Автореферат и диссертация по медицине (14.00.17) на тему:Модулирующая роль эстрадиола в центральных механизмах регуляции гонодотропной функции

ТБИЛИССКИЙ ОРДЕНА ТШОВОП) КРАСНОГО ЗНАМЕНИ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ ИНСТИТУТ

На правах рукописи

АЙВАЗАШЗИЛИ ЗАЗА ИЛЬИЧ

УДК 612.816.08:577.175.642

МОДУЛИРУЩАЯ РОЛЬ ЭСТРАДНОМ. В ЦЕНТРАЛЬНЫХ МЕХАНИЗМАХ РЕГУЛЯЦИИ ПШДОТРОГНОЙ ФУНКЦИИ

14.00.17 - Нормальная физиология

А.В Т О Р Е Ф Е Р А Т диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук •

ТБШСЙ - 1990

Работа выполнена в лаборатории физиологии эндокринной системы

Всесоюзного эндокринологического научного центра АМН СССР, Москва.

Научный руководитель: доктор биологических наук, профессор

БАШЧЕВ В.Н.

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, профессор

ПОЛЫМИ в.в.. . доктор медицинских наук, профеосор

. МАЙСУРАДЗЕ Н.З.

Ведущая организация: НШ перинатальной медицины, акушерства ; и гинекологии им.К.В.Чачава МЗ ГССР.

Защита состоится "30 " октября 1990 г. в час.

на заседании специализированного совета К 078.01.01 в Тбилисском ордена Трудового Красного Знамени государственном медицинском институте (Тбилиси 380077, пр.Бака Пшавела, 33).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Тбилисского государственного медицинского института.

Автореферат разослан " Сейтл^А 1990 г.

Ученый секретарь специализированного совета, кандидат медицинских наук,

доцент

картав '' 0Н11ДЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

'Г"-!

.......I

i

Актуальность работы. Проблема расшифровки центральных механизмов регуляции репродуктивной функции интенсивно изучается в последнее время. Нарушение данных механизмов достаточно часто является причиной целого ряда заболеваний репродуктивной системы у женщин, ведущих в конечном счете к бесплодию. По данным литературы (Хадсон Б. И др., 1986; Davajan, Moshell, 1986), .15$ случаев бесплодия связаны с нарушениями оьуляторной функции, которое у 30% больных вызвано нарушениями в гипотапамо-гипофиэарном звене.

Существующая в настоящее время концепция, сформулированная на основе исследований В.Н,Бабичева (1981,1984), Barraologh (198?., 1983),(1976)", МоСапа (1982,1983), Kalra' (1.983), Sawyer (1975) и ряда других авторов, предполагает тесное взаимодействие всех звеньев в цепи гипоталамус-гилофиз-гонады, осуществляемое по механизмам прямых и обратных связей. Сна базируется на представлении о механизмах тропной функции аденогипофиза и регулирующих влияний со стороны поптидэргических нейронных систем гипот-аломуоа, осуществляемых под модулирующим влиянием изменяющихся потоков интеро-и экстрорэцепторноЗ информации.

В настоящее время существует представление, что формирование пускового сигнала для разлития преовуляторйой волны лютеинизирую-иего гормона (ЛГ)_ в крови во многом определяется работой циклического центра регуляции гонадотропной функции гипофиза и уровнем эндогенных эстрогенов. Высказывалось предположение, что половые стероиды способны оказывать влияние на синтез и секреции ЛГ, действуя на уровне аденогипофиза. Вместе с тем, есть работы, которые указывают, что эстрогены могут изменять характер действия нейронадиато-ров транссинаптической передачи, т.е. оказывать свое модулируще^

влияние на механизм межнейронных взаимоотношений. Однако до сих пор остается неясным вопрос, как и?.! образом эотрогены осуществляют свое действие на уровне циклического центра регуляции гонадотроп-пой функции ютофиза и самого гипофиза, как происходит преобразование гормональной информации в нейрофизиологическую, нейроэндо-кринологическую или эндокринологическую. Среди возможных путей реализации влияний стероидов на процессы, происходящие в железистых клетках, наименее изученным является механизм, по которому осуществляются "быстрые" эффекты эстрогенов по длинным петлям обратной регуляции репродуктивной функции организма.

