Автореферат и диссертация по медицине (14.00.36) на тему:Микробная протеаза стрептолиаза и ее иммобилизованная форма как иммуномодуляторы в норме и патологии



На правах рукописи

\

РАГУЛИНА Вера Алексеевна

МИКРОБНАЯ ПРОТЕАЗА СТРЕПТОЛИАЗАИ ЕЕ ИММОБИЛИЗОВАННАЯ ФОРМА КАК ИММУНОМОДУЛЯТОРЫ В НОРМЕ И ПАТОЛОГИИ

14.00.36 — Аллергология и иммунология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Курск - 1995

/ Работа выполнена в Курском государственном * медицинском университете.

/Научный руководитель:

'— доктор биологических наук, профессор Г. А. Чалый

Официальные оппоненты;

— доктор медицинских наук, профессор А. И. Конопля

— кандидат медицинских наук А. Л. Мирингоф

Ведущее учреждение:

;Российский государственный медицинский университет им. Н. И. Пирогова (г. Москва).

Защита состоится.« » £>£»^3^511995 г. в ^ час. на заседании диссертационного Совета К 084.57.01 при Курском государственном медицинском университете (305033, г. ¡Курск, ул. К. Маркса, 3). ,

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке университета.

. Автореферат разослан <? ^б» СЛЛ, уу\ 1995 года.

Ученый секретарь

диссертационного Совета, доцент

Новиков

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность теин. Среди ферментных препаратов медицинского назначения наиболее распространенными язляятся прс.еази яивотного, растительного и микробного происхоядения, ,а .гакхе их активаторы и ингибиторе. Основннми показаниями к их применен<ю являются' брон-холегочние заболеглния.пнойно-воспалительние процессы млгких тканей, термические ожоги, тромбозы различной локализации, некоторые вирусные заболевания (Ыосквичев Б.Ь. и др., 1990;3еремеыжо К.Н. и др., 1993; Рансбергер К..Ной С.,1994).

Установлено, что протеолитические ферменты (трипсин, сво -бодный и иммобилизованный террилитин, комплексный ферментсодвр-гаций препарат каталитин) обладапт выравенным стимулирулщим действием на иммунологическая реактивность к различным экзо- и эндо-антигенам при ряде заболеваний, характервзувщихся нарувзяизм активности иммуно-омпетентных клетскЛКлыкова Г.Т.,1983;Чалый Г.Й., 198.; Зимсков В.М.,1991; Прокопенко Л.L. и др.,1994; Хыелевская И.Г., 1994; AnSorge S.et al,1988). Данныо препараты оказались эффективными как при традиционном, так и пои зкетракерпораяьном способах их применения С Вельский В.В. и др., 198?; Троянов Г,В. и др., 1988; Лопаткин H.A. и др.,иа9; Шаталова Е.В., 1963; Прокопенко Л.f. и др., 1990; Латыи H.A.. 1991;° Сипливая Л.Е., 199<!; Авоп E.U., 1992),

В настояоее время наиболее перспективными признаки фермвнты протеолиза, продуцируемые ' микроорганизмами и обладающие способностью лизировать фибуин. Интерес к ним. обуушвлен в первую очередь их тромболитическим действие)" высокой активностью и устойчивостью. Кроме того, технология получения протез из микробного сырья экономически более выгодна ( Гост'ичев Ü.K. и др.. 1S85;

Иосквичев j.ß. и др., 19SC; Дегтяренко Т.В., 1992* Сологуб Л.И. и др., 1993; Schärpe S. et al; 1991).

Активатор плазминогена-стрептолиаза, полученный из культуры , бета-гемолитического стрептококка, и его иммобилизованная форма стрептодеказа применяются как эффективные тройболитические средства в терапии периферического артериального тромбоза или тромбоэмболии, периферического флеботромбоза,острого инфаргта миок;.)Да, для растворения сг_,стков фибрина в плевральном экссудате и других полостях ( Чи^ман М.С. и др., 1..J6; Волобуав Ю.Ю., 1989; Господаренко Л.Л., 1992* Чазов £.И. и др., 1992; Навковский М.Д. 1993; ColHn D., 1992). В патогенезе и саногенезе за'.плеваний,при которых показано применение препаратов стрепп лиаза, существенный роль играет имыуннач система организма (Соловьев Г.К.и др., '986; Оермилен П., Ферстрате S..1S8Ü; Дранник Г.Н.,1989; Корочкин И.М... и др.,1989;Junger H.G.,1993 ),ß доступной литературе данные о влиянии естественных активаторов плазмИногена и их препаратов, в том числе стрептолиазы и гтрептодсказы, на систему иммунитета в норме и патологии отсутствувт. В связи с зтим изучение влияния препаратов стрыптолиази На иммунологическая реактивность.организма является актуальным.

