Автореферат и диссертация по медицине (14.00.36) на тему:Макрофаг-модулирующая иммунокоррекция биогенными продуктами

на правах рукописи

2 9 АПР 1УУо

АПРИКЯН ВАРДАН СЕРГЕЕВИЧ

МАКРОФАГ-ЫОДШРШЦАЯ ИММУНОКОРРЕКЦИЯ ШОГЕННЫМИ ПРОДУКТАМИ 14.00.36 - Аллергология и иммунология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

МоскЕа - 1996

Работа выполнена в Институте биохимии им. Г.Х.Цунятяна HAH Армении и в Институте иммунологии Минздравмедпрома РФ

Научный консультант: академик Р.В.Петров

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук Н.В.Г^учев

доктор медицинских наук, профессор Л.И.Краснопровина

члеи-корр. АЕН РФ, доктор медицинских наук, профессор Л.В.Ковальчу

Ведущая организация - Московский научно-исследовательский Институт эпидемиологии и микробиологии им. Г.Н.Габричевского

Защита состоится 22 мая 1996 года в 14 часов на заседании диссертационного совета Д 074.09.01 при Институте иммунологии Министерства здравоохранения и медицинской промышленности РФ по адресу: 115478 Москва, Каширское шоссе, 24, корп.2

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Института иммунологии Минздравмедпрома РФ

Автореферат разослан _ _ 1996 года

Ученый секретарь диссертационного совета, доктор медицинских наук

Л.С.Сославших

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Потенциальные возможности контроля и управления направленного воздействия на отдельные звенья и клетки иммунной системы, а также поиск средств, отвечающих требованиям им-муномодуляции, Бсё в большей мере становятся объектами пристального внимания исследователей в современной иммунологии. Перспективными в этом отношении представляются природные биорегуляторы - продукты жизнедеятельности макро- и микро-организмов. Предполагается, что в ближайшее десятилетие они будут составлять большую часть новых терапевтических средств ( Петров Р.В. , 1990; Roltt ,1., 1993 ).

Биогенные продукты в силу эволюционного совершенства, своего структурального родства, характеризуются полифункцио^чьностью, эффективностью в малых дозах, отсутствием в большинстве своем, токсичности, кумулятивных свойств и баластных веществ! Петров Р.В., 1976; Bach J.E. 1980; Ballorlll ГЛ.. 1991; Utchctl 11.. 1939; Roltt I..I9"5). В настоящее время известно участие биогенных продуктов в процессах созревания, роста, дифференцировки, пролиферации, реализации эффех-торных функций иммунокомпетентных клеток, межклеточных и межсистемных взаимодействиях I Петров Р.В., 1982, 1987, 1990; Вопа С.А.,1994). Еццелены, охарактеризованы и широко используются такие, ставшие традиционными, биорегуляторы как костно-мозговые цитокины (Петров Р.В., Михайлова А.А., 1984) , факторы тимуса ( Арион В.Я., 1981; Coidste-ln A. et al..I9S9.I99I), интерлейкины (Henderson В! et al.. 1992),_ интерфероны (Mu 11 er U. st al., 1994) , колониестиыулирупцие (Met-cair D.. 1987), ростовые (Scheven B.,1991), цитотоксические (Batana-be ¡{.'.et al. ¡991) факторы, мурамидципегтиды ( Овчинников D.A. и соавт., I980;Hagao S. et al.1990), нуклеинат натрия l Земсков B.M., ЗемсковА.М., 1987) и многие другие. Важное значение приобретают пептидные гормоны и гормоноподобные вещества4центральной нервной системы, как регуляторы активности иммунной системы. К их числу относят соматостатин (País S. et al..1991) , тиреотропин (Kruger Т. et al.,1985 ) , адренокортикотропин (Pa«líkousky !,!. et al., 1987 ) , аргинин-вазо-прессин (Torres В.. 1987 ) , окситоцин (Blalock J.,1939) , нейро-тенсин (Koff '.í., et al., 1985 ) , опиоидные пептиды (Петров Р.В. и соавт., 1982; Nordlind К- et al.. 1985; Wood Р.1., 1982;. Bruno A. .1995). К ..ли принадлежит и обнаруженный А.А.Галояном новый класс нейропеп-тидов гипоталамуса с выраженным кард"оактивным действием! ГалоянА.А., 1963, 1986, 1993). Важным представляется исследование их иммуно-

модулирующих свойств, участие в осуществлении иммунных функций, а также широко применяемых биогенных продуктов из различных источников.

Вместе с тем, фундаментальные исследования контроля и регуляции иммунного ответа (Петров Р.В. и соавт., 1981; Хаитов P.M., 1984;

Bona С.Л.,1994), выдвигают необходимость фармакологического контроля иммунорегуляции, исследований дозового ответа при'иммуномодулиру-юцих действиях.

Известна роль макрофагов - первых иммуноцитов, контактирующих с патогенами - в иммунорегуляции( Петров Р.В., 1967; Хаитов P.M., Земсков В.М., 1995; Rosenthal A.S..I9ÖÜ; Adans D..I984; van Furth R..I99 Однако, некоторые вопросы их физиологии, иммунобиологии, проявления дисфункций, и потенциальные возможности при иммуномодулирующем воздействии, изучены недостаточно, либо данные о них отсутствуют. Современная имыуномодуляция ставит требованием выяснение этих и других вопросов. 3 частности, о'применении иммуномодуляторов при патологиях, ассоциированных с токсическими веществами, гельминтами, бактериями, иммунодефицитами, стрессами,

В последние годы изучается модулирующее влияние питания на иммунный ответ - иммунопитание. Исследователи приходят к выводу, что питательные вещества, играют прямую роль как кофакторы и регуляторы нммунноЧ системы, и что модуляция иммунного ответа питательными веществами может обеспечить фундаментальный подход к профилактической медицине (Cunninghan-Rundl es S.. 1992 ) . В этой связи, особый интерес может представлять фитоиммунопитание, как и фитоиммуномодуля-ция, с применением традиционных для человека и животных растений.

Нам представляется, что исследование отмеченных вопросов является значимым и перспективным как для фундаментальной, таь и прикладной иммунологии.

Целью работы явилось исследование фармакологических аспектов имыуномодуляции биогенными продуктами, выявлении их иммунорегулятор-ной активности, и оценка роли макрофагов в реализации их иммунокор-ригирующих эффектов.

Задачи исследования. В процессе исследования решались следующие задачи:

I. Выявить иммуноыодулирукщую способность различных доз биоЬенных продуктов: нейрогенных биоактивных соединений гипоталамуса; наиболее распространенных антибактериальных антибиотиков: пенициллина, стрептомицина, гентамицина; растительного сырья: представителей традиционных пищевых/кормовых растений флоры Армении.

2. Исследовать юс нкмунофармакологическую активность в реакциях гуморального и клеточного звеньев иммунного ответа на различные антигены с учетом оппозитного и таксономического иммунного реагирования. Идентифицировать фармакокинетическую корреляции модулирущей способности этих соединений и источника их происхождения.

3. Изучить влияние биогенных продуктов, а также традиционных имму-номодуллторов на функциональную активность макрофагов, их морфологические, органоспецифические, онтогенетические, фенотипические н андрогенныа характеристики в различных функциональных состояниях.

4. Исследовать предельные в змоаяости иммунофуннциональной активи-руемости макрофагов, взаимозависимость их морфологии и функции, адаптационные способности к биорегуляторному воздействию, и трансформации различных функциональных состояний макрофагов, потенциальные возможности управления их функциями.

5. Изучить некоторые особенности проявления дисфункций макрофагов, экспрессии цитокинов: ИЛ-1 и ИЛ-2, и значение регуляции функций макрофагов при экспериментальных патологиях, вызванных минеральной токсической пылью /асбест, кремний, кварц, графит/, гельиин-тозах /фасциолез, дикроцелез, стронгилез/, бактериальных патологиях, иммунодефицитных и стрессовых состояниях.

6. Исследовать возможность и целесообразность применения биогенных продуктов индивидуально и в различных комбинациях в виде комбинированных иммуноыодулирущих биокомплексов при перечисленных патологиях для «акрофаг-модулируюцей иыыуноноррекции.

Научная новизна результатов исследования. В процессе проведенного исследования впервые установлены неизвестные ранее факты:

Обнаружена иммунофункциональная активность и выявлены иммуно-фармакологические особенности действия биорегуляторных нейрогенных структур/нейропептидов гипоталамуса. Установлена их способность участвовать в регуляции иммунных функций.

Выявлены иннунофармакологические особенности иммунофункцио-нальной активности представителей антибактериальных антибиотиков: пенициллина, стрептомицина, гентамицина. Установлены иммуностимулирующие и иммухокорригирущие их свойства при применении в субоптимальных дозах, а также их способность повышать восприимчивость иммунной системы к иммуномодулирутацему воздействию, и усиливать действие иммуномодуляторов/цитокинов.

Обнаружена иммунофункциональная активность у ряда представителей традиционных пищевых/кормовых растений флоры Армении. Выявлены их иммунофармакологические свойства, фитоиммунотерапевтичес-

кая значимость и иммунопотенциирующая способность фитоиымунопитания.

Показана зависимость направленности и интенсивности проявления эффектов биогенных продуктов от их дозы, но не разновидности самого продукта.

Обнаружена способность костно-мозговых цитокинов - миелопеп-тидов потенциировать выработку соматотропного гормона человека.

Выявлены некоторые особенности иммунобиологии активируемости макрофагов в различны:« функциональных состояниях, их органоспеци-фические, онтогенетические, фенотипические, андрогенные характеристики. Показано наличие дихотомии во взаимозависимости морфологии и функции макрофагов. Показано наличие как взаимозависимости, так и автономности интенсивности между функциями макрофагов, а также отдельными стадиями их развития/активации.

Выявлено наличие предела активируемости макрофагов. Показано, что потенциал их активируемости находится в обратной корреляционной зависимости от юс физиологической активности.

Показано проявление макрофагами привыкаемости и иммуномодуля-торной зависимости, а также наличие цикличности в проявлении феномена. Показано, что активация макрофагов не приводит к общему неспецифическому повышению их эффэкторных функций.

Выявлены некоторые особенности проявления дисфункций макрофагов, экспрессии цитокинов ИЛ-1, ИЛ-2 и механизмов иммунотоксичности при экспериментальных пылевых патологиях /асбест, кремний, кварц, графит/, гельминтозах /фасциолез, дикроцелез, стронгилез/, бактериальных поражениях, иымунодефицитных /циклофосфан, фторурацил/ и стрессовых /плавание, ЛПС-индуцированный шок/ состояниях, и значение активации макрофагов.

Показана возможность и целесообразность применения биогенных продуктов как индивидуально, так и в Еиде комбинированных иммуно-ыодулируюцих биокоыплекров на основе антибиотиков в макрофаг-ассо-циированной иммунокоррекции.

Показаны иммунокорригирующие эффекты биогенных продуктов, связанные с отменой проявляемых дисфункций(макрофагов: обнаруженной блокады на уровне перехода макрофагов из стадии ответных в стадию примированкя, повышением генерации ИЛ-2 через генерацию ИЛ-1 /минеральные токсикозы/; отменой супрессии иммуногенной способности макрофагов /гельминтозы, стресс- и иммунодефицит-индуцированные патологии/; а также модуляцией уровня выработки оксидантов, аккумуляцией макрофагов в пораженных органах, их количества и жизнеспособности, повышением бактерицидной активности, снижением обсеменен-

ности патогенами органов пораженных животных, повышением их выживаемости, привесов жиеой массы и надоев молока у коров.

Обнаружена антгельминтная - нематодоцидная и трематодоцидная активность /40 - 100%/ у кормового растения борщевика Сосновского.

Практическая значимость работы. Полученные данные позволяют расширить арсенал имыуномодулирующих средств за счет полифункциональных биогенных продуктов, расширить сферу их применения и оптимизировать юс использование в экспериментальной иммунобиологии.

Проведенный иммунофармакологический скрининг биогенных продуктов, различных параметров и характеристик активности макрофагов, исследование иымунофункциональной их активируемости, позволяют расширить представления о иммунобиологии макрофагов, стандартизировать пути и методы направленного воздействия на них, управления их функциональной активностью.

Показанная эффективность, возможность и целесообоазность применения биогенных продуктов индивидуально и в веде комбинированных иммуномодулирующих биокомплоксов может способствовать как их применению в клинике, так и созданию новых иммуномодулирующих средств с большей потенцией.

Биогенные продукты могут быть использованы в качестве вспомогательных средств для функциональной иммунокоррекции, фитоиыму-нотерапии, фитоиммунопитания в токсикологии, гельминтологии, бактериальных патологиях, иммунодефицитных и стрессовых состояниях различной тят.ести, нейроиммуномодуляции, в терапии и в реабилито-' логии.

\

Основные положения, выносимые на защиту.

1. Биогенные продукты: нейропептиды гипоталамуса, пенициллин, стрептомицин, гентамицин, овощные/кормовые растения флоры Армении, обладают полифункциональной иммуноыодулируицей активностью. Эффекты биогенных продуктов проявляются с большей силой при индукции иммунного ответа и реализуются преимущественно через раннюю фазу макрофаг-ассоциироБанных механизмов.

2. Нейропептиды гипоталамуса модулируют иммунные функции и участвуют в их реализации.

3. Пенициллин, стрептомицин, гентамицин в суббактерицидных дозах обладают иммуностимулирующими и иммунокорригирующими свойствами, повышают восприимчивость иммунной системы к иммуномодулйрующему воздействию и усиливают действие икмуномодуляторов/цитохинов. •

4. Традиционные пищевые/кормовые растения флоры Армении в качестве

\ фитоиммуномодулирупцих средств проявляют иммуностимулирующую активность. Фитоиммунопитание повышает иммунное реагирование, иммуноген-ность животных и содействует усилению иммунных функций.

5. Костно-моэговые цитокиш: - миелопептиды повышают экспрессию гормона роста человека.

6. Активность и активируемость макрофагов находится в первоочередной зависимости от их органоспецифических, онтогенетических, фенотипичес-ких, андрогенных особенностей. Потенциал их активируемости находится в обратной корреляционной зависимости от их физиологической активности. Предел активируемости макрофагов коррелирует с кратностью их активируемости и временем нахождения в активированном состоянии.

7. Макрофаги проявляют привыкаемость и иммуномодуляторную зависимость. Взаимозависимость морфологии и функции макрофагов характеризуется дихотомией. Активация макрофагов не приводит к общему неспецифическому повышению их эффектерних функций.

8. Направленность и интенсивность модулирующего действия биогенных продуктов зависят от факторов дозы и времени. Источник биопродуктов не играет первостепенной роли в осуществлении их эффектов.

9. Биогенные продукты проявляют эффективность при их использовании индивидуально и в виде комбинированных иммуномодулирупцих биокомплексов в иммунотоксикологии /при минеральных пылевых патологиях/, имму-нопаразитологии /при фасциолезе, дикроцелеэе, стрснгилезе/, бактериальных / преимущественно кишечных/, имыунодефицитных'/циклофосфан, фторурацил/, стрессовых /ЛПС-индуцированный шок, плавание/ патологиях, в качестве мдкрофаг-модулируюцих иммунокорригирупдих средств.

Публикации. Основные результаты исследования изложены в 53 публикациях .