Цель и задачи исследования. Основной целью настоящей работы явилось исследование яозмояносхи и характера непосредственного действия эотрадиола на спонтанную активность нейронов циклического центра регуляции гонадотропиоЗ функции и получение доказательства модулирующего аффекта стероида на чувствительность данных нейронов к норадрекалиыу, a гшшэ изучение влияния эстрадиола на уровне клеток аденогшкфюа.

В связи с этим в ходе исследования нами решались следующие задачи:

1. Проведение электрофизиологичаской оценки действия остра-' диода на нейроны преопгичоокой области гипоталамуса г, опытах 1)1 vivo и in vitt-o.

2. Лучшие в ошлох vivo и in vitro цодулирущего действия эстрадиела ль чувствительность нейронов преопгичоской области к действию норадранашпш.

3. Внутриклеточная и вликлёточная регистрация электрических свойств' /леток аденогип^яза.

4. .Выяснению возможности и характера прямого и модулирующего (Эфф'ЭКтоз есградкола на иэменоняе электрических параметров ые.мбра-ии клеток порепного гипоф/за.

Научная новизна. В проведанных исследованиях обнаружены самостоятельные эффзкты эстрадиола на работу одиночных нейронов преоптической области гипоталамуса. Получены приоритетные данные о характеро модулирующих влияний эстрадиола на чувствительность нейронов циклического центра регуляции гонадотропной функции гипофиза к норадреналину. Прямые, и модулирущие эффекты эстрадиола была также выявлены в условиях инкубации срезов преоптической области, когда данная структура гипоталамуса изолирована от нисходящих воздействий других структур центральной нервной системы. Проведена внутри- а внеклеточная регистрация электрических свойств нормальных клеток переднего гипофизр крыс в условиях перфузии среза железы при комплексном воздействии ргошзинг гормонов, нейромедиатороз, эстрадиола, ионов К+ и верапамила. Выявлен модулирующий эффект эотрадиола на чувствительность клеток переднего гипофиза к люли-берину. Данные о характера действия моноаминов, особенно дофями-на, на клетки гипофиза, проявившие чувствительность к люлиберину, впрочем, и на другие клетки, показали участие данного нейротранс-шттера в процессах секреции на уровне аденогьпофиза. Эти эффекты дофамина отличны от известного в литература тормозного воздействия его на синтез и секрецию пролакткна. В результате использования блокатора Са2+ каналов - верапамила - било обнаружено участие ионов Са2+ в электрических процессах, происходящих в адекогипофи-зе,■что подтверждает положение с роли данного катиона в процессе сопряжения стимула и секреции.

Теоретическая и практическая.значимость. Теоретическое значение работы определяется расширением наших представлений о роли , эстрадиола ъ механизме реализации принципа обратной связи в регуляции гонадотропной функции на уровне преоптической области гипоталамуса и передней доля гипофиза. Результаты исследований приачн-

зили к пониманию механизма, по которому осуществляются "быстрые" аффекты острадиола на нейроны гипоталамуса и оекреторные клетки аденогипофиза. В работе представлена динамика изменений чувствительности гипоталамического циклического центра регуляции гонадо-тропной функции гипофиза к норадреналину по ходу »страдного цикла. Эти изменения, очевидно, лежат в основе формирования преовуля-торной волны ЛГ. Немаловажное•значение имеют и наблюдаемые нами эффекты дофашгяа на клетки переднего гипофиза. Повшение частоты спонтанной активности и вызванные потенциалы действия, вероятно, указывав на участие данного моноашна в процессе оекреции гормонов клетками аденогипофиза. В теоретическом плане данные по действию моноаминоз дают прочное основание для дальнейшего развития наших представлений сб их участии в регуляции секреции клеткаш .гипофиза и служа? предпосылкой для последующих иссладованиЯ в этом направлении.

