Автореферат и диссертация по медицине (14.03.03) на тему:Молекулярно-клеточные механизмы в патогенезе болезней, обусловленных воздействием акрилатов

На правах рукописи

Тарских Михаил Михайлович

МОЛЕКУЛЯРНО-КЛЕТОЧНЫЕ МЕХАНИЗМЫ В ПАТОГЕНЕЗЕ БОЛЕЗНЕЙ, ОБУСЛОВЛЕННЫХ ВОЗДЕЙСТВИЕМ АКРИЛАТОВ

14.03.03 - патологическая физиология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук

Иркутск-2014

005549696

Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном учреждении «Научный центр проблем здоровья семьи и репродукции человека» Сибирского отделения Российской академии медицинских наук.

Научный консультант:

академик РАН и РАМН, профессор,

заслуженный деятель науки РФ Колесников Сергей Иванович

Официальные оппоненты:

Семинский Игорь Жанович - доктор медицинских наук, профессор (Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Иркутский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации, заведующий кафедрой патологии с курсами клинической иммунологии и аллергологии);

Бодиенкова Галина Михайловна - доктор медицинских наук, профессор (Ангарский филиал Российской академии медицинских наук ВосточноСибирского научного центра экологии человека Сибирского отделения РАМН -Научно-исследовательский институт медицины труда и экологии человека, заведующая лабораторией иммунологии);

Мичурина Светлана Викторовна - доктор медицинских наук, профессор (Федеральное государственное бюджетное учреждение «НИИ клинической и экспериментальной лимфологии» Сибирского отделения Российской академии медицинских наук, главный научный сотрудник лаборатории функциональной морфологии лимфатической системы).

Ведущая организация: Федеральное государственное бюджетное учреждение «НИИ биомедицинской химии им. В.Н. Ореховича» Российской академии медицинских наук

Защита состоится 25 июня 2014 г. в 10.00 часов на заседании диссертационного совета Д 001.038.02 при Федеральном государственном бюджетном учреждении «Научный центр проблем здоровья семьи и репродукции человека» Сибирского отделения Российской академии медицинских наук по адресу: 664003, г. Иркутск, ул. Тимирязева,16.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке и на сайте www.nzmedek.ru Федерального государственного бюджетного учреждения «Научный центр проблем здоровья семьи и репродукции человека» Сибирского отделения Российской академии медицинских наук.

Автореферат разослан_2014 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, доктор медицинских наук, профессор

Шолохов Леонид Федорович

АКТУАЛЬНОСТЬ ПРОБЛЕМЫ

Загрязнение окружающей среды - один из факторов, обусловливающих значительное ухудшение здоровья населения (Савилов Е.Д, Красовский Г.И., Колесников С.И., 2001; Степанова Н.В., Валеева Э.Р., 2009). В России загрязнение атмосферного воздуха городов является причиной до 40 тыс. дополнительных смертей, что колеблется от 2-3% до 17,5% от общей смертности населения в разные годы (Ревич Б.А., 2007). По всей совокупности наблюдений основным направлением международной стратегии в области химической безопасности является признание химического фактора как интегральной и приоритетной опасности нанесения ущерба здоровью человека и окружающей среде. Поэтому развитию концепции и методов биомониторинга в настоящее время придается важное значение ВОЗ. По данным Национального общества промышленной медицины России, около 190 тыс. человек в нашей стране умирает ежегодно от воздействия вредных и опасных производственных факторов (Аналитический вестник Совета Федерации ФС РФ, 2007). Ежегодно у нас регистрируется около 10 тысяч профзаболеваний. Ежегодные потери, обусловленные неадекватностью системы охраны труда и медицинской помощи работникам промышленных предприятий, оцениваются в 407,8 млрд. руб. (1,9% ВВП) (www. okhranatruda.ni).

Ежегодно только в США выявляются около 20 тысяч случаев онкологических профессиональных заболеваний, а в России, где численность занятых на рабочих местах с вредными условиями труда значительно выше, число таких случаев составляет считанные единицы. А для онкологической заболеваемости важно изменение структуры стадийности выявляемых опухолей и важна наиболее ранняя диагностика злокачественных новообразований, что и было одной из задач данного исследования.

Известно, что акрилонитрил (АН) и акриламид (АА) - яды общетоксического действия и вероятные канцерогены. Описаны случаи воздействия их на различные органы и системы (Лукьянчук В.Д., Радионов В.Н., 2003; El-Hadri L. е.а., 2005; LoPachin R.M., 2005; Wang S. е.а., 2010; и др.), возникновение рака различной

локализации и лимфопролиферативных заболеваний у людей, имевших профессиональный контакт с этими ядами (ВОЗ, 1987,1989; Czeizel Е. е.а., 2004; Klaunig J.E., 2008; Olesen Р.Т. е.а., 2008; и др.). В контакте с этими ядами находятся сотни тысяч людей во всем мире (Boettcher M.I. е.а., 2005; Starr Т.В. е.а., 2006; Doerge D.R. е.а., 2008; Tardiff R.G. е.а., 2010; Vesper H.W. е.а., 2010; и др.).

Однако, несмотря на это, в России взгляд на канцерогенность АН и АА практически не изменился: оба акрилата снова попали в одну группу, т.н. «возможных» канцерогенов для человека (Cole Р. е.а., 2008). Следует обратить внимание и на склонность авторов многих зарубежных исследований отрицать саму возможность развития злокачественных новообразований вследствие воздействия этих поллютантов (Sakurai Н„ 2000; Swaen G.M.H. е.а., 2004).

Соответственно, становится понятной актуальность данного исследования, где предпринята попытка разными методами оценить канцерогенное действие акрилатов, возможности снижения их токсичности в условиях промышленных предприятий, а также проследить результаты комбинированного воздействия этих промышленных ядов и противоопухолевых антибиотиков в эксперименте.

ЦЕЛЬ ИССЛЕДОВАНИЯ Изучить молекулярно-клеточные механизмы воздействия акрилатов для разработки патогенетически обоснованных способов оценки риска возникновения отдаленных последствий данных воздействий, ранней диагностики, а также мер профилактического и лечебного характера, в том числе при терапии возникших злокачественных опухолей.

ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ 1. Провести сравнительный анализ повреждающих эффектов АН и А А в модельных экспериментах.

2,Оценить частоту выявления онкомаркеров (РЭА, АФП, бета-2-микроглобулин), а также показателя содержания ковапентных соединений -аддуктов с гемоглобином эритроцитов у рабочих в зависимости от стажа профессионального контакта с АН для обоснования критериев риска возникновения онкопатологии и нейроинтоксикаций.

2. Обосновать медико-профилактические и лечебные мероприятия для выявленных групп риска в отношении оикопатологии и нейроинтоксикаций в условиях акрилонитрильного производства.

3. Изучить в эксперименте действие противоопухолевого антибиотика антрациклинового ряда доксорубицина в лечении злокачественных опухолей, возникших вследствие длительного воздействия акрилатов.

4. Предложить меры патогенетической химиопрофилактики, направленные на снижение токсичности и повышение антибластомной активности доксорубицина, вводимого после длительного воздействия акрилатов.

5. Предложить патогенетически обоснованные меры по снижению

нейротоксического действия акрилатов на организм.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА И ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ ИССЛЕДОВАНИЯ

1. Доказано принципиальное патогенетическое сходство, а также выявлены различия в повреждающих эффектах АН и АА в эксперименте на клеточно-молекулярном уровне и при развитии патологических состояний у человека.

2. Изучены клиническая картина и патогенез профессионально обусловленных заболеваний, вызываемых акрилатами - АН и АА; выявлен индикатор экологического неблагополучия на примере акрилонитрильного производства -онкопатология.

3. Представлена новая схема нейротоксического действия акрилатов и предложены меры нейропротекции при интоксикации акрилатами.

4. Предложен новый способ оценки риска возникновения профессионально обусловленных заболеваний, вызванных воздействием АН и АА, исходя из данных биомониторинга акрилонитрильного производства.

5. Впервые предложены медико-профилактические рекомендации для поступающих на работу в акрилонитрильные цеха, основанные на установленном в данном исследовании факте наличия злокачественных новообразований у лиц, профессионально подверженных воздействию акрилата, преимущественно в органах желудочно-кишечного тракта.

6. Проведена стратификация риска акрилонитрильного производства, что позволило отнести АН к обязательным (облигатным) канцерогенам для человека.

7. Установлено усиление гематотоксических эффектов антрациклинового противоопухолевого антибиотика доксорубицина и ослабление его антибластомной активности при экспериментальном лечении опухолей на фоне длительного воздействия акрилата.

8. Предложены меры патогенетически обоснованной химиопрофилактики токсических эффектов комбинированного воздействия доксорубицина на фоне длительной интоксикации акрилатами при экспериментальном лечении опухолей.

ОСНОВНЫЕ ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ

1. Острое отравление акрилатами вызывает повреждение биомембран гепатоцитов и эритроцитов вследствие прооксидантного эффекта в ранние сроки после введения ядов с последующим уплотнением мембран эритроцитов и повышением их осмотической стойкости.

2. Развитие окислительного стресса в печени, крови и головном мозге вследствие воздействия АА и АН обусловлено преимущественно подавлением активности антиокислительных ферментов клетки — каталазы и супероксиддисмутазы и сопровождается повреждением микросом и митохондрий, а также снижением содержания микросомального цитохрома Р-450.

3. АА и АН при острой интоксикации в эксперименте оказывают нейротоксическое действие, более выраженное у АН, а профессиональный контакт людей с АН приводит к развитию клинически выраженных синдромов поражения нервной системы. Выявленные поражения нервной системы у животных и людей при длительном воздействии АА и АН подтверждают их общетоксическое действие.

4. Токсическое влияние АА и АН на органы — печень, кровь и головной мозг и активация ПОЛ сопровождается повреждением субклеточных структур -микросом и митохондрий, а также снижением содержания микросомального цитохрома Р-450.

5. Использование подхода, доказывающего алкилирование биомакромолекул в условиях акрилонитрильного производства в совокупности с обнаружением высоких концентраций РЭА в крови рабочих, позволяет выделять группы риска с высокой вероятностью формирования онкопатологии.