Материалы диссертации были доложены и обсуждены : на Всесоюзной межвузовской научной конференции /Ереван, 1980/г Республиканской конференции молодых ученых "Молодежь и научно-технический прогресс." /Кировакан, 1982/; Всесоюзной конференции "Актуальные проблемы иммунологии, иммунодефициты, иммунокоррекг~{ы." /Владивосток, 1987/; Международном симпозиуме "Иммуномодуляторы, биология и терапевтическое применение." /Рио-де-Канейро, 1987/; 8-м Европейском съезде иммунологов /Загреб, 1987/; 9-м Европейской съезде иммунологов /Рим, 1988/; Международном симпозиуме "Клеточные механизмы инфекционного иммунитета." /Элсинор, 1988/; 11-м Международном конгрессе Международного общества биологии развития /Утрехт, 1989/; 10-м Европейском съезде иммунологов /Эдинбург, 1990/; Всесоюзном симпозиуме с международным участием "Система мононуклеарных фагоцитов в норме и при патологиях."/Новосибирск,

990/; Рабочем совещании с международным участием "Иммуномодуляторы риродного происхождения." /Владивосток, 1990/; УН и У1Н Симпозиу-ах по новым кормовым растениям ."Эколого-популяционный анализ кормо-ых растений естественной флоры, интродукция и использование." /Сык-гакар, 1990 и 1993/; 1-м съезде иммунологов и аллергологов Таджики-тана /Душанбе, 1991/; ХХ1У-м Всемирном ветеринарном конгрессе /Рио-це-Жанейро, 1991/; Европейском токсикологическом конгрессе ЕВРОТОКС Маастрихт, 1991/; Британской фармакологической конференции /Бирмин-ем, 1992/; 8-м Международном иммунологическом конгрессе /Будапешт, 992/; Международном семинаре "Экотоксикологические проблемы окружав-ей среды и здоровье в урбанических ареалах в Центральной и в Восточ-ой Европе." /Катовице, Краков, 1992/; Конференциях "Современные воп-осы фитотерапии и традиционной медицины." /Ереван, 1993 и 1995/; ездународной конференции "Руководства и стратегии для доклинической клинической оценки новых продуктов." /Лондон, 1995/.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 309 стра-ицах машинописного текста, иллюстрирована 36 таблицами и 30 рисунка-и, и состоит из ЕЕздения, обзора литературы, собственных исследоса-ий, заключения, выводов, списка литературы, включающего 300 источ-иков,

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материалы и методы.

ивотные. Использовались инбредные мыши: СВА, С57В1/61, ВА1В/с, гиб-иды первого поколения (СВАхС57В1/61) беспородные, самки и самцы азличных возрастных групп, свободных от специфического бактерионо-ительстза, из Питомника "Столбовая" и Лаборатории биологических мо-елей РАМН. Использовались также крупный /кавказской бурой и черно-пестрой пород/ и мелкий /мясо-шерстных пород/ рогатый скот из хо-яйств Армении.

¡иогенные продукты. . Использовались следующие биогенные продукты:

нейропептиды гипоталамуса, полученные в Институте биохимии м. Г.Х.Бунятяна НАН Армении;

антибиотики: бензилпенициллша натриевая соль/пенициллин в, трептомицина сульфат, гентамицина сульфат; полезные растения флоры Армении /22 вида/: овощные/кормсвыеА 1 Пик

vlctorlalls L.. Falcarla vulgaris Bernh., Chaerophyllun bulbosun L.. Polygonatuo

officinale All.Polygonatun glaberrloum C.Koch., Eleutherosperciira clcutarlum

(Bleb.) Bolss., Heracleum trachyloisa Fisch.et C.A.I.íey.H.Sosnowskyl Manden.,,

H.antaslatlcua Handen.Scablosa arvensls L...Caparla splnosa !,.;_ пряные:.

Thynus Kotschyanus Bolss. et Hohen., Mentha longlfolla L. Iluds., Armoracla'

rusticana Lam.Caerth.Mey. et Schreb.Carura carvt I,.,; ароматические:

Cichorium lntybus l.,. Corlandruni satlvua 'u.; диетические: Saturea horten-

sls L., PetrosellnuD crlspum L., Anethu;j graveolen3 L.;. лекарственные:

Brionla alba L.Cinsemj red Korean. Использовали цельное сырье, плода и стебли, в форме настоев, отваров, жидких и густых экстрактов, и их лиофилизированные препараты, приготовленные по оригинальной методике в Институте биохимии. Институте тонкой органической химии HAH Армении и в Институте женьшеня и табака г.Тайджон, Корея. Определялась активность сырья в иг/ыкл. Все сырье предварительно оценивалось на безвредность согласно требованиям Гос. Фармакопеи; - препараты тимуса: Тактивин, тималин, тимоптин, тимоген, тимозин фр.5; - бактериальные гликопептиды: мурамилдипептид, глкжозашпиц-мурамилдипептид, бластолизин,муроктазин; - костно-мозговые цито-кины: миелопептцды.

Гуморальный иммунный ответ. Изменения параметров гуморального иммунного ответа оценивали но продукции АТ-образуицих клеток в индуктивный и в продуктивный периоды в модифицированных методах прямого и непрямого локального гемолиза (Jerne U.K., Nordin A.A..1963), В качестве АГ-ов использовали: поликлональный ( Salounella ty-

phosa 0901, Dlfco Lab..Detroit, Mich., U.S.A. ) ; тимус-независимый ( динитрофенил-фиколл, приготовленный с использованием с H В i -фиколла (Ùm 400 ООО, Slgoa Chen.Co.. U.S.A.) и 2,4-динитрофенилсина (Signa) по Klaus С.С. et al.. 1976 ; тимус-зависимый - эритроциты барана. В качестве индикаторных клеток для ответа на ЛПС и ДВФ-фикодл5 использовали.вццернанные в растворе Олсвера эр.барана, соединенные с тринитрофенилом по Rittenberg M.B. et al.1969). Ответы оценивали: поликлональный - на 2-е сутки, тимус-независимый - на 3-е сутки, тшус-зависииый - на 5-е сутки после первичной/вторичной иымунизаци Клеточно-опосредованный иммунный ответ. Изменения параметров оце-нигали по сдвигу реакции повышенной чувствительности замедленного типа Chase U/¡!.,I97& ) . Интенсивность реакции оценивали как по разнице массы стоп, так и толщине их отеков.

Макрофаги получали из различных органов: легких, методом бронхоаль-веолярного лаважа ( l.emaire I.,. 1985 ) ; печени /клетки Купффе-ра/, методом центрифужного извлечения (Knook D.L. .Sleyster Е.С. . 1976);, селезенки (Julius М.Е., 1973) ; брюшной полости, методом'перитоне-ального лаважа (van Furth R.,Diesselhoff-den Dulk it.ILC., 1980); лимфатических узлов (Bradley L.M.. 1980) ; костного ыозга (van Furth R„, 1935); моноцит-производные макрофаги периферической крови (van Furth R., DlcsselhofC-den Dulk U.M.С., 1982). Макрофаги идентифицировали морфологически и цитохимически.

Активность макрофагов оценивали с помощью прямых и непрямых методов в различных тест-системах:

- морфологически, методом световой микроскопии с определением интенсивности фагоцитарной функции по индексу Гамбургера - процента активно фагоцитирующих макрофагов от общего их количества; индексу Райта - количество мишеней /термоинактивированные S. aureus /, поглощенных одним макрофагом; распластывания - по подвижности клеточной мембраны, определенного с помощью объект-микрометра; цито-патического действия мишеней и иымуномодуляторов, по процентному соотношению разрушенных макрофагов;

- цитохимически, по активности экто-ферментов л-нафтил ацетат эсте-разы (Sonne 0. et al., 1991) и 5-нунлеотидазы (Edelson Р.J., Cohn Z.A.. 1976).

- спектрофотометрически, с определением интенсивности фагоцитарной функции макрофагов (van Furth R.. 1985).

- микробиологически, с определением бактерицидной активности макрофагов: прямым методом внутриклеточного киллинга in vitro после фагоцитоза In vivo (van Dlssel J.Т. et al. ,1987) и непрямым методом внутриклеточного "дыхательного взрыва" (Park В.Н. et ab, 1968)j

- ыетаболйческ^ю_активность макрофагов оценивали как изменение пула оксидантов в тесте редукции нитросинего тетразолия (Jupin С.et al.I989).

- секреторную активность макрофагов оценивали по их способности вырабатывать и секретировать интерлейкин-I (Brandweln S.R. et al.,I987).

- ^¿иген-представляющ^в_ф^нкцию шкрофагов оценивали по антиген-специфической макрофаг-зависимой пролиферации Т-клеток in vitro

(Stelnnan L. et al.1978).

- ^5^офаг-зависрщю_активад™_Т;клеток оценивали по индукции синтеза интерлейкина-2 и по способности супернатантов культур клеток поддерживать пролиферацию ИЛ-2 зависимой линии цитотоксических Т-лиыфоцитов CTII-2 Для исключения секреции под действием биогенных продуктов ИЛ-4, также способного индуцировать пролиферацию CTIL-2,

использовали анти-ИЛ-4 моноклональные антитела IIBII.

- аккумуляция ма£рофагов_в_о£ганаа_и_полостях оценивали по их кол! честву как в норме, так и на фоне раздражителей.

- жизнеспособность макрофагов определяли периодически на всех эта' пах исследования с помощью трипанового синего (van Furth ,1975)..

- при исследовании_онтогенетических характеристик макрофагов, применяли разработанную нами тест-систему, основанную на методе механического истощения брюшной йолости по Фрейдлзш И.Я. и соавт., ISI Из брюшной полости/легких анестезированных внутримышечной инъекци< 0,5 мл/кг смеси кетамина /100 мг/мл/ и ксиларина /2 ыг/мл/ в соотношении 6:1, лаважировали'макрофаги в полном объеме через сутки 3 раза подряд. На 5-е сутки после последнего истощения, лаважирован-ные макрофаги суспензировали и идентифицировали.

Продукция гормона роста /соматотропина/. Модуляцию экспрессии сом; тотропина исследовали в экспериментальной модели, включающей лини; фибробластов мышей ВАЬВ/с, стабильно продуцирующую гормон роста ч( ловека /Резников М.В. и соавт., 1989/. Концентрацию гормона определяли двухсайтныы иммунометрическим методом ELIZA (Gaastra , IУ6 в модификации Свешникова П.Г. и соавт., 1988.

Бактериальные патологии моделировали используя 4-18 ч культуры патогенных штаммов микроорганизмов: Salmonella typhlnurlum 'II'.), S.cho lerae suis 1422, S. typhi 3446, escherichia coli 'J3,_ Pseudomonas aer glnosa 8. Shigella flexnerl Ia-I8I8._Sh.fi. 337._Sh.fl. Ia-2607, 5h sonnel 177, Staphylococcus aureus 1УУI. Streptococcus pneumoniae T3 Все бактериальные штаммы высоковирулентны и типичны по культураль-ным, морфологическим и ферментативным свойствам. Обсемененность микроорганизмами органов животных оценивали с помощью высевов их гомогенатов на дифференциальные питательные среды Плоскирева и Эндо. Идентификацию колоний микроорганизмов проводили с помощью типоспецифических агглютинирующих стандартных сывороток. Минеральные токсикозы моделировали с помощью минеральной токсической пыли: кризотилового асбеста А /волокна менее 0,25 мкм в диамет ре и 20 мкм В'длину/(Duke Scientific Corp., Palo Alto, USA); кремния /частички 5 мкм в диаметре/ (Pennsylvania Glass Sand Co., Pitts burg,_ PA,; USA) ; кварца (Pennsylvania) ; графита( Duke) . Минерал! ные вещества применяли в дозах 5 мкг - 100 мг/мл или на мышь. Гельминтозы. вызванные Fase 1 о 1 a hepatlca, Dlcrocoel lu.n 1 anceolatu:,:, Strongylus vulgaris исследовали у спонтанно пораженных крупно] и мелкого рогатого скота, либо моделировали на мышах. Исследование проводили капрологически методом последовательных смывов, с идентг

фикацией яиц гельминтов и их половозрелых форм. Яйца гельминтов вводили мышам подкожно в область спины, через 3-12 недель развивались характерные гельминтозы. У пораженных животных в динамике на разных 'стадиях патологий извлекали макрофаги и исследовали их активность. Эхстенсэффективность вычисляла как процент вылечившихся животных от общего количества пораженных.

Иммунодефицит-индуцированные патологии моделировали внутрибршин-ной инъекцией циклофосфана или фторурацила по 0,05 г/кг. Стресс-индуцированные патологии моделировали на мышах плаванием в течение 1-2-3 ч, и ЛПС-индуцированным шоком /внутрибрюшинно 350 тг или подкожно 250 ыхг на мышь.

Статистическую обработку данных проводили с использованием -t-критерия Сгьюдента

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

ШШНШОДШРУЩИЕ ЭШЯСШ БИОГЕННЫХ ПРОДУКТОВ

Изучали иммуномодулирующие эффекты различных доз биогенных продуктов: кейропегтидов гипоталамуса, антибактериальных антибиотиков - пенициллина, стрептомицина, гентамицина и традиционных пищевых/кормовых растений флоры Армении.

Иммунофункциональная активность нейропептидов гипоталамуса.

Исследованные кардиоактивные нейрогормокы гипоталамуса принадлежат-к новому классу низкомолекулярных гликопептидов /Мм 3-7 кДа/ и продуцируются ярупнохлеточными нейросекреторными ядрами гипоталамуса (Галоян A.A., 1986). Изучение иммуномодулирующих свойств данного класса нейропептидов гипоталамуса /ГЭД1/ позволило обнаружить их иммунофункциональную активность в широком диапазоне доз: от 10^ до 10 мнг. Оказалось, что в составе ГНП имеются нейропептиды, обладающие либо иммуностимулирующими, либо шмунодепрессирующими свойствами и, были условно обозначены нами соответственно как НЛ-Л-и НП-р> . Так, 1НП проявляют выраженную способность /в 1,2 - 14,3 р<0,001/ модулировать антителогенез /Рис. I/. Данный эффект проявляется под действием 1Ш1 на уровне физиологических концентраций как в индуктивный, так и в продуктивный периоды иммунного ответа на различные антигены: поликлональный, Т-зависимый, Т-независишЙ щ vitro и In vivo . Интенсивность изменения антителообразования под влиянием как стимулирующих, так и депрессирующих ПШ коррелирует с дозой, типом АГ, и системной моделью. Данные икмунофармакологичесного анализа свидетельствуют, что величина силы модулирующего действия

модулировать антителогенез

По оси ординат - количество АОК/Ю6

По оси абсцисс - дозы ГНП /мкг/: 1-контроль5 2-Ю"3: 3-10"; 4-10; 5-1; 6-Ю'2; 7-Ю"4; 8-Ю-6; 9-Ю"8; 10-Ю"10; 11-Ю"12; 12-Ю"14; 13"16. а - НП-оО, б - НП-£ .

nffl проявляется вше при индукции ответа m vivo /К= при ЛПС: Ш1-А 1,3-6,1; НП-Я 1,6-4,1; ДНФ-фиколле: НП-<* 1,3-3,4; НП-£ 1,5-2,8; э.б.: НП-^ 1,3-14,3; . НП-£ 1,2-4,1/, нежели in vitro /К= при ЛПС: НП-<С 1,5-5,2; НП-ja 1,6-4,3; ДНФ-фиколле: Hn-<¿ 1,2-2,3; НП-£ 1,2-2,1; э.б.: fflI-<¿ 1,2-7,3; НП-Р 1,3-3,8/, или в продуктивный период in vivo /К= при ЛПС: HIW- 1,3-3,2; НП-f- 1,3-3,0; ДНФ-финолле: HIb¿ 1,4-2,9; НП-/3 1.3-2,0; э.б.: НП-^ 1,4-5,6; m-f 1,4-3,3/ и In vitrc/K= при ЛПС: ШКб 1,3-2,8; Ш1-? 1,3-2,4; ДОФ-фиколле: fflI-<¿ 1,3-2,6; НП-/ 1,2-2,2; э.б.: mb¿ 1,3-4,1; НП-р 1,3-2,6/ (р< 0,05-0,001).

