Механизмы дизрегуляции кооперации эозинофилов и иммуноцитов при больших эозинофилиях крови

Литвинова, Лариса Сергеевна

Диссертации по медицине → Патологическая физиология

Автореферат и диссертация по медицине (14.00.16) на тему:Механизмы дизрегуляции кооперации эозинофилов и иммуноцитов при больших эозинофилиях крови

ДИССЕРТАЦИЯ

АВТОРЕФЕРАТ

Литвинова, Лариса Сергеевна Томск 2007 г.

Ученая степень: доктора медицинских наук

ВАК РФ: 14.00.16

Автореферат диссертации по медицине на тему Механизмы дизрегуляции кооперации эозинофилов и иммуноцитов при больших эозинофилиях крови

На правах рукописи

Литвинова Лариса Сергеевна

МЕХАНИЗМЫ ДИЗРЕГУЛЯЦИИ КООПЕРАЦИИ

ЭОЗИНОФИЛОВ И ИММУНОЦИТОВ ПРИ БОЛЬШИХ ЭОЗИИОФИЛИЯХ КРОВИ

14,00,16 — патологическая физиология 03.00.25 - гистология, цитология, клеточная биология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук

□озпв

Томск - 2007

003061072

Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Сибирский государственный медицинский университет Федерального агентства но здравоохранению и социальному развитию»

Научные консультанты:

доктор медицинских наук, профессор

доктор медицинских наук, академик РАМН, профессор. Заслуженный деятель науки РФ

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор Степовая Елена Алексеевна, профессор биохимии и молекулярной биологии ГОУ ВПО СибГМУ Росздрава

доктор медицинских наук, профессор, академик РАМН Дыгай Александр Михайлович, заместитель директора по ЯИР ГУ НИИ фармакологии ТНЦ СО РАМН

доктор медицинских наук, профессор, академик РАМН Шкурупий Вячеслав Алексеевич, директор ГУ I {Ц клинической и экспериментальной медицины СО РАМ11

Ведущая организация: ГУ Российский НИИ гематологии и трансфузиологии, г, Санкт-Петербург

Защита состоится «_» __2007 г. в__часов на заседании

диссертационного совета Д 208.096.01 при Сибирском государственном медицинском университете (643050, г. Томск, ул. Московский тракт, 2)

С диссертацией можно ознакомиться я научно-медицинской библиотеке Сибирского государственного медицинского университета

Автореферат разослан «__»____2007 г.

Рязанцева

Наталья Владимировна Новицкий

Вячеслав Викторович

Ученый секретарь диссертационного совета

Суханова Г.А.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Гиперэозинофильная реакция крови сопровождает течение многочисленной группы нозологических форм и синдромов, имеющих разные механизмы развития, прогноз и исход [Коровина Н А и соавт, 2002, Чучалин А Г , 2003, Ольшанская Ю В и соавт, 2005]

Явление пролонгированного пребывания эозинофильных клеток в периферической крови привлекает интерес многих исследователей в связи с ключевой ролью этих клеток в реализации патогенеза аллергических заболеваний и паразитарных инвазий, где они выступают в роли эффекторных клеток и факторов защиты, предотвращая генерализацию иммунного ответа и обеспечивая эффективную элиминацию инфектогенов паразитарной природы [Джальчинова В Б, Чистяков Г М, 1999, Озерецковская Н Н, 2000, Hamelmann Е, Gelfand EW, 2001, Коровина НА и соавт, 2002, Семенкова Е Н и соавт, 2004, Das AM et al, 2005] В современной литературе появляется множество работ, свидетельствующих об участии эозинофильных гранулоцитов в реализации противоопухолевого иммунитета как звена неспецифической резистентности врожденного иммунитета [Гриншпун Г Д., Виноградова ЮЕ, 1983, Мокеева РА и соавт, 2000, Воробьев А И, 2003, Чучалин А Г, 2003, Семенкова Е Н и соавт, 2004, Caruso RA et al, 2004, Ольшанская Ю В и соавт, 2005, Абдулкадыров К М, 2006]

Накопленные к настоящему времени в мировой литературе многочисленные сведения, касающиеся особенностей эозинофильного гомеостаза в норме и при реализации патологического процесса, свидетельствуют, что, с одной стороны, эозинофил является одной из наиболее агрессивных эффекторных клеток воспаления, а с другой, - выступает как важный фактор поддержания тканевого и иммунологического гомеостаза, принимая участие в регуляции функций иммунокомпетентных клеток, процессах фагоцитоза, клеточной репарации, свертывания крови и др [Джальчинова В Б , Чистяков Г М , 1999, Воробьев А И и соавт, 2000, Dvorak А М, Weller Р F, 2000, Волкова М А , 2001, Чучалин А Г , 2003, Ешану В С , 2004] Рассмотрение вопроса о переосмыслении физиологической роли эозинофилов продиктовано прежде всего фактическими данными о взаимодействии эозинофильных гранулоцитов с иммунокомпетентными клетками макроорганизма

взаимодействия за счет связывания растворимых веществ с аффинным рецептором на клеточной поверхности [Ярилин А А , 2001, Кетлинский С А, 2002, Симбирцев А С , 2002, 2004] Существующая между клетками иммунной системы и эозинофилами взаимонаправленность эффектов обусловлена как иммуномодулирующим действием иммунокомпетентных клеток, так и способностью лейкоцитов эозинофильного ряда активировать иммуноциты и вызывать поляризацию иммунного ответа в ту или иную сторону за счет секреции иммунорегуляторных молекул [Ои1Ьепкшп А И е1 а!, 1992, Беклемишев ИД, 1998, Минеев ВН и соавт, 2000, Намазова Л С и соавт, 2000, Ыа§азе Н е1 а1, 2001, Воробьев АИ, 2002, Ьашртеп М е1 а1, 2004, Бережная Н М и соавт, 2005] В свою очередь дизрегуляция функционирования компонентов, составляющих основу межклеточной кооперации, может обусловливать нарушение процессов созревания, активации и реализации программированной гибели эозинофильных гранулоцитов и приводить к длительному пребыванию последних в периферической крови

В целом, исследования последних лет показали, что, несмотря на повышенный интерес исследователей к этой проблеме и большое количество экспериментальных и клинических работ, в настоящее время механизмы и целесообразность развития эозинофилии крови при патологических процессах разного генеза изучены недостаточно, а имеющиеся в современной литературе данные носят весьма неоднозначный характер и касаются, в основном, лишь клинической стороны вопроса

Цель исследования установить механизмы нарушения кооперативного взаимодействия иммуноцитов и эозинофилов при заболеваниях, сопровождающихся развитием эозинофилии крови Задачи исследования:

1 Дать комплексную оценку морфофункциональных свойств эозинофильных гранулоцитов периферической крови у пациентов с лимфопролиферативными заболеваниями системы крови и у больных описторхозом, ассоциированных с эозинофилией крови

2 Оценить роль дисбаланса эозинофилспецифичных цитокинов (1Ь-3, 1Ь-4, 1Ь-5, вМ-СвР и эотаксина), регулирующих процессы пролиферации, дифференцировки и активации эозинофильных клеток, в механизмах нарушения межклеточной кооперации при заболеваниях, сопровождающихся формированием эозинофилии крови (лимфопролиферативные заболевания системы крови и описторхоз)

3 Выявить механизмы нарушения цитокинопосредованной кооперации эозинофилов и иммуноцитов при заболеваниях, осложненных формированием эозинофилии крови (лимфопролиферативные заболевания системы крови и описторхоз)

4 Оценить роль нарушений апоптотической гибели эозинофилов в механизмах развития большой эозинофилии крови при лимфопролиферативных заболеваниях системы крови и гельминтозе, обусловленном О ГеИпеив

5 Установить общие закономерности и особенности реализации механизмов кооперации эозинофилов и иммуноцитов при формировании большой

эозинофилии крови при лимфопролиферативных заболеваниях системы крови и описторхозе

Научная новизна. Впервые с привлечением широкого комплекса современных гематологических, иммунологических и молекулярно-биологических методов исследования представлены фундаментальные механизмы формирования эозинофильной реакции крови при патологических процессах разного генеза с позиций нарушения кооперативного взаимодействия иммуноцитов и эозинофилов

Впервые обосновано, что у пациентов с гемобластозами (лимфогранулематоз, множественная миелома и неходжкинске лимфомы) и у больных описторхозом (острая и хроническая формы), сопровождающихся гиперэозинофилией крови, нарушен морфофункциональный статус эозинофильных гранулоцитов (изменены морфометрические характеристики ядра и цитоплазмы, увеличены содержание внутриклеточных катионных протеинов и активность пероксидазы, усилена фагоцитарная активность, клетки имеют признаки дегрануляции и цитолиза)

Показано, что при лимфопролиферативных заболеваниях системы крови и гельминтозе, обусловленном паразитированием О felineus, ассоциированных с развитием эозинофильной реакции крови, интенсификация процессов, опосредующих реализацию кислороднезависимых и кислородзависимых механизмов микробицидности, приводит к формированию высокого цитотоксического потенциала эозинофильных гранулоцитов, что может обусловливать негативное влияние длительной гиперэозинофилии крови на течение основной патологии

Впервые установлено, что механизмы развития эозинофилии, осложняющей течение лимфопролиферативных заболеваний системы крови и описторхоза, сопряжены с изменением кооперативного взаимодействия эозинофильных гранулоцитов и мононуклеарных клеток Данное положение подтверждается фактом обнаружения повышенной продукции мононуклеарами эозинофилспецифичных медиаторов (IL-3, IL-5, IL-4 и GM-CSF) и увеличением уровня эотаксина в сыворотке крови с возрастанием на эозинофилах презентации мембранноассоциированных рецепторов к IL-3, IL-5 и эотаксину Получены новые данные, свидетельствующие о снижении резервной способности эозинофильных гранулоцитов презентировать рецепторы к IL-3 и IL-5 при инкубации клеток т vitro с рекомбинантными формами одноименных цитокинов

Установлен факт угнетения апоптоза эозинофилов при лимфопролиферативных заболеваниях системы крови и описторхозной инфекции Приоритетными являются данные о роли нарушений цитокинопосредованной программированной гибели эозинофилов в патогенезе больших эозинофилий крови Результаты экспериментальных исследований in vitro свидетельствуют, что при лимфопролиферативных заболеваниях системы крови на фоне низких значений базального апоптоза эозинофильных клеток, дополнительное воздействие на них рекомбинантных форм цитокинов, регулирующих гомеостаз эозинофильных гранулоцитов (IL-3, IL-5 и

эотаксина), не оказывает влияния на их программированную гибель, что свидетельствует о неадекватности восприятия эозинофилами антиапоптотических сигналов при данной патологии У пациентов с гельминтозом, обусловленном паразитированием О fehneus, напротив, в эксперименте in vitro продемонстрирована повышенная чувствительность эозинофильных клеток к антиапоптозному действию IL-3, IL-5 и эотаксина. Наряду с этим т vitro в условиях дефицита ростовых факторов показана повышенная чувствительность эозинофилов, полученных у пациентов с большими эозинофилиями крови, к действию проапоптотических факторов

Теоретическая и практическая значимость. Впервые установлены закономерности нарушения кооперации эозинофилов и иммуноцитов в механизмах развития больших эозинофилий крови при лимфопролиферативных заболеваниях системы крови и описторхозной инвазии Определена важная роль в этом процессе ключевых цитокинов (IL-3, IL-4, IL-5, GM-CSF и эотаксина), регулирующих гомеостаз эозинофильных гранулоцитов и их рецепторов (IL-3, IL-5, CCR3), нарушений лиганд-рецепторного взаимодействия и цитокинопосредованной регуляции апоптоза эозинофильных гранулоцитов Продемонстрирован факт выраженного нарушения морфофункционального статуса эозинофильных гранулоцитов при нозологиях, сопряженных с формированием эозинофилии

Положения исследования могут служить основанием для формирования стратегии изучения молекулярных и клеточных механизмов развития синдрома гиперэозинофилии при различных заболеваниях Полученные фундаментальные знания могут быть положены в основу разработки технологии коррекции дизрегуляции кооперативного взаимодействия эозинофилов и иммунокомпетентных клеток при патологических процессах разного генеза, ассоциированных с формированием эозинофилии крови, с целью проведения патогенетически обоснованной терапии иммунных нарушений и своевременной профилактики осложнений, возникающих при длительной гиперэозинофилии

Положения, выносимые на защиту:

1 При злокачественных заболеваниях системы крови (лимфогранулематоз, множественная миелома и неходжинские лимфомы) и описторхозе (острая и хроническая формы), ассоциированных с гиперзозинофильной реакцией крови, гранулоциты эозинофильного ряда претерпевают однотипные нарушения морфофункциональных свойств, обусловливающих формирование их высокого микробицидного потенциала

2 Патогенез больших эозинофилий крови, сопровождающих течение лимфопролиферативных заболеваний системы крови и описторхоза, сопряжен с нарушением цитокинопосредованной кооперации эозинофилов и мононуклеарных лейкоцитов

3 Механизмы нарушения кооперации эозинофилов и мононуклеарных клеток при эозинофилии, сопровождающей течение лимфопролиферативных заболеваний системы крови и описторхозной инвазии, опосредованы повышением продукции мононуклеарными клетками ключевых в регуляции

гомеостаза эозинофильных клеток цитокинов (IL-3, IL-5, GM-CSF и эотаксина) и нарушением баланса экспрессии эозинофилами комплементарных им рецепторов (IL-3R, IL-5R и CCR3)

4 Существенный вклад в формирование гиперэозинофильной реакции крови при лимфопролиферативных заболеваниях системы крови и описторхозе вносит нарушение реализации цитокинопосредованной апоптотической гибели эозинофилов

Апробация и реализация работы Результаты проведенных исследований докладывались и обсуждались на Международном конгрессе «Иммунитет и болезни от теории к терапии» (Москва, 2005), I Съезде физиологов СНГ «Физиология и здоровье человека» (Сочи, 2005), 5-й научно-практической конференции с международным участием «Достижения фундаментальных наук в решении актуальных проблем медицины» (Астрахань, 2006), VIII Конгрессе «Паллиативная медицина и реабилитация в здравоохранении» (Москва, 2006), Всероссийской научно-практической конференции с международным участием "Социально-экологические проблемы природопользования в Центральной Сибири" (Красноярск, 2006), XII Межгородской научной конференции молодых ученых «Актуальные проблемы патофизиологии» (Санкт-Петербург, 2006), Российском медицинском форуме-2006 «Фундаментальная наука и практика» (Москва, 2006), Всероссийской конференции молодых ученых, посвященной памяти профессора Н Н Кеворкова «Иммунитет и аллергия от эксперимента к клинике» (Пермь, 2006), VIII Всероссийской научно-практическая конференции «Актуальные вопросы клиники, диагностики и лечения в многопрофильном лечебном учреждении» (Санкт-Петербург, 2007), Х1-м Всероссийском научном форуме с международным участием имени академика В И Иоффе «Дни иммунологии в Санкт-Петербурге» (Санкт-Петербург, 2007), XIII-ой межгородской научной конференции молодых ученых "Актуальные проблемы патофизиологии - 2007» (Санкт-Петербург, 2007)

В работе приводятся результаты исследований, поддержанных Советом при Президенте РФ для ведущих научных школ РФ по проблеме «Молекулярные основы нарушения гомеостаза клеток крови при актуальных заболеваниях инфекционной и неинфекционной природы» (НШ-4153 2006 7), а также результаты научно-исследовательских работ «Роль нарушений межклеточной кооперации в механизмах формирования больших эозинофилий крови» 2005-РИ-19 0/002/010 (Государственный контракт № 02 442 11 7056 от 26 10 2005) и «Молекулярные и клеточные основы управления реактивностью системы крови при актуальных заболеваниях инфекционной природы» 2006-РИ-112 0/001/384 (Государственный контракт № 02 445 11 7419 от 09 06 2006 г), выполненных в рамках Федеральной целевой научно-технической программы «Исследования и разработки по приоритетным направлениям развития науки и техники на 2002-2006 годы»

Публикации. По теме диссертации опубликовано 23 печатные работы, из них 9 статей в ведущих рецензируемых журналах и изданиях, определенных ВАК РФ, одна монография в соавторстве, 13 статей и тезисов в материалах конференций, конгрессов и съездов.

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 275 страницах машинописного текста и состоит из введения, четырех глав, выводов и списка использованной литературы Работа иллюстрирована 24 рисунками и 43 таблицами Библиографический указатель включает 452 источника (167-отечественных и 285 - иностранных)

ХАРАКТЕРИСТИКА КЛИНИЧЕСКОГО МАТЕРИАЛА И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

В основу настоящей работы положены результаты комплексного клинико-лабораторного обследования 246 человек (115 мужчин и 131 женщин в возрасте от 18 до 60 лет, средний возраст - 34±3 лет) 130 больных (59 мужчин и 71 женщина в возрасте от 18 до 60 лет) страдали злокачественными заболеваниями системы крови (из них 97 пациентов с первичным обращением в стационар по поводу лимфопролиферативных заболеваний системы крови и 33 пациента, находящихся на диспансерном учете и ранее получавших от 2 до 6 курсов полихимиотерапии (не менее чем 1-3 года назад)) Все пациенты с лимфопролиферативными заболеваниями системы крови были обследованы до назначения терапии при поступлении в отделение гематологии Томской областной клинической больницы (главный врач - Заслуженный врач РФ Б Т Серых) У 116 человек (56 мужчин и 60 женщин в возрасте от 18 до 60 лет) был верифицирован диагноз описторхоза Набор этого клинического материала проводился в инфекционном отделении госпитальных клиник ГОУ ВПО СибГМУ Росздрава (главный врач - Заслуженный врач РФ к м н В М Шевелев, заведующая отделением — к м н , доцент Н С Бужак) Включение больных в исследование осуществлялось при непосредственном участии заведующей отделением гематологии В Ю Гранкиной, врача-гематолога Е Н Кнутаревой, заведующего кафедрой инфекционных болезней ГОУ ВПО СибГМУ Росздрава д м н, профессора А В Лепехина и врача-ординатора клиники инфекционных болезней ГОУ ВПО СибГМУ Росздрава к м н Н П Чернышовой В контрольную группу были включены 40 здоровых доноров с аналогичными характеристиками по полу и возрасту (22 мужчины и 18 женщин в возрасте от 18 до 60 лет, средний возраст - 28±4 лет) Клинически и анамнестически у всех обследованных лиц были исключены обострение хронических воспалительных процессов, наследственные и психические болезни, инфекционная патология, а также злоупотребление алкоголем и наркотическая зависимость

Все больные со злокачественными заболеваниями системы крови, ассоциированными с эозинофилией, были разделены на три группы Первую группу составили 25 пациентов с лимфогранулематозом (по МКБ-10 рубрика С81) из них 9 - со смешанно-клеточным вариантом заболевания (С81 2), 10 - с нодулярным склерозом (С81 1), 6 - с лимфоидным преобладанием (С81.0) Среди больных лимфогранулематозом, согласно классификации, принятой в 1971 г в Arm Arbor, выделяли пациентов со II Бб стадией процесса (2 человека),

III Аб стадией (10 пациентов) и III Бб стадией (13 больных) Верификация диагноза проводилась на основании данных морфологического и иммунофенотипического исследований гистологических препаратов (наличие в опухолевом очаге типичных многоядерных клеток Березовского-Штернберга с фенотипом CD15, CD30) Во вторую группу обследованных были включены 30 пациентов с множественной миеломой (по МКБ-10 рубрика С90 0) их них 28 человек - с диффузно-очаговой формой миеломных инфильтратов, 2-е диффузной формой миеломных инфильтратов Диагноз миеломной болезни устанавливался на основании обнаружения плазмоклеточной инфильтрации костного мозга (число плазмоцитов более 10%) и моноклональной Ig-патии (сывороточный М-компонент или белок Бене-Джонса в моче), подтвержденных методами иммунохимического анализа сывороточных и мочевых иммуноглобулинов с привлечением метода иммунофиксации Третью группу обследованных составили 38 больных неходжкинскими лимфомами (рубрики С82 и С83 по МКБ-10) 20 человек с лимфомой из периферических (зрелых) клеток (12 - со зрелоклеточной лимфомой, 2-е пролимфоцитарной, 2-е лимфоцитарной, 4-е В-мелкоклеточной), 4-е В-крупноклеточной, 14-е фолликулярной При этом у 16 пациентов с неходжкинскими лимфомами отмечали III Аб стадию процесса, у 22 - III Бб стадию При диагностике неходжкинских лимфом обязательной являлась гистологическая оценка субстрата опухоли, дополненная иммунологическим и цитогенетическим методами исследования

Группу сравнения составили 37 пациентов с лимфопролиферативными заболеваниями системы крови (из них 13 больных лимфогранулематозом, 11 -множественной миеломой, 13 - неходжкинскими лимфомами), не сопровождавшимися эозинофилией с сопоставимыми характеристиками по полу и возрасту

Все обследованные пациенты с описторхозом были разделены на две группы В первую группу были включены 46 лиц, страдающих острым описторхозом (по МКБ-10 рубрика В66), подавляющее большинство которых составили новоселы Томской области (40 человек) из них 29 заразились описторхозом при проживании в эпидемическом очаге до 1 года Верификация диагноза острого описторхоза основывалась на данных эпидемиологического анамнеза (пребывание больного в местности, не благополучной по описторхозу; употребление необезвреженной рыбы семейства карповых), остром начале болезни, сопровождавшемся высокой температурой, аллергическими явлениями, болями в эпигастральной области и правом подреберье, характерных изменениях периферической крови (эозинофилия (>15%), лейкоцитоз) Обязательным для постановки диагноза острого описторхоза у обследованных пациентов являлось обнаружение IgM-антител к антигенам О felmeus в сыворотке крови с применением иммуноферментного анализа

Согласно классификации описторхоза МЭ. Винникова и соавт [1969, 1971] и Н Н Озерецковской [2000], были выделены следующие клинические группы 1) пациенты с тифоподобным вариантом течения инфекции - 16

человек, 3) пациенты с гепато-холангитическим вариантом течения - 20 человек, 4) пациенты с гастроэнтерологическим вариантом течения -10 человек

Анализ клинической картины у пациентов с тифоподобным вариантом течения острого описторхоза показал, что наиболее часто у пациентов выявлялся токсико-аллергический синдром (83%) Больные предъявляли жалобы на общую слабость, головную боль, ознобы, повышенное потоотделение, боли в суставах и мышцах При осмотре выявлялась легкая субиктеричность, экзантема Диспепсический синдром (непереносимость жирной пищи, тошнота, горечь во рту, изжога, метеоризм) встречался у 36% пациентов В большинстве случаев гепато- и спленомегалия, выявленные физикально, подтверждались результатами ультразвукового исследования В свою очередь у лиц с гепато-холангитическим вариантом течения острого описторхоза преобладали симптомы, обусловленные поражением гепато-биллиарной системы (у 92%) боли в области правого подреберья, желтуха различной степени выраженности, значительное увеличение печени (выступает на 4 см и более из под края реберной дуги) Симптомы Ортнера, Кера, Мюсси -положительные Астеновегетативный синдром выявлялся у 32% пациентов Гастроэнтероколитический вариант острой фазы описторхоза характеризовался жалобами на частый жидкий стул (79%), болями в животе (84%), метеоризмом (54%), тошнота и рвота были отмечены у 47%

Вторую группу обследованных составили 50 больных хроническим описторхозом с выраженной клинической картиной (реинвазия, суперинвазия) (по МКБ-10 рубрика В-66) Верификацию диагноза проводили на основании данных клинико-эпидемиологического, инструментального и лабораторного исследований Анамнестически у всех пациентов данной категории был определен примерный срок инвазии, оценивались жалобы, характер течения заболевания и объективные признаки. Проводился широкий спектр лабораторных исследований, включавший общий и биохимический анализ крови, иммуноферментный анализ, оценку иммунного статуса, дуоденальное зондирование и копроовоскопию У обследованных пациентов с хроническим описторхозом в 95% случаев заболевание было выявлено впервые, у 5% больных в анамнезе - курс дегельминтизации бильтрицидом

В соответствии с классификацией, предложенной Н Н Озерецковской [2000], были выделены следующие клинические группы 1) больные с гепатохолангитическим вариантом течения хронического описторхоза - 30 пациентов, 2) больные холангиохолециститом - 16 человек, 3) больные гепатопанкреатитом - 4 человека

Анализ клинической картины у больных хроническим описторхозом показал, что наиболее часто выявлялись синдромы гастро-дуоденальной диспепсии (тошнота, чувство давления в эпигастральной области, изжога, отрыжка, снижение или полное отсутствие аппетита) — у 49%, ангиохолецистита - у 68%, панкреатический - у 36% Кроме того, у 30% больных на коже периодически появлялись высыпания, у 12% возникали приступы удушья по типу бронхиальной астмы, синдром холестаза (желтушное окрашивание кожи и склер, зуд, билирубинемия) обнаруживался у

15 %, артралгический синдром регистрировался у 27% больных Группу сравнения составили 20 пациентов с хроническим описторхозом без эозинофилии крови с сопоставимыми характеристиками по полу и возрасту Распределение здоровых доноров и обследованных пациентов по группам в соответствии с использованными методами исследования представлено в таблице

Материалом исследования являлась венозная кровь обследованных лиц, взятая утром до приема пищи (кровь стабилизировали гепарином - 25 Ед/мл)

Определение общего количества лейкоцитов периферической крови и подсчет их отдельных морфологических форм проводили стандартными гематологическими методами [Меньшиков В В , 1987]

Иммунофенотипирование лимфоцитов периферической крови по CD-маркерам (CD3+, CD4+, CD8+, CD22+) проводили иммуноцитохимическим методом [Тотолян А Н и соавт, 2002] Результаты выражали в процентных и абсолютных значениях

Мононуклеары выделяли в стерильных условиях из цельной венозной крови методом градиентного центрифугирования с использованием Ficoll-Paque («Pharmacia», Швеция) (р= 1,077 г/см3) Выделенные клетки культивировали в течение 18 ч при температуре 37° и 5% СО, в полной культуральной среде (90% RPMI-1640 («Вектор-Бест», Новосибирск), 10% инактивированная эмбриональная телячья сыворотка («Биолот», Санкт-Петербург), 0,3 мг/мл L-глутамина) без митогена или с добавлением 10 мкг/мл фитогемагглютинина (ФГА) («Difco», Германия) для активации лимфоцитов [Хаитов Р М и соавт, 1995] Затем проводили оценку содержания цитокинов (IL-3, IL-4, IL-5 и GM-CSF) в супернатантах культур мононуклеарных лейкоцитов и эотаксина в сыворотке крови методом иммуноферментного анализа согласно инструкциям, предлагаемым производителями тест-систем («Ргосоп», Россия, «Biosource», Бельгия) Учет результатов иммуноферментного анализа проводили с применением фотометра для микропланшетов «Multiscan ЕХ» («ThermoLabSystems», Финляндия) при длине волны 450 нм

Выделение эозинофильных гранулоцитов проводили с использованием пятиступенчатого градиента Percoll («Amersham Biosciences АВ», Швеция) (1,070,1,081, 1,090, 1,095 и 1,105) [Gartner 1, 1980]

Выделенные клетки культивировали в течение 18 ч при температуре 37°С и 5% С02 в 96-луночных иммунологических планшетах в полной культуральной среде (90% RPMI-1640, 10% инактивированной эмбриональной телячьей сыворотки, 0,3 мг/мл L-глутамина, 100 мкг/мл гентамицина и 2мМ/мл HEPES («Flow», GB))

Затем проводили оценку морфофункционального статуса эозинофильных гранулоцитов с использованием цитохимических методов исследования Содержание неферментных катионных протеинов в эозинофилах периферической крови определяли цитохимическим методом МГ Шубина

Таблица

Распределение здоровых доноров и пациентов с заболеваниями, ассоциированными с эозинофшией периферической крови, в соответствии с использованными методами исследования

МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ ГРУППЫ ОБСЛЕДОВАННЫХ |

Здоровые доноры Пациенты со злокачественными заболеваниями системы крови Пациенты с 1 описторхозом

Определение показателей лейкоцитарного звена периферической крови (общего количества лейкоцитов, абсолютного и относительного содержания эозинофилов и лимфоцитов) 40 130 116

Определение содержания лизосомальных катионных белков и пероксидазы в эозинофильных гранулоцитах цитохимическим методом 38 93 96

Определение фагоцитарной активности эозинофилов периферической крови в НСТ-тесте 40 85 70

Оценка морфометрических характеристик ядра и цитоплазмы эозинофильных гранулоцитов методом компьютерной морфометрии 25 75 50

Определение особенностей морфологии озинофилов в среде с антигеном О felmeus 30 75 50

Определение количества лимфоцитов крови, презентирующих CD3+, CD4+, CD8+ и CD22+-маркёры иммуноцитохимическим методом 35 80 60

Исследование содержания (IL-3, IL-4, IL-5 и GM-CSF) эозинофилстимулирующих цитокинов в супернатантах культур мононуклеарных лейкоцитов и уровня эотаксина в сыворотке крови методом иммуноферментного анализа 20 60 45

Оценка количества эозинофилов, несущих рецепторы к IL-3, IL-5 и эотаксину, методом лазерной проточной цитофлуориметрии 20 45 30

Оценка реализации апоптоза в аннексиновом тесте с использованием лазерной проточной цитоф чуориметрии • Исследование спонтанного апоптоза эозинофилов периферической крови • Модуляция апоптоза m vitro - лишением ростовых факторов - добавлением рекомбинантных форм цитокинов (IL-5, IL-3, eotaxm) ООО 45 45 45 ООО

[Меньшиков В В, 1987] (рис 1а) Оценивали активность пероксидазы в эозинофильных гранулоцитах методом Грэхема-Кнолля [Хейхоу ФГДж, Кваглино Д , 1983] (рис 16) Морфологическое исследование эозинофильных гранулоцитов проводили в условиях их инкубации с антигеном О ГеЬпеив по

методу 1 .С. 11пшеном и соает. [1995]. Фагоцитарную акт ивность эозииофилон периферической крови оценивали методом J.S. Steward el al. в модификаций Б.С. Нагоеаа В.В,. 19§5(Нрис. 1»),

Исследование морфометр и чесщх характеристик эозицофильпых ГрануЛОЦВТОв осуществляли с: помощью метода компьютерной морено метрик [Автандилов Г. Г.. 1990; Ильинских Н.Н. и соавт., 2005] с йс п о л 1ЙЙ ианием программы «hmgeJ» (проект, реализованный национальным институтом З&оровш США) (Автор - Wayne Rasband, Res с arch Services Branch. National Institute of Mental Health, Bethesda. Maryland, USA) (рис. 2),

Рис. I. Содержание внутримешочных жзинофтъных катиоппых прптешюв (а) и nepOKCuiiam (о ) в -мынофтах периферической крови. Дчформаюн-шиитщме защшофюы (в)

li рамках диссертационной работы проводили оценку состояния рецепторно! о аппарата эозинофйлов, полученных у пациентов с jIимфопролиферативнымн заболеваниями системы крови, сопровождающихся синдромом эозинофилии, а также у здоровых доноров, in i itro без стимуляции и в условиях инкубации эознноф ильных клеток с ре ком бин ант н ы мй формами цитоки] юв. Для зтого выделенные эозинрфилы периферической крови ityлътивировали в отсутствии стимуляции или е добавлением рекомбинантого (г) IL-3 («Вююигсе», Бельгия), r-IL-5 («Biosource», Бельгия) или г-эотакейяа («Biosonrce», Бельгия) в концентрации 10 г/мл. Клетки инкубировали в течение 1К ч При температуре .17" и 5% (ТК Оценку презентации мембран о связан шах форм рецепторов к IL-3, DL-5 и зотаксину на зозинофндач крови проводили методом проточной лазерной двухцветной цитоме[рии с использованием моиоклональных антител к цитоки новым рецепторам, меченных флуоресцентными метками. Регистрацию презентации цитокпнолых рецепторов на эозинофилах проводили согласно протоколу фирмы производителя («R&D Systems», США). Анализ образцов клеточных суспензий проводили на Цроточном цитометре Epics XL («Beckman Coulter», Франция) с применением автоматического программного обеспечения и методой сбора и анализа данных с высоким разрешением (1024 канала) (рис. 3).

