хлынин С.М., Кляйн Т.Ф. и др. Некоторые методы статистической обработки и анализ результатов научных исследований: Учебно-методическое пособие Томск: СибГМУ, 2004. - 62 с.

122. Михайлова Т.Н., Зингер Г.В., Шубина Т.С. и др. Клеточная кинетика в тимусе и селезенке мышей после введения фопурина // Вопросы радиобиологии и биологического действия цитостатических препаратов. — Томск: Изд-во ТГУ, 1987. С. 21-28.

123. Михайлова Т.Н., Зингер Г.В., Шубина T.G., Ломовицкая Н.С. Характеристика иммунодепрессивных свойств 5-фторурацила и фторафура // Вопросы радиобиологии и биологического действия цитостатических препаратов. Томск: Изд-во ТГУ, 1974. - С. 12-16.

124. Мороз Б.Б., Дешевой Ю.Б., Цыбанев O.A. Влияние карбоната лития на пострадиационное восстановление системы крови в эксперименте // Гематология и трансфузиология. 1986. - № 10. - С. 25-29.

125. Мосягина E.H., Владимирская Е.Б., Торубанова H.A. и др. Кинетика элементов крови. М.: Медицина, 1976. - 272 с.

126. Натан Д.Г., Зифф К.А. Регуляция кроветворения // Гематол. и трансфу-зиол. 1994. - Т. 39. - № 2. - С. 3-10.

127. Науменко О.И. Роль гемопоэтического микроокружения костного мозга в норме и при лейкозе // Эксперим. онкология. 1992. - Т. 14. - № 1. — С. 11-20.

128. Нефедов В.П., Нефедова В.В., Кононыхина B.C. и др. Влияние серото-нина на стволовые клетки костного мозга // Бюл. эксперим. биол. и мед. -1991.-Т. 112,- № 11.-С. 488-489.

129. Нефедова В.В., Инжеваткин Е.В., Нефедов В.П. Роль С2-рецепторов в реализации стимулирующего влияния серотонина на стволовые кроветворные клетки костного мозга // Бюл. эксперим. биол. и мед. 2002. - Т. 133.-№5.-С. 484-486.

130. Никулина Л.Б. Влияние актиномицина D, карминомицина и блеомици-на и их сочетанного применения с серотонином и зимозаном на функциональное состояние перитонеальных макрофагов // Антибиотики. 1978. -№ 6. - С. 543-547.

131. Нифонтова И.Н., Свинарева Д.А., Чертков И.Л. и др. Отдаленные последствия длительного применения гранулоцитарного колониестимули-рующего фактора у мышей // Бюл. эксперим. биол. и мед. 2008. — Том 145.-№5.-С. 568-573.

132. Новицкий В.В. Костномозговое кроветворение в эксперименте при введении 5- фторурацила // Вопросы радиобиологии и биологического действия цитостатических препаратов. Томск: Изд-во ТГУ, 1969. - С. 100103.

133. Новицкий В.В. Реакции системы крови при введении 5-фторурацила и фторафура в эксперименте: Автореф. дисс. . канд. мед. наук. Томск, 1971.-27 с.

134. Новицкий B.B. Картина крови при введении 6-меркаптопурина' в эксперименте // Вопросы радиобиологии и биологического действия цитоста-тических препаратов. Томск: Изд-во ТГУ, 1972. - С. 85-89.

135. Новицкий В.В., Фокин В.А., Гольдберг В.Е. Способ интегральной оценки.тоскического действия противоопухолевых препаратов на систему крови: Метод, рекомендации / Под ред. Е.Д. Гольдберга. М., 1990. - 24 с.

136. Новицкий Е.В. Состояние гомеостаза у больных раком легкого припротивоопухолевой терапии: Дисс.канд. мед. наук. Томск, 1996. 121 с.

137. Орел Н.Ф. Новые производные нитрозомочевины // Новые цитостатики в лечении злокачественных опухолей / Под ред. В.А. Горбуновой. — М.,1998. С. 25-39.

138. Павлов5 А.Д., Морщакова Е.Ф. Регуляция эритропоэза: Физиологические и клинические аспекты. М.: Медицина, 1987. - 272 с.

139. Переверзеев А.Е., Розанов Ю.М. Динамика пролиферативной активности клеток костного мозга у мышей в период супрессии и восстановлении гемопоэза^после введения животным 5-фторурацила // Цитология. — 1993. -Т. 35.-№ 10.-С. 44-51.

140. Переводчикова Н.И. Противоопухолевая химиотерапия. М.: Медицина, 1993.-223 с.

141. Переводчикова Н.И. Место химиотерапии в системе лечения онкологических больных и выбор терапевтической тактики // Современная онкология. 2001. - Том 3. - № 2. - С. 23-26.

142. Петров Р:В., Хаитов P.M., Манько.В.М., Михайлова A.A. Контроль и регуляция иммунного ответа. Л., 1981. - 132 с.

143. Плотников В.М. Система крови при введении 6-меркаптопурина, про-ксифеина и преднизолона в эксперименте // Вопросы радиобиологии и биологического действия цитостатических препаратов. — Томск: Изд-во ТГУ, 1977.-С. 68-79.

144. Плотников В:М., Дыгай A.M. О нарушении митотической активности клеток костного мозга при введении 6-меркаптопурина в эксперименте // Материалы теоретической и клинической медицины. — Томск: Изд-во ТГУ, 1975.-С. 188-191.

145. Подольцева Э:И. Колониестимулирующие факторы, в онкологии // Практическая онкология. Т. 1. - № 5. - 2001. - С. 21-23.

146. Преображенская М.Н., Мельник С .Я. Аналоги компонентов нуклеиновых кислот ингибиторы нуклеинового обмена / Итоги науки и техники. ВИНИТИ. Сер. биоорг. химия. - М., 1984. - 244 с.

147. Противоопухолевые препараты. Сборник научных трудов ВНИФИ /. Под ред. В.А. Чернова и Т.С. Сафоновой. М., 1984. - 190 с.

148. Проценко Л.Д., Булкина З.П. Химия и фармакология синтетических противоопухолевых препаратов. Киев: Наукова думка, 1985. - 268 с.

149. Птушкин В.В. Совершенствование методов поддерживающей терапии при проведении цитостатической терапии // Современная онкология. -2002. Т. 4. - № 2. - С. 28-30.

150. Птушкин В.В. Лечение и профилактика осложнений химиолучевой терапии у больных с лимфомами // Практическая онкология. — 2004. Т. 3,5. -С. 223-227.

151. Птушкин В.В. Гемопоэтические факторы роста: биологические основы функционирования и клиническое применение // Материалы Второй ежегодной Российской онкологической' конференции. — Москва,. 1998. — С. 324-330.

152. Ромашко О.О., Мороз Б.Б., Безин Г.И. К вопросу о стимулирующем и ингибирующем действии гидрокортизона на родоначальные кроветворные клетки //Проб, гематологии и переливания крови. — 1979. — Т. 24. — № 9. — С. 48-55.

153. Росс У. Биологические алкилируюгцие вещества: М.: Медицина, 1964: • -260 с.178:, Руководство по химиотерапии опухолевых заболеваний / Под ред. Н:И.

154. Симанина Е.В., Шерстобоев Е.Ю. Роль лимфокинов в регенерации костного мозга после цитостатического воздействия // Актуальные проблемы фармакологии и поиска новых лекарственных препаратов. Томск: Изд-во ТГУ, 1990. - Т. 4. - С. 135-137. .

155. Система цитокинов: Теоретические и клинические аспекты / Под ред. В.А. Козлова, C.B. Сенникова. Новосибирск: Наука, 2004. - 324 с.

156. Соловьев С.К. Интенсивная терапия ревматических заболеваний (лекция)// Русский Медицинский Журнал. 2004; - Т. 12. - № 20. - С. 58-61.

157. Судаков К.В., Захаров Ю.М. Функциональная система, определяющая оптимальный уровень эритроцитов в организме // Клин, медицина. 2002. -Т. 801-№4.-С. 4-11.

158. Суслов Н.И., Провалова Н.В., Скурихин Е.Г. и др. Некоторые аспектымеханизма действия адаптогенов //Актуальные проблемы фармакологии и поиска новых лекарственных препаратов. Томск, 1999. - Т. 10. - С. 94103.

159. Трентин Д.Д. Кроветворное микроокружение // Пробл. гематологии. -1982.-№7. С. 52-57.

160. Трубникова E.H. Состояние кроветворения у больных раком легкого в условиях химиотерапии тиофосфамидом и циклофосфаном: Автореф. дисс. . канд. мед. наук. Томск, 1974. - 17с.

161. Тупицин H.H. Роль рецептора цитокинов gp 130 в гемопоэзе // Современная онкология. 2001. - Том 3 - № 1. - С. 7-12.

162. Федоров H.A. Биологическое и клиническое значение циклических нуклеотидов. М.: Медицина, 1979. - 184 с.

163. Федорович Т.В., Филиппов Э.А. Сравнительная оценка действия сарко-лизина, асалея и асалина на кроветворение безопухолевых животных // Актуальные вопросы гематологии. Томск: Изд-во ТГУ, 1976. - С. 147— 150.

164. Филиппов Э.А., Плотников В.М. Система крови крыс на введение терапевтических доз азиприна и сарколизина // Вопросы радиобиологии и биологического действия цитостатических препаратов. Томск: Изд-во ТГУ, 1972. - С. 95-98.

165. Фрейдлин И.С. СМФ. М.: Медицина, 1999 - 608 с.

166. Фриденштейн А.Я., Лурия Е.А. Клеточные основы кроветворного микроокружения. М.: Медицина, 1980. - 213 с.

167. Хайсман Е.Б., Маликова Л.А., Арефолов В.В. Состояние периферических катехоламинергических систем в условиях фармакологической кор' 292 рекции; иммобилизационного стресса с помощью оксибутирата натрия //

168. Бюл. эксперим. биол. и мед. 1985:-№9i-С. 317-319.

169. Харкевич Д.Д. Фармакология. М.: Изд-во ГЭОТАР Медицина, 1999. ,661 с.

170. Шамбах X., Кнаппе Г., Карол В. Гормонотерапия. М.:Медицина, 1988.-416 с.

171. Шарф В.Г. Биотрансформация алкилнитрозомочевин // Химико-фармацевтический'журнал. 1989: - Т.23. -№10; - С. 1157-1172.

172. Шерстобоев Е.Ю. Влияние тимэктомии на продукцию монокинов прилипающей фракцией костномозговых клеток мышей при стресс-реакции //

173. Актуальные проблемы фармакологии и поиска новых лекарственных препаратов. Томск, 1992. - Т. 5. - С. 84-86.