Полученные данные позволяют предположить участие ШП в кооперативных процессах АТ-образования как в период индукции, так и на уровне зрелых АТ-продуцентов. Вероятно, ПШ модулируют общий синтез иммуноглобулинов. Фармакокинетически наибольшая активность ГОЛ проявлялась в Т-зависимом ответе, затем поликлональноы, и только после - в Т-независиыом. Данное обстоятельство позволяет прбдпо-ложить, что реализация этой активности ГОП может осуществляться преимущественно посредством Т-клеток.

ГНП в широком диапазоне доз модулируют и клеточно-опосродоваи-ный иммунный ответ в РПЧЗТ /Рис. 2А/. Однако, характерной особенностью данного феномена является тот факт, что показатели индекса реакции повышают /в 1,3 (р<0,05) - 2,9 (р<0,001) раза/ как стимулирующие, так и депрессирущие НП. Известно, что классически РПЧЗТ это зависимая от Т-клеток иммунная реакция, в которой в ответ на АГ раздражитель иммунные Т-клетки синтезируют и секретируют лимфо-кины и другие активные иолекулы, привлекахщие в возникший очаг воспаления макрофаги, вызывают их накопление и активацию. В этой связи, полученный факт, вероятно, способен дополнить предположение о способности ГНП модулировать иммунные реакции в большей степени через Т-клеточные механизмы. Исходя из отмеченного, логичным представлялось исследование способности ПШ модулировать активность макрофагов. Полученные данные показывают, что ГНП модулируют различные морфологические параметры фагоцитарной активности макрофагов /Рис. 2 Б - Д/. Так, НП-л и НП-р соответственно стимулируют/ угнетают ИГ в 1,1-1,61/1,1-1,87; ИР в 1,2-2,4/1,1-2,1; распластывание макрофагов - в 1,16-1,54/1,2-1,63 (р<0,05-0,001) раза. НП-Л » снижали ЦПД мишени относительно контроля в 1,3-1,6 (р<0,001) раза. НП-р не проявляли аналогичного эффекта, сохраняя тенденцию к зависящему от дозы повышенному его уровню относительно контроля'.

Выявлено, что ГШ модулируют также выработку ИЛ-I /использованы только НП-Л / мышиными перитонеальнши макрофагами. Так, ГНП потен-

I | I I I I I I I

1 г 34 5670910111213

101

О I I ' I I I I I ' I

12эч5б'/в91ш1 1213

О I I I м м I I I I I I 12 3 45 Б7 ВЗОИЙВ

2501

125

120|

6С

12эчэб709ш

250

125

г и б 12 гн ив

—I I I—I—г

к о г - -

ч б е ча

Рис. 2 Ииыун©функциональная активность Щ] А - РПЧЗТ, по оси ординат - толщина отека стопы /х0,1 мм/; Б - ИГ, В - ИР, Г - ПКМ, Д - ЦОД, по оси абсцисс - дозы ШП в мкг: 1-контроль, 2-10^ 3-102, 4-10, 5-1, 6-Ю"2, 7-Ю"4, 8-Ю-6, 9-Ю"8, 10-Ю"10, Н-Ю-х2, 12-Ю-14, 13-Ю-16, а - НП-л , б - НП-р . . Е - действие ГШ на продукцию ИЛ-1 ЛПС-стимулированными № через 48 ч инкубации. По оси абсцисс - дозы ГШ в мкг: 1-контроль ЛПС без ПШ, 2-1, 3-Ю"2, 4-Ю"4, 5-Ю"6, 6-Ю'8, 7-Ю"10, 8-Ю'12, 9-Ю'14 Ю-Ю"^6. а - ГШ без ЛПС, б - ГШ в присутствии ЛПС, Ж - кинетика "продукции }!Л-1 ЛГхС-стицулированными МБ в отсутствие . ПП1, по оси абсцисс - время инкубации /ч/;

3 - и в присутствии ГШ /10"*® мкг/» добавленных в различное время после ЛПС, по оси абсцисс - время добавки ПШ /ч/, по оси ординат - активность {1Л-1 /ед в мл/.

циируют ЛПС-стиыулированную продукцию ИЛ-I в 1,3-3,3 (р<0,05-0,001) раза /Рис. 2 Е,Ж,3/, которая не сопровождается повышением количества макрофагов и их адгезии. Причем, ГШ потенциируют раннюю стадию активации макрофагов» приводящую к повышению продукции ИЛ-I. Так, кинетически, ИЛ-I появлялся в супернатантах культур макрофагов спустя 2 ч после начала их инкубации с ЛПС, достигал пика к 24 ч и оставался на том же уровне и через 48 ч. Применение ГНП повышало выработку ИЛ—X в начальном периоде инкубации, в убывающем порядке: при одновременном применении с ЛПС - 0 ч, затем - 2 ч и 4 ч. Это связывает действие макрофагов и ПШ, а не ГНП и пролиферацию тимо-цитов. Результаты кинетического анализа указывают на тот факт, что действие ПШ проявляется ещё до секреции ИЛ-I в культуральный су-пернатант, то есть в период ранней фазы синтеза мИШ. Можно предположить, что действие ПШ наиболее эффективно в период синтеза ШЫ, хотя оно может распространяться и на начальный период секреции мононина. ГНП обладают также способностью повышать АГ-представляющую функцию макрофагов /в 1,6-5,1 (р<0,001) раза/ /Табл. I/. Это показано в методе АГ-специфической макрофаг-зависимой Т-клеточной пролиферации ш vitro. Данная тест-система позволяет судить о начальном этапе периода первичного ответа к АГ популяцией непримированных клеток и, характеризует раннюю фазу представления АГ. Обнаруженный феномен сопровождается повышенной продукцией ИЛ-2 /в 2,0-5,8 (р<0,001) раза/ /Табл. 2/ в ИЛ-2 зависимой линии цитотоксических Т-клеток CTLI-2, но не ИЛ-4, Последний также, как известно, способен повышать пролиферацию данной линии клеток, и был нейтрализован анти-ИЛ-4 мышиными МонАТ-ми IIBII /Табл. 3/'. Мсжно предположить, что механизмы, посредством которых ПШ модулируют макрофаг-Т-клеточные взаимодействия, могут быть вовлечены в повышение эффективности захвата, обработки и представления АГ макрофагами и/или содействие взаимодействию или переносу информации Т-клеткам. Эти эффекты могут отражаться на повышении продукции ИЛ-2 и других цитокинов, а также экспрессии их рецепторов на лимфоцитах, приводящих к повышению их пролиферации. Примечательно, что кинетически наивысшая активность ГНП проявляется в дозах 10~® - 10""ыкг, что соответствует области физиологической активности большинства пептидных гормонов.

Вероятно, существование стимулирующих и депрессирующих ПШ физиологически закономерно. Можно предположить, что данный антагонизм способствует сбалансированному функционированию гипоталамуса как локально - в системе иммунного барьера мозга, так и в систем..гомеоста-

дозы нп захват зн-тздал

(мкг) (имп/мин)

К 17,8 ± 0,6

1,оо 30,1 ± 1,0

10"^ 42,1 ± 1,1

Ю"4 54,6 ± 1,3

кг6 66,8 ± 1,3

ю"8 79,9 ± 1,4

Ю"10 91,8 ± 1,6

ю-1-2 68,4 ± 1,3

ю-14 44,8 £ 1,1

то-и 22.7 ± 0.7

Таблица I

Действие ГНП на АГ-представляюцую функцию макрофагов

ДОЗЫ нп (мкг1 АКТИВНОСТЬ ИЛ-2 (ел/мл)

ВРЕМЯ ИНКУБАЦИИ (ч;

24 48 72

контр. 9,8 ± 0,3 28,8 ± 1,6 19,2 + 0.7

1,0, 17,6 ± 0,8 56,2 ± 3,1 34,2 ± 2,1

10"г 25,0 84,6 ± 5,4 49,5 + 2,3

ю-4 32,4 ±1,7 112,6 ± 8,1 65,7 + 3,8

ю-6 42;5 ± 2,1 135,7 ± 8,8 60,9 + 5,8

Ю"8 48,2 ± 2,4 167,3 ± 9,8 96,9 ± 6,9

кгш 39,9 ± 2,6 133,7 ±9,6 79,7 + 4,8

кг1* 30,4 - 2,1 100,2 ± 8,7 62,4 + 3>5

ю-14 23,1 ±1,6 66,1 ± 4,7 43,9 + 2,3

Ю"16 13,9 ± 0.6 32.4 ± 1,8 26,2 ± 1,3

Таблица 2

Действие ГНП на продукцию и секрецию интерлеЕкина-2

дозы нп (мкг)

АКТИВНОСТЬ ИЛ-2 (ед/мл)

-Мон АТ

4,0 ±

34.0 ± 41,2 ±

49.1 ± 56,4 ±

63.8 ± 71,6 ±

52.9 *

35.0 ±

16.1 ±

+Мон АТ

г 0,6

± 0,9 ± 1.1

± 2,2' ± 2,6 ± 3,1

* 4,4 ± 4,8

* 2,5 ±1,6

* 0,9

к -аг к +аг

г2 г4

10' 10' 10' 10' 10' Ю-

пг"

10"16

гб

Г8

,-ю

•12

0,03 0,06 0,6 0,6 1,1 3,1 3,6

4.1

3.2 2,6 0,6

21,3 19,2 32,9

40.1

48.2

55.7 63,2

70.8 .52,0 32,7 14,0

Таблица 3

Действие ГНП на секрецию интерлейкина-2 в присутствии анти-ИЛ-4 Мон антител

оа. Колю предположить, что сдвиг баланса преимущественно в одну из сторон, приводит к иммунопатологии, как и является ее следствием.

Иммунофункциональная активность антибактериальных антибиотиков.

В настоящее время накоплен обширный материал в области изучения влияния антибиотиков на иммунную систему. Анализ данных литературы свидетельствует, что антибиотики яеляются иммунодепрессантами, либо не изменяют активности иммунной системы. В то же время, характер их действия зависит от вида, величины дозы, продолжительности и способа их применения по отношению к АГ воздействию (Навашин С.М., Фомина И.П., I9S2; Егоров Н.С., 1986). Очевидно и то, что исследования в данной области были ориентированы на изучение их химиотерапевти-ческих доз при продолжительном применении в условиях бактериального инфицирования. Имеются отдельные работы подвергающие сомнению представления об иммунной активности антибиотиков. Однако, это относится к неактивным в отношении бактерий полиеновым /противогрибковым/ и антрациклиноЕЫм.антибиотикам ( Ватин А.Е., 1983; Лазарев Д.Н., Алехин Е. К., 1985; Martin Е. et а!..1994 ) . Интересным представлялось исследование иммуномодулирувщих свойств антибактериальных антибиотиков при однократном их применении без участия пизнеспособных микроорганизмов.

Исследование установило, что антибактериальные антибиотики: пенициллин, стрептомицин, гентамнцин, обладают разнонаправленной ш-мунотропнсй активностью, зависящей от дозы антибиотика. Обнарунен-ная активность антибиотиков проявляется в различных тест-системах в диапазоне доз: от 0,5 до 500 ООО ЕД/мкг на кг. В максимальных бактерицидных дозах'антибиотики оказывают угнетающее влияния на иммунные реакции. В средних бактерицидных дозах они либо угнетают, но с меньшей силой, либо не изменяют их уровень. Это согласуется с тра-д:щионнш представлением относительно их иммунотропности.

Основным и наиболее значимым обнаружением исследования является выявление факта, что антибиотики в суббактерицидных/субтерапевтических дозах обладают выраленной иммуностимулирующей активностью. В наших модельных системах она проявляется в дозах 25-2 500 ЕД/кг. Пик активности приходится на дозу 250 ЕД/кг. Наилучший эффект достигается при сочетанном применении пенициллина и стрептомицина.

Так, максимальные бактерицидные дозы антибиотиков угнетают АТ-образовакие как в индуктивную, так и в продуктивную фаз иммунного ответа на Т-зависимый АГ /Рис. 3 А,Б/ соответственно: П-в

7ooq

3500

t 5 5 4 5 67 6910ДШ314 u" I 2 S 45 6 Si6ili2l3i4

Рис. о Иммунофункциональная активность различных доз антибиотиков.

АТ-образование в индуктивный - А - и в продуктивный периоды ответа- Е По оси ординат - кол-во АОК/селезенку /А/ и кол-во ACK/iCr? В - ИГ', Г - ИР, 11 - ПКМ, Е - ЦДЛ. По оси абсцисс - дозы /ЕД на кг/: I—контроль, 2-500 000,3-250 ООО, 4-50 ООО, 5-25 ООО, 6-5 ООО, 7-2 500, 8-500, 9-250, 10-50, 11-25, 12-5, 13-2,5; 14-0,5. -х- пенициллин, -о- стрептомицин, гентамицин,— пен+стрепт

2.3-3,2 в 1,7-2,7; С - в 3,7-5,8 к в 2,1-3,8; Г - в 3,8-6,2 и в 2,4-3,6; П+С - в 2,2-2,7 л в 1,3-2,1 (р<0,05-0, ООП раза. Суббактерицндние дозы антибиотиков стимулируют АТ-генез соответственно ({азе ответа: П-в 1,5-3,1 и в 1,3-1,6; С - в 2,3-4,6 и в 1,4-1,9; Г - в 1,9-4,1 и в 1,4-1,8; П+С - в 1,5-7,9 и в

1.4-3,7 (р<0,05-0,001) раза. Можно видеть, что фармакокинетически величина силы АТ-стимулирующей активности антибиотиков проявляется выше при индукции иммунного ответа.

Аналогичным образом антибиотики модулируют проявление феномена клеточного иммунитета в РПЧЗТо Так, максимальные бактерицидные дозы угнетают индекс реакции: П-в 1,6-1,9; С - з 1,7-2,8; Г -в 1,5-2,4; П+С - в 2,3-3,1 (р<0,05-0,001) раза.

Антибиотики модулируют тагске фагоцитарную функцию макрофагов, оцененную морфологически. Так, максимальные бактерицидные дозы антибиотиков угнетали КГ, ИР, ШШ, ЦОД в 1,12 (р<0,05) - 1,94 (р <0,001) раза . Суббактерицидные дозы антибиотиков повышали эти показатели в 1,17 (р<0,01) - 2,6 0?<0,001) раза. /Рис. 3 В,Г,Д,Е/.

Целесообразным представлялось также изучение иммунокорригирую-щих свойств антибиотиков. В настоящее время имеются лишь единичные работы, дающио возможность предполокить их наличие ("Арцимович Н.Г. и соавт., 1988, 1991), Исследование позволило выявить наличие у антибиотиков выраженных иыыунокорригирующих свойств. Обнаруженные свойства антибиотиков проявляются при их применении в суббактерицидных дозах в условиях цкклофосфан-индуцированного иммунодефицита. Уак, суббактерицидные дозы антибиотиков повыпали АТ-образование по сравнению с ЦФ-обработанным контролем соответственно: П-в 1,38-1,7; С - в 1,4-2,1; Г - в 1,42-1,9; П+С - в 1,6-3,8 (р <0,001; раза /Рис. 4 А/. В аналогичных дозах антибиотики повышали формирование клеточно-опосредованного иммунного ответа в РПЧЗТ: П-в 1,6-1,96; С - в 1,4-1,52; Г - 1,48-1,6; П+С - в 3,1-3,7 р р<0,001) раза /Рис. 4 Б/. По тому же принципу антибиотики проязи-ли активность и при угнетении фагоцитарной функции макрофагов. Ога повышали ИГ макрофагов: П-в 1,44-1,87; С - в 1,18-1,4; Г -в 1,16-1,83; П+С - в 1,17-3,3 (р>0,05-0,001) раза. /Рис. 4 В/. Максимальные бактерицидные дозы антибиотиков во всех случаях угнетающее действие ЦФ усиливали.

