Автореферат и диссертация по медицине (14.03.09) на тему:Молекулярные и клеточные маркеры воспаления при хронической обструктивной болезни легких

на правах рукописи

КУБЫШЕВА НАИЛЯ ИСХАКОВНА

МОЛЕКУЛЯРНЫЕ И КЛЕТОЧНЫЕ МАРКЕРЫ ВОСПАЛЕНИЯ ПРИ ХРОНИЧЕСКОЙ ОБСТРУКТИВПОЙ БОЛЕЗНИ ЛЕГКИХ

14.03.09. - клиническая иммунология, аллергология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

1 О (.¡АГ; 1Ш

Нижний Новгород, 2012

005017284

005017284

Работа выполнена в Федеральном бюджетном учреждении науки Нижегородском научно-исследовательском институте эпидемиологии и микробиологии им. академика И.Н.Блохиной Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека

Научные консультапты:

доктор биологических наук, профессор Новиков Виктор Владимирович

доктор медицинских наук, профессор Соодаева Светлана Келдибековна

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор каф клинической иммунологии и аллергологии ГБОУ ВПО Первый МГМУ им. И.М.Сеченова Минздравсоцразвития России Калюжии Олег Витальевич

доктор медицинских наук, профессор, зав. отделом иммунологии, зав. лабораторией иммунологических методов исследования ФГБУ «НИИ вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова» РАМН Краснопрошина Людмила Ивановна

доктор медицинских наук, профессор, зав. кафедрой фармакологии и декан фармацевтического факультета ГБОУ ВПО РНИМУ им. Н.И.Пирогова Минздравсоцразвития России Козлов Иван Генрихович

Ведущая организация:

Федеральное государственное бюджетное учреждение «Государственный научный центр «Институт иммунологии» Федерального медико-биологического агентства Российской Федерации

Защита состоится «24 » мая 2012г. в 10.00 часов

на заседании диссертационного совета Д 208.046.02 при Федеральном бюджетном учреждении науки «Московский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Г.Н. Габричевского» Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (125212, Москва, ул. Адмирала Макарова, д. 10).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФБУН МНИИЭМ им. Г.Н. Габричевского, г. Москва

Автореферат разослан «_»_2012г.

Ученый секретарь диссертационного совета,

кандидат медицинских наук Л.И.Новикова

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность проблемы.

Неуклонный рост распространенности хронической обструктивной болезни легких (ХОБЛ) во всем мире обуславливает актуальность детального исследования патогенетических механизмов развития данного заболевания.

В основе современной концепции патогенеза ХОБЛ лежит неуклонное прогрессирование хронического воспаления и частично обратимой обструкции дыхательных путей (GOLD, 2007). В настоящее время верификация диагноза ХОБЛ основана на оценке клинических симптомов и параметров вентиляционной функции легких. Однако, данные методы не позволяют объективно определить выраженность воспалительного процесса, развивающегося как на местном, так и на системном уровнях. В связи с этим, в общем спектре актуальных задач по проблеме ХОБЛ выделяют область поиска новых маркеров топического и системного воспаления с целью совершенствования диагностики и лечения данной патологии.

Развитие и прогноз ХОБЛ в значительной степени определяются состоянием иммунной системы. При ХОБЛ формирование и прогрессирование хронического воспаления во многом обусловлено повышением числа нейтрофилов, активацией альвеолярных макрофагов и Т-лимфоцитов (особенно CD8+) в бронхолегочной ткани (GOLD, 2007). Тем не менее, в прогрессировании системного и топического воспаления при данной патологии до конца не определена роль других мононуклеарных клеток, участвующих в реализации иммунного ответа.

В настоящее время интенсивно изучается прогностическая, мониторинговая и диагностическая значимость растворимых форм дифференцировочных молекул при различных патологических процессах (Новиков В.В., 2008). Данные растворимые протеины являются межклеточными белковыми коммуникаторами и выполняют модулирующую функцию в реализации иммунных реакций (Новиков и др., 2007; Mason et al., 2001). Существуют немногочисленные и противоречивые сведения, касающиеся участия данных молекулярных форм в патогенезе ХОБЛ (Takabatake N., 2000; Yasuda N., Gotoh К., 1998), что подчеркивает важность

дальнейшего изучения роли растворимых дифференцировочных молекул в прогрессировали воспаления при данной патологии.

Одну из важных позиций в инициации воспалительных реакций в дыхательных путях у больных ХОБЛ занимает ряд флогенных цитокинов (TNF-a, IL-8), способствующих активации и миграции клеток воспаления в бронхолегочную ткань (Barnes P.J., 2008; Chung K.F., Adcock I.M., 2008). Однако, целесообразно дальнейшее изучение других компонентов цитокинового звена, малоизученных при ХОБЛ, для уточнения их функциональной роли в механизмах прогрессирования системных проявлений и бронхообструктивных нарушений.

Активация и поддержание хронического воспаления при ХОБЛ во многом опосредованно оксидативным, нитрозивным стрессом и увеличением эндотелийповреждающих стимулов. Несмотря на то, что в настоящее время показано активное участие свободных радикалов в деструктивных процессах воздухоносных путей у больных ХОБЛ (Соодаева С.К., 2002; W. MacNee, 2006), закономерность изменений системных индикаторов свободнорадикального окисления в зависимости от стадии заболевания остается малоизученной. На современном этапе исследования ХОБЛ обсуждается роль нитрозивного стресса как важнейшего патогенетического фактора (Ricciardolo F., 2003; Brindicci С., 2010). Существуют противоречивые сведения об изменениях концентрации оксида азота (NO) и его производных при ХОБЛ как в респираторном тракте, так и на общеорганном уровне. Требует дальнейшего изучения и взаимосвязь прогрессирования респираторных нарушений у больных ХОБЛ и изменения секреции такого маркера эндотелиальной дисфункции как эндотелии-1 (ЭТ-1), роль которого установлена в развитии системных проявлений.

Несмотря на достигнутые успехи в лечении ХОБЛ, до сих пор, остается нерешенной проблема противовоспалительной терапии, что определяет потребность совершенствования фармакологической коррекции. Учитывая мультифакторность изменений иммунной системы при ХОБЛ, привлекательным и перспективным является исследование влияния иммуномодулирующей терапии на различные патогенетические факторы у пациентов с обострением этой патологии.

Цель исследования:

Исследовать патогенетические механизмы развития хронической обструктивной болезни легких на основе определения клеточно-молекулярных маркеров системного и топического воспаления при обострении заболевания и установить критерии мониторирования эффективности иммуномодулирующей терапии.

Задачи исследования:

1. Исследовать изменения содержания растворимых дифференцировочных молекул CD8, CD25, CD38, CD95, CD50, CD54, HLA-I, HLA-DR, HLA-I:CD8 в периферической крови, индуцированной мокроте, конденсате выдыхаемого воздуха у больных ХОБЛ в зависимости от степени тяжести заболевания.

2. Изучить особенности изменения иммунофенотипа мононуклеарных клеток, экспрессирующих CD4, CD8, CD 16, CD25, CD95, CD38, CD50, CD54, HLA-I, HLA-DR антигены, в периферической крови и индуцированной мокроте у больных ХОБЛ различной степени тяжести.

3. Провести анализ содержания цитокинов IL-ip, IL-4, IL-8, TNF-a, y-INF в периферической крови и индуцированной мокроте у больных ХОБЛ различной стадии заболевания.

4. Исследовать особенности свободнорадикалыюго окисления и антиоксидантной системы в периферической крови у больных с обострением ХОБЛ на различных стадиях заболевания. Изучить оксидативный метаболизм нейтрофилов периферической крови у пациентов ХОБЛ с разной степенью нарушения бронхиальной проходимости.

5. Провести анализ изменения показателей нитрозивного стресса в сыворотке крови и конденсате выдыхаемого воздуха у больных с ХОБЛ в зависимости от степени тяжести заболевания.

6. Изучить содержание эндотелина-1 в сыворотке крови у пациентов ХОБЛ с различной степенью выраженности бронхиальной обструкции.

7. Исследовать корреляционные связи между показателями клеточного иммунитета, цитокинового статуса, содержания растворимых

дифференцировочных молекул и параметрами оксидативного, нитрозивного стресса и уровня эндотелина-1 при ХОБЛ.

8. Изучить особенности изменения исследуемых клеточно-молекулярных маркеров воспалительного процесса в различных биологических средах на фоне применения иммуномодулирующего препарата натрия дезоксирибонуклеата у больных с обострением ХОБЛ II и III стадии заболевания. Положения, выносимые на защиту

1. Прогрессирование системных и топических воспалительных реакций у больных ХОБЛ сопровождается изменениями в содержании растворимых дифференцировочных молекул в периферической крови, индуцированной мокроте и конденсате выдыхаемого воздуха. Уровень растворимых дифференцировочных молекул sHLA-I, sHLA-II, sCD54, sCD95, sCD8, sCD25 и комплекса sHLA-I:CD8 может рассматриваться в качестве системных и тошгческих маркеров прогрессировалия ХОБЛ.

2. Активность воспаления и стадия ХОБЛ определяются изменением субпопуляционного состава циркулирующих и эндобронхиальных мононуклеарных клеток, формированием цитокинового стресса на топическом и системном уровнях.

3. Прогрессирование воспаления у больных ХОБЛ сопровождается усилением свободнорадикальных процессов, накоплением продуктов перекисного окисления липидов, увеличением уровня эндотелина-1 в периферической крови и повышением содержания метаболитов оксида азота в дыхательных путях и на системном уровне.

4. Установленные корреляционные взаимосвязи показателей клеточного иммунитета, цитокинового ■ статуса, содержания растворимых дифференцировочных молекул с параметрами оксидативного, нитрозивного стресса и уровнем эндотелина-1 позволили уточнить механизмы развития и прогрессировалия воспаления при ХОБЛ.

5. Применение парентеральной формы препарата натрия ДНК в составе стандартной терапии у пациентов с ХОБЛ II и III стадии оказывает модулирующее

влияние на выявленные в настоящей работе патогенетические маркеры данной

патологии.

Научная новизна:

Впервые у больных ХОБЛ различной степени тяжести проведена комплексная оценка содержания растворимых молекул гистосовместимости I и II класса (sHLA-I и sHLA-II), молекул адгезии sICAM-1 и sICAM-3, sCD8, sCD25, sCD38, sCD95 белков, комплексов sHLA-I:CD8 в периферической крови, индуцированной мокроте и конденсате выдыхаемого воздуха. Установлена сопряженность прогрессирования бронхиальной обструкции у пациентов с ХОБЛ с увеличением сывороточного содержания растворимых молекул sHLA-I, sHLA-II, sICAM-1, sCD8, sHLA-I:CD8 и снижением уровня sCD95 в крови, с повышением концентрации sHLA-I, sHLA-II белков в индуцированной мокроте и конденсате выдыхаемого воздуха, увеличением уровня sICAM-1 и снижением содержания sCD8 молекул в индуцированной мокроте, уменьшением концентрации sCD95 и sCD25 протеинов в конденсате выдыхаемого воздуха.

Показано, что обострение у пациентов с ХОБЛ в зависимости от стадии заболевания характеризуется изменением иммунофенотипа эндобронхиальных и циркулирующих мононуклеарных клеток, несущих на своей поверхности мембранные рецепторы CD4, CD8, CD16, CD25, CD38, CD50, CD54, CD95, HLA-I и HLA-DR. У больных ХОБЛ независимо от степени тяжести установлено повышение относительного количества циркулирующих CD16+, эндобронхиальных CD38+ мононуклеарных клеток и снижение числа системных клеток, экспрессирующих молекулы адгезии ICAM-1 и ICAM-3. Выявлена взаимосвязь содержания циркулирующих CD54+ мононуклеарных клеток и прогрессирования бронхиальной обструкции.

При сравнительной оценке содержания цитокинов IL-ip, IL-4, IL-8, y-INF, TNF-ct в периферической крови и индуцированной мокроте установлено однонаправленное нарастающее повышение концентрации вышеназванных цитокинов в данных биологических средах с увеличением стадии ХОБЛ. Показана связь нарушения бронхиальной проходимости и роста уровня IL-8 и TNF-a в

индуцированной мокроте, прогрессирования топического и сывороточного содержания у-ЮТ у больных ХОБЛ.

При исследовании показателей оксидативного и нитрозивного стресса выявлено увеличение сывороточного содержания диеновых коньюгатов и усиление интенсивности хемилюминесценции сыворотки крови у пациентов на любой стадии заболевания; повышение уровня оснований Шиффа у больных со средней и тяжелой степенью ХОБЛ; снижение интегрального антиоксидантного показателя в группе лиц с тяжелыми бронхообструктивными нарушениями; увеличение концентрации нитритов в сыворотке крови и дыхательных путях у пациентов II и III стадии заболевания. Показано, что увеличение сывороточной концентрации эндотелина-1 происходит на фоне роста стадии ХОБЛ и ассоциировано со снижением показателя функции внешнего дыхания «Емкость вдоха».

Впервые выявлены взаимосвязи показателей оксидативного, нитрозивного стресса, уровня ЭТ-1 и содержания растворимых дифференцировочных молекул, относительного количества антигенположительных клеток иммунной системы и концентрации цитокинов в различных биологических средах у пациентов с ХОБЛ, что отражает участие изучаемых клеточных и молекулярных компонентов воспаления в патогенезе и развитии данной патологии.

У больных с обострением ХОБЛ II и III стадии установлены критерии мониторирования эффективности применения парентеральной формы иммуномодулятора натрия дезоксирибонуклеата. Индикаторами, определяющими противовоспалительную эффективность проводимой иммунотропной терапии, являются содержание растворимых дифференцировочных молекул в крови и КВВ, относительное количество циркулирующих мононуклеарных клеток, уровень системных цитокинов, сывороточное содержание диеновых коньюгатов и оснований Шиффа, интенсивность хемилюминесценции сыворотки крови, интегральный показатель антиоксидантной защиты, суммарная концентрация метаболитов оксида азота в конденсате выдыхаемого воздуха.

Теоретическая значимость Создана теоретическая основа для расширения представлений о роли растворимых дифференцировочных молекул, клеточного иммунитета.

цитокинового статуса в механизмах патогенеза хронической обструктивной болезни легких.

Установленные взаимосвязи содержания растворимых дифференцировочных молекул, уровня цитокинов, компонентов клеточного иммунитета и показателей оксидативного, нитрозивного стресса имеют теоретическое значение для уточнения и раскрытия общебиологических механизмов развития воспалительных процессов в дыхательных путях и на системном уровне у больных ХОБЛ.

Выявленная позитивная динамика исследуемых клеточно-молекулярных маркеров на фоне применения иммунотропной терапии позволяют обосновать новые механизмы регулирующего действия препарата натрия дезоксирибонуклеата у больных с обострением ХОБЛ.

Таким образом, на основании выполненных исследований разработаны теоретические положения, совокупность которых можно квалифицировать как научное достижение, заключающееся в формировании целостных представлений о молекулярно-клеточных механизмах патогенеза ХОБЛ и возможности иммунотропной коррекции обострения заболевания.

Практическая значимость

Исследование пула растворимых дифференцировочных молекул в сыворотке крови, индуцированной мокроте, конденсате выдыхаемого воздуха может быть использовано в качестве дополнительного критерия в диагностике и мониторинге степени тяжести и активности системного и топического воспаления у больных ХОБЛ.

Связь изменений уровня растворимых дифференцировочных зНЬА-1, вНЬА-II, 5С1)25, зСВ95 молекул в конденсате выдыхаемого воздуха, концентрации эНЬА-I, вНЬА-Н, $СВ54, бСВ8 белков, уровня 1Ь-8, Ш-я, у-1№ в индуцированной мокроте и ухудшения бронхиальной проходимости у пациентов с ХОБЛ позволяет использовать эти показатели в качестве неинвазивных маркеров тяжести ХОБЛ.

Изменения показателей клеточного иммунитета, цитокинового статуса на системном и топическом уровнях в зависимости от стадии заболевания могут быть использованы в качестве индикаторов выраженности активности воспаления и

иметь большое значение для определения функционального состояния иммунной системы в дыхательных путях и в системе общего гомеостаза у пациентов с ХОБЛ.