6. Активация ПОЛ биомембран - ведущий механизм в гематотоксическом действии АН и Дрб, при их комбинации, при воздействии на организм перевитой опухоли, а также опухоли на фоне длительного введения акрилата при лечении ее Дрб.

АПРОБАЦИЯ ДИССЕРТАЦИИ

Результаты работы доложены на Всесоюзной конференции «Комплексные гигиенические исследования в районах интенсивного освоения», Новокузнецк, 1991; Пленуме Западно-Сибирского общества патофизиологов «Механизмы патологических реакций», Новокузнецк, 1991; Пленуме Западно-Сибирского общества патофизиологов «Механизмы развития патологических процессов», Кемерово, 1994; ХП Российско-японском Симпозиуме по медицинскому сотрудничеству, Красноярск, 2005; Всероссийской конференции с международным участием «Профилактическая медицина в России: истоки и современность», Казань, 2009; V Всероссийской с международным участием конференции дисциплин естественно-научного цикла, Красноярск, 2012; Международной научно-практической конференции Метасистема "Природа— Общество—Человек": Управление развитием", Иркутск, 2013; Международной конференции «Теория, методология и концепция модернизации в экономике...», Санкт-Петербург, 2013; V International Conference on European Science and Technology. Munich, Germany, 2013; 1П Conference "Science, Technology and Higher Education". Westwood, Canada, 2013; Всероссийской конференции «Современное образование, физическая культура, спорт, туризм, рекреация и здоровье», Сочи, 2013; Международной конференции «Социальное служение: институциональные и общественные практики в современном мире», Красноярск, 2013; VI Всероссийской (с международным участием) конференции «Современное естественно-научное образование: достижения и инновации». Красноярск, 2013;

IX Международной конференции «Perspektywiczne opracowania sq nauk^ i technikami-2013» PrzemySl, 2013; I Международной онлайн-конференции «Липндология - наука XXI века», Казань, 2013; Международной дистанционной научной конференции «Тенденции и перспективы развития современного научного знания», Москва, 2013; III Международной конференции «Профессиональное развитие ради сохранения восточно-европейской цивилизации». Красноярск, 2013; опубликованы статьи и тезисы.

По материалам диссертации опубликовано 44 научные работы, из них 16 статей в журналах, рекомендованных ВАК Минобрнауки РФ, 3 монографии.

ОБЪЕМ И СТРУКТУРА ДИССЕРТАЦИИ Диссертация изложена на 258 страницах машинописного текста, включает в себя введение, обзор литературы, описание материалов и методов исследования, полученных результатов, обсуждения полученных результатов, выводов и списка литературы. Работа содержит 34 таблицы, 20 рисунков. Библиографический указатель включает в себя 383 литературных источника, из них 197 отечественных и 186 зарубежных авторов.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ Работа выполнена на 650 белых беспородных крысах обоего пола массой 150-250 г и 100 белых беспородных мышах-самцах массой 20-25 г. Животные содержались в стандартных условиях вивария при 12ч. световом режиме. Содержание, питание, уход за животными и выведение их из эксперимента осуществляли в соответствии с требованиями «Правил проведения работ с использованием экспериментальных животных» (Приложение к приказу МЗ СССР от 12.08.1977 г. № 755).

Содержание АН в воздухе рабочей зоны Красноярского завода синтетического каучука (КЗСК) (внешняя доза воздействия) определялось газохроматографическим методом на рабочих местах 25 человек основных профессий завода от 25 до 45 лет: I гр. -слесари - 10 чел; II гр. - аппаратчики - 8 чел; III гр. - инженерно-технические работники - 7 чел. Для исследования

содержания опухолевых маркеров кровь из вены забиралась у 139 человек, относящихся к группе риска, имевших длительный производственный контакт с АН. Содержание опухоль-ассоциированных антигенов исследовалось также в крови 139 сотрудников другого предприятия г.Красноярска — цехов биохимического завода. Кроме того, клиническому неврологическому осмотру и наблюдению было подвергнуто 350 человек. Из них была выделена группа лиц в 165 человек с поражениями нервной системы различной степени тяжести, имеющих разные сроки производственного контакта с АН. Среди лиц этой группы со сроками производственного контакта с АН от 1 до 10 лет оценивалась связь тяжести поражений нервной системы и степень канцерогенного риска путем определения внутренней поглощенной дозы яда в виде его аддуктов с гемоглобином методом В.В. Иванова и Л.Г. Климацкой (1996) с использованием газового хроматографа Shimadzu 14 А. В качестве контроля брались показатели крови 30 человек, занятых на том же предприятии, но не контактирующих с АН. Данный раздел работы выполнялся совместно с В.В. Ивановым и Л.Г. Климацкой. В эксперименте создавали модели острой, подострой и хронической интоксикации АА и АН. Сроки проведения хронической затравки соответствуют требованиям, предъявляемым к длительным токсикологическим экспериментам и составляют 10% продолжительности жизни белой крысы (Трахтенберг И.М. с соавт., 1987). Острое отравление крыс вызывали однократным внутрибрюшинным введением АА на физрастворе в дозах: 0,42 ммоль/кг (30 мг/кг, 1/4 от LD50); 1,06 ммоль/кг (75 мг/кг, 3/5 от LD50) и 1,4 ммоль/кг (100 мг/кг, 4/5 от LD50). Для создания модели токсического поражения печени при хроническом отравлении крыс А А животные были разбиты на 3 группы: 1) получавшие АА в дозе 0,07 ммоль/кг (5 мг/кг, 1/24 от LD 50) ежедневно 6 раз в неделю вместе с питьевой водой в течение 4 месяцев с учетом суточной потребности в воде, равной 35 мл. Концентрация АА составляла 0,0033%; 2) получавшие АА в этой же дозе на фоне введения альфа-токоферола ацетата (витамина Е); 3) контрольная группа: животные находились на том же пищевом и питьевом режиме, но вместо витамина Е через день получали 0,5 мл физиологического раствора

внутримышечно. При изучении прооксидантного эффекта АН в крови опытных животных острое отравление крыс создавалось подкожным введением 0,38 ммоль/л, 20 мг/кг, 1/3 от LDso) водного раствора АН. Эта доза оказывала отчетливое общетоксическое действие, вызывая выраженные сдвиги в активности ферментов системы микросомальных оксидаз печени (Иванов В.В., 1981,1983). Острое отравление крыс ССЦ создавалось введением 1,6 мл/кг массы (Авдеева Е.В. с соавт., 2006; Сниедзе Т.Н., Васариня В.А., 1986). При изучении комбинированного действия АН и противоопухолевого антрациклинового антибиотика доксорубицина (Дрб) в эксперименте in vivo сначала проводилось подострая затравка крыс АН в течение 28 дней путем ежедневного подкожного однократного его введения в дозе 0,38 ммоль/кг (1/3 от LDso, 20 мг/кг). Затем, спустя 9 дней после перевивки опухоли, раз в день внутрибрюшинно (начиная с 29 дня) вводили доксорубицин в дозе 0,25 мг/кг, что составляет около 1/10 МПД (Гольдберг Е.Д., Новицкий В.В.,1986) в течение 10 дней как затравленным акрилатом животным, так и животным-опухоленосителям, подверженным подострому воздействию АН. Цитостатик вводился также животным-опухоленосителям, не подвергавшимся воздействию АН. Контрольным животным вводился изотонический раствор NaCl. Штамм лимфосаркомы Плисса был предоставлен Банком опухолевых штаммов Всероссийского онкологического научного центра РАМН (Москва). Перевивку опухоли осуществляли на 19 день затравки АН путем подкожной инъекции 0,4 мл гомогенной 30% взвеси опухолевой ткани, взятой на 15 день после трансплантации. Данная модель в настоящее время успешно используется в экспериментальной онкологии (Трашков А.П., Васильев А.Г., 2010; Трофимова С.В. с соавт., 2010). Определялись показатели ростков кроветворения, а также рост опухоли. Антибластомная активность Дрб оценивалась по изменению размеров опухоли в динамике. Материал и кровь забирались на 29, 35, 41 и 47 дни эксперимента. Состояние системы крови оценивалось по содержанию эритроцитов, гемоглобина, лейкоцитов и тромбоцитов. Данный раздел выполнен совместно с Е.В. Нестеровой.

Для оценки гепатотоксичности АА в сыворотке крови определяли активности специфических ферментов печени: фруктозомонофосфатальдолазы по Брагинскому Д.М.(1973), бутирилхолинэстеразы методом Vinsent, Segonsak (1958) и щелочной фосфатазы методом Bodansky (Камышников B.C., 2009; Тодоров И., 1968). Активность выражалась в мкмолях гидролизованного субстрата на 1 мл сыворотки крови при инкубации в течение часа при температуре 37° С. Кровь забирали из хвостовой вены до начала опыта для определения фоновой активности ферментов через 1, 3, 6, 12 и 24 часа после инъекции АА при остром отравлении, и через 2 недели, 1, 2, 3, 4 и 5 месяцев при хроническом отравлении акрилатом. Пятый месяц эксперимента - восстановительный период без введения АА. С целью индукции цитохрома Р-450 использовали фенобарбитал фирмы «Merk» (Германия), который вводили внутрибрюшинно в дозе 0,31ммоль/кг (80 мг/кг) трехкратно за 72, 48 и 24 ч до АА. Для ингибирования синтеза цитохрома Р-450 подкожно двукратно за 48 и 24 часа до АА вводили C0CI2 в дозе 0,46 ммоль/кг (60 мг/кг). Связывание АА с цитохромом Р-450 регистрировали спектрофотометрически. Фракционирование субклеточных компонентов проводили дифференциальным центрифугированием. Животных декапитировали под гексеналовым наркозом, печень промывали через нижнюю полую вену 1,15% раствором KCl, содержащим 100 мМ трис-HCl буфер, pH 7,4. Печень, почки и головной мозг гомогенизировали, гомогенат центрифугировали при 17000 g в течение 10 минут. Для получения микросомальной фракции постмитохондриальная надосадочная жидкость повторно центрифугировалась при 105000 g в течение 60 минут. Осажденные микросомы суспендировали в ЮмМ трис-HCl буфере, pH 7,4. В части опытов микросомы осаждали «кальциевым» методом при 2000 g в течение 30 мин в присутствии ионов Са+2. Содержание белка определяли биуретовым методом. Митохондриальную фракцию получали препаративным центрифугированием по известным методам (Pedersen P.L. е.а.,1978). Оценка состояния биомембран эритроцитов проводилась с помощью кислотных эритрограмм по методу Гительзона И.И., Терскова И.А. (1959) с использованием компьютеризированного вычислительного комплекса. В