Учитывая полученный факт, что антибиотики способны усиливать действие цитостатика - вещества, несущего отрицательный- стимул, логичным представлялось выяснение способности антибиотиков та. :е усиливать действие веществ, несущих положительный стимул - иммуностиму-

1650

805'

+- гЬ

п

+

П С Г с п с

д

г*-,

Г*1 ri- ff-l 4-] -к-

ri п

+ +

п с Г с П С г с

-I

I оси

50

101

1 2 345S7B9iaillZlli1l5

0

+1

|-В-|

гЬ П 4* ■4-

К П С г с П с г

- I 3

201

10

0

ж

м

Рис. 4 Иммунокорригируюцая и иммунопотенциирукщая активности антибиотиков.

А и Г -;АТ-генез, Б и Д - РПЧЗТ, В - ИГ, Е - ИР, Ж - СТГ. По оси ординат - А - кол.АОК/селезенку, Б -индекс реакции /%/, Г и Д - яоэф. стимуляции, Я - конц. СТГ мкг/мл. По оси абсцисс - А,Б.В/- дозы ЕЙ/кг: I-K инт.. 2-К ЦФ, 3-500 ООО, 4-250-000, 5-50 ООО, 6-25 ООО, 7-5 ООО, 8-2 500, 9-500, 10-250, 11-50, 12-25, 13-5, 14-2,5 15-0,5. -х- П, -о- С, -е- Г, — П+С.

2

К

ляторов. В качестве такового использовали, костно-мозговые цитокины - миелопептиды в субоптимальной дозе. Исследование выявило, что антибиотики повышают восприимчивость иммунной системы к иммуностимулирующему воздействию, выступая примируюцим агентом при их применении до стимулятора, а также усиливают его действие при одновременном с ним применении. Так, при применении антибиотиков за 24 ч до одновременного применения АГ и МП, повышавших АТ-образование в 1,5 ("р<0,001) раза, П увеличивал выработку АОК ещё в 1,16 (р<0,05); С - в 1,2 Ср<0,01); Г - в 1,18 (р<0,05); П+С - в 1,45 (р <0,001) раза. При одновременном применении антибиотиков, АГ и МП, ошх повышали продукцию АОК на фоне МП: П - в 1,25; С - в 1,4; Г - в 1,54; П+С - в Г,9 (р<0,001) раза /Рис. 4 Г/.

Аналогичные результаты получены и в клеточно-опосредованном ответе. Так, применение антибиотиков за 24 ч до МП, повышало действие последних: П-в 1,4 (р<0,01); С - в 1,25 (р<0,05); Г -в 1,25 (р<0,05); П+С - в 1,6 (р 0,001) раза. При одновременном применении, антибиотики повышали действие МП: П-в 1,5 (р<0,001); С - в 1,3 ; Г - в 1,3 (р<0,05); П+С - в 1,8 (р<0,001) раза /Рис. 4 Л/.

Интенсивность фагоцитарной функции макрофагов /ИР/ повышалась под действием антибиотиков, примененных за24чдоМП: П - в 1,6; С - в 1,2; Г - в 1,3; П+С - в 3*2 (р<0,001) раза. При одновременном применении антибиотики повышали действие МП: П-в 2,1 ; С - в 1,6; Г - в 1,8; П+С - в 4,6 (р<0,001) раза /Рис. 4 Е/.

Мояно предположить, что антибиотики в суббактерицидных дозах способны претендовать на роль иммуностимуляторов с широким спектром действия. Кинетически, аыиногликозидные /стрептомицин, гентамицин/ антибиотики в большей степени стимулируют гуморальное звено иммунного ответа, а беталактамные /пенициллин/ - преимущественно клеточное. Интересно, что сочетанное применение аминогликозидов и бета-лактаыазом приводит к выраженному синергизму их эффектов, но только в стимулирующих дозах. Данный факт мокет свидетельствовать о благоприятном их действии на иммунную систему.

Известно, что антибиотики, помимо прямого назначения, используются в качестве средств, стимулирующих рост и развитие молодняка животных в с/х-ве. Известно также, что под действием антибиотиков в макроорганизме увеличивается количество ростовых гормонов ("Мозгов И.Е., 1985). В этой связи нам представлялось интересные выяснение возможности исследуемых антибиотиков модулировать выработку ос-

новного гормона роста - соматотропина в суббактерицццных/иыыуности-ыулирующих дозах. Исследование показало, что антибиотики в суббактерицидных дозах не влияли на экспрессию гормона роста человека в перевиваемых культурах фибробластов мышей BALB/c, определенную им-мунометрическиы методом ELIZA . Однако, положительным эффектом обладали костно-мозговые цитокины МП, которые повышал!! экспрессию соматотропина в 2,3 (р<0,001) ра.за в дозе I0"3 иг. Другие примененные иммуномодуляторы: Тактивин, тималин, МДП, ГВДП, подобным эффектом не обладали /Рис. 4 Ж/. Ранее нами была установлена способность МП повышать привесы молодняка с/х животных (Априкян B.C., 1988). В этой связи, можно предположить, что МП, помимо известных активностей, могут выступать и в роли ростовых/ростостимулирущих цитокинов. Можно предположить наличие в их составе отдельных пептидов, ответственных за стимуляцию/регуляцию соматического роста.

Известно, что характерной особенностью соыатотропного гормона является его видоспецифичяость, не позволяющая использовать в медицине гормон, выделенный из животных (Rich H., 1УУ5 ). Учитывая широкое применение МП в медицине можно предположить, что обнаруженное его новое свойство' может оказаться полезным не только в фундаментальном, но и в прикладном аспектах.

йммунофункциональная активность высших растений.

Среди биогенных продуктов особое место занимают высшие растения как естественные аккумуляторы биоактивных соединений и наиболее многочисленные из существующих типов природных продуктов.

Нам представлялось актуальным изучение иммунологической активности высших растений и, в первую очередь тех из них, которые наиболее часто употребляются человеком и животными.

В настоящее время в Армении дико произрастают 3200.видов высших растений. В качестве полезных из их числа традиционно используют 599 видов, из которых только в пищу употребляют 210 видов (Априкян C.B., 1975). В целом ке в странах бывшего СССР из 20 ООО видов высших растений в пищу используют 1000 видов, а из 300 ООО видов высших растений Земли - 2000 видов (Априкян C.B., 1972). Учитывая богатый народный опыт армян по использованию дикорастущих овощных и пряных растений, их широкое употребление в пищу, насыщенность ими флоры, изученность ботанических, биолого-экологических особенностей их видов и родов, химического состава, качественных показателей, хозяйственной ценности и внедренность в производство пищевой и консерв-

v.oZ аре.'оптетепости, c/k-eo (Априкян C.B., 1975, 1930), a вше воз-росауэ роль ;:1г.:унспитания в регуляции иммунной системы (Cunninghan--Rundlos S.,1092) t значительный штерес представляло исследование пищевых/кормових растений флоры Армении в аспектах фитоиммуномоду-ляцпи и фотоиммунопатания.

Всего нами исследованы представители 22 видов наиболее распро-странешаес днкорас1ущлх озоцнкх и пряных растений, произраставших во всех флористических, шпаатических зонах, географически и высотных поясзх Арметтк: от полупустынного до альпийского /шсота над уровнем моря 550-3000 м/, с учетом зон антропогенного воздействия. Из изученных'видов съедобных трав наибольшую иммунологическую ак-тлиюсть проявили следующие» Среда пкцйэшг/вормовых - борщевик'пе-роховато-озаймлешшй (Heracleun trachy 1 otaa Fisch, et C.A.Hey) , 6. Сосновокого (H.Sosnov.'skyl Manden.), б. д-эрзднеазиатскиЙ ( H. antasl atlcum Manden ) , черемша - лук победный (Al 1 нш victorlalls L. ) , нупена Гл?.Д7'.3~Ч ( Polygonatun glaberrlau,?! C.Koch. ) . Среди пряно-ароматических - ïitîîbini Копи - чабрец (Thynus Kotschyanus Bolss. et Hohen. ),_ цикорий обыкновенный (Cichoriun intybus L. ) , кориандр дикий ( С о м-

îst'vvr. L.) . Дтет'гческгос - чабер дикий - цитрон (Sature?. hortensls L, ) , каперс колючий (Caparls splnosa L. )".•

Дял сравнили геличкш силы нммунотрошой активности растений, использовали так~а лекарственные растения: традиционный неньшень корейский краекпй (Ginseng red Korean) и переступень белый/армянский яеньпгнь (Brionla alba L.I.Все растительное сырье предварительно оценивалось на безвредность. Побочных еффектов не обнаругено.

Ддя в:шЕления нал»1чкя у растений им^омодулирующей активности, растительное сырье применяли в вэде фармакологических форм, согласно Государственной Фармакопеи, однократно внутрибрЕЕпшо или подколно одновременно с AT. Исследованные полезные растеши флоры Армении обладают выраженными зпдлуностимулирующими свойствам!!. Они повышают АТ-образоЕште как в индуктивный, так и в продуктивный периоды иммунного ответа /Рис. 5 А,Е/ в 1,13 (р<0,05) - 1,37 (р<0,001) раза , а лекарственные в 1,2 (р<0,01) - 1,48 (р<0,001) раза. Интересно, что нам не удалось обнаружить угнетающей АТ-генез активности у исследованных растений. Интересно а то, что кинетически высота силы аффекта растений в обоих периодах ответа идентична. Но имеет место дозовая и незначительная фитородовая /5 - 8?V корреляция. Данный факт может характеризовать полезные растения как неспецифических,

60

30

200

100

ДОЗЫ ыг

(-1-1 В _______1_1_1

103 102 ю

.ДОЗЫ мг

«2 Кт

10"

102 ДОЗЫ ыг

10

О абвг абвг абвг

2001

100

Д

КК дех

10? 102 10

ДОЗЫ

10?

мг

Рис. 5 Фитоиммуномодуляция

А - АТ-генез в индуктивный, и Б - в продуктивный периоды ответа. В - Н1ЧЗТ, Г и Д - фагоцитарная функция МФ. По оси ординат: А и Б кол. АОК/селезенку х 10? и хЮ6, В - индекс реакции Г и Д - . показатели СФ при =492 нм /ед. Ш хЮ"3/. По оси абсцисс - I - кормовые, 2 - пряно-ароматические, 3 - диетические, 4 - переступень, 5 - женьшень, в - Э.Б.+женьшень, г - Э.Б.+женьшень+ЛПС, а - Э.Е.+переступень, б - Э.Б.+переступень+ЛПС, д - Э.Р.+корм.+ЛПС е - Э.Б.+пряно-аромат.+ЖЮ, ж - а.Б*диет.+ЛПС. К^-Э.Б, К^-Э.Е.+ЛПС ----на «Тоне иымуноыодулятора МП.

4

о

4

5

умеренных иммунопотенциаторов. Сила эффекта АТ-образования у лекарственных растений была выше до 18&.

Однако, овощные растения не проявляют аналогичных свойств в клеточно-опосредованном иммунном ответе, и не изменяют фагоцитарную функцию макрофагов, что оказалось характерным для лекарственных растений /Рис. 5 В,Г,Д/. Все исследованные растения усиливают эффекты традиционных иммуностимуляторов/цитокинов как в гуморальном ответе, так и при активации макрофагов, а лекарственные и в клеточно-опосредованном ответе /Рис'5/. Так, овощные растения усиливают АТ-образо-вание в 1,13 (р<0,05) - 1,37 (р<0,001) раза, а активацию макрофагов - в 1,15 (р<0,01) - 1,23 (р<0,001) раза. Лекарственные растения усиливают АТ-образование в 1,36 - 1,61 (р<0,001); клеточно-опосредован-ный ответ - в 1,27 (р<0,05) - 1,53 (р<0,001); активацию макрофагов ЛПС-м - в 1,14 (р<0,0Т) - 1,61 (р<0,001) раза. Показатели активности переступеня белого на 7-26Я выше таковых женьшеня корейского красного, но последний не обладал иммунодепрессируюцими свойствами.

Фитоиммунопитание. •

Известно, что рацион мышей на 75% состоит из растительной пищи, включающей траву, сено, корнеплоды, семечки, коноплю, крупу, зерно (Западнюк И.П.' и соавт., 1983). Испытуемые растения: кормовые, пряно-ароматические, диетические, и их смесь, включали в рацион в количестве 2 г/мышь, что составляло 15-20Я от общей суточной нормы рациона. Исследовали 8 групп животных, каждую из которых кормили соответственно 5-10-15-20-25-30-45-60 дней. Применяли также иммуномоду-ляторы, которые инъецировали одновременно с АГ. Кормление растениями прекращали в день введения АГ. Исследовали и способность традиционных иммуномодуляторов проявлять эффекты на фоне фитоиммунопктания.

Исследование выявило, что включение в рацион.животных полезных растений потенциирует иммунное реагирование, повышает иммуногенность животных, содействует усилению иммунных функций.Полезные растения флоры Армении способствуют усилению гуморального и клеточного ответов, повышен™ активности макрофагов. Так, растения потенциировалч АТ-генез: в т,15 - 1,5 /кормовые/; в 1,14 - 1,43 /пряно-ароматические/; в 1,13 - 1,36 /диетические/; в 1,17 - 1,65 /смесь/(р<0,05 -0,001) раза. Данные рас. ;ния усиливали действие гтмуномодулятора МП, примененного на их фоне: в 1,13 - 1,47 /кормовые/; в 1,13 - 1,44 /пряно-ароматические/; в 1,13 - 1,4 /диетические/; в 1,15 - 1,6 /смесь/ (р<0,05 - 0,001) ре»* /Рис. 6 А/. Аналогичные данк^е получены при исследовании продуктивной фазы ответа. Фитоиммунопитание сти-

г*т*ы*| I снн I! ' Ь"1 'I '• 1 11 I I I , I I и И I I , .

450

ГКо

"К!

кг 5 10 15 20 25 30 45 60

30 60

60

ЗС

г1 гЬ Г>> ^ 1. л ^ . , Г*»Ы I I гН^ |

100

Б

М^ГГ^ГП

г^н-

гЧ"Ко

К: 5 10 15 20 25 30 . 45

60

10

гь

Д

П I -ь I Г1

10

п

п

' Г1!"1!*! П^-Нк.

г+ + ■+ +

I 2 3 4 I о 3 1

30

60

30

60

ТОО

50

а

1234 1234

40

20

123 4 1234

30

60

30

60

50

1234 1234

30 60

Рис. 6 Фитоиммунопитание

А - АТ-генез, Б - РПЧЗТ, В - ИГ, Г - ПКМ, Д - ИР, Е - ЦПД, Ж - ИЛ-1. 3 - ШГ-2. По оси ординат: А- кол. АОК/сел.хЮ3, Б- индекс реакц %, В и Г - активность %, Д и Е - активность ед., Ж и 3 - активн.е,ц/мл. По оси абсцисс - 1-корм., 2- пряно-аром., 3 - диет., 4 - 1+2+3. — на фоне иммуномодулятора МП, • •

т

О

о

5

О

О

3

муштровало /препыущоствешю с 15-х суток/ проявление РПЧЗ в 1,25 (p<0,G5) - 1,4 (р<0,01) раза, и потенциировало ее проявление под действием Ш в 1,25 (р<0,05) - 1,5 (р<0,01) раза /Рис. 6 Е/. Интересно, что существенная разница между величинами силы эффектов фитоиммунопитания в различные периода иммуногенеза отсутствовала, или но превышала П'Л. Дценти^люй была и сила эффектов различных видов растений. Величина силы стимулирующих эффектов в отсутствие и в присутствии' иымуномодулятора была также идентичной.