Теоретические выводы работы определяют ее практическую ценность. Проведенные исследования осветили одну из сторон центральной рефляции репродуктивной функции. Результаты настоящей работы, наряду с дакю-'Ш о действии эстрада о ла и кейромедиагоров на различные стрьктуры ШС, полученными в лаборатории физиологии эндо- • кринкой системы ВЭНЦ АМН СССР, вошли в разработанную схему коррекции некоторых патологических нарушений ропродуктивной системы центрального гсае&а с целью лечения рада заболеваний, ведущее к бесплодию у женщин (Ь.Я.Игнагков, 1389).

, 'Теоретические выводы и экспериментальные'данные кашли свое применение в учебном процессе с ординаторами и аспирантами Всесоюзного эндокринологического научного центра АМН СССР, в лекциях и семинарских занятиях сс студентами Госудерсгвенлого университета им. Н.В.Ломоносова.

Основные положения, выносите на защиту. Выдвинута и экспериментально обоснована концепция модулирующего влияния эстрадиола в формировании механизма центральной регуляции гонадотропной функции. .Данная концепция состоит из следующих положений:

1. В системе, организующей гипоталашческую регуляцию гонадотропной функции, важное -значение принадлежит изменению чувствительности нейронов циклического центра к эсградиолу в ходе астрального цикла.

2. Механизм, регулирующий циклическую функцию гонадотропной системы,' в существенной мерз определяется модулирующим влиянием зстрадийла на чувствительность нейронов праоптической области к норадраналину.

3. Эстрадирл вызывает выраженное изменение в чувствительности гонадотропных клеток гипофиза к люлиберину.

Апробация работы. Результаты проведенных исследований и положения диссертации докладывались и обсукдались на: Ш Всесоюзном съезде эндокринологов в г.Ташкенте (1939 г.)j XIX республиканской научной конференции молодых медиков Грузии в пос,Еакуриани (1990г.).

Публикации. По теме диссертации опубликованы 4 работы.

Структура и объем диссертация. Диссертация состоит из введения, обзора литературы (часть I), описания материала и методов исследования (часть 2), результатов исследования (часть 3), обсуждения результатов, выводов и списка литературы. Работа изложена на 120 страницах машинописного текста, из них текстовая часть занимает 77 страниц, иллюстрирована 14 рисунками и 3 таблицами. Список цитируемой литературы содержит 220 работ, из которых 15 отечественных и 205 зарубежных авторов.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Матери?лы и методы исследования. Работа выполнена на нелинейных крысах самках массой 200-250 г с устойчивым 4-х дневным астральным циклом, контролируемым но вагинальным мазкам, и кастрированных самцах весом 180-250 г. Животных содержали в стандартных условиях освещения (свет с 6.00 до 20.00 час). Эксперименты по исследованию импульсной активности нейронов прооптический области проводили с 10.00 до 11.00 кавдой стадии астрального цикла и с 17.00 до 18.00 на стадиях диэструс-2 и проэструс. Эти параметры были выбрали в соответствии с данными нашей лаборатории по изучения динамики содержания JTT и фолликулостимулнрувдаго гормона (SCD, эстрадиода к прогестерона при оценке физиологической модели. В вкспзриыентах in vitro использовали свежеприготовленные срезы преспг'.иесксй области птоталжуса циклирующих самок к рис и переднего гипофиза кастрированных самцов крыс (кастрирование проводили за 10 дней до эксперимента). Срезы толщиной 400-500 ьаш по^щали в специально разработанную и изготовленную наш инкубационную камеру. Перфузисщшй раствор поступал в камору со скоростью 0,5-Г ш/мин, согретый до 35°С, оксигенированный кислородом в смеск о углекисла! газом (95$ и 5¡2 COg).