174. Шерстобоев Е.Ю. Роль гуморальных факторов в регуляции грануломо-ноцитопоэза при экстремальных воздействиях: Дис. . канд. мед. наук. -Томск, 1992.-180 с. . .

175. Чейдо М.А. Включение дофаминергического механизма в реализацию иммуностимулирующего влияния вещества Р и его аналога//Бюл. эксперим, биол. и мед. -1997. Т. ^^

176. Черниговский В.Н., Шехтер C.IO. Ярошевский А.Я. Регуляция эритро-поэза.-Л., 1967.- 101 с.210; Черниговский В.II., Ярошевский А.Я: Вопросы нервной регуляции системы крови. М.: Медгиз, 1953. - 222 с.

177. Чертков И.Л., Гуревич O.A. Стволовая кроветворная клетка и ее микроокружение. М.: Медицина, 1984. - 238 с.

178. Чертков И.Л., Дризе Г1.И. Как обеспечивается поддержание кроветворной системы // Гематол. и трансфузиол. —1998. Т. 43 - № 4. - с. 3-10.

179. Удут Е.В. Коррекция анемического синдрома при миелоингибирующих воздействиях: Автореф. дисс. . докт. мед. наук. Томск, 2008. - 44 с.

180. Удут Е.В;, Жданов В.В-, Гурьянцева Л.А. и др. Роль гемопоэтических ростовых факторов в регенерации кроветворения при миелосупрессии, вызванной введением этопозида // Бюл. эксперим. биол. и мед. 2001. -Том 131.-№5-С. 512-516.

181. Удут Е.В., Жданов В.В., Гурьянцева Л.А. и др. Механизмы эритропоэз-стимулирующего действия экстракта шлемника байкальского // Эксперим. и клинич. фармакология. 2005. - Том 68. - № 4. - С. 43^-5.

182. Удут Е.В., Скурихин Е.Г., Жданов В;В. и: др. Механизмы действия стимуляторов эритропоэза в условиях миелосупрессии, вызванной введением 5-фторурацила // Российский биотерапевтический журнал. 2008: - Том: 7. -№1- С. 53.

183. Урбах В.Ю. Математическая статистика для биологов и медиков. -М.:

184. Изд-во АН СССР, 1963. 323 с.

185. Урбах В.Ю. Статистический анализ биологических медицинских исследований. -М.: Медицина, 1975. 295 с.

186. Ястребов А.П., Юшков Б.Г., Большаков В.Н. Регуляция гемопоэза при воздействии на организм экстремальных факторов. Свердловск, 1988. -152 с.

187. Эммануэль Н.М., Корман Д.Б., Островская JI.A. и др. Нитрозоалкилмо-чевины новый класс противоопухолевых препаратов. М.: Наука, 1978. -295 с.

188. Эпштейн О.И., Жданов В.В., Ставрова JI. А. и др. Гемостимулирую-щие свойства сверхмалых доз антител к эритропоэтину // Бюл. эксперим. биол. и мед. — 2001. — Прил. З.-С. 40-43.

189. Эпштейн О.И., Штарк М.Б., Дыгай А.М-. и др. Фармакология сверхмалых доз антител к эндогенным регуляторам функций. М.: Изд-во РАМН, 2005.-225 с.

190. Abels R.I. Recombinanat human erythropoietin in the treatment of the anaemia of cancer // Acta Haematol. 1992. - № 87. - Suppl. 1. - P. 4-11.

191. Abdul H.T.A., Turk J.L. Enhancement of interleukin-1 release in rats by treatment with bleomycin and adriamycin in vivo // Cancer Immunol. Immuno-ther. 1987. - Vol. 25. - P.245-249.

192. Adamson J.W., Popovic W.J., Brown J.E. Hormonal influences on erythroid colony growth in culture // In vitro aspects of erythropoieis / Ed. by M.J.Murphy. N.Y., 1978. - P. 95-99.

193. Afan A.M., Bpoome C.S., Nichools S.E. Bone marrow innervation regulates cellular retention in the murine haemopoietic system //Brit J. Haem. 1997. -№98.-P. 569-577.

194. Aguirre M.V., Juaristi J.A., Alba Alvarez M. et al. In vitro and in vivo studies of murine erythropoietic recovery after treatment with cyclophosphamide // Sangre (Bare). 1999. - Vol. 44. -№ 3. - P. 182-187.

195. Aquila H.L. Regulation of hematopoietic niches by sympathetic innervation // Bioassays. 2006. - Vol. 28. - № 7. - P. 687-691.

196. Allen T., Testa N. Cellular interactions in erythroblastic islands in long-term bone marrow culture? As studied by time-lapse video // Blood cells. — 1991. — Vol. 213.-№6.-P. 29—43.

197. Al-Hawary B.A., al-Saleh A.A. Cytogenetic effects of dacarbazine on mouse bone marrow cells in vivo // Mutat Res. 1989. - Vol. 223. - № 2. - P. 259266.

198. Armstrong N.A., Bolton E.J., Morris D.L. Study on the reduction of chemotherapy induced, neutropenia in mice using * glucosaminylmuramyl dipeptide // Arzneimittelforschung. 1999:-Vol. 49; - №8,-P: 716-720.

199. Athlin L., Domellof L., Norberg B. Effect of therapeutic concentrations of antracyclines on monocyte phagocytosis of yeast cells // Eur. G. Clin. Pharmacol. 1989. - Vol. 36.-№ 2.-P. 155-159.

200. Avalos B.R., Gasson J.C., Hedvat C. et al. Human granulocyte colony-stimulating factor: biologic activities and receptor characterization on hemato-. poietic cells and small cell lung cancer cell lines // Blood. 1990. - Vol. 75. -P. 851- 857.

201. Bagby G.CJr. Interleukin-1 and hematopoiesis // Blood. 1989. - № 3. - P. 152-161.

202. Balaji N., Nayah K. Effect of 5-fluorouracil on interleukin-2 expression // Biochem. and Biophys. Res. Commun. 1992. - Vol. 187. - № 1. - P. 305309.

203. Barrett-Lee P.J., Bailey N.P., O'Brien M:E., Wager E. Large-scale UK audit of blood transfusion requirements and • anaemia in patients receiving cytotoxic chemotherapy // Br. J. Cancer. 2000. - Vol. 82. -№. 1. - P. 93-97.

204. Barrios L.3 Poletti O.H. Effects of filgrastim on granulopoietic cells of mice pretreated with methotrexate // Biocell. 2005. - Vol. 29. - № 1. - P. 7-14.

205. Barzilai A., Zilkha-Falb R., Daily D. et al. The molecular mechanism of do-pamine-induced apoptosis: identification and characterization of genes that mediate dopamine toxicity // J. Neural Transm. Suppl. 2000. - № 60. - P. 59-76.

206. Basser R. The impact of thrombopoietin on clinical practice // Curr. Pharm. Des. 2002. - Vol. 8. - № 5. - P. 369-377.

207. Becker R., Ritter A., Eichhorn U. et al. Induction of DNK breaks and apoptosis in crosslink-hypertensitive V 79 cells by the cytostatic drug |3-D-glucosyl-ifosfamide mustard // British Journal of Cancer. 2002. - № 86. - P. 130-135.

208. Becker S., Groner B., Muller C.W. Three-dimensional structure of the Stat3beta homodimer bound to DNA // Nature. 1998. - Vol. 394. - № 6689. -P. 14-151.

209. Beutel G., Ganser A. Risks and benefits of erythropoiesis-stimulating agents in cancer management // Semin Hematol. 2007. - Vol. 44. - № 3. - P. 157— 165.

210. Belda-Injesta C., Perona R., Carpeno J.D. et al. Human Recombinant Erythropoietin Does Not Promote Cancer Growth in Presence of Functional Receptors Expressed in Cancer Cells // Cancer Biol Ther. 2007. - Vol. 6. -№. 10. -P. 1802-1810.

211. Bennet C.L., Smith T.J., Weeks J.C. et al. Use of hematopoietic colony-stimulating factors: the American society of clinical oncology survey // J.Clin.Oncol. 1996. - Vol. 14. - P. 2511-2520.

212. Bhanumathi P., Saleesh E.B., Vasudevan D.M. Modification of adryamy-cin/cyclophosphamide induced immune suppression by an aminothiol// Bio-chern. Arch: 1994. - Vol. 10. - N 2. - P. 11-116.

213. Birgegard G. rhErythropoietin in Cancer Supportive Treatment. New York, 1996.-P. 85-98.

214. Blau C.A., Neff T., Papayannopoulou T. The hematological effects of folate analogs: implications,for using the dihydrofolate reductase gene for in vivo selection // Hum: Gene Ther. 1996. - Vol. 7. - № 17. - P. 2069-2078.

215. Blazsek I., Liu X.H., Anjo A. et al. The hematon, a morphogenetic functional complex in mammalian bone marrow, involves erythroblastic islands and granulocytic cobblestones // Exp. Hematol. 1995: - Vol. 23. - № 4.- P. 309319.

216. Boranic M., Krizanac-Bengez L., Gabrilovac J. et al. Enkephalins in hema-topoiesis // Biomed. Pharmacother. 1997. - Vol. 51. - № 1. - P.29-37.

217. Bosing-Schneider R., Haug M. Role of cyclic AMP on differentiation of Tand B-lymphocytes during the immune induction // Cell. Immunology. 1976. -Vol. 27. — P.121-125.

218. Botnick L.E., Hannon E.C., Vigneull R., Hellman S. Differential effects of cytotoxic agents on hemopoietic progenitors // Cancer Res. 1981. - Vol. 41. -P. 2338-2342.

219. Brandt J.E., Bhalla K., Hoffman R. Effects of interleukin-3 and c-kit ligand on the survival of various classes of human hemopoietic progenitor cells // Blood. 1994.-Vol. 83.-№6.-P. 1507-1514.

220. Bravo-Cuellar A., Mathe G., Arbouys O.S. Injection intraperitoneale de 4-0-tetrahydropyranyl-adriamycine provoque activation des macrophages perito-neaus cher la souris // Bull. Cancer. 1989. - Vol. 76. - № 5. - P. 501.

221. Broome C.S., Miyan J.A. Neuropeptide control of bone marrow neutrophil production. A key axis for neuroimmunomodulation // Ann. N. Y. Acad. Sci. -2000. № 917. - P. 424-434.

222. Brown J.E., Adamson J.W. Modulation of in vitro erythropoiesis: enhancement of erythroid colony growth by cyclic nucleotides //Cell Tiss. Kinet. -1977. Vol. 10. - P. 289-298.