Фитоигалунопитание способствует повышению активности макрефагов. Так, растения повыпали ИГ в 1,21 - 1,47 (р <0,001) раза /Рис. 6 В/; ИР - в 1,34 (>0,05) - 1,8 (р 0,001) раза /Рис. 6 Д/; ПКМ - в 1,15 (р<0,Сб) - 1,5 Ср<0,001) раза /Рис. 6 Г/; снижали ЦПД в 1,3 (р<0,01) - 1,6 р<0,001 раза /Рис. 6 Е/. Фитоиыыунопитание способствовало такие усилению какрофаг-активирупцего действия МП в 1,36 - 1,6 (р<0,01) раза /Рис. 6/. Кинетически разница в величине силы эффекта различных групп растений не превышала Интересно, что при сочетанием применении /смеси/ различных груш растений не имел место синергизм их эффектов, но эффект усиливался.

Фитоиммунопитание способствует усилению выработки цитокинов. Так, оно способствовало повышению выработки ИЛ-I ЛПС-стимулирован-кшш «акрофагами в 1,18 (р<0,05) - 1,35 (р<0,001) раза /Рис. 6 I/. Кинетически сила эффекта под влиянием различных групп растений не превышала 10л. Диетические растения не проявили активности. Фитоикмунопитание способствовало повышению выработки ИЛ-2 в культуре клеток CTXI-2 в 1,17 (р<0,05) - 1,3 (р<0,001) разе. /Рис. 6 3/. Кинетически сила эффектов групп растений не превышала 35«. Диетические растения такяе не проявили активности. Примечательно, что ко- . личество жизнеспособных макрофагов при выработке цитокинов не изменялось.

Интересным представляется факт увеличения иммунофармакологичес-ких показателей по мере кратности кормления животных. Это может косвенно указывать на кумуляцию биоактивных веществ растений в организме животных по мере их поступления, что может способствовать усилению иммунных реакций. В нашем исследовании показатели повышались в большей мере к 25-30 суткш, и в меньшей степени к 60-м суткам. Известно, что исследованные растения богаты органическими и минеральными веществами, в том числе витаминами Е /11-16 иг/%/ и С /90-110 ыг/%/, являющимися главными антистрессорными витаминами (Soitt bet al.,_I99!3). Исследование также показало, что лучшую активность проявляют растения, произрастающие ближе к субальпийскому

и альпийскому поясам. Активность растений имела обратную корреляци-чнную зависимость от зон антропогенного воздействия.

МАКРОФАГИ В ИММУНСМОДУЛЯЦИИ: АКТИВНОСТЬ И АКТИВИРУЕМОСТЬ

В предыдущих сериях исследования были получены экспериментальные доказательства наличия у биогенных продуктов способности участвовать в осуществлении ыакрофаг-ассоциированных функций. Представлялось естественным выяснение и некоторых аспектов иммунобиологии макрофагов при иммуномодулирующем воздействии. Мы исследовали морфологические и функциональные свойства органоспецифических, онтогенетических, фенотипических, андрогенных характеристик активности и акти-вируемости макрофагов в различных состояниях.

Органоспецифические показатели /Рис. 7 А-Д/ активности макрофагов в норме располагались в. убыванием порядке: печеночные, селезеночные, легочные, брюшные, макрофаги лимфатических узлов. Интересно, что именно в таком порядке происходит пополнение этих органов моноцитами из циркуляции. Так, известно, что около 5696 моноцитов, покидающих циркуляцию, становятся клетками Купффера. Около 30% - становятся селезеночными, около 15% - легочными, и около 8% - перитонеальными макрофагами (van Pur th R.Dlesselhof f-den Dulk M. 1.1.C., 1982). Именно та c.r образом, как известно, пополняется более 75% тканевых макрофагов, и данный процесс происходит каждые 6-7 дней. И только около 25% макрофагов восполняется за счет локального деления незрелых мононуклеарных клеток (van Гиг th R.,19861 Можно предположить наличие прямой зависимости между этими явлениями и, связь с первоочередностью интенсивности жизнедеятельности исследованных органов. Разница интенсивности распластывания у резидентных макрофагов находилась в пределах 25-68%, у ответных - 17-33%. Минимальная разница имела место между селезеночными и легочными макрофагами, максимальная - между перитонеальными и макрофагами л/узлов. Разница интенсивности фагоцитарной функции у резидентных макрофагов была в пределах 1-80%: минимальная у перитонеальных и макрофагов л/узлов, . максимальная - между легочными и перитонеальными. У ответных макрофагов колебалась в пределах 3-18%: мшшмальная - между селезеночными и легочшми, максимальная - между легочными и перитонеальными.

Показатели активируемости макрофагов не соответствовали показателям их активности, и проявлялись в обратном порядке: чем макро-флги активнее физиологически, тем слабее их. последующая активируемо-сть кумукомодуляторазли. Разница интенсивности распластывания у при->■ •■: оглнных и активированных макрофагов органоспецифически была иден-

тичной. В обеих стадиях минимальная разница приходилась на селезеночные и легочные, максимальная - на легочные и перитснеальные макрофаги. Разница интенсивности фагоцитарной функции макрофагов.у примированных и активированных была также идентична, однако минимальная - приходилась в обеих стадиях на селезенку и легкие, максимальная - на перитонеальнуо полость и л/узлы. АГ-представляющая функция у примированных и активированных макрофагов органоспецифи-чески различалась. Минимальная разница в первой из стадий имела место между перитонеальными и л/у, максимальная - между легочными и перитонеальными макрофагами. Во второй стадии, минимальная разница имела место между макрофагами печени и селезенки, максимальная - между перитонеальными и макрофагами л/узлов.

^то^ене^1«е^кие_ха1»ктеристики активности и активируемостн макрофагов проявляются следуицим образом. Макрофаги становятся активными с возрастом хозяина, независимо от физиологической продолжительности его жизни. В зрелов организме макрофаги более актиьны и менее активируемы. Эти факты имеют прямую онтогенетическую зависимость и представлены во всех органах и фенотипах мьшей. /Рис. 7 Г,Ж,3,И/.

Так, активность макрофагов в динамике по недельным возрастам проявлялась следуицим образом. Распластывание у резидентных макрофагов повышалось: с 10 до 20 н.в. на 39,3*; с 20 до 30 н.в. - на 27,6*; с 30 до 80 н.в. - на 15*. Распластывание у ответных макрофагов повышалось: с 10 до 20 н.в. - на 5,4*; с 20 до 30 н.в. - на 3,5*; с 30 до 80 н.в. - на 3*. Темп же фагоцитарной функции макрофагов повышался до 30 н.в., а затем падал. Так, данная функция повышалась у резидентных макрофагов: с 10 до 20 н.в. - на 12,3*; с 20 до 30 н.в, - на 16,5*; с 30 до 80 н.в. - на 5,2*. У ответных макрофагов эта функция повышалась: с 10 до 20 н.в. - на 11,6*; с 20 до 30 н.в. - на 10,7*; с 30 до 80 н.в. - на 5,9*.

Ахтивируемость макрофагов проявлялась иным образом. Так, у при-мированных макрофагов распластывание уменьшалось: с 10 до 20 н.в. -

- на 5,7*; с 20 до 30 н.в. - на 18,5*; с 30 до 80 н.в. - на 11,9*. У полностью активированных макрофагов распластывание продолжало уменьшаться^ 10 до 20 н.в? - на 6,4#; с 20 до 30 н.в. - на 14,7*; •с 30 до 80 н,в„ - на 24,9*, Фагоцитарная и АГ-представляющая функ-

,ции макрофагов повышались прямо пропорционально возрасту хозяина. ,:Так, фагоцитарная функция примированных макрофагов повышалась: о 10 до 20 н.в, - на 2,1*; с 20 до 30 н.в. - на 0,5*; с 30 ,по РО и.л.

- на 0,9*. АГ-предстааляющая функция макрофагов в данной стадии достигала пика не на 20 н., как предыдущая, а на 60 н. Так, в те до

100

печень

50

II

Ю0!бр

.пол.

А

к 5а

И В

10 нед.

О

Л

Ей

НЩ

о

с 50 т

ь

%

100 50

20 нед.

гН*

■I

СБА

К

га

Р О II А

сел-ка

л/у

Ж

30 нед.

Р 0 П А1

легкие

*

Н Е

-I ; i - ■г

; ■ь

>

Л*. ; с V А

30 не.ц.

£В

т ё и

ВА1В/С

г!

Р О II л

Рис. 7 Морфологические и функциональные характеристики физиологически особенностей макрофагов

А-Б-В-Г-Д органоспецифические, Г-Е-З-И онтогенетические, (сал.хС57ВЬ/6)Р1;Г-К-Л-М фенотипические /ПШ/. Р-резидентные, О-ответные, П-примированные, А-активированные КФ. Д -распластывание, - фагоцитарная, -АГ'-предстарл.ф-и, - разрушенных Г.®. Е - взаимозависимость эффекторных ф-й.

сроки, данная функция повышалась соответственно на 2,Ъ%; 1,3%; 4,8%. В стадии полного активирования/развития макрофагов темп роста обеих функций проявлялся строго прямо пропорционально возрасту хозяина. Так, фагоцитарная и АГ-представляюцая функции макрофагов повышались соответственно: с 10 до 20 н.в. - на 0,3% и на 0,5^; с 20 до 30 н.в. - на 1,15« и на 4,4%; с 30 до 80 н.в. - на 2,4% и на 14,1%.

Интересно, что темп активности онтогенетической органоспецифи-чности шел свои особенности. Так, у резидентных и ответных макрофагов отмечался рост активности распластывания, фагоцитарной и АГ-представлякщей функций. Активируемость у примированных и активированных макрофагов также растет, но только фагоцитарной и АГ-пред-ставлязпцзй функций. Распластывание ге динамично падает. Макрофаги из различзшх органов проявляли в онтогенезе различную активность, не отражающую доминирующей закономерности. Так, с 10 до 80 н.в. у резидентных макрофагов темп роста распластывания проявлялся в убывающем порядке: л/узлы, бр.полость, легкие, селезенка, печень. Темп роста фагоцитарной функции проявлялся иначе: л/узлы, бр.полость, печень, легкие, селезенка. У ответных макрофагов распластывание проявлялось в убывающем порядке: легкие, печень, бр.полость, селезенка, л/угли, Фагоцитарная функция проявлялась в том же порядно: л/узлы, бр.полость, селезенка, печень, легкие.

Активируемость макрофагов органоспецифически проявлялась в более определенном порядке: чем вше темп спада распластывания, тем выше темп роста фагоцитарной и низе теш роста АГ-представлякщей функций. Однако, интенсивность активируемости проявлялась в соответствии с различиями в стадиях активации/развития макрофагов. Так, по темпу спада распластывания и одновременно роста фагоцитарной функции в стадии примированил находятся макрофаги бр.полости, затем л/узлов, легких, селезенки и печени .Параллельно наблюдалось падение темпа роста АГ-представляющей функции, но в строго обратном порядке. В стадии активированных макрофагов проявлялась аналогичная картина последовательности, 'но с той разницей, что первое и второе места делили л/узлы и бр,полость, а не наоборот.

Можно заключить, что активность макрофагов имеет прямую, а активируемость - обратную онтогенетическую зависимость. Возрастные изменения прогрессируют с 20 н.в. Интересно, что макрофаги с возрастом хозяина хуке распластываются. Вероятно, либо микроокружение в таком организме содействует этому, либо макрофаги проявляют способность экономить затрат;; для осуществления иммунных функций.

Фенотипические_особенности иммунобиологии макрофагов проявлялись следующим образом. /Рис. 7 Г,К,Л,М/. Наиболее высокий уровень • распластывания имели макрофаги от мышей ВА1В/с, затем - от С57В1/6, и наименьший - от СВА. Разница между ними составляла соответственно 20,7% и 42,3% у резидентных, и 17,8% и 19,9% у ответных макрофагов. Разница показателей распластывания фенотипически составляла у при-мированных и активированных макрофагов соответственно 3,3%; 10,7% и 2,5%; 11,5%. Наиболее высокий уровень фагоцитарной функции у резидентных макрофагов имел место у мышей в той же фекотипической последовательности. Разница между ними составляла соответственно 4,8% и 4,0%. Однако, у ответных макрофагов очередность высоты уровня данной функции изменялась: СВА - ВА1Б/с - С57В1/6 и сохранялась в дальнейших стадиях активации/развития макрофагов. Разница между показателями данной функции макрофагов от мышей различных фенотипов в отмеченной очередности составляла: у ответных - 7,2% и 18,3%; прнмированных - 1,5% и 5,6%; активированных - 1,9% и 11,1%. По высоте уровня АГ-представляющей функции активность макрофагов находилась в очередности, аналогичной распластыванию: ВАЕВ/'с. г С57В1/6 -- СВА. Разница показателей составляла соответственно: у прнмированных макрофагов - 10,8% и 10,0%, у активированных - 2,9% и 11,4%.

Не обнаружены отклонения в органоспецифичности между макрофагами от различных линий мышей. Различия касались лишь преимущественного проявления той или иной их функции. Интересно, что у ответ- -нкх макрофагов мышей С57В1/6 выявлена самая минимальная разница между распластыванием и фагоцитарной функцией. Кинетический анализ по-, зволяет предположить, что факт имеет место из-за большего/выие среднего уровня распластывания.

- В онтогенезе имелись лишь различия в АГ-представляющей функции макрофагов между разными линиями мышей. Так, в 80 н.в. у примирован-ных макрофагов уровень данной функции располагался в убывающем порядке у мышей ВА1В/с, СВА, С57В1/6. Разница показателей была на уровне 9,6% и 3,2%. У активированных макрофагов уровень функции соответствовал указанной очередности только у макрофагов печени. Наиболее высокий уровень функции отмечался у мышей ВА1В/с. Затем следовали по убивающей С57В1/6 и СВА у макрофагов легких и брюшной полости. У макрофагов селезенки и л/узлов эти две линии мышей имели идентичный уровень активности АГ-представляющей функции.

Во всех случаях, показатели активности и активируемости макрофагов у мышей-гибридов первого поколения (СВАхС57В1/61) занимали в среднем промежуточное положение между показателями их родителей.

Андрогенные особенности иммунобиологии макрофагот проявляясь следующим образом. Активность макрофагов у самок ниже, а активируемость выше, чем у самцов. Данные соотношения колеблятся в пределах 5 - 20*. Так, у самцов мышей СВА активность макрофагов выше, чем у самок на 15-20*, у ВАЬВ/с - на 5*, у гибридов первого поколения (СВАхС57ВЬ/61)- на 10-15*. Активируемость же макрофагов у самок данных линий мышей выше, чем у самцов в пределах тех же показателей. Исключение составляет линия С57В1/6. У самок данной линии мышей активность макрофагов наоборот - выше на 5*, а активируемость соответственно ниже, чем у самцов. Разница активности макрофагов междо самками и самцами не отражалась на описанных выше закономерностях органоспецифичности. Интересно, что наиболее восприимчивыми к Оио-регуляторноиу воздействию являются макрофаги от самок. Они активируются от меньшей дозы биорегулятора. Можно предположить, что чем ниже активность макрофагов, тем меньше затраты энергии, что косвенно может сказываться на продолжительности жизни. Так, известно, что средняя продолжительность жизни у самок СВА на 41* больше, чем у самцов. У мышей ВАЬВ/с - она выше на 10*. А продолжительность жизни у самок С57В1/6 на II* меньше, чем у самцов (Западнюк И.П. и соавт,, 1983) . Известны также линейные различия по количеству белка в сыворотке крови мышей. Так, например, количество белка в сывороткэ крови мышей СВА наиболее высокое, и содержит его в количестве 70 г/л. У шеей ВАЬВ/с - 44 г/л (Чумаченко Н.В., 1967) . Учитывая изложенные факты, можно предположить наличие прямей связи между отмеченными явлениями, активностью и активируекостью макрофагов, а также продолжительностью жизни животных.