качестве гемолитика использовался 0,002N раствор HCl. Исследование гемолиза эритроцитов в гипоосмотической среде проводилось при остром отравлении крыс АА, АН и СС14 в вышеуказанных дозировках по методу Tanigushi М е.а. (1981). Активность перекисного окисления липидов (ПОЛ) биомембран определялась по скорости образования малонового диальдегида (МДА) и выражалась в нмоль МДА на мг белка за 30 и 60 минут инкубации при 37°С для гомогенатов органов, постмитохондриальной надосадочной жидкости, препаратов микросом и митохондрий печени, а также по накоплению МДА в плазме и эритроцитах, выражавшемуся в нмоль МДА на мл плазмы или мг гемоглобина соответственно. В опытах с добавлением АА непосредственно к постмитохондриальной надосадочной жидкости с целью определения зависимости «доза-эффект» использовались концентрации 1, 3 и 10 ммоль как при оценке активности спонтанного, ферментативного - НАДФН-зависимого, так и неферментативного аскорбатзависимого ПОЛ. В аналогичных опытах с добавлением АН использовали концентрацию 1 ммоль и определяли активность спонтанного, ферментативного и неферментативного ПОЛ. Активность антиокислительных ферментов каталазы (KT), супероксиддисмутазы (СОД), глутатионпероксидазы (ГП) определялась в гомогенатах печени, почек, головного мозга и гемолизате эритроцитов при инкубации in vitro с 10 ммоль А А. Активность KT определяли по Карпищенко А.И., (1999). Активность СОД определяли по Гевари С. с соавт., (1985). Активность ГП определялась по максимуму поглощения окисленного глутатиона при длине волны 275 им (Карпищенко А.И., 1999; Bartosr G., Bartkowiak А., 1981).

Определение нейротоксичности проводилось по интегральным критериям оценки нейротоксичности химических веществ (Токсикометрия химических веществ, загрязняющих окружающую среду. Программа ООН по окружающей среде., 1986). Кроме того, исследовались координационно-мышечная работоспособность мышей и крыс, определяемая по времени удержания их на равномерно вращающемся стержне (100 об/мин), а также мышечная работоспособность, определяемая по длительности плавания животных при интоксикациях

акрилатами. В этих опытах АА вводился в дозе 100 мг/кг (4/5 ЛД»), а АН в дозе 10 и 20 мг/кг (1/6 и 1/3 ЛДю- Весь экспериментальный материал был подвергнут статистической обработке (Ноткин ЕЛ., 1965) с использованием прикладного пакета программ. В экспериментах in vivo в опытные группы входило от 5 до 11 животных. Для рандомизации распределение по группам производилось с помощью таблиц случайных чисел. В исследованиях in vitro для уменьшения индивидуальных различий материал объединялся от 6-8 животных.

Заболеваемость с временной утратой трудоспособности (ЗВУТ) изучалась в динамике за последние 10 лет.

Полученные данные подвергались математической обработке для вычисления средней арифметической (М) и стандартной ошибки средней арифметической (м). Достоверность различий сравниваемых параметров рассчитывали с использованием t-критерия Стьюдента. Различия считались значимыми при Р<0,05. Математический расчет выполнялся с помощью статистической программы Microsoft Excel.

Автор выражает признательность сотрудникам Регионального центра иммунохимических исследований, а также лабораторий Института медицинских проблем Севера СО РАМН и Краевого центра по профилактике СПИД за оказанную помощь в проведении научных исследований.

Результаты исследований и их обсуждение

При исследовании возможности развития прооксидантного эффекта акрилатов при инкубации в течение 30 и 60 минут с постмитохондриальной надосадочной жидкостью печени крыс, содержащей микросомы и клеточный сок продемонстрировано отсутствие прооксидантного эффекта при добавлении различных концентраций АА (доза - эффект) как при изучении ферментативного ПОЛ-в присутствии НАДФН, так и неферментативного - в присутствии аскорбата, поскольку скорость образования МДА - продукта ПОЛ, в инкубационной смеси за 30 минут не увеличивалась (Тарских М.М., Колесников С.И., 2012). В противовес этому при инкубации 1мМ АН с постмитохондриальной

надосадочной жидкостью отмечалось значительное увеличение скорости образования МДА в инкубационной смеси за 30 и 60 минут инкубации мономера как при изучении спонтанного ПОЛ, так и индуцированного НАДФН и аскорбатом (Тарских М.М., Колесников С.И., 2012). Таким образом, в одинаковых условиях опыта АН оказался более реактивным соединением и вызывал прооксидантный эффект в субклеточной фракции гепатоцитов. Для объяснения причин этого явления изучена активность ферментов антиоксидантной защиты -супероксиддисмутазы (СОД), каталазы (КТ) и глутатионпероксидазы (ГП). Эксперименты продемонстрировали снижение активности КТ в гомогенате органов и в гемолизате эритроцитов крыс при прямом воздействии ЮмМ A A in vitro уже через 5 минут после добавления акрилата в инкубационную среду (рис.1). Активность фермента была пониженной и через 15 минут после начала опыта, но имела тенденцию к повышению, которая сохранялась до 30-й минуты опыта. Характерно, что после 30-й минуты эксперимента активность КТ в печени превышала контрольный уровень на 29%, а в почках - на 12% (рис.1). Активность фермента в головном мозге и гемолизате эритроцитов хотя и возрастала, но к 30-й минуте эксперимента не превышал контрольного уровня, оставаясь более низкой в эритроцитах (рис. 1). Активность СОД при воздействии АА падала на 5-й минуте инкубации на 37, 47, 10 и 20 % в печени, почках, головном мозге и в эритроцитах соответственно. Далее активность СОД в печени возрастала к 15-й минуте инкубации, и через 30 минут активность фермента в печени возрастала на 12%, а в почках-до контрольного уровня. Активность фермента в головном мозге и в эритроцитах оставалась стойко сниженной до окончания опыта (рис.2). Вышеуказанные результаты могут объяснить отсутствие прооксидантного эффекта АА при инкубации его с постмитохондриальной надосадочной жидкостью печени крыс, т.к. через 30 минут с начала опыта активности ферментов антиоксидантной защиты клетки - КТ и СОД превышают контрольный уровень. Следует отметить, что активность ГП в исследуемых субклеточных препаратах при воздействии А А не изменялась ни в одном из органов: графически она совпадала с линией, изображающей исходную

активность фермента, принятую за 100% (рис. 1,2).

Рисунок 1. Влияние АА на активность КТ в гомогенатах органов и гемолизате

эритроцитов крыс

Рисунок 2. Влияние АА на активность СОД в гомогенатах органов и гемолизате

эритроцитов крыс

Примечание: на рис. 1 и 2 по оси абсцисс — время инкубации; по оси ординат — активность фермента в %. Кривая 1 — динамика активности фермента в печени; кривая 2—динамика активности фермента в почках; кривая 3—динамика активности фермента в головном мозге; кривая 4 —динамика активности фермента в гемолизате эритроцитов. За 100% принята исходная активность фермента, изображенная в виде прямой.

Таблица 1

Влияние фенобарбитала (ФБ) на скорость образования малонового диальдегида (МДА) в гомогенате печени крыс при остром отравлении АА

Серия опытов Скорость образования МДА, нмоль/мг белка за 30 мин

Контроль 0,23+0,03

АА 0,34 + 0,03*

ФБ + АА 0,91 + 0,25*5

ФБ 0,42 ±0,18

Примечание: инкубационная смесь, термостатируемая при 37°С в 2,1мл объема содержала: 100мМ трис-НС1 буфер, рН 7,4; 2 мг/мл белка гомогената печени. * - Р<0,05; ** - Р<0,01- здесь и в табл.2 достоверность различий с контролем; § - Р<0,05; §§ - Р<0,01 - достоверность различий серий «ФБ+АА» и «АА»

Как видно из таблицы 1, предварительное введение фенобарбитала стимулировало образование МДА в печени - спустя 3 часа после введения АА, а так же в плазме крови и эритроцитах затравленных животных через 1 и 3 часа с начала опыта (табл.2). Таким образом, становится понятным роль окислительного стресса и его важнейшей составной части — перекисного окисления липидов в патогенезе гепато-, гемато- и, возможно, нейротоксичности АА. Это хорошо согласуется с ранее проведенными исследованиями по изучению влияния АА на процессы перекисного окисления липидов биомембран субклеточных структур гепатоцитов. Как стало видно из опытов, АА не вызывал развития прооксидантного эффекта в острых опытах с постмитохондриальной надосадочной жидкостью и микросомами печени отравленных животных. В то же

Таблица 2

Влияние фенобарбитала на содержание МДА в крови крыс при остром

отравлении АА

Серия опытов Содержание МДА, нмоль/мл плазмы Содержание МДА, нмоль/мг гемоглобина эритроцитов

Контроль 10,0 + 1,0 0,24 + 0,05

АА 17,8+0,8** 0,38 ± 0,03*

ФБ + АА 21,7 ± 0,7**55 0,49 ± 0,03***

ФБ 15,5 + 2,6 0,34 ± 0,03

Примечание: 0, 1мл упакованных эритроцитов (1000g в течение 10 мин.) и 0,5 мл плазмы разводились равными объемами физиологического раствора, после чего без инкубации определялось содержание МДА.

время АА стимулировал ферментативное ПОЛ в изолированных микросомах, о чем свидетельствует обнаружение прооксидантного эффекта яда при добавлении НАДФН к микросомам отравленных АА крыс (Тарских М.М., 2009). Кроме того, это сопровождалось снижением содержания цитохрома Р-450 в микросомах отравленных АА крыс (через 3 часа после введения) по сравнению с контрольными, что, по всей видимости, обусловлено деструктивным действием промежуточных продуктов перекисного окисления на микросомальный гемопротеид (Тарских М.М., 2009). Все вышеперечисленные факты подтверждают значение процессов метаболизма АА для его прооксидантного действия и хорошо согласуются с результатами, показывающими роль окислительных превращений АА в патогенезе его токсичности.