Регистрация а по птоза была основана на определении экспрессии на поверхности клеток фосфагиди.тсерипа. Для его обнаружения непользовался И ТС-Меченный аннексии V. который обладает сродством к фосфат идилсерипу

(Уап Епд1апё е! а!.. 1998]. Выделенные в стерильных условиях эозин«филы периферической крови культивировали н 96-луночных круглодонных планшетах о объеме 200 мкл. В лунки вносили суспсншю теток (2*) (Г на лупку), а гакже полную культуральную среду, состоящую т 90% КРМ1-1640 |?Вектор-£ест», Новосибирск), 10% эмбриональной телячьей сыворотки («Биолит». Сапкт-11егйр6ург), ипактивиронанной при 56°С в течение 30 мин, 0.? мг/мл Ь-глутамина, Клёпки инкубировали в течение 18 ч при температуре 37°С и 5% СО;. После отмывания клетки суспензировали (1*1 0 в 1 мл) и аынексиновом буфере, содержащем аннексии V, леченный Р1ТС, и через 15 мил подвергали проточной питофлуорнметрии как описано выше. В гейте зозинофильных клеток анализировали наличие зеленой флуоресценции И ТС на одномерной гистограмме (рис.

Рис. 2. Данные компьютерной морфометрии: ч) выбор объекта 0(0 мврфометшческого исследования, б) выоыенае ггчощвдц 'зозынофидъной клетки, е) выделение ядра эозЩофйЯО* **) выделение гетерохроматиновых областей ядра эонтофгпа. д) выделение эухромитиниеых участков ядра мзннофила с использованием метода кластерного анализа, Окраска Щур И- ютном, увеличение 900

'Л

к А /1

Р5С-Н Ь П_1 -Н

Рис. .1 Г"истогримма распределения щщмофтов по интенсивности флуоресценции в /' Оценка содержания 1Ь-5И -клеток, меченных ПТС. а гейте эозинофильнщХ

• 'решулоцнпюъ

а - иршшип автоматического выделен и* генга эочинофилад по показателям малоуглСШОГО (РЮ н бокового ) светораесепаапия:

б одномерная тетограмма ИНТЕНСИВНОСТИ флуорсещлщии я гейте ЗЙЭилофМлъны* клеток ио РЫ -калачу (слева от оси несяеолцнсся клетки, справа НТС-гючич пвньн" чочинофилы).

В рамках диссертационной работы проводили оценку реализации апоптоза эозинофилов периферической крови у пациентов с лимфопролиферативными заболеваниями системы крови и у лиц, страдающих описторхозом, сопровождавшимися эозинофилией крови, а также у здоровых доноров т vitro в условиях инкубации эозинофильных клеток в среде, лишенной ростовых факторов и с рекомбинантными формами эозинофилспецифичных цитокинов (IL-3, IL-5 и эотаксин) Для этого в лунки планшета вносили суспензию выделенных эозинофилов крови (2*105 на лунку), а также чистую среду RPMI-1640 без эмбриональной телячьей сыворотки, т е в отсутствии ростовых факторов, или полную культурапьную среду с добавлением рекомбинантных (г) IL-3 (r-IL-3) («Biosource», Бельгия), r-IL-5 («Biosource», Бельгия) и r-eotaxin («Biosource», Бельгия) в концентрации 10"8 г/мл Клетки инкубировали в течение 18 ч при температуре 37 °С и 5% С02 Затем с помощью FITC-меченного аннексина V методом проточной лазерной цитометрии регистрировали апоптоз как указано выше (рис 3)

Оценку полученных результатов проводили методами статистического описания и проверки статистических гипотез При анализе имеющихся выборок данных использовали гипотезу нормальности распределения (критерий Шапиро-Вилка) Для нормально распределенных выборок вычисляли средневыборочные характеристики среднее арифметическое ( X), среднее квадратичное отклонение (а), ошибка среднего (т) Для выборок, распределение которых отличалось от нормального, рассчитывали медиану (Me), первый и третий квартили (Qb Q3) При соответствии нормальному закону распределения признака в исследованных выборках проверку гипотезы о равенстве средних выборочных величин проводили с использованием однофакторного дисперсионного анализа Для оценки достоверности различий выборок, не подчиняющихся критерию нормального распределения, использовали критерий Kruskal-Walhs С целью попарного сравнения показателей в исследованных группах применяли критерий Манна Уитни для независимых групп Различие двух сравниваемых величин считали достоверным при уровне значимости р<0,05 С целью обнаружения связи между исследованными показателями проводили корреляционный анализ путем вычисления коэффициента ранговой корреляции Спирмена (г) Методом множественной регрессии был рассчитан коэффициент р, определяющий степень зависимости между исследованными показателями [Гланц С, 1999, Боровиков В П, 2001]

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

На сегодняшний день проблемы, касающиеся аспектов формирования эозинофилии крови при патологических процессах разного генеза, относятся к

актуальным задачам современной медицины. Это связано как с весьма высокой встречаемостью данного феномена, так и с возможностью развития опасных осложнений, опосредованных реализацией цитотоксического потенциала эозинофильных гранулоцитов [Джальчинова В Б., Чистяков ГМ, 1999, Воробьев А И и соавт, 2000; Dvorak А.М, Weiler Р F , 2000, Чучалин А Г, 2003, Семенкова ЕН и соавт, 2004] В последнее время становится очевидным, что изучение реализации патогенеза превалирующего числа заболеваний и синдромов с позиций оценки межклеточной кооперации эффекторных клеток, к которым с полным основанием можно отнести клетки крови, может привнести ясность в вопросы формирования тех или иных патологических процессов, а также предложить стратегию для разработки универсальных патогенетически обоснованных методов их коррекции Данное положение послужило основным посылом к выполнению настоящего исследования, направленного на установление ключевых механизмов нарушений кооперативного взаимодействия иммуноцитов и эозинофилов при заболеваниях, ассоциированных с развитием эозинофильной реакции крови (лимфопролиферативные заболевания системы крови и гельминтоз, обусловленный О fehneus) Наше внимание было сфокусировано на оценке морфофункционального статуса эозинофильных гранулоцитов, выявлении иммунофенотипических свойств иммунокомпетентных клеток и их способности к продукции ключевых эозинофилспецифичных медиаторов, регулирующих гомеостаз эозинофильных клеток, исследовании особенностей рецепторэкспрессирующей функции эозинофилов, установлении характера изменения их программированной гибели и степени вовлеченности в спонтанный и индуцированный цитокинами апоптоз эозинофилов в условиях т vitro, полученных у пациентов с гиперэозинофилией крови

При проведении сравнительного анализа результатов исследования у пациентов с лимфопролиферативными заболеваниями системы крови, сопровождающимися эозинофилией, в зависимости от половых и возрастных критериев, а также факта наличия полихимиотерапии в анамнезе достоверных различий тестируемых показателей выявлено не было

Результаты, полученные в ходе настоящего исследования, согласуются с данными литературы, указывающими на развитие феномена эозинофилии при описторхозной инвазии и злокачественных заболеваниях системы крови, что характеризовалось значительным увеличением (по сравнению с нормой) содержания эозинофилов в крови (до 25,79±4,29%, р=0,003 - у пациентов с лимфогранулематозом, 16,86*2,63%, р=0,014 - множественной миеломой, 15,18±2,66%, р=0,042 - неходжкинскими лимфомами, 45,43±8,71%, р=0,001 -острым описторхозом и 19,51±1,76%, р=0,019 - хроническим течением гельминтоза (реинвазия, суперинвазия) при норме 2,18±0,06%)

Обще известно, что в реализации противопаразитарного иммунитета лейкоциты эозинофильного ряда играют особую роль Повышенное содержание эозинофилов является одним из первых, а иногда и единственным признаком сенсибилизации макроорганизма антигенами О fehneus [Бронштейн А М , 1997,

Сергиев ВП и соавт, 1997, Токмалаев АК, 2002] Формирование эозинофильной реакции крови при описторхозной инвазии опосредовано антителозависимым хемотаксисом эозинофильных гранулоцитов (опосредованный ^Е- или 1§0-антителами) [Гриншпун Л Д, 1989, Озерецковская НН, 2000], который имеет защитную функцию, опосредуя эффективный киллинг эозинофилами инфектогенов паразитарной природы [Воробьев АИ, 2002] Установлено, что высокая эозинофилия (>50%) крови при развитии острой фазы описторхоза является специфическим маркером миграционной стадии гельминтоза, когда паразитарный инфектоген находится в тесном соприкосновении с тканями макроорганизма [Гриншпун ЛД, 1983, Беклемишев И Д, 1998, Джальчинова В Б, Чистяков Г М, 1999, Озерецковская Н Н , 2000]

В последнее время исследователи уделяют все большее внимание проблеме хронического описторхоза, поскольку именно эта стадия заболевания характеризуется системным действием возбудителя на организм [Лепехин А В , 1992, Карбышева Н В, 2001, Карапетян М С., 2003] Согласно данным современной литературы, эозинофилия крови при хроническом описторхозе развивается всего в 44,0%-59,3% случаев [Лепехин А В , 1992, Карбышева Н В , 2001, Ильинских ЕН и соавт, 2002] Наше исследование также подтверждает формирование эозинофилии периферической крови лишь у 60% обследованных нами пациентов с хроническим течением описторхоза (реинвазия, суперинвазия) Данное обстоятельство многие авторы связывают с повышенной миграцией эозинофильных гранулоцитов в область пребывания гельминтов и способностью формировать там инфильтраты Так, эозинофилы обладают способностью фиксироваться в различных тканях и органах, обусловливая развитие «эозинофильного воспаления» с последующим повреждением и фиброзированием окружающих тканей (эозинофильная пневмония, эозинофильные васкулиты, эозинофильные гастроэнтериты и др) [Рип§рак в й а1,1989, Карбышева Н В , 2001, Карапетян М С , 2003, Раи1у А е1а!, 2003]

Частота обнаружения эозинофилий при опухолевых заболеваниях различной локализации по данным А И Воробьева [2002] достаточно низкая (0,54% среди всех случаев) Однако рост количества эозинофилов в крови является весьма частым спутником злокачественной патологии системы крови В гематологической практике врачи нередко сталкиваются с проблемой интерпретации причин развития эозинофилии у больных гемобластозами, происходящими из клеток-предшественниц лимфо- и миелопоэза [Меге Н. е! а1, 1991, Хорошко Н Д и соавт, 1998, Морозова В Т и соавт, 2000, Волкова М А , 2001, Чучалин А Г , 2003, Семенкова Е Н и соавт, 2004, Абдулкадыров К М , 2006] Некоторые авторы отмечают, что данный гематологический синдром имеет большое диагностическое значение, являясь одним из ранних симптомов начальной стадии опухолевой прогрессии [Гриншпун ГД, 1983, Воробьев А И , 2002, Бережная Н М и соавт, 2005, Поддубная И В и соавт, 2006]

Очевидно, что механизмы формирования различных заболеваний и синдромов, в том числе гематологических, тесно сопряжены с морфо-функциональным дисбалансом тех или иных эффекторных клеток [Автандилов

Г Г , 1990, Анаев ЭХ и соавт, 2002, Ильинских Н Н и соавт, 2005] В ходе проведенного нами анализа цифровых скенограмм эозинофильных гранулоцитов, полученных от лиц с лимфопролиферативными заболеваниями системы крови и у больных описторхозом, ассоциированных с эозинофилией крови, с помощью метода компьютерной морфометрии, нами было выявлено значимое (по сравнению с нормой) увеличение размеров изученных клеток у всех категорий обследованных пациентов вне зависимости от нозологии, о чем свидетельствовал рост показателей, отражающих значения общей площади клетки (площадей ядра и цитоплазмы), а также периметра эозинофильных гранулоцитов (у пациентов с лимфогранулематозом значения площади эозинофильных клеток составили 178,01±9,22 мкм2 (р=0,018), множественной миеломой - 159,31±7,41 мкм2 (р=0,036), неходжкинскими лимфомами -165,21±10,21 мкм2 (р=0,025), острым описторхозом - 169,10±7,02 мкм2 (р=0,010) и хроническим течением данного гельминтоза - 157,01±9,02 (р=0,023) при норме 132,80±13,11 мкм2)

Возможно, что одним из основополагающих механизмов зафиксированного нами изменения размеров эозинофильных клеток при рассматриваемых нозологиях, ассоциированных с повышением числа эозинофилов, может быть приобретение последними гиподенсного фенотипа [Simon D et al, 1982, Pnn L et al, 1983, 1984, Peters В et al, 1989, Gleich G J , Leiferman К M, 2005] Показано, что субпопуляцию низкоплотностных эозинофилов характеризуют более крупные размеры клеток и повышенная вакуолизация цитоплазмы [Анаев ЭХ, и соавт, 1994 2002] Кроме того, эозинофилы со сниженной плотностью обладают большей функциональной и метаболической активностью, что находит отражение в интенсификации их окислительного метаболизма, увеличении транспорта гексозы, повышении синтеза биологически активных веществ и т д [Winqvist G et al, 1982, Prin L et al, 1984, Frick T et al, 1988, Черногорюк Г Э, 2002] Небезынтересно отметить, что при гемобластозах и описторхозной инвазии, сопровождающихся эозинофилией крови, также регистрировалось статистически значимое снижение (по сравнению с нормой) значений циркулярности (в среднем в 1,8 раз) и, напротив, увеличение (в среднем в 5,5 раз) количества инвагинаций плазматической мембраны эозинофилов

При исследовании показателей, характеризующих состояние ядра эозинофильных гранулоцитов, у больных лимфопролиферативными заболеваниями системы крови и острым описторхозом, ассоциированных с эозинофилией крови, обращало на себя внимание увеличение значений ядерных площадей эозинофилов и ядерно-цитоплазматического индекса по сравнению с аналогичными параметрами у здоровых доноров (соответственно 84,44±7,19 мкм2, р=0,023 и 0,91±0,01, р=0,017 - у больных лимфогранулематозом, 79,16+4,56 мкм2, р=0,029 и 0,95±0,01, р=0,017 -множественной миеломой, 80,89*6,32 мкм2, р=0,031 и 0,94±0,03, р=0,027 -неходжкинскими лимфомами и 81,04±6,09 мкм2, р=0,009 и 0,096±0,01, р=0,021 - остром описторхозе при норме 55,4±3,04 мкм2 и 0,72±0,01) Установление

данного факта может свидетельствовать об интенсификации процессов эозинофилопоэза в костном мозге при вышеуказанных нозологиях [Ильинских Н Н, 2005] При хроническом описторхозе площадь ядер эозинофильных гранулоцитов и значения ядерно-цитоплазматического индекса варьировали в пределах нормальных значений (р=0,077 и р=0,054)

Согласно современным представлениям, реализация генетической информации, выражающаяся в синтезе разнообразных молекул, связана с изменением структуры ядерных компонентов степень выраженности компактизации хроматина коррелирует с долей активированного генетического материала, что, в свою очередь, детерминирует функциональную активность клетки [Автандилов Г Г , 1973, 1984, 1990, Ильинских Н Н и соавт, 2005] У обследованных нами лиц с лимфопролиферативными заболеваниями системы крови вне зависимости от нозологии отмечалось значимое увеличение (по сравнению с нормой) относительной площади эухроматиновой зоны ядер эозинофилов (в 2 раза) на фоне сниженных значений гетерохроматинового кластера (в среднем на 27%), что может служить индикатором повышения транскрипционной активности и интенсивности синтетических процессов в ядерных структурах изученных клеток При остром и хроническом течении гельминтоза, вызванном паразитированием О felmeus, напротив, регистрировалось достоверное увеличение (по сравению с контролем) участков гетерохроматиновых зон в ядрах эозинофилов (в среднем в 1,8 раз, р=0,015 и р=0,011) при соответствии показателей эухроматиновой зоны нормальным значениям (р=0,120 и р=0,098), что может указывать на замедление или «инертность» реализации вышеуказанных процессов. Данное обстоятельство многие авторы связывают с гиперантигенемией, развивающейся при описторхозной инвазии и присутствием в плазме генотоксических агентов [Fedorov К Р et al, 2002; Pauly A. et al, 2003, Falcone F H et al, 2004]

He вызывает сомнения тот факт, что адекватное функционирование клеток макроорганизма во многом определяется полноценностью их структур [Гриншпун Г Д, Виноградова Ю Е, 1983, Воробьев А И, 2002] Эозинофилия, сопутствующая течению патологических процессов разного генеза, весьма часто сопровождается существенными изменениями морфологических свойств эозинофилов, что может проявляться усилением их способности к дегрануляции и цитолизу [Анаев Э X и соавт, 1997, Ружицкая Е А. и соавт, 2000] Это положение подтверждается результатами наших исследований, выявивших значительное увеличение (по сравнению с нормой) содержания эозинофилов, полученных у больных лимфопролиферативными заболеваниями системы крови и у пациентов с описторхозом, ассоциированных с эозинофилией крови, с измененной морфологией ядра и цитоплазмы в спонтанной (без антигенной стимуляции) и индуцированной (инкубация с очищенными фиксированными иммунодоминантными фракциями белков О felmeus) пробах (у лиц с лимфогранулематозом, множественной миеломой и неходжкинскими лимфомами, количество морфологически измененных эозинофилов в пробах без антигенной стимуляции превышало аналогичные значения нормы в среднем в 3,3 (р=0,025, р=0,03 и р=0,036), в условиях

инкубации с антигенами О felmeus - в 4,1 раз (р=0,023, р=0,029 и р=0,033), у больных острым и хроническим течением описторхоза - в 3,4 (р=0,001 и р=0,008) и в 4,2 (р=0,023 и р=0,049) раза, соответственно) При этом рассчитанный показатель повреждения эозинофилов [Нишева ЕС и соавт, 1995] у всех обследованных больных с эозинофилией крови варьировал от 3,05 до 5,07 услед при норме 1,81 услед Обнаруженные нами изменения морфологии эозинофильных гранулоцитов носили преимущественно признаки дегрануляции и цитолиза разбухшие клетки в два и более раз превышали размеры нейтрофилов, их оболочка была разорвана, рядом располагались гранулы Кроме того, была зарегистрирована повышенная вакуолизация ядра и цитоплазмы эозинофилов

Согласно современным представлениям, противоопухолевая активность эозинофильных гранулоцитов и эффективный лизис последними инфектогенов паразитарной природы опосредованы их способностью к фагоцитозу и цитотоксическому действию [Джальчинова ВБ, Чистяков Г М, 1999, Giembycz М А , Lindsay М А , 1999, Адаскевич В П , Зыкова О С , 2000, Dvorak А М, Weller Р F , 2000, Волкова М А, 2001, Яковлева В В и соавт, 2003] В ходе проведенного цитохимического исследования у пациентов с гемобластозами и инвазией О felmeus, сопровождающимися развитием эозинофильной реакции крови, было отмечено повышение (по сравнению с нормой) числа активных эозинофилов в отношении обнаружения гранул лизосомальных катионных белков и эозинофильной пероксидазы Выявленные изменения изученных параметров носили однонаправленный характер не зависимо от особенностей нозологии (у пациентов с лимфогранулематозом значения средних цитохимических коэффициентов содержания внутриклеточных катионных белков и пероксидазы оказались равными 2,93*0,02 (р=0,011) и 2,95*0,03 услед (р=0,043), множественной миеломой -2,95*0,06 услед (р=0,003) и 2,79*0,07 услед (р=0,039), неходжкинскими лимфомами - 2,42±0,08 (р=0,041) и 2,69±0,07 услед (р=0,048), острым описторхозом 2,95*0,06 (р=0,022) и 2,99*0,03 услед (р=0,045) и при хроническом течении данного гельминтоза - 2,78±0,05 (р=0,015) и 2,89±0,02 услед (р=0,029) при норме 2,17*0,07 и 2,53*0,07 услед соответственно) В свою очередь, предпринятая оценка биоцидной активности эозинофилов крови у лиц, страдающих гемобластозами и у пациентов с описторхозом, течение которых было ассоциировано с синдромом эозинофилии, в тесте восстановления нитросинего тетразолия, отражающего активацию гексозомонофосфатного шунта, позволило констатировать факт увеличения количества диформазан-позитивных клеток в спонтанном и индуцированном пирогеналом НСТ-тесте по сравнению с аналогичными параметрами у здоровых доноров (у лиц, страдающих лимфогранулематозом, множественной миеломой и неходжкинскими лимфомами значения спонтанного и индуцированного пирогеналом НСТ-теста превышали аналогичные показатели контроля в среднем в 2,8 (р=0,012, р=0,04 и р=0,011) и в 1,5 раза (р=0,041,

р=0,034 и р=0,039), у пациентов с острым и хроническим течением описторхоза в - 2,1 (р=0,012 и р=0,04) и в 2,5 раза (р=0,041 и р=0,034), соответственно)

Очевидно, что значительный рост содержания цитотоксических компонентов гранул в эозинофилах и усиление их фагоцитарной активности может явиться следствием усиления их функциональной активности при вышеназванных патологиях Данное обстоятельство может быть опосредовано как антигенной стимуляцией, так и активирующим влиянием хемотаксических факторов, среди которых ключевую роль играют эозинофилспецифичные медиаторы (IL-3, IL-5, eotaxm, PAF и др ) [Беклемишев И Д, 1998, Воробьев А И, 2002] Следует отметить, что концентрация последних в сыворотке крови нередко оказывается увеличенной при целом ряде заболеваний, сопровождающихся эозинофилией [Бережная Н М , 2000, Воробьев А И , 2002, Бережная Н М и соавт, 2005, Флеминг М В и соавт,, 2005, Munitz I et al, 2006]

Резюмируя вышеизложенное, следует подчеркнуть, что значительное увеличение размеров эозинофильных клеток, образование ими инвагинаций цитоплазматической мембраны, а также усиление дегрануляции и цитолиза эозинофилов, выявленное нами при вышеуказанных нозологиях, с одной стороны, может являться следствием их гиперактивации, а, с другой, - быть фактором, способствующим усилению цитотоксичности эозинофильных гранулоцитов В свою очередь, интенсификация кислороднезависимых и кислородзависимых процессов киллинга эозинофилов, обнаруженное нами при заболеваниях, сопровождающихся эозинофилией, обусловливает формирование высокого цитотоксического потенциала эозинофильных клеток, действие которого может реализоваться не только в отношении антигенных структур, но и клеток макроорганизма Последнее обстоятельство, вероятно, обусловливает негативное влияние длительной эозинофилии крови на организм и может осложнять течение основного заболевания

Говоря о роли явления эозинофилии в прогнозировании исхода заболеваний разного генеза и развития их осложнений, на наш взгляд правильно рассмотреть эозинофил с точки зрения участия этой клетки в регуляции иммунологического и тканевого гомеостаза (рис 4) Как упоминалось ранее, известные на сегодняшний день механизмы формирования зозинофилий периферической крови антителозависимый хемотаксис, развивающийся при паразитозах (IgE- или IgG-антитела), иммунный, опосредованный через IgE (характерен для аллергии), ответ на эозинофильный хемотаксический фактор, выделяемый некоторыми опухолями, собственно опухолевая эозинофилия - лейкоз, не позволяют сформировать целостного представления о патогенезе данного феномена при патологических процессах разного генеза, касаясь лишь клинической стороны вопроса [Джальчинова В Б, Чистяков Г М ,1999, Минеев В Н и соавт, 2000, Воробьев А И, 2003, Бережная Н М и соавт, 2005]. Дискутабельными остаются вопросы о целесообразности, а также о закономерностях и особенностях формирования эозинофильной реакции при различных патологических процессах

Молекулярно-биологические подходы, используемые в последние годы в медицине, позволили значительно расширить возможности изучения патогенеза многих заболеваний и синдромов [Хаитов Р М и соавт 2000, Фрейдлин ИС, 2001, Воробьев АИ, 2002, 2003] Изучение аспектов дизрегуляции межклеточных взаимодействий эффекторных клеток, к которым с полным основанием можно отнести клетки крови, является, безусловно, превалирующим в установлении пусковых механизмов развития любого патологического процесса [Иванов А А и соавт, 2005] Принимая во внимание вышесказанное, логично предположить, что феномен эозинофилии, сопутствующий течению многих заболеваний, имеющих разнообразные механизмы возникновения, есть не что иное, как результат дискоординированного функционирования клеточных элементов, в частности, эозинофилов и иммуноцитов, входящих в состав кооперации

Регуляция функций клеток иммунной системы

Участник процессов межклеточной коммуникации (базофилы, макрофаги, эндотелиоциты

Участник репарационных процессов

Участник процессов элиминации чужеродных антигенов (опухолевые клетки, гельминты и до)

Регуляция процессов свертывания крови

Рис 4 Роль эозинофипа в регуляции гомеостаза [по данным А И Воробьева, 2002,

J О 2002, Н М Бережной и соавт , 2005]

Исследования особенностей реагирования системы иммунитета на различные антигенные структуры как в норме, так и при типовых патологических процессах свидетельствуют о том, что существующий в организме баланс показателей клеточного звена иммунитета является одним из важнейших условий поддержания эффективного иммунного ответа на внедрение многообразных патогенов, где ключевая роль принадлежит иммунокомпетентным клеткам периферической крови, в частности лимфоцитам [Кетлинский С А , 2002, Симбирцев А С., 2004, Ярилин А А , 2004] Проведенный нами анализ показателей, характеризующих субпопуляционный состав лимфоцитов периферической крови у пациентов со злокачественными заболеваниями системы крови и описторхозной инвазией, сопровождающихся длительной эозинофилией крови, и у больных без эозинофилии, позволил констатировать факт изменения параметров, характеризующих способность лимфоцитарных клеток экспрессировать маркеры клеточной дифференцировки Так, у лиц с гемобластозами и

гельминтозом, обусловленном паразитированием Ofelmeus, вне зависимости от нозологии и наличия эозинофилии периферической крови отмечалось значительное уменьшение содержания CD3+-, CD4+- и С08+-клеток, а также снижение индекса иммунореактивности (CD4+/CD8+) по сравнению с соответствующими величинами у лиц контрольной группы В то же время у всех пациентов с лимфопролиферативными заболеваниями системы крови выявлялось достоверное снижение (по сравнению с нормой) абсолютного количества клеток, экспрессирующих фенотипические маркеры В-лимфоцитов (CD22+), тогда как у больных описторхозом вне зависимости от фазы течения клинического процесса и наличия эозинофилии крови отмечалась значительная активация гуморального звена иммунитета

Выявленный нами Т-клеточный дефицит при лимфопролиферативных заболеваниях, с одной стороны, по-видимому, обусловлен способностью опухолевых клеток индуцировать иммуносупрессию, а, с другой, - может быть следствием усиления миграционных процессов клеток в опухолевую ткань, поскольку известно, что неопластически трансформированные клеточные элементы являются мишенями иммунной атаки со стороны нормальных Т-лимфоцитов, составляющих основу клеточной популяции пораженных лимфатических узлов [Зеленова О В и соавт, 2002, Олейник ЕК и соавт, 2006, Хват Н С и соавт, 2006, Чубукина Ж В и соавт, 2006] Полученные нами данные подтверждаются результатами других исследователей, согласно которым лимфопролиферативные заболевания системы крови характеризуются угнетением Т-клеточного звена иммунитета [Serrano D et al 1997, AyoubJP et al, 1999, Воробьев АИ и соавт, 2000, Лорие ЮЮ, 2000, Смирнова О В и соавт, 2006]

