Автореферат и диссертация по медицине (14.00.14) на тему:Меланома сосудистой оболочки глаза

ГБ ОД

2 ^МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ И МЕДИЦИНСКОЙ

ПРОМЫШЛЕННОСТИ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ РОСТОВСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ

На правах рукописи

ЧЕРНЕЦКИИ Евгений Оскарович

МЕЛАНОМА СОСУДИСТОЙ ОБОЛОЧКИ ГЛАЗА (клинико-иммунологические исследования)

14.00.14 - онкология 14.00.08. - глазные болезни

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

РОСТОВ-НА-ДОНУ - 1996

Работа выполнена в Ростовском Государственном медицинском Университете

НАУЧНЫЙ РУКОВОДИТЕЛЬ:

кандидат медицинских наук, доцент В.С.Журавлев

ОФИЦИАЛЬНЫЕ ОППОНЕНТЫ :

доктор медицинских наук, профессор .Чиж Г.И. доктор медицинских наук, профессор .Темиров Н.Э.

ВЕДУЩАЯ ОРГАНИЗАЦИЯ : Межотраслевой научно-технический

комплекс " Микрохирургия глаза" МЗ и МП Российской Федерации.

Защита состоится »С^и&брО^иЯ 1996 года в _час на заседании диссертационного совета К 084.73.01 при Ростовском научно-исследовательском онкологическом институте ( г.Ростов-на-Дону, 14-я линия, 63). С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Ростовского научно-исследовательского онкологического института.

Автореферат разослан

года.

Ученый секретарь диссертационного совета доктор медицинских наук

Рубцов В. Р.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

АКТУАЛЬНОСТЬ ПРОБЛЕМЫ

Меланома сосудистой оболочки глаза является одной из самых частых внутриглазных опухолей и составляет среди них, по данным разных авторов, от 50 до 85% (В. М.Шепкалава, А. А. Хора-санян-Тодэ, О.Н.Дислер, 1965, Э.Ф. Левкоева, 1973, Э.О.Коте-ля'нский, 1974. Н. Shammas, 1977, А.И.Пачес, А.Ф.Бровкина, Г.Г.Зиангирова, 1980). Вместе с тем меланома сосудистой оболочки является и одной из самых злокачественных опухолей человека, в первые пять лет после энуклеации летальность достигает 50% (A.B.Reese, 1963, F.Davidorf, J.Lang, 1975).

Диагностика меланомы сосудистой оболочки глаза в настоящее время встречает определенные затруднения. Особенно это касается самых ранних стадий заболевания (Т1 -Т2), а также случаев, когда длительное нахождение опухоли в глазу сопровождается гемофтальмом, помутнением оптических сред, высокой отслойкой сетчатки. Расхождения между клиническим и патологоана-томическим диагнозом достигают 15% (Э.Ф.Левкоева, 1973)'. Все это обусловливает необходимость использования комплекса диагностических мероприятий, от самых простых и традиционных, как офтальмоскопия, диафаноскопия, до весьма сложных и дорогостоящих, таких как, компьютерная томография и ядерно-магнитный резонанс (J.J.Augsburger et al.,1987, L. Lambrecht et al.,1988, Л.Ф. Линник о соавт., 1990). Вместе с тем постоянно идет поиск и разработка новых методов, которые позволили бы улучшить диагностику меланомы сосудистой оболочки. При этом из инструментально-лабораторных методов диагностики особое значение для клиницистов имеют те, которые сочетают в себе высокую информативность, безопасность и простоту технического исполнения.

В этом плане заслуживает внимание использование иммунологических тестов.