Выявление зависимости «время-эффект» при интоксикации АН проводилось в сравнительном варианте с известным гепатотропным ядом - четыреххлористым углеродом (CCI4). Результаты продемонстрировали увеличение накопления малонового диальдегида (МДА) в плазме крови при введении ССЦ как и спустя 3 часа после введения АН (рис.3). При этом содержание МДА в плазме крови опытных крыс достоверно превышало контрольный уровень (рис.3). Данный эффект сохранялся до конца опыта, т.е. спустя сутки после введения АН и СС14 При этом не наблюдалось увеличения накопления МДА в эритроцитах опытных крыс по сравнению с контрольными на всех временных этапах эксперимента (рис.З).Полученные результаты, по всей вероятности, отражают патогенетическую закономерность, проявившуюся в опытах с гемолизом эритроцитов при отравлениях акрилатами и СС14. При значительных дозах ксенобиотиков происходит уплотнение эритроцитарных мембран в результате подавления в них процессов перекисного окисления липидов. Данная закономерность ранее показана и для ряда других ксенобиотиков (Сниедзе Т.Н., Васариня В.А., 1988) и может быть объяснена тем, что поражение печени приводит к накоплению в

органе и в плазме крови перекисей липидов. Это приводит к нарушению превращения в печени холестерина и вызывает накопление его в биомембранах, в том числе и в эритроцитарных, что приводит к подавлению процессов ПОЛ в них (Болдырев A.A. с соавт., 2006; Рубин А.Б., 2002). Результатом является уплотнение мембран эритроцитов и повышение их устойчивости к гемолизу (табл.3)

Для изучения нейротоксичности акрилатов - АН и АА был использован комплексный гигиенический подход к данной проблеме — от выявления интегральных показателей нейротоксичности акрилатов в модельных экспериментах до изучения заболеваемости с временной утратой трудоспособности (ЗВУТ) на акрилонитрильном производстве.

о н

5

а

о

£• S а.

сс т

<

s

м £ а.

о О

I

0,9 0,8 0.7 0,6 0.5 0,4 0.3 0.2 0.1 0

20

15

< =5

10

о

О

л р J ¡ili:.

1 L

j и

К АН

3 час

СС14 АН

3 час 6 час

СС14 АН ССЦ АН CCU

6 час 12 час 12 час 24 час 24 час

Примечание: *- р< 0,001; HB | | эритроциты плазма

гемоглобин эритроцитов.

Рисунок 3. Влияние острого отравления АН и СС14 на содержание малонового диальдегида (МДА) в плазме и эритроцитах крыс

Таблица 3

Влияние акриламида (АА), акрилонитрила (АН) и ССЬ на осмотическую резистентность эритроцитов

Серия эксперимента Гемолиз в гипоосмотическом растворе, %

Контроль 44,3 ± 2,5

ССЬ, 26,1 ±3,0°°

АА 37,7 ± 2,0°

АН 34,2 ± 3,0°°

Примечание: ° - р < 0,05;00 - р < 0,0

Скрининг-тестирование нейрогенных эффектов акрилатов с помощью измерения времени засыпания (Тз) показал, что острые отравления АА приводили к развитию нейротоксических эффектов, выражавшихся в укорочении времени засыпания (Тз) крыс после введения гексенала по сравнению с контрольными животными на протяжении всего эксперимента (табл.4). Показатель времени засыпания отравленных акрилатами животных после введения им гексенала к концу эксперимента — через 12 и 24 часа — был достоверно короче у крыс, отравленных АН. Аналогичная картина имела место при исследовании координационно-мышечной работоспособности (КМР), однако этот показатель был короче у животных, подверженных отравлению АН, лишь в начале опыта — через 1 и 3 часа (табл.4).

Далее опыты продемонстрировали значительное снижение времени плавания опытных мышей по сравнению с контрольными (табл.5), причем время плавания мышей, отравленных АН, было достоверно короче времени плавания животных, подвергнутых острому воздействию АА. Таким образом, результаты исследования продемонстрировали более высокую нейротоксичность АН по сравнению с АА. Сопоставление данных результатов с ранее полученными (Иванов В.В. с соавт., 2004) позволило предположить единый механизм нейротоксического действия акрилатов, схема которого представлена на рис. 6.

Таблица 4

Влияние острого отравления крыс АА и АН на развитие нейротоксических

эффектов у крыс

Серия эксперимента Исследуемый показатель Время от начала введения акрилатов, час

1 3 12 24

Контроль 20,0 + 2,0 20,0 + 2,0 13,0+1,5 14,0 + 2,0

АА КМР (мин.) 18,0 ±2,0 9,0 + ^ о*** 7,0 + 2,0** 8,0 ± 1,0***

АН 6,0 ± 1,5***§§§ 5,0 ± 1,0***§ 7,0 ± 2,0*** 5,0 ± 1,5***

Контроль 4,0 ± 0,3 3,5+0,4 4,0 ±0,2 4,0 + 0,3

АА Тз (мин.) 1,5 + 0,3* 1,5+0,2* 3,0 + 0,3* 3,0+0,2**

АН 1,0 ±0,3*** 1,2 + 0,2* 1,8 ±0, !***§§ 2,3 ±0,2***§

Примечание: * - Р<0,05; **- Р<0,01; *** - Р<0,001 - здесь и далее достоверность различий по сравнению с контролем. § - Р<0,05; §§ - Р<0,01; §§§ _ р<0,001 - здесь и в табл. 5 достоверность различий АН по сравнению с АА.

Таблица 5

Влияние острого отравления АА и АН на время плавания мышей

Серия эксперимента Время плавания мышей, мин

Контроль 110 + 3,5

АА 70 + 3,5***

АН 50 + 5,0***15

Примечание: время плавания мышей определялось через 1 час после акрилатов.

Профилактика нарушений здоровья людей в результате воздействия химических веществ окружающей среды может быть достигнута двумя путями: в рамках первого подхода - экологического мониторинга - нами проводилась оценка состояния прооизводственной среды на крупнейшем в России предприятии, использующем в производственной технологической цепи АН -

КЗСК, а именно определение содержания акрилата в воздухе рабочей зоны слесарей и аппаратчиков (группы I и II) - наиболее распространенных профессий на заводе. Кроме того, определение содержания АН проводилось в рабочей зоне лиц смежных профессий, а также инженерно-технических работников (группа III). Как следует из таблицы 6, содержание АН в воздухе рабочей зоны КЗСК значительно превышает предельно допустимую концентрацию (р<0,001), равную 0,5 мг/м3 (ВОЗ,1987; ГН 2.2.5.1313-03. М„ 2003).

Как выяснилось, особенно подвержены воздействию АН рабочие основных производств завода - слесари (группа I ) и аппаратчики (группа II) (табл.6). Сузить круг лиц, среди которых следует искать патологии, помог подход, основанный на биологическим мониторинге и исходящий из патогенеза интоксикаций. В этих опытах определялась внутренняя доза АН, связанного с гемоглобином эритроцитов у лиц группы I и II. Всего исследованию было подвергнуто 18 человек (табл.7). Анализ этих проб, взятых из крови рабочих завода синтетического акрилонитрильного каучука, показывает, что 57% обследованных имеют аддукты АН с гемоглобином при выраженных индивидуальных различиях и этот показатель не зависел от стажа работы с АН (табл.7). При этом следует отметить, что концентрации акрилата, имеющиеся в рабочей зоне цехов приготовления шихты, полимеризации и выделения каучука в 19 - 45% всех проб были значительно выше ПДК и достигали 16 мг/м3. Эта доза, включающая концентрации, определенные нами для рабочих основных профессий на заводе — слесарей и аппаратчиков, может считаться внешней (табл.6). Она принципиально отличается от определенной нами внутренней (действующей) дозы, которая доказательно делит рабочих, имеющих контакт с профессиональным фактором- АН, на подвергшихся и не подвергшихся его воздействию (табл.7).

Важно отметить, что аддукты АН с гемоглобином отсутствовали в крови контрольной группы рабочих -105 человек, занятых в хозяйственных службах завода и выполняющих близкие по энергозатратам работы.

Таблица 6

Содержание АН в воздухе рабочей зоны КЗСК

Группа обследуемых Профессия обследуемых Среднегрупповое содержание АН, мг/м3 (рабочая зона)

I Слесари 3,23+0,6

П Аппаратчики 5,76+1,1

Ш Инженерно-технические работники и лица смежных профессий 1,57+0,3

Таблица 7

Содержание аддуктов АН в гемоглобине у рабочих КЗСК в зависимости от стажа _работы __

Рабочие производства синтетического каучука Уровень или доза воздействия Период воздействия Содержание АН, ммоль/моль НВ

До 7 ррм (16 мг/м"1) -эквивалентно ежедневному воздействию 1,3 мг/кг АН* 1-5 лет 5-10 лет 4,5 - 33,5 3,8-17,4

Примечание: рабочие подвергались воздействию АН 40 часов в неделю при постоянной работе. Ррм - обозначение концентрации в частицах на миллион, принятое за рубежом. Для АН 1 ррм = 2,17 мг/м3. Расчеты в ррм даны для удобства сравнения ПДК в России и за рубежом.