Взаимозависимость морфологии и функции макрофагов, как показало исследование, не является однозначно прямой. Имеет место разнонаправленная зависимость: дихотомия. Существуют только фенотипические различия, освещенные выше. Интересно, что наиболее стабильными были показатели у самок. Лучшим образой они проявились у мышей-гибридов первого поколения (СВАхС57В1/61) Рр затем - у С57В1/6 и ВА1Е/с. Менее стабильными были показатели у мышей СВА. Интересно, что онтогенетически показатели стабилизировались к 30 н.в. и, затем становились менее стабильными к 80 н.в., чем у мышей 10 н.в. Видимо, в молодости, как и в старости, макрофаги более лабильны и подвержены изменениям. Результаты исследования зависимости функций макрофагов от объема их распластывания /Рис. 7 Е/ свидетельствуют, что по мере увеличения объема распластывания, уменьшается интенсивность функциональной активности макрофагов, и увеличивается количество разрушенных макрофагов.

Не исключено, что такие макрофаги, подобно активированным нейтрохи-лам С We 1 tzcsan S.A.et al., 1У35)могут обладать мутагенным и канцероген--ным эффектами. Уместно отметить, что остается открытым вопрос и относительно доз 1-го и 11-го стимулов и очередности самих доз (Celada А... Nathan С., 1УУ4;_ Нага) 1 ton Т. А. Adams D.O.1937).

Адаптационные особенности активируемости макрофагов: привыкае-мость к иммуномодулирущему воздействию, также способны содействовать прояснению вышеупомянутых вопросов. Вша исследована зависимость изменения функций макрофагов от кратности и дозы имыуномодулятора /Рис. 8 В/. Имыуномодулятор МП применяли в 1-3-5-7-9 дни исследования, затем его применение прекращали и возобновляли на 17 и 19 дни. Затем применение МП вновь прекращали и, возобновляли на 25 день исследования. Так, активность макрофагов после третьей инъекции МП не повышалась, и была почти на одинаковом уровне на 5-7-9 дни. В период прекращения применения МП: на II-I3-I5 дни, наблюдалось резкое падение активности функций макрофагов. Она возобновлялась вместе с инъекцией МП на 17 и 19 дни исследования. Затем активность макрофагов вновь падала с прекращением инъекций МП на 21 и 23 дни, и вновь повышалась с их возобновлением на 25 день исследования. Интересно, что в дни прекращения инъекций иымуномодулятора АГ-пред-ставляющая функция макрофагов не проявлялась. Интересно и то, что при возобновлении инъекций после их предыдущего прекращения,'показатели активности макрофагов сразу же повышались до предыдущего уровня, минуя постепенный переход/динамику. Так, распластывание макрофагов на 1-3-5-7-9 дни составляло соответственно 26%-72&-74&-73&--73%, а на II-I3-I5 дни -' 26%-25*-24%. На 17 и 19 дни оно составляло 70% и 72%, а на 21 и 23 дни - 26% и 22%. На 25 день исследования, оно составляло 70%, Фагоцитарная функция в те же сроки составляла соответственно 52%-91%-93%-92%-92%-50%-46%-46%-90%-92%-52%-48%-90%. АГ-представляющая функция макрофагов в те же дни исследования составляла соответственно 0-96%-98%-96%-96%-0-0-0-92&-96^-0-0-94?«.

Таким образом, при длительном применении иммуноыодуляторов в малых дозах(МП 50 мкг) возникает .привыкаемость и иммуномодуляторная зависимость макрофагов.

Так Kai; данные иммунофармакологического анализа функциональной активности макрофагов не указывают на пряыую доминирующую взаимосвязь различных показателей при трансформации отдельных функциональны состояний в осущетсвлении активации макрофагов, можно констатировать, что активация макрофагов не приводит к общему неспецифическому повышению их эффекторных функций.

Рис- 8 Активируемость макрофагов

А-Б предел активируемости, В привыкаемость к ИМ-щему воздействию. [*] распластывание, фагоцитарная и АГ-представлякхцая функции,-Я % разрушенных Ш.

Выявлена прямая зависимость между количеством поглощаемого вещества, концентрацией макрофагов, и интенсивностью юс активности. В наших исследованиях оптимальное соотношение макрофаг:бактерия составляло 1:3 при концентрации макрофагов 5хЮ®/ыл. '

В настоящее время остается открытым вопрос относительно значения и роли распластывания макрофагов и ее идентичности с фагоцитарной функцией (Urlght S.D., Sllversteln S.C.. 19Sb) . Известны различия темпов распластывания и фагоцитоза, существование несхожих морфологических особенностей и наличии рецепторов, содеЙств>тш;их распластыванию, но не фагоцитозу (Helple J.U. et al., 19841.По результатам проведенного исследования нам представляется, что распластывание и фагоцитоз являются идентичными процессами, имеющими особенности в проявлениях. Так, распластывание-макрофагов в индуктивный период выступает морфологическим маркером их фагоцитарной функции. В про-дуктивный/пффекторный период - степень распластывания макрофагов главным образом характеризует количественные, но не качественные показатели их активности, и не играет первичной роли в осуществлении ими иммунных функций.' Интересно, что на жизнеспособность макрофагов в большей степени влияет их распластывание, увеличение объема которого характеризуется уменьшением интенсивности их функций и периода полузкизни. Результаты исследования свидетельствуют о наличии как взаимосвязи, так и относительной автономности интенсивности распластывания, фагоцитарной и АГ-представляющей функций макрофагов. В этой связи возникает вопрос о преимущественное™ количественного и качественного насыщения макрофагов мишенью, для реализации i« функциональной активности.

Предел актмвируемости макрофагов мог содействовать решению возникшего еышз вопроса. Было предпринято исследование кратности активируемости макрофагов и времени нахождения их в активированном состоянии, предельных возможностей активируемости макрофагов при воздействии 1-го и П-го стимулов /Рис. 8/. Активируемость макрофагов после 1-го стичула/примирования повышалась, затем динамично пеншилась с 10-24 ч исследования, сопровождаясь динамичным повышением количества разрушенных макрофагов. Так, распластывание на 0-10-24-30-48-60-72-80 ч исследования составляло соответственно 28^-78Й-92?~90Го-82«-68^-54^-36^, Фагоцитарная функция в те же сроки составляла соответственно 52?;-S656-88^-84&-745ä-84?a-7S?6-6:W. АГ-представляющая функция макрофагов в те же сроки исследований составляла соответственно 0-1СШ-1005-£-10(К- I00%-96^-S2?i-80^. Количество разрушенных макрофагов в те же сроки составляло соответственно 0,3?'~2,8r/2-4,2$i-8,65i-II98r/S-I5,4#. Можно видеть,

что рост фагоцитарной функции макрофагов имел два пика: на 10-й и 60-й ч исследования. Это явление можно связать с резким скачком, в обоих случаях, процента разрушенных макрофагов. Можно предположить, что в указанные сроки рост фагоцитарной функции макрофагов из-за поглощения ими дополнительного количества, появившихся разрушенных макрофагов, приводил к появлению этих пиков. /Рис. 8 А/.

При применении 11-го стимула для полной активации макрофагов, имели место следующие изменения: повышение распластывания, угнетение АГ-представляющей функции и дальнейшее повышение количества разрушенных макрофагов. При применении 11-го стимула через 24 ч после 1-го, пик распластывания, фагоцитарной функции и резкое увеличение количества разрущенных макрофагов отмечались на 10 ч исследования. После этого имело место общее падение их активности и повышение их разрушенного количества. Так, распластывание на 0-10-24-30-35 ч исследования составляло соответственно 9296-9894-56%--9094-62%. Фагоцитарная функция в те же срот.си составляла соответственно 88&-92%-86?»-84%-82#. АГ-представляющая функция макрофагов в те же сроки исследования составляла соответственно 100%-Зб9б-30%-22%-14%. Количество разрушенных макрофагов составляло соответственно тем же срокам 2,3%-6%-129о-18%-22%. Наиболее умеренное, но последовательное изменение отмеченных параметров активируемости макрофагов имело место при применении 11-го стимула спустя 72 ч после 1-го.

Проведенное исследование позволяет констатировать наличие предела активируемости макрофагов. Они находятся в примированном/ частично активированном состоянии до трех суток.Ранее была установлена их способность находиться в аналогичном состоянии до 24 ч, но с участием жизнеспособных микроорганизмов и противоопухолевых кле- . ток (Априкян В.С.,1988 ;Низзе1 И.еЬ а1.1977). В полностью активированном состоянии макрофаги находятся до 30 ч /Рис. 8 Б/. Следовательно, если воздействовать на макрофаги больше одного раза в течение трех суток, они переходят в стадию полной/предельной активации, быстро изнашиваются и погибают. Нам представляется, что необходимость и осуществление частичной и полной активации макрофагов зависят от каждой конкретной ситуации и являются особенностями ее проявления. Нам также представляется, что проблема частичной и полной активации макрофагов в большей степени является условной и . выработанной в процессе исследований в модели противоопухолевой активности. В такой модели, полностью активированный макрофаг становится цитотоксичным, выделяет цитолитические факторы, осуществляет цитолиз клеток, но при этом повреждает и собствен'.;ые окружающие ткани Шагая П.0..е1 а1.,1933; .Мпзоп И. .Шаз 0.0., И'З'!).

- за -

МАКРОТАГИ В ИММУНОПАТОЛОГИИ: ДИОФУНКЦИИ И ИММУНОКОРРЕКЦИЯ

Известно, что дисфункции макрофагов, помимо системных расстройств, могут приводить как к непрямым тканевым повреждениям через резистентность к инфекционным и неинфекционным агентам окружающей среды, так и через прямые тканевые повреждения самими макрофагами или их клеточными продуктами

3 этой связи, ваяныы представляется распознавание проявлений дисфункций макрофагов и их коррекция при различных' патологических состояниях. Учитывая преимущества и недостатки применяемых ныне при наличии синдрома дисфункций фагоцитов в клинике иммуномодуляторов, изучаемые нами биогенные продукты, как представляется, способны вывеет:: данную проблему на качественно новый уровень.

Проявление дисфункций макрофагов и иммунокоррекция при

бактериальных патологиях.

Бюгенные продукты повышают бактерицидную активность макрофагов. Так, они повышали внутриклеточный киллинг бактерий Sh.flexnerl макрофагами щ vitro после фагоцитоза in vivo: П, С, Г, соответственно в 1,7; 1,3; 1,5 (р<0,001) раза. Из растительных препаратов наиболее эффективным оказался переступень. Он повышал бактерицидную активность макрофагов в 1,67 (р<0,001) раза. МП повышали данную активность в 3,8 (р<0,001) раза. Известно, что обоснованное комбинирование терапевтических средств способно значительно расширить как спектр их действия, так и потенциал. Мы применили комбинирование биогенных продуктов при иммуномодулирукщих действиях, но экстракорпорально, однократно, одновременно с АГ, в виде иммуномодулирующих биокомплексов. Это позволило достичь не только аддитивного, но и синергидного их действия. Так, комбинирование П+С повышало бактерицидную активность макрофагов в 3,2; П+С+МП ' - в 7,4; П+С+МП+пересту-пень - в 12,3 (р<0,001) раза /Рис. 9 А/.

Известно, что понижение экспрессии специфической активности экто-фермента макрофагов 5-нуклеотидази, является одним из основных универсальных маркеров их активации (Edelson P.J., Cohn ?..А.. 1976). В нашем исследовании данная активность макрофагов под действием микробной массы снижалась до 60% от контроля /100%/. П,С,Г, переступень и Mi снижали ее соответственно до 25%, 35%, 32%, 30%, 15%. П+С, П+С+ +МП, П+С+МП+переступень снижали активность фермента соответственно до 20%, 6%, 2,6% от контроля.

Интересно, что МП повышали /в 1,5 (р<0,001) раза/, а антибиотики снижали пул оксидантов при активации макрофагов /Рис. 9 Ж/. Так, П+С

2 3 4 S 6 78 S

HTit

4oq

0 K23456789 K23456789 K23456789 резидентные ответные-тиоглик. ответные-микроб.м-а

pf-j

* -f- 1

к 2 3 4 5 6 7 8 9

EL

Рис. 9 Макрофаг-модулирупцая иммунокоррекция при бактериальных

патологиях (Shigella flexnerl) 'А - бактерицидная активность Ш, Б - выживаемость животных, В-Г-Д обсемененность, Е - аккумуляция МФ в брюшной пол-ти, Ж - выработка пула биоокислителей. 1-ГИ1, 2-МП, 3-пенициллин, 4- стрептомицин, 5-гентамицин, 6-пен+стреп, 7-переступень, 8-пен+стреп+МП, 9-8+7. По оси ординат: А-Е-В-Г-Д %, Е-кол-во ПМФ/млхЮ5, Ж-показатели СФ ед ОТ. '

способствовали снижению пула в 1,2 fp<0,001) раза, а биокомплекс П+С+МП+переступень - в 1,4 Ср<0,001) раза.

Известно, что бактериальные патологии сопровождаются локальным притоком и аккумуляцией фагоцитов in vivo (Kurlandcr R.J.et al..1989). В нашем исследовании биогенные продукты повышали аккумуляцию макрофагов у мышей, обработанных микробной массой: П-в 1,6; С и Г - в 1,2; переступень - в 1,6; МП - в 2,0 (р<0,001) раза. Применение биокомплексов также повышало аккумуляцию макрофагов: П+С - в 4,0; П+С+ +МП - в 7,0; П+С+МП+переступень - в 8,8 (р<0,001) раза /Рис. 9 Е/. Вюгенные продукты повышали аккумуляцию макрофагов также и у резидентных и у тиогликоллят-обработанных животных.

Эффекты биогенных продуктов сопровождались снижением обсеменен-ности микроорганизмами органов и сокращением сроков их персистенции в организме зараженных животных /Рис. 9 В,Г,Д/. Следствием их эффектов являлось и повышение выживаемости животных. Так, при ДЦ 100, выживаемость мышей под действием П составляла 13*, С - 8*¿ Г - 9*, переступеня - 10%, МП - 50*, П+С - 30*, П+С+МП - 90*, П+С+МП+переступень - 100*. /Рис. 9 Б/.

Традиционные иммуномодуляторы: Тактивин, тималин, тимомодулин, тимоптин, тимозин фр.5, тимсген, МДП,ЩЩ, муроктазин, бластолизин, в общепринятых дозах: 0,01 - 100 мкг не изменяли контрольного уровня бактерицидной активности макрофагов. Оцнако, в дозах, превышавших общепринятые в 10-100 раз , гормоны тимуса угнетали, а бактериальные гликопептиды слабо активировали бактерицидную активность макрофагов. Аналогичным образом проявили себя и нейропептиды гипоталамуса. В стандартных дозах они были неэффективны, но в больших дозах: 100-500 мкг, повышали бактерицидную активность макрофагов в среднем в I,25(р<0,001) раза.

Биогенные продукты качественно не обладали этиотропным действием. Количественно - они незначительно модулировали рост микроорганизмов, но только в динамике, не влияя на контрольный результат. Антибиотики в примененных нами дозах /5 мкг/ не проявляли бактерицидных свойств. Однако, учитывая существование МПК /минимальных подавляющих рост микроорганизмов концентраций/, которые для пенициллина, например, в зависимости от сероваров микроорганизмов, колеблятся в пределах 0,004 - 100 мкг/мл, можно предположить следующее. В суббактерицидных концентрациях антибиотики либо в некоторой степени задерживают рост микроорганизмов, либо ограничивают их активность.