Использование парентеральной формы иммуномодулятора натрия дезоксирибонуклеата в комплексе со стандартной терапией повышает противовоспалительную эффективность фармакологической коррекции обострений ХОБЛ

Полученные результаты обосновывают целесообразность исследования и мониторирования в динамике клеточных и молекулярных компонентов иммунитета, показателей оксидативного, нитрозивного стресса и уровня эндотелина-1 при изучении эффективности иммуномодулирующей терапии у больных ХОБЛ.

Результаты исследования используются в преподавании курсов лекций по молекулярной иммунологии для студентов Федерального государственного бюджетного учреждения высшего профессионального образования «Нижегородского государственного университета им. Н.И.Лобачевского».

Комплекс лабораторного обследования пациентов с хронической обструктивной болезнью легких используется в Бюджетном государственном учреждении здравоохранения Нижегородской области «Городской больнице №28», Федеральном государственном учреждении научно-исследовательский институт Пульмонологии Федерального медико-биологического агентства России (г. Москва), в Федеральном государственном бюджетном учреждении высшего профессионального образования «Нижегородский государственный университет им. Н.И.Лобачевского» научно-исследовательском институте молекулярной биологии и региональной экологии. Апробация работы

Диссертация апробирована на заседании ученого совета ФБУН ННИИЭМ им. академика И.Н. Блохиной Роспотребнадзора 14 декабря 2011 года, протокол №10/1.

Основные положения диссертации доложены и обсуждены: на XV, XVI, XVII, XVIII, XIX, XX, XXI Национальных Конгрессах по болезням органов дыхания (Москва, 2005, 2009, 2010; Санкт-Петербург, 2006; Казань, 2007; Екатеринбург, 2008; Уфа, 2011), на 17, 19, 20, 21 Конгрессах Европейского

Респираторного Общества (Стокгольм, 2007; Вена, 2009; Барселона, 2010; Амстердам, 2011).

Публикации. По теме диссертационного исследования опубликовано 59 печатных работ, в том числе 16 статей в журналах, рекомендованных ВАК РФ, в других изданиях — 3 статьи, в сборниках научных трудов и в материалах конференций — 38, одна монография, один патент на изобретение.

Структура и объем диссертации. Диссертационная работа в объеме 378 страниц состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследований, собственных результатов и их обсуждения, заключения, выводов и списка литературы. Диссертация иллюстрирована 61 таблицей. Библиографический указатель включает 477 источников литературы (97 отечественных и 380 иностранных авторов).

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ 1 .МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Материалом для исследования служили образцы цельной периферической крови, сыворотки крови, индуцированной мокроты (ИМ) и конденсата выдыхаемого воздуха (КВВ) пациентов ХОБЛ, наблюдавшихся в Городском консультативном центре для оказания медицинской помощи больным с хроническими обструкгивными заболеваниями легких, терапевтическом отделении ГБУЗ НО «Городская больница №28» и ФГУ НИИ Пульмонологии ФМБА России (г. Москва). Исследования были проведены на базе лаборатории ГБУЗ НО ДКГБ№27 «Айболит», в лаборатории молекулярной иммунологии бактериальных и вирусных инфекций ФБУН ННИИЭМ им. академика И.Н. Блохиной Роспотребнадзора, на кафедре клинической лабораторной диагностики ФПК врачей ГБОУ ВПО «Нижегородская государственная медицинская академия» МЗСР России, в лаборатории клинической экспериментальной биофизики ФГУ НИИ Пульмонологии ФМБА России (г. Москва).

В исследование было включено 158 человек, из них 128 человек с обострением ХОБЛ в возрасте от 40 до 65 лет. Группу сравнения составили 30 здоровых некурящих добровольцев со сходными половозрастными показателями.

Диагноз ХОБЛ, тяжесть течения и период заболевания был установлен врачами ГБУЗ НО «Городская больница №28» и сотрудниками кафедры внутренних болезней ФГОУ ВПО «Институт ФСБ России» в соответствии с рекомендациями по диагностике и лечению ХОБЛ (GOLD, 2001)(Чучалин А.Г., 2007).

128 пациентов с обострением ХОБЛ были разделены на три группы: 1-я группа (п=32) - пациенты с обострением ХОБЛ легкой степени тяжести (ОФВ1 — 80-70% от должных величин; ОФВ^ФЖЕЛ <70%); 2-я группа (п=47) - больные с обострением ХОБЛ средней степени тяжести (ОФВ, - 69-50%; ОФВ,/ФЖЕЛ<70%); 3-я группа (п=49) - больные с обострением ХОБЛ тяжелой степени тяжести (ОФВ) менее 50%; ОФВ1/ФЖЕЛ <70%). Среди больных с обострением ХОБЛ было 96 (75%) мужчины и 32 женщины (25 %).

Определение уровня растворимых форм мембранных молекул CD25, CD95, CD50, CD54, CD38, HLA-I, HLA-DR, CD8, HLA-I:CD8 в сыворотке крови, индуцированной мокроте и конденсате выдыхаемого воздуха проводили с помощью иммуноферментного метода с использованием моноклональных антител серии ИКО и поликлональных антител, специфичных к мембранным протеинам мононуклеарных клеток крови человека. Результаты выражали в условных единицах (U/ml).

Иммунофенотипирование мононуклеарных клеток выполняли методом непрямой иммунофлуоресценции с применением соответствующих МКА серии ИКО на люминесцентном микроскопе «Leitz» (Германия).

Содержание TNF-a, IL-lß. IL-4, y-INF. IL-8 в сыворотке крови и индуцированной мокроте определяли с помощью тест-систем «Протеиновый контур» (Санкт-Петербург) и «Вектор Бест» (I Ъжоснбнрск). Результаты выражали пг/мл.

Определение уровня эндотелию-1(фмоль/мл) осуществляли методом ИФА с использованием набора реагентов «Biomedica Gruppe» (Австрия).

Содержание нитритов в сыворотке крови и суммарную концентрацию нитритов/нитратов в конденсате выдыхаемого воздуха определяли спектрофотометрическим методом с использованием реактивов Грисса. Результаты выражали в мкмоль/мл.

Содержание молекулярных продуктов перекисного окисления липидов — диеновых коньюгатов (ДК) и оснований Шиффа (ОШ) исследовали с помощью спектрофотометрического метода по модифицированной методике Волчегорского (1989 г.). Результаты выражали в отн.ед.

Исследование люминолзависимой хемилюминесценции нейтрофилов и сыворотки крови, индуцированной перекисью водорода, выполняли на приборе «Dynatech» (Германия). Результаты выражали в отн.люм.ед.

При сравнительной оценке использования иммунотропной и стандартной терапии были обследованы больные II и III стадии заболевания. В группу сравнения вошли 21 пациент II стадии ХОБЛ и 22 больных III стадии заболевания, которым применялось только стандартное лечение. Стандартная терапия больных с обострением ХОБЛ включала: ингаляционные бронхолитики короткого действия, муколитики; антибактериальную терапию. Терапия обострений ХОБЛ III стадии включала системные ГКС с последующим переводом на ингаляционные формы ГКС. В исследовании оценки эффективности применения иммунотропной терапии при обострении ХОБЛ принимали участие больные средней (п=26) и тяжелой степени (п=27) заболевания, которым применялась в комплексе со стандартной терапией парентеральная форма препарата натрия дезоксирибонуклеата.

Для этого в комплексе со стандартной терапией больным ХОБЛ дополнительно назначали парентеральное введение препарата натрия дезоксирибонуклеата 1,5% раствор, 5 мл, в/м (75 мг/сут), 7 инъекций через 1-2 дня, с повторным обследованием через 18-20 дней.

Методы статистического анализа результатов исследования

Статистическую обработку данных проводили с помощью пакета программ Statistica. 6.0. и BIOSTAT. Результаты выражали в виде М±т, где М — среднее, а т - стандартная ошибка среднего. Нормальность распределения проверяли с применением критерия Шапиро-Уилка. Дальнейший анализ данных проводили с использованием критериев Стыодента с поправкой Бонферони и с использованием непараметрических методов анализа: критерия Манна-Уитни, критерия Крускал-Уоллиса, критерия Дана и коэффициента ранговой корреляции Спирмана.

2. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ 2.1,Оценка цитокинового статуса у больных ХОБЛ

В настоящей работе у пациентов с ХОБЛ была проведена сравнительная оценка цитокинового статуса по изучению содержания 1Ь-1р, 1Ь-4,1Ь-8, ЮТ-а, уЮТ в сыворотке и индуцированной мокроте (табл. 1).

Таблица 1

Изменение содержания 1Ь-1р, 1Ь-4, 1Ь-8, у-ШР, ТГЧР-и (пг/мл) в периферической крови и индуцированной мокроте у больных ХОБЛ различной стадии____

Кошрать I стадия II стадия III стадия

1Ь-1р (кровь) 35,3+5,8 231,6±52,5* 335,1 ±31,9* 476,2±53,4*,**,***

1Ь-1р (мокрота) 67,3+18,1 146,3±22,3* 195,5±43,2* 189,6±38,5*

1Ь-4 (кровь) 22,9±6,7 49,6±15,3 102,7±29,1* 145,9±45,03*,**

1Ь-4 (мокрота) 12,1±3,1 15,04±3,2 25,9±9,5 87,1±23,4*,**,***

1Ь-8 (кровь) 25,4+7,9 107,5±31,3* 147,5±22,9* 217,7±21,5*,**,****

1Ь-8 (мокрота) 6,52±1,7 22,4±5,03* 119,9±35^*,** 212,7±47,6 *,**

у-ЮТ (кровь) 28,2±9,7 61,3±18,4 153,5±13,9* 179,9±14,2*,**

у-ЮТ (мокрота) 59,8±22,3 125,5±18,4* 186,6±29,2* 366,8±56,6*,**,***

ЮТ-а (кровь) 10,2±1,32 63,4±10,2* 57,5±3,9* 130,8±35,1*,**

ТОТ-а (мокрота) 31,9±8,24 74,1±13Д* 94,5±19,1* 90,9±12,1*

Примечание: * - р<0,05 относительно контрольной группы, ** - р<0,05 по сравнению с больными I стадии ХОБЛ, *** - р<0.05 по сравнению с больными II стадии ХОБЛ

Концентрация провоспалительных цитокинов 1Ь-1р, 1Ь-8, ЮТ-а, у-1МР бьша статистически значимо повышена практически у всех пациентов ХОБЛ во всех тестируемых жидкостях по сравнению с показателями контрольной группы, с ростом стадии заболевания отмечалась тенденция к увеличению уровня данных медиаторов. Концентрация 1Ь-4 статистически значимо увеличивалась в крови группе пациентов средней и тяжелой степени, а в ИМ только у больных III стадии ХОБЛ. Таким образом, очевидно, что в условиях интенсификации хронического

системного и топического воспаления формируется так называемый «цитокиновый стресс».

Установленные отрицательные корреляции между концентрацией ТЫР-а, уровнем 1Ь-8 в ИМ, а также сывороточным и топическим содержанием у-ЮТ и показателями функции внешнего дыхания позволяют рассматривать данные цитокины в качестве маркеров степени тяжести заболевания (табл.2).

Таблица 2

Корреляционные связи между содержанием цитокннов IL-8, TNF-a, y-INF и параметрами функции внешнего дыхания__

ОФВ, ОФВ[/ФЖЕЛ

IL-8 (мокрота) г=-0,57 р=0,03 г=-0,52 р=0,05

TNF-a (мокрота) г=-0,34 р=0,14 г=-0,76 р=0,013

y-INF (кровь) г=-0,47 р=0,01 г=-0,43 р=0,02

y-INF (мокрота) г=-0,57 р=0,03 г=-0,7 р=0,02

Примечание: г— коэффициент корреляции Спирмена;

2.2. Сравнительное исследование относительного количества CD4+-, CD8+-, CD16+- мононуклеарных клеток у больных ХОБЛ

Ключевая роль в реализации воспалительных процессов при ХОБЛ принадлежит клеточному иммунитету. При исследовании уровня основных субпопуляций лимфоцитов (CD4+, CD8+, CD16+ клеток) установлено значительное увеличение относительного количества циркулирующих и эндобронхиальных CD16+ мононуклеарных клеток у всех больных ХОБЛ относительно контрольных показателей (табл. 3).

В группе пациентов II и III стадии заболевания выявлено статистически значимое повышение относительно нормы количества системных и топических мононуклеарных клеток, экспрессирующих CD8 рецепторы.

Распределение количества Т-хелперных клеток в разных биологических средах и в зависимости от стадии заболевания носило разнонаправленный характер. Статистически значимое снижение содержания CD4+ мононуклеарных клеток в периферической крови было характерно для больных с умеренными и

тяжелыми бронхообструктивными нарушениями. В индуцированной мокроте наблюдалось увеличение вышеназванных клеток у пациентов II стадии ХОБЛ.

Таблица 3.

Относительное количество С04+, СБ8+ и С016+ (%) мононуклеарных клеток в крови и индуцированной мокроте у больных ХОБЛ__

Кошрсль I стадия II стадия Шсщаия

СБ4+ (кровь) 39,2±4,7 32,6±3,8 28,1±3,7* 25,5±2,21*

СБ4+ (мокрота) 26,1 ±4,1 29,1±6,8 54,2±5,3*,** 36,8±4,4*

СБ8+(кровь) 23,3±3,4 26,6±3,6 33,1±2,5* 35,6±4,3*

С08+(мокрота) 21,5±4,5 26,4±4,3 41,6±3,9*,** 39,1±4,4*,**

СБ4+/СП8+(кровь) 1,65±0,25 1,23±0,08 0,83±0,13*,** 0,69±0,11*,**

С04+/С08+(мокрота) 1,21±0,07 1,09±0,12 1,23±0,1 0,82±0,065*,**,***

СШ6+(кровь) 14,1±2,1 23,6±3,1* 33,2±3,5*,** 26^±2,8*

СО 16+(мокрота) 23,2±1,3 33,6±5,1 55,1±3,9*,** 39,4±3,2*,***

Примечание: см.табл.1.

Период активации хронического воспаления при ХОБЛ сочетался с достоверным двукратным снижением иммунорегуляторного индекса (СБ4+/С08*) в крови у пациентов средней степени тяжести заболевания относительно нормальных значений. В группах больных III стадии ХОБЛ также наблюдалось падение соотношения С04+/СВ8+ как в крови, так и в индуцированной мокроте.

Полученные результаты могут свидетельствовать о дисфункции клеточного иммунитета и преобладании цитотоксических лимфоцитов на фоне снижения числа Т-хелперных клеток в условиях тяжелого воспаления при ХОБЛ.

2.3. Изменение содержания растворимых дифференцировочных молекул в различных биологических средах у больных ХОБЛ в зависимости от стадии заболевания

При исследовании изменения содержания растворимых дифференцировочных молекул в различных биологических средах у больных ХОБЛ в зависимости от стадии заболевания одновременно проводилась оценка относительного количества системных и эндобронхиальных мононуклеарных клеток, экспрессирующих гомологичные рецепторы.

Зафиксировано статистически значимое повышение содержания сывороточных растворимых белков sHLA-I и sHLA-II у пациентов тяжелой степени ХОБЛ по сравнению с контрольной группой. Установлен прогрессирующий рост относительно нормы содержания sHLA-I и sHLA-II как в КВВ, так и в индуцированной мокроте у больных II и III стадии ХОБЛ (табл.4.).