Как известно, в возникновении и развитии злокачественных новообразований большая роль отводится иммунной системе организма. Превращение нормальной клетки в опухолевую всегда сопровождается антигенными изменениями и вызывает в организме специфический иммунный ответ, который можно выявить с помощью определенных иммунологических методов (В. А. Крестовникова, 1965, Л.Н.Косяков, Н.П.Косякова, 1985). С этой целью исследователи применяют различные иммунологические тесты, позволяющие выявить опухолевые маркеры - эмбриональные антигены, опухоле-ассоциированные антигены, сенсибилизированные лимфоциты, иммуноглобулины. Использование иммунологических тестов в офтальмо-онкологии показано в работах ряда авторов (D.H. Char, 1977, A. Chernak, F.Kalafut, 1983, Т.П.Нифонтова, 1986). Применение известных иммунологических тестов, таких как, реакция торможения миграции лейкоцитов, реакция торможения прилипания лейкоцитов, изменение электрофоретической подвижности лейкоцитов, внутрикожные пробы с меланомным антигеном, радиоиммунологический метод и др., позволило авторам выявить специфические иммунологические сдвиги у больных с меланомой сосудистой оболочки глаза. Однако нельзя не отметить малочисленность таких исследований. Положительные результаты реакций были обнаружены авторами у 70,7 - 74% больных, но и в контрольной группе был высок процент (до 36%) ложноположительных результатов (D.H. Char, 1977, A. Chernak, F.Kalafut, 1983, Т.П.Нифонтова, 1986).

Вместе с тем известно использование иммунологических

тестов и для выявления антител к опухолеспецифическим антигенам у онкологических бальных {B.S.Kelly и др.,1981). В работах Л.А.Чиликина (1979), Е.П.Москаленко и др. (1989, 1990, 1995), В.А.Балязина и др.(1994), показано выявление противоопухолевых антител при онкологических заболеваниях в 70-94% случаев при незначительном уровне ложноположительных реакций в контрольной группе. Вот почему представлялось целесообразным провести исследования по разработке иммунологической'тест-системы на основе реакции пассивной гемагглютинации (РПГА) при меланоме сосудистой оболочки глаза.

Целью настоящего исследования явилась разработка и внедрение клинико-иммунологического метода диагностики меланомы сосудистой оболочки глаза.

Для достижения поставленной цели мы считали необходимым решить следующие задачи:

1. Изучить сравнительную диагностическую ценность различных клинико-инструментальных методов диагностики меланомы сосудистой оболочки глаза.

2. Разработать методику выделения опухолеассоциированных антигенов меланомы сосудистой оболочки глаза, определить некоторые особенности их химического и антигенного состава.

3. Разработать методику конструирования иммунологической тест-системы на основе опухолеассоциированных антигенов меланомы сосудистой оболочки для выявления противомеланомных антител и характеристики антигенов, выделенных из ткани меланомы сосудистой оболочки.

4. Изучить антигенный состав ткани меланомы .сосудистой ^ободочки в иммунологических тестах на основе сорбированных ди-

агностикумов и определить параметры характеристики антигенных препаратов для конструирования иммунологических тест-систем.

5. Разработать методику применения иммунологической тест-системы и оценить эффективность ее использования в комплексе клинико-иммунологических исследований при меланоме сосудистой оболочки глаза.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА состоит в том, что впервые получены новые факты, имеющие существенное значение для характеристики антигенов меланомы сосудистой оболочки, оценки иммунологических сдвигов у больных и экспериментальных животных, оценки современных клинико-инструментальных методов диагностики меланомы сосудистой оболочки глаза.

1. Показано, что антигены, выделенные-из меланомы сосудистой оболочки с помощью В-нафтоловой экстракции, являются липополисахаридопептидными комплексами без свободного липида и неоднородными по антигенному составу. Антигенные комплексы, выделенные из меланомы сосудистой оболочки, отличаются от аналогичных препаратов нормальной ткани сосудистой оболочки по содержанию жирных кислот, моносахаридов, аминокислот. В их составе обнаружены субстанции с молекулярной массой 77 и 80 Кд, которые не обнаружены в ткани нормальной сосудистой оболочки.

2. Получены данные, свидетельствующие о том, что сложный неоднородный антигенный состав меланомной ткани требует использования смеси отдельных индивидуальных препаратов для конструировании иммунологических тест-систем.