В то же время иммунный ответ при паразитозах имеет специфические особенности, связанные с эволюционно сформировавшимися биологическими механизмами длительного сосуществования макроорганизма и паразитарного инфекта на условиях взаимоадаптации [Озерецковская Н Н, 2000, Falcone F et al, 2004] В современной литературе наиболее согласуются данные о значительной уязвимости при инвазии О fehneus Т-системы лимфоцитов, что проявляется изменением количественных характеристик этой популяции клеток и ее отдельных субпопуляций [Озерецковская Н Н , 2000, Кальгина Г А и соавт, 2002, Яковлева В В и соавт, 2003] В то же время активация гуморального звена иммунного ответа при заражении О fehneus, по мнению КР Fedorov et al [2002] и A Pauly et al [2003], отражает особенности взаимодействия макроорганизма с антигенами О fehneus, характеризующимися слабовыраженной иммуногенностью, что позволяет предположить компенсаторный характер индукции В-клеточной компоненты иммунной защиты при данном гельминтозе

Резюмируя вышесказанное, следует подчеркнуть, что детальное исследование субпопуляционного состава циркулирующих Т-лимфоцитов у больных лимфопролиферативными заболеваниями системы крови и у лиц с описторхозом с убедительностью доказало факт нарушения количественных

характеристик клеточного и гуморального звеньев иммунной системы, что, видимо, определяется особенностями течения основного заболевания

Значительную роль в установлении и стабилизации контактов между взаимодействующими клетками макроорганизма играет цитокин-рецепторная сеть [Фрейдлин И С , 1996, Беклемишев И.Д , 1998, Кашкин К Е, 1998, Ярилин А А, 1999, 2001, Ковальчук А В. и соавт, 2001, Кетлинский С А, 2002, Симбирцев А С, 2002, 2004] Именно посредством цитокиновых молекул осуществляются лиганд-рецепторные взаимодействия, обеспечивая трансдукцию сигнала внутрь клетки и индуцируя изменения ее внутриклеточного метаболизма [Кашкин КЕ, 1998, Ярилин А А, 1999, 2001, Romagnam S, 1999, Хаитов Р М и соавт, 2000, Кетлинский С А, 2002, Симбирцев А С , 2004, Pritchard DI et al, 2004]

Согласно современным представлениям, дисбаланс в системе цитокинов, регулирующих клеточные и гуморальные реакции иммунитета, определяет развитие многих заболеваний [Медуницын Н В , 1993, Озерецковская Н Н, 1997, Magnan A et al, 1997, Беклемишев ИД, 1998, Ешану ВС, 2004] По данным ряда авторов, поляризация иммунного ответа преимущественно в сторону Th-2 пути может обусловливать формирование эозинофилии при патологических процессах разного генеза [Newcom S R et al, 1992; Медуницын НВ, 1993, Бережная НМ, 2000, Бережная Н.М и соавт, 2005] Данное положение связано с тем, что на сегодняшний день четко определен спектр ключевых цитокинов (IL-3, IL-5, IL-4, IL-8, GM-CSF, МСР, эотаксин, PAF и др), продуцируемых преимущественно Th-2-лимфоцитами и принимающих участие в регуляции процессов пролиферации, дифференцировки, апоптоза, дегрануляции, осуществлении механизмов цитотоксичности и хемотаксиса лейкоцитов эозинофильного ряда [Rojas RE, Martinez JE, 1999, Бережная H М , 2000, Минеев В Н и соавт, 2000, Намазова Л С и соавт, 2000, Nagase Н et al, 2001, Воробьев АИ, 2002, Zangrilh D., 2002, Бережная НМ и соавт, 2005] (рис 5)

В связи с этим в поле зрения нашего исследования оказались механизмы нарушения цитокинопосредованной кооперации эозинофилов и мононуклеарных клеток при лимфопролиферативных заболеваниях системы крови и описторхозной инвазии, сопровождающихся формированием эозинофильной реакции крови

Как показало проведенное нами с помощью иммуноферментного анализа исследование способности мононуклеарных лейкоцитов периферической крови продуцировать эозинофилспецифичные цитокины, у лиц с лимфопролиферативными гематологическими заболеваниями и у больных с описторхозом, ассоциированных с явлением эозинофилии, отмечалось значимое увеличение уровней базальной и ФГА-индуцибельной секреции IL-5 и GM-CSF, а также конституциональной продукции IL-3 по сравнению с аналогичными значениями у здоровых индивидов и у пациентов без эозинофилии, включенных в группы сравнения (с гемобластозами и хроническим описторхозом) (рис 6) У лиц с хроническим описторхозом (реинвазия, суперинвазия), сопряженным с развитием эозинофильной реакции

крови, способность мононуклсаров крови се котировать IL-3 не отличалась от таковой r норме (рис. 6).

RANTES

Pl/C .5. ЦитокуюпосреОованная коопераций иммумОКОШфП&Нйщых клеток (ИКК) и эозипбфш 1Ы1ыХ гринулоцитф [по данным И.Д Кеклемшиева, ¡998; А.И, Воробьева. 2002; НМ. Бережной и спает., 2005]

При исследовании содержания IL-4 п су пери агатах культур мононуклеарных лейкоцитов у больных со злокачественными заболеваниями системы крови вне зависимости от нозологии и наличия эозинофилии крови отмечалось выраженное угнетение спонтанной (в среднем на 34%, р 0,021, р—0,017, р=0,023, р-0,0311 и ФГЛ-стимулированной продукции (в среднем на 42%, р=0,02В, р=0,041, р-0,001, р=0,001) данного цитокипа, по сравнению с аналогичными параметрами у здоровых доноров (рис. 6в).

V пеех обследованных пациентов с описторхозом независимо от наличия эозинофилии кропи и стадии клинического процесса, напротив, отмечалось повышение (по сравнению с нормой) уровней конституциональной и А-пндуцированной продукции мононуклеарными клетками 1L-4 по сравнению с аналогичными параметрами в контроле (рис. 6а).

Анализируя возможные причины повышенной секреции изученных цитокштов мононуклеарами крови на фоне выявленного количественного дефекта Т-звена иммунитета при злокачественных заболеваниях системы крови, следует отметить, что данное обстоятельство может быть обусловлено как прямым, гак и опосредованным стимулирующим влиянием опухолевых клеток на субпопуляции CD4'-клеток [Трапезников H.H. и соавт., 1996; Хорошко Н.Д. и соапт., 1998; Морозова В,Т. и соавт., 2000; Волкова М.А., 2001[. Последние, сскрстируя медиаторы (IL-4, 11,-3, IL-5 и др.), модулирующие процессы клеточного гомеостаза эозинЬфилов, опосредуют чем самым развитие эозинофильной реакции в крови и в большинстве случаев инфильтрацию эозинофидами опухоленой ткани [Трапезников H.H. и соавт., 1996; Лорие Ю.Ю., 2000; Зеленова О.В. и соавт., 2002; l-'oss 1 I.D., 2000]. Снижение уровня

Баэальная Ф1 А-стимулиронанная Индекс стимуляции

400 ■

300 т - -2S0 гоо

150 100 50 б) 0

ФГА-сл"имулированнан Индекс стимуляции

200 -Г) о

Ьаэальная ФГА-стимулированная Индекс стимуляции

□ Здоровые доноры

□ Пациенты с гемобластозами без эоэинофигии III Пациенты с лимфогранулематозом

а Пациенты с множественной миеломой

Ш Пациенты с неходжкинскими лимфомами

{3 Пациенты с хроническим описторхозом без зоэинофипчи

И Пациенты с острым описторхозом

£3 Пациенты с хроническим описторхозом

Ьаэальная

Индекс стимуляции

База ль на я

ФГ А-с т имули рояа н н ая

1'ис 6. Продукция IL-5 (a), IL-3 (6). IL-4 (в) и GM-CSF (г) мононуклеарными лейкоцитами периферический крови у пациентов с лимфопролиферативными заболеваниями системы крови и описторхозом, сопровождающимися эозцнофилией

продукции IL-4 - ключевого медиатора Th-2 иммунного ответа при гемобластозах на наш взгляд следует рассматривать с позиции опухолевого процесса, поскольку известно, что IL-4 является мощным ингибитором роста опухолевых клеток как in vivo, так и in vitro В связи с этим дисбаланс продукции рассматриваемого цитокина при неопластических заболеваниях может быть связан с его повышенным потреблением в условиях злокачественной патологии и явиться одним из основных звеньев, способствующих снижению противоопухолевой защиты организма, и, как следствие, - неизбежной прогрессии заболевания [Хаитов Р М , 2001, Бережная НМ и соавт, 2005]

В свою очередь в литературе имеются сведения, согласно которым при тканевых паразитозах, ассоциированных с высокой эозинофилией крови, пусковыми механизмами стимуляции активности ТЬ2-лимфоцитов являются растворимые метаболиты и компоненты кутикулы/тегумента инвазионных личинок паразитов - инициаторов иммунного ответа хозяина [Кашкин К Е, 1998, Озерецковская НН, 2000] Так, обнаруженное нами увеличение секреции IL-4, IL-5 и IL-3 мононуклеарами крови при описторхозе, возможно, обусловлено способностью попадающих в кровоток эпитопов антигенов гельминтов (О felineus) определенным образом индуцировать продукцию данных медиаторов активированными CD4+-лимфоцитами [Беклемишев Н Д, 1998, Озерецковская НН, 2000, Falcone FН et al, 2004, Ольховский ИА, Шакина Н А , 2005]

Обращало на себя внимание снижение значений индекса стимуляции продукции вышеуказанных цитокинов (IL-3, IL-5 и GM-CSF) у всех обследованных больных с эозинофилией крови (более чем в 2 раза) по сравнению с его уровнем у здоровых доноров, не отличаясь от аналогичных показателей в группе пациентов без эозинофилии Данное обстоятельство, по-видимому, свидетельствует о снижении резервной способности Th-2-лимфоцитов продуцировать эозинофилстимулирующие цитокины [Dirks W et al, 1997, Jundt F et al, 1999, Abrahamsen A F , 2000] (рис 6)

Развитие высокой эозинофилии при рассматриваемых нами патологиях, сопряженных с развитием эозинофилии крови, может быть опосредовано и действием эотаксина - хемокина, специфично действующего в отношении лейкоцитов эозинофильного ряда [Griffiths-Johnson DA et al, 1993, Resnick M В , Weller Р F , 1993, Gonzalo J et al, 1996, Humbles A A et al, 1997, Kay AB et al, 1997, Тотолян А А, 2001] Основными продуцентами данного медиатора являются эпителиальные клетки и сами эозинофильные гранулоциты [Rothenberg М Е et al, 1995, Bartels J et al, 1996, Li D et al, 1997, Lilly С M et al, 1997, Zangrtlh J G, 2002] В ходе настоящего исследования было зарегистрировано значительное повышение уровня эотаксина в сыворотке крови у больных с лимфогранулематозом, ассоциированном с эозинофилией крови (до 115,0 (63,82-140,5) пг/мл, р=0,045, при норме 58,95 (50,11-66,95) пг/мл) (рис 7) У лиц с множественной миеломой и неходжкинскими лимфомами значения данного показателя не отличались от контроля (р=0,069 и р=0,065) и аналогичных параметров у пациентов без эозинофилии (р=0,063 и

р=0,070) (рис. 7). В то же время оценка концентрации сывороточного уровня эотаксипа у лиц, страдающих острым и хроническим описторхозом, сопряженных с формированием эозинофшши крови, так и без таковой показала, что данный параметр превосходил (в среднем на 26%) соответствующие значения контроля (р=0,021, р=0,003 и р~0,045) у всех обследованных пациентов с огшеторхозной инвазией (рис. 7).

□ Здоровые доноры

□ Пациенты с гемобластозами без

эозинофилии И Пациенты с

лимфо/ранулем атоз о м ва Пациенты с множественной

мнедамай а Пациенты с неходжкинскими

лимфомами| ЕЭ Пациенты с хроническим

описторхозом без эоэинофилии ЕЭ Пациенты с острым

описторхозом ЕЗ Пациенты с хроническим описторхозом

Рис, 7. Концентрация зотвкецна в сыворотке крови ) пациентов с яимфопролиферативными заболеваниями системы крови и описторхозом, сопровождаю щимися -юзин оф ил чей

Таким образом, в результате проведенного нами исследования у пациентов со зло качественными заболеваниями системы крови и у больных описторхозом, сопровождавшимися формированием эозинофильной реакции крови, выя влей существенный дисбаланс секреции ключевых медиаторов, принимающих участие в регуляции механизмов клеточного гомсостаза зозинофильных граиулоцигов. Это создает условия для усиления напряженности как процессов дифференцировки гемических эозшюфилов в тканевые элементы, обеспечивая их повышенную миграцию в очаг воспаления, так и обратной рециркуляции зозинофильных клеток в кровяное русло. Для изучения взаимосвязей между способностью мононуклеарлых клеток продуцировать цитокииы (1Ь-3, И.-5, !Ь-4, ОМ-СБР) и концентрацией эотаксина в сыворотке крови с выраженностью эозинофильной реакции крови, а также с целыо определения роли отдельных медиаторов в формирование эозинофилии крови при вышеуказанных нозологиях, нами был проведен корреляционный и, в последующем пошаговый ресрессионный анализы. В ходе установления зависимости между исследуемыми параметрами было показано, что развитие эозинофильной реакции, осложняющей течение рассматриваемых нами нозологии, был« обусловлено повышенной продукцией мононуклеарами медиаторов 11.-5 и 1Ь-3, что подтверждается наличием положительных корреляционных связей между

изученными показателями у больных лимфогранулематозом, множественной миеломой и острым описторхозом (г=0,620, р<0,05 и r=0,520, р<0,05, г==0,735, р<0,05 и г=0,531, р<0,05, г=0,779, р<0,05 и г=0,560, р<0,05, соответственно) Небезынтересно, что у лиц, страдающих лимфомой Ходжкина и у пациентов с острым гельминтозом, обусловленном инвазией О fehneus, нами также было обнаружено наличие позитивных связей между концентрацией эотаксина и относительным содержанием эозинофилов в периферической крови (г=0,502, р<0,05 и г=0,790, р<0,05), что свидетельствует о значительной роли данного хемокина в механизмах реализации феномена эозинофилии при этих заболеваниях В свою очередь с помощью регрессионного анализа было показано, что из выявленных значимых параметров (IL-3, IL-5 и эотаксин) наибольший вклад в формирование эозинофильной реакции крови при лимфогранулематозе и остром описторхозе вносит IL-5 (соответственно, Р=1,07, р=0Д5 и р=1,15, р=0,18)

В настоящее время становится очевидным, что изучение механизмов межклеточной кооперации заключается, с одной стороны, в оценке продукции медиаторов, опосредующих кооперативное взаимодействие клеток, а, с другой, - обязательным этапом подобных исследований является анализ клеточных рецепторных структур

Общеизвестно, что эозинофилы на своей мембране несут разнообразные антигенные структуры [Capron M et al, 1984, Wardlaw A J , 1993, Valent P , 1994, Seminario MC, Bochner BS, 1997, Matsumoto K. et al, 1998, Джальчинова В Б, Чистяков Г M, 1999, Tachimoto H , Bochner В S , 2000, Воробьев A И, 2002] (рис 8) Ключевую роль в реализации механизмов межклеточной кооперации эозинофильных гранулоцитов и иммунекомпетентных клеток играют рецепторы к цитокинам Показано, что эозинофилы презентируют рецепторы (R) к IL-3, IL-4, IL-5, IL-10, эотаксину (CCR3), GM-CSF и др [Mawhorter S D et al, 1996, Dvorak A M , Weller P F , 2000, Воробьев A И , 2001, Минеев В H и соавт, 2001, Бережная H M и соавт, 2005] Стимуляция эозинофильных лейкоцитов антигенными детерминантами приводит к синтезу определенного набора медиаторных молекул, экспрессии соответствующих цитокиновых рецепторов и активации опосредуемых ими функций [Newcom SR et al, 1992, Serrano D et al, 1997, Беклемишев ИД, 1998, Bochner В S , 2000, Nagase H et al, 2001, Steinke J W 2002]

Проведенное нами исследование методом лазерной проточной цитофлуориметрии презентации рецепторов к IL-5, IL-3 и CCR3 в интактной культуре эозинофилов in vitro, полученных у больных гемобластозами (лимфогранулематоз, множественная миелома и неходжкинские лимфомы) и описторхозом (острый и хронический), ассоциированных с эозинофилией, позволило констатировать достоверное увеличение абсолютного и относительного количества IL-5R-, IL-3R- и ССЯЗ-позитивных клеток у всех обследованных пациентов по сравнению с аналогичными параметрами у здоровых доноров (рис 9, 10) При хроническом гельминтозе, обусловленном О felineus (реинвазия, суперинвазия), и при неходжкинских лимфомах число

зозинофилов, эксирессирующих ССЯЗ, варьировало в пределах нормальных значений (р=0,637 и р 0,057) (рис. НУ).

Антигенные струкчуры,

, tBOHCTweiilIblC ,

ч ^ : (! ;i HV.'l0 (sn npяому ростку '

V (шз CDM

Молекулы

у. > 1:^ ;

]JLÏT[enTOf)Ll для

ЦИ Ч OKHIJOD

COÏIb

t:U37

" РоцеЯ1*$(Йа Ш1Я

■ .:v:■ i■... ]l,,11,;

PfjjerijLip лдя при^аиюлшшов j \

Рецензордня Г Frit,. FtR,. \

KOpTltFif>L"TCp4Lt I

I rVLU: д n j Uk'M yl IC'"Kniy.tl{Ji

f^IKny'jpbi Д|(Я

a Kli:'HL>, ■'.<:!' ■ icjfiod

1'цс 8. Рецепторнът аппарат эозинвфильиых гранулоцитав [по данным А.И Воробьева,

2002: Н.М Бережной к ссавт. 20051

Установленное в результате настоящего исследования увеличение фракции эозцвоф ильных клеток, нрезентирующих ^-ЗК и ССЙЗ, у пациентов с

гемобласто-зами и описторхозной инвазией, сопровождавшимися эозиийфилией, может быть опосредовано влиянием одноименных медиаторов, секретируемых в избыточных концентрациях м он он у к л е ар н ы м и лейкоцитами периферической крови. Этот тезис ¡подтверждается положительной корреляционной зависимостью между уровнями базяльной продукции мешонуклеарами крови 1Ь-3, 11.-5 и эотаксинй в сыворотке крови с количеством ¡Ь-ЗЯ-, 11.-5Я- и ССЯЗ-дозитивных клеток у больных лимфогранулематозом и осгрым ОПЩгорхозом, что свидетельствует о тесной взаимосвязи изученных показателей (соответственно т^ 0,560, р<0,05; г-0.511. р<0,05 и г-0,651, р<0,05 -для пациентов с лимфогранулематозом и г^0,64, Р'::-0,05; г=0,43, р<0,05 и гЧ),541, р<0,05 - у больных с острым гельминтозом, обусловленном инвазией ОЛЫшеия).

Как упоминалось ранее, способность нрезентировать мсмбранноаесоциировапные цитокииовые рецепторы клеткой усиливается после её активации одноименными медиаторными молекулами или антигенными детерминантами, что может отражать состояние функционального потенциала клетки в отношении экспрессии тех или иных

рецепторных структур [Ройт А , 2000, Фрейддин И С , 2001, Симбирцев А С , 2002, 2004] В связи с этим для уточнения представлений о резервных возможностях эозинофильных гранулоцитов в отношении презентации цитокиновых рецепторов в процессе нашего исследования мы проводили инкубацию эозинофильных клеток с рекомбинантными формами эозинофилспецифичных цитокинов (r-IL-3, r-IL-5, r-eotaxin) in vitro

Рис 9 Гистограммы, отражающие количество эозинофилов (%) периферической крови у здорового донора (а), у больного лимфогранулематозом (б), у пациента с острым описторхозом (в), несущих рецепторы к цитокинам (IL-3, IL-5, эотаксину) в интактных культурах (по данным проточно-цитометрического анализа)

При добавлении в культуру эозинофилов, полученных у пациентов с лимфопролиферативными заболеваниями системы крови и описторхозом, ассоциированными с эозинофилией, r-IL-5, r-IL-З и r-eotaxin у всех обследованных лиц вне зависимости от особенностей течения основного заболевания мы обнаружили с высокой степенью достоверности (по сравнению с нормой) повышение относительного и абсолютного содержания IL-5R- и ССЯЗ-несущих эозинофилов и абсолютного числа клеток эозинофильного ряда, экспрессирующих IL-3R (рис 10) При этом относительное число эозинофилов,

презентируници* ССКЗ, прп хроническом описторхозе п неходжски неких лимфомах, хотя и было несколько повышенным. но достоверной разницы средних значений данного показателя у этих больных и здоровых лиц зафкксЩШШто ас было (р=(>,089 и р=0.245) (рис. 10).

1800

1иая 11 Иилеке стимуляции

С " III 4' С : И Н .111 И&Л Г-Н - Л И) '.'1С с I V [ И111' 1 *

1600 "МОо 1200 1000 800 еоо

400 200 Щ й

еоо 500 ¿100 зоо 200 1 ОО

I >.:ыск Стн мул пропан пая г- Пиле КС стимуляции

СОШтоп

О Здоровые доноры 1Ш Пациенты с пимфогр£1иулема*оэом О Пациенты с множественной миеломой В Пяциенты с иоходжкйнскими лисис|Х1Мами СЧ [Пациенты с острым описторхозом И Пациенты с хроническим описторхозом

Рис. /О. Содержание //.-5А' (а), 16) и ('СИЗ-потппитых клеток 1в) в кулыпуре

эозинофтов. полученных у пщшмтоя с псифощю.тфератнными заболеваниями системы крови и о'шмыг геяьминпюшн. вызванном О./еНпеих, сопровождающихся шшиофилией

Рассчитанные нами индексы стимуляции презентации IL-5R и IL-3R у больных лимфопролиферативными заболеваниями системы крови и описторхозом, ассоциированными с эозинофилией, оказались достоверно ниже (в среднем - в 1,8 раз) аналогичных показателей в норме (рис 10) Данное обстоятельство может свидетельствовать о снижении резервной способности эозинофильных гранулоцитов экспрессировать рецепторы к IL-5 и IL-3

По-видимому, при изученных нами нозологиях, осложненных развитием эозинофилии крови, клетки эозинофильного ряда с изначально высокой способностью презентировать рецепторы к эозинофилспецифичным цитокинам в условиях дополнительной стимуляции не способны адекватно воспринимать активационные цитокиновые сигналы, что может быть также обусловлено функциональной резистентностью к действию вышеуказанных цитокинов Индекс стимуляции экспрессии CCR3 у всех пациентов с эозинофилией крови не зависимо от нозологии соответствовал контрольным значениям (рис. 10) Лишь у лиц, страдающих хроническим описторхозом (реинвазия, суперинвазия), данный показатель в 2 раза превышал аналогичные параметры у здоровых доноров (р=0,021) (рис 10)

Нарушение баланса рецепторного аппарата эозинофильных гранулоцитов может являться еще одним механизмом, лежащим в основе длительного пребывания эозинофильных гранулоцитов в периферической крови при гемобластозах и описторхозе У пациентов с лимфогранулематозом и острым описторхозом это предположение подтвердилось фактом наличия позитивной корреляции между относительным количеством клеток, презентирующих рецепторы к IL-5 и эотаксину, и процентным содержанием эозинофильных гранулоцитов в крови (соответственно г=0,863 и г=0,641, р<0,05 - при злокачественной лимфоме, г=0,780 и г=0,921, р<0,05 - при остром описторхозе)

Проблема формирования гемической и тканевой эозинофилий при патологических процессах разного генеза на сегодняшний день рассматривается сквозь призму особенностей программированной клеточной гибели [Druilhe А, 1996, Dewson et al, 1998, SaitaN et al, 2001, Воробьев А И , 2002; Munitz A etal,2006]

При изучении показателей, характеризующих степень выраженности апоптоза эозинофилов, полученных у пациентов с лимфопролиферативными заболеваниями системы крови и больных с острым гельминтозом, вызванном О fehneus с помощью метода проточной лазерной цитометрии с использованием FITC-меченного аннексина V [Van England A et al, 1998, Eeden SF et al, 1999], нами было зарегистрировано значительное обеднение фракции эозинофильных гранулоцитов, подвергшихся спонтанному апоптозу, по сравнению с аналогичными показателями у здоровых лиц (до 4,61±0,86% (р=0,015) - у больных лимфогранулематозом, 3,35±0,07% (р=0,034) - у лиц с множественной миеломой, 4,34±0,67% (р=0,020) - у пациентов с неходжкинскими лимфомами, 7,21±0,92% (р=0,025) - у лиц с острым описторхозом при норме 14,94±1,09%) (рис 11) При хроническом течении описторхоза (реинвазия, суперинвазия), ассоциированного с развитием

эозинофильной реакции крови, содержание аннексин-положительных клеток в интактной культуре снижалось относительно нормальных значений, не достигая, однако, статистически значимого уровня (р=0,054)

В современной литературе ингибирование программированной гибели эозинофилов цитокинами рассматривается как важный механизм, опосредующий развитие эозинофшгаи крови при различных заболеваниях [Минеев В H и соавт, 2000; David J H. et al, 2001, Иванчук И И и соавт, 2003, 2004, Бережная H M, 2005; Mumtz A et al, 2006] При проведении корреляционного анализа между уровнем спонтанной гибели эозинофилов и продукцией мононуклеарными клетками крови эозинофилспецифичных цитокинов (IL-5, IL-3 и эотаксина) у обследованных больных с эозинофилией нами были выявлены отрицательные функциональные связи между изученными показателями, в частности, при лимфогранулематозе и остром описторхозе, свидетельствующие о причастности к угнетению апоптотической гибели эозинофилов IL-5, IL-3 и эотаксина (соответственно -г=0,701, р<0,05, -г=0,324, р<0,05 и -г=0,438, р<0,05 - при лимфогранулематозе, -г=0,562, р<0,05, -г=0,521, р<0,05 и —г=0,456, р<0,05 — при остром описторхозе) при данных патологиях

В ходе реализации настоящей работы для определения роли отдельных цитокинов (IL-3, IL-5 и эотаксин) в модуляции апоптоза эозинофильных клеток при заболеваниях, ассоциированных с эозинофилией крови (лимфопролиферативные заболевания системы крови и гельминтоз, вызванный О fehneus), нами был проведен экспериментальный блок исследования m vitro

Установлено, что сигналами к реализации или ингибиции апоптоза могут быть изменения концентрации ряда регулирующих этот процесс цитокинов как в норме, так и при патологических процессах [Brüggen Т et al, 1995, Kmoshita Т et al, 1995, Казначеев К С, 1999] Согласно данным современной литературы, в отношении лейкоцитов эозинофильного ряда такой способностью обладают IL-5, IL-3, эотаксин и др, увеличивая их выживаемость in vitro, блокируя реализацию танатогенной программы [Pazdrak К et al, 1998, Akdis M et al, 2001, Zangrilli JG, 2002, Иванчук И И и соавт, 2003, 2004, Бережная H M, 2005] В частности, исследование, проведенное с использованием метода проточной цитометрии, в условиях инкубации m vitro эозинофилов, полученных у здоровых доноров, в присутствии рекомбинантных форм цитокинов - r-IL-5 и r-eotaxm, позволило выявить выраженное снижение (в среднем на 50% и 43%) уровня апоптотической гибели эозинофильных клеток по сравнению с аналогичными показателями в интактной культуре (р<0,05 во всех случаях) (рис 11) При добавлении in vitro r-IL-3 содержание вступивших в апоптоз эозинофилов, полученных у здоровых лиц, не изменялось по сравнению с его интактным уровнем (р>0,05) Это, по-видимому, может быть опосредовано меньшей чувствительностью зрелых эозинофильных клеток к антиапоптозному воздействию IL-3, поскольку известно, что экспрессия рецепторов к изучаемому цитокину (IL-3) снижается по мере созревания клеток эозинофильного ряда [Минеев В H и соавт, 2000, Nagase H et al, 2001, Воробьев A И, 2002] (рис 11)

Рис. í 1 Гистогрйммы пропючно-г^пюметрическор.о анализа, отражающие количество апоитотических нозинофилов периферической крови, полученных у здорового донора О), пациента с острым описторхоюм (II), больного лимфогранулематозом (Ш). культивированных в полной питательной среде (а), при лишении ростовых факторов (бессывороточная среда) (б). при добавлении r-IL-5 (в), при добавлении г-Н.-З(г); при добавлении r-eotaxin (д)

В свою очередь инкубирование зшинафилов крови, полученных у больных лимфопролиферативиыми заболеваниями системы крови, ассоциированных с высокой эозинофилией, с ML-5 и r-eotaxin, продемонстрировало отсутствие статистически значимой разницы с выраженностью спонтанного атютоза изученных клеток (р>0,05 по всех случаях) (рис, 11). Инкубация зозинофильных гранулонитов, выделенных у лиц с множественной миеломой И неходжки некими лимфомами, в полной культуральной среде с добавлением r-lL-З приводила к значительному обогащению эозинофильной популяции (в среднем на 50%) апоптотическимн клетками по сравнению с ишдаинм у pon нем их гибели (р<0,05 во всех случаях). У больных лимфогранулематозом данный показатель не отличался от значений спонтанного апоптоза (р>0Д>5) (рис. )!).