Цель работы - установлен..г закономерностей влияния свободной и иммобилизованной форм стрептолиазы на иымунологическг ; реактивность здоровых животных и в условиях патологии, сопровождавшейся повытзшшм ''-роыооооразованием и развитием вторичного иммунодефицита.

Задач;;; 1 - исследовать воздействие препаратов стрептолиазы (CTpeniüJU ¡1 стрепгодеказы) на развитие гуморального иммунного т-Г)ета(1'ЙИ.1.!.нду1|ирэванного Т-зависичим антигеном- эритроцитами бо,. ■ на (ЗБ).в •JdbiiCHMüCTM ür дозы, кратности и сроков введения относительно кь'.нуннзации;

2 - изучить -цияние стрептолиазц и стрептодекази на вырахенкость реакции гиперчувствятельности замедленного типа 1ГЗТ) на ЭВ;

3 - выявить воздействие изучаемых препаратов на функциональную активность иииунорегуляторгшх клеток;

4 - установить эффективность эг.стракорпоральноги применения стрептолиазц и её ¡шуобилизованнол форми на развитие ГИО к ЗЬ;

5 - изучить олиише препаратов стрептолиазп на иуыунологичесиуя реактивность организма в условиях алиментарной гиперхолестеринемки я саоговой травме.

Новые научшю полозения,выносимые на защиту. Стрептолиаза и

06 нмнооилизованнаа форма стрепгодеказа, применяема внутривенно у.г-л внутрибрзиинно, стииулируят формированиг ГИО и ГЗТ на Т-ззои-

антиген.

Стрепголназа и стрептодеказа предотвратит развитие антигвн-■"пгия^мчрс::оЛ :1 антигеннэспецифичоскоЛ ману.чосупресгии.

£ I;; н у г I о 1= о д у л и р у пз - г ? яффект про..аратов стрелтолпззи реализуется экстракорпорально прп обработке ики ш vitro с;:«е!1оц!1тов, эритроцитов и лиифоцитоз териферичоской йр;с».

Препарата стрэптоллаз:» э цслпвипх енотового порагония и алиментарной гипзрхолестеричег'и оСладапт йау^окорригивцпцими свойствами.

Практическая значимость Установлен:! дозн, способа и скачи введения препаратов стрептолиазп, приводящие в эка^г.иы.'НТч ;; устогчивнм имауностимулирукциы эффекта!) в условия;; здорового организм и некоторых Фирмах патологии, сопровЛгдач^сйся посивеш^м тромбоэбра-зопаниум и гторичшш иммунодефицитом > ожоговое порах" • нне.этпериыентгльнии атеросклероз

спорикентально обоенэвзча возможность .жстрамгрпг.ра:•'• й имичнофа^'-акотарании стрептоли.эзой и ' етреги-декэлнй. с-и.я-т /д»

ганнрй эритроцитами и лимфоцитами периферической ь^ови.

предложены и внедрены "Экстракорпоральный способ стимуляции иммунного ответа препаратами стрептолиази'Ч 1130-94). "Способ стимуляции иммунного ответа при ожоговой бэлеьни'Ч 1131-94).

Апробация работы. Основные положения диссертации были доло-генц и обсЯ8дены .а научно-практических конференциях КГЙ9, посвященных актуальным вопросам экспериментальной и клинической медицины и фармации (Курск, 1354, 1995); Всероссийской научно-практической конференции "йктуалыша проблемы профессиональной и экологической патологии" 1Курск, 1994),'юби 'йнои конференции, посвя-ценкой 80-летип КГМ9 "Актцс—ы-шо вопросы экспериментальной и клинической медицины " ( 1995); Междупродном экологическом форуме Современнее зколо! ические яг ^лемы провинции" (Курс: ,1995), совместном заседании кафедр биологической химии, фармакологии, органической химии ( 1995).

Публикации. По материалам диссерт^ 1ии опцбликовано 6 работ. Объем и структура работы. Диссертация состой, из введени , обзора литературы ( глапи 1,2,3), описания материалов и методов исследования (г,.ава 4), изломения результатов собственных исследований (главы 5-9), заклшчешш к выводов. Работа излояен' на с-раницах ыалинописи и включает 1? таблиц, 10 рисунков,

указатель литературы, содержаний 219 источниксз оте „'ственной и 44 источников зарубенной литературы.