3. Разработаны методики приготовления эритроцитарных ди-агностикумов на основе антигенов, выделенных из нормальной и

опухолевой (меланома) ткани сосудистой оболочки.

4. В эксперименте показана способность антигенов сосудистой оболочки вызывать образование антител, которые выявляются в иммунологических реакциях (РПГА, РТПГА).

5. Установлена возможность выявления противоопухолевых (меланомных) антител у больных меланомой сосудистой оболочки глаза, что может быть использовано в качестве дополнительного' теста при диагностике.

6. Показано, что из всех использованных для диагностики меланомы сосудистой оболочки глаза инструментальных методов исследования (офтальмоскопия, диафаноскопия. ультразвуковое А и В - сканирование и др.) наиболее информативными и диагностически ценными оказались иммунологические.

Практическая значимость проведенного исследования заключается в обосновании использования иммунологического метода диагностики меланомы сосудистой оболочки глаза. Метод позволяет повысить эффективность диагностики меланомы сосудистой оболочки, экономичен, безопасен и может быть использован при об-^ следовании амбулаторных и стационарных больных.

Внедрение результатов исследования. Разработанный клини-ко-иммунологический метод диагностики меланомы сосудистой оболочки глаза применяется в глазном отделении Областной клинической больницы.

Результаты проведенных исследований используются в учебном процессе на кафедре глазных болезней N2 РГМУ, на курсах иммунологии ФУВа, кафедре микробиологии и вирусологии N2 РГМУ.

АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ

Основные положения диссертации доложены и обсуждены на Всесоюзной конференции по офтальмоонкологии в г.Таллинне (1990 г.), 4 Всероссийском Съезде онкологов в г. Ростове-на-Дону (1995 г.), кафедральных конференциях (1992-1995 гг).

ПУБЛИКАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ

По теме диссертации опубликовано 7 печатных работ. Предложенный метод запатентован. Патент РФ "Способ диагностики ме-ланомы сосудистого тракта глаза" N 1639244 от 10.12.92 г.

СТРУКТУРА И ОБЪЕМ РАБОТЫ

Диссертация состоит из вв'едения, пяти глав, заключения, выводов и указателя литературы. Излажена на 145 страницах машинописного текста, иллюстрирована 35 таблицами, 26 рисунками. Указатель литературы включает 142 источника, в том числе 78 иностранных.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ^

В качестве объекта клинического исследования были больные с предполагаемым диагнозом меланомы сосудистой оболочки глаза. Всего было обследовано 149 пациентов, в возрасте от 12 до 84 лет, с подозрением на внутриглазное новообразование. Диагноз меланомы сосудистой оболочки был установлен у 92 бальных, из них 52 -мужчины, 40 - женщин. Ретроспективный анализ клини-ко-иммунологических методов исследований определил необходи-

мость распределить больных по трем группам:

1 группа - больные с гистологически подтвержденным диагнозом мел&номы сосудистой оболочки - 83 случая.

2 группа - включала 57 больных с другими заболеваниями глаза, симулирующими меланому сосудистой оболочки. В этой группе больные имели следующие заболевания глаза: экссудатив-ный ретинит Коатса -16, субретинальные кровоизлияния -5, субтотальная отслойка сетчатой оболочки -8, ретинобластома -2, гемангиоперицитома -1, злокачественная лимфома орбиты -1, не-вус сосудистой оболочки -4, отслойка сосудистой оболочки -8, болезнь Гиппель-Линдау - 2, ретролентальная фиброплазия стекловидного тела - 2, гемофтальм - 8.

3 группа - 9 больных с клинически установленным диагнозом меланомы сосудистой оболочки глаза. В эту группу вошли больные, которым проведено органосохранное лечение ( В-терапия, лазеркоагуляция), - 4 человека, и 5 больных, отказавшихся от операции. Так как больные этой группы не были оперированы и им не проводили гистологическое исследование, в сравнительный анализ диагностической ценности разных методов исследования эта группа не включена.

Для группировки больных с меланомой сосудистой оболочки по стадиям"использовали клиническую классификацию по ТИМ -системе, утвержденной ВОЗ в 1982 г. и рекомендованной Российским офтальмоонкологическим центром.