Интерпретация факта отсутствия чувствительности зозинофильпых клеток к антиапот отческому действию IL-5, IL-3 и эотаксина при гемобластозах, ассоциированных с эозинафилиен крови, представляется весьма затруднительной. Выявленные изменения, по-видимому, можно объяснить функциональной неполноценностью зозинофильных клеток, обусловленной как

укорочением клеточного цикла на ранних этапах их созревания, так и увеличением митотического индекса [Brüggen Т et al, 1995, Воробьев А И, 2002, Zangrilh J G , 2002], и, как следствие, - появлением в кровотоке генерации юных лейкоцитов эозинофильного ряда с неадекватной реакцией на антиапоптотические стимулы и, соответственно, нарушением реализации их программированной гибели при рассматриваемых патологических процессах Кроме того, вероятный механизм данного явления может быть опосредован изменением рецепции передаваемого сигнала на мембране эозинофилов при злокачественной патологии системы крови Однако это умозаключение носит сугубо гипотетический характер, не подкреплено фактическими данными и требует дополнительного специального исследования

Исследование апоптогенной реакции лейкоцитов эозинофильного ряда, выделенных из периферической крови у лиц, страдающих острым и хроническим описторхозом, в условиях их инкубации in vitro с r-IL-5, r-IL-5 и r-eotaxin, напротив, позволило выявить статистически значимое снижение количества клеток, экспрессирующих фосфатидилсерин на своей поверхности, по сравнению с соответствующими значениями спонтанного апоптоза (р<0,05 во всех случаях) (рис 11) Возможно, что одним из механизмов выявленного нами изменения программированной гибели эозинофилов на действие антиапоптотических медиаторов при гельминтозе, инициированном О fehneus, может быть усиление способности эозинофилов презентировать рецепторные структуры к изученным цитокинам на своей мембране Это предположение было подкреплено установленным фактом негативной корелляции между относительным содержанием эозинофилов, несущих рецепторы к IL-5, и уровнем их спонтанной гибели при остром описторхозе (-г=0,510, р<0,05) В то же время следует отметить, что повышенная чувствительность эозинофильных клеток к действию r-IL-5, r-IL-З и эотаксину при описторхозе, может свидетельствовать о существенном напряжении процессов зозинофилопоэза в костном мозге и усилении функциональной активности эозинофилов в условиях антигенной стимуляции, требующей значительной поддержки со стороны ростовых факторов выживания при данном гельминтозе [Степанова Т Ф, 2006]

Общеизвестно, что процессы пролиферации, дифференцировки и элиминации клеток макроорганизма находятся в состоянии равновесия за счет баланса про- и антиапоптотических факторов [Бахов НИ и соавт, 1997, Ярилин А А , 1997, Белушкина Н Н и соавт, 1998, Ярилин А А и соавт, 2000, Барышников А Ю , Шишкин А В , 2002, Потапнев М П , 2002] Дефицит факторов роста воспринимается клеткой как сигнал к апоптозу происходят дефосфорилирование Bad, его внедрение в наружную мембрану митохондрий, выход цитохрома с и последующая активация каспазы-9 [Kluck R М et al, 1997, Ярилин А А, 1998] Согласно полученным нами данным, культивирование эозинофильных клеток т vitro в бессывороточной питательной среде, лишенной ростовых факторов, индуцировало гибель более 25% эозинофилов у здоровых доноров и от 42 до 53% - у пациентов с гемобластозами и описторхозом, ассоциированных с развитием эозинофилии (рис 11)

Обнаруженное нами увеличение процента эозинофильных клеток, вступивших в апоптоз при лишении их ростовых факторов, может свидетельствовать о повышенной чувствительности эозинофилов к проапоптотическим стимулам, что является косвенным отражением значительного напряжения функциональной активности эозинофилов и, возможно, указывает на факт истощения резервных возможностей этих клеток

Результаты настоящего исследования с убедительностью продемонстрировали ведущую роль нарушений межклеточной кооперации эозинофилов и иммуннокомпетентных клеток в механизмах формирования феномена эозинофилии крови при лимфопролиферативных заболеваниях системы крови и гельминтозе, инициированном О fehneus (рис 12) Установлено, что гиперэозинофилия, осложняющая течение рассматриваемых нами нозологий, сопровождается увеличением продукции ключевых цитокинов, регулирующих процессы клеточного гомеостаза эозинофильных гранулоцитов (IL-5, IL-3 и GM-CSF), мононуклеарами крови и уровня эотаксина в периферической крови на фоне количественного дефицита Т-клеточного звена иммунной системы В то же время показано, что у больных гемобластозами и описторхозом, ассоциированных с эозинофилией, фиксируется повышенное количество эозинофильных клеток, несущих рецепторы к IL-3, IL-5 и эотаксину, опосредованное повышенным уровнем секреции эозинофистимулирующих медиаторов мононуклеарными клетками При дополнительном воздействии на эозинофильные клетки, полученных у пациентов с лимфопролиферативными заболеваниями системы крови и описторхозом, сопровождавшимися эозинофилией, tn vitro рекомбинантных форм IL-3, IL-5 и эотаксина, установлено снижение функционального потенциала эозинофильных гранулоцитов в отношении экспрессии IL-3R и IL-5R при неизменной способности эозинофилов презентировать рецептор к эотаксину Следует отметить, что обнаруженное нами угнетение танатогенной программы эозинофилов периферической крови вносит значительный вклад в механизмы развития феномена эозинофилии при рассматриваемых нозологиях Результатами проведенного эксперимента in vitro была продемонстрирована повышенная чувствительность эозинофильных клеток, полученных у пациентов с описторхозом, к антиапоптозному действию IL-3, IL-5 и эотаксина На основании этого можно сделать вывод о том, что усиление секреции этих цитокинов мононуклеарами крови (IL-3, IL-5, эотаксин) у лиц с инвазией О fehneus также вносит вклад в персистирование эозинофильной реакции за счет подавления реализации танатогенной программы эозинофилов При лимфопролиферативных заболеваниях системы крови, несмотря на наличие функциональных отрицательных связей между уровнем секреции указанных медиаторов мононуклеарными клетками и количеством клеток в апоптозе, данные экспериментального блока исследования in vitro доказывают, что на фоне низких значений базального апоптоза эозинофильных клеток дополнительное воздействие на них рекомбинантных форм цитокинов не оказывает влияния на их апоптотическую реакцию, что может свидетельствовать о неадекватности восприятия изучаемыми клетками про- и

1 Патологические процессы.»ассоциированные с большой эозинофилией крови |

Лимфопролиферативные заболевания системы крови Гельминтоз, обусловленный О.ГеЬпеиз ||

Активация гуморального звена иммунного ответа

Депрессия Т-клеточнога звена иммунной системы

Стимуляция эозинофилопоэза в костном мозге

Увеличение продукции моионуклеарными лейкоцитами крови эозинофилспецифичных цитокииов (1Ь-3,1Ь-4,1Ь-5, ОМ-СЭР)

Рециркуляция эозинофилов из тканей в кровоток

Увеличение количества эозинофилов, несущих ИЛИ, |Ь-.51^СС113 и др.

Угнетение апоптоза эозинофилов

Увеличение митотического индекса, укорочение клеточного цикла эозиносЬилов

ГиперэозииЬфильная реакция крови

Измененнсморфо-функциональных характеристик эозинофилов

Увеличение фракции гиподенсных эозинофилов

Повышено^ способности к дсграиуляциии цитолизу

Интенсификация процессов тикробнишносги

Эффективный цитолиз антигенных детерминант различной природы (опухолевые клетки, паразитарные инфекты и

яр)

Формирование высокого цитотоксического потенциала

Повреждение тканей

макроорганизма (эндотелий сосудов, нервные волокна и др )

Рис 12 Роль нарушений кооперации эозинофилов и иммуноцитов в патогенезе «больших эозинофилий крови» (по данным ИД Беклемишева, 1998, Н Nagase е1а1, 2001, А И Воробьева, 2002, М Ьатртеп е? а!, 2004, Бережной Н М и соавт, 2005 и результатам собственных

исследований (выделено))

антиапоптогенных сигналов при злокачественной патологии системы крови Кроме этого, у всех обследованных пациентов с заболеваниями, ассоциированными с развитием гиперэозинофильной реакции крови (гемобластозы и описторхоз), было выявлено значительное напряжение процессов, обеспечивающих реализацию кислороднезависимых и кислородзависимых механизмов цитотоксичности, и изменение морфофункционального статуса эозинофилов (увеличение размеров клеток, усиление образования ими псевдо- и лобоподий, изменение соотношения компонентов ядерного материала), что в целом ведет к усилению микробицидности эозинофильных гранулоцитов и обусловливает формирование их высокого цитотоксического потенциала (рис 12)

Таким образом, избыточная продукция цитокинов, являющихся ключевыми в регуляции процессов клеточного гомеостаза эозинофилов, мононуклеарными лейкоцитами, с одной стороны, дисбаланс экспрессии рецепторного аппарата эозинофильных гранулоцитов и угнетение их апоптотической гибели, - с другой, на наш взгляд, могут обусловливать нарушение кооперации изученных клеток и являться одними из механизмов, лежащих в основе формирования больших эозинофилий крови при рассматриваемых нами заболеваниях (лимфопролиферативные заболевания системы крови и гельминтоз, вызванный инвазией О ГеИпеив) (рис 12)

Безусловно, в нашем исследовании мы смогли осветить лишь некоторые вопросы, касающиеся механизмов развития гиперэозинофильной реакции крови Между тем, оценка молекулярных и клеточных механизмов нарушения межклеточной кооперации эозинофилов и иммуноцитов при формировании больших эозинофилий крови требует более углубленного и всестороннего изучения

ВЫВОДЫ

1 При больших эозинофилиях крови лейкоциты эозинофильного ряда претерпевают выраженные изменения морфологических и функциональных свойств

2 Гиперэозинофилия, осложняющая течение лимфопролиферативных заболеваний системы крови и описторхоза, сопровождается нарушением баланса морфометрических показателей ядерных и стромальных структур эозинофильных клеток (увеличение площадей ядра и цитоплазмы эозинофилов, рост числа инвагинаций и снижение циркулярное™ цитоплазмы, изменение соотношения эу- и гетерохроматиновых зон в ядрах эозинофилов), а также их повышенной способностью к дегрануляции и цитолизу по сравнению с нормой.

3 Интенсификация кислороднезависимых и кислородзависимых механизмов микробицидности эозинофилов при гиперэозинофилии крови у пациентов с лимфопролиферативными заболеваниями системы крови и описторхозом приводит к формированию их высокого цитотоксического потенциала

4. Механизмы развития большой эозинофилии крови при лимфопролиферативных заболеваниях системы крови и описторхозной инвазии сопряжены с дисбалансом кооперативного взаимодействия эозинофилов и мононуклеарных лейкоцитов, опосредованного медиаторами, регулирующими процессы клеточного гомеостаза эозинофильных гранулоцитов

5 Механизмы нарушения межклеточной кооперации эозинофилов и мононуклеарных клеток при гиперэозинофилии крови у больных лимфопролиферативными гематологическими заболеваниями и описторхозом связаны с повышенным уровнем секреции мононуклеарами IL-3, IL-5 и GM-CSF и увеличением концентрации эотаксина в сыворотке крови при возрастании числа эозинофилов, несущих рецепторы к IL-3, IL-5 и эотаксину, в условиях дефицита Т-клеточного звена иммунной системы

6 Резервный потенциал эозинофилов в отношении экспрессии IL-3R и IL-SR при лимфопролиферативных заболеваниях системы крови и описторхозе, ассоциированных с формированием гиперэозинофилии, снижен, резервная способность эозинофилов презентировать рецептор к эотаксину не нарушена

7 Патогенез гиперэозинофилии крови, осложняющей течение лимфопролиферативных заболеваний системы крови и опистохоза, сопряжен с угнетением программированной гибели эозинофилов, опосредованной эозинофилспецифичными медиаторами (IL-3, IL-5, эотаксин)

8 В основе формирования гиперэозинофильной реакции крови у больных гемобластозами и описторхозом лежат однонаправленные, но в разной степени выраженные нарушения кооперативного взаимодействия эозинофилов и иммуноцитов

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1 Литвинова, Л С Иммунорегуляторная роль интерлейкина-4 при гемобластозах / Л С Литвинова, Ю В Колобовникова, Н В Рязанцева // Тезисы докладов Международного конгресса «Иммунитет и болезни от теории к терапии», Москва, 2005 - С 170

2 Изменение продукции IL-4 иммунокомпетентными клетками при хроническом описторхозе / Л С Литвинова, Ю В Колобовникова, Е С. Григорьева, Е В Суворова, Н В. Рязанцева, А П Зима, О Б Жукова // Тезисы докладов I Съезда физиологов СНГ «Физиология и здоровье человека», Сочи, 2005 -С 118-119

3 Механизмы нарушения кооперации эозинофилов и иммуноцитов при формировании больших эозинофилий крови / ВВ. Новицкий, НВ. Рязанцева, Л С Литвинова, Ю В Колобовникова, Е С. Григорьева, Е.В Суворова // Бюллетень сибирской медицины -2006 -№2 - С 52-61

4 Цитотоксический потенциал эозинофильных гранулоцитов у больных с синдромом эозинофилии / Л С Литвинова, Ю В Колобовникова, Е Н

Кнутарева, Е С Григорьева, Е В Суворова, В В Новицкий, Н В Рязанцева // Бюллетень сибирской медицины -2006 - №3 -С 26-31

5 Цитокины и противовирусный иммунитет / Н В Рязанцева, В В Новицкий, В В Белоконь, А П Зима, О Б Жукова, И О Наследникова, Л С Литвинова, Ю В Колобовникова, Н Ю Часовских // Успехи физиологических наук - 2006 -Т 137, №4 - С 1-11

6 Особенности цитотоксичности эозинофилов периферической крови при описторхозе / Л С Литвинова, ЮВ Колобовникова, НВ Рязанцева, ЕС Григорьева, Е В Суворова, Н П Чернышева // Тезисы Всероссийской научно-практической конференции с международным участием "Социально-экологические проблемы природопользования в Центральной Сибири", Красноярск, 2006 года - С 359 - 360

7 Изменение продукции эозинофилстимулирующих цитокинов иммунокомпетентными клетками при описторхозе / Л С Литвинова, Ю В Колобовникова, О Б Жукова, Н П Чернышева, Е С Григорьева, Е В Суворова, В В Новицкий, Н В Рязанцева // Вестник уральской медицинской академии наук -2006 -Т3,№ 1 -С 139-141

8 Реактивность эозинофилов и лимфоцитов периферической крови при инвазии Opisthorhis felmeus / В В Новицкий, Н В. Рязанцева, Л С Литвинова, Н П Чернышова, О Б Жукова, Н Ю Часовских, Ю В Колобовникова, Е С Григорьева, ЕВ Суворова И Медицинская паразитология и паразитарные болезни -2006 -№3 -С 23-27

9 Особенности противопаразитарной реактивности организма при описторхозе / Л С Литвинова, Ю В Колобовникова, Е С Григорьева, Е В Суворова, В В Новицкий, Н В Рязанцева // Тезисы докладов 5-й научно-практической конференции с международным участием «Достижения фундаментальных наук в решении актуальных проблем медицины», Астрахань, 2006 - С 142-144

10 Изменение продукции Th2-цитокинов мононуклеарными клетками при множественной миеломе / Л С Литвинова, Ю В Колобовникова, Е Н Кнутарева, Е С Григорьева, Е В Суворова, Н В Рязанцева // Тезисы докладов VIII Конгресса «Паллиативная медицина и реабилитация в здравоохранении», Москва, 2006 - С 19.

11 Изменения иммунологической реактивности при лимфогранулематозе / Л С Литвинова, ЮВ Колобовникова, ЕС Григорьева, ЕВ Суворова // Тезисы докладов ХП-ой Межгородской научной конференции молодых ученых «Актуальные проблемы патофизиологии», Санкт-Петербург, 2006 - С 53-54

12 Изменение уровня продукции IL-5 иммунокомпетентными клетками при злокачественных заболеваниях системы крови, сопровождающихся синдромом эозинофилии / Л С Литвинова, ЮВ Колобовникова, ЕС Григорьева, ЕВ Суворова, В В Новицкий, Н В Рязанцева, О Б Жукова // Тезисы докладов Российского медицинского форума-2006 «Фундаментальная наука и практика», Москва, 2006 - С 88.

13 Механизмы нарушения цитокинопосредованной кооперации эозинофилов и иммуноцитов при формировании феномена эозинофилиии / Н В Рязанцева,

В В Новицкий, Л С Литвинова, С Б Ткаченко, Ю В Колобовникова, Е С Григорьева, Е В Суворова//Иммунология -2007 -№2 - С 123-127

14 Цитокинопосредованные механизмы формирования синдрома эозинофилии при гемобластозах / В В Новицкий, Н В Рязанцева, Л С Литвинова, Ю В Колобовникова, Е Н Кнутарева, Е С Григорьева, Е В Суворова // Бюллетень сибирского отделения Российской Академии медицинских наук — 2007 - №2 -С 153-159

15 Литвинова, Л С Особенности цитокинпродуцирующей способности мононуклеарных клеток периферической крови при гемобластозах, ассоциированных с синдромом эозинофилии / Л С Литвинова, Ю В Колобовникова, НВ Рязанцева // Тезисы докладов ХШ-ой Межгородской научной конференции молодых ученых «Актуальные проблемы патофизиологии», Санкт-Петербург, 2007 - С 76-78

16 Колобовникова, Ю В Изменение морфометрических характеристик эозинофилов при гемобластозах, ассоциированных с синдромом эозинофилии / Ю В Колобовникова, Л С Литвинова // там же - С 66-68

17 Особенности цитотоксичности эозинофилов периферической крови при гемобластозах, ассоциированных с синдромом эозинофилии / Л С Литвинова, Ю В Колобовникова, Н В Рязанцева, В В Новицкий // Тезисы докладов VIII-ой Всероссийской научно-практической конференции «Актуальные вопросы клиники, диагностики и лечения в многопрофильном лечебном учреждении», Санкт-Петербург, 2007 - С 67

18 Молекулярные механизмы нарушения кооперации иммуноцитов и эозинофилов при гемобластозах, ассоциированных с синдромом эозинофилии / Л С Литвинова Л С , Ю.В Колобовникова, Н В Рязанцева, В В Новицкий //там же - С 93

19 Новицкий, В В Механизмы нарушений кооперации эозинофилов и иммуноцитов при формировании синдрома эозинофилии / В В Новицкий, Л С Литвинова, Н В Рязанцева // Тезисы докладов Х1-го Всероссийского научного форума с международным участием «Дни иммунологии в Санкт-Петербурге», Санкт-Петербург, 2007 - Медицинская иммунология - 2007 - Т 9, №2-3 - С 281 -282

20 Влияние рекомбинантных форм интерлейкинов-5, -3 и эотаксина на апоптоз эозинофильных гранулоцитов / Н В Рязанцева, В В Новицкий, Л.С Литвинова, СБ Ткаченко, ЮВ Колобовникова, ОБ Жукова, ЕС. Григорьева, ЕВ Суворова, ЕН Кнутарева, ТТ Радзивил, НЮ Часовских // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины - 2007 - Т 143, №4 - С 370 - 374

21 Изменение продукции ключевых цитокинов регуляции эозинофильных гранулоцитов при инвазии Ор^зйюйиэ 1е11пеиз / В В Новицкий, Н В Рязанцева, Л.С Литвинова, С Б Ткаченко, Ю В Колобовникова, А В Лепехин, Н П Чернышова, Е.С Григорьева, Е В Суворова И Эпидемиология и инфекционные болезни - 2007 - №3 - С 46-51

22 Механизмы нарушения кооперации лимфоцитов и эозинофилов при гемобластозах, сопровождающихся синдромом эозинофилии / Н В Рязанцева, Л С Литвинова, В В Новицкий, С Б Ткаченко, Ю В Колобовникова, Е С

Григорьева, E.B- Суворова, B,ff. Кнутарсва, О.Б. Жукова // Медицинская иммунология. - 2007. - №4-5. - С. 326 - 330.

23. Литвинова, Л.С. Клеточные механизмы больших эозинофилий крови / Я.С. Литвинова, Н.В- Рязанцева, В.В. Новицкий. - Томск: Изд-во Том. ун-та, 2007. -145 с.

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ СОКРАЩЕНИЙ

ИКК - иммунекомпетентная клетка

ИФА - нммуноферментный анализ

КОЕ - колониеобразующая единица

ИСТ - нитроемний тетразолий

CL|R' - средний цитохимический коэффициент

ФГА - фитогемагглютинин

CD — поверхностный кластер дифференцировки

CSF - колониестамулирующий факгор

GM-CSF - фанулоцитарно-макрофагальный колониеетимулирующий факгор

ППЭ - показатель повреждения эозинофщюв

Ig - иммуноглобулин

IL - янтерлейкин

Th - Т-хелперы

TNF - фактор некроза опухоли

PAP - фактор активации тромбоцитов

Автор выражает глубокую прнзнательниек, заведующему кафедрой инфекционных больней ГОУ НПО СибГМУ Poe-здрава д-ру мед. наук, профессору A.B. Лепехину, заведующей отделением гематологии Томской областной клинической больницы В.K.J. Гра.нкиной, заведующей лабораторией клинической иммунологии ГУ3 ЦМСЧ №81 ЗАТО Северск канд. мед. наук Т.Т. Радзивил, врачу-гематологу отделения гематологии Томской областной клинической больницы E.H. К нута ре ной, врачу-ординатору клиники инфекционных болезней ГОУ ВПО СибГМУ ['оездрава канд. мед. наук Н.П, Черныш оной, см,С, 1ДНИЛ ГОУ ВГЮ СибГМУ Росэдравэ канд. мед. наук Ü.M. Шевцовой за проявленный шггерес к работе, ценные теоретические и методические советы.

Отпечатано в лаборатории оперативной полиграфии СибГМУ 634050, г. Томск, Московский тракт, 2, тел. 53-04-08 Заказ № Тираж (00 экземпляров

Оглавление диссертации Литвинова, Лариса Сергеевна :: 2007 :: Томск

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Современные представления о строении и функциональных особенностях эозинофильных гранулоцитов.

1.2. Механизмы развития эозинофилий периферической крови при различных заболеваниях.

1.3. Основные закономерности функционирования цитокиновой сети.

1.3.1. Роль цитокиновой сети в регуляции гомеостаза эозинофильных лейкоцитов.

1.3.2. Механизмы цитокинопосредованной регуляции кооперации эозипофилов и иммуноцитов.

1.3.3. Дизрегуляция цитокинопосредованных механизмов кооперации иммунокомпетентных клеток и эозинофилов в реализации феномена эозинофилии.

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1. Общая характеристика клинического материала.

2.1.1. Клиническая характеристика пациентов с лимфопролпферативными заболеваниями системы крови, ассоциированными с эозинофилией периферической крови.

2.1.2. Клиническая характеристика пациентов с описторхозом, ассоциированным с эозинофилией периферической крови.

2.2. Методы исследования.

2.2.1. Определение содержания эозинофилов и лимфоцитов периферической крови.

2.2.2. Выделение мононуклеарных лейкоцитов периферической крови.

2.2.3. Иммуноцитохимический метод определения экспрессии лимфоцитами CD3+, CD4+, CD8+, CD22+.

2.2.4. Культивирование мононуклеарных лейкоцитов.

2.2.5. Определение содержания цитокинов в супернатантах культур мононуклеарных лейкоцитов и эотаксина в сыворотке крови.

2.2.6. Выделение эозинофильных гранулоцитов периферической крови.

2.2.7. Культивирование эозинофилов периферической крови.

2.2.8. Оценка презентации мембраносвязанных форм цитокиновых рецепторов на эозинофилах крови.

2.2.9. Определение содержания пероксидазы в эозинофильных гранулоцитах.

2.2.10. Определение содержания лизосомальных катиопных белков в эозинофильных гранулоцитах.

2.2.11. Исследование морфометрических характеристик эозинофильных лейкоцитов.

2.2.12. Определение показателя повреждения эозинофилов в средс с антигенами O.felineus.

2.2.13. Определение фагоцитарной активности эозинофилов периферической крови.

2.2.14. Оценка реализации апоптоза эозинофилов периферической крови методом проточной лазерной цитометрии.

2.2.14.1. Регистрация апоптоза эозинофилов периферической крови.

2.2.14.2. Экспериментальный блок исследований.

2.2.14.2.1. Метод индукции апоптоза эозинофилов крови путем лишения ростовых факторов in vitro.

2.2.14.2.2. Оценка влияния рекомбииаптных форм цитокинов (IL-5, IL-3 и эотакспна) на апоптотическую гибель эозинофильных гранулоцитов.

2.2.15. Статистический анализ результатов исследования.

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ.

3.1. Морфо - функциональная характеристика эозинофильных гранулоцитов у пациентов с заболеваниями, ассоциированными с эозинофилией периферической крови.

3.1.1. Количественные показатели лейкоцитарного звена периферической крови у пациентов с заболеваниями, ассоциированными с эозинофилией периферической крови.

3.1.2. Содержание внутриклеточных катионных протеинов и пероксидазы в эозинофилах периферической крови у пациентов с заболеваниями, ассоциированными с эозинофилией периферической крови.

3.1.3. Показатели кислородзависимой бактерицидности эозинофилов периферической крови в НСТ-тесте у пациентов с заболеваниями, ассоциированными с эозинофилией периферической крови.

3.1.4. Морфометрическая характеристика эозинофилов периферической крови у пациентов с заболеваниями, ассоциированными с эозинофилией периферической крови.

3.1.5. Морфологические особенности эозинофилов периферической крови у пациентов с заболеваниями, ассоциированными с эозинофилией периферической крови.

3.2. Иммунофенотипические особенности лимфоцитов периферической крови у пациентов с заболеваниями, ассоциированными с эозинофилией периферической крови.

3.3. Содержание IL-3, IL-4, IL-5 и GM-CSF в супернатантах культур мононуклеарных лейкоцитов и эотаксина в сыворотке крови у пациентов с заболеваниями, ассоциированными с эозинофилией периферической крови.

3.4. Содержание эозинофилов периферической крови, презентирующих цитокиновые рецепторы, у пациентов с заболеваниями, ассоциированными с эозинофилией периферической крови.

3.5. Особенности реализации апоптотической гибели эозинофильных гранулоцитов у пациентов с заболеваниями, ассоциированными с эозинофилией периферической крови.

Введение диссертации по теме "Патологическая физиология", Литвинова, Лариса Сергеевна, автореферат

Актуальность проблемы. Гилерэозинофильная реакция крови сопровождает течение многочисленной группы нозологических форм и синдромов, имеющих разные механизмы развития, прогноз и исход [Коровина Н.А. и соавт., 2002; Чучалин А.Г., 2003; Ольшанская Ю.В. и соавт., 2005].

Явление пролонгированного пребывания эозинофильных клеток в периферической крови привлекает интерес многих исследователей в связи с ключевой ролью этих клеток в реализации патогенеза аллергических заболеваний и паразитарных инвазий, где они выступают в роли эффекторных клеток и бесспорных факторов защиты, предотвращая генерализацию иммунного ответа и обеспечивая эффективную элиминацию инфектогенов паразитарной природы [Фассахов Р.С. и соавт., 1992; Логинов А.С.и соавт., 1998; Джальчинова В. Б., Чистяков Г. М. 1999; Озерецковская Н.Н., 2000; Hamelmann Е., Gelfand E.W., 2001; Коровина Н.А. и соавт., 2002; Семепкова Е.Н. и соавт., 2004; Das A.M. et al., 2005]. В современной литературе появляется множество работ, свидетельствующих об участии эозинофильных гранулоцитов в реализации противоопухолевого иммунитета, как звена неспецифической резистентности врожденного иммунитета [Гриншпуп Г.Д., Виноградова Ю.Е., 1983; Merz Н. et al., 1991; Хорошко Н.Д. и соавт., 1998; Мокеева Р.А. и соавт., 2000; Чучалин А.Г., 2003; Воробьев А.И., 2003; Семенкова Е.Н. и соавт. 2004; Caruso R.A. et al., 2004; Ольшанская Ю.В. и соавт., 2005; Абдулкадыров К.М., 2006].

Накопленные к настоящему времени в мировой литературе многочисленные сведения, касающиеся особенностей эозинофильного гомеостаза в норме и при реализации патологического процесса, свидетельствуют, что эозинофил является одной из наиболее агрессивных эффекторных клеток воспаления, благодаря наличию широкого спектра уникальных цитотоксических продуктов, повышенное содержание которых обусловливает формирование высокого микробицидного потенциала, направленного не только в отношении инородных субстанций, но и окружающих тканей [Анаев Э.Х. и соавт., 1994; Беклемишев И.Д., 1998; Джальчинова В.Б., Чистяков Г.М., 1999; Воробьев А.И. и соавт., 2000; Dvorak A.M., Weller P.F., 2000; Волкова М.А., 2001; Чучалин А.Г., 2003; Ешану B.C., 2004]. На сегодняшний день описаны многочисленные осложнения пролонгированной эозпнофплии, приобретающие порой черты отдельной нозологии (эозинофильные васкулиты, эндокардиты, миокардиты, гастроэнтериты и др.) [Джальчинова В.Б., Чистяков Г.М., 1999; Воробьев А.И. и соавт., 2000; Dvorak A.M., Weller P.F., 2000; Волкова М.А. 2001; Чучалин А.Г., 2003; Ешану B.C., 2004].