Методика электрофизиология ескюс исследований. Регистрации спонтанной а/стивности одиночных нейронов и шжроионофорегическое подведение к ним тестируемых препаратов осуществляли с помощью многоканальных стеклянных шкроэлекгродов. В. опытах использовали микроэдектроды с толщиной кончика 3-5 мхм и сопротивлением центрального ствола 2-7 МОм.'а боковых - 30-100 МОм. Центральный ствол елзктрода заполняли 2% раствором понтаыина лазурного 6ВХ в 2М растворе NaCl. Боковые стволы в зависимости от целей акспери-

ршгачошшй во времени момент.

1.2. Модулирующее действие эстрадиола на чувствительность нейронов к действию норадреналина. В ходе проведении* экспоримин топ биле, исследована активность 625 нейронов преотической облас ти в различные стадии астрального цикла у крыс. При оценке во¡го пула исследованных нейронов эстрадиол в значительном проценте слу чаев изменял чувствительность и направленность исходной ответной реакции нейронов циклического центры гипоталамической рьгулг.ции гонадотропной функции к норндреналину. Из ЗЗв нейронов, исходио не реагирующих на норадреналин, 45,,'!% в услов.их предварительного введения эстрадиола приобретали способность отвечать на него. »

Из них 91 клетка (26,9+2,4$) активировались, а 62, т.е. 18,4_+2, тормозились монсадгшои. Тиккм образом, на фот еотрогенизаци.. ранее нечувствительные нейроны преоптической области достоверни чаща (р 0,01) активируются данным нвйротрансмыгером. Более того, 27,3+3,9% клеток, отвечающих торможением на норадреналин, па фон» эстрагенизации приобретали способность давать активационную реакц.ии.

Учет стадии астрального цикла показал, чтс среди нейроноп о исходной тормозной реакцией наибольший процент (55,6+4,9%) трансформации в активационные имеет мосто в утренние часы стадии про-эструс. В это же время отмечается наибольшее количество клеток спади спонтанно работающих нейронов преоптической обчасти, которые, будучи исходно нереагируыцими на норадреналин, приобретают аа фоне астрогянизации способность реагировать на подведение дашм.-о моноамина активацией (44,5+4.9%). Представляь: интерес, что в это врем цикла отмечается наименее выраженная способность ястрадиола переводить нейроны, исходно так ил., иначе отвечающий ны норадршт--лии, в раз рад иереагируюших клвтог. Если в другие сгадш! ч^-

цеит гаках ней;онов от общего числа клеток флюктуируй! яг и и-Чврниь часы стадии пювстдоо- до 63 в утропнич чаги ишог.усв--;,

утром в проэструсе этот эффект наблюдался наш лишь в 36,0+4,8$

«

олучаев. Характерно, что это тлеет отношение к клеткам как о акги-зационным, так и с тормозным ответом на норадреналин.

Выявленные изменения в утренние часы стадии проэструс вряд ли можно объяснить суточной динамикой чувствительности нейронов преоптической области к норадреналину. Сравнение с утренними часами стадии диэструс-2 свидетельствует о существенной разнице между характером изменений под влиянием эстрогенизации в чувствительности и направленности ответной реакции исследованных клеток к норадреналину. Вероятнее всего, это связано с процессами изменения эндокринного статуса животных в утренние часы стадии проэструс, когда имеет место резкое повышение концентрации эндогенных эстрогенов в крови у с шлок крыс. Данный сигнал для ВДС с периферии, обеспечиваемый повышенной экскрецией половых стероидов яичниками, сообщает о степени готовности к овуляции- зреющих яйцеклеток. Активация под его влиянием нейронов преоптической области и повышение их актива-циошюй чувствительности к норадреналину необходимо для реализации триггернпй функции данного циклического центра, с возбуждением его пептцдаргических лвлиберинпродуцирувдих нейронов и усилением транс-локацли люлиберина в область медиобазального гипоталамуса. Все это является необходимой основой.для развития преовуляторной волны ЛГ в крови в вечеркыв часн стадии проэструс.