Обследование общего состояния больных, кроме традиционных анализов, в обязательном порядке включало исследование органов грудной клетки с помощью й-графии или И-скопии, а также сцин-тиграфию или ультразвуковое исследование печени. При исследо-

вании органа зрения были использованы следующие методики: определение остроты зрения по таблице Головина-Сивцева, помещенной в аппарат Рота, определейие статической рефракции на высоте фракционной циклоплегии 1% раствором гоматропина с помощью рефрактометра Хартингера, исследование границ периферического зрения и состояния центрального поля зрения при стандартных фотометрических условиях фоновой яркости по 8 меридианам на сферопериметре Карл Цейс, исследование гидродинамики методом аппланационной тонометрии и топографии по А.П.Нестерову (1974), осмотр глазного яблока, биомикроскопия на щелевых лампах Карл Цейс и Оптон, офтальмоскопия, офтальмобиомикроскопия, диафаноскопия, гониоскопия. Ультразвуковое исследование включало использование A-метода (одномерной эхографии) и В-метода (двухмерной эхографии). Для проведения одномерной эхографии (A-метод) использовали аппараты отечественного производства ЭХО-21 и ЭОС-22 с зондами на 5 и 10 Мгц диаметром 5 мм. Двухмерную эхографию (В-метод) проводили на аппаратах Toshiba -SAL77A с конвексным датчиком электронного сканирования (3,75 Мгц) и Aloca SSD-630 с конвексным датчиком электронного сканирования UST-935N (5Мгц) и датчиком механического секторного сканирования ASU -32Н (5Мгц).

Одним из дополнительных методов исследования, который мы применяли, была флюоресцентная ангиография глазного дна (ФАГ), которую проводили на фундус-камере фирмы Optan.

Иммунологические исследования были выполнены у всех больных, поступивших в глазное отделение с диагнозом: подозрение на внутриглазное новообразование - 149 клинических случая. В качестве контроля иммунологические исследования были выполнены

у 30 практически здоровых людей в той же возрастной категории, у 15 больных с новообразованиями головного мозга и у 25 больных с заболеваниями различных органов (аппендицит,гастрит, ИБС).

Решение задач разработки и применения иммунологической тест-системы проведено в несколько этапов.

Для определения аутоантител к нормальной и опухолевой ткани сосудистой оболочки глаза использовали реакцию пассивной гемагглютинации (РПГА) и реакцию торможения пассивной гемагг-лютинации (РТПГА).

Выбор серологических реакций определяется данными литературы (Л. А. Людоговская, 1959, П. И. Ремизов а соавт.. 1964, А. Е. Эс-сель, 1965, Е.П.Москаленко, А.Д.Кирицева. 1966, Е. Р.Аронова с соавт. ,1971, Б. Т. Билынский с соавт., 1973) о том, что РПГА является весьма чувствительной и специфичной реакцией для выявления антител в сыворотке крови больных различными заболеваниями инфекционной и неинфекционной природы.

РПГА ставилась по методике, разработанной Е.П.Москаленко с соавт., 1992 ). Контролем специфичности РПГА служила РТПГА, где торможение производили антигеном, идентичным тому, который был адсорбирован на эритроцитах.

В РПГА и РТПГА использовали эритроцитарный диагностикум на основе антигенов нормальной и опухолевой ткани сосудистой оболочки глаза. Для создания диагностикумов предварительно выделяли антигены из нормальной и опухолевой ткани сосудистой оболочки глаза в соответствии с рекомендациями Е.П.Москаленко (1992). Нормальную ткань сосудистой оболочки глаза забирали не позднее 12-24 часов с момента смерти (в основном в результате

травмы), а опухолевая ткань забиралась сразу же после операции. Учитывая различный антигенный состав тканей отдельных индивидуумов, забор нормальной ткани сосудистой оболочки производили у нескольких трупов (индивидуумов).