Таблица 4

Изменение содержания sHLA-I, sHLA-II (U/ml) и относительного количества HLA+ и IILA-II+ (%) мононуклеарных клеток в различных биологических жидкостях у больных ХОБЛ

Контроль I стадия ХОБЛ II стадия ХОБЛ III стадия ХОБЛ

sHLA-I (кровь) 1224,8+209,2 1513,?+??3,4 1688,2±189,4 2242,45±334,1*

sHLA-I (мокрота) i 633,5±58,6 617,4±113 767,3+165,4 1431,7±208,6*,**,***

sHLA-I (КВВ) 298,2±13,6 270,1±45,7 427,4±37,1*,** 560,2±50,1*,**,***

sHLA-II (кровь) 83,7±10,2 106,3±3,1* 117,3±7,1* 152,7±15,5*,**,***

sHLA-П (шкрота) 81,2±11,5 107,5±2,2* 108,3±4,7* 122,6±10,1*

sHLA-II (КВВ) 51,5±12,3 59,6±7,7 73,6±3,7* 82,7±3,6*,**

HLA-I+ (кровь) 70,2±8,1 5б,6±8,4 49,4±4,4* 38,4±3,5*,**

HLA-Г (мо!фога) 54,1±8,4 37,6±3,7* 59,2±5,8** 41,0±4,7 ***

HLA-II+ (кровь) 20,3±1,4 25,8±3,1 34,7±3,2*,** 31,8±3,1*

HLA-lf (мокрота) 30,2+3,8 32,2±2,4 44,7±4,1*,** 34,2±5,6***

Примечание: см.табл. 1

Установлена взаимосвязь повышения содержания $НЬА-1 и эЛЬА-И молекул во всех исследуемых биологических средах и степенью бронхиальной обструкции у пациентов ХОБЛ (табл. 8), что свидетельствуют об участии данных белков в патогенезе и прогрессирования системных и топических воспалительных реакций, а также их влиянии на ведущие патофизиологические механизмы формирования данного заболевания. Полученные результаты позволяют отнести содержание растворимых молекул гистосовместимости I и II класса к индикаторам степени тяжести ХОБЛ.

С нарастанием степени тяжести заболевания выявлено прогрессирующее снижение уровня НЬА-1+ клеток в крови. В группе больных II и III стадии ХОБЛ отмечалось достоверное снижение числа данных клеток относительно нормы. В индуцированной мокроте наблюдалось значимое снижение количества НЬА-1+ клеток при легкой степени ХОБЛ, в то время как у больных II и 1П стадии ХОБЛ число вышеназванных клеток не отличались от нормы.

Выявлено однонаправленное изменение уровня НЬА-П+ мононуклеарных клеток как в крови, так и в мокроте в зависимости от степени тяжести заболевания. Максимальное число циркулирующих и эндобронхиальных НЬА-П+ клеток выявлено у больных II стадии ХОБЛ.

В ходе настоящей работы отмечалось достоверное повышение содержания растворимой формы 1САМ-1 у всех больных ХОБЛ в КВВ относительно контроля, в то время как в индуцированной мокроте концентрация вС054 достоверно начинала увеличиваться со II стадии ХОБЛ, а в сыворотке крови только у пациентов с тяжелой степенью заболевания (табл.5). Наиболее значимое увеличение концентрации зС050 относительно контрольных показателей наблюдалось на всех стадиях ХОБЛ в индуцированной мокроте, в КВВ достоверный рост уровня эГСАМ-З отмечался со II стадии заболевания, а в периферической крови только у пациентов тяжелой степени.

Установленная отрицательная корреляционная связь между содержанием зСБ54 молекул в крови и ИМ и степенью бронхиальной обструкции у больных ХОБЛ (табл.8) позволяет рассматривать содержание 51САМ-1 в качестве системного и топического маркера выраженности нарушения вентиляционной функции легких и, следовательно, отягощения течения заболевания.

Обнаружено статистически значимое снижение уровня С050+ и СВ54+ мононуклеарных клеток у всех больных ХОБЛ в крови по сравнению с контрольной группой (табл.5). Позитивная корреляция между относительным количеством циркулирующих СП54+ клеток и параметрами функции внешнего дыхания ОФВ, и ОФВ]/ФЖЕЛ свидетельствует о закономерном снижении числа данных клеток с нарастанием бронхиальной обструкции (табл.8). В

индуцированной мокроте снижение уровня С050+ и клеток наблюдалось у

больных I и III стадии ХОБЛ по сравнению с нормальными значениями (табл.5).

Таблица 5

Изменение содержания sCD54, sCD50 (U/ml) и относительного количества CD54+, CD50+ мононуклеарных клеток (%) в различных биологических жидкостях у больных ХОБЛ различной стадии_

Контроль I стадия ХОБЛ II стадия ХОБЛ III стадия ХОБЛ

бС050 (кровь) 351,4±45,7 338,1±23,1 431,5±50,1 662,7±65,1 ***,***

зС050 (мокрота) 251,5±48,5 408,5±4б,6* 416,5±47,5* 561,1±46,9* *****

зС050 (КВВ) 220,2±14,8 250,1±9,2 308,6±21,3*,** 283,2±20,1*

5СЭ54 (кровь) 56,8+10,3 54,2+12,1 74,8±9,5 118,4±24,1*,**

зСЕ>54 (мокрота) 36,9±9,9 42,6±5,2 61,5±6,4* 97,4±16,6V*

вС054 (КВВ) 62,6±5,2 77,4±4,3* 95,8±7,1*,** 86,7±5,1*

С1)50+ (кровь) 58,6+5,6 3б,5±5,3* 32,8±1,8* 29,7±3,2*

СБ50+ (мокрота) 54,3+5,7 36,6±4,5 44,8±5,4 37,8±4,8*

СБ54+ (кровь) 64,4±5,1 43,6±5,1 * 33,6±3,9* 24,8±3,7*,**

СП54' (мокрота) 59,2±4,3 35,1±4,9* 56,3±7,3** 39,8±1,6*,***

Примечание: см.табл.1

Таким образом, анализ полученных результатов позволяет отнести содержание молекул адгезии ICAM-1 и ICAM-3, представленных в мембранной и растворимой форме, к важным патогенетическим факторам развития и утяжеления течения ХОБЛ.

На современном этапе изучения ХОБЛ поддерживается гипотеза о значимости нарушений баланса между апоптозом и пополнением структуральных клеток в дыхательных путях, ведущих к деструкции бронхолегочной ткани и эмфиземе у больных данной патологии.

В ходе исследования обнаружено снижение сывороточного содержания молекулы sCD95 у пациентов с тяжелой степенью ХОБЛ по сравнению с контрольной группой и пациентами I стадии заболевания (табл.6). В КВВ, так же как и в ИМ, максимальная концентрация растворимых Fas молекул была характерна для группы пациентов II стадии заболевания. В то же время, при III

стадии ХОБЛ концентрация sCD95 молекул в данных биосредах была достоверно ниже относительно группы больных с умеренными бронхообструктивными нарушениями и статистически не отличалась от нормальных значений. При легкой степени тяжести заболевания содержание растворимых Fas белков в КВВ было выше контрольных значений, а в индуцированной мокроте не отличалось от показателей нормы.

Таблица 6

Изменение содержания sCD95 молекул (U/ml) и относительного количества CD95* мононуклеарных клеток (%) в различных биологических жидкостях у больных ХОБЛ в зависимости от стадии заболевания_

Контроль I стадия ХОБЛ II стадия ХОБЛ III стадия ХОБЛ

SCD95 (кровь) 393,7±20,9 401,2±52,5 360,8±13,8 319,1±11,7*,**

sCD95 (мокрота) 275,5±41,5 258,8±44,7 374,3±21,5* 301,1±31,2**

SCD95 (КВВ) 139,6±6,8 177,5±13,1* 204,2±18Д* 161,2±12,1**

CD95+ (кровь) 27,0 + 5,4 25,6±2,7 34,1 ±3,1 45,3±6Д*,**

CD95+ (мокрота) 34,7±5,7 44.4+9,4 58,3±6,9* 37,7±5,9***

Примечание: см.табл.1.

Зафиксированное увеличение относительного содержания СЭ95+ мононуклеарных клеток в крови у больных III стадии ХОБЛ может указывать о повышенной готовности данных клеток к Раз-опосредованному апоптозу и подтверждает развитие активации процессов программируемой клеточной гибели на системном уровне в условиях тяжелого воспалительного процесса.

В индуцированной мокроте обнаружено значимое повышение относительного количества СВ95-положительных клеток у больных II стадии ХОБЛ, в то время у пациентов III стадии заболевания отмечалось снижение числа данных клеток по сравнению с показателями предыдущей группы.

Выявленные позитивные корреляционные связи между параметрами ФВД и содержанием 8СБ95 молекул в крови и в КВВ (табл.8), а также числом циркулирующих СБ95+ мононуклеарных клеток могут свидетельствовать о значимости данных маркеров апоптоза в прогрессировали!! системных и

топических проявлений, а также в нарушении вентиляционной функции легких у пациентов с ХОБЛ.

Таблица 7

Изменение содержания sCD25, sCD38, sCD8 молекул и комплекса sHLA-I:CD8 (U/ml), уровня CD25+ и CD38+ мононуклсарных клеток (%) в различных

Контроль I стадия ХОБЛ II стадия ХОБЛ III стадия ХОБЛ

бС025 (кровь) 350,7±17,4 757,2±143,2* 597,7±69,5* 398,9±22,9*V**

зС025 (мокрота) 174,5±43,4 406,5±22,5* 417,4±25,1* 415,2±16,8*

8СБ25 (КВВ) 196,8±3,5 241,5±16,5* 228,8±7,8* 200,8±6,9**,***

вСОЭ8 (кровь) 143,4±14,7 202,1±15,2* 292,1±45,2* 138,3±7,9**,***

эСОЗв (мокрота) 124,2±12,8 133,1±6,1 187,3±18,3*,** 147,5±15,6

зС038 (КВВ) 134,2±4,7 143,1±4,1 221,3±20,8*,** 157,9±17,6***

вСВ8 (кровь) 482,8±35,6 775,1±105,2* 684,1±47,1* 502,1±35,8**,***

вС08 (мокрота) 434,4±53,2 447,1±37,3 409,3±41,7 280,7±20,3*,**,***

эС08 (КВВ) 290,6±19,2 392,1±41,2* 410,8±24,8* 394,7±16,7*

зНЬА-1:С08 (кровь) 513,1+22,1 542,3±36,9 660,7±39,2*,** 881,2±97,2*,**

зНЬА-1:С08 (мокрота) 265,5±46,5 280,2±61,3 705,7±125,4*,** 608,9±58,7*,**

5НЬА-1:С08 (КВВ) 648,2+148,9 1208,1±165,1* 1278,1±74,9* 1307,2±117,4*

СТ>25* (кровь) 19,3±3,7 27,6±2,2* 37,1±3,6* 24,1±3,2***

СБ25+ (мокрота) 12,3±2,9 34,8±6,5* 55,1±4,5*,** 32,3±4,1*,***

СБ38+ (кровь) 19,9±1,4 33,1±4,2* 28,7±2,8* 22,2±3,4**

С0381 (мокрота) 21,7±1,6 28,8±4,7 56,1±8,1*,** 34,4±3,9*,***

Примечание: см.табл. 1

Исследование растворимых молекул CD25, CD38, CD8 выявило однонаправленный характер изменения сывороточного содержания данных белков у больных ХОБЛ, сопряженный с прогрессированием стадии заболевания. Установленные для больных I и II стадии ХОБЛ высокие концентрации данных

растворимых молекул в крови с ростом степени тяжести заболевания снижались, и у пациентов с тяжелыми бронхообструктивными нарушениями уровень sCD25, sCD38 и sCD8 молекул не превышал контрольных показателей (табл. 7).

Содержания sCD25 белков в ИМ было повышенным у всех больных относительно контрольных значений. В КВВ отмечалась тенденция к снижению уровня данных молекул с прогрессированием стадии ХОБЛ.

Зарегистрированная позитивная связь между уровнем sCD25 белков в КВВ и параметрами функции внешнего дыхания (табл.8) позволяет рассматривать содержание данных белков в качестве неинвазивдаго маркера степени тяжести ХОБЛ

В ходе настоящей работы было проведена оценка относительного количества CD25 мононуклеарных клеток. CD25 рецепторы экспрессируются на поверхности Т-, В-лимфоцитов, натуральных киллеров. Обнаружено повышение относительного количества циркулирующих мононуклеарных клеток, экспрессирующих рецепторы к IL-2, у больных I и II стадии ХОБЛ (табл. 7). У пациентов III стадии содержание С025-положительных клеток в крови и индуцированной мокроте не отличалось от нормы, но было статистически ниже значений, характерных для пациентов средней степени тяжести ХОБЛ.

Исследование содержания sCD38 молекул на топическом уровне показало статистически значимое повышение уровня данных белков у больных II стадии ХОБЛ как в КВВ, так и в ИМ, относительно контрольных значений и по сравнению с группой пациентов I стадии заболевания. При тяжелой степени ХОБЛ содержание sCD38 молекул было в пределах контрольных значений, но в КВВ уровень данных растворимых форм статистически значимо был меньше по сравнению с группой пациентов II стадии заболевания.

Установлено достоверное повышение количества циркулирующих CD38+ мононуклеарных клеток у больных I и II стадии ХОБЛ относительно нормы. У пациентов с тяжелой степенью ХОБЛ количество данных клеток не отличалось от контрольных показателей, но было достоверно ниже значений, выявленных на I стадии заболевания. Обнаруженная положительная достоверная корреляция между относительным количеством CD38+ клеток периферической крови, ОФВ( и ОФВ]/ФЖЕЛ (табл.8) свидетельствует о прогрессирующем снижении уровня

данных клеток с ростом бронхиальной обструкции. В ИМ наблюдалось значительное увеличение процентного содержания эндобронхиальных СБ38-положительных клеток у пациентов со средней степенью тяжести ХОБЛ по сравнению с контролем и больными I стадии.

Содержание растворимых дифференцировочных молекул 5СБ8 в КВВ было достоверно повышено у всех больных ХОБЛ по сравнению со значениями здоровых некурящих добровольцев (табл. 7). В ИМ уровень данных белков у пациентов I и II стадии заболевания был в пределах контрольных значений, в то время как в группе больных с тяжелыми обструктивными нарушениями содержание молекул статистически значимо было снижено относительно

показателей контрольной группы и пациентов легкой и средней степени тяжести заболевания. Установленная позитивная достоверная корреляция уровня вСБв белков в крови и ИМ с параметрами ФВД также подтверждает регрессивное снижение содержания данных молекул как на системном, так и на топическом уровне на фоне роста бронхообструктивных нарушений (табл.8).

При исследовании содержания комплексов зНЬА-1:С08 у больных ХОБЛ выявлено прогрессирующее повышение сывороточного уровня данных ассоциатов на фоне нарушения бронхиальной обструкции. Установлена отрицательная статистически значимая корреляция между содержанием комплексов бНЬА-1:С08 в сыворотке крови и показателями функции внешнего дыхания ОФВ] и ОФВ1/ФЖЕЛ (табл.8). На топическом уровне концентрация данных комплексов была повышена практически у всех больных ХОБЛ как в КВВ, так и в ИМ. Исключение составила группа пациентов с легкой степенью заболевания, у которых в индуцированной мокроте содержание 5НЬА-1:С08 не отличались от значений нормы (табл.7).

Полученные результаты свидетельствуют об участии комплексов бНЬА-1:С08 в патогенезе ХОБЛ. При этом содержание комплексов бНЬА-1:С08 в сыворотке крови может выступать в качестве маркера степени тяжести этого заболевания.

Таблица 8.

Корреляции между содержанием растворимых дифферепцировочных молекул, относительным количеством мононуклсарных клеток и параметрами функции внешнего дыхания__

ОФВ, ОФВ|/ФЖЕЛ

зСР95 (кровь) г=0,47 р=0,02 г=0,33 р=0,03

БСВ95 (КВВ) г=0,41 р=0,02 г=0,17 р=0,23

эС054 (кровь) г=0,27 р=0,26 г=0,28р=0,21

8СБ54 (мокрота) г=-0,31 р=0,09 г=-0,65 р=0,02

зСВ25 (КВВ) г=0,46 р=0,03 г=0,54 р=0,01

зНЬА-1 (кровь) г=-0,47 р=0,03 г=-0,28 р=0,07

вНЬЛ-! (мокрота) г=-0,57 р=0,031 г=-0,43 р=0,04

зПЬА-! (КВВ) г=-0,54 р=0,034 г=-0,33 р=0,03

бНЬА-И (кровь) г=-0,52 р=0,0003 г=-0,48 р=0,01

эНЬЛ-П (мокрота) г=-0,65 р=0,01 г=-0,74 р=0,003

зНЬА-П (КВВ) г=-0,62 р=0,01 г=-0,44 р=0,047

вС08 (кровь) г=0,4 р=0,04 г=0,43 р=0,002

бС08 (мокрота) г=0,5 р=0,043 г=0,54 р =0,041

$НЬА-1:С08 (кровь) г=^0,52 р=0,007 г=-0,48 р=0,04

СБ54+ (кровь) г=0,48 р=0,008 г=0,37 р=0,035

С095+ (кровь) г=0,22р=0,15 г=-0,37 р=0,03

СБ38+ (кровь) г=0,38 р=0,044 г=0,48 р=0,032

Примечание: г — коэффициент корреляции

Суммируя полученные результаты, можно заключить, что растворимые дифференцировочные молекулы вносят важный вклад в патогенез развития ХОБЛ и позволяют рассматривать растворимые молекулы зНЬА-1, бНЬА-Н, зСВ54, вС095, зС08, зСВ25 и комплекса зНЬА-1:СП8 в качестве системных и топических маркеров прогрессирования ХОБЛ.