223. Brunson M.E., Alexander J.W. Mechanisms of transfusion-induced immunosuppression // Transfusion. 1990. - Vol. 30. - № 7. - P. 651-658.

224. Buck C.A., Horwitz A.F. Integrin, a transmembrane glycoprotein complex mediating cell-substratum adhesion // J. Cell Sci. Suppl. 1987. - № 8. - P. 231-250.

225. Bussolino F., Bocchietto E., Silvagno F. et al. Actions of molecules which regulate hemopoiesis on endothelial cells: memoirs of common ancestors // Pathol. Res. Pract. 1994. - Vol. 190. -№ 9-10. - P. 834-839.

226. Campbell A.D., Wicha M.S. Extracellular matrix and the hematopoietic mi. croenvironment//L Lab:,Clin; Med; 1988: -№112; - P,1.140-146: .

227. Carde P. Inhibitors of hematopoiesis:. from physiology to therapy // Bull. Acad: Natl. Med: 1994. - Vol. 178. №5.-P. 793-803.

228. Carey P.J. Drug-induced myelosuppresion: diagnosis and management // Drug Saf. 2003. - Vol. 26. - № 10. - P. 691-706.

229. Cerami A., Warren K.S. CNS effect of epoetin-alfa // 11th Intern Congr AntiCancer treat. Abstr., Paris. - 2001. - P. 165.

230. Chapel A., Bertho J.M., Bensidhoum M. et al. Mesenchymal stem cells home to injured tissues when co-infused with hematopoietic cells to treat a radiation-induced multi-organ failure syndrome // J- Gene-Med:- 2003*; Vol. 5. -№ 12.-P. 1028-1038.

231. Cham V., Saidman B., Ben-Jacob A. et al. A randomized, open-label, multicenter trial of immediate versus delayed intervention with darbepoetin alfa for chemotherapy-induced anemia // Oncologist. 2007. - Vol. 12. - № 10. - P. 1253-1263.

232. Chatelain C., Hamood M., De Bast M., Symann M. Cholinergic enhancement of megakaryocytopoiesis and granulocytopoiesis in culture: mediation via T-lymphocytes // Exp. Hematol. 1989. - Vol. 17. - № 11. - P. 1067-1071.

233. Chen C.S., Jounaidi Y., Su T., Waxman D.J. Enhancement of intratumoral cyclophosphamide pharmacokinetics and antitumar activity in a P450 2B11-based cancer gene therapy model // Cancer Gene Ther. 2007. - Vol. 14. - №. 12.-P. 935-944.

234. Cilloni D., Carto-Stella C., Falzetti F. et al. Limited engraftment capacity of bone marrow-derived mesenchymal cells following T-cell-depleted hematopoietic stem cell translation // Blood. Vol. 96. - № 10. - P. 3637-3643.

235. Cioca D.P., Watanabe N., Isobe M. Apoptosis of peripheral blood lympho- . cytes is induced by catecholamines // Jpn. Heart J. 2000. - Vol. 41. - № 3. -P. 385-398.

236. Clark B.R., Gallagher J.T., Dexter T.M. Cell adhesion in the stromal regulation of haemopoiesis // Baillieres Clin. Haematol. 1992. - Vol. 5. - № 3. - P. 619-652.

237. Clark B.R., Keating A. Biology of bone marrow stroma // Ann. N.Y. Acad. Sci. 1995. - № 770. - P. 70-78.

238. Cline M.J., Hackell C.M. Cancer chemotherapy. Phyladelphia: W. Saun-der. comp.- 1980.-278 p.

239. Cohen J. Thymus derived lymphocytes seguestered in the bone marrow of hydrocortisone treated mice // J. Immunology. 1972. - Vol. 108. - P. 841— 844.

240. Cohen G.I., Greenberger J.S., Canellos G.P. Effect of chemotherapy and irradiation on interactions between stromal and hemopoietic cells in vitro // Scanning Electron Microsc. 1982. - № 1. - P. 359-365.

241. Colombo C., Cosentino M., Marino F. et al. Dopaminergic modulation of apoptosis in human peripheral blood mononuclear cells: possible relevance for Parkinson's disease // Ann N Y Acad Sci. 2003. - № 1010. - P. 679-682.

242. Consolo F., Princi P. Richerche sperimentall sull'azione dei corticoidi e dell'acth sulla attivite midollare hormale // Boll. Boc. Ital. Biol. Sperim. 1960. - Vol. 36. - № 10. - P. 531-534.

243. Cook P.A., Page P.L., Greenberg H.M. et al. Recovery of hematopoietic stem cells in mouse bone marrow after depletion by chemotherapy // Blood. -1977.-Vol. 50.-P. 143.

244. Covas M.J., Pinto L.A., Victorino R.M. Disturbed immunoregulatory properties of the neuropeptide substance P on lymphocyte proliferation in HIV infection // Clin. Exp. Immunol. 1994. - Vol. 96. - № 3. - P. 384-388.

245. Cowling G.J., Dexter T.M. Apoptosis in the haemopoietic system // Philos. -Trans. R. Soc. Lond. B. Biol. Sci. 1994. - Vol. 345 -№ 1313. - P. 257-263.

246. Crocker P., Gordon S. Isolation and characterization of resident stromal macrophages and hematopoietic cell clasters from mouse bone marrow // J. Exp. Med. 1985. - Vol. 162. - № 9. - P. 993-1014.

247. Crook T.R., Souhami R.L., McLean A.E. Cytotoxicity, DNA cross-linking, and single strand breaks induced by activated cyclophosphamide and acrolein in human leukemia cells // Cancer Res. 1986. - Vol. 46. - № 10. - P. 50295034.

248. Cross M.A., Heyworth C.M., Dexter TM. How do stem cells decide what to do // Ciba Found Symp. 1997. - № 204. - P: 3-14.

249. Dal-Zotto S., Marti Oi, Armario A. Glucocorticoids are involved in the long-term effects of a single immobilization stress on the hypothalamic-pituitaiy-adrenal axis // Psychoneuroendocrinology. 2003. - Vol. 28. - № 8. - P. 9921009.

250. Danenberg P.V., Shealuke C.C., Danenberg K. Effect of 5-fluoracil substitution on the self-splicing activity of tetrahymena ribosomal RNA // Cancer Res. 1990. - Vol. 50. - № 6. - P. 1757-1763

251. De Filippi R., Cucchiara G., Prete S.P. et al. Immuno-chemotherapy of advanced colorectal cancer with alpha-2a interferon and 5-fluorouracil. Immuno-pharmacological studies // Ann. Oncol. 1991. - Vol. Z - № 10: - P. 759-764.

252. Deimann W., Strobel E. Activated macrophages induce hemopoietic islands in the adult rat liver // Blood cells. 1991. - Vol. 17. - № 1. - P. 97-103.

253. Delmonte L. Effect of myleran on murine hemopoiesis. I. Granulocytic cell line specifity of action on progenitor cells // Cell Tissue Kinet. 1978. - Vol. 11.-№4.-P. 347-358.

254. Demetri G.D. Targeted approaches for the treatment of thrombocytopenia // Oncologist. -2001. -№ 6. P. 15-23.

255. DePace D.M., Weber R.H. Human P40 T cell growth (interleukin-9) supports erythroid colony formation //Acta Anatomica. 1974. - № 93. - P. 1-18.

256. Depelchin A., Letesson J J. Adrenaline influence on the immune response. II. Its effects through action on the suppressor T cells // Immunol. Lett. 1981. -Vol. 3.-P. 207-213.

257. De Wit R;, Verweij-J., Bontenbal M. et al. Adverse effect on bone marrow protection; of prechemotherapy granulocyte colony-stimulating factor support // J.Natl. Cancer Inst. 1996.-Vol. 88.-№19.-P. 1393 1398.

258. Dexter T.M:, Coutinho E.H;, Spooncer E; et al: Stromal? cells, imhaemopoi-esis in:: Molecular Control of Haemopoiesis // Ciba Found*: Symp. Wiley, Chichester, 1990.-Vol: 148.-P. 76-95.

259. Domaratskaia E.I:, Starostin V.I., Prianishnikova O.D. The effect5 of 5-fluorouracil on the clonogenic hemapoietic cells (CFU-S) of embryonic and sexually mature mice // Izv. Akad. Ser. Biol. 1995. - № 4. - P. 398-402.

260. Doiron A.L., Kirkpatrick A.P., Rinker K.D. TGF-beta and TNF-a affect cell surface: proteoglycan and! sialic acid expression on vascular endothelial cells // Biomed: Sci: Instrum. — 2004. — Vol: 40; Pi: 331-336:

261. Dorshkind K. Regulation on hemopoiesis by bone marrow stromal cells and their products// Annu. Rev. Immunol. 1990. - № 8: - P. 111-137.

262. Dunleavy K., Hakim F., Kim H.K. et al. B-cell recovery following rituxi-mab-based therapy is associated with perturbations in stromal derived factor-1 and granulocyte homeostasis // Blood. 2005. - Vol. 106. - № 3. - P. 795-802.

263. Dygai A.M., Khlusov I.A., Udut V.V. et al. Regulating effect of sympathetic-system on hemopoiesis suppressed by cytostatic drugs // Pathophysiology. 1997.-Vol. 4.-P. 175-181.

264. Eaves A.C., Bruce W.R. Altered sensitivity of hematopoietic stem cells to 5-fluouroracil following endotoxin, cyclophosphamide or irradiation // Cancer Chematherr. Rep. 1974. - Vol. 58. - P. 813-820.

265. Ebbe S., Yee T., Phalen E. 5-Fluorouracil induced thrombocytosis in mice is independent of the spleen and can be partially reproduced by repeated doses of cytosine arabinoside // Exp. Hematol. - 1989. - Vol. 17. - № 7. - P. 822826.

266. Egli R., Keller H.M. Erythropoietic effect of 11-dehydrocorticosterone // Acta Haematol. 1958. - Vol. 20. - № 6. - P. 356-368.

267. Egrie J.C., Dwyer E., Browne J.K. et al. Darbepoetin alfa has a longer circulating half-life and greater in vivo potency than recombinant human erythropoietin // Exp. Hematol. 2003. - Vol. 31. - P. 290-299.

268. Ehmer B., Roshan J.Y., Mocks J., Franke W. rh Erytropoietin in cancer Supportive Treatment. New York, 1996. - P. 159-174.

269. El Alaoui S., Lawry J., Griffin M. The cell cycle and induction of apoptosis in a hamster fibrosarcoma cell line treated with anti-cancer drugs: its importance to solid tumour chemotherapy // J. Neurooncol. 1997. - Vol. 31. - № 1-2.-P. 195-207.