Антигенные препараты из ткани сосудистой оболочки получали путем В-нафтоловой экстракции из нормальной ткани сосудистой оболочки глаза и из ткани меланомы сосудистой оболочки по методу, описанному Е.П.Москаленко с соавт. (1985 г). По химическому составу антигены представляют собой липополисахаридо-пептидный комплекс без свободного липида (ЛППК).

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

Проведенные исследования позволили определить диагностическую ценность разных методов для выявления меланомы сосудистой оболочки глаза . Наиболее информативными в 1-й группе больных были следующие методы: офтальмоскопия - 57,8% положительных результатов, диафаноскопия - 67,5%, ультразвуковое исследование - А-метод -63.9%, В-метод - 69,9%. Вместе с тем во 2-й группе больных эти методы также давали положительные результаты в определенном проценте случаев: офтальмоскопия -31,6%, диафаноскопия - 12,3%, ультразвуковое исследование -А-метод - 31,6%, В-метод - 15,8%. Положительные результаты исследования, указывающие на возможность присутствия.меланомы сосудистой оболочки, во 2-й группе мы расценивали как ложнопо-ложительные. Анализ полученных данных позволил прийти к заключению, что не существует методов, которые давали бы возможность однозначно поставить диагноз меланомы сосудистой оболочки

Исследование антигенных препаратов, выделенных из ткани меланомы сосудистой оболочки глаза, выявило особенности их состава.

При изучении белкового состава препаратов с помощью метода Лоури было установлено, что в жидких нативных препаратах его количество колебалось от 200 до 1500 мкг/мл в ЛППК опухолевой ткани и от 200 до 1000 мкг/мл в ЛППК нормальной ткани сосудистой оболочки.

Биожмические исследования препаратов, полученных из нормальной и патологической ткани (меланомы) сосудистой оболочки, позволили провести сравнительный анализ жирнокислотного, углеводного и аминокислотного состава нормального и опухолевого антигенных препаратов.

Полученные результаты свидетельствовали о присутствии в препарате, выделенном из меланомы сосудистой оболочки, определенных субстанций, характерных только для опухолевых антигенов сосудистой оболочки глаза и отсутствующих в антигенных препаратах из ткани нормальной сосудистой оболочки. В антигенном комплексе из меланомы сосудистой оболочки было меньше пентаде-кановой, пальмитиновой, гептадеценовой, линолевой, арахидоно-вой жирных кислот, чем в антигене из нормальной ткани, но значительно больше пальмитолеиновой, гептадекановой, стеариновой. Выраженное различие в содержании арахидоновой кислоты в составе опухолевого и нормального антигена может быть использовано для дифференциации опухолевого процесса. Существенная разница обнаружена и в содержании моносахаридов. Количество маннозы и фукозы было существенно ниже, а рибозы выше в опухолевом антигене по сравнению с нормальным антигеном сосудистой оболочки.

В опухолевом антигене было значительно меньше таких аминокислот, как лизин, гистидин. серин, тирозин, но больше триптофана и глютаминовой кислоты по сравнению с антигеном из нормальной сосудистой оболочки. При изучении электрофоретической подвижности антигенных комплексов в опухолевом препарате были . обнаружены 2 белковые зоны с молекулярной массой 80 и 77 Кд, которые отсутствовали в антигенном комплексе из нормальной сосудистой оболочки.

Для приготовления эритроцитарных диагностикумов использовали формалинизированные эритроциты барана, полученные по методу Чизмеса в модификации М.И.Леви с соавт.(1962), которые сенсибилизировали антигенными препаратами.

На первых этапах решения данной проблемы были проведены исследования по изучению влияния дозы антигена на активность получаемых препаратов. Наиболее активные диагностикумы. были получены при использовании ЛППК опухолевой ткани в дозе 20' мкг/мл. Такая доза антигена была применена при получении эритроцитарных диагностикумов на основе опухолевых и нормальных антигенов.

Учитывая указания авторов (П.Н.Косяков, Н.П.Косякова, 1985) о наличии в опухолевой ткани антигенов, характерных для нормальной ткани, представлялось целесообразным изучить антигены сосудистой оболочки глаза в системе серологических реакций на основе нормального и опухолевого антигенов сосудистой оболочки.