Однако в свете современных данных, эозинофильные гранулоциты рассматривают не только в качестве клеток-эффекторов, но и позиций их участия в поддержании тканевого и иммунологического гомеостаза [Минеев В.Н. и соавт., 2000; Воробьев A.PI., 2002; Бережная Н.М. и соавт., 2005]. Именно благодаря способности секретировать широкий спектр биологически-активных веществ и экспрессировать на своей поверхности разнообразные рецепторные структуры, лейкоциты эозинофильного ряда принимают участие в регуляции функций иммунокомпетентных клеток, в процессах клеточной репарации, свертывания крови н др. [Воробьев А.И., 2003; Бережная Н.М. и соавт., 2005]. Принимая во внимание ключевые аспекты переосмысления физиологического значения эозинофилов, особый интерес, на наш взгляд, представляют фактические данные об их способности взаимодействовать с иммунокомпетентньтми клетками макроорганизма.

В настоящее время одним из наиболее развивающихся направлений биомедицинских исследований становится изучение молекулярных механизмов нарушений кооперативных взаимодействий эффекторных клеток в патогенезе различных заболеваний. Очевидно, что межклеточная кооперация, осуществляя ключевую роль в регуляции гомеостаза клеток, определяет направление их дифференцировки, а также реализацию многих эффекторных клеточных функций [Ярилин А.А., 1999; Иванов А.А. и соавт., 2005]. Важную роль в становлении и стабилизации контактов между взаимодействующими клетками макроорганизма играет цитокин-рецепторная сеть. Посредством цитокинов, синтезируемых и сскретируемых клеткой, осуществляются лиганд-рецепторные взаимодействия за счет связывания растворимых веществ с аффинным рецептором на клеточной поверхности [Ярилин А.А., 2001; Кетлинский С.А., 2002; Симбирцев А.С., 2002, 2004]. Существующая между клетками иммунной системы и эозинофилами взаимонаправленность эффектов обусловлена как иммуномодулирующим действием иммунокомпетентных клеток, так и способностью лейкоцитов эозинофильного ряда активировать иммуноциты и вызывать поляризацию иммунного ответа в ту или иную сторону за счет секреции иммунорегуляторных молекул [Gulbenkian A.R. et al., 1992; Беклемишев И.Д., 1998; Минеев В.Н. и соавт., 2000; Намазова Л.С. и соавт., 2000; Nagase Н. et al., 2001; Воробьев А.И., 2002; Lampinen М. et al., 2004; Бережная Н.М. и соавт., 2005]. В свою очередь дизрегуляция функционирования компонентов, составляющих основу межклеточной кооперации, может обусловливать нарушение процессов созревания, активации и реализации программированной гибели эозинофильиых гранулоцитов и приводить к длительному пребыванию последних в периферической крови.

Цель исследования: установить механизмы нарушения кооперативного взаимодействия иммуноцптов и эозинофилов при заболеваниях, сопровождающихся развитием эозинофилии крови.

Задачи исследования:

1. Дать комплексную оценку морфофункциональных свойств эозинофильиых гранулоцитов периферической крови у пациентов с лимфопролифератнвными заболеваниями системы крови и у больных описторхозом, ассоциированных с эозинофилией крови.

2. Оценить роль дисбаланса эозинофилспецифичных цитокинов (1L-3, 1L-4, IL-5, GM-CSF и эотаксина), регулирующих процессы пролиферации, дифференцировки и активации эозинофпльных клеток, в механизмах нарушения межклеточной кооперации при заболеваниях, сопровождающихся формированием эозинофилии крови (лимфопролиферативные заболевания системы крови и описторхоз).

3. Выявить механизмы нарушения цитокинопосредованной кооперации эозинофилов и нммуноцитов при заболеваниях, осложненных формированием эозинофилии крови (лимфопролиферативные заболевания системы крови и описторхоз).

4. Оценить роль нарушений апоптотической гибели эозинофилов в механизмах развития большой эозинофилии крови при лимфопролиферативных заболеваниях системы крови и гельминтозе, обусловленном O.felineus.

5. Установить общие закономерности и особенности реализации механизмов кооперации эозинофилов и пммуноцитов при формировании большой эозинофилии крови при лимфопролиферативных заболеваниях системы крови и описгорхозе.

Научная новнзна. Впервые с привлечением широкого комплекса современных гематологических, иммунологических и молекулярно-биологических методов исследования представлены фундаментальные механизмы формирования эозинофильной реакции крови при патологических процессах разного генеза с позиций нарушения кооперативного взаимодействия иммуноцитов и эозинофилов.

Впервые обосновано, что у пациентов с гемобластозами (лимфогранулематоз, множественная мнелома и неходжкинские лимфомы) и у больных описторхозом (острая и хроническая формы), сопровождающихся гиперэозинофилпей крови, нарушен морфофункциональный статус эозинофильных гранулоцитов (изменены морфометрические характеристики ядра и цитоплазмы, увеличены содержание внутриклеточных катионных протеинов и активность пероксидазы, усилена фагоцитарная активность, клетки имеют признаки дегрануляции и цитолиза).

Показано, что при лимфопролиферативных заболеваниях системы крови и гельминтозе, обусловленном паразитированием O.felineus, ассоциированных с развитием эозинофильной реакции крови, интенсификация процессов, опосредующих реализацию кислороднезависимых и кислородзависимых механизмов микробицидности, приводит к формированию высокого цитотоксического потенциала эозинофильных гранулоцитов, что может обусловливать негативное влияние длительной гиперэозинофилии крови на течение основной патологии.

Впервые установлено, что механизмы развития эозинофилии, осложняющей течение лимфопролиферативных заболеваний системы крови и описторхоза, сопряжены с изменением кооперативного взаимодействия эозинофильных гранулоцитов и мононуклеарных клеток. Данное положение подтверждается фактом обнаружения повышенной продукции мононуклеарами эозинофилспецифичных медиаторов (IL-3, IL-5, IL-4 и GM-CSF) и увеличением уровня эотаксина в сыворотке крови с возрастанием на эозинофилах презентации мембранноассоциированных рецепторов к IL-3, IL-5 и эотаксину. Получены новые данные, свидетельствующие о снижении резервной способности эозинофильных гранулоцитов презентировать рецепторы к IL-3 и IL-5 при инкубации клеток in vitro с рекомбинантными формами одноименных цитокинов.

Установлен факт угнетения апоптоза эозинофилов при лимфопролиферативных заболеваниях системы крови и описторхозной инвазии. Приоритетными являются данные о роли нарушений цитокинопосредованной программированной гибели эозинофилов в патогенезе больших эозинофилий крови. Результаты экспериментальных исследований in vitro свидетельствуют, что при лимфопролиферативных заболеваниях системы крови на фоне низких значений базалыюго апоптоза эозинофильных клеток, дополнительное воздействие па них рекомбинантных форм цитокинов, регулирующих гомеостаз эозинофильных гранулоцитов (IL-3, IL-5 и эотаксина), не оказывает влияния на их программированную гибель, что свидетельствует о неадекватности восприятия эозинофилами антиапоптотпческпх сигналов при данной патологии. У пациентов с гельминтозом, обусловленном паразитироваиием O.felineus, напротив, в эксперименте in vitro продемонстрирована повышенная чувствительность эозинофильных клеток к антиапоптозному действию IL-3, IL-5 и эотаксина. Наряду с этим in vitro в условиях дефицита ростовых факторов показана повышенная чувствительность эозинофилов, полученных у пациентов с большими эозинофилиями крови, к действию проапоптотнческих факторов.

Теоретическая и практическая значимость. Впервые установлены закономерности нарушения кооперации эозинофилов и иммуноцнтов в механизмах развития больших эозинофилий крови при лимфопролиферативных заболеваниях системы крови и описторхозной инвазии. Определена важная роль в этом процессе ключевых цитокинов (IL-3, IL-4, IL-5, GM-CSF и эотаксина), регулирующих гомеостаз эозинофильных гранулоцитов и их рецепторов (IL-3, IL-5, CCR3), нарушений лиганд-рецепторного взаимодействия и цитокинопосредованной регуляции апоптоза эозинофильных гранулоцитов. Продемонстрирован факт выраженного нарушения морфофункционального статуса эозинофильных гранулоцитов при нозологиях, сопряженных с формированием эозинофилии.

Положения исследования могут служить основанием для формирования стратегии изучения молекулярных и клеточных механизмов развития синдрома гиперэозинофилии при различных заболеваниях. Полученные фундаментальные знания могут быть положены в основу разработки технологии коррекции дизрегуляции кооперативного взаимодействия эозинофилов и иммунокомпетентных клеток при патологических процессах разного генеза, ассоциированных с формированием эозинофилии крови, с целью проведения патогенетически обоснованной терапии иммунных нарушений и своевременной профилактики осложнений, возникающих при длительной гиперэозинофилии.

Положения, выносимые на защиту:

1. При злокачественных заболеваниях системы крови (лимфогранулематоз, множественная миелома и неходжинские лимфомы) и описторхозе (острая и хроническая формы), ассоциированных с гиперэозинофилыюй реакцией крови, гранулоциты эозипофильного ряда претерпевают однотипные нарушения морфофункциональных свойств, обусловливающих формирование их высокого микробицидного потенциала.

2. Патогенез больших эозинофилий крови, сопровождающих течение лимфопролиферативных заболеваний системы крови и описторхоза, сопряжен с нарушением цитокинопосредованной кооперации эозинофилов и мононуклеарных лейкоцитов.

3. Механизмы нарушения кооперации эозинофилов и мононуклеарных клеток при эозинофилии, сопровождающей течение лимфопролиферативных заболеваний системы крови и описторхозной инвазии, опосредованы повышением продукции мононуклеарными клетками ключевых в регуляции гомеостаза эозинофильных клеток цитокинов (IL-3, IL-5, GM-CSF и эотаксина) и нарушением баланса экспрессии эозинофилами комплементарных им рецепторов (IL-3R, IL-5R и CCR3).

4. Существенный вклад в формирование гиперэозинофильной реакции крови при лимфопролиферативных заболеваниях системы крови и описторхозе вносит нарушение реализации цнтокинопосредованной апоптотической гибели эозинофилов.

Апробация и реализация работы. Результаты проведенных исследований докладывались и обсуждались на Международном конгрессе «Иммунитет и болезни: от теории к терапии» (Москва, 2005), I Съезде физиологов СНГ «Физиология и здоровье человека» (Сочи, 2005), 5-й научно-практической конференции с международным участием «Достижения фундаментальных наук в решении актуальных проблем медицины» (Астрахань, 2006), VIII Конгрессе «Паллиативная медицина и реабилитация в здравоохранении» (Москва, 2006), Всероссийской научно-практической конференции с международным участием "Социально-экологические проблемы природопользования в Центральной Сибири" (Красноярск, 2006), XII Межгородской научной конференции молодых ученых «Актуальные проблемы патофизиологии» (Санкт-Петербург, 2006), Российском медицинском форуме-2006 «Фундаментальная паука и практика» (Москва, 2006), Всероссийской конференции молодых ученых, посвященной памяти профессора Н.Н. Кеворкова «Иммунитет и аллергия: от эксперимента к клинике» (Пермь, 2006), VIII Всероссийской научно-практическая конференции «Актуальные вопросы клиники, диагностики и лечения в многопрофильном лечебном учреждении» (Санкт-Петербург, 2007), XI-м Всероссийском научном форуме с международным участием имени академика В.И. Иоффе «Дни иммунологии в Санкт-Петербурге» (Санкт-Петербург, 2007), ХШ-ой межгородской научной конференции молодых ученых "Актуальные проблемы патофизиологии - 2007» (Санкт-Петербург, 2007).

В работе приводятся результаты исследований, поддержанных Советом при Президенте РФ для ведущих научных школ РФ по проблеме «Молекулярные основы нарушения гомеостаза клеток крови при актуальных заболеваниях инфекционной и неинфекционной природы» (НШ-4153.2006.7), а также результаты научно-исследовательских работ «Роль нарушений межклеточной кооперации в механизмах формирования больших эозинофнлий крови» 2005-РИ-19.0/002/010 (Государственный контракт № 02.442.11.7056 от 26.10.2005) и «Молекулярные и клеточные основы управления реактивностью системы крови при актуальных заболеваниях инфекционной природы» 2006-РИ-112.0/001/384 (Государственный контракт № 02.445.11.7419 от 09.06.2006 г.), выполненных в рамках Федеральной целевой научно-технической программы «Исследования и разработки по приоритетным направлениям развития науки и техники на 2002-2006 годы».

Объем и структура работы. Диссертация изложена на 275 страницах машинописного текста и состоит из введения, четырех глав, выводов и списка литературы, включающего 452 источника, из которых 167 отечественных и 285 иностранных. Работа иллюстрирована 43 таблицами и 24 рисунками.

Заключение диссертационного исследования на тему "Механизмы дизрегуляции кооперации эозинофилов и иммуноцитов при больших эозинофилиях крови"

ВЫВОДЫ

1. При больших эозинофилиях крови лейкоциты эозинофильного ряда претерпевают выраженные изменения морфологических и функциональных свойств. v 2. Гиперэозинофилия, осложняющая течение лимфопролиферативных заболеваний системы крови и описторхоза, сопровождается нарушением баланса морфометрических показателей ядерных и стромальных структур эозинофильных клеток (увеличение площадей ядра и ци го плазмы эозинофилов, рост числа инвагинаций и снижение циркулярности цитоплазмы, изменение соотношения эу-и гетерохроматиновых зон в ядрах эозинофилов), а также их повышенной способностью к деграиуляции и цитолизу по сравнению с нормой.

3. Интенсификация кислороднезависимых и кислородзависимых механизмов мнкробпцидностн эозинофилов при пшерэозииофилпи крови у пациентов с лимфопролиферативными заболеваниями системы крови и описторхозом приводит к формированию их высокого цитотоксического потенциала.

5. Механизмы нарушения межклеточной кооперации эозинофилов и мононуклеарных клеток при гиперэозинофилии крови у больных лимфопролиферативными гематологическими заболеваниями и описторхозом связаны с повышенным уровнем секреции мононуклеарами IL-3, IL-5 и GM-CSF и увеличением концентрации эотаксина в сыворотке крови при возрастании числа эозинофилов, несущих рецепторы к IL-3, IL-5 и эотаксину, в условиях дефицита Т-клеточного звена иммунной системы.

6. Резервный потенциал эозинофилов в отношении экспрессии IL-3R и IL-5R при лимфопролиферативных заболеваниях системы крови и описторхозе, ассоциированных с формированием гиперэозинофилии, снижен; резервная способность эозинофилов презентировать рецептор к эотаксину не нарушена.

7. Патогенез гнперэозинофилии крови, осложняющей течение лимфопролиферативных заболеваний системы крови и опистохоза, сопряжен с угнетением программированной гибели эозинофилов, опосредованной эозинофилспецифичными медиаторами (IL-3, IL-5, эотаксин).

8. В основе формирования гиперэозинофильной реакции крови у больных гемобластозами и описторхозом лежат однонаправленные, но в разной степени выраженные нарушения кооперативного взаимодействия эозинофилов и иммуноцитов.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Чрезвычайно широкое разнообразие нозологических форм, при которых встречается гпперэозипофпльный синдром, тяжелые осложнения, формирующиеся вследствие длительной циркуляции лейкоцитов эозинофильного ряда в периферической крови н последствия инфильтрации этими клетками органов и тканей, обусловленные крайней агрессивностью эозинофилов, определяют необходимость расширения и углубления фундаментальных исследований, касающихся изучения механизмов реализации данного феномена.

Озвученные в настоящее время в мировой литературе многочисленные сведения, касающиеся патогенеза гиперэозинофилий крови: антителозависимый хемотаксис, развивающийся при паразитозах (IgE- или IgG-антитела); иммунный, опосредованный через IgE (характерен для аллергии); ответ на эозинофильный хемотаксический фактор, выделяемый некоторыми опухолями; собственно опухолевая эозинофилия - лейкоз, не затрагивают, однако, ключевую суть самого явления; они ориентированы, преимущественно, на констатацию частных (локальных) механизмов реализации данного гематологического синдрома при различных заболеваниях (паразитозы, аллергопатология и др.). На наш взгляд, решение данной проблемы, в целом, на уровне современных знаний, не может быть достигнуто без применения системного подхода. Так, в последнее время становится очевидным, что использование в медицинских исследованиях современных высокотехнологичных молекулярпо-биологических подходов диктует необходимость пересмотра ключевых представлений о патогенезе многих заболеваний, позволяя на более тонком - клеточном и молекулярном уровнях, установить механизмы, лежащие в основе развития патологических процессов, в том числе и гематологических синдромов.

Детальный анализ данных современной литературы и результатов собственных исследований позволяет с уверенностью заключить, что особую актуальность в изучении патогенеза больших эозинофилий крови приобретает исследование фундаментальных механизмов нарушения кооперативного взаимодействия эффекторных клеток крови, в частности, эозинофилов и лимфоцитов, где важнейшую роль играет биологическая мультиснстема - цитокин-рецепторная сеть [Ярилин А.А., 1999; Иванов А.А. и соавт., 2005]. Так, посредством цитокинов, синтезируемых и секретируемых клетками макроорганизма, осуществляются лиганд-рецепторные взаимодействия за счет связывания растворимых веществ с аффинным рецептором на клеточной поверхности [Ярилин А.А, 2001; Кетлинский С.А. 2002; Спмбпрцев А.С, 2002, 2004]. Таким образом, изучение цитокинового профиля и способности клеток экспрессировать на мембране соответствующие рецепторы, позволяет оценить характер межклеточных взаимодействий, дизрегуляция которых может обусловливать формирование патологического процесса.

Результаты настоящего исследования с убедительностью продемонстрировали ведущую роль нарушений межклеточной кооперации эозинофилов и иммунпокомпетентиых клеток в механизмах формирования феномена эозинофилии крови при лимфопролиферативных заболеваниях системы крови и гельминтозе, инициированном О. felineus (рис. 24). Установлено, что гнперэозннофилия, осложняющая течение рассматриваемых нами нозологий, сопровождается увеличением продукции ключевых цитокинов. регулирующих процессы клеточного гомеостаза эозинофильных гранулоцитов (IL-5, IL-3 и GM-CSF), мононуклеарами крови и уровня эотаксина в периферической крови на фоне количественного дефицита Т-клеточного звена иммунной системы. В то же время показано, что у больных гемобластозами и описторхозом, ассоциированных с эозинофилией, фиксируется повышенное количество эозинофильных клеток, несущих рецепторы к IL-3, IL-5 и эотакспну, опосредованное повышенным уровнем секреции эозинофистимулирующнх медиаторов мононуклеарными клетками. При дополнительном воздействии на эозинофильные клетки, полученных у пациентов с лимфопролпферативными заболеваниями системы крови и описторхозом, сопровождавшимися эозинофилией, in vitro рекомбинантных форм IL-3, IL-5 и эотаксина, установлено снижение функционального потенциала эозинофильных гранулоцитов в отношении экспрессии IL-3R и IL-5R при неизменной способности эозинофилов презентировать рецептор к эотаксину.

Следует отметить, что обнаруженное нами угнетение танатогенной программы эозинофилов периферической крови вносит значительный вклад в механизмы развития феномена эозинофилии при рассматриваемых нозологиях.

Патологические процессы, ассоциированные с большой эозинофилией крови

Лнмфопролиферативные заболевания системы крови

Гельминтоз, обусловленный O.felineus

Активация гуморального звена иммунного ответа

Депрессия Т-клеточного звена иммунной системы

Стимуляция эозинофилопоэза в костном мозге

Увеличение продукции мононуклеарными лейкоцитами кровн эозинофилепецифичных цитокинов (IL-3, IL-4, IL-5, GM-CSF)

Увеличение количества эозинофилов, несущих IL-3R, IL-5R. CCR3 и др. L

Увеличение митотического индекса, укорочение клеточного цикла эозинофилов

Рециркуляция эозинофилов из тканей в кповоток

Угнетение апоптоза эозинофилов Гиперэозиноф) кР< льная реакция }ВИ

Изменение морфо-функниональных характеристик эозннофнлов

Увеличение фракции гиподенсных эозинофилов X

Повышение способности к дегрануляции и цитолизу Интенсификация процессов м и кроби цидности

Эффективный цитолиз антигенных детерминант различной природы (опухолевые клетки, паразитарные инфекты и ДР-)

Формирование высокого цнтотокснческого потенциала

Повреждение тканей макроорганизма (эндотелий сосудов, нервные волокна и др.)

Рис. 24. Роль нарушений кооперации эозинофилов и иммуноцитов в патогенезе «больших эозинофилии крови» (по данным И.Д. Беклемишева, 1998; Н. Nagase et al., 2001; А.И. Воробьева, 2002; М. Lampinen et al, 2004; Бережной Н.М. и соавт., 2005 и результатам собственных исследований (выделено цветом))

Результатами проведенного эксперимента in vitro была продемонстрирована повышенная чувствительность эозинофильных клеток, полученных у пациентов с описторхозом, к аптиапоптозному действию IL-3, IL-5 п эотаксина. На основании этого можно сделать вывод о том, что усиление секреции этих цитокинов мононуклеарами крови (IL-3, IL-5, эотаксин) у лиц с инвазией О. felineus также вносит вклад в персистирование эозинофильной реакции за счет подавления реализации танатогенной программы эозинофилов. При лимфопролиферативных заболеваниях системы крови, несмотря на наличие функциональных отрицательных связей между уровнем секреции указанных медиаторов мононуклеарнымн клетками и количеством клеток в апоптозе, данные экспериментального блока исследования in vitro доказывают, что на фоне низких значений базального апоптоза эозинофильных клеток дополнительное воздействие на них рекомбинантных форм цитокинов не оказывает влияния на их апоптотическую реакцию, что может свидетельствовать о неадекватности восприятия изучаемыми клетками про- и антиапоптогенных сигналов при злокачественной патологии системы крови.

Кроме этого, у всех обследованных пациентов с заболеваниями, ассоциированными с развитием гиперэозинофильной реакции крови (гемобластозы и описторхоз), было выявлено значительное напряжение процессов, обеспечивающих реализацию кислороднезависимых и кислородзависимых механизмов цитотоксичности, и изменение морфофункцыонального статуса эозинофилов (увеличение размеров клеток, усиление образования ими псевдо- и лобоподий, изменение соотношения компонентов ядерного материала), что в целом ведет к усилению микробицидности эозинофильных гранулоцитов и обусловливает формирование их высокого цитотокспческого потенциала (рис. 24).

Таким образом, чрезмерная продукция медиаторов, являющихся ключевыми в регуляции процессов клеточного гомеостаза эозинофилов, мононуклеарнымн лейкоцитами, с одной стороны, дисбаланс экспрессии рецепторного аппарата эозинофильных гранулоцитов и угнетение их апоптотической гибели, - с другой, на наш взгляд, обусловливают нарушение кооперации изученных клеток и являются одними из механизмов, лежащих в основе развития больших эозинофилий крови. Необходимо подчеркнуть, что движущей силой детального исследования механизмов, составляющих основу клеточных коммуникаций, является многообещающая перспектива использования полученных результатов для коррекции патологических состояний, характеризующихся выраженным нарушением баланса кооперативного взаимодействия клеток.

Безусловно, в нашем исследовании мы смогли осветить лишь некоторые вопросы, касающиеся механизмов развития гиперэозинофильной реакции крови. Оценка молекулярных и клеточных механизмов нарушения межклеточной кооперации эозинофилов и иммуноцитов при формировании больших эозинофилий крови требует более углубленного и всестороннего изучения.

236

Список использованной литературы по медицине, диссертация 2007 года, Литвинова, Лариса Сергеевна

1. Абдулкадыров, К.М. Клиническая гематология: Справочник / К.М. Абдулкадыров. Спб: Питер, 2006. - 448 с.

2. Авидитет антител G класса в патогенезе атопического дерматита / Н.М. Гевондян, B.C. Гевондян, И.Б.Трофимова и др.//Аллергология.-2003. -№3. -С. 17-22.

3. Автандилов, Г.Г. Медицинская морфометрия: Руководство / Г.Г. Автандилов. М.: Медицина, 1990. - 384 с.

4. Автандилов, Г.Г. Морфометрия в патологии / Г.Г. Автандилов. М.: Медицина, 1973.-245 с.

5. Автандилов, Г.Г. Проблемы патогенеза и патологоанатомической диагностики болезней в аспектах морфометрии / Г.Г. Автандилов. М.: Медицина, 1984.-226 с.

6. Адаскевич, В.П. Эозинофильные болезни кожи / В.П. Адаскевич, О.С. Зыкова. Витебск, ВГМУ, 2000. - 120 с.

7. Акимов, А.А. Некоторые биологические аспекты лимфомы Ходжкина и новые подходы к ее терапии / А.А. Акимов, Н.В. Ильин // Вопросы онкологии. -2003.-Т.49,№1.-С. 31 -41.

8. Анаев, Э.Х. Эозинофилы и эозинофилии / Э.Х. Апаев // Пульмонология и аллергология. 2002. - №3. - С.15-18.

9. Анализ молекулярного взаимодействия в системе: IL-ip- IL-1RA-IL-1R/ А.В. Ковальчук, Б.Н. Соболев, JI.B. Ганковская и др. // Иммунология. 2001. - № 1. - С. 6 -10.

10. Астафьев, Б.А. Иммунологические проявления и осложнения гельминтозов / Б.А. Астафьев //М.: Медицина, 1997. 181с.

11. Барышников, А.Ю. Иммунологические проблемы апоптоза / А.Ю. Барышников, А.В. Шишкин. М.: Эриториал УРРС, 2002. - 320 с.

12. Бахов, Н.И. Концепция апоптоза / Н.И. Бахов, Ю.Ф. Майчук, А.В. Корнев // Имунология. 1997. - №3. - С. 62 - 64.

13. Беклемишев, И.Д. Положительные обратные связи в механизмах иммунного ответа/И.Д. Беклемишев // Иммунология. 1998. - № 5. - С. 15 - 20.

14. Белобородова, Э.И. Случай эозинофильной пневмонии у больной описторхозом / Э.И. Белобородова, Т.А. Колосовская // Клиническая медицина. -1986.-№ 12.-С. 109-110.

15. Белушкина, Н.Н. Молекулярные основы патологии апоптоза / Н.Н. Белушкина, С.Е. Северин // Архив патологии. 2001. - № 1. - С. 51-59.

16. Белушкина, Н.Н. Молекулярные основы апоптоза / Н.Н. Белушкина, Х.Х. Али, С.Е. Северин // Вопросы биологии, медицины и фармацевтической химии. -1998.- №4. -С. 15-23.

17. Бережная, Н.М. Индукция противоопухолевых механизмов при гиперпродукции иммуноглобулина Е / Н.М. Бережная, Е.Б. Ковальчук // Экспериментальная онкология. — 1991. №13. — С. 41 — 43.

18. Бережная, Н.М. Интерлейкины и формирование иммунологического ответа при злокачественном росте / Н.М. Бережная // Аллергология и иммунология. -2000.-Том 1, №1. С. 45-61.

19. Бережная, Н.М. Эозинофилы, базофилы и иммуноглобулин Е в противоопухолевой защите / Н.М. Бережная, В.Ф. Чехун, Р.И. Сепиашвили // Аллергология и иммунология. 2005. - Том 6, №1. - С. 38 - 49.

20. Блокировка IL-4 и IL-10 изменяет гомеостатические свойства лимфоцитов / Ю.А. Витковская, Б.И. Кузник, А.В. Солпов и др. // Иммунология. 2001. - №5. - С. 16 -18.

21. Бойчук, С.В. Fas-рецептор и его роль при атопических заболеваниях / С.В. Бойчук, И.Г. Мустафин // Иммунология. 2001. - №3. - С. 24-29.

22. Боровиков, В. Statistica. Искусство анализа данных на компьютере / В. Боровиков. Спб., Москва, Харьков., Минск, 2001. - 306 с.

23. Бронштейн, A.M. Трематодозы печени: описторхоз, клонорхоз / A.M. Бронштейн, В.И. Лучшев // Российский медицинский журнал. 1998. - Т.З, №63. -С.140-148.

24. Васильева, Г.И. Кооперативное взаимодействие моно- и полпнуклеарных фагоцитов, опосредованное моно- и нейтрофилокинами / Г.И. Васильева, И.А. Иванова, С.Ю. Тюкавкпна // Иммунология. 2000. - №5. - С. 11 - 16.

25. Вирусиндуцированная дизрегуляция пр о гр аммиру см ой гибели иммунокомпетентных клеток: адаптация или патология? / Н.В. Рязанцева, В.В. Новицкий, О.Б. Жукова и др. // Успехи физиологических наук. 2005. - Т. 36., №3. -С. 33 -44.

26. Владимирская, Е. Б. Апоптоз и его роль в развитии опухолевого роста / Е.Б. Владимирская, А.А. Масчан, А.Г. Румянцев // Гематология и трансфузиология. -1997. Т.42, №5. - С. 4-9.

27. Влияние рекомбинантного интерлейкина-5 на апоптотическую гибель эозинофилов периферической крови больных бронхиальной астмой / И.И. Иванчук, JI.M. Огородова, А.Э. Сазонов и др. //Медицинская иммунология. 2004. -Т.6, №1-2. С. 117-120.

28. Волкова, М.А. Клиническая онкогематология / М.А. Волкова. М.: Медицина, 2001. - 572с.