270. Emerson S.G., Antin J.H. Bone marrow progenitor cells induce a regulatory autologous proliferative T lymphocyte response // J. Immunol. 1989. - Vol. 142. -№3.-P: 766-772.

271. Erslev A.J. Erythropoietin // Leukemia Research. 1990. - Vol. 14. - № 8.-P. 683-688.

272. Faucher C., le Corroler A.G., Blaise D. et al. Comparison of G-CSF primed peripheral blood progenitor cells and bone marrow auto transplantation: clinical assessment and cost effectiveness // Bone Marrow Transplant. 1994. - Vol. 14.-P. 895-901.

273. Fauci A.S., Dale D.C. The effect of in vivo hydrocortisone on subpopulations of human lymphocytes // J. Clin. Invest. 1974. - Vol. 53. - № 1. - P. 240-246.

274. Feldman S., Rachmilewitz E.A., Izak G. The effect of central nervous system stimulation on erythropoiesis in rats with chronically implanted electrodes // J. Lab. a. Clin. Med. 1966. - Vol. 67. - P. 713-725.

275. Fibbe W.E., Van Damme J., Billiau A. et al. Human fibroblasts produce granulocyte-CSF, macrophage-CSF and granulocyte-macrophage-CSF following stimulation by interleukin-1 and poly(rl), poly (rC) // Blood. 1988. - № 72. - 860-866.

276. Filshie R.J. Cytokines in haemopoietic progenitor mobilisation for peripheral blood stem cell transplantation // Curr. Pharm. Des. 2002. - Vol. 8. - № 5. — P. 379-394.

277. Fink G.D., Fisher J.W. Erythropoietin production after renal denervation or beta-adrenergic blockade // Amer. J. Physiol. 1976. - Vol. 230. - P. 508-513.

278. Fisher J.W., Crook J.J. Influence of several hormones on erythropoiesis and oxygen consumption in the hypophysectomized rat // Blood. 1962. - № 19. — P. 557-565.

279. Fleicsher I., Wainstein R., Milano M.C. 5-Fluourouracil en at las doses. Fundamentas y toxicidad // Acta gastroenterol. Latinoanur. 1985. - № 3. - P. 165-170

280. Fried W., Barone J. Residual marrow damage following therapy with cyclo-phospahamide // Exp. Hematol. 1980. - № 8. - P. 610-614.

281. Fried W., Adler S. Late effects of chemotherapy on hematopoietic progenitor cells // Exp. Hematol. 1985. - № 13. - Suppl 16. - P. 49-56.

282. Friedenstein A.J., Chailakhyan R.K., Latsinik N.V. et al. Stromal cells responsible for transferring the microenvironment of the hemopoietic tissues // Transplantation. 1974. - № 17. - P. 331-340.

283. Friendel E., Dumenil D., Sainteny F. Role of pluripoietic in murine bone marrow stem cell differentiation // Leuk. Res. 1980. - № 4. - P. 287-299.

284. Fruhman G.J., Gordon A.S. Effects of growth hormone and Cortisol upon hemopoiesis // Acta haematol. 1956. - Vol. 15. - №. 4. - P. 249-262.

285. Gabrivole J. Overview: erythropoiesis, anemia and the impact of erythropoietin // Semin. Hematol. 2000. - Vol. 37. - №. 4. - Suppl. 6. - P. 1-3.

286. Gallagher J.T., Spooncer E., Dexter T.M. Role of the cellular matrix in haematopoiesis. I. Synthesis of glycosaminoglycans by mouse bone marrow cell cultures // J. Cell Sci. 1983. -№ 63. - P. 155-171.

287. Ganser A., Heil G. Use of hematopoietic growth factors in the treatment of acute myelogenous leukemia // Curr. Opin. Hematol. 1997. - Vol. 4. - N 3. -P: 191-195.

288. Gardner R.V., Begue R., McKinnon E. The effect of granulocyte-macrophage colony-stimulating factor (GM-CSF) on primitive hematopoietic stem cell (PHSC) function and numbers after chemotherapy // Exp. Hematol. — 2001.-Vol. 29.-№9.-P. 1053-1059.

289. Geissler K. Therapeutic potential of thrombopoietin // Wien. Kli. Wochenschr. 2000. - Vol. 112. - № 19. - P. 829-834.

290. Gervais V., Zerial A., Oschkinat H. NMR investigations of the role of the sugar moiety in glycosylated recombinant human granulocyte-colony-stimulating factor // Eur. J. Biochem. 1997. - Vol. 247. - P. 386-395.

291. Gibson L.F., Fortney J., Landreth K.S. et al. Disruption of bone marrow stromal cell function by etoposide // Biol. Blood Marrow Transplant. 1997. - № 3 -P. 122-132.

292. Glader B.E., Rambach W.A., Alt H.L. Observations on the effect of testosterone and hydrocortisone on erythropoiesis // Ann. NY Acad. Sci. 1968. -Vol. 149. -№ l.-P. 383-388.

293. Glaspy J.A. Hematopoietic management in oncology practice. Part 1 // Myeloid growth factors Oncology (Huntingt). 2003. - Vol. 17. - № 11. - P. 15931603

294. Golde D.W., Bersch N., Quan S.G. et al. Inhibition of murine granulopoiesis in vitro by dexamethazone // Am. J. Hematol. 1976. - № l.-P. 369-373.

295. Gordon M.Y. Extracellular matrix of the marrow microenvironment // Br. J. Haemat. 1988. - № 70. - P. 1-4.

296. Gordon M.Y., Ford A.M., Greaves M.F. Interactions of hematopoietic progenitor cells with extracellular matrix / In: The Hematopoietic Microenvironment. Johns Hopkins Univ. Press, Baltimore, 1993. - P. 152-174.

297. Gordon A.S., Mirand E.A., Zanjani E.D. Mechanisms of prednizolone action in erythropoiesis // Endocrinology. 1967. - Vol. 81. - № 2. - P. 363-368.

298. Greco F.A., Breton H.D. Effect of lithium carbonate on the neutropenia caused by chemotherapy: a preliminary clinical trial // Oncology. 1977. - Vol. 34.-P. 153-155.

299. Greenberger J.S. The hematopoietic microenvironment // Crit. Rev. Oncol. Hemat. 1991. - № 11. - P. 65-84.

300. Greenberg P.L., Van Kersen I., Mosney S. Cytotoxic effects of 1-b-D-arabinoside and 6-thioguanine on granulocyte progenitor cells // Cancer Res. -1976.-Vol. 36.-P. 4412^4417.

301. Gregoretti M.G., Gottardi D., Ghia P. et al. Characterization of bone marrow stromal cells from multiple myeloma // Leuk. Res. 1994. - Vol. 18. - № 9. -P. 675-682.

302. Groopman J.E., Itri L.M. Chemotherapy-induced anemia in adults: incidence and treatment // J. Natl. Cancer Inst. 1999. - Vol. 91. - №. 19. - P. 1616— 1634.

303. Guest I., Uetrecht J. Drugs toxic to the bone marrow that target the stromal cells // Immunopharmacology. 2000. - Vol. 46. - № 2. - P. 103-112.

304. Guo X., Goessl E., Jin G. et al. Cell cycle perturbation and acquired 5-fluorouracil chemoresistence // Anticancer Res. 2008. - Vol 28. - № 1A. - P. 9-14.

305. Hall N.R. Neurotransmitters and the immune system / In: Psychoneuroim-munology. — N. Y., 1981.-524 p.

306. Halvorsen S. Plasma erythropoietin levels following hypothalamic stimulation in the rabbit // Scand. J. Clin. Lab. Invest. 1961. - Vol. 13. - P. 564-575.

307. Halvorsen S. The central nervous system in regulatin of erythropoiesis // Acta Haemat. 1966. - Vol. 35. - P. 65-79.

308. Hardy C.L., Minguell J.J. Cellular interactions in hemopoietic progenitor cell homing: a review // Scanning Microsc. 1993. - Vol. 7. - № 1. - P: 333341.

309. Harrison D.E., Lerner C.P. Most primitive hemopoietic stem cells are stimulated to cycle rapidly after treatment with 5-fluorouracil // Blood. 1991. - Vol. 78.-№5.-P. 1237-1240.

310. Hauser S.P., Udupa K.B., Lipschitz D.A. Murine marrow stromal response to myelotoxic agents in vitro // Br. J. Haematol. 1996. - № 95. - P. 596-604.

311. Heidelberger C. Chemical carcinogenesis, chemotherapy, cancer's continuing core challenges. G.H. Clowes memorial lecture // Cancer Res. 1970. -Vol. 30.-P. 1549-1569.

312. Heil G., Hoelzer D., Sanz M.A. et al. Long-term survival data from a phase 3 study of Filgastrim as an adjunct to chemotherapy in adults with de novo acute myeloid leukemia // Leukemia. 2006. - Vol. 6. - № 3. - P. 404-409.

313. Hengstler J.G., Hengst A., Fuchs J. et al. Induction of DNA crosslinks and DNA strand lesions by cyclophosphamide after activation by cytochrome P450 2B1 //mutat. Res. 1997.-Vol. 373.-№ 2. - P. 215-223.

314. Hockel M., Schlenger K., Aral B. et al. Association between tumor hypoxia and malignant progression in advanced cancer of the uterine cervix // Cancer Res.-1996.-Vol. 56.-№ 19.-P. 4509-4515.

315. Hodgson G.S., Bradley T.R. Properties of haemopoietic stem cells surviving 5-fluourouracil treatment evidence for a pre-CFU-s cell // Nature. -1979: Vol. 281. - P. 381-382.

316. Hoglund M. Glycosylated and non-glycosylated recombinant human granulocyte colony-stimulating factor (rhG-CSF) what is the difference? // Med. Oncol.-1998.-Vol. 15.-P. 229-233.

317. Hoskins J., Butler J.S. RNA-Based 5-Fluroruracil Toxicity Requires the Pseudouridylation Activity of Cbf5p // Genetics. 2008. - Vol. 179. - № 1. -P. 323-330.

318. Hu X., Zuckerman K.S. Cloning and sequencing of an alternative splicing-derived c DNA variant of the GM-CSF receptor alpha subunit, which encodes a truncated protein // Am. J. Hematol. 1998. - Vol. 58. - № 2. - P. 145-147.

319. Huang S., Terstappen L.W. Formation of haematopoietic microenvironment and haematopoietic stem cells from single human bone marrow stem cells // Correction Nature. 1994. - № 368. - P. 664.

320. Huber S.A., Moraska A. Cytolytic T-lymphocytes and antibodies to myocytes in adriamycin-treated BALB/c mice. Evidence for immunity to drug -induced antigens // Am. J. Pathol. 1992. - Vol. 140. - № 1. - P. 233-242.