При определении структуры заболеваемости лиц, имеющих непосредственный контакт с АН на КЗСК, был выявлен факт превышения числа случаев нетрудоспособности, связанных с болезнями нервной системы в целом на 20%, причем анализ амбулаторных карт рабочих этого предприятия показал, что большинство лиц с установленным профессиональным заболеванием имели выраженные отклонения в нервно-психической сфере. Именно рабочие основных профессий КЗСК предъявляли наибольшее число жалоб со стороны нервной системы. Всего было выбрано 162 человека, имевших различные по длительности сроки контакта с АН. При этом состояние здоровья этих людей, то есть степень выраженности клинической неврологической симптоматики, увязывалось с

данными эко- и биомониторинга (рис.5) — внешней дозой воздействия, а именно с содержанием АН в воздухе рабочей зоны, а также с внутренней поглощенной дозой АН, связанного с гемоглобином эритроцитов обследуемых лиц (табл.8). Из таблицы 8 видно, что наибольшее количество астено-невротических расстройств падает на стаж работы 7 - 8 и более лет, а более тяжелые психоорганические нарушения, связанные с развитием органической церебральной патологии, возникают в результате более длительного контакта с мономером (рис.5). Обращает на себя внимание отсутствие здоровых лиц среди тех, кто работает в контакте с ядом при его концентрации в воздухе рабочей зоны, равной 9 мг/м3. Лица, не имеющие отклонений в нервно-психической сфере, составляют всего 8% от общего количества обследованных лиц данной группы (табл.8) и выявлялись только при концентрации яда, не превышающей 4 мг/м3, а 92% являлись носителями расстройств в нервно-психической сфере различной степени тяжести, в том числе с выраженными органическими поражениями (табл.8). Изучение распространенности нарушений со стороны нервной системы в группе лиц, у которых определялся АН, связанный с гемоглобином эритроцитов, показало, что чуть больше половины лиц, составляющих данную группу, не имело адцуктов АН с гемоглобином и представляла собой «здоровую» подгруппу (табл. 8). Другая же часть включала в себя лиц с поражениями нервной системы различной степени тяжести, причем их было больше среди тех, кто имел большую концентрацию АН связанного с гемоглобином эритроцитов - до 33 ммоль/л (табл. 8).

В дальнейших исследованиях нами была предпринята попытка оценки онкогенной опасности АН для профессионально подверженных его воздействию людей. Было отобрано 139 человек, предъявлявших жалобы со стороны желудочно-кишечного тракта, в число которых, как правило, входили лица основных профессий завода - слесари-ремонтники, слесари-чистильщики и аппаратчики полимеризации. У всех лиц, входящих в данную группу, в целях ранней диагностики злокачественных новообразований в крови определялись опухолевые маркеры - РЭА, АФП и р2-МКГ. Анализ полученных данных показал, что наиболее чувствительным из маркеров оказался РЭА, который у целого ряда

лиц многократно превышал стандартные значения и в среднем составлял 25,0 ± 2,2 нг/мл, причем эта группа тестированных составляла 10,8% от общего количества обследованных людей.

Таблица 8

Степень выраженности поражений нервной системы у рабочих КЗСК в зависимости от стажа работы, содержания АН в воздухе рабочей зоны и _внутренней поглощенной дозы _

А Б В

Стаж работы менее 1 года 3 - -

1-2 года 7 6 —

3-4 года 9 9 1

5-6 лет 10 14 2

7-8 лет 7 15 4

9-10 лет 11 13 5

более 10 лет 10 20 16

Содержание АН в воздухе 2 14

рабочей зоны до 4 мг/м3

Содержание АН в воздухе 6 2

рабочей зоны до 9 мг/м3

Содержание АН

связанного с

гемоглобином ммоль/моль

гемоглобина:

-0 8 2 -

-до 12 1 2 1

-до 33 - 2 2

Условные обозначения: А-количество здоровых лиц; Б-количество лиц с функциональными отклонениями (астеническими, астено-вегетативными, неврозоподобными); В - лица с психическими нарушениями. ПДК АН в воздухе рабочей зоны-0,5 мг/м3 (ВОЗ, 1987). Соотношение меаду максимальной разовой и среднесменной предельно допустимыми концентрациями АН составляет 1,5 мг/м3 :0,5 мг/м3 (ГН 2.2.5.1313-03).

Среднее содержание РЭА в крови большинства тестированных не превышало 10,87 ± 0,54 нг/мл, что, однако, значительно превышает концентрацию данного маркера в крови здоровых людей (до 4 нг/мл) (Кушлинский Н.Е.Д999; Кушлинский Н.Е., Трапезников H.H., 2000). Количество таких проб среди тестированных сотрудников КЗСК составляло 89,2% (табл.9). Следует отметить, что в соответствии с литературными данными при повышении РЭА у людей

свыше 15 нг/мл опухоли встречаются в 50% случаев (иесЬ N. е.а., 2000). Исходя из этого, лица, имеющие по результатам нашего обследования наиболее высокие показатели РЭА, были отнесены нами к группе риска и составили особую группу, представленную в таблице 10, из которой видно, что уровень опухолевого маркера в крови этих людей варьирует в широких пределах-от 24,4 до 48,8 нг/мл, составляя в среднем 25,0 + 2,2 нг/мл, что значительно превышает стандартные значения и значения РЭА в крови большинства сотрудников завода (р<0,001) (табл.9). Последующее всестороннее клиническое обследование вышеперечисленных лиц, имеющих высокие показатели РЭА, в несколько раз превышающие стандартные значения, показало, что у 20% из них имелись злокачественные новообразования желудочно-кишечного тракта (рис 5). Кроме этого, было выявлено, что у подавляющего большинства из тех, кто имел концентрацию РЭА от 10 до 20 нг/мл и выше (58%), при клиническом обследовании диагностированы предраковые заболевания желудочно-кишечного тракта. Это является конкретным подтверждением предрасположенности людей, профессионально подверженных воздействию АН, к онкозаболеваниям. Следует обратить внимание, что процент лиц, имеющих высокие показатели РЭА и страдающих предраковыми заболеваниями желудочно-кишечного тракта (а в дальнейшем, возможно, злокачественными новообразованиями) близок к таковому носителей аддуктов АН с гемоглобином, равному 57 %.

Таблица 9

Среднее содержание раково-эмбрионального антигена (РЭА) в крови рабочих _КЗСК, имеющих профессиональный контакт с АН_

Среднее содержание РЭА в крови большинства тестированных, нг/мл п = 124 (89,2%). Среднее содержание РЭА в крови сотрудников завода, относящихся к группе риска, нг/мл п = 15 (10,8%). Содержание РЭА в крови здоровых людей, нг/мл

10,87+0,54 25+2,2* 0-4

Примечание: * - достоверность различий со стандартным содержанием РЭА и его содержанием в крови большинства тестированных (р<0,001).

Таблица 10

Содержание раково-эмбрионального антигена (РЭА) в крови рабочих КЗСК,

№ Значения РЭА, № Значения РЭА, № Значения РЭА,

нг/мл нг/мл нг/мл

1 29,32 6 24,60* 11 27,60

2 26,30 7 25,00 12 48,80**

3 37,35 8 24,40 13 31,60

4 36,60 9 24,40 14 24,60

5 26,50 10 26,50 15 33,00***

Примечание: лица, относящиеся к группе риска, с выявленными злокачественными новообразованиями -

* - Обследованная Я. Диагноз: рак ректосигмоидного отдела толстого кишечника. Гистологическое исследование — аденокарцинома;

** _ Обследованный К. Диагноз: рак желудка. Гистологическое исследование -аденокарцинома;

*** _ Обследованный И. Диагноз: рак восходящего отдела толстого кишечника. Гистологическое исследование — аденокарцинома.

Проведение аналогичного исследования среди сотрудников другого предприятия того же района г. Красноярска Красноярского биохимического завода в цехах, где основным токсическим фактором химической природы является гепато-, гемато- и нейротропный яд фурфурол, не дало ни одного случая повышения вышеуказанных опухольассоциированных антигенов в крови рабочих этого завода. Полученные нами с помощью предложенного скрининг-метода результаты могут свидетельствовать о канцерогенное™ АН для человека. Серьезными аргументами в пользу такого предположения являются и другие наши исследования, проведенные на том же КЗСК с использованием методов математической статистики. Так, было показано, что соотношение числа умерших от рака к числу умерших от других причин для жителей города Красноярска составляет 1:4, а для рабочих вредных цехов вышеупомянутого предприятия это соотношение равно 1:1; кроме того, смертность от онкозаболеваний в районе расположения данного предприятия в 3 раза превышает таковую по городу Красноярску в целом (Климацкая Л.Г. с соавт., 2002). Следует отметить, что

выявленные на заводе злокачественные опухоли у сотрудников вредных цехов акрилонитрильного производства имели локализацию в желудке, толстом кишечнике, поджелудочной железе, причем в поздних стадиях (рис.5). Изучение причин смертности 600 сотрудников показало, что из 150 рабочих, ранее работавших во вредных цехах данного производства, 73 человека (48,7%) умерли от злокачественных новообразований (Тарских М.М. с соавт, 2013). Этот статистический анализ с длительностью исследуемого временного промежутка -20 лет (начиная с 1980 г.) подтвердил высокую вероятность того, что промышленный мономер АН является безусловным (облигатным) канцерогеном для человека, а акрилонитрильное производство является производством доказанного профессионального риска. На основании этих данных был разработан и применен алгоритм санитарно-гигиенических мероприятий на КЗСК, где была установлена онкогеноопасная ситуация, представленая на рис. 4. При этом следует исходить из совокупности обоих критериев, определяющих группу риска (рис.4). Следует отметить, что предлагаемые рекомендации целесообразно применять так же и к поступающим на работу в акрилонитрильные цеха, хотя и не в полном объеме: сочетать клиническое обследование прежде всего желудочно-кишечного тракта на предмет выявления предраковых заболеваний и онкопатологии с определением концентрации РЭА в крови. Это связано с тем, что, согласно полученным нами результатам, длительный профессиональный контакт с АН приводит к возникновению злокачественных новообразований именно в органах желудочно-кишечного тракта. Данный факт согласуется с литературными данными о выявлении рака у лиц, подвергавшихся профессиональному воздействию этого яда, наряду с раком легких, также и в желудке, в поджелудочной железе, в прямой кишке (Акрилонитрил. ВОЗД987).