2. Действие зстрадиола ка нейроны преоптической области гипо-талаодса в опятах In vitro- . В ходе 19 опытов были зарегистрировали 32 единицы активности. В общем пуле исследованных единиц эс-тгадрол, подводимый в инкубационную камеру к срезам преоптической ni-аста, в 50? случаев влиял на нейронную активность, причем из них в G2% вкзывад активацсонный эффект. Сравнивая две половины- дня слог.! прогст{ус, было показало, что происходит заметное измененио мггтг.гте.-.ьнспп клеток к тюградиоду, причем наблюдалось явное по-

нижение активационного эффекта стероида к вечеру стадии по сравнению о утренними часами (33,35? и 21,55? соответственно), Колячесг-во нейронов с тормозной реакцией на зстрадиол практически не менч-лооь, однак'о к вечеру стадии проэструс увеличивалось количество "молчащие" клеток. Эксперименты in vitro показали, что клетк-.i в условиях инкубации среза тнани мозга сохраняют свои электрофиаао-логические свойства и способны изменять свою активность при подведении препаратов в иккубагионную среду. Данные, полученные наш! в опытах ¿Д vitro, сравнимы с таковыми в экспериментах 111 на животных с микроионофоретическим подведением эотрадиола. Пре-

оптическая область гипоталамуса, удаленная и с мозга, теряет свои »

нейрофизиологические связи с другими отделили ВДС, однако реакция на эсградиол сохранялась .. в зависимости от с?ад:пг цикла она была различной. Это, вероятно, указывает i'a способность к относительной автоноши данной структуры мозга в реализации функцчи циклического центра и регуляции развития лреовуляториой волны JLT. Вместе с тем ввдно, что изменение уровня эндогенных эстрогенов, происходящее по ходу цикла, предопределяет работу нейронов прооп-тической области.

В этих же экспериментах наш было проведено тестирование нейронов преоптической области на норадреналин отдельно и после преинкубации эстрадиолом. В 34,А% случаев моноаппликацпя норадре-налина изменяла работу одиночных нейронов области, причем актива-цвонные и тормозные ответы была практически равны, иреиккубацля эотрадиола изменяла чувствительность нейронов к Ьпплшсации коно-амина. Число клеток так или иначе отвечапцих на норпдраралгп составило 59,455 по всему пулу экспериментов, что заметно больше значения, полученного при подведении отдально норздрепалина. При этом значитеяы о возрастала доля шетивациотаык отчетов екда р.а-

гирупцмх клеток (73,7%). Иа нейронов исходно "молчащих" после инкубации стероидом 47,6$ переходили в разряд реагирующих на нейро-модиатор, причем в 80% наблюдали активационный эффект.

Анализ полученных данных с учетом времени тестирования на стадии проэсгрус показал, что утром в этой стадии наблюдается заметное увеличзние числа клеток с реакцией активации на норадрена-лин: после инкубации эстрадиолом Ь0% ранее нечувствительных на фоке эстрагенизации приобретали способность реагировать на него. В это же время 67$ клеток с исходной тормозной реакцией на моно-. амин - активировались. В вечерние часы стадии проэструс остроге- . низания незначительно влияла на процент клеток с активациокным ответом на норадреналин, зато увеличила число клеток с тормозной реакцией. Надо отметить, что если в утренние часы стадии эсградиол не переводил клетки исходно "активные" или "молчащие" в торлозные, то в вечерние часы 33,3$ первых и 22,'«$ вторых соответственно приобретали способность тормозиться под действием норадреналина.

Сравнение результатов экспериментов в in vitro и in vivo по группам и по стадиям не выявило заметных различий. Это подтверждает возможность применения данной модели в электрофизиологических исследованиях. Клетки в соответствующих условиях инкубации жизнеспособны и в значительной степени сохраняют свои электрические характеристики. Рецепторное..связывание с агентами,' по-видимому, не нарушается, а быстрые эффекты эстрадиола свидетельствуют, что они обусловлены непосредственным влиянием стероида на мембранные свойства клеток. Условия инкубации исключают возможность чпкпх-лпбо нисходящи воздействий на нейроны преоптической области гипоталамуса, что позволяет изучать собственные свойства данной структуры. В заключение настоящая сория опытов показала удобство vi це.чссобраэгтость кспользовангл в электрофизиологических иссле-; :!?а»;гях колол", с инкубацией срезов мозга.