Интересно, что фитоишунопитание способствовало потенциированию корригирующих эффектов биогенных продуктов на 20-25*.-Интересен и факт способности антибиотиков сникать пул окислителей в активации

макрофагов. Это может свидетельствовать о наличии у антибиотиков иного, нежели кислород-зависимый, пути активации макрофагов. В частности путем содействия выработке антимикробных протеинов макрофагами, обнаружении в последние годы (Hlenstra P.S. et al... 1993).

Проявление дисфункций макрофагов и иммунокоррекция при

патологиях, вызванных минеральной токсической пылью.

Известно, что макрофаги представляют главную оборонительную преграду не только для бактериальных патогенов, но и других агентов окружающей среды; химических веществ, газов, биологических токсинов, металлов, минеральных корпускулов и других (Adams D..Hanl I ton Т..1984).

Исследование, проведенное с применением асбеста, кремния, кварца, графита, позволило выявить дозовую зависимость иммунотоксическо-го действия минеральной шли /5 мкг-100 мг/ как на функции, опосредованные альвеолярными макрофагами, так и на иммунный ответ. В оптимальных токсичеких дозах, по степени иммунотоксичности в убывающем порядке находятся кварц, графит, кремний, асбест. В субоптимальных дозах, асбест повышал фагоцитоз и распластывание альвеолярных макрофагов соответственно на 28% и 89,5* /Рис. 10 А/. Остальные корпускулы понижали данные показатели соответственно: кремний - на 18% и 21%; кварц - на 37,7« и 55,3%; графит - на 34,4% и 31,6%. Оцнако, во всех случаях, активность экто-фермента 5-нуклеотидазы оставалась неизменной, и соответствовала стадии ответных макрофагов /Рис. 10 А/. Так, под действием асбеста она понижалась всего на 3,5%; кремния -на 36,8%; графита - на 44%, а кварца - повышалась на 10,5%. .фнный дефект/блокада на уровне перехода макрофагов из стадии ответных в стадию примирования, не устранялся с помощью классически примирующе-го стимула: либо И®-¡г , либо ЛПС. Переход в-стадию примирования достигался только при их совместном применении, что говорит в пользу вероятности потребности не силы стимула, а его природных свойств. Активность макрофагов удалось деблокировать, с разной степенью интенсивности, биогенными продуктами. Так, наилучшую активность проявил биокомплек« б составе; П+С+МП+переступень. Он снижал активность фермента в е,1 ('? <0,001) раза, и повышал активность фагоцитоза и распластывания соответственно в 1,26 и в 1,3 (р<0,001) раза при поражении асбестом. При поражении кремнием, он снижал активность фермента в 12,0 (р<0,001) раз, и повышал фагоцитоз и распластывание в 1,64 и в 2,4 (р<0,001) раза соответственно. При поражении кварцем, биокомплекс снижал активность фермента в 4,85 (р<0,001) раза, и повышал фагоцитоз и распластывание соответственно в 1,97 и в 3,76 (р<0,001) раза. При поражении графитом, он снижал активность фер-

100

0

430

Л

-ч

й

е?

п

л

л

по

2 3 В

К

30

П

г+1 I |

I I г*

нИГ

I I

И

П I

I

3 4 Г

п п

I I гЧ

К1К2 I 2

;40

Д

3 4 150

.К^ I 2

'00

А

И1

•у

г

Л 5

К ф.н. ж ид

ф.н. ЛПС ИД

таг

ЛПС ид

Рис. 10 Макро?аг-модулирукхцая иммунокоррекция при минеральных

пылевых патологиях /А-Б-В-Г/, гельминтозах /Д-Е-Е/,стрессах /З-И-К/и иммунодефицитах. р.. ,

А-гункциональная активность АКФ.Ш-фаг., Ц-распл., ^-о-нуклеотидаза, ГД -пен+стр-Л1Пн-переступень.Б,Д- пул оксидантов, В-Е-К ИЛ-1, Г-ИЛ-2, 1Г-И иммуногенная активность, 3-фагоцит. По оси абсиисс: 1-асбест, И-кгемнпй, 3-кварц, 4-граггит, 5-б.Соснсвского, 6-5+МП, ф-гасциолез, ->дш:роцелез, с-стронгилез, д-льгп;е, п-печень, б-брвш.пол.,с-сел-ка

плавание , Рщ-йторурацил-1"ндуцированны1'1 иммунодеф. В-Е-К -КтКо-.ПС и ЛПС+/пен+стр-н.Л+перест./, Г-Кт станд.ЯЛ-Х, Ко-опытный, Д± К- оез МП Ко-лП Ко-гельыинты. — пен+стр+Ш+перестто же на г оне зитс^увшийния. И, К - по оси абсцисс - йнк исследования.

С

О

1

цента в 16,0 Ср<0,001) раз, и повышал фагоцитоз и распластывание в 1,75 и в 2,23 (р<0,001) раза соответственно.

Минеральная пыль повышала выработку пула оксидактов: асбест - в 3,5; кварц - в 3,16; кремний - в 2,16; графит - в 2,0 (р<0,001) раза /Рис. 10 Б/. Применение отмеченного биокомплекса снижало этот уровень: при асбесте - в 2,6; кварце - в 2,5; кремнии - в 2,0; графите - в 2,35 (р<0,001) раза. Аккумуляцию макрофагов ограничивали асбест, кварц и графит соответственно на 50%, 40% и 22%. Биогенные продукты способствовали повышению аккумуляции макрофагов на 7-80%. Интересно, что все корпускулы понижали жизнеспособность макрофагов, далее в суб-оптимальнкх дозах, с разной интенсивностью, в убывающем порядке: кремний, кварц, асбест, графит. Еиогенные продукты способствовали повышению жизнеспособности макрофагов на 40-70% при субоптимальных, и на 5-30% - при оптимальных дозах корпускулов.

Минеральная пыль блокировала выработку ИЛ-1 у ЛПС-стимулированных макрофагов: асбест - в 11,43; кварц - в 6,67; кремний - б 3,3; графит - в 2,67 (р<0,001) раза /Рис.10 В/. Биогенные продукты способствовали генерации выработки цитокина на 45-75% от уровня контроля.

Минеральная пыль блокировала также экспресс™ ИЛ-2: асбест - в 9,17; кварц - в 5,5; ¡сроишй - в 3,67; графит - в 2,8 (р<0,001) раза /Рис.10 Г/. Применение биогенных про.цуктов на этом фоне способствовало генерации выработки ИЛ-2 на 50-83%, через генерацию ИЛ-1, добавленного в культуры макрофагов при их стимулировании.

Биогенные продукты способствовали также повышению АТ-отзета, РПЧЗТ, лимфопролнфератиЕНого ответа к митогенам, абсолютной и относительной массы тимуса, селезенки, лимфатических узлов. В частности, они потенциировалк пролиферацию спленоцитов в отБвт на ЛПС и $ГА, ингибировали генерацию Т-супрессоров в ответ на КонА, в среднем на 30-40%.

Проявление дисфункций макрофагов и' иммунокоррекция при

гельминтозах /фасциолез, дикроцелез, стронгилез/.

Известно, что вопросы о роли макрофагов, проявление юс дисфункций и иммунокоррекции в гельминтологии остаются открытыми, тк и поиска эффективных антгельминтиков, наносящих минимальных урон пораженному организму. Почти все антгельмштики - шсокотоксичные химические соединения, активные только в отношении зрелых гельминтов, вызывающие потерю живой массы животных и их продуктивности, действие которых основано на этиотропком эффекте: антгельминтик - гельминт в пораженном организме хозяина (Зс-Ьпкс Л.';'., ГЗУи)

Исследование выявило, что при гельминтозах понижена жизнеспособ-

ность макрофагов на 20-5056, в большей мере при фасциолезе и стронги-лззе. Также блокирован приток/аккумуляция макрофагов в пораженные органы: печень, легкие, брюшную полость, на 20-4096, в большей степени при фасциолезе и дикроцелезе. Шло также обнаружено угнетение выработки оксидантов, блокада выработки ИЛ-1, супрессия имыуноген-ной способности макрофагов, й восприимчивости к иммуномодулирующему воздействию. Так, пул выработки оксвдантов снижался при фасциолезе, дикроцелезе и стронгилеэе, соответственно в 1,6; 1,98 и в 1,29 (р<0,001) раза /Рис. 10 ДЛ Было обнаружено, что новое кормовое многолетнее растение с высокой продуктивностью и устойчивостью в окружающей среде - борщевик Сосновского, обладало выраженной имыуномоду-лирующей и антгельминтной: нематодоцидной и трематодоцидной, активностями. Так, борщевик способствовал повышению выработки оксидантов при фасциолезе в 2,4 (р 0,001), а при совместном применении с МП

- в 3,7 (р <0,001) раза. При дикроцелезе - соответственно в 2,5 и в 4,3 (р<0,001) раза. При стронгилеэе - в 2,1 и в 2,5 (р<0,001) раза.

Выработка ИЛ-1 ЛПС-стимулированными макрофагами угнеталась: при фасциолезе - в 2,88; Дикроцелезе - в 2,5; стронгилеэе - в 2,2 (р<0, 00Г) раза /Рис. 10 Е/. Применение борщевика способствовало нормализации и стимуляции продукции цитокина: фасциолезе в 3,2; дикроцелезе

- в 3,07; стронгилеэе - в 3,18 (р<0,001) раза.

Иммуногеннооть макрофагов /по их способности активировать пролиферацию иыцунных Т'-клеток/ снижалась: при фасциолезе - в 4,25; дикроцелезе - в 2,43; стронгилеэе- - в 1,55 (р-0,001) раза /Рис.10 К/. Применение борщевика на этом фоне способствовало стимуляции иммуно-генности макрофагов: при фасциолезе - з 4,75; дикроцелезе - в 2,57; стронгилеэе - в 2,0 (р<0,001) раза.

Применение борщевика способствовало аккумуляции макрофагов в пораженных органах и повышению их жизнеспособности. ЭЭ под его воздействием составляла 40-100%, и коррелировала с количеством, кратностью применения и формой патогенеза. Установлено, что для профилактики гельминтозов целесообразно применять силос зеленой массы борщевика, а для терапии - его аноды. Растение охотно поедается животными, не вызывая побочных явлений, не требует предварительной подготовки животных, повышает надои молока на 20-3056 среднесуточно, и привесы живой массы животных на 40-80&, в сравнении с необработанными борщевиком животными.

Известно, ИЛ-1 повышает катаболизм лизосомальных и протеолити-чесгих ферментов (Вгапйнст S-R.pt а!. 1У37).Можно предположить, что биоокнслктели способны играть одну,из ведущих ролей в деградации клеточной мембрг.ны гельминтоз,. а ИЛ-1 - в их, деструкции. Можно такне

предположить, что борщевик содействует образованию АТ анафилактического типа: 1д(32а и 1дЕ, способствующих осуществлению макрофагами АТ--зависимой клеточной дитотоксичности против гельминтов.

Проявление дисфункций макрофагов и иммунокоррекция при

вторичных иммунодефицитных /фторурацил/ и стресс-инду-

цированных /ЛПС-шок, плавание/ патологиях.

Проявление дисфункций макрофагов при данных патологиях характеризуется повышением аэробного типа метаболизма /интенсивности фагоцитарной функции макрофагов легких в 1,22-1,46 (р<0,001) раза/ и понижением анаэробного /печени, перитонеальной полости, селезенки, соответственно в 1,8-2,3; 1,43-1,97; 1,13-1,58 (р<0,001) раза/ /Рис.Ю 3/. Вместе с тем, имеет место кратковременная потеря иммунных функций макрофагами в начальный период /до 3-х суток/, переходящая в супрессию имиуногешюй их способности на стадии ремиссии /Рис. 10 И/. Угнетена и ви|лботки ИЛ-1 макрофагами в 1,67-5,83 (р<0,001) раза /Рис. 10 К/.

Интересным представляется период восстановления утраченных/поврежденных функций макрофагов. Так, у контролей общие функции /фагоцитарная/ восстанавливались за 5-8 дней, а иммунные /АГ-представляю-щая и ИЛ-1 секретирующая/ - за.11-17 дней. Данное положение способствует подтверждению обнаруженного нами факта наличия дихотомии активности макрофагов. Так, фагоцитарная функция макрофагов в большей степени поражалась при ЛПС-индуцированном шоке, а кммуногенная их способность - при фторурац!"л-индуцированном иммунодефиците. В то же время, фагоцитарная и иммуногенная активность макрофагов поражались в одинаковой степени при физической нагрузке /плавании/ , где имело место сравнительно менее интенсивное поражение функций макрофагов и сравнительно быстрое их восстановление. Интересно, что традиционные иммуномодуляторы практически не влияли на активность макрофагов. Применение же биогенных продуктов, главным образом в виде биокомплексов, способствовало иммунокоррекции. Так, биокомплекс в составе П+С+МП+ 4переступень, повышал интенсивность фагоцитарной функции макрофагов в 1,54-2,25 (Р<0,001) раза; АГ-представляюцей - в 1,7-9,0; ИЛ-1 сек-ретирующей - в 1,5-3,3 (р<0,001) раза. Эффект'иммунокоррекции возрастал на фоне фитоиммунопитония на 30-60%, которое более актуально в период реабилитации. Представленная иммунокоррекция способствовала сокращению сроков проявления дисфункций макрофагов и сокращала период восстановления их активности в 3,0-3,7 (р<0,001) раза. Интетесно, что фитоиммунопитание 0>э применения биокомплексов способствовало данному эффекту на 37-43% при восстановлении фагоцитарной их функции.

ВЫВОДЫ

i. Биогенные продукты овладают полифункциональной иммуномодулирующей активностью. Направленность и интенсивность их действия зависят от факторов дозы и времени. Источник биопродуктов не играет первичной роли в осуществлении их функций. Эффекты биопродуктов проявляются с большей силой при индукции иммунного ответа, и реализуются преимущественно черен раннюю фазу [»©-ассоциированных механизмов.

?. ГНП модулируют иммунные функции и участвуют в их реализации. В их составе имеются НП/субпопуляции, обладающие либо стимулирующей, либо депрессирующей активностями. ГНП модулируют интенсивность т-иунного реагирования: выработку АОК в индуктивный и в продуктивный периоды по-ликлонального, Т-зависимого, Т-независиыого ответов in vivo и in vii.ro ; обе субпопуляции повышают формирование РПЧЗТ; фагоцитарную, АГ-пред-ставляющую функции МФ; продукцию цитокинов ИЛ-I и ИЛ-2.

3. Пенициллин, стрептомицин, гентамицин обладают разнонаправленной, зависящей от дозы, иммунотропной активностью. В суббактзрицидных дозах они проявляют стимулирующие и корригирующие свойства: в индуктивный и

в продуктивный периоды выработки АОК /преимущественно стрепт. и гент./, при формировании РПЧЗТ /преимущественно пениц./ и модуляции активности МФ. Они повышают восприимчивость к ИМ-щему воздействию, Еыступая при-мирующкм агентом при их применении до,ИМ-ров, и потенциируют их действие при одаовременнсм с ними применении.

4. Традиционные пищевые/кормовые растения флоры Армении обладают иммуностимулирующей, но не депрессирующей активностью. В качестве фитоим-муномодулирукщих средств, они потенциируют образование АОК с идентич-.кой силой в обоих периодах АТ-ответа, не изменяют формирование РПЧЗТ и фагоцитарную активность МФ, но усиливают эффекты стимуляторов в АТ-от-вете и при активации МФ. Борщевик Сосновского обладает также и антгель-минтной: некатодоцидной.и трематодоцидной активностью, с ЭЭ 40-100*.

Лекарственные растения: женьшень корейский красный и переступень белый проявляют иммуностимулирующую, а последний - и депрессирунцую активность. Они повышают интенсивность формирования АОК, РПЧЗТ, активируют МФ и, потенциируют эффекты ИМ-модуляторов.