Для оценки активности антигенов опухолевой ткани сосудистой оболочки и определения содержания антигенов нормальной ткани сосудистой оболочки применяли РНАт с использованием опу-

холевой и нормальной тест-системы. Опухолевая тест-система -это эритроциты, сенсибилизированные опухолевым антигеном, и сыворотки животных, привитых опухолевым антигеном. Нормальная тест-система - это эритроциты, сенсибилизированные нормальным антигеном сосудистой оболочки, и сыворотки животных, привитых нормальным антигеном сосудистой оболочки.

Проведенные исследования показали, что в опухолевом антигене меланомы сосудистой оболочки содержались детерминанты антигенов нормальной сосудистой оболочки, в антигене нормальной сосудистой оболочки опухолевые антигенные детерминанты не были выявлены. Эти данные были подтверждены результатами реакции адсорбции с использованием эритроцитарного диагностикума, сенсибилизированного ЛППК, выделенным из ткани нормальной сосудистой оболочки, и определили необходимость применения приема адсорбции сывороток крови больных меланомой сосудистой оболочки.

Принимая во внимание данные авторов (П.Н.Косяков, Н.П. Ко-сякова, 1985) о наличии индивидуальных антигенов в опухолевой ткани, мы провели исследования по определению таковых в ткани меланомы сосудистой оболочки глаза. С этой целью сыворотки больных меланомой сосудистой оболочки были изучены в РПГА с эритроцйтарными диагностиками на основе индивидуальных мела-номных антигенов (монодиагностикумы). В результате проведенных исследований было установлено, что сыворотки крови больных давали положительный результат в РПГА лишь с отдельными (с од-ним-двумя из четырех, взятых в опыт) монодиагностикумами, содержащими индивидуальные ЛППК из меланомы сосудистой оболочки.

Обнаружив различия в антигенном составе меланомы сосудис-

той оболочки отдельных индивидуумов, мы провели дополнительные исследования на экспериментальных животных. С этой целью мышей линии П и белых беспородных мышей иммунизировали антигенами, выделенными из меланомы сосудистой оболочки отдельных больных. Уровень антител определяли в РПГА с гомологичными и гетероло-гичными антигенными препаратами до и после адсорбции.

Проведенные исследования по перекрестной адсорбции сыворотки крови мышей, иммунизированных опухолевыми антигенами, полученными от различных больных, свидетельствуют о различии в антигенном составе индивидуальных меланом сосудистой оболочки глаза и о необходимости использования полипрепарата для диагностических целей, а также открывают возможности для получения адсорбированных монорецепторных сывороток.

Полученные результаты-послужили основанием для применения "полиантигенов" при конструировании эритроцитарных диагности-кумов.

"Полиантигенный" препарат получали путем механического смешивания антигенных препаратов ЛППК, выделенных от '4-6 больных меланомой сосудистой оболочки, в равных количествах по .белку (метод Лоури). Активность полученного препарата проверяли в РНАт с сыворотками мышей, иммунизированных по разработанной нами схеме антигенными комплексами меланомы сосудистой оболочки.

В результате проведенного исследования выявили прямую зависимость активности "полиантигенов" в РНАт в гомологичной системе и активности эритроцитарных диагностикумов, приготовленных на их основе, от содержания белка в "полиантигене". Установлена также обратная зависимость между исходным содержание

белка в антигенном "полипрепарате" и его активностью с гетеро-логичной (нормальной) системой.

Для оценки специфических сдвигов у бальных меланомой сосудистой оболочки глаза готовили специфический диагностикум, который представлял собой 0,8% взвесь эритроцитов барана, фор-малинизированных по методу Чизмеса в модификации Леви М.И. с соавт.(1968), танизированных и сенсибилизированных "полиантигенными" препаратами, выделенными от нескольких (4-6) больных. Эритроцитарный диагностикум предназначен для обнаружения в сыворотке крови больных специфических антител в РПГА. Специфичность РПГА подтверждали в каждом отдельном случае в РТПГА.