С I) Ц К Р I А Н И £ Р й 5 0 Т И Материала и методы исследования Ио\.::чА.)вднйя бнполнсив на 1513 крысах Вистар массой 120—180г ны$;<х--ги6ридзх ^ ( СЙЙлСГ'ВЬ ), ¿56 беспородных кроликах

массой 2,0-?,3 кг. Исследовали икнунотропное действие препаратов строптолиаэы (синонимы - С7рептаза, стрептокиназа), полученной из культуралыюй жидкости бета-гемолитического стрептококка,относящегося к группе С ("Беринг", Германия) и стрептодвказы - строптоли-азц, иммобилизованной на полисахаридной матриц^ (ИОС 1!Н Л^Р экспериментальный эаиод),Растворенные в изотоническом растворе хлорида натрия препараты вводили одно- или трехкратно, с интервалом 24 ч, внутривенно, внутрибрюиинно или внутримышечно. Стрепто^яазу применяли в дозах 25*10* , 25*11? , 25*Ю4 , 75*10* , 1,0*1^ . 3*10* МЕ на

i 4 &

1 кг аассн тела, стрептодеказу -в дозах 25*10 , 75*10 , 1,3*10 , £

3*10 ФЕ на 1 кг массы.

Ожоговую патологию моделировали под эфирным наркозом путём нанесения ожога 36 степени.Оаог наносили на кожу спинн крыс с по-цо^ъв устройства, поддерживающего текператуоу на уровне 100 С,при экспозиции 8 секДМинухин В.В. и др., 1985), Гиперхолестеринекию вызывали путем ежедневного введения в лицевой рацион кроликам 0,5г холестерина в течение 24 недель.

В качестве Т-заэигЧмого антигена использовали ЗБ, которые мышам и крысам вводили в дозе 2*1 С? клеток на 1 кг массы тола однократно, в'нутриорпаинно. Куликов имму..лзировали ЗБ в краевую вену

8 °

уха из расчета 8*10 кле ок на 1 кг массы тела животного.Выраженность ГИ0 оценивали на 5-е,8 е или 12-э сутки после иммунизации по количеству антителообразуючих (Й0К) (Мальберг К.,3игль 3., 198/), розчткообразувцих клеток ¿РОКИ Зауэр Х.,13з?) в селезенке и титрам антиэритроцитарк^х антител (йт) в сиво[отке кровтК.Кальберг, 196? . ГЗГ у кыией индуцировали внутрибргшинным введением лб ( Й.Д.Черноусова и др., 1979).

Пучение действия препаратоз стрЬптолкази на Фзноке:; аитм-генспецифической пчауносупрассин исследовали на модгли. ьпкган-

- Б -

ной Р.Н.Хаитовым и соавтд1980), путем введения динорам спленоци-тов п.леримыунизнрувчей дозы ЭБ.Препарат и вводил« донораи или реципиента« клеток селезенки до или после иммунизируем 1 дозц Эй»' йнтигеннеспецифическуп иныуногупрессив воспроизводили внутривон-

«г

hi - введенной Кон й (Новиков В.К. и др., 1992).

Ё чач'и опы jb рсследовали имкуномодулирункне свойства препаратов, опосредованные спленоцитаии и их фракциями» эритроцитами и лимфоцитами периферической крови при экстракорпоральной обработке клеточных элементов. Пул ядросодервацих клеток селезенки фракционировали по спссооности прилипат к стеклу (Нолуикии З.Ф.и др., 198д). Лимфоциты,эритмиитн периферической кри^л или -члено-циты инкубировали с растворами спелтолиаэи, содерхацими 7/15 и

2572 ME в 1 мл, и..л стрепто;> ?казы - в дозе 30857 и .3428 ФЬ/кг на т

2*10 клеток, йизкеспособность ядросодерка&дос клеток оценивали в

тесте поглощения трипанового синего (Вихнер 3.,13й?).06работаннае

in vitro стрептолиазой или стрептодеказ.:1 сплеиоциты,эритроциты и

ч

лимфоциты вводили интактным реципиентам внутравенно в дозе клеток на 1 кг кассы до или после иммунизации.

Фибринолитич^иую активность плазмы определяли по Ковальскому и Ковсфяику i Валуда В.il. и др., 19Й0) с использопанием наб 'ов д."ч определения фибринолитической активности плазмы крови i лизиса зуглоОулиносого сгустка ),("SiMKG itd", Львов)..

Статкстячегкув обраоотку цифрового мак . лала проводили путем вычисления, гчедней арифш ич«скск itt),квадратичного. О1клон?ния( 6) и довэрищЬьньго янтсрпаяа ¿1) с версятиоспв :!bZ по таолмцан Р.Б. Стрйлкпгл i !'Jii(j). Г t; г т г vtiH о с 7 ь различий средних величин оценивали о /U'Vijjrf.3 кригориги i;!! л': о г::: .л - .4 j н: i) - Ь' и т н и I Tv/vp t.H., I'J/i-,

|!.»:я.« ! .1?.. '.'Jilt)).

- 7 -

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ .

Инмунонодулкруищее действие стрептолказ» и стрептодеказа у здоровых животных ' В первой серии опнтоз исследовали влияние стрептолиазы и стрептодекази на формирование ГИи в зависимости от дозы, способа и времени введения препаратов. Установлено, что стрептолирза и стрептодеказа, ввпдешшв до иммунизации, ойладапт дозозавигимнм иммуностимулируащим эффектом.Наибольпее иммуностимулирующее действие отменено на 5-о сутки при внутрноркаинчон применении стропто-

1 6

лиззы и стрептодекази соотвегстствонно в дозах ?S*fv й£/кг и 3*10 ФЕ/кг, поэтому в последуцих сериях опытов препараты применялись г основном в таких дозах.Другие дозировки строптолиазы и строптоде-каэи поел? иммунизации еивотных оказывают аналогичный, но менее внраненный эффект. Показатели ГИО на 8-е и сутки после икиу-низацин свидетельствуют о более пролонгированном нмч^иотропнои эффекте стрептодекази по сравнении с нативной формой,что,по-видимому, связано с иммобилизацией стрептолиазк. Ьолчс вирааеиннй иммуностимулирующий эффекг препаратов стрептолиазы до иммунизации позволяет считать, что непосредственное или опосредованное действие их направлено'в больиер -стзпени-на недифференцированные пред-кественники антит&лсобраз лцих клеток.

Ü дальнейаем изучено вли ше препаратов стрептолиазы и стрс-птодеказц на развити.5 ГЙО на 3fi у аысей в зовисиностн от спосооа их введения.Установлено, чти наиболее зираяешши качуиостниулирч-В5им эФфеиток обладает внутривенный спос°> их введения. о '^м свидетельствует увеличение уровня ..JK в 3,f¡ и 2,9 , РОК и 3.2 к 3,1 pata для стрептрдеказы м стрептолиазч соотгетстрекго. снятии-мшеичио' поступление стрзптолиазц или стрептодекази не ву.':п«г формирование fiíl) (Таблица 1),

Таблица 1.

Влияние стрептолиазы и стрептодеказы на разьит.чг ГИО в зависимости от способа их введения

гр Всловия опита — -- -................ ■ — Аи К Р 0 ■

5-й день 8-й день 5-й день 8-й день

1 Иамунизащ 1 13,3+0,2 7/'0,2 24,8+1,6 43,9+1,4

г Стрептолиаза, 38,3+2,1 17,1+2,6 76,9+2,1 127,6+4,6

в1<чтривенно+ РК-О.О'о Р1<0,^ Р1<0,05 Р1<0,ОЬ

иимунизацьл

3 Стрзптолйаза, 22,У+2,? 1С,1+2,1 44,4+4,8 77,8+0,5

внутриорюшинно+ Р1<С,09 Р1<0,05 Р1<о,о: РК0.05

иммунизация Р2<0,05 Р2<0,05 Р2<0,05 Р2<0,05 ■

4 Стрептолиаза, 12,8+2,3 5,9+1,1 21,9+2,4 42,7+5,6

внутримышечно

+иимунизациа Р2,3<0,05 Р2,3< 0,05 Р2,3<0,0Г" Р2Д<0,05

5 Стрепгпдеказа, 50,6+3,6 28,9+1,2 81,8+2,7 132,9+4,8

внутривенно + Р1<0,05 Р1<0,05 Р1<0,05 РкО.ОЬ

_ иммунизация

К Стр^птодеиаза, 32,1ы,4 15,4+4,2 52,1+4,7 83,1+5,6

еиутркбрвашшо Р1<0,05 Р1< 0.05 Р1с0,05 Р1 <0,05

+иммунизациа РЬ<0,05 Р5<0,05 Р5<0,0й Р5<0.05

. Стре.чпдркьзс), «,1+1,2 28,4+2,2 45,6+2,2

внцгрикичсчне

\ »имунизацка 1 1 Pli.liiO.Db Р5.6<0,05 Р5,6<0,05 Р5,Ь< 0,05

Примечание: 3 таблицах ¡. 2, з : каждая средняя получена в опытах на о-Ю гипотных, ¡"мичество йОК дано б кс/орган; количеств ?0Ь да!.о г; у.лн'ор чи; Р-достоьорногть различия средних, цифр: ал-=к '.'.плздсагг.по стноо^кип к показателю г-ч^й. П"!".пи 37Н ра^ЛИ'-1? ,9<Н'«<гЕЧ$»КН. *

ГЗТ играет вавнуга роль в патогенезе различных заболеваний. В этой связи изучено влияние стрепталиази и стрептодеказы на развитие д-.ииой реакции, индуцированной ?5.Препараты в эдили Енут^и-^рииинно одновременно с сенсиби1изируаг;ей или." разрешающей дозой антигена. Стрептодеказа так ае, как и стрептол"аза, стииуирует реакции ГЗТ в болы й счпени при ззедении с разрешавшей дозой ЗБ. Вероятно,препараты стрептолиа^ оказывает влияние как на пролиферация лимфоцитов с.инси&илизировашюги ЗБ организма,так 11 на функ-циональнуа активность клеток эффекторной фазы ГЗТ.