5. Фитоиммунопитание повышает иммуногенность макроорганизма,'содействует усиление, иммунных функций: повышает интенсивность гуморальных /АОК/ и клеточных /РПЧЗТ/ иммунных реакций, активность МФ, выработку цитокинов ЙЛ-1 и ИЛ-2. Применение стимуляторов на фоне фитоиммунопитания усиливает их эффективность.

Костно-мозговые цитокины - МП, но не МДП, ЩЦП, Тактивин, тималин, повышают экспрессию соматотропного гормона человека в культурах фибро-бластов гккей ЕА1В/с.

6. Органоспсцифическая активность МФ в норма прямо-пропорциональна количественному порядку физиологического их пополнения из циркуляции: печеночные, селезеночные, легочные, брюшные, л/узлов, и обратно-пропорциональна их активируемости.

Онтогенетически активность МФ имеет прямую, а активируемость - об- • ратную зависимость. В онтогенезе падает активность только распластывания. Онтогенетические изменения иммунобиологии МФ прогрессируют у мышей в среднем со второй четверти их жизни.

7. Фенотипически по уровню распластывания и АГ-представляюцей функции в убывающем порядке располагаются МБ от мышей ВА1В/с, С57В1/61, (СВАх С57В1/61) СВА. По уровню фагоцитарной функции - СВА, ВА1В/с, (СВАх С57В1/61) Рх, С57В1/61.

Андрогенные особенности активности и активируемости I® прямо-про-порционалыш физиологической продолжительности жизни хозяев-особей. У самок мышей активность I® преимущественно ниже, а активируемость выше, чем у самцов:' у СВА - на 15-20%, ВА1В/с - на 5%, (СВАхС57В1/61) -на 10-15%. У самок С57В1/61 активность выше, а активируемость ниже, чем у самцов на 5%. Наиболее восприимчивы к биорегуляторноцу воздействию МФ у самок. Они активируются от меньшей дозы биорегулятора.

8. Еза13-'Озависимость морфологии и функции МФ характеризуется дихотомией. Между интенсивностью функций МФ, а также отдельными стадиями их активации, имеет место как взаимозависимость, так и автономность.

Предел активируемости МФ коррелирует с кратностью их активирования и временем нахождения в таком состоянии. Осуществление двухфазности /примирование и полное активирование/ активации МФ зависит от конкретной необходимости и является особенностью ее проявления.

9. № проявляют привыкаемость к ИМ-раь. и ИМ-ную зависимость. Проявление феномена характеризуется ниличием цикличности.

Морфофункциональные характеристики МФ свидетельствуют об отсутствии доминирующей односложности взаимосвязи различных показателей при трансформации отдельных функциональных состояний МФ в осуществлении феномена их активации. Активация № не приводит к общему неспецифическону повышению та эффекторных функций.

10. Биогенные продукты проявляют эф£ективность при их использовании индивидуально и в виде комбинированных икмуномодулирующих биокстиизксов на основе антибиотиков в токсикологии /при минеральных пылевых патологиях/, гельминтологии /при фасциолеэе, дикрсцелезе, стронгилезе/, бактериальных /преимущественно кишечных/, иммунодефицит /пиклофосфан, фтор-ураинл/ и стресс /ЛПС-шок, плавание/ -индуцированных патологиях, при 1®-модулирующей иммунокоррекции.

11. Иммунокорригирукщие эффекты биогенных продуктов опосредованы отив-

ной обнаруженных проявлений дисфункций Щ>: блокады на уровне перехода из стадии ответных в стадию примирования /при минеральных токсикозах/, супрессии имыуногенной способности 1® /при гельминтозах, стрессах, ИД-х^ модуляцией уровня выработки оксидантов, повышением генерации ИЛ-2 через генерацию ИЛ-1, аккумуляцией К® в пораженных органах, повышением жизнеспособности И, их бактерицидной активности, снижением обсемененности патогенами органов животных, повышением их выживаемости, надоев -молока /у коров/ и привесов живой массы.

Список работ, опубликованных по теме диссертации.

1. Априкян B.C. Фасциолез кр.рог.скота и испытание антгельминтного действия борщевика Сосновского.//Тез.докл.Всесоюзн.межвуз.научн.конф.-Ер9ван,-1580.-С.5-6.

2. Априкян B.C. Испытание семян борщевика Сосновского - антгельминтика при фасциоле обыкновенной.//Тез.докл.Республ.конф.молодых ученых "Молодежь и научн.-техн.прогресс."-Кировакан.-1982.-С.137-139.

3. Априкян B.C. Лечебные свойства борщевиков.//Там же.-С.134-136.

4. Априкян С.В., Априкян B.C. Перспективы выращивания каперса в Армянской ССР.//Известия с/х наук МС>ГАрм CCP.-I9B3.-P Ю.-С.12-23.

5. Априкян B.C., Сергеев Ю.О., Михайлова А.А., Душанов А.Д., Алферова Е.М., Кибза С.В. Стимулирующее влияние миелопептидов на выработку антител к антигенам бактерий рода Сальмонелл.//Иммунология.-1987.-6-С.69-70.

6. Сергеев Ю.О., Априкян B.C., Михайлова А.А., Душанов А.Д. Использование миелопептидов для коррекции иммунного ответа к бактериям кишечной группы.//Тез.докл.Всесоюзн.конф."Актуальные проблемы иммунологии, иммунодефицит, иммуноковректоры."-Владивосток.-I987.-C.57.

7. Sergeev Yu.O., I.!lk"hallova Л.A., Apr 1 k 1 an V.S. Biological properties of a new class of linraur.ouodulators -'rayelopeptldes.//Int.Synp."Ininunoniodula-tors: Bloloay and therapeutic application."-R1o-de-Janelго.-1У37.-P.7I-7Z.

8. Sergecv Yu., l.ilkhallova A., Aprlklan V., Klbza S. Biological properties of a new class of lmmunonodulators - ¡ayelop'eptldes.//Eighth European Im-munolony meeting.-Zagreb.-I9S7.-P.156.

9. Seraeev Yu.O., Aprlklan V.S., Elklna S.I., Ulkhallova A. A. Employment of myelopeptldes for the prophylaxis and cure' cf Intestinal Infections. //Ninth European Inaunology meeting.-Roroa.-I9B8.-P.S6.

10. Sergeev Yu.O., i.Ukhallova A.A., Aprlklan V,S. Biological properties of a new class cf 1 mmunо::iоdu 1 ators - myelopeptldes.//Int. SyrcD. "Cel lular mechanlsias of Infection lnrcunl ty. "-Els inor. -1988.-P.46.

11. Априкян С.В., Априкян B.C. Пищевая и экономическая ценность хрена обыкновенного Армении.//Ж.Наука и производство.Госагропрома Армении.-1988.2.-С.25-28. ..

12. Петров Р.В., Априкян B.C., Сергеев Ю.О., шпаша С.И*, Сергеев В.В., Михайлова А.А. Протективные свойства миелопептидов при развитии инфекционных процессов, вызванных бактериями рсца Сальмонелл.//Ж.микробиол. опидемиол.иммунобиол.-1938.-И- 5.-С.62-64.

.Id. Apr 1 kIач v.§., Sergeev Yu.O. The lnfUence of rayeiopentldes on the .bactericidal activity of peritoneal macrophages.//Cell Differentiation and Development.-1989.-Vol.27.-Suppl.-P.92.

14. Aprlklan V.S., Elklna S.I., Mllthallovu A.A. ¡.techanlsm cf myelopcptldes antl-ulcrcblal ac tl on.//Ten th European Iununology neetl in. -Edlnburg.-

rvyJ.-S.aj-I.'-ОЯАЬ.

lb. Apriklr.n V.S., Elklna S,L, l.'lkhallova A.A. Bone narrow peptides against r.lcroblal lnfectlons„//Ibld.-S.35-22.

1ъ. Лг г I 41 nn V. S. Stepanenko R.N.', Sergeev Yu.O. Regulation and correctly of ¿onsnuc U'&r phagocytes bactVvuitfal actwi ty" vd th .lyolopld.//A' I

-Union S у га p. with the participation of foreln scientist- "Mononuclear phagocyte system in nornal and pathological states." -ed.by V.A.Koslov^-Ho-voslblrsk.-ISyO.-P,129-130.

17. Apr 1 к 1 an V.S., Mlkhallova S.I.. Clklna S. I.■ Mye1opeptl des and the mononuclear phagocyte sys ten.//u'ork 1 nq meeting with Int. par 11 с 1 patl on "Ira-nunoraoJulators by natural origin."-Vladivostok.-1990.-P. 1Й.

18. Apr 1 kl an V.S,. Mlkhallova A.A., Elklna 3.L Antibacterial activity of the lmnunorejulator myelopeptldes.//Ibld.-P.26.

19. Апршсян B.C., Априкян С.В. Антгельминтная активность борщевика Сос-новского флоры Армении.//УП Бсесоюзн.симп. по новым кормовым растениям "Эколого-популяционный анализ кормовых растений естественной флоры, интродукция и использование."-Сыктывкар.-1590.-С. II-I2.

20. Априкян С.В., Априкян B.C. Новые резервы интенсификации кормопроизводства в Армении.//И.Наука и производство.Госагропрома Армении.-1990.—N- 5.—С.50—66.

21. Априкян B.C., Ёлкина С.И. Иммунобиологические механизмы регуляции эффекторных функций фагоцитов пептидными иммуномодуляторами.//Тез.докл. I съезда иммунол. и аллергол. Таджикистана.-Душанбе.-1991.-С.72-73.

22. Apr 1k1 an /. S.. Aprlklan S.V. Natural anthelmintic vM th trematodlcldal and neuatodlcldal activity and lrmunocorrection.//XXIY World Veterinary Congress, -it 1 u-de-Jane I ro.-1991. -no.0I04I. -ORAL.

23. Apr 1 к 1 an V.S.. Mlkliallova A.A.-. Pctrov R.-V, The natural lMunoregula-tors at Infectious diseases In anli.als.//Topi cs In Veter 1 nary: Proceed 1 ngs of XXIY iiorld Vet.Congress.-rtlo-de-Janelro.-I99I.-no.0III2.

24. Apr 1 к 1 an V.S., Mlkhallova A.A.. Petrov H.V. Iniaunotoxlc nechanlsns of chronic asbestosls and silicosis In nice and lnrnunocorrc-ctlon.-//EUROTOX Congress.-Maastr1cht.-199L-no.113.-ORAL.

25. Априкян B.C., Михайлова А.А., Петров P.В. Влияние различных доз антибиотиков на иммунный отЕет.//Иммунология.-1992.2.-С.16-18.

26. Априкян B.C., Михайлова А.А., Петров Р.В. Изменение фагоцитарной активности макрофагов под действием различных доз антибиотиков.//!. микробиол.эпидемиол.иммунооиол.-1992.-№ 9-10.-С.71-74.

27. Петров Р.В., Априкян B.C., Михайлова А.А. Ишунокорригиругацие свойства антибиотиков в условиях вторичного иммунодефицита.//Вол.экспер. биол.мед.-1992.I.-C.62-64.

28. Априкян B.C., Галоян К.А. Изменение антителообразования в продуктивный период иммунного ответа на различные антигены под влиянием ги-поталамических пептидов in vitro .//Нейрохимия.-1992.-Т.П.-№ 2.-

С 212-217.

29. Априкян B.C., Галоян К.А. Гипоталамические пептиды повышают анти-ген-представляющую функцию макрофагов.//Там же.-№ 3-4.-С.27-33.

30. Априкян B.C., Галоян К.А. Гипоталамические пептиды повисают продукцию интерлейкина-I мышиными перитонеальными макрофагами.//Там же.-34-36

П. Apr I k 1 an V.S. 0 rganospec 1 f 1 с and onto'genlc characteristics of the 11-jlt resources of macrophages functional actlvlty.//Britlsh pharnaceutlcal : onf erence. -31 r;nl nnhan. -1992. -no. 144.

32. Apr 1 к 1 an V.S. 'ihs lnuaune response manifestation and correction at ln-riunotoxlc dusts pathologies.//Eighth Int.Congress Innunology.-Budapest.-

[ 9'J2. -'¡/. 96.

33. Anrlklan V.Sj, Elklna S.I. Role of bone-narrow peptides In phagocyte ic tl vatl on. //Ibid. -'./ 24.

34. Aprlklan V.S. Kcotoxlcologlcal aspects of lianunoraodu 1 a11 on and Innuno: о r rec tl on.//I nt. Seminar "Ecological approaches oil environment and health In urban areas In Central and Easton Europe, "-¡(atowl ce/Cracow. I'J92-no.'">3. 3D. Aprlklan V.S. The alneral toxic dusts'and the resistance of the body. '/Ibid.-no.71.

36. Априкян С.В., Априкян B.C. Биологические активные вещества у диетических и пряно-ароматических растений Армении.//Известия с/х натк Армении.-1993.-!!? 4-6.-С.195-204.

37. Априкян B.C., Априкян С.В. Иммуномодулирущая активность борщевико //УШ Симп. по новым кормовым растеншти.-Сыктывкар.-1993.-С.13.

38. Априкян B.C., Априкян С.В. Иммунорегуляторные свойства борщевика Сосновского при гельминтозах.//Там же,-С.14-15.

39. Априкян B.C., Галоян К.А. Действие гипоталамических пептидов на активность макрофагов.//Нейрохимия.-1993.-T.I2.-P 3-4.-С.22-26.

40. Априкян С.В., Априкян B.C. Растительные биоактивные вещества и здо ровье человека.//Ж.Наука производству.Госагропрома Армении.-1993.-

4**в» -С• 43**52 •

41. Априкян B.C., Априкян С.В. Функциональные аспекты иммунорегулятор-ной активности полезных растений флоры Армении.//Тез^докл.кстф. Современные вопросы фитотерапии и традиционной медицины.-Ереван.-1993.С.З-6

42. Априкян B.C., Априкян С.В. Фитоиммунотерапия при экспериментальных гельминтозах, токсикозах, стрессовых патологиях.//Там же.-С.7-8.

43. Априкян С.В., Априкян B.C." Традиционные пищевые растения Армении: диетическая и терапевтическая значимость.//Там же.-С.8-10.

44. Априкян С.В., Априкян B.C. Дикорастущие пряно-ароматические растения флоры Армении и их лечебные 'свойства.//Там же.-11-14.

45. Априкян B.C., Галоян К.А. Иымунофармакологический анализ способности нейропептидов гипоталамуса модулировать антителогенез.//Нейрохимия -1993.-Т. 12.-li? 3-4.-С.27-31.

46. Априкян С.В., Априкян B.C. Перспективы выращивания д1..сорастущего переступеня и его лечебные свойства.//Известия с/х наук Армении.-1994. IP 7-I2.-C.I9I-20I.

47. Apr 1k1 an V.G. Dose response In the Ismunonodulation by the biological products.//Int.Conference ICIt guidelines and strategies for preclinical and clinical evaluation of new produc ts. "-London.-I'JSb. -no. 02429..

48. Aprlklan V.S. Biological products in macrophages manipulation, /ijid.

49. Aprlklan V.S. Modulation of macrophage functions: morphology, ontogenesis, organospccl f lcl ty.//In: Progress In Imunoblology.-lieu York, Ток 1 с Hong-Kong.-:.!TP Press Ltd.-I'J'JO.-P.34lJ-37I. \

50. Априкян С.В., Априкян B.C., Сарибекян Н.Х. Черемша Армении и ее лечебные свойства.//Тез.докл.конф. Современные вопросы традиционной

52. Априкян B.C., Ли Д.Б., Апэикян l'.B., Априкян с.и. сравнительный анализ влияния женьшеня корейского красного и переступень белого на иммунный ответ.//Там же.-С.8-10.

53. Априкян B.C., Априкян C.B. Иммунотерапевтнческий потенциал полезных растений флоры Армении. //Там же.-С.. 10-12.