2.4. Исследование показателей оксидативного стресса у больных ХОБЛ

По результатам настоящего исследования выявлено практически однонаправленное изменение таких показателей, как содержание ДК, интенсивность хемилюминесцентного (ХЛ) ответа сыворотки крови и значения

индуцированной ХЛ циркулирующих нейтрофилов у больных ХОБЛ, сопряженное с прогрессированием стадии заболевания (табл. 9).

Таблица 9

Изменение показателей про-антиоксидантнон системы у бальных ХОБЛ в зависимости от стадии заболевания_

Контроль I стадия II стадия III стадия

Основания Шиффа (усл.ед.) 3,2±0,25 3,97±0,53 4,3±0,35* 5,94±0,71 *,**,***

Диеновые коньюгаты (усл.ед.) 0,165±0,005 0,238±0,02* 0,24±0,01* 0,195±0,008*,**,***

1тах (отн.люм.ед.) 0,061±0,029 0,17±0,038* 0,28±0,039*,** 0,16±0,024*,***

АОА 0,078±0,01 0,082±0,01 0,145±0,024*,** 0,062±0,003*,**,***

ЬпахКе (отн. люм.ед) 0,08 ± 0,01 0,21±0,032* 0,25 ±0,033* 0,12±0,027**,***

¡яроМ Ые (отн. люм.ед) 0,006±0,003 0,03±0,007* 0,04 ±0,005* 0,04±0,009*

Ка 0,87+0,03 0,85+0,07 0,84±0,08 0,59±0,02*,**,***

Примечание: см. табл.1; 1тах - хемилюминесценция сыворотки крови, пцдуцированпая перекисью водорода; АОА - интегральный показатель антиоксидантной защиты сыворотки крови; нпах Ке - хемилюминесценция нейтрофилов, индуцированная опзонизированным зимозаном; ¡¡роМ Ne — спонтанная хемилюминесценция нейтрофилов; Ка - коэффициент клеточной активности;

Выявленно повышение концентрации ДК, интенсивности ХЛ сыворотки крови относительно контрольных значений у всех пациентов ХОБЛ, однако на III стадии болезни уровень данных показателей статистически был ниже значений больных предудыщих групп.

Показатели индуцированной ХЛ циркулирующих нейтрофилов у пациентов легкой и средней степени ХОБЛ превышали значения контрольной группы. В то же время у лиц с тяжелыми бронхообструктивными нарушениями установлено

снижение данного параметра по сравнению с больными I и II стадии, но не выявлено различий относительно от здоровых некурящих добровольцев. Одновременное снижение коэффициента клеточной активности у пациентов с тяжелой ХОБЛ в отличие от контрольной группы и больных I и II стадии заболевания может указывать на угнетение функциональной деятельности нейтрофилов в условиях тяжелого хронического воспаления.

При И и III стадии ХОБЛ отмечалось повышение содержания конечных продуктов ПОЛ (оснований Шиффа) относительно нормативов контроля (табл.9).

Оценка интегрального показателя антиоксидантной защиты показало его двукратное увеличение в группе пациентов с умеренными бронхообструктивными нарушениями и значительное снижение у больных с тяжелой степенью ХОБЛ по сравнению с показателями контрольной группы. Установленная позитивная корреляция между уровнем АОА и параметрами легочной функции ОФВ] и ОФВ,/ФЖЕЛ (г =0,47 р=0,04 и г =0,72 р=0,004, соответственно) при тяжелом течении ХОБЛ свидетельствует о закономерном снижении антиоксидантной защиты с ростом бронхиальной обструкции.

2.5. Исследование содержания метаболитов оксида азота у больных ХОБЛ

При комплексной оценке изменения содержания метаболитов оксида азота было обнаружено прогрессивное повышение концентрации нитритов в сыворотке крови, ассоциированное со степенью тяжести заболевания (табл.10). Причем при III стадии заболевания отмечалось двукратное увеличение содержания данного метаболита оксида азота по сравнению с показателями контрольной группы.

Таблица 10

Изменение содержания нитритов (N02") в сыворотке крови и суммарной концентрации 1^Юз'/1Ч02" (мкмоль/л) в конденсате выдыхаемого воздуха у больных ХОБЛ в зависимости от стадии заболевания_

Контроль I стадия хобл II стадия хобл III стадия хобл

n0/ 2,8±0,4 2,7±0,5 3,8±Ю,3*** 5,87±0,77*,**,***

Ino3tno2- 5,57±1,1 6,7±1,4 Ю,7±0,7*,** 12,2±2,3*,**

Примечание: см.табл. 1

Определение суммарной концентрации нитратов/нитритов в КВВ у больных ХОБЛ также показало увеличение уровня данных молекул в группе больных П и III

стадии заболевания по сравнению с нормальными значениями и пациентами с легкими бронхообструктивными нарушениями. 2.6. Содержание эндотелина-1 у больных ХОБЛ

У всех наблюдаемых пациентов было установлено достоверное увеличение концентрации ЭТ-1 в крови по сравнению со здоровыми некурящими лицами (табл. 11).

Максимальное повышение содержания ЭТ-1 зафиксировано у больных тяжелого течения ХОБЛ, которое было увеличено в 3,6 раза относительно нормальных показателей. Выявленная отрицательная корреляция между сывороточным уровнем ЭТ-1 и показателем функции внешнего дыхания «емкость вдоха» (г=-0,53 р=0,02) свидетельствует о патогенетической значимости данного вазоактивного пептида в прогрессировании хронического воспаления при ХОБЛ.

Таблица 11

Содержание эндотслина-1 (фмоль/мл) в сыворотке крови у больных ХОБЛ различной степени тяжести_

Группы обследованных лиц Эндотелии-1 (фмоль/мл)

Здоровые некурящие добровольцы 0,67 ± 0,07

I стадия 1,76±0,07*

II стадия 1,74 ±0,13*

III стадия 2,43 ±0,21*,**,***

Примечание: см. табл.1

2.7. Взаимосвязь показателей иммунной системы и параметров оксидатнвного, нитрозивного стресса и уровня эндотелина-1 у больных ХОБЛ

Выявленные изменения показателей оксидативного, нитрозивного стресса, уровня эндотелина-1 и функционального состояния иммунной системы позволили рассмотреть характер и направленность возможных взаимоотношений этих важнейших систем гомеостазау больных ХОБЛ (табл. 12,13).

Установлены многочисленные корреляционные связи между параметрами оксидативного, нитрозивного стресса, уровнем ЭТ-1 и содержанием растворимых СП95 молекул в различных биологических средах и количеством циркулирующих мононуклеарных клеток, экспрессирующих Раз-рецепторы. Было установлено, что повышение содержания N0/ в сыворотке крови сочеталось со снижением уровня

циркулирующих sCD95 молекул и с падением концентрации эндобронхиальных растворимых Fas молекул. Кроме того, была зафиксирована сопряженность роста суммарной концентрации продуктов синтеза оксида азота в дыхательных путях и повышения количества CD95+ мононуклеарных клеток в крови у больных ХОБЛ.

Таблица 12

Корреляции между показателями иммунной системы в периферической крови и параметрами оксндатнвного, ннтрозивного стресса и уровнем эндотелнна-1

ОШ Imax no2 INO2/NO3 (KBB) Эндотелии-1

TNF-ct - r=0,78p=0,01 - - 0,63p=0,03

IL-8 - r=0,58 p=0,02 - - 0,42p=0,03

y-INF - r=0,52 p=0,02 - 1=0,46 p=0,04 -

IL-4 1=0,46 p=0,03 - r-=0,42p=0,03 i=0,86 p=0,002 -

IL-ip - - - r=0,72p=0,01 -

sHLA-I r=0,54 p=0,001 - - r=0.8p=0,001 -

HLA-I+ r=4),43p=0,02 - r=0,38p=0,03 i=4),68 p=0,003 -

sCD50 - - - - r=0,45 p=0,04

CD50+ r=-0,42p=0,03 - r-037p=0,02 r=M),42p=0,03 -

SCD54 - - - - i=0,73 p=0,03

sCD95 - г=-0,57 p=0,01 r=4),44p=0,02 - -

CD95+ - i=0,43 p=0,01 r=0,65 p=0,01 г=0,47рЮ,02 -

Примечание: г - коэффициент корреляции Спирмена,

«-» - отсутствие статистически значимых корреляций

В ходе работы была определена отрицательная корреляция между сывороточным содержанием ЭТ-1 и концентрацией растворимых форм мембранных молекул СБ95 в конденсате выдыхаемого воздуха. Обнаружены ассоциации интенсивности хемилюминесценции сыворотки крови со снижением сывороточного содержания эСВ95 молекул и ростом циркулирующих С095+ мононуклеарных клеток у больных ХОБЛ.

Учитывая, что свободные радикалы, оксид азота и его метаболиты, а также ЭТ-1 являются одними из инициаторов программированной гибели клеток,

обнаруженные корреляции предполагают влияние данных факторов на усиление процессов апоптоза как на системном, так и на топическом уровне, у больных ХОБЛ через Рая-опосредуемые механизмы.

В настоящем исследовании были обнаружены многочисленные коррелятивные связи между уровнем нитритов, показателями оксидативного стресса и концентрацией растворимых молекул гистосовместимости I класса в сыворотке крови и конденсате выдыхаемого воздуха, а также относительным числом циркулирующих НЬА-Г мононуклеарных клеток у больных ХОБЛ (табл.12, 13). Выявлено, что повышение сывороточного содержания бНЬА-1 происходило на фоне увеличения суммарной концентрации метаболитов оксида азота в дыхательных путях и усиления интенсивности хемилюминесценции сыворотки крови у пациентов ХОБЛ. Кроме того, наблюдалась сопряженность увеличения содержания эндобронхиальных растворимых молекул бНЬА-1 и повышения £М02"/К03" в КВВ и увеличения концентрации Оснований Шиффа (табл.13). Было также установлено, что снижение относительного количества НЬА-1+ мононуклеарных клеток сочеталось с повышением содержания конечных продуктов ПОЛ, а также с ростом уровня метаболитов оксида азота как в сыворотке крови, так и в респираторном тракте.

Таблица 13

Корреляции между топическими показателями иммунной системы и параметрами оксидативного, нитрознвного стресса и уровнем эндотелина-1

ОШ N02 ЦЧОг/Г-ГОз (КВВ) Эндотелии-1

1Ь-4 (мокрота) - г=0,76р=0,01 - -

зНЬА-1 (КВВ) 1=0,4 р=0,04 - г=0,57 р=0,032

5СБ50 (КВВ) г=0,43 рН),01 1=0,47 р=0,04 - -

эС095 (КВВ) - г=Ч)38рН),02 - 1=0,5 р=0,03

эС1)95 (мокрота) - 1=-0,8 р=0,018 г=Ч),87 р=0,007 -

Примечание: г — коэффициент корреляции Спирмена «-» - отсутствие статистически значимых корреляций Учитывая, что основная функция системы главного комплекса

гистосовместимости заключается в регуляции иммунного ответа и в презентации

Т-лимфоцитам фрагментов различных антигенов, обнаруженные взаимосвязи, по нашему мнению, могут указывать о влиянии метаболитов оксида азота, и радикальных процессов на нарушение антигенной презентации при ХОБЛ, что может быть одной из причин обострения данного заболевания.

В результате корреляционного анализа была выявлена сопряженность повышения сывороточного содержания sICAM-1 и sICAM-З молекул и роста уровня эндотелина-1 в крови. Кроме того, отмечалась позитивная связь между концентрацией sCD50 белков и содержанием конечных ПОЛ.

В связи с тем, что одна из функций растворимых молекул адгезии состоит в ограничении мигрирующей способности клеток в очаг воспаления, то, не исключено, что существует общий механизм участия свободных радикалов, эндотелина-1 и sCD54, sCD50 белков в модуляции иммунологических реакций, направленных на торможение процессов адгезии, связанных с клеточной миграцией.

В настоящей работе отмечалось, что снижение количества CD50 мононуклеарных клеток происходило на фоне повышения концентрации ингермедиатов СРО и увеличения концетрации топических и системных метаболитов N0. Полученные результаты могут указывать на роль липоперекисных радикалов и оксида азота на функциональное изменение мембранно-рецепторного комплекса, нарушение межклеточных взаимодействий и презентации чужеродных агентов.

Были обнаружены существенные положительные корреляционные связи и между интенсивностью хемилюминесценции сыворотки крови и содержанием циркулирующих CD8+, CD16+, CD25+, HLA-DR+ мононуклеарных клеток (табл.14). Кроме того, была установлена негативная ассоциация между относительным количеством СВ16-положительных клеток и интегральным показателем антиоксидантной защиты (г=-0,69р=0,02).

Выявленные корреляции, возможно, свидетельствуют, что в развитии воспаления при ХОБЛ оксидативный и нитрозивный стресс являются частью того единого механизма, в ходе которого в процесс активации воспаления также

вовлекаются различные клетки для выполнения своих эффекторных и регуляторных функций.

Таблица 14.

Корреляции между показателями клеточного иммунитета в периферической крови и интенсивностью хемилюминесцеиции сыворотки крови

CD8+ CD16+ CD25+ CD38+ HLA-DR+

Imax 1=035 pH),002 i=0,4p=0,0018 r=035p=0,04 r=0,52p=0,01 i=0,64 p=0,0001

Примечание: г - коэффициент корреляции Спирмена

Одной из важнейших патогенетических особенностей развития ХОБЛ является и выявленная в настоящей работе позитивная взаимосвязь концентрации таких циркулирующих цитокинов как TNF-a, IL-8 с интенсивностью ХЛ сыворотки крови и уровнем эндотелина-1. Отмечалась положительная ассоциация и между суммарной концентрацией эндобронхиальных метаболитов оксида азота, показателем Im ах и сывороточным содержанием y-INF. Данные результаты могут свидетельствовать о совместном участии вышеназванных цитокинов и оксидативного, нитрозивного стресса, а также эндотелина-1 в механизмах формирования системного и локального воспалительного процесса у больных ХОБЛ.

Стоит также выделить установленные многочисленные положительные связи между уровнем IL-4 в крови и содержанием продуктов синтеза оксида азота в сыворотке крови и дыхательных путях, концентрацией диеновых коньюгатов и отрицательную ассоциацию между уровнем данного медиатора и интегральным показателем АОА. Позитивная корреляция также была зарегистрирована и между содержанием IL-4 в индуцированной мокроте и концентрацией нитритов в сыворотке крови.

Проведенное исследование и полученные результаты позволили выделить ключевые факторы иммунитета, про-антиоксидантной и эндотелнальной системы и на основе установленных взаимосвязей показателей этих важнейших систем гомеостаза определить новые аспекты механизмов многокомпонентного патогенеза ХОБЛ, приводящих к усилению воспалительного процесса, ремоделированию и

повреждению бронхолегочной ткани и патофизиологическим нарушениям у пациентов с данным заболеванием.

2.8. Исследование динамики исследуемых показателей на фоне медикаментозной коррекции у больных с обострением ХОБЛ

Определение в настоящей работе клеточно-молекулярных маркеров прогрессирования воспатения у больных с обострением ХОБЛ позволило провести исследование потенциальной возможности использования данных индикаторов для мониторинга эффективности проводимой стандартной и иммуномодулирующей терапии (парентеральной формы натрия дезоксирибонуклеата) у больных с обострением ХОБЛ II и III стадии заболевания.