Далее оценивались результаты использования антрациклинов на фоне длительного воздействия акрилатов. При этом учитывалось, что доксорубицин — препарат выбора в схемах моно- и полихимиотерапии лимфосарком, сарком мягких тканей. Исследования показали, что комбинированная терапия в целом не обладала значительным преимуществом по сравнению с монотерапией

антрациклином (Альберте Д.С., 2006; Гольдберг Е.Д., Новицкий В.В., 1986; Пивник A.B., 1999). Исходя из этого, был применен именно этот препарат для изучения комбинированного воздействия его с АН на экспериментальных животных, в том числе с лимфосаркомой Плисса в опытах, моделирующих возможную клиническую ситуацию. Результаты проведенных нами экспериментальных исследований показали, что промышленный мономер АН при подостром воздействии особенно токсичен в отношении красного ростка кроветворения (табл.11,12). У животных с перевитой лимфосаркомой Плисса отмечается снижение количества эритроцитов начиная с 15 дня после перевивки опухоли, а также гемоглобина, которые оставались сниженными и через 28 дней после перевивки опухоли, т.е. на 47-й день эксперимента (табл.11,12).

Метод определения группы риска:

• Наличие аддуктов АН с гемоглобином

• Концентрация РЭА в крови

Я

fo

я .в

П) 43 о ч о а п>

U

>

Рекомендации по группе риска:

• Выведение из АН-цехов.

• Всестороннее клиническое обследование — выявление предраковых заболеваний и злокачественных новообразований

Рисунок 4. Критерии наличия онкопатологии у людей, профессионально подверженных воздействию АН, и медико-профилактические меры

Количество эритроцитов и содержание гемоглобина у животных-опухоленосителей, подвергавшихся затравке АН по сравнению с имевшими только опухоль уменьшалось в более ранние сроки - на 29-й день затравки, то есть через 10 дней после перевивки опухоли (табл. 11,12). При этом уровень гемоглобина оставался низким и к 41 дню эксперимента по сравнению с этим же показателем в группе крыс-опухоленосителей, не подвергавшейся отравлению АН (табл.12). У животных с перевитой лимфосаркомой Плисса тоже отмечалось

снижение количества эритроцитов начиная с 15 дня после перевивки опухоли, как и содержание гемоглобина, которые оставались на более низком уровне и через 28 дней после перевивки опухоли, т.е. на 47-й день эксперимента (табл.11,12). Показатели красной крови у получавших Дрб крыс с лимфосаркомой Плисса и без нее были достоверно ниже таковых у интактных животных и животных-опухоленосителей. Воздействие Дрб на фоне АН также приводило к снижению показателей красной крови: у животных без опухоли, а также с лимфосаркомой Плисса, предварительно затравленных АН и получавших Дрб содержание эритроцитов и гемоглобина было достоверно ниже, чем у контрольных крыс и крыс-опухоленосителей соответственно (табл. 11,12). Со стороны белой крови после введения АН крысам без опухоли отмечалось раннее развитие лейкоцитоза, который, однако, исчезал спустя почти 2 недели после окончания затравки (табл.13). В то же время у крыс с перевитой лимфосаркомой Плисса без введения АН и на его фоне лейкоцитоз отмечался на 35-й день эксперимента, то есть на 16-й день роста опухоли, и оставался высоким до конца эксперимента (табл. 13). В группе животных, получавших Дрб, наблюдалась достоверная лейкопения по сравнению с контрольными животными. Комбинированное воздействие АН и Дрб вызывало снижение содержания лейкоцитов у животных без опухоли на 35-й день эксперимента. Снижение содержания лейкоцитов отмечалось и у животных-опухоленосителей на фоне комбинированного воздействия АН и Дрб по сравнению с «опухолевой» группой, не подвергавшейся иным воздействиям (табл.13). В данном эксперименте, кроме гематологических показателей, также изучалась динамика роста опухоли у крыс. Результаты указывают на увеличение массы опухоли под влиянием АН на 47-й день. Отмечалось также закономерное ее снижение под влиянием Дрб и отсутствие влияния на рост опухоли комбинированного воздействия АН и Дрб (Тарских М.М., 2009).

Результаты данного эксперимента доказывают, что предварительная затравка животных АН усугубляет гематотоксические эффекты Дрб. Введение яда животным с опухолью подавляет противоопухолевое действие антрациклина и ускоряет темпы роста перевитой лимфосаркомы Плисса у крыс, не получавших

Дрб. В дальнейшем, в целях изучения патогенеза явлений, происходящих в организме при комбинированном воздействии Дрб и АН, нами исследовалось состояние процессов ПОЛ по изменению уровня МДА в крови опытных животных. Результаты показали, что подострое отравление крыс АН сопровождалось накоплением МДА в эритроцитах спустя 14 дней с начала введения АН и в плазме крови через 28 дней с начала опыта (Тарских М.М., 2009).

Таблица 11

Динамика содержания эритроцитов в крови интактных крыс и крыс с перевитой лимфосаркомой Плисса, подвергавшихся изолированному и комбинированному воздействию АН и Дрб

Дни Количество эритроцитов, х 1012/л

Контроль Опухоль АН Дрб АН + Дрб

без опухоли с опухолью без опухоли с опухолью без опухоли С опухолью

29 5,14 ±0,15 5,00 ±0,21 4,07 + 0,21* * 4,26 ± 0,23*

35 6,70 ± 0,26 5,20 + 0,18* 6.40 ±0,24 5,80 + 0,17 4,60 + 0,13** 4,40+ 0,19* 4,60 + 0,12** 3,50±0,398

41 6,20 + 0.21 5,20 + 0,19* 5,82 + 0,19 4,25 ± 0,37 5,19+ 0,16** 4,28 + 0,18* 4,89 + 0,20** 3,68 + 0,2 И

47 7,62 ±0,37 6,00 + 0,49" 6,83 + 0.20 5,49 ± 0,30 6,55 + 0,24 6.09 ±0,31 6,6! +0,40 5,28 ±0,50

Примечание: * - здесь и в табл 12,13 различия достоверны при сравнении группы с опухолью и контроля, **- различия достоверны при сравнении экспериментачьных групп без опухоли с контролем,

§ - различия достоверны при сравнении экспериментальных группы с опухолью (затравленные и леченные животные) с животными-опухоленосителями, не подвергшимся другим воздействиям.

Таблица 12

Динамика содержания гемоглобина в крови интактных крыс и крыс с перевитой лимфосаркомой Плисса, подвергавшихся изолированному и комбинированному воздействию АН и Дрб

Дни Концентрация гемоглобина, г/л

Контроль Опухоль АН Дрб АН + Дрб

без опухоли с опухолью без опухоли с опухолью без опухоли С опухолью

29 128,8 ±2,25 129,9 ±5,60 108,2 ± 6,70** 113,4 ± 5,20®

35 144,4± 6,30 124,0 ±5,07* 126,2 ± 4,24** 11,4 ±2,085 125,0±3,60** 108,2±0,195 125,4 ± 4,80** 105,2±5,205

41 135,2 ±5,20 117,3 ±4,90* 130,0 ±3,40 104,3 ± 2,105 123,0±0,89** 100,4+4,005 121,0±2,50** 96,5+ 6,605

47 127,8 ± 3,20 104,0 ± 7,50* 124,8 ±4,80 123,8 + 2,00 123,8 +2,00 119,3±9,50 И6,8± 2,80** 110,0 + 8,90

Таблица 13

Динамика содержания лейкоцитов в крови интактных крыс и крыс с перевитой лимфосаркомой Плисса, подвергавшихся изолированному и комбинированному воздействию акрилонитрила (АН) и доксорубицина (Дрб)

Дни Количество лейкоцитов, х 107л

Контроль Опухоль АН Дрб АН + Дрб

без опухоли с опухолью без опухоли с опухолью без опухоли С опухолью

29 6,34 ±1,00 8,66 + 0,83 10,05 ± 0,90** 7,78 ± 1,20

35 7,86 ±0,63 16,70 + 2,60* 9,92 + 0,52** 10,60 + 0,335 6,01 +0,48** 7,30 + 0,635 5,30 + 0,45** 8,56 ± 0,485

41 10,80 ±1,07 16,23 ±1,06* 11,46+1,70 17,70 + 5,50 6,85 ±0,75** 11,52+1,30* 9,36 + 0,44 12,67 + 2,50

47 8,39 ± 0,61 25,77 ± 3,00* 12,33 + 1,40 17,77 ±4,50 9,49 + 0,91 14,40±1,40§ 12,13 + 1,50 14,50 + 0,81

Стимуляция ПОЛ биомембран в красных клетках крови возникает и при введении животным противоопухолевого антибиотика Дрб, что выражалось в стимуляции накопления МДА в мембранах эритроцитов через 6 и 10 дней после начала введения Дрб интактным животным. У животных-опухоленосителей - с 10-, 16- и 22-дневной опухолью Плисса также наблюдалось усиление накопления МДА как в плазме крови, так и в эритроцитах. Аналогичные результаты были получены и в том случае, когда опухоль перевивалась животным, предварительно подверженным воздействию АН. - наблюдалось усиление накопления МДА в крови крыс с 10-, 16- и 22-дневной лимфосаркомой Плиса (Тарских М.М., 2009). Увеличение накопления МДА в плазме крови опытных животных отмечалось и при введении Дрб крысам с 16-дневной опухолью в течение 6 дней, но не наблюдалось этого эффекта в эритроцитах. Однако при более длительном введении Дрб - в течение 10 дней -крысам с 22-дневной опухолью достоверного увеличения накопления МДА в плазме крови этих животных не отмечалось, но имело место значительное увеличение накопления МДА в эритроцитах (Тарских М.М., 2009). Этот факт, по всей вероятности, обусловлен противоопухолевым действием Дрб, который сам по себе, по результатам наших опытов, стимулирующего действия на ПОЛ в плазме крови не оказывал, однако, как было сказано выше, увеличивал накопление МДА в эритроцитах. Вводимый же животным-опухоленосителям, предварительно подверженным воздействию АН, Дрб не уменьшал накопления МДА в плазме крови этих животных (Тарских М.М., 2009). По всей вероятности, стимулирующий эффект на ПОЛ в этих опытах сохранялся за счет прооксидантного действия АН, отмечавшегося при изолированном воздействии этого яда, либо этот факт может быть связан с нарушением перехода Дрб в активную форму вследствие повреждающего действия акрилата на микросомальную метаболизирующую систему и, значит, со снижением антибластомного действия антрациклина. Таким образом, результаты исследования свидетельствуют о том, что АН, Дрб и их

комбинация стимулируют процессы ПОЛ, что проявляется увеличением накопления МДА в крови опытных животных, а гематотоксические эффекты АН, Дрб и перевитой опухоли обусловлены стимуляцией перекисного окисления липидов биомембран.