Известно,что сниаение или повыисние фибринолитичоской активности (ФЙ) крови икеет сучественное значение в развитии различных видов патологии.(Йндреенко Г.В.и др., 1939;Ена Я.М,, 195(1) Снияение ОА крови является одним из ведущих факторов тромбооОразо^ания и атеросклерозасбалуда Й.П.1980).Установлено,что динамика изменении ФЙ крови отраяае интенсивность развития ГИО, которая проязляется з различии показателей ГИи у яивотнг.х, плучазвшх етрелтолиазу и стрептодеказу.Лри введении стрептодеказы отмечено более продоляи-тельное повыиение ФЙ крови, имеицее фазный характер при введении как свободной, так и иммобилизованной форм активатора плазминоге-на.В настоящее вре"«я иммуностимулирув^ий эффект лротеаз связнваит с их протеолитической активностью (Чалый 193Я; Нисч.лтенко

Л.Г. и др., 1994).На основании полученных данных мовио прэдполо-эшть, что иммуностимулирующий эффект исследуемых препаратов в условиях навих экспериментов опосредован позниенкой фипринолити-ческой активностьа, обусловленной вводимый» чнтиватпраии плазии-ногена.

- 10 -

влиание стрептолиази я стрепт^чеказы на анткгеяспецифическдю и антигень.,— специфическую иммуносупрессию Феноыен иниуносуиресс и имеет ваиюе згчение в регуляции чнтг. ;иености иммунных р1акций и тесно связан с индукцией толе-ра\. ости г: экзогенным и сооственным антигенам (Бастин А. и др., 1У83; Хаитов Р.К. я др..1990; Ковальчук Л.В., Чере^ев Д.Н. 1991} Мару -зния супрос )рн,.(: активности потенциально способны зазвать аноаа;. .и иммуннс.: о ответа и привес .и к возникновение различных заболеваний .

Б с язи с этим изучено влияние препаратов <~-роптолиа?ы на антигенспецифическуп и антигеннеспецифичес :ув имиуносуп^ессию. Установлено, что введение интактным яивотныи клеток се"9зенки гиперимыунизированных доноров (КСГД) угнетает ГИО на ЭБ.Однократное введение стрептолиазы как донорам, так и реципиентам КСГД, не влияет на выраишность имкуиосупрессии. Однократное £е введение стрептодеказы донор а Ш'Д у.чоньаает выраненность ичмуносупресгми, С увеличен!* "М кратности введения препаратов эффект нарастает.Наиболее выражение влиание на феномен антигенспецифической ииыуно-супрсссии вызывают препараты стрептол.-. *зи,введенные до иимуниза-цни доно^'У КСГД. 'Таблица 1 .

'.':■ 1> следующей еврин исследовали влияние этих ке препаратов на разши!! аптигеннретщифической иммунпсупрессии, ¡¡оказано, что вг--д'.!т», !)ОП А достоверно ;;гнетает имчуш'Ый ответ К5 35. Стреп-тедека:^ ;') т;п-; г« кз1: и стрег-толиаза, отменяет аитигеннеслецифи-пгскув 1'1Р-р»'сси:с в с-с-льзей стельки прк применении препаратов до ¡^ем'Нчь ье-и А.

Таблица 2

Ьлиянив на ГИО у реципиентов трехкратного введения стрептолиазы и стрептодекази гипьриымунизированкым донорам спленоцнтов

• N групп Условия опыта (что вводили) й и К .тнс. на оргин РОК млн. на орган

1. Иммунизаф'2 14,2+1,3 26,6+2,;

2. КСГД + ик«^ .изация 3,8+1,1 ■ 1 ,8+2,2

Р1<0,001 Р1<0,001 '

3. Стрептолиаза + КСГД • 12,2+2,а 2Ь,2+3,1

+ имыунизациа Р2<0,001 °2<0,001

4. Стрептодеказа + КСГД ¿.4,2+3,4 42,5+2,Й

+ инмуизация . Р1,3<0,05 Р1.3<0,03

Р2 <0,001 Р2 <0.001

5. КСГД + икиунизац ' 1 б, 1:3,2 24,3-М

+ стрептолиаза ■ Р1-4<0,05 Р2,4<0, ■}

6. КСГД + иниунизация 10,2+4,2' 28,4+4,8 ' .

+ стрептоле/'^за Р2,4<0,01 сг.4<о.о1

Таким образом, стрещолиаза и стрептодеказа облодаш\ способностью отменять как антигенс^цифическуи, так амтйгашеспецифи-ЧР'чую иммуиосупрессии. Н <у:6ольоий аффект при введении активаторов фибринолиза донорам спленоцигов. вероятно, объясняется их преимуцестве1шыи воздействием на' формирование'предшественников Т-супрессоров к п меньасй степени - на активность зрелых Т-клеток. Сникая кслнче'. эо и активность Т-супрессоров,то есть опосредованно ^лияя на проду-щш и функциональная активность иммунокомпе-тентных клеток, препарат« стрептолиазц ослабляют их неспецифическое иммуносупрессоркое действие, что дает возможность использования цанных препаратов при различных состояниях, сопровождавшихся повынешшм трсыоообразованием и возникновением вторичного иммунодефицита.