Таблица 15

Изменение содержания растворимых дифференцировочных молекул (U/ml) у больных II стадии ХОБЛ на фоне различных схем терапии_

Стандартная терапия Стандартная терапия + натрий-ДНК

Здоровые Исходно После лечения исходно После лечения

sHLA-DR Офовь) 83,7±10,2 116,2±5,2 111,9±6,5 118,5±5,6 81,1±6,1*

SCD25 (кровь) 350,7±17,4 645,4±115,2 538,6±96,9 643Д±76,9 377,4±44,8*

sHLA-DR (КВВ) 51,5±12,3 91,5±6,5 60,5±4,5* 91,2±4,8 63,7±7,6*

sCD95 (КВВ) 139,6±6,8 201,4±18,4 248,6±21.5 2253±21,6 166,5±17,4*

sIILA-I:CD8 (КВВ) 648.2+148,9 1352,3±35,3 1136Д±Я1И6* 1442Д±137<4 ММЗ^ШЗД*

Примечание: * - р<0,05 относительно исходных показателей

При оценке динамики содержания растворимых дифференцировочных молекул на фоне различных схем терапии было установлено, что в группе больных II стадии при применении иммуномодулирующего препарата натрия-ДНК происходило статистически значимое снижение концентрации вНЬА-ВЯ, бС025 молекул в крови и бС095 белков в КВВ (табл. 15). В то же время, не зависимо от использования медикаментозной коррекции в этой группе пациентов снижалась

концентрация бНЬА-ОЯ молекул и комплексов зНЬЛ-1:СГ38 в КВВ по сравнению с исходными значениями.

После курса иммунотропной терапии у больных тяжелой степени ХОБЛ отмечалось, что исходно высокое содержание зНЬА-1, вНЬЛ-БЯ, яС050 и зСП54 белков как в крови, так и в КВВ существенно снижалось до показателей контрольной группы (табл. 16).

Таблица 16

Изменение содержания растворимых дифференцировочных молекул (U/ml) у больных III стадии ХОБЛ на фоне различных схем терапии_

Стандартная терапия Стандартная терапия + натрий-ДНК

Здоровые Исходно После лечения Исходно Посте лечения

sIILA-I (кровь) 1224,81209, 2 1981,5Й48,8 1728,1+298,6 2393,1+1433 1883,1+165,4*

sHLA-DR (кровь) 83,7±10,2 131,5+20,1 1132+14,1 155,1±19,3 100,6±12,6*

sCD50 (кровь) 351,4±45,7 5572+39,8 486,7+462 550,8±84,1 349,4±42,6*

sCD54 (кровь) 62,6±5,2 81,3±4,8 71,6+10,3 99,6±9,6 73,3±7,9*

SCD95 (кровь) 393,7±20,9 317,8+13,7 311,3+14,4 290,7±27,1 394Д±41,2*

sCD25 (кровь) 350,7±17,4 421,1±55,8 401,2+49,9 451,7+67,5 (Э0%) 3053+3^*

2892+1228 (50%) 449,6+16,34*

sHLA-I (КВВ) 298,2±13,6 621,7±34,3 528£±27,5* 561,7±53,6 289,1±51,1*

sHLA-DR (КВВ) 51,5±12,3 111,2±27,5 94,1±8,9 105Д±18,1 64,1±4,9 *

sCD50 (КВВ) 220,2±14,8 389ДЙ4Д 372,4+56,1 378,1±50,6 258,5±16,1*

SCD54 (КВВ) 62,6±5,2 81,3±4,8 71,6±10,3 99,6±9,6 73,3±7,9*

Примечание: * - р<0,05 относительно исходных показателей В этой группе пациентов использование иммуномодулирующего препарата приводило к увеличению сывороточного содержания растворимых эРах молекул до значений нормы. Содержание бСВ25 белков на фоне применения препарата

натрия-ДНК снижалось у 50% пациентов III стадии ХОБЛ, вместе с тем у другой половины больных наблюдалось, напротив, повышение уровня данных молекул по сравнению с исходными показателями.

Исследование мобильности клеточного звена иммунитета на фоне различных фармакологических схем лечения выявило, что после курса иммунотропной коррекции у лиц с умеренными бронхообструктивными нарушениями происходит снижение уровня СВ16+, СШ5+ клеток до показателей здоровых некурящих лиц, а также статистически значимое повышение уровня иммунорегуляторного индекса (табл. 17). При этом в данной группе больных нормализация количества СЭ8+ и НЬА-1+ клеток, а также достоверное увеличение уровня С054* мононуклеарных клеток отмечалось как на фоне стандартной терапии, так и при использовании иммунотропного препарата.

Таблица 17

Изменение относительного количества мононуклеарных клеток (%) у

больных II стадии ХОБЛ на фоне различных схем те ранни

Стандартная терапия Стандартная терапия + натрий-ДНК

Здоровые Исходно После лечения Исходно После лечения

CD8+ 23,3±3,4 38Д±3,2 28,9±2,5* 34,6±3,1 24,5±3,1*

CD4+/CD8+ 1,65±0,25 0,84±0,28 1,2±0,36 0,7±0,09 1,21±0,13*

CDI6+ 14,1±2,1 34,2±5,4 24,3±2,1 31,4±3,9 17,2±4,7 *

CD25+ 19,3±3,7 32,8±2,6 27,6±5,7 40,5±8,7 17,3±4,6*

CD54+ 64,4±5,1. 27,7±4,3 36,7±2,7* 27,8±2,2 37,6±3,2*

HLA-I+ 70,2±8,1 43,2±3,4 60,1±3,63* 40,3±4,1 55,8±4,5*

Примечание: * - р<0,05 относительно исходных показателей

У больных III стадии ХОБЛ включение в комплексную терапию парентеральной формы натрия-ДНК приводило к нормализации уровня CD4+, CD8 , CD 16 мононуклеарных клеток и соотношения CD47CD8.В то же время, характерное для больных тяжелой степени ХОБЛ исходно низкое содержание клеток, экспрессирующих рецепторы CD25 и CD38, увеличивалось до значений.

свойственных пациентам II стадии заболевания, независимо от выбранной схемы лечения (табл. 18).

Таблица 18

Изменение относительного количества мононуклеарных клеток (%) у больных III стадии ХОБЛ на фоне различных схем терапии_

Стандартная терапия Стандартная терапия + натри й-ДНК

Здоровые Исходно После лечения Исходно После лечения

ст+ 39.2±4,7 24,9±3,2 31^3,4 37,4±1,7 *

С08+ 23,3±3,4 37,5±2,8 32,3±3,1 35,3±4,7 203±1,8 *

С04+/С08+ 1,65±0,25 0,76±0,08 1,08±0,14 0,6±0,1 1,35±0,33 *

СШ6+ 14.1±2,1 32,3±4,4 22,2±2,78* 29,7±2,9 20,1±3,1 *

СОЭ8+ 19,9±1,4 16,6±2,7 25,8±3,2* 1 б,5±2,2 363±5Д*

С054+ 64.4±5Д 23,8±4,3 32,3±3,2 22,1±3,9 ззз±зд*

Примечание: * - р<0,05 относительно исходных показателей

Таким образом, включение в стандартную терапию иммунотропного препарата натрия-ДНК продемонстрировало тенденцию к нормализации большего спектра субпопуляций иммунных клеток до уровня здоровых некурящих лиц.

Таблица 19.

Динамика содержания ЮТ-а, 1Ь-8, 1Ь-1р, 1Ь-4, (пг/мл) в крови у

больных с обострением ХОБЛ средней степени тяжести до и после терапии.

Цитокины (пг/мл) Здоровые Стандартная терапия Стандартная терапия +натрий-ДНК

исходно После лечения исходно После лечения

ТЫИ-а 10,2±1,32 67,9±12,3 47,9±3,9 64,5±10,27 35,1±8,5*

1Ь-8 25,4±7,9 139,8±25,7 119,±41,7 171,7±19Д 78,7±24,2*

у-ЮТ 28,2±9,7 175,1±29,4 158,1±14,9 170,1±39,1 73,9±22,1*

1Ь1р 35,3±5,8 314,2±47,3 280,1±28,1 299,8±35,4 427,8±47,2*

1Ь-4 22,9±6,7 97,2±18,1 87,3±17,6 95,4±19,2 49,2±10,1*

Примечание: * - р<0,05 относительно исходных показателей

Применение иммуномодулирующей терапии отличалось существенным снижением продукции таких цитокинов как 1Ь-8, у-ШР и 1Ь-4 в крови у пациентов II стадии ХОБЛ и уменьшением уровня ТОР-а в группе пациентов III стадии заболевания по сравнению со стандартным лечением (табл.19).

В то же время у лиц с III стадией болезни отмечалось статистически значимое снижение уровня 1Ь-1р и 1Ь-8 независимо от выбранной схемы лечения (табл. 20). Однако, стоит отметить, что наиболее значительное снижение сывороточного уровня интерлейкина-ф в 4,5 раза (р=0,001) зафиксировано в группе пациентов, которым дополнительно назначалась иммунотропная терапия, в отличие от группы больных, получавших только стандартное лечение, и у которых отмечалось падение концентрации данного цитокина в 2,1 раза (р=0,01).

Таблица 20.

Динамика содержания 1Ь-8,1Ь-1р (пг/мл) в крови у больных с обострением

ХОБЛ III стадии до и после терапии

Цитокины (пг/мл) Здоровые стандартная терапия Стандартная терапия + натрий-ДНК

До лечения После лечения До лечения После лечения

11,-8 25,4+7,9 237,1±31,7 124,8±18,6* 228Д±28,3 103,8±17,7*

1Ь-1р 35,3+5,8 460,2±29,8 214,1±39,9* 444,8±53,6 97,6±33,2*

Примечание: * - р<0,05 относительно исходных показателей

Необходимо отметить, что у пациентов II стадии ХОБЛ после курса иммуномодулирующей терапии происходило достоверное повышениеуровняП_г1р.

Таким образом, использование препарата натрия дезоксирибонуклеата оказывает модулирующее влияние на уровень цитокинов, играющих важную роль в формировании патогенетических механизмов ХОБЛ.

При исследовании динамики концентрации нитритов в сыворотке крови на фоне применения иммуномодулирующего препарата значимые изменения в содержании Ы02" наблюдались только у больных III стадии ХОБЛ. Так, в этой группе пациентов было установлено достоверное снижение содержания нитритов в сыворотке крови с 6,64±0,87 до 4,31±0,6 мкмоль/л (в 1,54 раза р=0,036).

При применении парентеральной формы натрия-ДНК в группе больных II стадии ХОБЛ отмечалось достоверное снижение суммарной концентрации

метаболитов оксида азота в КВВ с 9,7±0,5 до 8,3±0,4 мкмоль/л (р=0,042). У пациентов III стадии заболевания независимо от схемы проведенной терапии наблюдалось выраженное снижение уровня VN027N03" в КВВ (стандартная терапия — с 10,6±1,6 до 6,78±1,03 мкмоль/мл, р=0,046. иммунотропная терапия — с 9,04±0,8 до 5,25±1,3 мкмоль/мл, р=0,021).

Применение иммуномодулирующей терапии оказывало статистически значимое снижение уровня ЭТ-1 в крови с 2,33±0,32 до 1,56±0,05 фмоль/мл (р=0,029) только у 50% пациентов III стадии ХОБЛ.

Сравнительный анализ динамики показателей оксидативного стресса на фоне различных схем фармакологической коррекции продемонстрировал, что использование иммунотропного препарата в сочетании со стандартной терапией приводило к снижению содержания диеновых коньюгатов у всех пациентов II стадии ХОБЛ с 0,252±0,01 до 0,198±0,012 усл.ед. (в 1,27 раза, р=0,012) и у больных III стадии ХОБЛ с 0,21 ±0,008 до 0,16±0,019 усл.ед. (в 1,31 раза, р=0,023). Назначение стандартной терапии не выявило существенных изменений в содержании данных продуктов ПОЛ.

Анализ динамики содержания ОШ у больных с обострением ХОБЛ показал, что при использовании стандартной терапии уровень ОШ достоверно снижался в 1,94 раза только у 38% больных III стадии заболевания (с 5,93±0,92 до 3,05±0,66 усл.ед., р=0,035). В группе пациентов средней степени тяжести после данной медикаментозной коррекции наблюдалась лишь незначительная тенденция к снижению содержания конечных продуктов в крови (р>0,05). В группе больных II стадии ХОБЛ после курса внутримышечных инъекций препарата натрия-ДНК установлено статистически значимое снижение уровня ОШ в среднем с 4,87±0,37 до 3,57±0,25 усл. ед. (в 1,36 раза, р=0,004). При III стадии ХОБЛ применение иммунотропной терапии способствовало падению содержания данных конечных продуктов в 1,55 раза (с 6,34±0,91 до 4,09±0,52 усл.ед., р=0,047).

На фоне как стандартного лечения, так и при использовании иммунотропного препарата, интенсивность ХЛ плазмы статистически значимо снижалась относительно исходного уровня у пациентов II стадии ХОБЛ. Однако, у больных, дополнительно получавших препараты натрия-ДНК, снижение

показателя Imax после лечения было более выраженным (в 2,55 раза, р=0,046) по сравнению с группой больных, которым изначально применялась терапия, рекомендованная GOLD (в 1,7 раза р=0,028). Среди пациентов III стадии ХОБЛ обнаружено снижение интенсивности ХЛ сыворотки крови в 1,34 раза (с

0.1679±0,0145 до 0,1244±0,013 отн.люм.ед., р=0,034) относительно исходных показателей только у лиц, которым проводилась иммунотропная терапия.

Использование препарата натрия-ДНК приводило к выраженному увеличению значений АОА в 1,6 раза по сравнению с исходными значениями (р=0,039) в группе больных тяжелой степени ХОБЛ.

У пациентов III стадии ХОБЛ на фоне имммунотропного лечения при тяжелой степени заболевания у 57% пациентов выявлено выраженное снижение с imax Ne 0,16+0,01 до 0,066±0,038 отн.люм.ед. (р=0,028), а у 33% больных отмечалось, наоборот, статистически значимое повышение индуцированной ХЛ нейтрофилов относительно исходных значений (с 0,11±0,013 до 0,157±0,009 отн.люм.ед., р=0,012).

Обобщая полученные результаты проведенного сравнительного исследования по оценке эффективности двух схем медикаментозной коррекции, можно утверждать, что применение парентеральной формы препарата ДНК-натрия у пациентов ХОБЛ II и III стадии имеет определенное преимущество и оказывает положительный эффект на выявленные в настоящей работе патогенетические маркеры данной патологии.

ВЫВОДЫ:

1. Растворимые дифференцировочные молекулы sHLA-I, sHLA-II, sCD54, sCD95, sCD8, sCD25 и комплекс sHLA-I:CD8 могут выступать в качестве маркеров прогрессирования системного и топического воспаления и тяжести ХОБЛ. Прогрессирование бронхиальной обструкции у пациентов с обострением ХОБЛ сопряжено с повышением содержания растворимых молекул гистосовместимости I и II класса, sCD54 молекул, комплексов sHLA-I:CD8 и снижением уровня SCD95, sCD8 белков в сыворотке крови. Ухудшение бронхиальной проходимости у больных ХОБЛ сочетается с увеличением содержания sHLA-I, sHLA-II молекул в

конденсате выдыхаемого воздуха и индуцированной мокроте, повышением концентрация зСЦ54 молекул, снижением уровня бСБ8 белков в индуцированной мокроте и содержания бСВ95, бСБ25 молекул в конденсате выдыхаемого воздуха.

2. Активация воспаления при ХОБЛ характеризуется изменением иммунофенотипа клеток иммунной системы на топическом и системном уровне. У всех больных ХОБЛ обнаружено повышение относительного количества циркулирующих С016+, эндобронхиальных СОЭ8+ мононуклеарных клеток и снижение числа системных клеток, экспрессирующих молекулы адгезии 1САМ-1 и 1САМ-3. Установленная сопряженность содержания циркулирующих СБ54+ мононуклеарных клеток и прогрессировать! бронхиальной обструкции позволяет рассматривать данные компоненты клеточного иммунитета в качестве маркеров тяжести ХОБЛ.

3. У больных с обострением ХОБЛ формируется цитокиновый стресс, который проявляется накоплением цитокинов 1Ь-1р, 1Ь-8, у-ЮТ, ЮТ-а, 1Ь-4 в крови и индуцированной мокроте. Нарушение бронхиальной проходимости у пациентов с ХОБЛ ассоциировано с повышением уровня 1Ь-8, ЮТ-а в индуцированной мокроте и увеличением топического и сывороточного содержания у-ГМР, что позволяет рассматривать данные медиаторы в качестве маркеров системного и топического воспаления при ХОБЛ.