Биомониторннг акрилатов — акрнлонитрила (АН) и акриламида (АА): от _патофизиологии клетки до болезней человека_

Клеточный и субклеточный уровни Мониторинг эффекта Моннторннг дозы

Повышают активность ФМФА, снижают активность БХЭ в печени крыс, увеличивают содержание продуктов ПОЛ в различных органах и субклеточных структурах и на уровне целого организма; снижают содержание— цх Р-450. Являются мембранотоксинами смешанного типа Токсические свойства связаны с метаболизмом в системе микросомального окисления. Образуют аддукты с белками, гемоглобином, ДНК; имеет место дозозависимый эффект

Организменный уровень АН и АА сокращают время засыпания экспериментальных животных после введения им гексенала в условиях острой интоксикации, снижают время их удерживания на вращаюшемся стержне и время плавания - ненроинтоксикацин АН увеличивает содержание раково-эмбриопалыгого антигена (РЭА) в крови людей, профессионально подверженных его воздействию, что является индикатором развития в организме опухолевого процесса — мутагенез, канцерогенез

Болезни человека вследствие воздействия акрилатов Поражения печени (цитолиз гепатоцитов) — АА, АН Поражения кроветворной системы (анемии) — АА, АН

Онкозаболевания

Опухолевые заболевания желудочно-кишечного тракта - АН Раковые заболевания желудка, кишечника у 20% лиц, имеющих в крови высокие уровни раково-эмбрионального антигена (РЭА).

Поражения нервной системы - АН

Астенический синдром Синдром неврозоподобных нарушений Органическое поражение головного мозга с вегето-сосудистыми, оптико-вестибулярными и аффективными расстройствами

Рисунок 5

Патогенез непротоксичности акрилатов АН, АЛ

Цптохром ^^ " - Цитохром

р.450 Р-450 Эпокись АН, АА

37

ВЫВОДЫ

1. Острое отравление акрнлатами - АА и АН вызывает повреждение биомембран гепатоцитов и эритроцитов в ранние сроки после введения ядов, однако в дальнейшем отмечается повышение осмотической стойкости эритроцитарных мембран с одновременным снижением ПОЛ.

2. Острое, подострое и хроническое отравление акрилатами - АА и АН приводит к стимуляции ПОЛ в печени, крови и головном мозге животных, обусловленное окислительными превращениями этих ксенобиотиков в системе микросомальных оксидаз.

3. АА, подобно АН, при хроническом воздействии вызывают цитолиз гепатоцитов, который предотвращался одновременным введением животным витамина Е.

4. Развитие окислительного стресса в печени, крови и головном мозге при воздействии АА связано с подавлением активности антиокислительных ферментов клетки — каталазы и супероксиддисмутазы и сопровождается повреждением субклеточных структур — микросом и митохондрий, а также снижением содержания микросомального цитохрома Р-450.

5. Акрилаты - АА и АН при острой интоксикации оказывают нейротоксическое действие (более выраженное у АН), в механизме которого важную роль играет как прооксидантное действие акрилатов, так и способность связываться с белками нейронов — алкилирование биомакромолекул.

6. Профессиональный контакт людей с АН приводит к развитию клинически очерченных синдромов поражения нервной системы, степень выраженности которых зависит от содержания аддуктов АН с гемоглобином, концентрации яда в воздухе рабочей зоны и стажа профессионального контакта с акрилатом.

7. Антиоксиданты могут быть рекомендованы для профилактики нейротоксичности АН и АА.

8. Использование метода определения аддуктов АН с гемоглобином у лиц, профессионально подверженных воздействию АН, в сочетании с обнаружением

высоких концентраций раково-эмбрионального антигена (РЭА) дает возможность выделять группы риска с большой вероятностью формирования онкопатологии, а также предраковых заболеваний желудочно-кишечного тракта.

9. Тестирование на РЭА вместе с всесторонним клиническим обследованием желудочно-кишечного тракта может быть рекомендовано также и для отбора поступающих на работу в акрилонитрильные цеха на предмет наличия предраковых заболеваний и онкопатологии, так как длительный профессиональный контакт с АН приводит к возникновению злокачественных новообразований, согласно полученным данным, именно в органах желудочно-кишечного тракта.

10. АН является облигатным канцерогеном для человека, а предприятия, где в технологической цепи используется данный мономер, могут характеризоваться как производства доказанного профессионального риска.

11. Воздействие АН на крыс-опухоленосителей приводит к усилению роста опухоли, а совместное воздействие АН и Дрб приводит к усилению гематотоксического действия последнего у интактных крыс и крыс-опухоленосителей и снижает противоопухолевую активность Дрб.

12. В механизме гематотоксического действия АН, противоопухолевого антибиотика Дрб, их комбинации, а также опухоли, развившейся на фоне введения акрилата, и последующего лечения Дрб важную роль играет стимуляция ПОЛ биомембран.

13. Комбинация антиоксидантов (витамин Е, метионин, аскорбат) может быть рекомендована в качестве средства патогенетической химиопрофилактики токсического действия антрациклинов при лечении ими злокачественных' опухолей у лиц, длительное время подвергавшихся воздействию акрилатов-

АА и АН.

14. Показанное отсутствие зависимости между содержанием аддуктов АН с гемоглобином и временем профессионального контакта людей с этим ядом находится в соответствии и подтверждает принятую в настоящем беспороговую

концепцию канцерогенеза, предполагающую индивидуальную реакцию как отдельных лиц, так и профессиональных групп на действие канцерогена.

Публикации в ведущих научных рецензируемых журналах определенных ВАК Мннобрнауки РФ

1. Нестерова, Е.В. Исследование терапевтической эффективности и гематотоксичности при комбинированном действии противоопухолевого антибиотика рубомицина с промышленным мономером акрилонитрилом / Е.В. Нестерова, М.М. Тарских, В.В. Иванов // Фармакология и токсикология. - 1993. - Деп. в ВИНИТИ от 09.10.1992. № 2935 - В92, Юс.

2. Тарских, М.М. Промышленный мономер акриламид: взаимосвязь

окислительного метаболизма, гепатотоксических эффектов и механизмов их развития И Сибир. мед. журн. (г. Иркутск). - 2004. - № 4. - С. 36-40.

3. Тарских, М.М. Исследование загрязнения производственной среды акрилонитрилом и вероятных механизмов его онкогенного действия / М.М. Тарских, Л.Г. Климацкая // Сибирь-Восток. - 2005. - Вып. 9. - С. 811.

4. Тарских, М.М. Мембранотоксичность акриламида: роль его окислительного метаболизма в развитии мембранотоксических эффектов и механизмов их развития // Бюл. СО РАМН. - 2006. - № 3(121). - С. 137140.

5. Тарских, М.М. Повреждение мембран эритроцитов в механизме токсического действия акрилатов / М.М. Тарских // Бюл. эксперим. биологии и медицины. - 2006. - № 12. - С. 646- 648.

6. Тарских, М.М. Исследование комбинированного действия противоопухолеого антибиотика доксорубицина и промышленного яда акрилонитрила в эксперименте. Роль прооксидантного эффекта в патогенезе развития анемии / М.М. Тарских // Сибир. онколог, журн. (г. Томск). -2007. -№ 1(21). - С. 49-54.

7. Тарских, М.М. Психические и неврологические нарушения у рабочих

акрилонитрильного производства / М.М. Тарских, Л.Г. Климацкая // Журн. неврологии и психиатрии им. Корсакова. - 2007. - Т. 107. - С. 56 -57.

8. Тарских, М.М. Поражения нервной системы у рабочих акрилонитрильного производства / М.М. Тарских, Л.Г. Климацкая II Медицина труда и промышленная экология. - 2008. - № 10. - С. 12-15.

9. Тарских, М.М. Промышленный мономер акриламид: сравнительное исследование в опытах in vitro и на модели острой интоксикации / М.М. Тарских // Вопр. биолог., мед. и фармацевт, химии. - 2009. -№2. - С. 49-51.

10. Тарских, М.М. Исследование терапевтической эффективности и гематотоксичности комбинированного действия противоопухолевого антибиотика доксорубицина с промышленным мономером акрилонитрилом / М.М. Тарских // Патолог, физиология и эксперим. терапия. - 2009. - № 2. - С. 27-30.

11. Тарских. М.М. Исследование нейротоксичности акрилатов в эксперименте и у рабочих акрилонитрильного производства / М.М. Тарских, Л.Г. Климацкая, С.И. Колесников // Бюл. ВСНЦ СО РАМН. - 2012. - №3 (85), -Ч. 2.-С. 316-318.

12. Тарских, М.М. Исследование динамики активности антиокислительных ферментов и прооксидантного эффекта акриламида в изолированных тест-системах in vitro и в патогенезе острой интоксикации / М.М. Тарских, С.И. Колесников // Бюл. СО РАМН. -2012. - Т. 32, № 5. - С. 16-20.

13. Тарских, М.М. Канцерогенность акрилонитрила и оценка возможностей патогенетической коррекции токсичности акрилата и противоопухолевого антибиотика доксорубицина при химиотерапии опухолей / М.М. Тарских, М.А. Шумбасов, С.И. Колесников // Вестн. РАМН. - 2013. - № 2. - С. 6366.

14. Тарских, М.М. Патогенез нейротоксичности акрилатов - акрилонитрила и акриламида: от клетки до организма/ М.М. Тарских, С.И. Колесников // Бюл. эксперим. биологии и медицины. -2013. - Т. 155, № 4. - С. 443-446.

15. Кинетическая теория злокачественных онкологических и некоторых геннообусловленных заболеваний /В.Е. Задов, М.А. Шумбасов, М.М. Тарских. С.И. Колесников // Бюл. ВСНЦ СО РАМН. - 2013. - № 4. - С. 119124.