С целью подтверждения специфичности получаемых диагноста-кумов были обследованы следующие группы: практически здоровые люди, больные с новообразованиями головного мозга, с заболеваниями различных органов, с неонкологическими заболеваниями глаза.

В результате проведенных исследований выявлены антитела к меланоме сосудистой оболочки в сыворотке крови больных 1-й группы (с гистологически верифицированным диагнозом) в 85,4 % случаев (у 71 из 83 обследованных ), а во 2-й группе больных (с другими заболеваниями глаза) у одного больного из 57, что составило 1,8%. Во всех остальных (контрольных) группах антитела к меланоме сосудистой оболочки обнаружены не были.

Анализ результатов РПГА выявил связь между количеством положительных результатов и стадией заболевания. Максимальный процент положительных результатов РПГА отмечался у больных с 3 стадией. Положительные результаты получены в этой группе у 64 из 67 человек, что составляет 95,5%. На начальных (1-2) стади-

ях положительные результаты получены у 6 из 8 больных, т.е. в 75% случаях. Следует подчеркнуть, что для приготовления антигенных препаратов использовали опухолевую ткань больных 3 стадии, которая по антигенным маркерам может отличаться от опухолевой ткани больных 1-2 стадией заболевания. Этими различиями можно объяснить отрицательные результаты у 25% больных 1-2 стадией заболевания. Минимальный процент положительных результатов, равный 58,8% отмечали у больных 4 стадией заболевания (10 из 17).

На группе больных (8 человек), у которых до операции выявляли антитела к меланоме, была прослежена динамика уровня антител в послеоперационном периоде заболевания. При этом установлено, что через 1-6 месяцев после операции, реверсия антител в сыворотке больных отсутствовала. Клиническое обследование этих больных не выявила рецидива меланомы сосудистой оболочки и отдаленных метастазов.

• Сравнительный анализ различных методов исследований, использованных для диагностики меланомы сосудистой оболочки глаза (табл.1) показал, что иммунологическое исследование наиболее информативно (р<0,05).

Таблица 1.

Сравнительная диагностическая ценность различных методов диагностики меланомы сосудистой оболочки глаза.

Методы исследования Положительные результаты исследования

1 группа 2 труппа

Всего Всего

боль- Абс. % + м боль- Абс. % ± м

ных ных

Офтальмоскопия 83 48 57,8+5,4 57" 18 31.6+6,2

Диафаноскопия 83 56 67, 5+5,1 57 7 12,3+4,4

Тонометрия 83 19 22,9+4,6 57 11 19,3+5,2

Рефрактометрия 44 16 36.4+6,6 34 9 26, 5+7,6

УЗИ (А-метод) 83 53 63, 9+5, 3 57 18 31,6+6,2

УЗИ (В-метод) 83 58 69, 9+5, 0 57 9 15, 8+4, 8

Иммуноисслед. 83 71 85, 4+3, 9 57 1 1,8+1.7

Таким образом, на основании проведенных исследований, можно сделать заключение, что наиболее информативные из использованных методов обследования больных с подозрением на внутриглазное новообразование далеко не всегда дают однозначные результаты и во многих случаях не позволяют с высокой достоверностью установить диагноз меланомы сосудистой оболочки. Разработанная иммунологическая тест-система с использованием

специфического эритроцитарного диагностикума на основе полиантигенного препарата из меланомы сосудистой оболочки глаза является высокочувствительным и специфическим методом выявления антител к антигенам меланомы сосудистой оболочки и может в комплексе с другими клинико-инструментальными методами применяться для диагностики этого заболевания. Использование иммунологического исследования в глазном отделении Областной клинической больницы показало его эффективность, относительную простоту и экономичность.

ВЫВОДЫ:

1. Сравнительный анализ клинико-инструментальных методов, использованных при обследовании больных с меланомой сосудистой оболочки глаза, показал более высокую информативность офтальмоскопии, диафаноскопии, ультразвукового А и В-сканирования.