4. Усиление активности свободнорадикалыюго окисления при обострении ХОБЛ сопровождается: увеличением сывороточного содержания диеновых коньюгатов и усилением хемилюминесценции сыворотки крови у пациентов на любой стадии заболевания; прогрессивным повышением уровня оснований Шиффа у больных средней и тяжелой степени тяжести ХОБЛ; увеличением генерации активных форм кислорода нейтрофилами при I и II стадии, значительным снижением интегрального антиоксидантного показателя в группе лиц с тяжелыми бронхообструктивными нарушениями.

5. Обострение ХОБЛ II и III стадии характеризуется формированием нитрозивного стресса, что обусловлено избыточным накоплением нитритов в сыворотке крови и повышением суммарной концентрации нитритов/нитратов в дыхательных путях. Прогрессирование тяжести ХОБЛ сочетается с нарастанием

избыточной концентрации эндотелина-1 в крови. Отрицательная корреляция между параметром функции внешнего дыхания «емкость вдоха» и уровнем эндотелина-1 в крови у больных ХОБЛ позволяет рассматривать последнего в качестве маркера прогрессирования нарушений вентиляционной функции и топического воспаления.

6. Выявленные корреляционные связи между параметрами оксидативного, нитрозивного стресса, уровнем эндотелина-1 и содержанием растворимых дифференцировочных молекул, относительным количеством субпопуляций мононуклеарных клеток и уровнем цитокинов в различных биологических средах позволили определить и дополнить механизмы развития воспаления и прогрессирования ХОБЛ.

7. Установлена противовоспалительная эффективность применения парентеральной формы препарата натрия дезоксирибонуклеата в составе стандартной терапии у больных с обострением ХОБЛ II и III стадии, характеризующаяся модулирующим влиянием на показатели цитокинового статуса, клеточного иммунитета, оксидативного и нитрозивного стресса, содержание растворимых дифференцировочных молекул и уровень эндотелина-1.

Список работ, опубликованных по теме диссертации.

1. CD-маркеры хронического обструктивного бронхита. / Постникова Л.Б., Кубышева Н.И., Ишанова О.С. // Материалы 5 Нац. Конгресса иммунологов и аллергологов. - Москва, 2002. — С.43.

2. Особенности метаболизма провоспалительного цитокина (интерлейкина-lß) и оксидативной активности нейтрофилов при различных формах хронического бронхита. / Постникова Л.Б., Алексеева О.П., Кубышева Н.И., Ишанова О.С. // Терапевтический архив. — №3. — 2004. — С-40-43.

3. Перспективы применения антиоксидантов в клинике внутренних болезней. / Постникова Л.Б., Соодаева С.К., Лисица A.B., Кубышева Н.И.. Ермолаева Е.В. // Атмосфера. Пульмонология и аллергология. — 2004. —№ 1. - С.55-56.

4. Динамика продукции интерлейкина-lß и фактора некроза опухоли-а у больных с обострением хронической обструктивной болезни легких. / Постникова Л.Б., Алексеева О.П., Кубышева Н.И. // Нижегородский медицинский журнал. — 2004. - №2. - С.36-39.

5. Значение биохимических показателей слюны в диагностике обострений хронической обструктивной болезни легких. / Постникова Л.Б., Алексеева О.П., Кубышева Н.И.. Горшкова Т.Н. // Клиническая лабораторная диагностика. - 2004. -№10. - С. 16-18.

6. Характеристика лнмфоидных субпопуляций крови у курильщиков без нарушений функции внешнего дыхания и страдающих хронической обструктивной болезнью легких. / Постникова Л.Б., Кубышева Н.И.. Максимова A.B. // Нижегородский медицинский журнал. Здравоохранение Поволжья. - 2005. - №2. - С.75-78.

7. Связь компонентов системного Т-клеточного иммунитета с индикаторами топического воспаления при ХОБЛ. / Постникова Л.Б., Кубышева Н.И., Максимова A.B., Ишанова О.С. // Материалы 15 Национального Конгресса по болезням органов дыхания. — Москва, 2005. - С.241.

8. Современные лабораторные технологии в диагностике хронической обструктивной болезни легких. / Постникова Л.Б., Кубышева Н.И., Максимова A.B., Ишанова О.С. // Актуальные вопросы внутренней патологии. Сборник научных трудов, посвященных 10-летию кафедры внутренних болезней Военно-медицинского института ФСБ России. - Н.Новгород, 2005. - С.128 - 133.

9. Сравнительная оценка системного оксидативного стресса у здоровых курильщиков и больных ХОБЛ. / Постникова Л.Б., Кубышева Н.И., Максимова A.B. // Материалы 15 Национального Конгресса по болезням органов дыхания. — Москва, 2005,-С.63.

10. Цитооксидативные маркеры хронической обструктивной болезни легких. / Кубышева Н.И., Постникова Л.Б., Максимова A.B., Лазарева Л.Г. // Сборинк трудов четвертой национальной научно-практической конференции «Активные формы кислорода, оксид азота, антиоксиданты и здоровье человека». - Смоленск, 2005.-С. 165-166.

11. Гематосаливарные механизмы в развитии хронической обструктивной болезни легких. / Постникова Л.Б., Алексеева О.П., Кубышева Н.И.. Горшкова Т.Н., Соодаева С.К. // Пульмонология. - 2006. -№3. - С.77-80.

12. Системное воспаление: перспектива исследований, диагностики и лечения хронической обструктивной болезни легких. / Кубышева Н.И., Постникова Л.Б. // Клиническая геронтология. —2007. —№ 7. — С.57-61.

13. Субпопуляционный состав Т-лимфоцитов крови у пожилых пациентов с обострением хронической обструктивной болезни легких. / Кубышева Н.И., Постникова Л.Б., Жогота A.B., Костров В.А., Ишанова О.С. // Клиническая геронтология. — 2007. — №7. — Т. 13. - С. 17-21.

14. Soluble forms of differentiated antigens in COPD. / Postnikova L.B., Kubysheva N.I., Novikov V.V. // Eur. Resp. J. 30 (51). Abstracts 17 th ERS Annual Congress. -Stockholm. 2007.-№2421.

15. Circulating CD50+, CD54+ cells in patients with COPD. / Postnikova L.B., Kubysheva N.I., Soodaeva S.K., Ishanova O.S. // Eur. Resp. J. 31 (51). Abstracts 17 th ERS Annual Congress. - Stockholm. 2007. -№ 2829.

16. Диагностическая ценность метода индуцированной мокроты при ХОБЛ. / Постникова Л.Б., Кубышева Н.И., Костров В.А., Ишанова О.С. // Сборник трудов XVII национального конгресса по болезням органов дыхания. — Казань, 2007. -С.242.

17. Участие CD50+, CD54+, CD95+ Т-лимфоцитов в развитии ХОБЛ. / Кубышева Н.И., Постникова Л.Б., Жогота A.B., Костров В.А., Ишанова О.С. // Сборник трудов XVII национального конгресса по болезням органов дыхания. — Казань, 2007.-№628, С.242.

18. Роль растворимых дифференцировочных антигенов в развитии ХОБЛ. / Кубышева Н.И., Постникова Л.Б., В.А. Костров, Ишанова О.С. // Сборник трудов XVII национального конгресса по болезням органов дыхания. — Казань, 2007. -№631, С.243.

19. Эффективность иммуномодулятора Деринат у больных с обострением ХОБЛ. / Постникова Л.Б., Кубышева H.H.. Конторщикова К.Н., Миндубаев Р.З., Болдина М.В..// Клиническая геронтология. - 2008. — №6. — 23-26.

20. Возможность оптимизации диагностики и совершенствования терапии больных с обструктивными заболеваниями легких пожилого возраста в условиях городского пульмонологического центра. / Постникова Л.Б.,

Кубышева Н.И.. Болдипа М.В., Дубровная Н.П., Миндубаев Р.З. // Клиническая геронтология. — 2008. - №6. — 30-34.

21. Хроническая обетруктивная болезнь легких (особенности патогенеза и лечения). / Постникова Л.Б., Кубышева Н.И.. Монография. - Н. Нижний Новгород: Гладкова О.В., 2008. - 153 с.

22. Level of Fas-antigen of peripheral blood, induced sputum and expired air condensate in COPD. / Kubysheva N.I., Postnikova L.B., Novikov V.V. // Eur. Resp. J. 32 (52). Abstracts 18 th ERS Annual Congress. - Berlin. 2008. - № 2162.

23. Treatment of COPD exacerbations is able to influence the mononuclear cells level of the peripheral blood. / Postnikova L.B., Kubysheva N.I., Novikov V.V., Mindubaev R.Z., Boldina M.V.. // Eur. Resp. J. 32 (52). Abstracts 18 th ERS Annual Congress. -Berlin, 2008.-№4482.

24. Влияние иммуномодулятора Деринат на состояние системы оксиданты-антиоксиданты при обострении ХОБЛ. / Кубышева Н.И., Постникова Л.Б., Миндубаев Р.З, Болдина М.В.. // Сборник тезисов XV Российского Национального Конгресса «Человек и лекарство». - Москва, 2008. - № 577.

25. Клиническая эффективность Дерината при обострении ХОБЛ. / Постникова Л.Б., Кубышева Н.И., Миндубаев Р.З., Ишанова О.С., Болдина М.В. // Сборник тезисов XV Российского Национального Конгресса «Человек и лекарство». -Москва, 2008. -№ 628.

26. Содержание растворимых форм дифференцировочных антигенов в конденсате выдыхаемого воздуха у больных ХОБЛ на фоне применения препарата Деринат. / Кубышева Н.И., Постникова Л.Б, Новиков В.В.. // Сборник трудов XVIII конгресса по болезням органов дыхания. - Екатеринбург, 2008. - №455., С. 190.

27. Изменение про-антиоксидантной системы у больных ХОБЛ на фоне применении иммуномодулятора Деринат. / Кубышева Н.И., Постникова Л.Б. // Сборник трудов XVIII конгресса по болезням органов дыхания. - Екатеринбург, 2008.-№456. С.190.

28. Динамика содержания эндотелина-1 крови у больных с обострением ХОБЛ. / Постникова Л.Б., Кубышева Н.И., Миндубаев Р.З., Болдина М.В. // Сборник

трудов XVIII конгресса по болезням органов дыхания. - Екатеринбург, 2008. - № 496. С.207.

29. Содержание растворимых дифференцировочных антигенов в конденсате выдыхаемого воздуха у больных с ХОБЛ. / Кубышева Н.И., Постникова Л.Б., Новиков В.В., Миндубаев Р.З., Костров В.А. // 5-й иммунологический форум. Сборник тезисов. - Санкт-Петербург, 2008. - С. 265.

30. Исследование содержания Fas-антигенов у больных с ХОБЛ. / Кубышева Н.И., Постникова Л.Б., Конторщикова К.Н., Миндубаев Р.З. // 5-й иммунологический форум. Сборник тезисов. — Санкт-Петербург. 2008.-С265.

31. Клинико-иммунологическая эффективность иммуномодулятора Деринат у больных с обострением ХОБЛ. / Постникова Л.Б., Кубышева Н.И., Миндубаев Р.З., Костров В.А.. // Российские лекарственные препараты на основе ДНК -медицина завтрашнего дня. Сборник статей. — Москва, 2008. — С.12-20.

32. Виутрисердечная и легочная гемодинамика и эндотелин-1 у пожилых больных хронической обструктивной болезнью легких. / Постникова Л.Б., Костров В.А., Брунова A.B., Кубышева Н.И.. Болдина М.В., Миндубаев Р.З. И Клиническая геронтология. - 2009. - №6-7. — С.26-30.

33. Растворимые ICAM-1 и ICAM-3 антигены при хронической обструктивной болезни легких. / Кубышева Н.И.. Постникова Л.Б., Преснякова Н.Б., Королева В.В., Караулов A.B., Новиков B.B. II Иммунология. — 2009. — № 1.-С.55-57.

34. Содержание растворимого CD95 антигена и CD95+ мононуклеарных клеток в биологических жидкостях больных с хронической обструктивной болезнью легких. I Кубышева Н.И., Постникова Л.Б., Преснякова Н.Б., Новиков В.В. // Клиническая лабораторная диагностика. - 2009. - № 3. - С.22-23.

35. Содержание растворимых антигенов CD25, CD38 в биологических средах больных с хронической обструктивной болезнью легких. / Кубышева Н.И.. Постникова Л.Б., Преснякова Н.Б., Евсегнеева И.В., Новиков В.В., Караулов A.B. // Иммунология. - 2009. - №4. - С.217-220.

36. The changes of nitric oxide metabolism and soluble forms of differentiated antigens levels in exhaled breath condensate (EBC) in Chernobyl clean-up workers with COPD. / Soodaeva S.K., Klimanov I.A., Marchenko T.A., Kubysheva N.I., Lisitsa A.V. // Eur. Resp. J. 34 (53). Abstracts 19 th ERS Annual Congress. - Vienna, Austria, 2009. -№ 1062.

37. Soluble ICAM-1 and ICAM-3 antigens in chronic obstructive pulmonary disease. / Postnikova L„ Kubysheva N., Novikov V. // Eur. Resp. J. 34 (53). Abstracts 19 th ERS Annual Congress. - Vienna, Austria, 2009. - № 2149.

38. Circulating endothelin-1 levels in patients with COPD. / Postnikova L., Kubysheva N., Boldina M.. // Eur. Resp. J. 34 (53). Abstracts 19 th ERS Annual Congress. - Vienna, Austria, 2009. - № 4482.

39. Исследование содержания эндотелина-1 у больных ХОБЛ на фоне иммуномодулирующей терапии. / Постникова Л.Б., Кубышева Н.И., Миндубаев Р.З., Болдина М.В., Кузьмина Е.И. // Сборник трудов XIX Национального Конгресса по болезням органов дыхания. - Москва, 2009. - С. 147.

40. Изменения метаболизма оксида азота и уровней растворимых форм дифференцировочных антигенов в конденсате выдыхаемого воздуха у ликвидаторов аварии на ЧАЭС с ХОБЛ. / Соодаева С.К., Климанов И.А., Марченко Т.А., Постникова Л.Б., Кубышева Н.И., Лисица А.В. // Сборник трудов XIX Национального Конгресса по болезням органов дыхания. — Москва, 2009. - №444. С.388.

41. Динамика содержания метаболитов оксида азота в конденсате выдыхаемого воздуха у больных с обострением ХОБЛ. / Миндубаев Р.З. Постникова Л.Б., Кубышева Н.И., Абанин A.M., Болдина М.В. // Сборник трудов XIX Национального Конгресса по болезням органов дыхания. - Москва, 2009. - №475. с. 414.

42. Изучение профиля провоспапительных цитокинов у больных с обострением ХОБЛ. / Миндубаев Р.З. Постникова Л.Б., Кубышева Н.И., Абанин A.M., Болдина М.В. // Сборник трудов XIX Национального Конгресса по болезням органов дыхания. - Москва, 2009. -№476. С.415.

43. Участие растворимых молекул HLA I класса, CD8 и их комплексов в развитии хронической обструктивной болезни легких. / Кубышева Н.И.. Постникова JI. Б., Бвсегнеева И. В., Преснякова Н. Б., Королева В. В., Новиков В. В., Караулов А. В. // Иммунология. - 2010. - № 2. - С.97-100.

44. Использование дерината в иммуномодулирующей терапии больных хронической обструктивной болезнью легких. / Кубышева Н.И., Постникова Л.Б., Миидубаев Р.З., Новиков В.В. // Казанский медицинский журнал. - 2010. -Т.91.-№1.-С. 16-19.

45. Особенности содержания эндотелина-1 и эндобронхиалыюй концентрации метаболитов оксида азота при хронической обструктивной болезни легких. / Постникова Л.Б., Соодаева С.К., Кубышева Н.И.. Болдина М.В., Миндубаев Р.З. // Пульмонология. - 2010 - № 3. - С.108-112.