321. Humphreys J.M., Stringer R.E., Hart C.A., Edwards S.W. Effect of cytotoxic drugs on mature neutrophil function in the presence and absence of granuloche-macrophage colony-stimulating factor // Br. J. Haematol. 1993. - Vol. 84. -№2.-P. 316-321.

322. Idova G., Cheido M.5 Devoino L. Modulation of the immune response by changing neuromediator systems activity under stress // Int. J. Immunopharmac. 1997. - Vol. 19. - № 9-10. - P. 535-540.

323. Ikebuchi K., Wong G.G., Clark S.C. et al. Interleukin 6 enhancement of in-terleukin 3-dependent proliferation of multipotential hemopoietic progenitors // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1987. - Vol. 84. - № 24. - P. 9035-9039.

324. Imai S., Tokunaga Y., Maeda T. Calcitonin generelated peptide, substance P, and tyrosine hydroxylase-immunoreactive innervation of rat bone marrows //Orthop. Res. Jan.- 1997.-Vol. 15.-№1.-P. 133-140.

325. Inoue M., Yamada K., Ishida Y. et al. The inhibitory effect of circulating lymphocytes on granulopoiesis in human cyclic neutropenia in vitro // Tohoku J. Exp. Med. 1984. - Vol. 143. - № 2. - P. 213-220.

326. Iwasaki A., Inoue K., Hukuda S. Distribution of neuropeptide-containing nerve fibers in the synovium'and adjacent bone of the rat knee joint //Clin. Exp. Rheumatol. 1995. - Vol. 13. - № 2. - P. 173-178.

327. Jain K.K. Cutaneous vasculitis associated with granulocyte colony-stimulating factor // J. Am. Acad. Dermatol. 1994. - Vol. 31. - № 2. - P. 213-215.

328. Jelkmann W. Erythropoietin after a century of research: younger than ever // Eur J Haematol. 2007. - Vol. 78. -N. 3. - P. 183-205.

329. Johnson D., Montpetit M.L., Stocker P.J., Bennett E.S. The sialic acid component of the betal subunit modulates voltage-gated sodium channel function // J. Biol. Chem. 2004. - Vol. 279. - P. 44303^14310.

330. Johnston R.B. Monocytes and macrophages // New Engl. J. Med. 1988. -№388.-P. 747-752.

331. Jolivet J., Curt G.A., Clendeninn N.S. Antimetaboliters // Cancer Che-mather. Annu. 1982. - № 4. - P. 1-28.

332. Jolley G.M., Ormerod M.G. An improved method for measuring cross links in the DNA of mammalian cells. The effect of nitrogen' mustard // Biochem. Biophis. Acta. 1973. - Vol. 308. - P. 242-251.

333. Jones D.V., Ashby M., Vadhan-Raj S. et al. Recombinant human thrombopoietin clinical development // Stem Cells. 1998. - Vol. 16, Suppl. 2. - P. 199-206.

334. Josefsson E., Bergquist J., Ekman R., Tarkowski A. Catecholamines are synthesized by mouse lymphocytes and regulate function of these cells by induction of apoptosis // Immunology. 1996. - Vol. 88. - № 1. - P. 140-146.

335. Juarisiti J.A., Aguirre M.V., Todaro J.S. et al. Epo receptor, Bax and Bcl-x(L) expressions in murine erythropoiesis after cyclophosphamide treatment // Toxicology. 2007. - Vol. 231. - № 2-3. - P. 188-199.

336. Karger A.G. Hemopoietic growth factors and mononuclear phagocytes / Ed. By R.van Furth. Copyrigth, S. Karger A.G. P.O. Box, CH-4009 Basel (Switzerland), 1993-221 p.

337. Kato T., Matsumoto A., Ogami K et al. Native thrombopoietin: structure and function // Stem cells. 1998. - Vol. 16. - Suppl 2. - P. 11-19.

338. Kawahara M. Influence of granuloche colony-stimulating factor on bactericidal activities of macrophages and polymorphonuclear leukocytes // Kansen-shogaku Zasshi. 1993. -Vol. 67.-№ 11.-P. 1094-1100.

339. Keating A., Gordon M.Y. Hierarchical organization of hematopoietic microenvironments: role of proteoglycans // Leukemia. 1988. - Vol. 2. - № 11. - P. 766-769.

340. Kertesz Z., Vas V., Kiss. J. et al. In vitro expansion of long-term repopulat-ing hematopoietic stem cells in the presence of immobilized Jagged-1 and early acting cytokines // Cell Biol: Int. 2006. - Vol. 30. - № 5. - P. 401-405.

341. Kjellen L., Lindahl U. Proteoglycans: structures and interactions // A. Rev. Biochem:-1991.-№ 60.-P; 443-475.

342. Klamerth O.L. Abnormal base pairing under the influence of nitrogen mustard//FERS letters.-1973. Vol: 29: - P. 35-37

343. Klein G. The extracellular matrix of the hematopoietic microenvironment // Experientia:- 1995v-Vol. 51.-№ 9-10.-P. 914-926.

344. Klein G., Muller C.A., Tillet E. et al. Collagen type VI in the human bone marrow microenvironment: a strong cytoadhesive component // Blood. 1995. -Vol.86.-№ 5.-P. 1740-1748.

345. KleinermanE.S., Snyder J.S., Jaffe N. Influence of chemotherapy administration on monocyte activation by liposomal muramyl tripeptide phosphati-dylethanolamine in children with osteosarcoma // J. Clin. Oncol. 1991. - Vol. 9 ,— № 21 — P. 259—267.

346. Knuth A. Die Ghematherapic des Kolon-Und Rectumharzinoms // Ver-daungskrankheistein. 1990. - Vol. 8. - P. 148-154.

347. Kolset S.O., Gallagher J.T. Proteoglycans in haemopoietic cells // Biochim. Biophys. Acta. 1990. - Vol. 1032. - № 2-3. - Pi 191-211.

348. Konar D.B., Manchanda S.K. Role of hypothalamus in the phagocytic activity of the reticulo-endothelial system // Ind. J. Physiol: Pharmacol: 1970. -Vol; 14. - № 2. - P. 23-24.

349. Kondo S. Apoptosis by antitumor agents and other factors in relation to cell cycle checkpoints // J. Radiat. Res. 1995. - Vol. 36. - № 1. - P. 56-62.

350. Koury M.J., Bondurant M.C. Erythropoietin retards DNA breakdown and prevents programmed death in erythroid progenitor cells // Science. 1990. -Vol. 20.-№ 248.-P. 378-381.

351. Krantz S.B., Jacobson L.O. Erythropoietin and the regulation of erythro-poieisis. Chicago, 1970. - 330 p.

352. Kriegler A.B., Bernardo D., Verschoor S.M. Protection of murine bone marrow by dexamethasone during cytotoxic chemotherapy // Blood. 1994. - Vol. 83.- №1.-P. 65-71.

353. Kunewich J.P., Marsh J.C. Myelosuppressive effects of antioneoplastic drugs //Exp. Hematol. 1985. - № 16.-P. 106-116.

354. Lakshmi C., Deb C., Ray C, Ray M.R. Reduction of hematotoxicity and augmentation of antitumor efficacy of cyclophosphamide by dopamine // Neoplasma. 2005. - Vol. 52. - № 1. - p. 68-73.

355. Landman R.M., Burgisser E., Wesp M. et al. Beta-adrenergic receptors are different in subpopulations of human circulating lymphocytes // J. Recept. Res. 1984.-Vol. 4.-P. 37-50.

356. Lang P.A, Kempe D.S., Akel A. et al. Inhibition of erythrocyte "apoptosis" by catecholamines // Naunyn Schmiedebergs Arch. Pharmacol. 2005. - Vol. 372.-№3.-P. 228-235.

357. Laver J.H., Xu F., Barredo J.C., Abboud M.R. Effects of radiation and 4-hydroperoxycyclophosphamide on production of G- and GM-CSF by stromal cells // Bone marrow Transplant. 1992. - Vol. 10. - № 6. - P. 529-533.

358. Lee J.H., Park J.H., Yang M.H. The effect of cyclophosphamide on Fasmediated apoptosis // J. Korean Med. Sci. 1997. - Vol. 12. - № 3. - P. 185189.

359. Lenz H.J., Manno D.J., Danenberg K.D., Danenberg P.V. Incorporation of 5-fluorouracil into U2 and U6 snRNA inhibitis mRNA precursor splicing // J. Biol. Chem. 1994. - Vol. 269. - №50. - P. 31962-31968.

360. Lersa R.C., Mencoboni M., Bogloioglo G. et al. Leucovorin antagonizesthe effects of trimetrexate on mouse hemopoietic progenitors // Anticanceres. -1991.-Vol. 11. -№ 2. P. 613-616.

361. Li F., Danahy J. Utility of diffeatial leukocyte counts in cancer management //JAMA.- 1984.-Vol. 52. № 10. - P. 1312-1315.

362. Lissoni P., Malugani F., Bukovec R et al. Reduction of cisplatin-induced anemia by the pineal indole 5-methoxytryptamine in metastatic lung cancer patients //Neuro. Endicrinol. Lett. 2003. - Vol. 24. - № 1-2. - P. 83-85.

363. Littlewood T.J., Collins G.P. Granulocyte and erythropoietic stimulating proteins after high-dose chemotherapy for myeloma // Bone marrow transplant. -2007.-Vol. 40.-N. 12.-P. 1147-1155.

364. Littlewood T.J., Norteir J., Rapoport B. et al. Epoetin alfa corrects anemia and improves quality of life in patients with hematologic malignancies receiving non-platinum chemotherapy // Hematol Oncol. 2003. - Vol. 21. - N. 4. -P. 169-180.

365. Liu F., Poursine-Laurent J., Link D.C. Expression of the GrCSF receptor on hematopoietic progenitor cells is not required for their, mobilization by G-CSF // Blood. 2000. - Vol. 95. - № 10. - P. 3025-3031.

366. Long MiW.,:Dixit V.M.Thrombospondinfunctions as^ a cytoadhesion molecule: for human hematopoietic progenitor cells //Blood. 1990. - Vol. 75. - №' 12.-P. 2311-2318.

367. Lowley P.D., Orr D.R., Shah S.A. Reaction of alkylating mutagens and; carcinogens with nucleic acids N-3 of guanine as a site of alkylation by N-methyl-N-nitrosourea and dimethyl sulfate // Chem. Biol. Interact. 1972. - Vol. 4. -P. 431-434.