,!

Иммуномодулирувма действие препаратов стрептолиазы при их экстре орпоралыюм применении

¿.четракорпоральный способ применения препаратов позволяет устранить недостатки традиционных методов применения лекарственных средств.Й основе экстракорпоральной терапии лежит фармаколо-гичес зя индукция кл^гок опре,г ленной функциональной направле -ности т уЧго с последующим введением их в организм, из кота^ч'-го они были получе. I ( Лесков В.П. и др.,, 1986; Лусс Л.В. и др., 19У2; Ярскоиенко Л.Г. и др., 1992). .

Экстракорпоральный ианунокодулнрцвзиР эффект препаратпв стрептолиазы был опосредован в наэих опытах сингенниыи спленоц:;-тамь.их прилипающими и неяриливазйини к стечлу фраьчияии. эритроцитами или лимфоцитами периферической крови.

Установлено,что спленэциты иитактных доноров, обработанные п. vitro стре'птолиазой и стрептодеиаэой в дозах, в 10, 20 и 100 раз меньпв доз, применяемых парентерально, оказнеавт иннуностимулиру-вщее действие. Данний эффект реализуется преимуществен э за счет прилипавшей к стеклу фракции клеток селезенки.Аналогична»! эффектен обладает эритроцигц или лимфоциты, обработанные in vitro стрептолиазой и стрептодеказой.при их введении в организм интакт-ннх реципиентов с одновременной иммунизацией ' эследних ЗЕ,Эритроциты азотных, получавши инъекции исследуете препаратов, при вседении интактныи реципиентам' стииулируит ГИО к ЭБ, по их фокт менее зыр ген по ерп-'непиэ с экстракорпорально применяемыми эритроцитами.

Иммуностимулирующий эффект препаратов стрептолиази при их зкетракорпчральио'' применении, в основном, реализуется за счет стимуляции функциональной активности макрг "■агов ( прилипавшая к стеклу фракция спленоцитовсекратирув^чх различим« медиаторы иммунного ответа, '"ри этом, по-видимому, действие т иммунный ответ такяе частично реализуется и за счет актипироеаннах препаратами лимфоцитов i неприлипапчаз к стеклу оракцит спленоцитов ), чоторые способны в органкзае реципиентов ьыделять хелперние медиаторы. По-видимому, аналогичный механизм инеет несо и при экстракорпоральной обрабигке п;зпаратами стрептолиази л йфоцитов периферической крови. Появление иимуностииулируидих свести у экстракорпорально обработанних исследуемыми препаратами эритроцитов моано ооъяснить либо следствием изменения структуры меьшра-!Ш.эритроцитов.визв-нного препаратами стрептолиази. либс результатом сороцин их на меийране .эритро-чтоз.

Имиунокорркгирувдее '.ействие препаратов стрептолиазы в у ловиях одогового пог гелия

Известно, что термическая травма" угнетает асе звенья иммунитет'- Ори этом в крови снижается уровень основных классов наыдно-глобулиноа сГригрьев Ii.Г. и др., 1984; >,количество Г- и С-лиифо-цитов, наруа^ лея их функциональная активность (Вихриев С.б. и др.. 19Ö6- Козинец Г II. и др.,1988; Singh II; et ni, 1988: tiender U.S.; 4t al, 19t>ö ), угнетается формирование ГИ0 na Т-завис-шй антиген (;1шстрова H.H., 1989; ¡¡аталова Е.В. и др., 1990; Лсснак H.II., 199b; Чалый Г.Я. и др., 1995), В уело.лях огогового пораге-ния угнетается такве фибринолиз, что является предпосылкой к троыбообразоранию и ведет i: -необходимости лрииекенияя тромболити-ческих сядете с целью коррекции гемодинамики Георгиеса С.ft. и др.,1982; Вдеьм В.В., 19Ü6 ). Б этой связи,' паччно-практкческий инт^.ес представляет изучение "чиукотрошшх свойств препаратов строптолназ: используемых в комплексном лечении ожоговой болезни. Установлено, что охоговая травма достоверно угнетает развитие ГИО к 30. Применение препаратов стролтолиазы с данных условиях не только отменяет иымуносупрессия,но и обусловливает лмнуностиаали-№ций эффект. Наиболее он сцравен у яивотных. который нанесен ояог l день первой ииъекции ¡и .¡аратов и введения антигена, t Таблица :и4' При применении стрсптолиази и стрсптодекааь в злшшх условиях ..^ивень иммунных AUK в селезенке на 5-й сутки увеличивался ссагеетственно ь 4,0 и ti.O раз," а РОК - в ц ti,о раза. При '-чииененки препаратов спустя дь \ после оаога их и.н-муностиыулируиии эсфокт ütui несколько ниве.