29. Воробьев, А.И. Руководство по гематологии: В 2т. / Под ред. А.И. Воробьева. Москва, 2002. - Т.1. - 280с.

30. Воробьев, А.И. Руководство по гематологии: В Зт. / Под ред. А.И. Воробьева Зе издание переработанное и дополненное. М.: Ньюдиализ, 2003. - Т.2. - 280 с.

31. Выделение эозинофилов в многоступенчатом градиенте / Е.А. Ружицкая, В.Б. Джальчинова, А.А. Чебуркин, А.Н. Пампура // Клиническая лабораторная диагностика. 2000. - №11. - С.21-23.

32. Галактионов, В.Г. Иммунология. Учебник / В.Г. Галактионов. М.: Изд-во МГУ, 1998. -480с.

33. Гершанович, M.JI. Применение IL-2 (пролейкина, алдеслейкина) в онкологической практике / M.JT. Гершанович // Вопросы онкологии. 2003. - Т.49, №6. - С. 776 - 783.

34. Гпперэозинофильпый вариант РН положительного хронического миелолейкоза / Н.Д. Хорошко, Р.А. Мокеева, А.Г. Туркина и др. // Терапевтический архив. - 1998. - №7. - С. 30 - 36.

35. Гланц, С. Медико-биологическая статистика / С. Гланц. М.: Практика, 1998.-459с.

36. Гольдберг, Е.Д. Динамическая теория регуляции кроветворения и роль цитокинов в регуляции гемопоэза / Е.Д. Гольдберг, A.M. Дыгай, В.В. Жданов // Медицинская иммунология. 2001. - Т.З, №4. - С. 487 - 497.

37. Гольдберг, Е.Д. Методы культуры ткани в гематологии / Е.Д. Гольдберг, A.M. Дыгай, В.П. Шахов. Томск: Изд-во Том. ун-та, 1992. - 272с.

38. Гриншпун, Г.Д. Гиперэозинофильпая реакция (большая эозинофилия крови), связанная со злокачественной опухолью надпочечников у пожилой больной / Г.Д. Гриншпун, И.И. Нейченко // Клиническая геронтология. 2000. - № 5. - С. 42 - 43.

39. Гриншпун, Г.Д. Эозинофилы и эозинофилии / Г.Д. Гриншпун, Ю.Е. Виноградова // Терапевтический архив. 1983. - № 10. - С. 87 - 90.

40. Гриншпун, Л.Д. Большие эозинофилии крови / Л.Д. Гриншпун. М.: Медицина, 1962. - 130с.

41. Гриншпун, Л.Д., Виноградова Е.Ю. Эозинофилы и эозинофилии / Л.Д. Гриншпун, Ю.Е. Виноградова. М.: Медицина, 1982. - 65с.

42. Джальчинова, В.Б. Эозинофилы и их роль в патогенезе аллергических заболеваний / В.Б. Джальчинова, Г.М. Чистяков // Российский вестник пренатологии и педиатрии. 1999. - № 5. - С. 42 -'45.

43. Егоров, И.В. Дифференциальная диагностика эозинофилии в сочетании с интоксикационным синдромом / И.В. Егоров, Л.Н. Котина // Клиническая медицина. 2004. -Т.82, №8. -С. 70 - 72.

44. Ершов, Ф.И. Цитокины новое поколение биотерапевтических препаратов/ Ф.И. Ершов // Вестник РАМН. - 2006. - №9 - 10. - С. 45 - 50.

45. Ешану, B.C. Цитокины и их биологические эффекты при некоторых болезнях печени / B.C. Ешану // Клинические перспективы гастроэнтерологии, гепатологии. 2004. - №5. - С. 11-16.

46. Железникова, Г.Ф. Иммуноглобулин Е: биологическая роль при инфекционных заболеваниях / Г.Ф. Железникова // Медицинская иммунология. -2002. -Т.4, №4-5. С. 515 - 534.

47. Жуков, Н. А. Описторхоз в эпидемическом очаге как причина хронического колита / Н. А. Жуков, Л. М. Смирнова // Клинические иммунологические аспекты внутренней патологии в эпидемическом очаге описторхоза. — Омск, 1987. С. 57-59.

48. Завойкин, В.Д. Трематодозы / В.Д. Завойкин // Паразитарные болезни. -2005.-№1.-С. 10-32.

49. Зеленова, О.В. Болезнь Ходжкина: предполагаемые причины и иммунологические аспекты / О.В. Зеленова, Н.А. Терентьева, Е.Г. Зеленова // Нижегородский медицинский журнал. 2002. -№2. - С. 73-77

50. Значение сывороточных иммуноглобулинов классов М, G, А и субклассов IgG при остром лимфобластном лейкозе у детей / М.В. Белевцев, Л.Г. Борткевич, С.Е. Буглова и др. // Иммунология. 2003. - №3. - С. 149 - 153.

51. Зубов, Н.А. Патологическая анатомия описторхоза и его осложнений: Автореф. дис. . канд. мед. наук/ II. А. Зубов. Свердловск, 1973. - 24 с.

52. Идиопатический и симптоматический гиперэозинофильные синдромы (сравнительная характеристика на основе 14 наблюдений) / Н.Д. Хорошко, Р.А. Мокеева, А.Г. Туркина и др. // Терапевтический архив. 1997. - №7. - С. 26 - 33.

53. Иммунный ответ у больных хроническим описторхозом / Н.В. Карбышева, А.Н. Трунов, И.Н. Киушкина и др. / Консилиум. 2001. -№ 6. С. 15-18.

54. Интерлейкин -1 альфа, фактор некроза опухолей альфа и интерферон -гамма в сыворотке крови у детей при бронхиальной астме в различные периоды заболевания / О.В. Зайцева, А.В. Лаврентьев, С.В. Зайцева и др. // Аллергология. -2000.-№3.-С.8-13.

55. Инфекционная кариопатология / Н.Н. Ильинских, В.В. Новицкий, Е.Н. Ильинских и др. Изд-во Томского гос. ун-та, 2005. - 168с.

56. Исследование экспрессии антигена CD 95(FAS/APO-l), опосредующего апоптоз, с помощью моноклональных антител ICO-160 при гемобластозах / Е.Р. Полосухина, А.Ю. Барышников, Ю.В. Шишкин и др. // Гематология и трансфузпологня. 2000. - Т.45, №4. - С. 42 - 47.

57. К вопросу о так называемом плазмоклеточиом лейкозе с системным полиорганным специфическим поражением / Р.А. Мокеева, Е.М. Абакумов, О.А. Дягилева и др. // Гематология и трансфузиология. 2001. - Т. 46, №2. - С. 14 - 20.

58. Кадагидзе, З.Г. Цитокины / З.Г. Кадагидзе // Практическая онкология. 2003. -Т. 4, №3. - С. 131 - 139.

59. Казначеев, К.С. Механизмы развития цитокининдуцированного апоптоза / К.С. Казначеев // Гематология и трансфузиология. 1999. - Т. 44, №1. - С. 40 - 44.

60. Кальгина, Г.А. Популяционная структура пириферических лимфоцитов у больных в острую фазу описторхоза / Г.А. Кальгина, Т.Ф.Степанова, A.J1. Шонин // Медицинская паразитология и паразитарные болезни. 2002. - №3. - С.16-18.

61. Карапетян, М.С. К вопросу о роли продуктов метаболизма описторхисов в патогенезе рака ободочной кишки / М.С. Карапетян // Сб. тез. Юбилейной конф.: Описторхоз. Современное состояние проблемы, перспективы развития, Тюмень, 1991.-С. 86 88.

62. Кашкпн, К.Е. Цитокины иммунной системы: основные свойства и иммунобиологическая активность / К.Е. Кашкин // Клиническая лабораторная диагностика. 1998. - №11. - С. 21 - 31.

63. Кетлинский, С.А. Роль Т-хелперов 1 и 2 в регуляции клеточного и гуморального иммунитета / С.А. Кетлинский // Иммунология. 2002. - №2. - С. 77 - 79.

64. Клинические аспекты эозинофилии у детей / Н.А. Коровина, И.Н. Захарова, Л.П. Гаврюшова // Российский педиатрический журнал. 2002. - №2. - С. 42 - 46.

65. Колыгин, Б.А. Диагностика и лечение лимфомы Ходжкина у детей / Б.А. Колыгин // Вопросы онкологии. 2002. - Т.48, №3. - С. 269 - 274.

66. Комарова, Л.С. Опыт определения триптазы эозинофильного катионного белка у пациентов с эозинофилией различного происхождения / Л.С. Комарова, Е.Е. Зуева, Н.Б. Михайлова // Медицинская иммунология. 2004. - Т.6, №3. - С. 353 - 354.

67. Копнин, Б. Г1. Мишени действия онкогенов и опухолевых супрессоров / Б. П. Копнин // Биохимия. 2000. - Т. 65, вып. 1. - С. 5-33.

68. Котелкин, А.Т. Поиски изучения иммунологических маркеров Opisthorchis felineus и исследование возможности нх использования для иммунодиагностики описторхоза: Автореф. дис. . канд. биологических наук / А.Т. Котелкин. -Кольцово, 2000. 20 с.

69. Крыжановский, Г.Н. Некоторые общебиологические закономерности и базовые механизмы развития патологических процессов / Г.Н. Крыжановский // Архив патологии. 2001. - №6. - С. 44-49.

70. Кузнецова, В.Г. О патогенезе хронических и резидуальных форм описторхоза / В.Г. Кузнецова // Медицинская паразитология и паразитарные болезни. 2001. - № 2. - С. 21.

71. Лепехин, А.В. Влияние различных факторов на иммунный статус больных хроническим описторхозом / А.В.Лепехин, Н.С. Бужак // Медицинская паразитология и паразитарные болезни. 1988. - №2. - С. 18-20

72. Леутская, З.К. Некоторые аспекты иммунитета при гельминтозах / З.К. Леутская. М.: Медицина, 1990. - 121 с.

73. Литвинова, М.А. Описторхоз с позиций биологической медицины / М.А. Литвинова // Медицинская паразитология и паразитарные болезни. 2004. - №2. - С. 32-37.

74. Лорие, Ю.Ю. Опухолевая прогрессия и вопросы биологии лимфогранулематоза / Ю.Ю. Лорие // Терапевтический архив. 2000. - № 7. - С.76 - 80.

75. Лысенко А.Я, Владимова М.Г, Кондрашин А.В. Майори Дж. Клиническая паразитология. Женева. ВОЗ, 2002. 734 с.

76. Мазманян, М.В. Паразитарные возбудители: аллергены, триггеры или ингибиторы аллергии / М.В. Мазманян // Аллергические болезни. 2005. - №4. - С. 18-21.

77. Маянский, Н.А. Внутренний путь апоптоза нейтрофилов и механизмы антиапоптозного эффекта гранулоцитарного колониестимулирующего фактора / Н.А. Маянский // Иммунология. 2004. - №6. - С. 329-335.

78. Маянский, Д.Н. Лекции по клинической патологии: Руководство для врачей / Д.Н. Маянский, И.Г. Урсов. Новосибирск, 1997. - 249 с.

79. Медуницын, Н.В. Цитокины и аллергия / Н.В. Медуницын // Иммунология. -1999.-№5.-С. 5-9.

80. Медуницын, Н.В. Цитокины и аллергия, опосредованная IgE / Н.В. Медуницын // Иммунология. 1993. - № 5. - С. 11 - 18.

81. Межклеточные и клеточно-матриксные взаимодействия в патологии / А.А. Иванов, О.П. Гладких, А.В. Кузнецова, Т.И. Данилова // Молекулярная медицина. -2005.-№2.-С. 16-21.

82. Меньшиков, В.В. Лабораторные методы исследования в клинике / Под ред. В.В. Меньшикова. М.: Медицина, - 1987. - 367 с.

83. Механизмы геперэозинофильных реакций и повреждающее действие эозинофилов / А.Н. Абрамычев, В.Г. Иванов, М.И. Алексеева и др. // Терапевтический архив. 1984. - №9. - С. 88 - 93.

84. Минеев, В.Н. Костный мозг и эффекторные клетки при аллергии / В.Н. Минеев, В.В. Иванова, И.И. Нестерович // Аллергология. 2000. - №5. - С. - 27 - 35.

85. Михайлова, А.А. Миелопептиды и их роль в функционировании иммунной системы / А.А. Михайлова // Иммунология. 2001. - №5. - С. 16-18.

86. Модуляция программируемой гибели лимфоцитов периферической крови при хронической вирусной инфекции / О.Б. Жукова, Н.В. Рязанцева, В.В. Новицкий и др. // Цитология. 2007. - №1. - С. 26 - 31.

87. Морозова, В.Т. Хронические лейкозы / В.Т. Морозова. С.А. Луговская, М.Е. Почтарь // Клиническая лабораторная диагностика. 2000. - №12. - С. 25 - 43.

88. Морфометрические характеристики эозинофилов крови и мокроты у больных бронхиальной астмой / Э.Х. Анаев, М.В. Самсонова, А.Л.Черняев, А.Г. Чучалин // Терапевтический архив. 1997. - №3. - С.23-25.

89. Намазова, Л.С. Роль цитокинов в формировании аллергических реакций у детей /Л.С. Намазова, ВА.Ревякина, И.И. Балаболкин //Педиатрия. 2000. - №1. - С. 56 - 65.

90. Нишева., Е.С. Способ диагностики аллергии с помощью изучения морфологии эозинофилов / Е.С. Нишева, Н.А. Потихонова, Р.Д. Попова // Клиническая лабораторная диагностика. 1995. - №2. - С. 29 — 32.

91. Озерецковская, Н.Н. Эозинофилия крови и иммуноглобулинемия Е: особенности регуляции при гельминтозах и аллергический болезнях / Н.Н. Озерецковская // Медицинская паразитология и паразитарные болезни. -1997. № 2. - С. 3 - 7.

92. Олейник, Е.К. Система апоптоза FAS-FASL в онкогенезе / Е.К.Олейник, М.Ю. Донников, В.М. Олейник // Иммунология. 2004. - №4. - С. 251-255.

93. Ольшанская, Ю.В. Хромосомные перестройки при гемобластозах, сопровождающихся гнперэозинофилией / Ю.В. Ольшанская, А.В. Захарова, Е.В. Домрачева // Гематология и трансфузиология. 2005. - Т.50, №4. - С. 42-47.

94. Особенности иммунитета у больных лимфогранулематозом в процессе химиотерапии / А.А. Новик, В.Н. Цыган, В.Ю. Никитин и др. // Гедеон Рихтер. -2001.-№1.-С. 13-20.

95. Пальцев, А.И. Патоморфоз описторхоза / А.И. Пальцев, А.Е. Сердюков, В.Г. Кузнецова //Медицинская паразитология и паразитарные болезни. -1994. № 1. - С. 29 -33.

96. Пальцев, М.А. Межклеточные взаимодействия / М.А. Пальцев, А.А. Иванов. Москва: Медицина, 1995. - 224 с.

97. Патология сердца при идиопатическом гиперэозииофильном синдроме / Р.А. Мокеева, Н.В. Цветаева, Е.А. Семенова и др. // Терапевтический архив. 2000. -№12. - С. 59 - 62.

98. Пинегин, Б.В. Оценка иммунной системы человека: сложности и достижения / Б.В .Пинегин, А.Н. Чередеев, P.M. Хаитов // Вестник РАМН. 1999. - № 5. - С. 11 - 13.

99. Подклетнова, Л.Ф. Влияние кратности заражения на хозяино-паразитарные отношения при описторхозе / Л.Ф. Подклетнова, Т.Ф. Степанова // Медицинская паразитология и паразитарные болезни. 2003. №1.- С.16-21.

100. Полиморфизм некоторых генов иммунологического гомеостаза при гемобластозе у детей / Н.А. Сметанникова, В.А. Белявская, К.С. Казначеев и др. // Вопросы онкологии. 2005. - Т.51, №1. - С. 20 - 21.

101. Польнер, А.А. Роль молекул адгезии в аллергическом воспалении при бронхиальной астме, аллергическом рените и других заболеваниях / А.А. Польнер, Д.С. Минин, С .А. Польнер // Иммунология. 1998. - №2. - С. 13 - 17.

102. Потапнев, М.П. Апоптоз клеток иммунной системы и его регуляция цитокннами / М.П. Потапнев // Иммунология. 2002. - №4. - С. 237 - 243.

103. Программируемая клеточная гибель / под ред. В. С. Новикова. Спб: Наука,1996.-276 с.

104. Ревякина, В.А. Атопический дерматит: роль цитокинов в механизмах развития / В.А. Ревякина, Д.С. Коросговцев // Аллергология. 2000. - №1. - С. 40 - 48.

105. Резник, И.Б. Генетические механизмы развития бронхиальной астмы / И.Б. Резник//Аллергология. 1998. - №1. - С.8-12.

106. Рост содержания лизосомальных катионных белков полиморфно-ядерных лейкоцитов как ответ организма на описторхозную инвазию / В.В. Яковлева, Т.Ф. Степанова, Е.В. Андросова и др. // Медицинская паразитология и паразитарные болезни. 2003. - №3. - С.7-10.

107. Рукавицин, О.А. Выбор терапии и общая выживаемость больных хроническим миелопролиферативными заболеваниями / О.А. Рукавицин, В.П. Пон, А.П. Ссряков // Вопросы онкологии. 2004. - Т.50, №4. - С. 485 - 490.

108. Самуилов, В.И. Программируемая клеточная смерть / В.И. Самуилов // Биохимия. 2000. - Т. 65, вып. 8.-С. 1032-1041.

109. Семенкова, Е.Н. Клинические аспекты гиперэозинофилии / Е.Н. Семенкова, С.В. Моисеев, О.Г. Наместникова // Клиническая медицина. 2004. - №2. - С. 28 - 31.

110. Сенников, С.В. Альтернативный сплайсинг в форхмировании полиморфной структуры системы цитокинов / С.В. Сенников, А.Н. Силков, В.А. Козлов // Под ред. В.А. Козлова, С.В. Сенникова. Новосибирск: Наука, - 2004. - 324 с.

111. Паразитарные болезни человека, их профилактика и лечение / В.П. Сергиев, Лебедева М.Н., Фролова А.А., Романенко Н.А.// Эпидемиология и инф. болезни.1997.-№2.-С. 8- 10.

112. Симбирцев, А.С. Цитокины новая система регуляции защитных реакций организма/А.С. Симбирцев//Цитокины и воспаление.-2002.-T.l,№ 1.-С. 9- 17.

113. Симбирцев, А.С. Цитокины: классификация и биологические функции / А.С. Симбирцев // Цитокины и воспаление. 2004. - №2. - С. 16-21.

114. Система цитокинов у больных хроническими диффузными заболеваниями печени / В.Т. Ивашкин, С.Н. Маммаев, Е.А. Лукина и др. // Иммунология. 2001. -№1. - С. 46-49.

115. Спонтанный и липополисахариднндуцированный синтез цитокинов клетками крови в норме и при алллергопатологиях / Е.Г. Исаченко, Т.И. Виткина, С.А. Геронина и др. // Экспериментальная и клиническая аллергология. 1999. -№5.-С. 37 - 39.

116. Стандартизация методов нммунофенотипирования клеток крови и костного мозга человека / А.А. Тотолян, И.А. Болдуева, Л.И. Бубнова и др. // Клиническая лабораторная диагностика. 2002. - №1. - С. 44 - 50.

117. Старые и новые опухоли лимфатической системы / А.И. Воробьев, A.M. Кременецкая, Ю.Ю. Лорие и др. // Терапевтический архив. 2000. - №7. - С. 9 - 13.

118. Стимуляция бактериального роста цитокииом ФНОа в системе in vitro / А.С. Томова, А.А. Терехов, О.В. Тихонова и др. // Молекулярная генетика, микробиология и вирусология. 2005. - №2. - С. 37-39.

119. Структурно-функциональная характеристика и роль эозинофилов в патогенезе и лечении бронхиальной астмы / Э.Х. Анаев, А.Л. Черняев, А.Р. Татарский и др. // Пульмонология. 1994. - №4. - С. 82 - 85.

120. Токмалаев. А.К. Гельмиптозы человека / А.К. Токмалаев // Российский медицинский журнал. 2001. - Т.9, № 16. - С. 15 - 18.

121. Тотолян, А.А. Роль хемокинов и их рецепторов в иммунорегуляции / А.А. Тотолян // Иммунология. 2001. - №5. - С. 7 - 10.

122. Трапезников, Н.Н. Справочник по онкологии / Н.Н. Трапезников, И.В. Поддубная, Т.И. Артамонов. М: Каппа, 1996. - 624 с.

123. Труфакин, В.А. Проблемы гистофнзиологии иммунной системы / В.А. Труфакин, А.В. Шурлыгнна // Иммунология. 2002. - №1. - С. 4 - 7.

124. Уманский, С.Р. Апоптоз: молекулярные и клеточные механизмы / С. Р. Уманский // Молекулярная биология 1996. - Т. 30. - С. 487-502.

125. Участие системы Fas/Fas-лиганд в регуляции гомеостаза и функционировании клеток иммунной системы / А.А. Фильченков, Ю.М. Степанов, ВМ. Липкин, HJE. Купшннский // Аллергология и иммунология. -2002. Т. 3, № 1. - С. 24-35.

126. Фассахов, Р.С. Роль эозинофилов при бронхиальной астме / Р.С. Фассахов, С.В. Бойчук, И.М. Рахматуллин // Терапевтический архив. 1992. - №1. - С.147 -151.

127. Феномен трехклеточной кооперации макрофаги-Т-лимфоциты-кроветворные клеткп в гемопоэтическом островке костного мозга при стрессе / В.П. Шахов, Б.Ю. Гумилевский, С.С. Шахова и др. // Иммунология. 1999. - №3. - С. 20 - 27.

128. Фильченков, А.А. Апоптоз (физиологическая гибель клетки) / А.А. Фильченков, Р.С. Стойка К. : Витус, 1995. - 24 с.

129. Флеминг, М.В. О взаимовлиянии аллергических реакций и злокачественных процессов (современное состояние проблемы) / М.В. Флеминг, В.В. Климов, Н.В. Чердынцева// Сибирский онкологический журнал. 2005. - № 1. - С. 96 - 101.

130. Фрейдлин, И. С. Ключевая позиция макрофагов в цитокиновой регуляторной цепи / И. С. Фрейдлин // Иммунология. 1995. - №3. - С. 44 - 48.

131. Фрейдлин, И.С. Паракринные и аутокринные механизмы цитокиновой иммунорегуляции / И.С. Фрейдлин // Иммунология. 2001. - №5. - С. 4 - 7.

132. Фрейдлин, И.С. Регуляторпые функции провоспалительных цитокинов и острофазных белков / И.С. Фрейдлин, П.Г. Назаров // Вестник РАМН. 1999. - № 5. -С. 28- 32.

133. Фрейдлин, И.С. Цитокины и межклеточные контакты в противоинфекционной защите организма / И.С. Фрейдлин // Соровский образовательный журнал. — 1996. №7. — С. 19-25.

134. Хаитов, P.M. Иммунология / P.M. Хаитов, Г.А. Игнатьева, И.Г. Сидорович. -М.: Медицина, 2000. 431 с.

135. Хаитов, P.M. Основные задачи клинической иммунологии по изучению функциональной активности фагоцитирующих клеток / P.M. Хаитов, Б.В. Пинегин // Иммунология. 1995. - №3. - С. 6 - 10.

136. Хват, II.C. Особенности состояния иммунного статуса у больных почесноклеточным раком / Н.С. Хват, Е.А. Шкапова, А.А. Асвченко, J1.M. Куртасова //Медицинская Иммунология. 2006. - Т.8, №2 - 3. - С. 354.

137. Хейхоу, Ф.Г.Дж. Гематологическая цитохимия / Ф.Г. Дж. Хейхоу, Д. Кваглино. М.: Москва, 1983. - 230 с.

138. Хехмокины и прогрессия злокачественных новообразований / II.B. Чердынцева, П.А. Гервас, Н.В. Литвяков и др. // Медицинская иммунология. -2006.-Т.8, №2-3.-С. 355.

139. Чубукина, Ж.В. Особенности клеточного иммунитета у больных множественной миеломой / Ж.В. Чубукина, Л.Н. Бубнова, С.С. Бессхмельцев // Медицинская иммунология. 2006. - Т.8, №2 - 3. - С. 356.

140. Чучалин, А.Г. Гиперэозинофилия при заболеваниях органов дыхания / А.Г. Чучалин // Терапевтический архив. 2003. - №3. - С. 5 - 15.

141. Шахламов, В.А. Прошлое, настоящее и будущее проблем патологии клетки / В.А. Шахламов // Архив патологии. 1998. - №5. - С. 71-74.

142. Швыдченко, И.Н. Цитокинсекретирующая функция нейтрофильных гранулоцитов / И.Н. Швыдченко, И.В. Нестерова, Е.Ю. Синельникова // Иммунология. 2005. - №1. - С. 31 - 33.

143. Шиффман, Ф. Дж. Патофизиология крови / Ф. Дж. Шиффман. Спб.: БИНОМ, 2000.-446 с.

144. Шлычков. А.В. Неспецифические заболевания легких и описторхоз / А.В. Шлычков, С.И. Кучер // Смешанные инфекции и инвазии / Омск, 1981. С. 67 - 71.

145. Экогенетика описторхоза и персистенция вируса Эпштейна-Барр / Е.Н. Ильинских, В.В. Новицкий, А.В. Лепехин. Новосибирск: «Крокус», 2000. -267 с.

146. Эозинофильный гастроэнтерит / А.С. Логинов, А.И. Парфенов, И.Н. Ручкина, Н.И. Екисенина // Терапевтический архив. 1998. - №2. - С. 77 - 79.

147. Эпидемиология, клиника и профилактика описторхоза / А.В. Лепехин, В.В. Мефодьев, В.Г. Филатов, Н.С. Бужак. Томск, 1992. - 230 с.

148. Ярилин, А.А. Апоптоз: природа феномена и его роль в норме и при патологии / Актуальные проблемы патофизиологии. Под ред. Б.Б. Мороза. М,: Медицина, 2001. - С. 13 - 56.

149. Ярилин, А.А. Гомеостатпческпе процессы в иммунной системе: контроль численности лимфоцитов / А.А. Ярилин // Иммунология. 2004. - №5. - С. 312 - 320.

150. Ярилин, А.А. Межклеточная кооперация при иммунном ответе / А.А. Ярилин // Вестник РАМН. 1999. - №4. - С. 25 - 29.

151. Ярилин, А.А. Основы иммунологии / Под ред. А.А. Ярилина. М: Медицина, 1999. - 608 с.

152. Ярилин, А.А. Спмбиотические взаимоотношения клеток иммунной системы / А.А. Ярилин // Иммунология. 2001. - №4. - С. 16 - 20.

153. Ярилин, А.А. Система цитокинов и принципы ее функционирования в норме и при патологии / А.А. Ярилин // Иммунология. 1997. - №5. - С. 7 - 14.

154. Ячник, А.И. Механизмы реализации хронического воспаления при бронхиальной астме и возможные подходы к лечению / А.И. Ячник, Г:П. Победенная // Украинский пульмонологический журнал. 2005. - №1. - С.60-63.

155. A rare case of Toxocara canis cerebral vasculitis / R. Helbok, C. Brenneis, K. Engelhardt et al. // Eur J Neurol. 2007. - Vol. 14, №1. - P.49-53.

156. A case of gastroesophageal reflux disease with marked eosinophilia / R. Miyoshi, Y. Yasunaga, T. Kizu // Nippon Shokakibyo Gakkai Zasshi. 2007. - Vol.104, №4. - P. 542547.

157. A human high affinity interleukin-5 receptor (IL5R) is composed of an IL5-specific a-chain and а В chain shared with the receptor for GM-CSF / J. Tavernier, R. Devos, S. Cornelis et al.// Cel. -1991. -Vol. 66, №7.-P. 1175.

158. A role for eosinophils in transplant rejection / M. Goldman, A. Le Moine, M. Braun et al. // Trends. Immunol. 2001. - Vol.22, №5. - P. 247 -251.

159. A tyrosine kinase created by the fusion of the PDGFRA and FIP1L1 genes as a therapeutic target of imatinib in idiopathic hypereosinophilic syndrome / J. Cools, D.J. DeAngelo, J. Gotlib et al. // N. Engl. J. Med. 2003. - Vol. 348, №1. - P. 1201 - 1214.

160. Abnormal clones of T cells producing interleukin-5 in idiopathic eosinophilia / H.U. Simon, S.G. Plotz, R. Dummer, K. Blaser // N Engl J Med. 1999. - Vol. 341, №9. - P. 1112-1120.

161. Abrahamsen, A.F. What is actually Hodgkin disease? / A.F. Abrahamsen // Tidsskr. Nor. Iaegeforen 2000. - Vol. 120, №23. - P.2788—2790.

162. Activation of eosinophils in cancer patients treated with IL-2 and IL-2-generated lymphokine-activated killer cells / D.S. Silberstein, D.D. Schoof, M.L. Rodrick // J. Immunol. 1989. - Vol. 142, №6. - P. 2162-2167.

163. Activation of SAPK/JNK by TNF Receptor 1 Through a Noncytotoxic TRAF2-Dependent Pathway / G. Natoli, A. Costanzo, A. Iaimi et al. // Science. 1997. - Vol. 275; № 5297. -P.200-203.

164. Activation of the STAT3/Acute Phase Response Factor Transcription Factor by Interleukin-5 / E. Caldenhoven, T. van Dijk, J. Raaijmakers et al. // J. Biol. Chem. 1995. -Vol.270, №8. - P.25778-25784.