368. Macdougall: I.C., Padhi D:, Jang G. Pharmacology of darepoetin alfa // Nephrol Dial Transplant. 2007. - Vol. 22. - Suppl. 4. - P. 2-9

369. Maestroni C.J., Togni M., Covacci V. Norepinephrine protects-mice from acute lethal doses of carboplatin // Exp. Hematol. 1997. - Vol. 25. - № 6. - P. 491-494.

370. Malacrida S.A., Teixeira N.A., Queiroz M.L. Regulation of stress-induced' reduced myelopoiesis in rats // Int. J. Immunopharmacol. 1997. - Vol. 19. -№4.-P. 227-233*.

371. Malerba I., Casati S.~, Diodovich C. et al. Inhibition of CFU-E/BFU-E and CFU-GM colony growth by cyclophosphamide, 5-fluorouracil and taxol: development of a high-throghput in vitro method // Toxicol In Vitro. 2004. -Vol.18. -№3.- P. 293-300.

372. Marino F., Cosentino M:, Bombelli R. Measurement of catecholamines,, in mouse bone marrow by means of HPLC with electrochemical' detection //', Haematologica. 1997. - Vol. 82. - № 4. - P. 392-394.

373. Marino F., Cosentino M., Bombelli R. Endogenous catecholamine synthesis, metabolism storage, and uptake in human peripheral blood mononuclear cells // Exp. Hematol. Mar. 1999. - Vol. 27. - № 3. - P. 489-495.

374. Martin P., Bugat R., Pinon G. et al. 300 mg/ml carloplati'n, adriamycin, cyclophosphamide combination in advanced ovarian carcinoma: a feasibilitystudy // Cancer Chemather. And Pharmacol. 1989. - Vol. 23. - № 5. - P. 331-332.

375. Matulonis U. Efficacy of epoetin alfa on hematologic and quality of life measures in brast cancer patients // 11th Intern Congr Anti-Cancer treat. Abstr. -Paris, 2001.-P. 129-130.

376. McLeod D.L., Shreeve M.M., Axelrad A.A. Improved plasma culture system for production of erythrocytic colonies in vitro: quantitative assay method for CFU-E // Blood. 1974. - Vol. 44. -№ 4. - P. 517-534.

377. Mercuriali F. The role of human recombinant erythropoietin in oncologic surgery // Tumori. 1997. - Vol. 83, N. 4, Suppl. 2. - P. 16-19

378. Metcalf D. Cortisone action' on serum colony-stimulating factor and bone marrow in vitro colony-forming cells // Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 1969. -Vol. 132.-№ l.-P. 391-394.

379. Metcalf D. Hemopoietic growth factors. 1 // The Lancet. 1989. - Vol. 15. -P. 825-827.

380. Milano G., Etienne M.C. Evolution from pharmacokinetics to pharmacogenetics. The example of 5-fluouracil // Rev. Med. Intern. 1994. - Vol. 15. - № 4.-P. 287-291.

381. Milenkovic P., Stofanovic N., Govcic G., Lukic M. Regeneration of spleen colony-forming cells and granulocyte-monocyte progenitors in T-cell deprived mice treated with cyclophosphamide // Leukemia Research. 1987. - Vol. 11. -№ 12.-P. 1099-1103.

382. Miles K., Atwen S., Otten G. et al. Beta-adrenergic receptors on splenic lymphocytes from axotomized mice // Int. J. Immunopharm. 1984. - Vol. 6. - P. 171-177.

383. Miller M.L., Kasahara M. Observation on the innervation of human long bones // Anat. Rec. 1963. - Vol. 145. - P. 13-23.

384. Minami M., Saton M. Molecular biology of the opioid4receptors: structures, functions and distributions // Neurosci. Res. 1995. - Vol. 23. - № 2. - P. 121— 145.

385. Minich E., Ehrke M.J., Ishizuka M. Immunomodulation by antibiotics // Biol. Res. Cancer. 1985. - Vol. 3. - P. 71-93.

386. Mittelman M., Lessin L.S. Clinical application of recombinant erytropoietin in myelodisplasia // Hematol. Oncol. Clin. North. Am. 1994. - Vol. 8. - № 5. -P. 993-1009.

387. Miyauchi A., Hiramine C., Tanaka S., Hojo K. Differential effects of a single dose of cyclophosphamide on T cell subsets of the thymus and spleen in mice: flow cytofluorometry analysis // Tohoki. J. Exp. Med. 1990. - Vol. 162. - № 2. - P. 147-167.

388. Mizutani Y., Kamoi K., Ukimara O. et al. Synergistic cytotoxicity and apop-tosis of JTE-522, a selective cyclooxygenase-2 inhibitor, and 5-fluorouracil against bladder cancer // J. Urol. 2002. - Vol. 168. - № 6. - P. 2650-2654.

389. Mladenovic J., Adamson J.W. Adrenergic modulation of erythropoiesis: in vitro studies of colony-forming cells in normal and polycythemic man // Brit. J. Haemat. 1984. - Vol. 56. - P. 323-332.

390. Moora L., Ponassi A., Parodi G.B. et al. Mobilization of colony-forming cells (CFU-C) into the peripheral blood of man by hydrocortisone // Biomedi-cine.- 1981.-Vol. 35. № 3. - P. 87-90.

391. Moore M.A.S. Role of interleukin-1 in heamatopoiesis // Immunol. Res. -1989. Vol. 8 - № 3. - P. 165-175.

392. Morley A., Quesenberry P., Canity M. et al. Beta-adrenergic receptors on splenic lymphocytes from axotomized mice // Proc. Soc. Exp. Biol. Med. — 1971.-Vol. 138.-P. 57-59.

393. Morley A., Stolhman M. Cyclophosphamide-induced cyclical neutropenia // N.Engl. J. Med. 1970. - № 282. - P. 643-646.

394. Moulett I., Salles G., Ketterer N. et al. Frequency and significance of anemia in non-Hodgkin's lymphoma patients // Ann Oncol. 1998. - Vol. 9. - № 10. -P. 1109-1115.

395. Moynihan J., Cohen N. The kinetics of recovery of leukocyte number and lymphocyte function following an,injection of a single high dose of cyclophosphamide in C3H7HeJ mice // Int. J. Immunopharmacol. 1989. - Vol. 11. - №' 5.-P. 517-527.

396. Muta K., Krants S.B., Boundurant M.C., Wickrema A. Distrinct roles of erythropoietin, insulin like growth factor I, and stem cell factor in the-development of erythroid progenitor cells // Clin Inves. - 1994. - Vol. 94. - № 1. -P. 34^13.

397. Mytar B., Woloszyn M., Ruggiero I. et al. Monocyte-mediated regulation of antigen-driven IFN gamma production by T cells. The role of endogenously produced TNF // Immunol. Invest. 1995. - Vol. 24. - N 6. - P. 897-906.

398. Miyake K., Medina-K., Ishihara K. et al. A VCAM-like adhesion molecule on murine bone marrow stromal cells mediates binding of lymphocyte precursors in culture // J: Cell Biol. 1991. - Vol. 114. - № 3. - P. 557-565.

399. Nafissi S., Lederlin P., Witz F., Guerci A. Toxicate de la therapeutique par la cytosine arabinoside // Cancer Commun. 1990. - Vol. 4. - N 3. - P. 107-126.

400. Naito M. Macrophage heterogeneity in development and differentiation // Arch. Histol. Cytol. 1993. - Vol. 56. - № 4. - P. 331-351.

401. Nakano K., Hayashi H., Okugawa K. et al. Accelerated recovery of antigen-presenting cell activity by the administration of interleukin 1 alpha in 5-fluorouracil-treated mice // Cell Immunol. 1991. - Vol. 136. - № 1. - P. 234241.

402. Nathan C.F. Secretory products of macrophages // J. Clin. Invest. 1987. -№79.-P. 319-325.

403. Neben S., Hellman S., Montgomery M. et al. Hematopoietic stem cell deficit of transplanted bone marrow previously exposed to cytotoxic agents // Exp. Hematol". 1993. - Vol. 21. - № l.-P. 156-162.

404. Necas E., Sefc L., Znojil V. On control of the hematopoietic cell proliferation // Stem Cells. 1993. - Vol. 11. - № 4. - P. 319-325.

405. Nikkels P.G.J., de Jong J.P., Ploemacher R.E. Long-term effects of cytostatic agents on the hemopoietic stroma: a comparison of four different assays // Leuk. Res. 1987. - № 11. - P. 817-825.

406. Nip J., Strom D.K., Fee B.E. et al. E2F-1 cooperates with topoisomerase II inhibition and DNA damage to selectively augment p53-independent apoptosis // Mol Cell Biol. 1997. - Vol. 17. - № 3. - P. 1049-1056.

407. Nissen.C., Moser Y., Speck B. et al. Dexamethasone enhances 'CSA' release and depresses 'BPA' release and depresses 'BPA' release // Br. J. Haematol. 1983. - Vol. 53. -N 2. - P. 301-310.

408. Nowaczyk M., Pluta A., Modlinska M. et al. Immunosuppressive drugs inhibit class II synthesis by B and T lymphocytes // Arch. Immunol. Ther. Exp. -1990. Vol. 38. - № 5-6. - P. 415-419.

409. Ohnishi A., Ohsawa M., Yasunaga Y et al. Occurence of monocytoid B lymphocytes in lymph nodes of patients treated bychemotherapy // J. Surg. Oncol. -1996. Vol. 62. - № 4. - P. 245-248.

410. Ohtani T., Nakamura T., Toda K., Furukawa F. Cyclophosphamide enhances TNF-alpha-induced apoptotic cell death in murine vascular endothelial cell // FEBS Lett.-2006.-Vol. 580.-№6.-P. 1597-1600.

411. Ophir W., Berenshtein E., Ziltener H.J., Razin E. 5-fluourouracil and mast cell precursors in mice // Exp. Hematol. 1993. - Vol. 21. - № 12. - P. 15581562.

412. Patchen M.L., MacVittie T.J. Stimulated hemopoiesis and enhaced survival following glucan treatment in sublethaly and lethaly irradiated mice // Inst. J. Immunopharm. 1985. - Vol. 7. - P. 923-932.

413. Pellegrino T.C., Bayer B.M. Modulation of immune cell function following fluoxetine administration in rats // Brain Behav. Immunol. 2002. - Vol. 16. -P. 87-103.

414. Pessina A., Piccirillo M., Mineo E. et al. Role of SR-4987 stromal cells in the modulation of doxorubicin toxicity to in vitro granulocyte-macrophage progenitors (CFU-GM) // Life Sci. 1999. - Vol. 65. - № 5. - P. 13-23.

415. Peters C., O'Shea K.S., Campbell A.D. et al. Fetal expression of hemonectin: an extracellular matrix hematopoietic cytoadhesion molecule. // Blood. 1990. -№75.-P. 357-364.