2. Антигенные комплексы, выделенные по разработанной нами методике из меланомы сосудистой оболочки и нормальной ткани, различаются по содержанию ряда жирных кислот, моносахаридов, аминокислот и наличию 2 белковых зон с молекулярной массой 80 и 77 Кд.

3. С помощью иммунологической тест-систмы установлены различия не только в антигенном составе опухолевой и нормальной ткани сосудистой оболочки, но и в антигенном составе препаратов, выделенных от различных больных с меланомой сосудистой оболочки, что требует использования смеси индивидуальных препаратов для конструировании иммунологической тест-системы.

4. Эритроцитарный диагностикум, полученный путем сорбции антигенных комплексов из меланомы сосудистой оболочки глаза на

эритроцитах барана, отличается высокой специфичностью и активностью.

- 5. Эритроцитарные диагностику!® на основе опухолевых и нормальных антигенов, использованные в сопряженных серологических реакциях, позволили определить содержание гомологичных антител или антигенов в исследуемом материале.

6. Использование иммунологической тест-системы на основе опухолевого (меланомного) сорбированного диагностикума позволило выявить антитела к меланоме сосудистой оболочки глаза у 85,4% больных, в то время как в контрольной группе получены положительные результаты в 1,8% случаев.

7. Иммунологическое исследование при диагностике меланомы сосудистой оболочки глаза обладает наибольшей информативностью и объективностью по сравнению с использованными клинико-инс-трументальными методами. Метод отличается простотой, безопасностью и может быть рекомендован в качестве дополнительного теста при обследовании больных с подозрением на меланому сосудистой оболочки глаза.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ.

1. Антигенная характеристика субстанций, выделенных из меланомы сосудистого тракта глаза (Кленова И.А.). - //Тезисы докладов 9 Научной конференции " Актуальные вопросы иммунологии и иммунопатологии в медицине и курортологии". - Пятигорск. - 1987,- С. 17-18.

2. Иммунологические сдвиги 'у больных меланобластомой сосудистого тракта глаза ( Москаленко Е.П., Журавлев B.C., Кленова

И.А.).- // Тезисы докладов областной и дорожной научно-практической конференции "Возрастные и дистрофические изменения сетчатой оболочки глаза. - Ростов-на-Дону.- 1987,- С.59-60. ' 3. Метод диагностики меланомы сосудистого тракта глаза с использованием сопряженных серологических реакций ( Москаленко Е.П., Кленова И.А., Журавлев B.C.). - // Тезисы докладов 2-й областной конференции: "Научно-технический прогресс в медицине и медицинской технике". - Ростов-на-Дону.- 198Й.- С.51-52

4. Иммунологические методы диагностики мел'аномы хориоидеи (Москаленко Е.П. Журавлев B.C. Кленова И.А.). - // Матер, докл. Всесоюзной конференции "Опухоли и опухолеподобные заболевания органа зрения". - Москва. - 1990,- С.86-88.

5. Роль иммунодиагностики в хирургическом лечении меланомы хориоидеи. -// Сб. -трудов Всеросийской конференции хирургов "Сосудистая и общая хирургия",- Ростов-на-Дону.- 1991.-С. 330-331

6. Возможности использования иммунологической тест-системы для диагностики меланомы хориоидеи ( Журавлев B.C., Кленова И.А.).- // Тезисы докладов Российской конференции офтальмологов." Смоленск,- 1995,- С.214-215.

7. Клинико-иммунологические исследования при меланоме сосудистого тракта глаза ( Москаленко Е.П., Журавлев B.C., Кленова И. А.).- // Тезисы докладов 4 Всероссийского съезда онкологов. - Ростов-на-Дону. - 1995. - Т. 1,- С. 238-239.

8. "Способ диагностики меланомы сосудистого тракта глаза" Патент Российской Федерации N 1639244 от 30.12.92. Авторы: Москаленко Е.П., Чернецкий Е.О., Журавлев B.C., Кленова И. А.