46. Содержание иитерлейкина-8, растворимых молекул адгезии и молекул гистосовместимости I класса у больных хронической обструктивной болезнью легких на фойе иммунотропной терапии. / Кубышева Н.И., Постникова Л.Б., Новиков В.В., Евсегнеева И. В., Преснякова Н.Б., Королева В.В., Миндубаев Р.З., Караулов A.B. // Иммунопатология, аллергология, инфектология. - 2010. -№ 2.-С. 18-22.

47. Участие растворимых молекул гистосовместимости I класса в развитии хронической обструктивной болезни легких. / Кубышева Н.И., Постникова Л.Б., Преснякова Н.Б., Новиков В.В. // Вестник Нижегородского университета им.Н.ИЛобачевского. - 2010. - № 2. - часть 2. - С.541-543.

48. Markers of apoptosis and nitrosative stress in chronic obstructive pulmonary disease. / Kubysheva N., Postnikova L., Mindubaev R., Novikov V., Zhogota A., Soodaeva S.K. //Eur. Respir. J. - 2010. - Vol.36, suppl.54. - P.786-787.

49. Содержание ИЛ-17 в крови больных ХОБЛ. / Болдина М.В., Постникова Л. Б., Кубышева Н.И., Соодаева С.К., Брунова A.B. // Сборник трудов XX Национального Конгресса по болезням органов дыхания. — Москва, 2010 - Москва, 2010.-С.428.

50. Роль цитокинового и нитрозольного стресса при обострении ХОБЛ. / Постникова Л.Б., Кубышева Н.И., Соодаева С.К., Миндубаев Р.З., Болдина М.В. //

Сборник трудов XX Национального Конгресса по болезням органов дыхания. -Москва. 2010.-С.469.

51. Участие апоптотических маркеров в развитии ХОБЛ. / Кубышева Н.И., Постникова Л. Б., Соодаева С.К.. Новиков В.В., Миндубаев Р.З. // Сборник трудов XX Национального Конгресса по болезням органов дыхания. - Москва, 2010.— С.469-470.

52. Динамика метаболизма оксида азота в конденсате выдыхаемого воздуха (КВВ) у пациентов с ХОБЛ - ликвидаторов аварии ЧАЭС. / Соодаева С.К., Климанов И.А., Новоселов В.И., Марченко Т.А., Кубышева Н.И., Постникова Л.Б. // Сборник трудов XX Национального Конгресса по болезням органов дыхания. — Москва, 2010. - С.480.

53. Нитрозативный и цитокиновый статусы при ХОБЛ и хронической ишемии головного мозга / Соодаева С.К., Ли Т.В., Климанов И.А., Кубышева Н.И., Постникова Л.Б., Миронова О.П., Федин А.И. // Сборник трудов XXI Национального Конгресса по болезням органов дыхания. - Уфа, 2011. - С.161-162.

54. Изменение метаболизма оксида азота при бронхиальной астме. / Соодаева С.К., Климанов И.А., Запруднова Е.А., Кубышева Н.И.. Чучалин А.Г. // Сборник трудов XXI Национального Конгресса по болезням органов дыхания. - Уфа, 2011. -С. 162.

55. Корреляционные отношения провоспалительных цитокинов и давления в легочной артерии у больных ХОБЛ. / Постникова Л.Б., Болдина М.В., Кубышева Н.И., Соодаева С.К., Брунова A.B. // Сборник трудов XXI Национального Конгресса по болезням органов дыхания. - Уфа, 2011. - С.386.

56. Содержание интерлейкина-17 и интерлейкина-18 у больных ХОБЛ и бронхиальной астмы. / Постникова Л.Б., Болдина М.В., Кубышева Н.И., Соодаева С.К. // Сборник трудов XXI Национального Конгресса по болезням органов дыхания. - Уфа, 2011. -С.387.

57. Соотношение стабильных метаболитов оксида азота в конденсате выдыхаемого воздуха у ЛПА на ЧАЭС с ХОБЛ. / Климанов И.А., Соодаева С.К., Марченко Т.А., Постникова Л.Б., Кубышева Н.И // Сборник трудов XXI Национального Конгресса по болезням органов дыхания. - Уфа, 2011. - С.419.

58. Nitrosative and cytokine status in patients with COPD and chronic cerebrovascular diseases (CCVD). / Soodaeva S„ Li Т., Klimanov I., Lisitsa A., Kubysheva N., PostnikovaL., Mironova О., Fedin A. //Eur. Resp. J. - 2011, Vol. 38, Suppl.55.-P.706.

59. Патент на изобретение № 2245550. Способ прогнозирования бронхиальной обструкции при хроническом бронхите. / Постникова Л.Б., Кубышева Н.И. Заявка № 2002111601/15 (012227) от 29.04.2002. Опубл. 27.01.2005.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

АОА — антиоксидантная активность

АФК — активные формы кислорода

ДК — диеновые коньюгаты

Евд — емкость вдоха

ИМ — индуцированная мокрота

ИРИ - иммунорегуляторный индекс

ИФА — иммуноферментный анализ

КВВ — конденсат выдыхаемого воздуха

Ка - коэффициент клеточной активности

натрий ДНК — натрий дезоксирибонуклеат

ОФВ] — объем форсированного выдоха за первую секунду

ОШ - основания Шиффа

ПОЛ - перекисное окисление липидов

СРО — свободнорадикальное окисление

ФВД - функция внешнего дыхания

ФЖЕЛ - форсированная жизненная емкость легких

ХЛ - хемилюминесценция

ХОБЛ - хроническая обструктивная болезнь легких ЭТ-1 -эвдотелин-1

CD - дифференцировочные мембранные антигены

GOLD - Глобальная инициатива по диагностике, лечению и профилактике хронической

обструктивной болезни легких

ICAM - молекулы межклеточной адгезии

Imax — хемилюминесценция сыворотки крови, индуцированная перекисью водорода imax Ne - хемилюминесценция нейтрофилов, индуцированная опзонизированным зимозаном

y-INF — гамма-интерферон IL — интерлейкины

ispont Ne - спонга!шая хемилюминесценция нейтрофилов; HLA — главный комцлекс гисгосовмесгимости NK — натуральные киллеры NO2" — нитриты

SNOf/NOj" — суммарная концентрация нитратов и нитритов TNF-a — фактор некроза опухоли- a

Кубышева Наиля Исхаковна

МОЛЕКУЛЯРНЫЕ И КЛЕТОЧНЫЕ МАРКЕРЫ ВОСПАЛЕНИЯ ПРИ ХРОНИЧЕСКОЙ ОБСТРУКТИВНОЙ БОЛЕЗНИ ЛЕГКИХ

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соисканне ученой степени доктора биологических наук

Подписано в печать 06.04.12. Формат 60x84/16 Усл. печ. л. 2,79. Тираж 100 экз. Заказ № 533

Отпечатано «Издательский салон» ИП Гладкова О.В. 603022, Нижний Новгород, Окский съезд, 2, оф. 501 тел./факс: (831)439-45-11; тел.: (831) 416-01-02

Хроническая обструктивная болезнь легких (ХОБЛ) является серьезной проблемой пульмонологии и относится к одним из самых распространенных заболеваний в мире. Рост заболеваемости при ХОБЛ, неуклонное снижение качества жизни и высокие экономические потери подчеркивают актуальность данной патологии. Это заболевание приводит к социальной дезадаптации больного, а также характеризуется высокой смертностью.

ХОБЛ - заболевание, характеризующееся ограничением скорости воздушного потока с развитием не полностью обратимой бронхиальной обструкцией. У больных ХОБЛ ограничение скорости воздушного потока, как правило, неуклонно прогрессирует, и связано это с развитием фиброза и сужением бронхов, потерей эластичности легочной ткани. Все это вызвано аномальной воспалительной реакцией легочной ткани на раздражение различными патогенными частицами и газами, чаще всего связанные с курением табака [4].

В последние годы внимание ученых обращено к концепции, рассматривающей ХОБЛ не только как патологию респираторной системы (т.е. как топическое или местное воспаление), но также как системное расстройство, для которого характерно развитие дисфункции скелетной мускулатуры и миопатии, снижение массы тела, а также системный воспалительный процесс.

Несмотря на достигнутые успехи в изучении ХОБЛ, до сих пор для данной патологии сохраняется много нерешенных проблем. Учитывая широкий прогрессивный рост данного заболевания и высокую социально-экономическую значимость ХОБЛ, в настоящее время разработан международный регламентирующий документ, который получил название «Глобальная инициатива по диагностике, лечению и профилактике хронической обструктивной болезни легких» - «Global initiative for chronic obstructive lung disease» (GOLD) [219]. В этом документе намечены перспективы дальнейших исследований патогенеза ХОБЛ.

В общем спектре актуальных задач по проблеме ХОБЛ следует выделить область поиска новых маркеров топического и системного воспаления для совершенствования диагностики заболевания, стадии тяжести заболевания. На современном этапе верификация диагноза ХОБЛ основана на анамнетических данных, клинических симптомах и функциональных параметрах функции внешнего дыхания, определяемых методом компьютерной спирометрии. Однако, данные методы не позволяют объективно оценить выраженность воспалительного процесса, происходящего как на местном, так и на системном уровнях.

В настоящее время поиск новых критериев воспаления при ХОБЛ основан как на уже известных патогенетических механизмах развития данного заболевания, так и на новых достижениях современной иммунологии и биохимии.

Общепризнано, что центральную роль в повреждении и ремоделирования бронхолегочной ткани при ХОБЛ играют три основных составляющих: дисбаланс в протеазно-антипротеазной системе, оксидативный стресс и воспалительный процесс.

Большое внимание исследователей уделено изучению оксидативного стресса и антиоксидантной защиты в респираторной системе [75, 366, 367, 374]. В настоящее время является доказанным повышение содержания продуктов свободнорадикального окисления в конденсате выдыхаемого воздуха, индуцированной мокроте и в бронхоальвеолярной лаважной жидкости у больных ХОБЛ [180, 350, 368, 374]. Вместе тем, полученные на сегодняшний день результаты изучения системных компонентов оксидативного стресса у больных ХОБЛ в зависимости от стадии заболевания носят единичный и фрагментарый характер, что требует более детального и комплексного изучения.

Современными исследователями подчеркивается, что течение и прогноз ХОБЛ в значительной степени определяются состоянием иммунной системы и отдельных ее факторов. Известно, что в прогрессировании хронического топического воспаления при ХОБЛ участвуют различные клетки иммунной системы - нейтрофилы, моноциты, альвеолярные макрофаги, оказывающие существенную роль в деструктивных процессах в бронхолегочной ткани больных. За последнее время во многих публикациях проявляется интерес к изучению роли Т-лимфоцитов в патогенезе ХОБЛ [128, 160, 173, 408]. Некоторые исследователи предлагают рассматривать воспалительную реакцию в дыхательных путях у больных ХОБЛ как «специфический иммунитет к сигаретам», сопровождающийся адаптивной реакцией Тлимфоцитов и их основных субпопуляций CD4+ и CD8+. При биопсии у пациентов данной патологии обнаруживается большое количество данных клеток, чем при отсутствии ХОБЛ.

В то же время, необходимо отметить, что роль циркулирующих клеток лимфоцитарного звена в реализации хронического воспаления ХОБЛ в настоящее время остается малоизученной. Кроме того, исследование и топических и системных клеточных факторов иммунитета практически не рассматривается с позиций степени выраженности воспалительной реакции. В связи с этим, одним из перспективных направлений в изучении воспалительного ответа при ХОБЛ может служить сравнительное исследование циркулирующих и эндобронхиальных Т-клеток у больных ХОБЛ в зависимости от тяжести течения заболевания.

Детальной проработке требует уточнение роли и таких молекулярных биомаркеров воспаления при ХОБЛ как цитокины. Известно, что данные молекулярные компоненты регулируют иммунный ответ, участвуя в межклеточной кооперации. Известно, что одним из основных патогенетических факторов в развитии воспаления при ХОБЛ является IL-8, играющий важную роль в активации и миграции в бронхолегочную ткань нейтрофильных и лимфоцитарных клеток. В настоящее время расширяется спектр исследований по оценке влияния других цитокинов на механизмы прогрессирования воспаления ХОБЛ. Однако, сведения, касающиеся изучения роли данных молекулярных биомаркеров в различных условиях воспаления крайне мало, и поэтому необходимо проведение более детального исследования.

В настоящее время в современной иммунологии интенсивно изучается прогностическая, мониторинговая и диагностическая значимость различных растворимых форм дифференцировочных молекул при различных патологических процессах. Растворимые формы мембранных антигенов относятся к новому классу иммунорегуляторных молекул, включенные в глобальную иммунологическую сеть и участвующие в механизмах иммунного ответа на разных этапах ее реализации. Необходимо подчеркнуть, что сведения, касающиеся участия данных молекулярных форм в патогенезе ХОБЛ единичны и противоречивы [424, 468], что подчеркивает важность дальнейшего изучения роли растворимых дифференцировочных молекул в развитии воспаления данной патологии.

Согласно регламентирующему документу GOLD одной из актуальной задачей ХОБЛ является внедрение неинвазивных методов диагностики. К одним из современных методов диагностики топического воспаления ХОБЛ является исследование различных маркеров в конденсате выдыхаемого воздуха (КВВ). В составе КВВ на сегодняшний день выявлено более 100 соединений, в той или иной степени являющихся индикаторами различных патологических процессов, происходящих в тех или иных отделах бронхолегочной системы [118, 133]. С появлением новых методик и повышением их чувствительности, число этих маркеров стремительно увеличивается. Среди наиболее интенсивно исследуемых молекул в КВВ при патологиях респираторной системы особое место занимают маркеры нитрозивного стресса: активные формы азота (АФА), 3-нитротирозин, нитрозотиолы. Наиболее перспективная роль отводится определению стабильных метаболитов азота, таких как нитрат- и нитрит-анионы [118].

Научных публикаций, касающихся исследования содержания метаболитов оксида азота в КВВ у больных ХОБЛ в доступной нами литературе не встречено. Поэтому исследование метаболизма оксида азота в КВВ является перспективным направлением для диагностики и мониторирования проводимой терапии у больных ХОБЛ.

Кроме того в настоящее время все больший интерес исследователей вызывает определение в КВВ молекул, в той или иной степени вовлеченных в воспалительные реакции, т.к. последние являются ключевыми звеньями в развитии большинства легочных патологий, что позволяет неинвазивно оценить состояние слизистой оболочки бронхиального дерева. В связи с этим, на наш взгляд одним из актуальных и интересных направлений в изучении топического воспалительного ответа при ХОБЛ может быть определение в данной биологической среде содержания растворимых дифференцировочных молекул у больных различной тяжестью течения заболевания.

Другим неинвазивным методом оценки выраженности воспалительного процесса в легких служит исследование индуцированной мокроты. Преимущество этого метода состоит в том, что с его помощью можно исследовать не только молекулярные компоненты, как в КВВ, но также и клеточный состав из различных отделов дыхательных путей. Использование данных методик, на наш взгляд, поможет наиболее объективно провести оценку и анализ топических воспалительных процессов при ХОБЛ.

На современном этапе исследования ХОБЛ существует необходимость сравнительного изучения активности топического и системного воспаления у больных данной патологии как в различные периоды заболевания, так и на фоне проводимой терапии. В этом случае появляется возможность выбора чувствительных критериев для оценки эффективности противовоспалительной терапии.

На сегодняшний день до конца нерешенной проблемой ХОБЛ является недостаточная эффективность стандартной терапии, что требует поиска препаратов, обладающих противовоспалительной активностью [15]. С этих позиций рациональным в лечении обострения ХОБЛ рассматривается дополнительное применение препаратов с иммумодулирующим и антиоксидантным действием, что, вероятно, позволит снизить темпы прогрессирования хронического воспаления, бронхиальной обструкции. Немногочисленные исследования, касающиеся применения иммуноориентированных препаратов у больных ХОБЛ, показали положительный клинический и ггрсггивоспалительный эффект [15,80,165,166].

Одним из хорошо изученных иммуномодуляторов является препарат нуклеиновых кислот - дезоксирибонуклеат натрия, оказывающий влияние на различные звенья иммунитета и обладающий антирадикальными свойствами. В связи с этим, является привлекательным и перспективным исследование влияния данного иммуномодулятора на различные патогенетические факторы у больных с обострением ХОБЛ.