3. Электрофизиологичесхие свойства мембраны адеяоптэфизар-ных клеток: изменения, вызываемые астрадиолом и другими бкологи-чески активными веществами. Мембрагшй потенциал удалось регистрировать у 104 клеток в хода экспериментов с внутриклеточной регистрацией на срезах переднего гипофиза в условиях инкубации. Среднее значение мембранного потенциала составило 40+0,09 мВ. На подводимые вещества еденогяпофизарше клетки отвечали либо гиперполяризацией, либо деполяризацией, либо генорациай потенциалов действия.

Во время внеклеточной регистрации электрических событий клеток рденогипофиза в условиях инкубации срезов была обнаружена спай-ковая .активность в форде споитандых ашульсов высокой частотц, в ■среднем до трех импульсов в секунду, которая изменялась под алия-кием подводкадх веществ.

В этой части нашей работы нами планировалось изучить действие эотрадиола на мембранные свойства аденогипофизарнкх клеток. Сложность в интерпретации данных при регистрации цельного гипофиза заключается в невозможности точного определения типа тестируемых, ыз-ток. Для нас интерес предетоелкл эффект эстраднола на ЛГ а продуцирудаие клетки гипофиза. Оценку действия эстрадной проводили на клетках, предполояительно не являютхея ни тиреотрофжи, ки про.\актотрофами. пя согатогрофаш1, т.к. подведение к ним ТРГ и дофашна не вызывало характерных изменений потенциала мембраны ( ЕиГу et аХ., 1979. я, 1985, Огвиа, 1985).

Однако эстраднол линь в 9,С5? случаев действовал на мембрану адрногапофизарнгх ¡слеток с одгзгакоаым количеством изменении в сторону гпперполярязшпи и деполяризации. Подведение ЛГРГ в этгх случаях не влияло на электрическую характеристику данных клеток.

В случаях, когда аппликация ЛГРГ о? общего тисла ?встп-

ровения) вызывала сго.Хтю деполяризацию мембраны, применение отдельно стероида но выявило никаких изменений. Однако преиикубация встрадиолом даянпх меток заметно изменила чувствительность их к подводимому пептиду. Так, в 33$ ЛГРГ терял способность деполяризовать мембрану клеток.

Мы т&кхе исслэдовали действиэ норадренатана и дофашна на электрические свойства мембраны аденогипофизарных клетск. Дофамин в 4.8% случаев тестирования влиял на мембранный потенциал клеток. Причем, в половине случаев его применения наблюдали короткую преходящую гиперполяригацип мембраны с последующей деполяризацией. Эффект норадреналина на те ка клаткй был аналогичен, однако амплитуда изменения значения мембранного потенциала была'меньше. При воздействии на эти же клетки эстрадиола'или лшшберина изменение мембранного потенциала не происходило. Остальные случаи тестирования, дофамина и норадреналина пришлись на "люлиберян чувствительные" клетки гипофизе., Во всех случаях аппликации моноамннов к этим клеткам мы наблвдали вызванные потенциалы действия, хотя реакция клеток на дефамин была более ярко вкраяена. Введение дофамина- и нор-адрекалина на фоне прешпеубации астрадяолом не дало какого-либо отношения в ответе клеток.

Повышение концентрации ионов К+ в растворе приводило во всех случаях к значительной деполяризации клеточной мембраны, с после-дувдим восстановлением значения последнего'после вымывания избыточного калия из средн.

' В ходе опытов с внеклеточной записью спонтанных потенциалов действия нами были' зарегистрированы 43 единицы активности. Применение лпгаберина вызывало'активациоьный эффект в 23% случаев. Эс-традиол, подводимый к зиш клеткам, не действовал на электрофизио-логпгческяе параметры. Преинкубыдог эстрадиолом клеток, реагирующих на .ИТГ, выявила следупщую картину: 60$ клеток с активацион-

ной реакцией приобретали способность торлозигься на подведение х ним пептвда. Дофамин давал четкий активационнкй эффект на sin клетки и эстрадиол не был способен изменить действие катохсламина.