Следует отметить,чте осяее прошипел! ний никднсстимэлирдв-чип зсфект отпечен р случае иринснекйа стрептодекази.

Яроведешше исследования подтверждает целесообразность прийе-кеиир препаратов стрептолиази прк лечении данной <^рки патологии.

Таблица 3

Иммунокорригируючие свойства стрептолиззы и стрептодеказы в усчс лях огоговой травмы

.н групп Условия ог.нта й 0 К Р В К

5 день в день а 8 день

1 2 ' 3 4 6 7

1. 36 ( Контроль ) 18,1+3,1 7,9+1,4 28,6+3,2 51,2+5;1

2. Оаог + 36 6.4+0,6 4,3+2,1 6,8+1,6 15,6+2,4

Р1с0,0</1 Р1< 0,01 Р1<0,001 Р1<0,001

3. Оког + ЗБ + ¿9.1+2,7 15,4+1,6 29,4+7,) 59,3+5,1

стрептолиаза Р1< 0,0» Р1< 0,05 •

Р2<0,001 ✓2<0,001 Р2<0,001 Р2<0,001

4. Овог.+ соептоли- 14,8+2,1 8,8+1,5 21,6+1,2 46,8+2,2

аза + ЭБ Р2<0,001 Р2< 0,01 12<0,001 Р2<0,031

3. ' Ояог + -ЗБ + 38,5+3,3 21,8+3,6 18.2+6,3 63.2+6,2

стрептодеказа Р1< 0.05 Р;. 0,05

Р2<0,001 Р2<0.001 Р2<0,001 Р2<' 001'

о. . ■ Оког + стрегтоде- 19,5+2,6 10,2+1,3 29,4+2,2 55,3+4,6

) 1 1 •;аза + ¿Ь ! Р2<0,001 Р2< 0,01 Р2<0,001 Р2<0.001

- 16 -

. Иммцнокорригирувцие свойства препаратов стрептолиазы в условиях адимек.арной гйперхолестерикемии

В настоязез время атеросклэроз и гиперхолестеринемип относят к икмуноопосрмованным заболеваниям ( Карпов Р.С., lim; Чазо* Ь." , 1992; Steame S., et ai, 1391; Lopes-Uirem M.f'., et al, 1992; Hunoz I. et al. 1932; Hansson G.K., 1993).

.(оказано, что образование антител к 3G и белкам сыворотки крови человека у кроликов, получавиих холестс.ин в течение б Фидель до инъекции антигена, существенно снижалось i Дробгто Я.Д., 13/4; Барт Ё.6., 1993; Сиплизая Л.Е., 1991).В наших исследованиях после ¿¿-недельного поступления холестерина с пищей р звитие ГЙС у кроликов на Эй было существенно угнетено, „ведение *е стрептолиазы кроликам, получаввим холестерин, попивает количество (ШК па сравнении с «ивотными, не по. ^авшикк препарата, р 2,6 раза, а РОК - в 2,з раза. При этом данннб показатели достигают уровня контрольной группы. При применении стрептодекази имаунные ЙОК й РОК селезенки чли достоверно suae в 1,6 и 1,7. раза соответственно по сравнении с показателями контрольной группы, эритроциты кроликов, получавних хо-лстерин, при введении вивотным -аходиввинея на обычном пищевом рационе, супрессируст у них развитие иамунного ответа к Приыеньние стрептолиазы в данных условиях гмвелирует иммунасупрессоряое воздействи? эритроцитов шветных, получаь-гих холестерин. При применении стргптодгказа выявлен иммуьоск'^удиру-вций эфг i.i прзпарага, о чем свидетель.. вус г повыаение уровна лЖ в ',7 раза,РОК - в 1,8 раза вцше уровна контрольных показа.аяре, Введение интакгнаи «иьотшла сыйэ »год крови кроликов, получавших хо: перин, вызывало еккайние показатели!! ¡'НО- на ЗВ. Примепода.з

стрептолиазы в указанных услозиях повыаало количество АОК и РОК по сражении с группой гивотних, которым вводили си протку кроликов, получав х холестерш . но пока: 1тели не достигали уровня контрольных. При введении стрептодехаз« отмечено увеличение количества йОК в 1,9.раза,РОК в 1,8 раза по сравнения с по Ьазателями группы животных,которым ин- чцировали сивсротку кроликов, полунав-вих холестерин (таблица 4).

Таблица 4.