165. Adachi, T. The mechanism of IL-5 signal transduction / T. Adachi, R. Alam // Am. J. Physiol. 1998. - Vol. 275. - P. 623-633.

166. Altman, L.C. The role of cytokines in allergic eosinophilic disease / L.C. Altman, C. Baker, D. Luchtel // J. Immunol. 1995. - Vol. 95, №2. - P. 313 - 320.

167. Analysis of the survival of mature human eosinophils: interleukin-5 prevents apoptosis in mature human eosinophils / Y. Yamaguchi, T. Suda, S. Ohta et al. // Blood. -1991. Vol.78, № 3. - P. 2542 - 2547.

168. Anderson, S.M. Activation of src-related tyrosine kinases by IL-3 / S.M. Anderson, B. Jorgensen // J. Immunol. 1995. - Vol.155, №2. - P.1660-1670.

169. Annexin V-affinity assay: a review on an apoptosis detection system based on phosphatidylserine exposure / M. Van Engeland, L. J. Nieland, F. C. Ramaekers et al. // Cytometry.- 1998.-Vol. 31.-P. 1-9.

170. Apoptosis in human eosinophils: Programmed cell death in the eosinophils leads to phagocytosis by macrophages and is modulated by IL-5 / N. Stern, L. Meagher, J. Savil, C. Haslett // J. Immunol. 1992. - Vol.148, №6. - P. 3543.

171. Apoptotic eosinophils express IL-2R chains alpha and beta and co-stimulatory molecules CD28 and CD86 / K. Seton, L. Hakansson, M. Carlson et al. // Respir. Med. -2003. Vol.97, №8. - P. 893-902.

172. Apoptotic response of eosinophils in chronic eosinophilic pneumonia / N. Saita, T. Yamanaka, H. Kohrogi et al. //Eur. Respir. J. -2001. Vol.3, №17. - P.190-194.

173. Arbutnot, P. Hepatitis В vims and hepatocellular carciboma / P. Arbutnot, M. Kevv // Int. J. Exp. Pathol. 2001. - Vol. 82, N2. - P. 77-100.

174. Asakura, H. Selective eosinophil adhesion to fibroblast via IFN-gamma-included galectin-9 / H. Asakura, I. Kashio, K. Nakamura et al. // J. Immunol. 2002. - Vol.169, №10.- P. 5912-5918.

175. Ayoub, J.P. Therapeutic and prognostic implications of peripheral blood lumphopenia in patiens with Hodgkin\s disease / J.P. Ayoub, J.L. Palmer, F. Cabanillas // Leuk Lumpoma. 1999. - Vol. 34, № 5-6. - P. 19 - 27.

176. Baggiolini, M. CC chemokines in allergic inflammation / M. Baggiolini, C.A. Dahinden // Immunol Today. -1994. Vol. 15, №5. -P. 127 - 133.

177. Barnes, P.J. Differential regulation of human eosinophil IL-3, IL-5, and GM-CSF receptor alpha-chain expression by cytokines / P.J. Barnes // The Journal of Immunology. -2003. Vol. 170, №8. - P. 5359 - 5366.

178. Bates, M.E. ERK1 and ERK2 Activation by Chemotactic Factors in Human Eosinophils Is Interleukin 5-dependent and Contributes to Leukotriene C4 Biosynthesis / M.E. Bates, V.L. Green, P. J. Bertics // J. Biol. Chem. 2000. - Vol. 275, №6. - P. 1096810975.

179. Baylisascaris procyonis / S.C. Shafir, W. Wang, F.J. Sorvillo et al. // Emerg. Infect. Dis. 2007. - Vol.13, №1. - P. 172-173.

180. Bentley, A.M. Human late asthmatic reactions / A.M. Bentley, A.B. Kay, S.R. Durham // Clin. Exp. Allergy. 1997. - Vol.27, №1. - P. 71-86.

181. Bletry, O. De l'hypereosinophilie au syndrome hypereosinophilique / O. Bletry // Rev. Fr. Allergol. 1990. - Vol. 30, №2. - P. 87 - 90.

182. Bochner, B.S. Systemic activation of basophils and eosinophils: markers and consequences / B.S. Bochner // J. Allergy Clin. Immunol. 2000. - Vol. 5, №2. - P. 292 -302.

183. Boniface, S. Pathophysiology of the IgE-dependent reaction in respiratory allergy / S. Boniface, A. Magnan // Rev. Pneumol Clin. 2003. - Vol. 59, №2. - P. 77 - 83.

184. Brown, M.A. Functions of IL-4 and control of its expression / M.A. Brown, J. Hural // Crit. Rev Immunol. 1997. - Vol. 17, №1. - P. 12 - 17.

185. Burke-Gaffhey, A. Eotaxin stimulates eosinophil adhesion to human lung microvascular endothelial cells / A. Burke-Gaffhey, P.G. Hellewell // Biochem Biophys Res Commun. 1996. - Vol. 227, №6. - P. 35 - 40.

186. Capron, M. Role of IgE receptors in effectors function of human eosinophils / M. Capron, H.L. Spiegelberg, L. Prin // J. Immunol. 1984. Vol. 232, №9. - 462 - 468.

187. CD44 and CD69 represent different types of cell-surface activation markers for human eosinophils / K. Matsumoto, J. Appiah-Pippim, R.P. Schleimer et al. // Am J Resp Cell Mol Biol. 1998. - Vol. 18, №1. - P. 860 - 866.

188. CD48 Is an Allergen and IL-3-Induced Activation Molecule on Eosinophils / I. Munitz, R. Eliashar, M. Khodounetal // J. Immunol. 2006. - Vol.177, №1. - P.77 - 83.

189. CD69 is expressed by human eosinophils activated in vivo in asthma and in vitro by cytokines / A. Hartnell, D.S. Robinson, A.B. Kay, AJ. Wardlaw // Immunology. 1993. -Vol. 80,№4.-P. 281 -286.

190. Cellular localization of IL-5 expression in rectal carcinoma with eosinophilia / K. Tajima, M. Yamakawa, Y. Inaba et al. // Hum Pathol. 1998. - Vol. 29, №9. - P. 1024 -1028.

191. Chemokine receptor usage by human eosinophils / H. Heath, S. Qin, P. Rao et al. // J Clin Invest. 1997. - Vol. 99, №9. - P. 178 - 184.

192. Chemokines in asthma: cooperative interaction between chemokines and IL-13 / N. Zimmermann, G.K. Hershey, P.S. Foster et al. // J Allergy Clin. Immunol. 2003. - Vol. 111. №2.-P. 227-232.

193. Chung, K.F. Cytokines in asthma / K.F. Chung, P.J. Barnes // Thorax. 1999. -Vol.54, №6.-P.825-857

194. Classification and pathogenesis Hodgkin lymphoma / IT.D. Foss, N. Marafioti, H. Stein et al. // Pathologe. 2000. - Vol. 21. №2. - P. 113—123.

195. Clerici, M. Cytokine dysregulation in invasive cervical carcinoma and other human neoplasias: time to consider the TH1/TH2 paradigm / M. Clerici, G. Shearer, E. Clerici // Nat. Cane. Inst. 1998. - Vol. 90, №4. - P. 261 - 263.

196. Cloning, expression and characterization of the human eosinophil eotaxin receptor / B.L. Daugherty, S.J. Siciliano, J. DeMartino et al. // J Exp Med. 1996. - Vol. 183, №6. - P. 2349 -2354.

197. Cooperation between interleukin-5 and the chemokine, eotaxin, to induce eosinophil accumulation in vivo / P.D. Collins, S. Marleau, D.A. Griffiths-Johnson et al. // J Exp Med. -1995.-Vol. 182, №.5.-P. 1169- 1174.

198. Cytokine network and dysregulated apoptosis in atopic dermatitis / M. Alcdis, A. Trautmann, S. Klunker // Acta Odontol. Scand. 2001. - Vol. 59, №3. - P. 178 - 182.

199. Cytokines and adhesion molecules in respiratory allergy / A.G. Palma-Carlos, M.L. Palma-Carlos, M.C. Santos et al. // Allerg Immunol. 1995. - Vol. 27, №6. - P. 178 - 181.

200. Cytokines in symptomatic asthmatic airways / D.H. Broide, M. Lotz, A.J. Cuomo et al. // J. Allergy Clin. Immunol. 1992. - Vol. 89. - P. 958-967.

201. Decreased Expression of Membrane IL-5 Receptor {alpha} on Human Eosinophils: IL-5 Down-Modulates Its Receptor Via a Proteinase-Mediated Process / L.Y. Liu, J.B. Sedgwick, M.E. Bates // J. Immunol. 2002. - Vol. 169, №1. - P. 6459 - 6466.

202. Defense against the immune barrage: Helminth survival strategies / M. Riffkin, H. Seow. D. Jackson et al. // Immunol. Cell Biol. 1996. - Vol.14, №2. - P. 564-574.

203. Denburg, J.A. The origins of basophiles and eosinophils in allergic inflammation / J.A. Denburg // J. Allergy clin. Immunol 1998. - Vol.102, № 5. - P. 74-76.

204. Detection of GM-CSF in asthmatic bronchial epithelium and descrease bu inhaled corticosteroids / A.R. Sause, R.N. Poston, S.J. Lane et al. // Amer. Resp. Dis. 1993 -Vol.147, №6. -P.1557-1561.

205. Dewson, G. Expression of Bcl-2 and Its Homologues in Human Eosinophils / G. Dewson, G. M. Walsh, A. J. Wardlaw // Am. J. Respir. Cell Mol. Biol. 1999. - Vol.20, №5.-P. 720-728.

206. Dewson, G. Interleukin-5 inhibits translocation of Bax to the mitochondria, cytochrome с release, and activation of caspases in human eosinophils / G. Dewson, G.M. Cohen, A.J. Wardlaw // Blood. 2001. - Vol. 98, №8. - P. 2239 - 2247.

207. Differential chemokine expression in tissues involved by Hodgkin's disease: direct correlation of eotaxin expression and tissue eosinophilia / J. Teruya-Feldstein, E.S. Jaffe, P.R. Burd et al. // Blood. 1999. - Vol. 93, №7. - P. 2463 - 2470.

208. Differential extraction of eosinophil granule proteins / L.E. Ohnuki, L.A. Wagner,

209. A. Georgelas et al. // J. Immunol Methods. 2005. - Vol.307, №1-2. - P. 54-61.

210. Differential Regulation of Interleukin 5-stimulated Signaling Pathways by Dynamin / M.M. Gorska, O. Cen, Q. Liang et al. // J. Biol. Chem. 2006. - Vol. 281, №12.-P. 14429-14439.

211. Dimayuga, E. Eosinophil peroxidase levels in hearts and lungs of mice infected with Toxocara canis / E. Dimayuga, M. Stober, S. G. ICayes // J. Parasitol. 1991. -Vol.77, №3. - P. 461-466.

212. Disruption of fas receptor signaling by nitric oxide in eosinophils / H. Hebestreit,

213. B. Dibbert, I. Balatti et al. // J. Exp. Med. 1998. - Vol.187, №7. - P. 415-425.

214. Does IgE bind to and activate eosinophils from patients with allergy? / IT. Kita, M. Kaneko, IC.R. Bartemes et al. // Immunol. 1999. - Vol.162, №11.- P. 6901-6911.

215. Dominant effect of II50Val of the human IL-4 receptor alpha chain IgE syntesis / H. Mitsuyasu, Y. Yanagihara, X.Q. Mao et al. // Cell Immunol. 1990. - Vol. 162, №9. -P. 1227-1231.

216. Dorsch, M. Tyrosine phosphorylation of She is induced by IL-3, IL-5 and GM-CSF / M. Dorsch, H. Hock, T. Diamantstein // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1994. - Vol.200, №8. - P.562-568.

217. Dunn, I.J. Cell injury caused by Trichinella spiralis in the mucosal epithelium of B10A mice / I.J. Dunn, K.A. Wright // J. Parasitol. 1985. - Vol.71, №6. - P. 757-766.

218. Dunn, I.J. Trichinellosis / I.J. Dunn, P.E. Palmer // Parasite Immunol. 1993. -Vol.5, №1.-P. 13-24.

219. Dvorak, A.M. Ultrastructural analysis of human eosinophils / A.M. Dvorak, P.F. Weller // Chem Immunol. 2000. - Vol. 76, №5. - P. 1 - 28.

220. Effect of a thromboxane receptor antagonist on PGD2- and allergen-induced bronchoconstriction / R.C. Beasley, R.L. Featherstone, M.K. Church et al. // J. Appl. Physiol. 1989. - Vol. 66, №4. - P. 1685-1693.

221. Effects of interleukin 12 on immune responses and host protection in mice infected with intestinal nematode parasites / F.D. Finkelman, K.B. Madden, A.W. Cheever et al. // J. Exp. Med. 1994. - Vol.156, №9. - P. 1463 - 1471.

222. Elemental signals regulating eosinophil accumulation in the lung / P.S. Foster, A.W. Mould, M. Yang et al. // Immunol. Rev. 2001. - Vol. 6, №7. - P. 179 - 181.

223. Elsas, P.X. Eosinophil cytotoxity enhancing factor: purification, characterization and immunocytochemical localization on the monocyte surface / P.X. Elsas, M.I. Elsas, A.J. Dessein // Eur. J. Immunol. 1990. - Vol. 20, №5. - P. 1143-1151.

224. Eosinophil ablatin and tumor development / E. Rcali, J.W.Greiner, A. Corti // Cancer res.-2003. Vol. 61.-P. 5517 - 5522.

225. Eosinophil recruitment to the lung in a murine model of allergic inflammation. The role of T cells, chemokines and adhesion receptors / J. Gonzalo, C.M. Lloyd, L. Kremcr et al. // J Clin Invest. 1996. - Vol. 98, №3. - P. 2332 - 2345.

226. Eosinophilia during fludarabine treatment of chronic lymphocytic leukaemia / O. Sezer, P. Schmid, M. Hallek et al. // Ann. Hematol. 1999. - Vol. 78, №6. - P. 475 - 477.

227. Eosinophilia in transgenic mice expressing interleukin 5 / L.A. Dent, M. Strath, A.L. Mellor, C.J. Sanderson//J Exp Med. 1990. - Vol. 172, №7. - P. 1425 - 1431.

228. Eosinophilic esophagitis: an allergist's approach / J.M. Norvell, D. Venarske, D.S. Hummell et al. // Ann. Allergy Asthma Immunol. 2007. - Vol. 98, №3. - P. 207-238.

229. Eosinophilic inflammation in asthma / J. Bousquet, P. Chanez, J.Y. Lacoste et al. //N. Engl. J. Med. 1990. - Vol.323, №8. - P. 1033-1039.

230. Eosinophilic vasculitis: A rare presentation of Whipple's disease / W. Al-Hamoudi, F. Habbab, C. Nudo et al. // Can. J. Gastroenterol. 2007. - Vol. 21, №3. - P. 189-191.

231. Eosinophils and eosinophil-associatcd cytokines in allergic inflammation / A.B. Kay, L. Barata, Q. Meng et al. // Int. Arch Allergy Immunol. 1997. - Vol. 113, №3. - P. 196 - 199.

232. Eosinophil-tumor cell interaction in advanced gastric carcinoma: an electron microscopic approach / R.A. Caruso, A. Bersiga, L. Rigoli et al. // Anticancer Res. -2004. Vol. 22, №6. - P. 3833 - 3836.

233. Eotaxin protein and gene expression in guinea pig lungs: Constitutive expression and upregulation after allergen challenge / D. Li, D. Wang, D.A. Griffiths-Johnson et al. //EurRespir J. 1997. - Vol. 10, №2. -P. 1946- 1954.

234. Epstein-Barr vims BALF-1 is a Bcl-2-like antagonist of the herpesvirus antiapoptotic Bcl-2 proteins / D.S. Bellows, IT. Howell, C. Pearson et al. // J. Viral. -2002. Vol. 76, №5. - P. 2469-2479.

235. Evidence for IgE-dependent cytotoxity by rat eosinophils / M. Carpon, H. Bazin, M. Josef, A. Carpon // J. Immunol. 1981. - Vol.126, №5. - P. 1764-1768.

236. Evidence that interleukin-4 suppression of lymphokine-activated killer cell induction is mediated through monocytes / B. Brooks, H. Parry, J. Lawry et al. // Immunol. 1992. - Vol. 75, №2. - P. 343 - 348.

237. Expression of eotaxin by human lung epithelial cells / C.M. Lilly, H. Nakamura, H. Kesselman et al. // J Clin Inves. 1997.-Vol. 99, №9.-P. 1767- 1773.

238. Expression of Thl and Th2 immunoregulatory cytokines by human eosinophils /

239. G. Woerly, N. Roger, S. Loiseau et al. // Int. Arch Allergy Immunol. 1999. - Vol. 118, №4.-P. 95 -97.

240. Extracellular deposition of eosinophil and neutrophil granule proteins in the IgE-mediated cutaneous late phase reaction / K.M. Leiferman, T. Fujisawa, B.H. Gray, GJ. Gleich // Lab. Invest. 1990. - Vol.62, №8. - P. 579-589.

241. Falcone, F.H. Parasite role reversal: worms on trial / F.H. Falcone, D.I. Pritchard // Trends Parasitol. 2005. - Vol.21, №4. - P. 157-160.

242. Familial eosinophilia: clinical and laboratory results on a U.S. kindred / A.Y. Lin, T.B. Nutman, D. Kaslow et al. // Am J Med Genet. 1998. - Vol. 76, №5. - P. 229-237.

243. Fas-mediated apoptosis in cultured human eosinophils / A. Druilhe, Z. Cai, S. Haile et al. // The American Society of Hematology. 1996. - Vol.87, №7. - P.2822-2830.

244. Filariasis transmission potential of mosquitoes to humans of different age groups /

245. H.A. Farid, Z.S. Morsy, A.M. Gad et al. // J. Egypt. Soc. Parasitol. 1997. - Vol.27, №2. - P. 355-364.

246. Frick, W.E. Hypodense eosinophils in allergic rhinitis / W.E. Frick, J.B. Sedgwick, W.W.Busse// J Allergy Clin Immunol. 1988.-Vol. 82, №2.-P. 119-125.

247. Frjefelt, J.S. Specific eosinophils in patients with intestinal parasitic diseases / J.S. Frjefelt // J. Exp. Med. 1998. - Vol. 172, №5. - P. 1563 - 1572.

248. From the Cover: The laminin receptor modulates granulocyte-macrophage colony-stimulating factor receptor complex formation and modulates its signaling / J. Chen, J. M. Carcamo, O. Borquez-Ojeda et al. // PNAS. 2003. - Vol. 100, №24. - P. 14000 -14005.

249. Fukuda, T. Heterogeneity of human eosinophils / T. Fukuda, G.J. Gleich // J Allergy Clin Immunol. 1989. - Vol. 83, №6. - P. 369-373.

250. Fulkerson, P.C. Eosinophils and CCR3 regulate interleukin-13 transgene-induced pulmonary remodeling / P.C. Fulkerson, C.A. Fischetti, M.E. Rothenberg // Am. J. Pathol. 2006. - Vol.169, №6. - P. 2117-2126.

251. G2 Arrest in Response to Topoisomerase II Inhibitors. The Role of p53 / B. Clifford, M. Beljin, G. R. Stark et al. // Cancer Research. 2003. - Vol. 63. - P. 4074- ' 4081.

252. Gartner, I. Separation of human eosinophils in density gradients of polyvinylpyrrolidone-coated silica gel (Percoll) /1. Gartner // Immunology. 1980. - № 40.-P. 133 - 136.

253. Generation of clusters of free eosinophil granules (Cfegs) in seasonal allergic rhinitis / L. Greiff, J.S. Erjefalt, M. Andersson et al. // Allergy. 1998. - Vol. 53, №4. -P. 200-203.

254. Genetic variants of mast cell chymase and eczema / X.Q. Mao, T. Shirakawa, K. Yoshikawa et al. // Lancet. 1996. - Vol.348. №9. - P. 581-583.

255. Giembycz, M.A. Pharmacology of the Eosinophil / M.A. Giembycz, M.A. Lindsay // Pharmacol. Rev. 1999. - Vol.51, №4. - P. 213-340.

256. Gleich, G.J. The eosinophilic leukocyte: structure and function / GJ. Gleich, C.R Adolphson // Adv. Immunol. 1986.- Vol.39, №4. - P. 177-253.

257. Gleich, G.J. The hypercosinophilic syndromes: still more heterogeneity / G.J. Gleich, K.M. Leiferman // Curr. Opin. Immunol. 2005. - Vol. 17, №6. - P. 379-384.

258. GM-CSF, IL-3 and IL-5: Crosscompetition on human hemopoietic cells / A.F. Lopez, MJ. Elliot, I. Woodcock et al. // Immunol. Today. 1992. - Vol.13, №7. -P. 495-500.

259. Hamelmann, E. IL-5-induced airway eosinophilia the key to asthma? / E. Hamelmann , E.W. Gelfand // Immunol. Rev. 2001. - Vol. 179. - P. 182-191.

260. Helmby, H. IL-18 regulates intestinal mastocytosis and Th2 cytokine production independently of IFN-y during trichinella spiralis infection / H. Helmby // J. Immunol. -1993. Vol. 169. - P. 2553 - 2560.

261. Heterogeneity of human eosinophils. II. Variability of respiratory burst activity related to cell density / L. Prin, M. Capron, A.B. Tonnel, H. Taelman // Clin. Exp. Immunol. 1984. - Vol. 57, №6. - P. 735-742.

262. Heterogeneity of human eosinophils. / L. Prin, J. Charon, M. Capron et al. // Clin Exp Immunol. 1984. - Vol.57, №4. - P. 735-742.

263. High expression of the chemokine receptor CCR3 in human blood basophils: role in activation by eotaxin, MCP-4 and other chemokines / M. Uguccioni, C. R. Mackay, P. Ochensberger et al. // J. Clin. Invest. 1997. - Vol. - 100, № 5. - P. 1137 - 1143.

264. Hodgkin/Reed-Stemberg cells induce fibroblasts to secrete eotaxin, a potent chemoattractant for T cells and eosinophils / F. Jundt, I. Anagnostopoulos, K. Bommert et al. // Blood. 1999. - Vol. 94, № 6. - P. 2065 - 2071.

265. Hogan, S.P. Cytokines as targets for the inhibition of eosinophilic inflammation / S.P. Hogan, P.S. Foster // Pharmacol. Ther. 1997. - Vol. 74, №3. - P. 259 - 263.

266. Horton, J. Albendazole: a review of anthelmintic efficacy and safety in humans / J. Horton // Parasitology. 2000. - Vol. 121, №2. - P. 113 - 132.

267. Hsu, S.M. Interleukin-6, but not interleukin-4, is expressed by Reed-Stemberg cells in Hodgkin's disease with or without histologic features of Castleman's disease / S.M.Hsu, S.S. Xie,P.L. Hsu //Am. J. Pathol.- 1992.- Vol. 141, №1.-P. 129 -138.

268. Human dermal fibroblasts express eotaxin: molecular cloning, mRNA expression, and identification of eotaxin sequence variants / J. Bartels, C. Schluter, E. Richter et al. // Biochem Biophys Res Commun. 1996. - Vol. 225, №2. - P. 1045 - 1051.

269. Human eosinophils express Bcl-2 family proteins: modulation of Mcl-1 expression by IFN-gamma / A. Druilhe, M. Arock, L. Le Goff, M. Pretolani // Am. J. Respir. Cell Mol. Biol. 1998. - Vol.18, №3. - P. 315-322.

270. Human eotaxin is a specific chemoattractant for eosinophil cells and provides a new mechanism to explain tissue eosinophilia / E.A. Garcia-Zepeda, M.E. Rothenberg, R.T. Ownbey et al. // Nature Medicine. 1996. - Vol. 2. №8. - P. 449 - 456.

271. Human eotaxin represents a potent activator of the respiratory burst of human eosinophils / J. Eisner, R. Hochstetter, D. Kimmig, A. Kapp // Eur J Immunol. 1996. -Vol. 26, №9.-P. 1919 - 1925.

272. II50Val variant of interleukin-4-receptor (IL-4R) a chain upregulates IgE syntesis by B-lymphocytes and predicts childhood asthma / H. Mitsuyasu, K. Izuhara, X.Q. Mao et al. // Nat. Genet. 1998.-Vol.19, №2.-P. 119-120.

273. IL10 treated dendritic cells decrease airway hyperresponsiveness and airway inflammation in mice / Т. Koya, H. Matsuda, K. Takeda et al. // J. Allergy Clin. Immunol. -2007. Vol.10, №2. - P. 1267-1243.

274. IL-4 induces eotaxin in human dermal fibroblasts / M. Mochizuki, J. Schroder, E. Christophers et al. // Int. Arch. Allergy Immunol. 1999. - Vol. 12, №2. - P. 19 - 23.

275. IL-5 upregulates FcRI -chain messenger RNA in eosinophils / N. Terada, A. Konno, Y. Terada et al. // J. Allergy Clin. Immunol. 1995. - Vol.96, №7. - P. 11611169.

276. Impact of MK886 on Eosinophil Counts and Phenotypic Features in Toxocariasis / F.F. Anibal, A.P. Rogerio, A. Malheiro et al. // Scand J Immunol. 2007. - Vol.65, №4. - P.344-352.

277. In vivo neutralisation of eosinophil-derived major basic protein inhibits antigen-induced bronchial hyperreactivity in sensitised guinea pigs / J. Lefort, A. Nahori, C. Ruffiq et al. // J Clin Invest. 1996. - Vol. 97, №6. - P.l 117-1121.

278. Interleukin (IL) 5 levels and eosinophilia in patients with intestinal parasitic diseases / N. Ohmiya, S. Ustun, N. Turgay et al. // J. Exp. Med. 1997. - Vol. 172, №6. -P.1563-1572.

279. Interleukin-1 and interleukin-3 release from human peripheral blood eosinophils and neutrophils / M.J. Sanz, V. B. Veg, M. Bolanowski, S. Noursharg // J. Immunol. -1995. Vol. 154, 3. - P. 1364 - 1373.

280. Interleukin-12 enhances interleukin-3 dependent multilineage hematopoietic colony formation stimulated by interleukin-11 or Steel factor / R.E. Ploemacher, P.L. Soest, A. Boudewijn, S. Neben // Leukemia (Baltimore). 1993. - Vol.7, №2. - P. 13741380.

281. Interleukin-13 in the skin and interferon-gamma in the liver are key players in immune protection in human schistosomiasis / A. Dessein, B. Kouriba, C. Eboumbou et al. // Immunol. Rev. 2004. - Vol. 201. - P. 180-190.

282. Interleukin-4 blood concentrations in early and meta-static human solid neoplasms / P. Lissoni, D. Merlini, D.Pirato et al. // Int. J. Biol. Marker. 1997. - Vol. 12, №2. - P. 75 - 78.

283. Interleukin-5 / N. Olimiya, S.Williamson , N. Turgay et al. // Pathol. Res. Pract. -1997.-Vol. 193, №7.-P. 484-493.

284. Interleukin-5 is the predominant cytokine produced by peripheral blood mononuclear cells in alveolar echinococcosis / D. Sturm, J. Menzel, B. Gottstein et al. // Infect. Immun. 1995. - Vol. 63, №8. - P. 1688 - 1697.

285. Interleukin-5 messenger RNA and immunoreactive protein expression by activated eosinophils in lesional atopic dermatitis skin / Y. Tanaka, E. Delaporte, S. Dubucquoi et al. // J. Invest. Dermatol. 1994. - Vol.103, №6. - P. 589-592.

286. Interleukin-5 modulates eosinophil accumulation in the allergic guinea pig / A.R. Gulbenkian, R.W. Egan, X. Fernandez et al. // Am. Rev. Respir. Dis. 1992. - Vol.146, №6.-P. 263 -265.

287. Interleukin-5 signaling in human eosinophils involves JAK2 tyrosine kinase and Statl alpha / T. Bruggen, E. Caldenhoven, D. Kanters et al. // Blood. 1995. - Vol. 85, №2.-P. 1442 - 1448.

288. Involvement of caspases and of mitochondria in Fas ligation-induced eosinophil apoptosis: modulation by interleukin-5 and interferon-gamma / S. Letuve, A. Druilhe, M. Grandsaigne et al. //J. Leukoc. Biol. 2001. - Vol. 70. - P. 767 - 775.

289. Ishizaka, A. The inductive effect of interleukin-4 on IgG4 and IgE synthesis in human peripheral blood lymphocytes / A. Ishizaka // Hokkaido Igaku Zasshi. 1991. -Vol. 66, №5.-P. 502 - 509.

290. Itsuki, Y. Expression of interleukin-4 in colon 26 cells induces both eosinophil mediated local tumor killing and T-cell mediated systemic immunity in vivo / Y. Itsuki, S. Suzuki //Nippon Ika Daigaku Zasshi. 1996. - Vol. 63, №4. P. 275 - 285.

291. Kapp, A. The role of eosinophils in the pathogenesis of atopic dermatitis -eosinophil granule proteins as markers of disease activity / A. Kapp // Allergy. 1993. -Vol. 48, №1. -P. 1-5.

292. Kay, A.B. T lymphocytes and their products in atopic allergy and asthma / A.B. Kay // Int. Arch Allergy Appl. Immunol. 1991. - Vol. 94, №7. - P. 189 - 93.

293. Kinetics of eotaxin generation and its relationship to eosinophil accumulation in allergic airways disease: Analysis in a guinea pig model in vivo / A.A. Humbles, D.M. Conroy, S. Marleau et al. // J Exp Med. 1997. - Vol. 186, №4. - P. 601 - 612.