В ходе' экспериментов с регистрацией спонтанных и вызванных потенциалов действия мы применяли блокатор .Са2+ каналов - верапа-глил. Данный' препарат в 23$ случаев тормозил или полностью блокировал залп импульсов, встречающийся в клетках переднего гипофиза. Верапамил такяо прздотврааал глубокою деполяризацию, вызываемую лзнибэрином в клетках гипофиза.

Ионы К* действуют яа эадохркккшз клетки неспоцифически, вызывая деполяризацию мембраны и тем c&viim открывая ионныь каналы

• о,

для входа ионов Са в клетку, что яаляется необходимой предпосылкой для процесса секреции. Деполяризующее действие Kf в наше.4 случае указывает на то, что мембранный потенциал в данных клетках в основном определяется градиентом ионов Kf и что зги клетки в условиях зяяубацгл сохраняют сдои мембранные свойства. Кроме того,наб-

* О

ладаемая деполяризация позволяет предполсаигь, что вход ионов Са^, вероятно, вовлечен в процесс секреций■и в даннпс клетках. Косвен-

•ч

нее подтверздение этому imemm было получено при пршенении блока-торов каналов - вераламкла - в случаях ЛГ?Г - вызванной деполяризации мембраны, а такав при регистрации вызванных и спонтанных потенциалов действия.

Эстрадиол, как было показано в ходе экспериментов, способен был вызвать деполяризацию мембраны, равно как и шшрполяризацию. В'верэом случае эстрадиол, возможно, дейслзоьдл как стимулятор' секреции, во втором - действие его, вероятно, сопровождалось торможением процесса. Были ли &ти кло.-ívi гокадотрофами? Подведение к mi ЛГИ? не выявило изменений потенциала покоя, поэтому определить принадлежа mi. гтих клеток в ЛГ а ССР продуцирующим клеткам нево81.;о?то, равно кг к и отрицать это. По действии J1TTT на клетки

гонадотрофы существует е литературе разногласие. Так, одни авторы в противовес таорта деполяризация (или потенциал действия) -вход Са^-секреция предлагают другую связь, осуществляемую без высоко-амшгатудннх изменений мембранного потенциала покоя - «флюктуация мембран1:ого потенциала'- увеличение частоты открытия ионных кана-лов-секроция (Иааоп, Waring, 1985, 1906). Однако этот феномен наблюдали на культуралышх клетках гонадотрофах губеральной части гипофиза овцы. В нашем случае мы наблюдали стойкую деполяризацию мембраны. Вероятно, это связано с состоянием клеток, его рецепгорного аппарата. Значительным кажется тог факт, что преиккубвцяя эстрадио-ла, который отдельно не действовал на даннне клетки, изменила чувствительность последних к лшибарину в большом проценте случаев. По какому механизму осуществляется данный эффект стероида? Наиболее вероятным нам представляется следующее объяснение: асградиол действует на мембрану клеток (на уровне рецепторов и/или ионных каналов), вызывая в них локальные изменения (открытие или закрытие одиночных ионных каналов), которые но регистрировалась в условиях применения наше£ аппаратуры. Однако эти изменения каким-то образом I подготавливают мембрану клеток к восприятию информации нейронепти-да. Вероятно, такой модулирующий эффект стероида играет немаловажную роль в гипоталамической регуляции секреции тройных гормонов гипофиза - ЛГ и ФСГ.