иммунокоррип.^ущая активносг стрептолиази и стрептодеказы ь условиях алиментарной гипьрхолест.ринемии

Факторы 8' л и -я к я е

холестерина СЫБОРОТКИ эритроцитов

' Иммунизации: Супрессия' Супрессия Супрессия

Стрептолиаза + иммунизация ((ормализация ГИО Тенденция к норыалг ;ации Корнали?-ция гис

Стрептодеказа + иямунизация Стимуляция ГИО Нормализация ГИО Стимуляция ГИО

Таким сЗразои,введение препаратов сгрептолиаз.; ейвотнкч, дла-п..ьно получавгим холесте^^н^озвол^ет корригировать имыушшй ответ на 35. При применении стрептодеказа в условиях алиментарной гип .холестеринемии выявлена стимулгцка иимуниого ответа на 35.

Наличие у i. аратов стрептол'иаза фибринолитических я установленных нами и^д(уностимулнрувцих свойств позволяет при их применении воздействовать «.с различные стороны этяопа.ч)генезй заболеваний шимзлышя количеством препаратов, обоснованно сняла необходим, гь полипрагаазии.

а и а о д и

t. Прс. ^ратм экзогенного активатора уаориполнза стрептолнгзй

i: оо иммобилизованная Qopua стрептодеказа ст:шулируат уариирова ~

вание Г110 и ГЗТ на 35 у здорових снвотаим,

¿. Иакуностичулируичес действие стрьптолнази .. стрептодекази

зависит от дозы, времени и спосооа введений. Иаксмаяьнва иыму-

4

ностиьулируЕции эффектов оалаь^ют: стрег.толи-эза в дозе 75*10

е

lit/кг. стрептодеказа - 3*10 ФЕ/кг при их внутривенном введаь.ш до 'пшуннзащш;меныз выраяен эффект при внугркбрювинноц введении, tips; енутрккыгечнои применении влиячия исследуемых препаратов на iiii) не ч гановгено.

3, Стрептолназ«! и стрептодеказа откеи'шт развитие антигек-специфической и анг.тсннеспецифической яммО'тсупрессии.

!;■■ . .н:,1 а'лтннх к'чн., осработонны»? in vitro стрепто-

лйазой и стрептодеказой, более интенсивно, чем эритроциты »ивот-иых, получаавих инъекции данных препаратов, стиму ируит ГИО к ЗБ у интактных реципиентов.

5. Лимфоциты периферической крови и спленоциты животных, обработанные in vitro стрептолиазой и стрептодеказой,оказывают

иммуностимулирующее действие в организме интактных реципиентов к ЗВ. Иммуномодулируюций эффг"т препаратов реализуется, в основном, за счет прилипавчьй к стеклу Фракции клеток селезенки.

6. Препараты стрептолиазы повышают ГИО на ЭБ, сниженный ояого-йой траг ой и алиментарной гиперхолестеринемией. -Нгоолее вира-генными иммуностимулируачими свойствами обладает иммобилизованная форма стреыолиазн.

7. Введение сг^ептолиазы и стрептодеказы вызываем повышение Оибринолитической активности крови, имеющее фазный характер. Стрептодеказа повивает в 10,° раза фибринолитическуи активность крови по сравнению с неиимобилиэованной формий активатора.

' СПИСОК РЛРОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Стрептокиназа и стрептодеказа как стимуляторы гу«оиально .т иммунного ответа. - Москва. 1994.-Деп.в В!ШИ1ы N Д-2396Й от 10.03;94 Соавт. Г.А.Чалий. <

2. Влияние тромболитических препаратов свободной й иммобилизованной стрептазы на гуморальный иммунный ответ //Якт.пробл. про*, и акол. патол. - Курск, - 1994. - С. 2/'Й-282(соавт. Г.Я.Чалый).

3. Иммунотрспное действие препар ов стреитокиназы/Акт. проод. медицины и г ;рмации//Мат. итоговой научной конференции студентог

и иолодых ученыхв - Курск. - 1995. - С, 75. (соавт. Л.П.Чалая).

4. Имк'чюмодулирующич свойства зритрсцитов, экетракорпоральн! обработанных препаратами стрептокинагу / Современные вопросы дер-матовенерологии//Юбилейный сборник научных трудов. -Курск. -1995. -С. 124-12;).(ссавт.Г.А.Чалый).

5. Некоторые аспекты иммуномодулирупцего действия свободной и г мобилизированной стрептазы/йкт. вопр. зксперим. н клинич; медицины и фармации//Мат.юбилейной конф., посвяч.бО-летив КГИУ. .

- Нур^к. - 1995. - С. 113-114. (соавт. Чалый Г.Р.., Чалая Л.П.).

6. Влияние препаратов стрептокинази на антигенспецифическуь и антигеннеспецифическуа иммуносупрессию / Современные экологические проблемы провинции//. Йеядународный экологический форум.

- Курск- 1995. - С. 201-202Дсоавт. Г.Я,Чалай, И.Г.Хнелевская).

Подписано в печать ¿С С А 9.5 Заказ I_Тираж

Печать ротапринтная, йормат<->/> усл.псч.листов

Курская городская типография 305004 г.Курск ¿> л .Бенина д.77