294. Kobayashi, H. Effect of c-kit ligand (stem cell factor) in combination with interleukin-5, granulocyte/macrophage colony-stimulating factor, and interleukin-3, on eosinophil lineage / H. Kobayashi // Int. J. Hematol. 1993. - Vol. 58, №4. - P. 21-26.

295. Koch, K.C. The role of IL-4 in immune responses to different antigens / K.C. Koch // Eur. J. Immunol. 1992. - Vol. 22, №1. - P. 153 - 157.

296. Kotsimbos, A.T. L-5 and IL-5 receptor in asthma / A.T. Kotsimbos, Q. Hamid // Mem Inst Oswaldo Cruz. 1997.-Vol. 92, №1.-P. 75-81.

297. Kubin, R. Interleukin-5 as a differentiation factor for eosinophilic granulocytes. Its biological effects and potential therapeutic uses / R. Kubin // Dtsch. Med Wochenschr. -1992.-Vol. 21, №8. P. 307 -312.

298. Kuroda, J. Aggressive natural killer leukemia/lymphoma / J. Kuroda, S. Kiniura, T. Akaogi // Ann. Hematol. 2000. - Vol. 9, №12. - P. 519 - 520.

299. Lampinen, M. Cytokine-regulated accumulation of eosinophils in inflammatory disease / M. Lampinen, M. Carlson, L.D. Hakansson // Allergy. 2004. - Vol. 59, №8. -P. 425 - 430.

300. Larfars G. Fludarabine, as well as 2-chlorodeoxyadenosine, can induce eosinophilia during treatment of lymphoid malignancies / G. Larfars, A.M. Uden-Blohme, J. Samuelsson // Br. J. Haematol. 1996. - Vol. 94, №4. - P. 709 - 712.

301. Ligation of CD69 induces apoptosis and cell death in human eosinophils cultured with granulocyte/macrophage colony-stimulating factor / G.M. Walsh, M.L. Williamson, F.A. Symonetal.//Blood. 1996. - Vol. 87, №6.-P. 2815-2821.

302. Lucey, D.R. Type 1 and type 2 cytokine dysregulation in human infectious, neoplastic, and inflammatory diseases / D.R. Lucey, M. Clerici, G.M. Shearer // Clin Microbiol Rev. 1996. - Vol. 9, №4. - P. 532 - 562.

303. Lung eosinophilia is dependent on IL-5, and the adhesion molecules CD 18 and VLA-4 in a guinea-pig model / A.M. Das, T.J. Williams, R.R. Lobb, S. Nourshargh // Immunology. 2005. - Vol. 48, №8. - P. 14 - 16.

304. Magnan, A. Allergies: determinants of T2 lymphocyte polarization and desensitization mechanisms / A. Magnan, D.Vervlo et al. // Rev Mai Respir. 1997. -Vol. 14, №3.-P. 173 - 181.

305. Mainou-Fowler, T. Interleukin 4 production by peripheral blood lymphocytes in patients with classical Hodgkin lymphoma / T. Mainou-Fowler, S.J. Proctor, P.R. Taylor //Leun. Res. 2004. - Vol. 28, №2. - P. 159 - 166.

306. Major basic protein homolog (MBP2): a specific human eosinophil marker / D.A. Plager, D.A. Loegering, J.L. Checkel et al. // J. Immunol. 2006. - Vol.177, №10. - P. 7340-7345.

307. Manipulation of Thl/Th2 balance in vivo by adoptive transfer of antigen-specific Thl or Th2 cells / D.I. Pritchard, A. Ohta, T. Tashiro et al. // Clin. Rev. Allergy Immunol. 2004. - Vol. 26, №1. - P. 61 - 72.

308. Manometric findings in adult eosinophilic eosophagitis: a study of 12 cases / A.J. Lucendo, P. Castillo, S. Martin-Chavarri et al. // Eur. J. Gastroenterol Hepatol. 2007. -Vol. 19, №5.-P. 417-424.

309. McEwen, B.J. Eosinophils: A review / B.J. McEwen // Vet. Res. Commun. -1992.-Vol. 16. P. 11-44.

310. Medical history and risk of Hodgkin's and non-Hodgkin" s lymphomas / A. Tavani, C. La Vecchia, S. Franceschi et al. // Eur. J. Cancer Prev. 2000. - Vol. 9, №1. - P. 59 - 64.

311. Membrane-bound and soluble alpha IL-5 receptor mRNA in the bronchial mucosa of atopic and nonatopic asthmatics / Z. Yasruel, M. Humbert, T.C. Kotsimbos et al. // Am. J. Respir. Crit. Care. Med. 1997. - Vol.155, №4. - P. 1413-1418.

312. Miller, M.D. Biology and biochemistry of the chemokines: a family of chemotactic and inflammatory cytokines / M.D. Miller, M.S. Krangel // Crit Rev Immunol. 1992. - Vol. 12, №7. - P. 17 - 26.

313. Modulation of antigen-induced В and T cell responses by antigen-specific IgE antibodies / A. Oshiba, E. Hamelmann, A Haczku et al. // J. Immunol. 1997. - Vol. 159, №8.-P. 4056-4063.

314. Molecular cloning and characterization of a human eotaxin receptor expressed selectively on eosinophils / P.D. Ponath, S. Qin, T.W. Post et al. // J. Exp. Med. 1996. -Vol. 183, №7. - P. 2437 - 2448.

315. Molecular organization of the cytocine gene claster, involving the human IL-3, IL-4, IL-5 and GM-CSF genes, on human chromosome 5 / B.H. Van Leeuwen, M.E. Martinson, G.C. Webb et al. // Cell Immunol. Vol.119, №5. - P. 1142-1148.

316. Mordvinov, V.A. Regulation of IL-5 expression / V.A. Mordvinov, C.J. Sanderson // Arch Immunol. Ther Exp (Warsz). 2001. - Vol. 49, №5. - P. 345 - 351.

317. Morphometry of eosinophils in human blood / R.J. Solcol, N.T. James, J. Wales, G. Hudson // Acta. Anat. 1987. - Vol.129, №2. - P. 211-213.

318. Mosmann, T.R. Cytokines: is there biological meaning? / T.R. Mosmann // Curr Opin Immunol. 1991. - Vol. 3, №3. - P. 311 - 314.

319. Munoz, N.M. Highly purified selective isolation of eosinophils from human peripheral blood by negative immunomagnetic selection / N.M. Munoz, A.R. Leff // Nat. Protoc. 2006. - Vol.101, №6. - P.2613-2620.

320. Murine hypodense eosinophils induce tumour cell apoptosis by a granzyme B-dependent mechanism / D.J. Costain, A.K. Guha, R.S. Liwski et al. // Cancer Immunol. Immunother. 2001. - Vol. 50, №6. - P. 293 - 299.

321. Neonatal transient eosinophilic colitis causes lower gastrointestinal bleeding in early infancy / Y. Ohtsuka, T. Shimizu, H. Shoji et al. // J. Pediatr Gastroenterol Nutr. -2007.-Vol. 44, №4.-P. 501-505.

322. Neutrophil and eosinophil participation in atopic and vernal keratoconjunctivitis / SJD. Trocme, KM. Leifemian, T. George et al. // Curr. Eye Res. -2003. Vol.26, №6. - P. 319-325.

323. Neutrophils but not eosinophils are involved in growth suppression of IL-4-secreting tumors / G. Noffz, Z. Qin, M. Kopf et al. // J. Immunol. 1998. - Vol. 160, №1. - P. 345-350.

324. Newcom, S.R. Interleukin-4 is an autocrine growth factor seereted by the L-428 Reed-Stemberg cell/S.RNewcom,AA.Ansari,L.Gu// Blood.- 1992.-Vol. 79, №1 -P. 191 -197.

325. Newman, T.M. Ultrastructural characterization of tannic acid-arrested degranulation of permeabilized guinea pig eosinophils timulated with GTPS / T.M. Newman, M. Tian, B.D. Gomperts // Eur. J. Cell. Biol. 1996. - Vol.70, №7. - P. 209220.

326. Nopp, A. Quantitative, rather than qualitative, differences in CD69 up-regulation in human blood eosinophils upon activation with selected stimuli / A. Nopp, J. Lundahl, G. Hallden //Allergy. -2000. Vol. 55, №2. - P. 148 - 156.

327. Ochiai, K. Effect of cytokines on eosinophil differentiation and proliferation / K. Ochiai, I. Iwamoto //Nippon Rinsho. 1993. - Vol. 51, №3. - P. 571 -574.

328. Okudaira, H. Simple understanding and optimistic strategy for coping with atopic diseases. IL-5 central hypothesis on eosinophilic inflammation / H. Okudaira, A. Mori // Int. Arch Allergy Immunol. 1998. - Vol. 1, №4. - P. 11 - 19.

329. Pereira, F.E. Intestinal nematodes, Toxoeara infection, and pyogenic liver abscess in children: a possible association / F.E. Pereira., S.F. Moreira-Silva // J. Trop. Pediatr. -2000. Vol.46, №3. - P. 167-172.

330. Pereira, F.E. Pathology of pyogenic liver abscess in children / F.E. Pereira, C. Musso, J.S. Castelo // Pediatr. Dev. Pathol. 1999. - Vol.2, №6. - P. 537-543.

331. Persisting viruses and autoimmunity / M. Paroli, E. Schiaffella, F. Di Rosa et al. // Journal of Neuroimmunology. 2000. - Vol. 107. - P. 201-204.

332. Poppema, S. Interaction between host T cells and Reed -Sternberg cells in Hodgkin lymphomas / S. Poppema, A. Van der Berg // Semin. Caner Biol. 2000. - Vol. 10, №5 - P. 345 - 350.

333. Pritchard, D.I. Sourcing a chemical succession from parasites and human pathogens / D.I. Pritchard // Drug Discov Today. 2005. - Vol.10, №10. - P.688-91.

334. Prostaglandin D2 causes accumulation of eosinophils in the lumen of the dog trachea / D.L. Emery, T.D. Djokic, P.D. Graf, J.A. Nadel // J. Appl. Physiol. 1989. -Vol.67, №7.-P. 959-962.

335. Pulmonary biology of anti-interleukin 5 antibodies / R.W. Egan, D. Athwahl, C.C. Chou et al. // Memorias do Institute Oswaldo Cruz. 1997. - Vol.92, №2 - P. 69-73.

336. Quantitative analysis of small intestinal mucosa in cow's milk-sensitive enteropathy / C. Maluenda, A.D. Phillips, A. Briddon, J.A. Walker-Smith // J. Pediatr. Gastroenterol. Nutr. 1984. - Vol.3, №3. - P. 349-356.

337. Recombinant human stem cell factor (rhSCF) induces cutaneous mast cell activation and hyperplasia, and hyperpigmentation in humans in vivo II / J.J. Costa, G.D. Demetri, T.J. Harrist et al. // J. Allergy clin. Immunol. 1994. - Vol. 93, №4. - P. 225.

338. Regulation of chemokine receptor expression in eosinophils / H. Nagase, M. Miyamasu, M. Yamaguchi et al. // Int. Arch Allergy Immunol. 2001. - Vol. 125, №1. -P. 29 - 32.

339. Regulation of IL-5 and IL-5 receptor expression in the bone marrow asthmatics / J.A. Denburg, R. Sehmi, J. Urham et al. // Int. Arch. Allergy Immunol. 1999. -Vol. 118, №2-4.-P. 101-103.

340. Resnick, M.B. Mechanisms of eosinophil recruitment / M.B. Resnick, P.F. Weller // Am J Respir Cell Mol Biol. 1993. - Vol. 8. - №4. - P. 349 - 355.

341. Ricci. M. Source of IL-4 able to induce the development of TH2-like cells / M. Ricci, A. Matucci, O. Rossi // Clin. Exp Allergy. 1997. - Vol. 27, №5. - P. 488 - 500.

342. Riffo-Vasquez, Y. Role of cytokines and chemokines in bronchial hyperresponsiveness and airway inflammation / Y. Riffo-Vasquez, D. Spina // Pharmacol. Ther. 2002. - Vol. 94, №3. - P. 185 - 211.

343. Rojas, R.E. The TH2 theory in allergy / R.E. Rojas, J.E. Martinez // Rev Alerg. Мех. 1999. - Vol. 46, №3. - P. 83 - 88.

344. Role for Tyrosine Phosphorylation and Lyn Tyrosine Kinase in Fas receptor-Mediated Apoptosis in Eosinophils / H.-U. Simon, S. Yousefi, B. Dibbert et al. // Blood. 1998. - Vol.92, №6. - P.547-557.

345. Role of IgE in Th2 cell-mediated allergic airway inflammation / Y. Maezawa, H. Nakajima, K. Kumano et al. // Int. Arch. Allergy Immunol. 2003. - Vol. 131, №4. - P. 2-6.

346. Romagnani, S. T-cell subsets (Thl versus Th2) / S. Romagnani //Ann Allergy Asthma Immunol. -2000. Vol. 85, №1. - P. 9 - 18.

347. Romagnani, S. Thl/Th2 cells / S. Romagnani // Inflamm. Bowel Dis. 1999. -Vol. 5, №4.-P. 285 - 294.

348. Rotenberg, M.E. Eosinophils cocultured within endothelialalls have increased survival and functional properties / M.E. Rotenberg, W.F. Owen, D.S. Silberstein // Science. 1987. - Vol. 237, №12. - P. 645 - 647.

349. Rothenberg, M.D. Eosinophilia / M.D. Rothenberg // J. Allergy clin. Immunol. -1998. Vol. 338, №22. - P. 1592 - 1600.

350. Rothenberg, M.D. Eotaxin. An Essential Mediator of Eosinophil Trafficking into Mucosal Tissues / M.D. Rothenberg // Am. J. Respir. Cell Mol. Biol. 1999. - Vol. 21. -№3. - P. 291 -295.

351. Rothenberg, M.E. Murine eotaxin: an eosinophil chemoattractant inducible in endothelial cells and in interleukin 4-induced tumor suppression / M.E. Rothenberg, A.D. Luster, P. Leder // Proc Natl Acad Sci USA. 1995. - Vol. 92, №2. - P. 8960 - 8964.

352. Rubira, G.N. Tumor necrosis factor / G.N. Rubira // Allergol. Immunopathol. -2000.-Vol. 28, №3.-P. 115 119.

353. Sabin, E.A. Schistosoma mansoni egg-induced early IL-4 production is dependent upon IL-5 and eosinophils / E.A. Sabin, M.A. Kopf, E.J. Pearce //J. Exp. Med. 1996. -Vol.184, №6.-P.1871-1878.

354. Samoszuk, M. Eosinophils and cancer / M. Samoszuk // Histopathol. 1997. - Vol. 12, №6.-P. 807 - 812.

355. Schistosoma mansoni infection in eosinophil lineage-ablated mice / J.M. Swartz, IC.D. Dyer, A.W. Cheever et al. // Blood. 2006. - Vol.108, №7. - P. 2420-2427.

356. Schroder, J.M. The role of chemokines in cutaneous allergic inflammation / J.M. Schroder, M. Mochizuki // Biol. Chem. 1999. - Vol. 380, №12. - P. 889 - 896.

357. Seminario, M.C. Expression and function of beta 1 integrins on human eosinophils / M.C. Seminario, B.S. Bochner // Mem Inst Oswaldo Cruz. 1997. - Vol. 92, №5. - P. 157-164.

358. Serrano, D. The patterns of IL2, IFN-gamma, IL4 and IL5 gene expression in Hodgkin's disease and reactive lymph nodes are similar / D. Serrano, F. Ghiotto, S. Roncella // Haematologica. -1997. Vol. 82, №5. - P. 542 - 549.

359. Serum CD40/CD40L System ovarian carcinoma cell Soluble Fas, FasL and Humoral Markers of Autoimmune Response / J. Mysliwiec, M. Oklota, A. Nilcolajuk et al. // Immunol Invest. 2007. - Vol.36, №3. - P. 247-257.

360. Shu, H.B. Casper is a FADD- and caspase-related inducer of apoptosis / H. B. Shu, D. R. Halpin, D. V. Goeddel // Immunity. 1997. - Vol. 6, № 6. - P.751-763.

361. Signal transducer and activator of transcription 5a (STAT5a) is required for eosinophil differentiation of human cord blood-derived CD34+ cells / M. Buitenhuis, B. Baltus, J. Lammers et al. // Blood. 2003. - Vol.101, №4. - P. 134-142.

362. Significance of tumor associated tissue eosinophilia and other inflammatory cell infiltrate in early esophageal squamous cell carcinoma / Y. Ohashi. S. Ishibashi, T. Suzuki et al. // Anticancer Res. 2000. - Vol. 20, №8. - P. 3025 - 3030.

363. Simon, D. Eosinophilic disorders / D. Simon, H.- U. Simon // J. Allergy Clin. Immunol. 2007. - Vol.119, №6. - P. 1291-1300.

364. Simon, H. Regulation of eosinophil apoptosis: transduction of survival and death signals / H. Simon, R. Alam // Int. Arch. Allergy Immunol. 1999. - Vol.l 18, №1. - P. 7-14.

365. Simon, H.-U. Molecular mechanisms of defective eosinophil apoptosis in deasises associated whit eosinophilia / H.-U. Simon // Int. Arch. Allergy Immunol. 1997. -Vol.113, №3.-P. 208-208.

366. Simon, H.-U. Molecular mechanisms of programmed cell death / H.-U. Simon // Apoptosis.-1996.-Vol. l.-P. 107-109.

367. Skinnider, B.F. Immunology of Hodgkin's disease / B.F. Skinnider, T.W. Мак// Blood. 2002. - Vol. 99, №5. - P. 4283 - 4297.

368. Sok, J.C. Differential diagnosis of eosinophilic chronic rhinosinusitis / J.C. Sok, B.J. Ferguson // Clin. Allergy Immunol. 2007. - Vol.19, №4. - P. 69-85.

369. Spectral and landscape characterization of filarious and non-filarious villages in Egypt / M.M. Sowilem, I.M. Bahgat, G.A. ICady G.A. et al. // J. Egypt. Soc. Parasitol. 2006. - Vol. 36, №2. - P. 373-388.

370. Spry, C.J. Eosinophils / C.J. Spry // Clin. Exp. Immunol. 1988. - Vol.24, №4. -P. 423-434.

371. Steel, C. Regulation of IL-5 in onchocerciasis. A critical role for IL-2 / C. Steel, T. B. Nutman // The Journal of Immunology. 1993. - Vol.150, №9. - P. 5511-5518.

372. Steinke, J.W. Anti-interleukin-4 therapy / J.W. Steinke // Immunol. Allergy Clin. North Am. 2004. - Vol. - 24, №4. - P. 599 - 614.

373. Street, N.E. IL4 and IL5: the role of two multifunctional cytokines and their place in the network of cytokine interactions / N.E. Street, T.R. Mosmann // Biotherapy. -1990. Vol.2, №4. - P. 347 -362.

374. Suppression of apoptotic death in hematopoietic cells by signaling through the IL-3/GM-CSF receptors / T. Kinoshita, K. Yokota, K. Arai, A. Miyajima. // EMBO J. -1995. Vol.14, №2. - P. 266-275.

375. Suppression of extraintestinal and intestinal Nippostrongylus brasiliensis-induced eosinophilia by Eimeria nieschulzi / Z. Al-Dahwi, L.F. Mayberry, G.A. Conder, J.R. Bristol // J. Parasitol. 2006. - Vol.92, №6. - №5. - P. 962-970.

376. Synergistic effects of interleukin-4 or interleukin-13 and tumor necrosis factor-alpha on eosinophil activation in vitro / W. Luttmann, T. Matthiesen, PI. Matthys et al. // Am. J. Respir. Cell Mol. Biol. 1999. - Vol. 20, №6. - P. 474 - 480.

377. Synthesis of type 1 (IFN gamma) and type 2 (IL-4, IL-5, and IL-10) cytokines by human eosinophils / B. Lamkhioued, A.S. Gounni, D. Aldebert et al. // Ann N. Y. Acad. Sci. 1996. - Vol. 31, №9. - P. 203 - 208.

378. Synthesis of type 1 (IFN gamma) and type 2 (IL-4, IL-5, and IL-10) cytokines by human eosinophils / B. Lamkhioued, A.S. Gounni, D. Aldebert et al. // Ann. NY Acad. Sci. 1996. - Vol. 79, №6. - P. 203-208.

379. T cell cytokines: animal models / J.G. Martin, M. Suzuki, D. Ramos-Barbon et al. // Paediatr. Respir. Rev. 2004. - Vol. 5, №8. - P. 47-51.

380. T1/ST2 expression on Th2 cells negatively regulates allergic pulmonary inflammation / N.E. Mangan, A. Dasvarma, A.N. McKenzie, P.G. Fallon // Eur. J. Immunol. 2007. - Vol.4, №6. - P. 238-241.

381. Tachimoto, H. The surface phenotype of human eosinophils / H. Tachimoto, B.S. Bochner // Chem Immunol. 2000. - Vol. 76, №3. - P. 45 - 62.

382. Tavernier, J. Interleukin 5 regulates the isofonn expression of its own receptor a-subunit / J. Tavernier, J. Van der Heyden // Blood. 2000. - Vol. 95. - №5. - P. 1600 - 1607.

383. Temkin, V. Mechanism of tumour necrosis factor alpha mediated eosinophil survival / V. Temkin, F. Levi-Schaffer // Cytokine. 2001. - Vol. 15, №1. - P. 20 - 26.

384. Tenascin expression in elastotic cuffs of invasive ductal carcinoma of the breast / M. Melis, A. Baiocchini, G. Soda, D. Bosco // Pathol. Res. Pract. 1997. - Vol. 193, № 7.-P. 479-484.

385. Tepper, R.I. The anti-tumour and proinflammatory actions of IL4 / R.I. Tepper // Res Immunol. -1993. Vol. 144, №8. - P. 633 - 637.

386. Tepper, R.I. The eosinophil-mediated antitumor activity of interleukin-4 / R.I. Tepper // J Allergy Clin. Immunol. 1994. - Vol. 94, №6. - P. 1225 - 1231.

387. The appearance of hypodense eosinophils during interleukin-2 treatment / J.B. Sedgwick, W.E. Frick, P.M. Sondel et al. // J Allergy Clin Immunol. 1990. - Vol.85, №5.-P. 557-559.

388. The CD40/CD40L system / C. Prontera, N. Martelli, V. Evangelista et al. // J Am Coll Cardiol. 2007. - Vol.49, №22. - P.2182-2190.

389. The CD69 receptor: A multipurpose cell-surface trigger for hematopoietic cells / R. Testi, D. D'Ambrosio, R. De Maria, A. Santoni // Immunol. Today. 1994. - Vol.15, №4.-P. 479-483.

390. The chemokine, Eotaxin, activates guinea-pig eosinophils in vitro, and causes their accumulation into the lung in vivo / D.A. Griffiths-Johnson, P.D. Collins, A.G. Rossi et al. // Biochem Biophys Res Commun. 1993. - Vol. 197. - P. 1167 - 1172.

391. The chemotactic cytokine eotaxin acts as a granulocyte/macrophage colony-stimulating factor during lung inflammation / A. Pcled, J.A. Gonzalo, C. Lloyd, J.C. Gutierrez-Ramos//Blood. 1998. - Vol.91, №3. - P. 1909-1916.

392. The Differential Role of Extracellular Signal-Regulated Kinases and p38 Mitogen-Activated Protein Kinase in Eosinophil Functions // T. Adachi, B.K. Choudhury, S. Stafford et al. // J. Immunol. 2000. - Vol.165, №8. - P.2198-2204.

393. The GM-CSF analogue E21R induces apoptosis of normal and activated eosinophils. / P.O. Iversen, D. Robinson, S. Ying, Q. Meng // Amer. J. Respir. Crit. Care Med. -1997. Vol. 156. - P. 1628 - 1632.

394. The heart and the eosinophil / J.E. Touze, L. Fourcade, P. Heno et al. // Med Trop (Mars). 1998. - Vol. 58, №4. - P. 459 - 464.

395. The inhibitory receptor IRp60 (CD300a) suppresses the effects of IL-5, GM-CSF, and eotaxin on human peripheral blood eosinophils / I. Munitz, R. Eliashar, A. Moretta et al. //Blood. -2006. Vol.107, №5. - P. 1996-2003.

396. The innate allergenicity of helminth parasites / F.H. Falcone, A. Loukas, R.J. Quinnell, D.I. Pritchard // Clin Rev Allergy Immunol. 2004. - Vol.26, №1. - P.61-72.

397. The Mapping of the Lyn Kinase Binding Site of the Common {beta} Subunit of IL-3/Granulocyte-Macrophage Colony- Stimulating Factor/IL-5 Receptor / T. Adachi, K. Pazdrak, S. Stafford, R. Alam // J. Immunol. 1999. - Vol.162, №1. - P.1496-1501.

398. The Opisthorchis felineus paramyosin: cDNA sequence and characterization of its recombinant fragment / A.V. Shustov, A.T. Kotelkin, A.V. Sorokin et al. // Parasitol Res.- 2002. Vol.88, №8. - P. 724-730.

399. The release of cytochrome с from mitochondria: a primary site for Bcl-2 regulation of apoptosis / R. M. Kluck, E. Bossy-Wetzel. D. R. Green et al. // Science. -1997.-Vol. 275.-P. 1132-1136.

400. The use of flow cytometry to measure neutrophil function / S.F. Eeden, M.E. Klut, В .A.M. Walker et al. // J. of Immun. Meth. 1999. - Vol. 232. - P. 23-43.

401. Thompson, C.B. Apoptosis in the pathogenesis of diseasea / C.B. Thompson // Sceince. 1995. - Vol. 267. - P. 1456-1462.

402. Tissue eosinophilia correlates strongly with poor prognosis in nodular sclerosing Hodgkin's disease, allowing for known prognostic factors / R. Wasielewski, S. Seth, J. Franklin et al. // Blood. 2000. - Vol. 93, №8. - P. 1207 - 1213.

403. Toxicity of eosinophil cationic proteins for guinea pig tracheal epithelium in vitro / S. Motojima, E. Frigas, D.A. Loegering et al. // Am. Rev. Respir. Dis. 1989. -Vol.139, №6. -P. 801-805.

404. Transduction of a dominant-negative H-Ras into human eosinophils attenuates extracellular signal-regulated kinase activation and interleukin-5-mediated cell viability / J. David, J. Hall, M. Bates et al. // Blood. 2001. - Vol.98, №7. - P. 2014-2021.

405. Trocme, S.D. Spectrum of ocular allergy / S.D. Trocme, K.K. Sra // Curr. Opin. Allergy Clin. Immunol. 2002. - Vol. 2, №5. - P. 423-427.

406. Tumor necrosis factor / R. Davies G., M. Abdelaziz M., O.A. Khair, J.L. Devalia // J. Allergy clin. Immunol. 1995. - Vol. 95, №2. - P. 316 - 320.

407. Ultrasonographic study of the biliary system in opisthorchiasis patients after treatment with praziquantel / S. Pungpak, S. Sornmani, P. Suntharasamai, P. Vivatanasesth // Southeast Asian J Trop Med Pub Hlth. 1989. - Vol.20, №4. - P.l57-162.

408. Valent, P. The phenotype of human eosinophils, basophils, and mast cells / P. Valent // J. Allergy Clin. Immunol. 1994. - Vol. 94. - P. 1177.

409. Vella, A.T. CD4+ Th2 response induced by Schistosoma mansoni eggs develops rapidly, through an early, transient, ThO-like stage / A.T. Vella, E.J. Pearce // J. Immunol. 1992. - Vol.148, №8. - P. 2283-2290.

410. Vellenga, E. Interleukin-4 and its receptor; modulating effects on immature and mature hematopoietic cells / E. Vellenga, W. Dokter, R.M. Halie // Leukemia. 1993. -Vol. 7, №8.-P. 1131-1141.

411. Vijayan, V.K. How to diagnose and manage common parasitic pneumonias / V.K. Vijayan // Curr. Opin. Pulm. Med. 2007. - Vol. 13, №3. - P. 218-224.

412. Wardlaw, A.J. Eosinophil adhesion receptors / A.J. Wardlaw // Behring Inst Mitt. 1993. - Vol. 92, №2. - P. 178 - 183.

413. Wardlaw, A.J. Eosinophil trafficking in asthma / A.J. Wardlaw // Clin Med. -2001.-Vol. 1. №3. - P. 214 - 218.

414. Wardlaw, A.J. Eosinophils in the 1990s: new perspectives on their role in health and disease / A.J. Wardlaw // Postgrad Med J. 1994. - Vol. 70, №8. - P. 536 - 552.

415. Weller, P.F. The idiopathic hypereosinophilic syndrome / P.F. Weller, G.J. Bubley // Blood. 1994. - Vol. 83. - P. 2759 - 2779.

416. Winqvist, I. Mechanisms for eosinophil degranulation; release of the eosinophil cationic protein / I. Winqvist, T. Olofsson, I. Olsson // Immunology. 1984. - Vol.51, №2.-P. 1-8.fcy /Ч

417. Wong, C.K. Biochemical assessment of intfacejnilar signal transduction pathways in eosinophils: implications for pharmacotherapy / C.K. Wong, W.K. Ip, C.W. Lam // Clin Lab Sci. 2004. - Vol. 41, № 1. - P. 99 - 113.

418. Wozel, G. Eosinophilic dermatoses / G. Wozel // Hautarzt. 2007. - Vol.16, №1. - P.38-42.

419. Zangrilli, James G. Regulation of Eosinophil Viability by Cytokines / James G. Zangrilli // Cell Mol. Biol. 2002. - Vol. 26, №4. - P. 388 - 390.