416. Pfreundschuh M., Hartmann F., Jacobs G. et al. Cytosine arabinoside, idarubi-cin and divided dose etoposide for the treatment of acute myeloid leukemia in elderly patients / Leuk. Lymphoma. 2000. - Vol. 42. - № 3. - P. 347-355.

417. Piersma A.H., Brocklank K.G., Ploemacher R.E. et al. Characterization of fibroblast stromal cells from murine bone marrow // Exp. Hematol. 1985. -Vol. 13. - № 4. - P. 237-243.

418. Platzer E. Human hemopoietic growth factors // Eur. J. Haematol. 1989. -Vol. 42. - № l.-P. 1-15.

419. Podesta M., Frassoni F., Van Lint M.T. et al. Generation of CFU-c suppressor T cells in vitro. IV. Effect of time on the inhibitory activity of mitigen-primed normal T lymphocytes // Thymus. 1982. - Vol. 4. - № 4. - P. 233232.

420. Pogrebniak H.W., Matthews W., Pass H.I. Chemotherapy amplifies production of tumor necrosis factor // Surgery. 1991. - Vol. 110. - № 2. - P. 231237.

421. Poplin E., Thempson B., Whitacre M. Small cell carcinoma of the lung influence of age on the treatment outcome // Cancer Treat. Rep. 1987. - Vol. 71. -№ 3. - P. 291-296.

422. Pospisil M., Zakopalova I., Netikova J. The effect of hydrocortisone pretreat-ment upon eruthropoietic recovery after a single sublethal x-ray exposure of mice // Folia Biol. (Praha). 1972. - Vol. 18. - № 4. - P. 284-291.

423. Preisler, HID:, Henderson-E.S; Effects ofcytosine arabinoside and 1,3-bis (2-chloroethyl)-1 -nitrosourea on hematopoietic precursors- in- the mouse // J; Natl. Gancer Inst. 197K-Vol: 47:-P: 971-977.

424. Rameshwar P;vGascon PlSubstance^P (SP) mediates production of;stem:cell factor and interleukin-1 in bone marrow stroma // Blood. 1995. - Vol. 86 - № 2. - P. 482-490.

425. Reuss-Borst M.A., Buhring H.J., Klein G., Muller C.A. Adhesion molecules on CD34 + hematopoietic cells in normal human bone marrow and)leukemia // Ann. Hemat. 1992. - № 65. - P. 169-172.

426. Reynolds C.H. Clinical efficacy of rhIL-11 // Oncology. 2000. - Vol. 14. -№ 9. - Suppl. 8. - P. 32-40.

427. Rinehart J., Keville L., Measel J<. et alt Corticosteroid alteration of car-boplatin-induced hematopoietic toxicity in a murine model // Blood. 1995. -Vol. 15. - № 12. - P. 4493-4499

428. RizzoJ.D., Seidenfeld J., Piper M. et al. Erythropoietin: a paradigm for the development of practice guidelines // Hematology Am. Soc. Hematol. Educ. Program. 2001. - PI 10-30.

429. Rodel J.E., Link D.C. Suppression of apoptosis during*cytokine deprivation of 32 D cells is not sufficient to induce complete granulocytic differentiation // Blood. 1996. - Vol. 87. - № 3. - P. 858-864.

430. Rodrigues M.A., Hutchinson I.V., Morris P.J. Alloreactive T suppressor cells in the rat. I. Evidence of three distinct subsets of splenic suppressor T cells resistant to cyclosporine // Transplantation. 1989. - Vol. 47. - № 5. - P. 847852.

431. Rohde D., Wickenhauser C., Denecke S. et al. Cytokine release by human bone marrow cells, analysis at the single cell level // Virchose Arch. 1994 -Vol. 424. - № 4. - P. 389-395.

432. Rojas E, Herrera L.A., Sordo M., Gonsebatt M.E. et al. Mitotic index and cell proliferation kinetics for identification of antineoplastic activity // Anticancer Drugs. 1993. - Vol. 4. - № 6. - P. 637-640.

433. Roodman G.D., Spivak J.L., Zanjani E.D. Stimulation of erytroid colony formation in vitro by erythropoietin immobilized on agarose-bound lections // J. Lab. Clin. Med. 1981. - Vol. 98. - P. 684.

434. Rosenberg B. Fundamental studies with Cisplatin // Cancer. 1985. - № 55. -P. 2303-2316.

435. Rosendaal M., Dixon R., Panayi M. Haemopoietic stem cells: possibility of toxic effects of 5-fluorouracil on spleen colony formation // Blood Cells 1981. -Vol. 7. -№ 3. - P. 561-574.

436. Ross D.D., Chen S.S., Cuddy D.P. Effects of 1-ß-D-arabinofuranosylcytosine on DNA replication intermediates monitored by pH-step alkaline elution // Cancer Res. 1990. - Vol. 50. - № 9. - P. 2658-2666.

437. Rothstein G., Clarcson D.R., Larsen W. Effect of lithium on neutrophil mass and production // New Engl. J. Med. 1978. - Vol. 298. - P. 178-189.

438. Rojas E., Herrera L.A., Sordo M. et al. Mitotoxic index and cell1 proliferation kinetics for identification of antineoplastic activity // Anticancer Drugs. 1993. - Vol. 4.-№ 6. - P. 637-640.

439. Rubenstein M., Muchnik S., Chet M. et al. Efficacy of immunopriming prior to isolation of tumor infiltrating lymphocytes for use in adoptive immunotherapy // Immunopharmacol: Immunotoxicol. 1990. - Vol. 12. - № 4. - P. 583594.

440. Ruchatz H., Puttini M., Cleris L. et al. Effect of imatinib on haematopoietic recovery following idarubicin exposure // Leukemia. 2003. - Vol. 17. - № 2. -P. 298-304.

441. Ruef C., Coleman D.L. GM-CSF and G-CSF: cytokines in clinical application // Schweiz. Med. Wochenschr. 1991.-Vol. 12.-№ 12.-P. 397-412.

442. Ruoslahti E., GiancottrF.G. Integrinesand tumor cell dissemination // Cancer Cells. 1989.-Vol. 1. — № 4. - P. 119-126.

443. Saha B., Mondal A.C., Majumder J. et al. Physiological concentrations of dopamine inhibit the proliferation and*cytotoxicity of human CD4+ and CD8+ T cells in vitro: a receptor-mediated mechanism // Neuroimmunomodulation. — 2001. Vol.9:-№ 1.-P. 23-33.

444. Sefc L., Psenak O., Sykora V. et al. Response of hematopoiesis to cyclophosphamide follows highly specific patterns in bone marrow and spleen // J. Hematother. Stem Cell Res. 2003. - Vol. 12. - № 1. - p. 47-61.

445. Seredenin S.B., Blendov Iu. A., Badistov B.A., Shevchenko N.A. Drug dependence and emotional* behavior: neurophysiological and neurochemical approaches / Ed. A.V.Valdman. N.Y., Lond., 1986. - P. 49-77.

446. Setchenska M.S., Bonanou-Tzedaki S.A., Arnstein H.R.V. Classification of beta-adrenergic subtypes in immature rabbit bone marrow erythroblasts // Biochem. Pharmacol. 1986. - Vol. 35. - P. 3679-3684.

447. Scaltrini G.C., Conigliaro S. Action of prednisolone on normal bone marrow. Note 2 // Haematologica. 1959. - № 44. - P. 645-656.

448. Schofield K.P., Rushton G., Humphries M.J. et al. Influence of interleukin-3 and other growth factors on alpha4betal integrin-mediated adhesion and migration of human hematopoietic progenitor cells // Blood. 1997. - Vol. 90. - № 5.-P. 1858-1866.

449. Schofield R. The relationship between the spleen colony-forming cell and the haemopoietic stem cell // Blood cells. 1978. - Vol. 4. - № 1-2. - P. 7-25.

450. Schreml W., Lohrmann H.P., Anger B. Stem cell defects after cytoreductive therapy in man // Exp. Hematol. 1985. - Vol. 13. - Suppl. 16. - P. 31-42.

451. Scicchitano R., Biennenstock J.,' Stanisz A.M. In vivo immunomodulation by the neuropeptide substance P // Immunology. 1988. - Vol. 63. - № 4. - P. 733-735.

452. Siczkowski M., Andrew T., Amos S., Gordon M.Y. Hialuronic acid regulates the function and distribution of sulfated glycosaminoglycans in bone marrow stromal cultures // Exp. Hematol. 1993. - Vol. 21. - № 1. - P. 126-130.

453. Sieff C.A. Hematopoietic growth factors // J. Clin. Invest. 1987. - Vol. 79. - № 6. - P. 1549-1557.

454. Sieff C.A., Niemeyer C.M., Nathan D.G. et al. Stimulation of human hematopoietic colony formation by recombinant gibbon multi-colony-stimulating factor or interleukin 3 // J. Clin. Invest. 1987. - Vol. 80. - № 3. - P. 818-823.

455. Sieff C.A., Tsai S., Faller DV. Interleukin 1 induces cultured human endothelial cell production of granulocyte-macrophage colony-stimulating factor // J. Clin. Invest.- 1987.-Vol. 79.-N 1.-P. 48-51.

456. Siena S., Bregni M., Bonsi L. et al. Increase in peripheral blood megakaryocyte progenitors following cancer therapy with high-dose cyclophosphamide and hemopoietic growth factors // Exp. Hematol. 1993. - Vol. 21. - N 12. - P. 1583-1590.

457. Simmons P. Cellular interactions in vitro haemopoiesis / Thesis of Doctor of Phylosophy. Manchester, 1984. P. 230

458. Singer J.W., Keating A., Wight T.N. The human hematopoietic microenvironment. In: Recent Advances in Heamatology / Ed. A.V. Hofman. Churchill-livingstone, Inc., New York, 1985. P. 1-24.

459. Skillings J.R., Sridhar F.G., Wong C., Paddock L. The frequency of red cell transfusion for anemia in patients receiveing chemotherapy. A retrospective cohort study // Am. J. Clin. Oncol. 1993. - Vol. 16. - № 1. - P. 22-25.

460. Smith J.W. Tolerability and side-effect profile of rhIL-11 // Oncology. -2000. Vol. 14. - № 9. - Suppl. 8. - P. 41-47.

461. Sodhi A., Gupta P., Singh S.M. In vivo activation of murine peritoneal macrophages by intraperitoneal administration of cisplatin // Arch. Immunol. Et Ther. Exp. 1988. - Vol. 36. - № 3. - P. 303-314.