Таким образом, дальнейшее изучение патогенетических механизмов и, в частности, особенностей функционирования составляющих иммунной системы, показателей свободнорадикального окисления у больных ХОБЛ, позволит определить и разработать дополнительные маркеры активности и тяжести хронического воспаления, совершенствовать оценку эффективности проводимой терапии и уточнить противоспалительную значимость иммуномодулирующей терапии при обострении данной патологии.

Цель исследования:

Исследовать патогенетические механизмы развития хронической обструктивной болезни легких на основе определения клеточно-молекулярных маркеров системного и топического воспаления при обострении заболевания и установить критерии мониторирования эффективности иммуномодулирующей терапии.

Задачи исследования:

1. Исследовать изменения содержания растворимых дифференцировочных молекул CD8, CD25, CD38, CD95, CD50, CD54, HLA-I, HLA-DR, HLA-I.CD8 в периферической крови, индуцированной мокроте, конденсате выдыхаемого воздуха у больных ХОБЛ в зависимости от степени тяжести заболевания.

2. Изучить особенности изменения иммунофенотипа мононуклеарных клеток, экспрессирующих CD4, CD8, CD16, CD25, CD95, CD38, CD50, CD54, HLA-I, HLA-DR антигены, в периферической крови и индуцированной мокроте у больных ХОБЛ различной степени тяжести.

3. Провести анализ содержания цитокинов IL-ip, IL-4, IL-8, TNF-a, y-INF в периферической крови и индуцированной мокроте у больных ХОБЛ различной стадии заболевания.

4. Исследовать особенности свободнорадикального окисления и антиоксидантной системы в периферической крови у больных с обострением ХОБЛ на различных стадиях заболевания. Изучить оксидативный метаболизм нейтрофилов периферической крови у пациентов с ХОБЛ с разной степенью нарушения бронхиальной проходимости.

5. Провести анализ изменения показателей нитрозивного стресса в сыворотке крови и конденсате выдыхаемого воздуха у больных с ХОБЛ в зависимости от степени тяжести заболевания.

6. Изучить содержание эндотелина-1 в сыворотке крови у пациентов ХОБЛ с различной степенью выраженности бронхиальной обструкции.

7. Исследовать корреляционные связи между показателями клеточного иммунитета, цитокинового статуса, содержания растворимых дифференцировочных молекул и параметрами оксидативного, нитрозивного стресса и уровня эндотелина-1 при ХОБЛ.

8. Изучить особенности изменения исследуемых клеточно-молекулярных маркеров воспалительного процесса в различных биологических средах на фоне применения иммуномодулирующего препарата натрия дезоксирибонуклеата у больных с обострением ХОБЛ II и III стадии заболевания.

Положения, выносимые на защиту

1. Прогрессирование системных и топических воспалительных реакций у больных ХОБЛ сопровождается изменениями в содержании растворимых дифференцировочных молекул в периферической крови, индуцированной мокроте и конденсате выдыхаемого воздуха на фоне нарушений бронхиальной обструкции и в зависимости от стадии заболевания. Уровень растворимых дифференцировочных молекул бНЬА-!, зНЬА-П, зС054, зС095, бСББ, бС025 и комплекса зНЬА-1:С08 может рассматриваться в качестве системных и топических маркеров прогрессирования ХОБЛ.

2. Активность воспаления и стадия ХОБЛ определяются изменением субпопуляционного состава циркулирующих и эндобронхиальных мононуклеарных клеток, формированием цитокинового стресса на топическом и системном уровнях.

3. Прогрессирование воспаления у больных ХОБЛ сопровождается усилением свободнорадикальных процессов, накоплением продуктов перекисного окисления липидов, увеличением уровня эндотелина-1 в периферической крови и повышением содержания метаболитов оксида азота в дыхательных путях и на системном уровне.

4. Установленные корреляционные взаимосвязи показателей клеточного иммунитета, цитокинового статуса, содержания растворимых дифференцировочных молекул с параметрами оксидативного, нитрозивного стресса и уровнем эндотелина-1 позволили уточнить механизмы развития и прогрессирования воспаления при ХОБЛ.

5. Применение парентеральной формы препарата натрия ДНК в составе стандартной терапии у пациентов с ХОБЛ II и III стадии оказывает модулирующее влияние на выявленные в настоящей работе патогенетические маркеры данной патологии.

Научная новизна:

Впервые у больных ХОБЛ различной степени тяжести проведена комплексная оценка содержания растворимых молекул гистосовместимости I и II класса (sHLA-I и sHLA-II), молекул адгезии sICAM-1 и sICAM-3, sCD8, sCD25, sCD38, sCD95 белков, комплексов sHLA-I:CD8 в периферической крови, индуцированной мокроте и конденсате выдыхаемого воздуха. Установлена сопряженность прогрессирования бронхиальной обструкции у пациентов с ХОБЛ с увеличением сывороточного содержания растворимых молекул sHLA-I, sHLA-II, sICAM-1, sCD8, sHLA-I:CD8 и снижением уровня sCD95 в крови, с повышением концентрации sHLA-I, sHLA-II белков в индуцированной мокроте и конденсате выдыхаемого воздуха, увеличением уровня ICAM-1 и снижением содержания sCD8 молекул в индуцированной мокроте, уменьшением концентрации sCD95 и sCD25 протеинов в конденсате выдыхаемого воздуха.

Показано, что обострение у пациентов с ХОБЛ в зависимости от стадии заболевания характеризуется изменением иммунофенотипа эндобронхиальных и циркулирующих мононуклеарных клеток, несущих на своей поверхности мембранные рецепторы CD4, CD8, CD16, CD25, CD38, CD50, CD54, CD95, HLA-I и HLA-DR. У больных ХОБЛ независимо от степени тяжести установлено повышение относительного количества циркулирующих CD16+, эндобронхиальных CD38+ мононуклеарных клеток и снижение числа системных клеток, экспрессирующих молекулы адгезии ICAM-1 и ICAM-3. Выявлена взаимосвязь содержания циркулирующих CD54+ мононуклеарных клеток и прогрессирования бронхиальной обструкции.

При сравнительной оценке содержания цитокинов IL-ip, IL-4, IL-8, у-INF, TNF-a в периферической крови и индуцированной мокроте установлено однонаправленное нарастающее повышение концентрации вышеназванных цитокинов в данных биологических средах с увеличением стадии ХОБЛ. Показана связь нарушения бронхиальной проходимости и роста уровня ТЬ-8 и ЮТ-а в индуцированной мокроте, прогрессирования топического и сывороточного содержания у-ГЫБ у больных ХОБЛ.

При исследовании показателей оксидативного и нитрозивного стресса выявлено увеличение сывороточного содержания диеновых коньюгатов и усиление интенсивности хемилюминесценции сыворотки крови у пациентов на любой стадии заболевания; повышение уровня оснований Шиффа у больных со средней и тяжелой степенью ХОБЛ; снижение интегрального антиоксидантного показателя в группе лиц с тяжелыми бронхообструктивными нарушениями; увеличение концентрации нитритов в сыворотке крови и дыхательных путях у пациентов II и III стадии заболевания. Показано, что увеличение сывороточной концентрации эндотелина-1 происходит на фоне роста стадии ХОБЛ и ассоциировано со снижением показателя функции внешнего дыхания «Емкость вдоха».

Впервые выявлены взаимосвязи показателей оксидативного, нитрозивного стресса, уровня ЭТ-1 и содержания растворимых дифференцировочных молекул, относительного количества антигенположительных клеток иммунной системы и концентрации цитокинов в различных биологических средах у пациентов с ХОБЛ, что отражает участие изучаемых клеточных и молекулярных компонентов воспаления в патогенезе и развитии данной патологии.

У больных с обострением ХОБЛ II и III стадии установлены критерии мониторирования эффективности применения парентеральной формы иммуномодулятора натрия дезоксирибонуклеата. Индикаторами, определяющими противовоспалительную эффективность проводимой иммунотропной терапии, являются содержание растворимых дифференцировочных молекул в крови и КВВ, относительное количество циркулирующих мононуклеарных клеток, уровень системных цитокинов, сывороточное содержание диеновых коньюгатов и оснований Шиффа, интенсивность хемилюминесценции сыворотки крови, интегральный показатель антиоксидантной защиты, суммарная концентрация метаболитов оксида азота в конденсате выдыхаемого воздуха.

Теоретическая значимость

Создана теоретическая основа для расширения представлений о роли растворимых дифференцировочных молекул, клеточного иммунитета, цитокинового статуса в механизмах патогенеза хронической обструктивной болезни легких.

Установленные взаимосвязи содержания растворимых дифференцировочных молекул, уровня цитокинов, компонентов клеточного иммунитета и показателей оксидативного, нитрозивного стресса имеют теоретическое значение для уточнения и раскрытия общебиологических механизмов развития воспалительных процессов в дыхательных путях и на системном уровне у больных ХОБЛ.

Выявленная позитивная динамика исследуемых клеточно-молекулярных маркеров на фоне применения иммунотропной терапии позволяют обосновать новые механизмы регулирующего действия препарата натрия дезоксирибонуклеата у больных с обострением ХОБЛ.

Таким образом, на основании выполненных исследований разработаны теоретические положения, совокупность которых можно квалифицировать как научное достижение, заключающееся в формировании целостных представлений о молекулярно-клеточных механизмах патогенеза ХОБЛ и возможности иммунотропной коррекции обострения заболевания.

Практическая значимость

Исследование пула растворимых дифференцировочных молекул в сыворотке крови, индуцированной мокроте, конденсате выдыхаемого воздуха может быть использовано в качестве дополнительного критерия в диагностике и мониторинге степени тяжести и активности системного и топического воспаления у больных ХОБЛ.

Связь изменений уровня растворимых дифференцировочных зНЬА-1, зНЬА-И, зС025, зСБ95 молекул в конденсате выдыхаемого воздуха, концентрации зНЬА-1, эНЬЛ-П, бСВ54, бС08 белков, уровня 1Ь-8, ТЫБ-а, у-ШБ в индуцированной мокроте и ухудшения бронхиальной проходимости у пациентов с ХОБЛ позволяет использовать эти показатели в качестве неинвазивных маркеров тяжести ХОБЛ.

Изменения показателей клеточного иммунитета, цитокинового статуса на системном и топическом уровнях в зависимости от стадии заболевания могут быть использованы в качестве индикаторов выраженности активности воспаления и иметь большое значение для определения функционального состояния иммунной системы в дыхательных путях и в системе общего гомеостаза у пациентов с ХОБЛ.

Использование парентеральной формы иммуномодулятора натрия дезоксирибонуклеата в комплексе со стандартной терапией повышает противовоспалительную эффективность фармакологической коррекции обострений ХОБЛ.

Полученные результаты обосновывают целесообразность исследования и мониторирования в динамике клеточных и молекулярных компонентов иммунитета, показателей оксидативного, нитрозивного стресса и уровня эндотелина-1 при изучении эффективности иммуномодулирующей терапии у больных ХОБЛ.

Результаты исследования используются в преподавании курсов лекций по молекулярной иммунологии для студентов Федерального государственного бюджетного учреждения высшего профессионального образования «Нижегородского государственного университета им. Н.И.Лобачевского.

Комплекс лабораторного обследования пациентов с хронической обструктивной болезнью легких используется в Бюджетном государственном учреждении здравоохранения Нижегородской области «Городской больнице №28», Федеральном государственном учреждении «Научноисследовательский институт пульмонологии» Федерального медико-биологического агентства России (г. Москва), в Федеральном государственном бюджетном учреждении высшего профессионального образования «Нижегородский государственный университет им. Н.И.Лобачевского» Научно-исследовательском институте молекулярной биологии и региональной экологии (г.Нижний Новгород).

Апробация работы

Диссертация апробирована на заседании ученого совета ФБУН ННИИЭМ им. академика И.Н. Блохиной Роспотребнадзора 14 декабря 2011 года, протокол № 10/1.

Основные положения диссертации доложены и обсуждены: на XV, XVI, XVII, XVIII, XIX, XX, XXI Национальных Конгрессах по болезням органов дыхания (Москва, 2005, 2009, 2010; Санкт-Петербург, 2006; Казань, 2007; Екатеринбург, 2008; Уфа, 2011), на 17, 19, 20, 21 Конгрессах Европейского Респираторного Общества (Стокгольм, 2007; Вена, 2009; Барселона, 2010; Амстердам, 2011).

ВЫВОДЫ:

1. Растворимые дифференцировочные молекулы зНЬА-1, бНЬА-П, бС054, бС095, бС08, зСЭ25 и комплекс зНЬА-1:СВ8 могут выступать в качестве маркеров прогрессирования системного и топического воспаления и тяжести ХОБЛ. Прогрессирование бронхиальной обструкции у пациентов с обострением ХОБЛ сопряжено с повышением содержания растворимых молекул гистосовместимости I и II класса, зСВ54 молекул, комплексов 8НЬА-1:СБ8 и снижением уровня зСБ95, зС08 белков в сыворотке крови. Ухудшение бронхиальной проходимости у больных ХОБЛ сочетается с увеличением содержания зНЬА-1, зНЬА-П молекул в конденсате выдыхаемого воздуха и индуцированной мокроте, повышением концентрация 8СБ54 молекул, снижением уровня зС08 белков в индуцированной мокроте и содержания бСВ95, бС025 молекул в конденсате выдыхаемого воздуха.

2. Активация воспаления при ХОБЛ характеризуется изменением иммунофенотипа клеток иммунной системы на топическом и системном уровне. У всех больных ХОБЛ обнаружено повышение относительного количества циркулирующих С016+, эндобронхиальных СЭ38+ мононуклеарных клеток и снижение числа системных клеток, экспрессирующих молекулы адгезии 1САМ-1 и 1САМ-3. Установленная сопряженность содержания циркулирующих С054+ мононуклеарных клеток и прогрессирования бронхиальной обструкции позволяет рассматривать данные компоненты клеточного иммунитета в качестве маркеров тяжести ХОБЛ.

3. У больных с обострением ХОБЛ формируется цитокиновый стресс, который проявляется накоплением цитокинов 1Ь-1Р, 1Ь-8, у-ШР, ТЫР-а, 1Ь-4 в крови и индуцированной мокроте. Нарушение бронхиальной проходимости у пациентов с ХОБЛ ассоциировано с повышением уровня

Ь-8, ТЫБ-а в индуцированной мокроте и увеличением тонического и сывороточного содержания у-1№, что позволяет рассматривать данные медиаторы в качестве маркеров системного и топического воспаления при ХОБЛ.

4. Усиление активности свободнорадикального окисления при обострении ХОБЛ сопровождается: увеличением сывороточного содержания диеновых коньюгатов и усилением хемилюминесценции сыворотки крови у пациентов на любой стадии заболевания; прогрессивным повышением уровня оснований Шиффа у больных средней и тяжелой степени тяжести ХОБЛ; увеличением генерации активных форм кислорода нейтрофилами при I и II стадии, значительным снижением интегрального антиоксидантного показателя в группе лиц с тяжелыми бронхообструктивными нарушениями.

5. Обострение ХОБЛ II и III стадии характеризуется формированием нитрозивного стресса, что обусловлено избыточным накоплением нитритов в сыворотке крови и повышением суммарной концентрации нитритов/нитратов в дыхательных путях. Прогрессирование тяжести ХОБЛ сочетается с нарастанием избыточной концентрации эндотелина-1 в крови. Отрицательная корреляция между параметром функции внешнего дыхания «емкость вдоха» и уровнем эндотелина-1 в крови у больных ХОБЛ позволяет рассматривать последнего в качестве маркера прогрессирования нарушений вентиляционной функции и топического воспаления.

6. Выявленные корреляционные связи между параметрами оксидативного, нитрозивного стресса, уровнем эндотелина-1 и содержанием растворимых дифференцировочных молекул, относительным количеством субпопуляций мононуклеарных клеток и уровнем цитокинов і 7 в различных биологических средах позволили определить и дополнить механизмы развития воспаления и прогрессирования ХОБЛ.

Установлена противовоспалительная эффективность применения парентеральной формы препарата натрия дезоксирибонуклеата в составе стандартной терапии у больных с обострением ХОБЛ II и III стадии, характеризующаяся модулирующим влиянием на показатели цитокинового статуса, клеточного иммунитета, оксидативного и нитрозивного стресса, содержание растворимых дифференцировочных молекул и уровень эндотелина-1.