Интерес представляют результаты, полученные при тестировании клеток нейротраномиттерама коноашнового ряда. В половине случаев дофамин вызывал эффект короткой гиперполяризации мембраны клеток переднего гипофиза с после,дующей деполяризацией. Такое действие дофшлика на железистые клетки ке было никем ранее описано в литературе. KaTais это глотки и какую функцию они выполняют в передном гкпофле трудно сказать. Одшзкс, одно можно предположить, что до-^■VT.n зияет на яекоторцч клвтки аденогипофиза, вызывает короткое

событие в низе, а, вероятно, инициирует специфический процесо. С другой стороны, дофамин, действуя на предположительные клетки гонпдотрофи, вызывал генерацию потгнциалов действия после короткой фазы деполяризации. Эти потенциалы тормозяльсь верапашлом, что указывает на присутствие в штх компонента. Вероятно, дофамин действует на секреторную активность данных клеток через изменение проницаемости мембраны для ионов Норадреналин

выявил ао многих случаях схожую о дофамином картину. Однако, он уступал дофамину в эффективности воздействия на аде.чогипофизарныо клетка, что проявилось а меньшей амплитуде и продолжительности зызыраемых изменений потенциала покоя данных клеток. Характерно, что зстрадиол не влиял на аффекты моноалашов. Естественна предло-лозить, что ысноемннн и люлиберин действуй по различии: механизмам на потенциал мембраны аденогипофизарных клеток. Эстрад^ол по механизму своего действия инторферируе-" с нейропептидом, тем самым проявляя модулирующее действие» на уровне аденопто^иза, но не с катеходЕидналя.

ВЫВОДЫ

. I. Эсградпол способен оказывать непосредственное планам на работу нервных клеток циклического центра рэгуляхрп: гокадотропноЛ фуша$.:: гапофкза, проявляющееся в актвациошюм эффекте стероида, наиболее ярко выраяешюы- в стадии диэструс-2 астрального цчнла.

2. Эотрадиол оказывает выраженное модулирующее действие ни чувствительность а направленность ответной реакции одиночных нейронов преопткчесюЗ облаете к норадреналину, пргводащеп к почитания долп актлвациог'ых ответов клеток ни действие нвйротронештте-ра. Вероятнее всего,, аспекты эс градиола на нейроны циклического центра обусловлены непосредственным влиянием на цитонтБ^магкчеспую гомбрану.

3. Эстрадиол изменяет чувствительность аденогипофизарных клеток к лпяиберину в условиях in vitro, выражающуюся гормояением вызываемой пептидом деполяризации клеточной мембраны и повышения импульсной активности.

4. Дофамин, и в меньшей степени норадрэналин, способны воздействовать на ЛГРГ-чувотвительные клетки гипофиза с генерацией потенциалов действия в них, что указывает на возможноз участие данных нейро-трансмиттеров в регуляции гонадотропной функции на уровне гипофиза.

5. В механизме формирования потенциалов действия, наблюдающихся в клетках переднего гипофиза, важную роль играют Са^+ зонные каналы, что подтверждает вероятность Ьозлочени« изменений электрически свойств мембршш в процессе секреции.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ:

1. Непосредственное влияние эстрадиола на функциональное состояние нейронных популяций различных областей головного мозга у'крыс. Материалы Ш Всесоюзного съезда эндокринологов. - Ташкент, 1989 (соавт. В.Я.Игнатков).

2. Эстрогенчувствительные нейроны преоптической области гипоталамуса. Физиологический журнал СССР. - Москва, 1985, г, 75.- ЙЮ.-C.I36I-I367 (соавт. В.Я.Игнатков, В.Н.Бабичев).

5. Модулирующее действие эстрадиола ка чувствительность одиночных нейронов преоптической области гипоталамуса к норадреналину. Бюлл.эксп.биол. и медицины.- - Москва, 1990, т. 109. - № 4. -С. 17-18 (соавт. В.Я.Игнатков. В.Н.Бабичев),

4. Элекгрофизкологическея характеристика аденогипофизарных клеток в условиях воздействия на них различных веществ. Материалы XIX республиканской научной конференции молодых медиков Грузии. - Баку-р.1йш;, 1990 (соавт. В.Я.Игнатков, З.Н.Бабичев).

v'U'f-f- 'Л-.-CbM't