462. Sonneveld P, Mulder J, van Bekkum DW. Cytotoxicity of doxorubicin for normal hematopoietic and acute myeloid leukemia cells of the rat // Cancer Chemother Pharmacol. -1981. Vol. 5. -№ 3. - P. 167-173.

463. Sookhai S., Wang J.H., McCourt M. et al. Dopamine induces neutrophil apoptosis through a dopamine D-l receptor-independent mechanism // Surgery. 1999. - Vol. 126. - № 2. - P. 314-322.

464. Spooncer E., Gallagher J.T., Krizsa F., Dexter T.M. Regulation of haemopoiesis in long-term bone marrow cultures. IV. Glycosaminoglycan synthesis and the stimulation of haemopoiesis by beta-D-xylosides // J. Cell Biol. -1983.-Vol. 96.-№2.-P. 510-514.

465. Stasi R., Amadori S., Littlewood TJ. et al. Management of cancer-related anemia with erythropoietic agents: doubts, certainties, and concerns // Oncologist.-2005. Vol. 10. -№ 7. - P. 539-554.

466. Steward W.P., Scarfe J.N., Austin R. et al. Recombinant human-GM-CSF given as daily short infusion // BRIT. J. Cancer. 1989. - Vol. 59. - P. 142145.

467. Stewart F.M., Temeles D., Lowry P. Post-5-flourouracil human marrow stem cell characteristics and renewal properties after autologous marrow transplantation // Blood. 1993. - Vol. 81. - № 9. - P. 2283-2289.

468. Tanaka R., Koike K., Imai T., Shiohara M. et al. Stem cell factor enhances proliferation, but not maturation, of murine megakaryocytic progenitors in serum-free culture // Blood. 1992. - Vol. 80. - № 7. - P. 1743-1749.

469. Tang Y., Shancar R., Gamelli R. Dynamic norepinephrine alterations in bone marrow: evidence of functional innervation // J: Neuroimmunol; 1999. -Vol. 96, -№ 2.-P. 182-189.

470. Tavassoli M. Studies on hemoppoietic microenvironments // Exp. HematoL 1975. - Vol. 3. - P. 213-226. :

471. Teixido J., Hemler M.E., Greenberger J.S., Anklesaria P. Role of beta 1 and beta 2 integrines in the adhesion of human CD34hi stem cells to bone marrow stroma // J. Cli. Invest. 1992. - Vol. 90. - № 2. - P. 358-367.

472. Testa N.G., Schofied R., Eliason Y.E. Experimental hematology today / Eds. S.Y. Baum et al., Base et al. 1980. - P. 103-108.

473. Tewari S.P., Srivastava R.K., Verma P. Effect 5-fluorouracil on rat bone marrow// Indian J. Cancer. 1985. -№ 3. - P. 99-101.

474. Trentin J.J. Hemopoietic inductive microenvironment / Stem cells of renewing cell populations. -N.Y., 1976. P. 155-164.

475. Trillet-Lenoir V., Arpin D., Bruñe S. Optimal delivery of dose in cancer chemotherapy with the support of haemopoietic growth factors // Eur. J. Cancer -1993. Vol. 29A. - Suppl. 5. - P. 14-16.

476. Vadhan-Raj S. Recombinant human thrombopoietin; clinical experience and-in vivo biology // Semin Hematol: 1998. - Vol. 35. - № 3. - P: 261-268.

477. Valeriote F., Vietti-T., Edelstein M. Combined effect of cytosine arabinoside and'thiópurines // Cancer treat. Rep. 1976. - № 60. - P. 1925-1934."

478. Van Furth R. Phagocytic cells in the defense against infection: introduction' //Rev. Infect. Dis. 1980. - Vol. 2. - P. 104-105.

479. Van Zant G. Studies of hemopoietic stem cells spared by 5-fluoracil // J. exp. Med. 1984. - Vol. 159. - P. 679-690.

480. Vetvicka V., kincade P.W., Witte P.L. Effects of 5-fluorouracil on B lymphocyte lineage cells // J. Immunol. 1986. - Vol. 137. - № 8. - P. 24052410.

481. Vial T., Descotes J. Clinical toxicity of cytokines used as haemopoietic growth factors // Drug Saf. 1995. - Vol. 13. - № 6. - P. 371-406.

482. Wang S.Y., Hsu M.L., Su C.Y. et al. In vivo stimulation of myelopoiesis in cyclophosphamide treated mice by purified human GM-CSF // Chung Hua I HsuehTsa Chin. - 1991.-Vol. 43.-№ 3.-P. 171-176.

483. Wathen L.M., Degowin R.L., Gibson P., Knapp S.A. Residual injury to the hemopoitic microenvironment following sequential radiation and busulfan // Int.J.Radiat. Oncol. Biol. Phys. 1982. -№ 8. - P. 1315-1322.

484. Weihe E., Nohr D., Michel S. et al. Molecular anatomy of the neuro-immune connection // J. Neurosci. 1991. - Vol. 59. - P. 1—12.

485. Weinstein Y., Chambers D.A., Bourne H.R. et al. Cyclic GMP stimulates lymphocyte nucleic acid synthesis // Nature. 1974. - Vol. 251. - P. 352-353.

486. Weiss L. An electron microscopic study of the vascular sinuses of the bone marrow of the rabbit //Bull. J. H. Hosp. 1961. - Vol. 108.-P. 171-199.

487. Weiss L. Heamopoiesis in mammalian bone marrow / Microenvironments in haemopoietic and lymphoid differentiation. London, 1981. - P. 5-21.

488. Weiss L. The haemopoietic microenvironment of bone marrow: Ultrastructural study of the interaction of blood cells stroma and blood vessels / Blood cells and vessel wall: functional interaction. Amsterdam, 1986. - P. 3-19.

489. Wickramasinghe S.N. Human bone marrow. Oxford: Blackwell scientific publications, 1975. - 456 p.

490. Williams G., Smith C.A., Spooncer E. et al. Haemopoietic colony stimulating factors promote cell survival by suppressing apoptosis // Nature. 1990. -Vol. 343.-P. 76-79.

491. Winearls C.G. Recombinant human erythropoietin: 10 years of clinical experience // Nephrol Dial Transplant-. 1998. - Vol. 13. - Suppl. 2. - P. 3-8.

492. Wlodarski P., Wasik M., Ratajczk M.Z. et al. Role of p53 in hematopoietic recovery after cytostatic treatment // Blood. 1998. - Vol. 91. - № 8. - P. 2998-3006.

493. Woo S., Krzyzanski W., Jusko WJ. Pharmacodynamic model for chemo-therapyinduced anemia in rats // Cancer Chemother Pharmacol. 2008. - Vol 62. -№ l.p. 123-133.

494. Wu H.H., Talpaz M., Champlin R.E. et al. Sequential interleukin 3 and granulocyte-macrophage-colony stimulating factor therapy in patients with bone marrow failure with long-term follow-up of responses // Cancer. 2003. -Vol. 98. -№ 11. - P. 241-249.

495. Wu X.X., Kakehi Y., Mizutani Y. et al. Activation of caspase-3 in renal cell carcinoma cells by anthracyclines or 5-fluorouracil // Int. J. Oncol. — 2001. — Vol. 19.-№ l.-P. 19-24.

496. Xu Y.J., Chen F.P., Li X.L. et al. Effect of recombinant human interleukin 11 on the platelet after hematopoietic stem cell transplantation in patients with leukemia // Zhong Nan Da Xue Xue Bao Yi Xue Ban. 2007. - Vol. 32. - № 3. -P. 433-436.

497. Yamazaki K., Alien T.D. Ultrastructural morphometric study of efferent nerve terminals on murine bone marrow stromal cells, and the recognition of a novel anatomical unit: the 'neuroreticular complex' // Amer. J. Anatomy. -1990.-№ 187.-P. 261-276.

498. Yang G.S., Wang C., Minkin S. et al. Hydrocortisone in culture protects the blast cells in acute myeloblasts from the lethal effects of cytosine arabinoside // J. Cell. Phisiol.- 1991.-Vol. 148.-P. 60-67.

499. Yang M., Srikiatkhachorn A., Anthony M., Chong B.H. Serotonin stimulates megakaryocytopoiesis via the 5-HT2 receptor // Blood Coagul. Fibrinolysis. -1996. Vol. 7. - № 2. - P. 127-133.

500. Yeager A.M., Levin J., Levin F.C. The effects of 5-fluorouracil on hemato-poiesis: studies of murine megakaryocyte-CFC, granulocyte-macrophage-CFC, and peripheral blood cell levels // Exp Hematol. 1983. - Vol. 11. - № 10. -P. 944-952

501. Zahniser N.R., Bier-Laning C.M., Gerber J.G. et al. Timolol-induced up-regulation of polymorphonuclear leukocyte /?2-adrenergic receptors in the elderly // Clin. Pharmacol. Ther. 1989. - Vol. 45. - P. 469-475.

502. Zhu H., Guo W., Zhang L. et al. BCL-XL small interfering RNA suppresses the proliferation of 5-fluorouracil-resistant human colon cancer cells, // Mol: Cancer Ther. 2005. - Vol. 4. - № 3. - P. 451-456.

503. Zembala M., Czupryna A., Wieckiewicz J. et al. Tumour cell-induced production of tumour necrosis factor by monocytes of gastric cancer patients receiving BCG immunotherapy // Cancer Immunol. Immunother. 1993. - Vol. 36.-№2.-P. 127-132.

504. Zinzani P.L., Storti S., Zaccaria A. et al. Elderly aggressive-histology non-Hodgkin's lymphoma: first-line VNCOP-B regimen experience on 350 patients //Blood. 1999.- Vol. 94.-№ l.-P. 33-38.

505. Zipori D:, Tamir M. Stromal cells of hemopoietic origin // Int. J. Cell Cloning. 1989. - Vol. 7.-№5.-P. 281-291.

506. Zuckerman K.S., Wicha M.S. Extracellular matrix production be the adherent cells of long-term murine bone marrow cultures // Blood 1983. - № 61. — P. 540-547.

Автореферат и диссертация по медицине (14.00.16) на тему:Моноаминергические механизмы регуляции кроветворения при цитостатических воздействиях

Автореферат диссертации по медицине на тему Моноаминергические механизмы регуляции кроветворения при цитостатических воздействиях

Оглавление диссертации Минакова, Мария Юрьевна :: 2009 :: Томск

Введение диссертации по теме "Патологическая физиология", Минакова, Мария Юрьевна, автореферат

Заключение диссертационного исследования на тему "Моноаминергические механизмы регуляции кроветворения при цитостатических воздействиях"

Список использованной литературы по медицине, диссертация 2009 года, Минакова, Мария Юрьевна

Похожие научные работы

Каталог диссертаций