16. Кинетическая теория злокачественных онкологических заболеваний и ее применимость к геннообусловленному заболеванию - синдрому Дауна /В.Е. Задов. М.А. Шумбасов, М.М. Тарских, С.И. Колесников // Жизнь без опасностей. Здоровье. Профилактика. Долголетие." - 2013. - №4— С.106-108.

Публикации в прочих изданиях:

17. Тарских, М.М. Использование витамина Е в профилактике мембранотоксического действия акриламида. Взаимосвязь метаболизма и окислительного стресса в патогенезе острой интоксикации / М.М. Тарских, В.В. Иванов, A.B. Пучко // Механизмы патологических реакций: тез. науч. конф. - Новокузнецк, 1991,- С. 203-205.

18. Перестройка обучения на кафедре патофизиологии по проекту «Самостоятельность и компетентность» / В.В. Иванов, В.Н. Бравве, М.М. Тарских [и др.] // Механизмы патологических реакций: тез. науч. конф. -Новокузнецк, 1991. - С. 237-238.

19. Тарскнх, М.М. Клиника и опыт лечения психоневрологических расстройств у рабочих, имеющих производственный контакт с акрнлонитрилом / М.М. Тарских // Проблемы профессиональной патологии и индивидуального здоровья. Комплексные гигиенические исследования в районах интенсивного освоения: тез. докл. Всесоюз. конф. - Новокузнецк, 1991. - С. 93-94.

20. Иванов, В.В. Рейтинговая система оценки знаний студентов на кафедре патологической физиологии / В.В. Иванов, О.И. Жавнерович, М.М. Тарских // Профилактика и экспериментальная терапия экстремальных и терминальных состояний: материалы конф. - Омск, 1992. - С. 197-198.

21. Тарских, М.М. Сравнительное изучение роли ПОЛ в патогенезе острых отравлений АН и ССЦ, а также подострого изолированного и комбинированного воздействия АН с противоопухолевым антибиотиком Рб в эксперименте / М.М. Тарских, Е.В. Нестерова // Механизмы развития патологических процессов: материалы конф. - Кемерово, 1994. - С. 107108.

22. Тарских, М.М. Поражение нервной системы при болезнях химической зависимости / М.М. Тарских // Вопросы профилактики, лечения и медико-социальной реабилитации в наркологии: материалы конф. - Красноярск, 2002. - С. 34-39.

23. Тарских, М.М. Экзогенно-токсические поражения нервной системы / М.М. Тарских, Л.Н. Дроздова, С.А. Шетекаури // Очерки по неврологии и нейрохирургии. - Красноярск, 2002. - С. 51-58.

24.Тарских, М.М. Исследование распространенности и характера поражений нервной системы среди рабочих акрилонитрильного производства / М.М. Тарских, Л.Г. Климацкая // Сибир. мед. обозрение. - Красноярск, 2005. -№ 2-3.-С. 45-46.

25.Тарских, М.М. Исследование комбинированного действия противоопухолеого антибиотика доксорубицина и промышленного яда акрилонитрила в эксперименте / М.М. Тарских // Вести. Бурят, ун-та,- Чита, 2007,-№8.-С. 120-126.

26.Способ определения онкогенного действия акрилонитрила у лиц, подверженных его воздействию. Приоритетная справка по заявке на изобретение (№2007123411/ 15(025492). Приоритет от 21.06.07г.

27.Тарских, М.М. Исследование онкогенного и нейротоксического действия акрилонитрила / М.М. Тарских, Л.Г. Климацкая // Профилактическая медицина в России: истоки и современность, посвящ. 140-летию образования первой гиг. кафедры в России: сб. материалов Всерос. конф. с междунар. участием. - Казань, 2009. - Т. 2. - С. 78-79.

28. Тарских, М.М. Дополнение в теорию преподавания основ безопасности жизнедеятельности человека: современный взгляд на токсикологию аварийно-химически опасного вещества акрилонитрила / М.М. Тарских, Л.Г. Климацкая // V Всерос. (с междунар. участием) науч.-метод. конф. учителей, преподавателей, студентов, магистрантов и аспирантов

дисциплин естественно-научного цикла, 13-15 ноября 2012г. - Красноярск, 2012. - С. 157-159.

29. Тарских, М.М. Исследование нейротоксичности акрилатов - акрилонитрила и акриламида / М.М. Тарских // Междунар. науч.-исследов. журн. - 2013. -№7(14), 4.5.-С.47-49.

30. Тарских, М.М. Канцерогенность промышленного мономера акрилонитрила: новые подходы / М.М. Тарских // Актуальные проблемы гуманитарных и естественных наук. - 2013. — № 8(55). - С. 25—27.

31. Кинетическая теория злокачественных онкологических заболеваний / В.Е. Задов, М.А. Шумбасов, М.М. Тарских, С.И. Колесников // Теория, методология и концепция модернизации в экономике, управлении проектами, политологии, педагогике, психологии, праве, природопользовании, медицине, философии, филологии, социологии, математике, технике, физике: сб. науч. ст. по итог, междунар. науч.-практ. конф. - СПб., 2013. - С. 171- 179

32. Тарских М.М., Л.Г. Климацкая Л.Г. Доказательства канцерогенности промышленного мономера акрилонитрила / М.М.Тарских, Л.Г.Климацкая // Метасистема «Природа - Общество - Человек»: Управление развитием: сб.тр. Международной научно-практической конференции / под ред. д-ра экон. наук, проф. А.П. Киреенко. - Иркутск: Изд-во БГУЭП. - 2013. - С.21-28.

33. Тарских М.М. Доказательства канцерогенности промышленного мономера акрилонитрила / М.М.Тарских, М.А.Шумбасов // Materials of the V International Research and Practice Conference. "Science, Technology and Higher Education" - Munich, Germany, 2013. - Vol. - P.233-237.

34. Тарских М.М. Современные представления о нейротоксичности акрилатов-акрилонитрила и акриламида и механизмах ее развития

/ М.М.Тарских, Л.Г.Климацкая // Materials of the Ш International Research and Practice Conference. "Science, Technology and Higher Education" -Westwood, Canada, 2013. - Vol.1 - P.534-541.

35. Тарских, М.М. Критерии и меры медико-социальной реабилитации лиц, профессионально подверженных длительному воздействию акрилонитрила / М.М. Тарских // Социальное служение: институциональные и общественные практики в современном мире: междунар. науч.-практ. конф. - Красноярск, 2013.- С.152-154.

36. Тарских, М.М. Акрилонитрил как аварийно-химически опасное вещество. Токсикология акрилатов и меры медико-социальной реабилитации. Взгляд сегодня / М.М. Тарских // Современное естественно-научное образование: достижения и инновации: VI Всерос. науч.-метод. конф. с междунар. участием. - Красноярск, 2013. - С. 301-304.

37. Тарских, М.М. Доказательства канцерогенности промышленного мономера акрилонитрила / М.М. Тарских, Л.Г. Климацкая // Современное образование, физическая культура, спорт, туризм, рекреация и здоровье: материалы Всерос. науч.-практ. конф., 2-5 октября 2013г. - Сочи, 2013. -С. 101-108.

38. Тарских, ММ. Исследование механизма прооксидантного действия акриламида, а также роли метаболизма акриламида в системе микросомальных оксидаз на его гепатотоксичность и прооксидантное действие / М.М. Тарских // Тенденции и перспективы развития современного научного знания: междунар. дистанцион. науч. конф. - М.: 2013.-С.108-116.

39. Тарских, М.М. Способы выявления онкопатологии и меры медико-социальной реабилитации лиц, профессионально подверженных длительному воздействию акрилонитрила / М.М. Тарских // Вести. Вост. -Сибир. открытой акад. «Профессиональное развитие ради сохранения восточно-европейской цивилизации»: III Междунар. науч.-практ. конф. Красноярск, 2013. - С. 271-281.

40. Тарских, М.М. Исследование механизмов повреждающего действия промышленного мономера акриламида / М.М. Тарских // Perspektywiczne opracowania sq naukq i technikami - 2013: Materialy IX Miedzynarodowej naukowi-praktycznej konferencji. Ekologia. Geografía i geología.: Przemysl. Nauka i studia, 2013. - Vol. 30. - P. 30-36.

41. Тарских, М.М. Перекисное окисление липидов биомембран - важнейший механизм в патогенезе повреждающего действия акриламида / М.М. Тарских // Липидология - наука XXI века: междунар. науч.-практ. онлайн конф. -М.: 2013. - С.190-197.

Монографии

42. Иванов, В.В. Молекулярно-клеточные механизмы токсичности ксенобиотиков, патогенетическая профилактика профессионально обусловленных и экологических заболеваний / В.В. Иванов, Ю.В. Котловский, Л.Г.Климацкая, Е.Ю.Ставицкая, М.М.Тарских. - Новосибирск: Наука, 2004. - 224с.

43. Тарских, М.М. Акрилаты: нейротокеичность и канцерогенез / М.М. Тарских, Л.Г. Климацкая, С.И. Колесников [и др.]. - М.: Изд-во РАМН, 2013.-287с.

44. Тарских, М.М. Акрилаты — акрилонитрил и акриламид: от патологии клетки до болезней человека / М.М. Тарских; Красноярский государственный педагогический университет им. В.П.Астафьева -Красноярск: Литера-принт, 2014. - 271с.

Принятые сокращения

АА - акриламид АН - акрилонитрил АФП - альфа-фетопротеин

ВОЗ - Всемирная организация здравоохранения

ЗВУ'Г - заболеваемость с временной утратой трудоспособности

Дрб - доксорубицин

КЗСК - Красноярский завод синтетического каучука

КМР - координационно-мышечная работоспособность

Л Дм, - среднесмертельная доза

МДА - малоновый диальдегид

ПОЛ - перекисное окисление липидов

РЭА - раково-эмбрионапьный антиген

СМО - система микросомальных оксидаз

Тз - время, прошедшее после введения препарата до наступления (засыпания ). НЬ - гемоглобин Р2-МКГ - бета- 2 -микроглобулин

Подписано в печать 14.04.14. Формат 60x84 '/|6. Усл. печ. л. 1,5. Бумага офсетная. Тираж 120 экз. Заказ 4-64

Отпечатано в типографии «ЛИ'ГЕРА-принт», т. 295-03-40