Автореферат и диссертация по медицине (14.00.16) на тему:Иммунологические механизмы противоопухолевого действия модификаторов биологических реакций различной природы

Актуальность. В последние три десятилетия определенный прогресс в лечении злокачественных опухолей достигнут в связи с внедрением различных схем комбинированного и комплексного лечения, которые позволили повысить эффективность хирургического лечения и радиотерапии. Наряду с внедрением новых химиопрепаратов, гормонотерапии, программ адьювантного лечения это позволило добиться возможности принципиального излечения некоторых опухолей, однако в целом показатели общей смертности от рака практически не изменились, при этом значительное место среди онкологических больных занимают пациенты с местнораспространенными и метастатическими формами рака [35,87,134, 135]. Возможность успешного лечения первичной опухоли не исключает гибели больного от метастазов, которые часто существуют уже на момент постановки диагноза. Применение системной химиотерапии, с целью предотвращения или контроля микрометастазов, не приводит к повышению продолжительности жизни больных при подавляющем большинстве солидных новообразований [297]. Существует целый ряд ограничений для химиотерапии, обусловленный наличием химиорезистентных опухолей, неэффективностью в случае большого размера опухоли, низкой чувствительностью метастазов, повреждающим влиянием химиотерапии на нормальные ткани с высоким пролиферативным потенциалом, что особенно касается костно-мозгового кроветворения и связанной с этим иммуно-депрессии, которая имеет место также при хирургическом и лучевом лечении. С учетом вышесказанного становится понятной необходимость разработки принципиально новых методов терапии злокачественных новообразований.

Одной из основных тенденций в современной онкологии является полифакторная терапия рака, имеющая своей целью разработку подходов к оптимизации и повышению эффективности уже имеющихся методов. Перспективность такого подхода обусловлена достижениями фундаментальной науки, позволившими углубить и получить новые сведения о тонких механизмах и многообразии факторов и их взаимоотношений в процессе онкогенеза . Основными в этом плане являются открытие роли онкогенов и их продуктов в малигнизации клетки; понимание механизмов регуляции процессов роста и дифференцировки клеток, установление биологической природы лекарственной устойчивости и тонких механизмов клеточной смерти (апоптоза); понимание существенной роли факторов опухолевого микроокружения в прогрессии опухоли, вскрытие механизмов специфической и неспецифической супрессии, индуцированной влиянием опухоли и терапевтических воздействий.

Все вышесказанное служит основанием для формирования терапевтических подходов, при которых предусматривается не только прямое повреждающее действие на опухолевые клетки, но и возможность воздействия на различные регуляторные процессы организма, включающие дифференцировку клеток, ростовые факторы, иммунные механизмы, факторы естественной противоопухолевой резистентности.

В этом плане перспективным является использование биотерапевтических воздействий в сочетании с классическими методами (химио-, лучевая терапия, операционное вмешательство), что дает возможность повысить эффективность терапии и (или) уменьшить ее побочные эффекты на организм больного. Преимущество такого комплексного подхода заключается в одновременном повреждающем воздействии на опухолевые клетки и активизации защитных механизмов организма, оказывающих в свою очередь, противоопухолевый эффект. В арсенал наиболее перспективных биотерапевтических воздействий входят модификаторы биологических реакций (МБР), в том числе цитокины, генотерапия, трансплантация костного мозга и эмбриональных тканей с высоким гемо- и иммунопоэтическим потенциалом [2, 37, 55, 87,135, 286, 297, 319]. Повышение эффективности лечения с помощью биотерапевтических агентов, наиболее широкое распространение среди которых в настоящее время получили МБР, опосредовано целым рядом механизмов, которые так или иначе связаны либо с усилением противоопухолевых эффекторных реакций организма, либо с повышением чувствительности опухолевых клеток к терапевтическим цитостатическим воздействиям и эндогенным механизмам, осуществляющим противоопухолевый надзор на молекулярно-генетическом, иммунологическом и нейро-гуморальном уровнях [2, 33, 37, 135, 204, 297].

Современные представления о механизмах канцерогенеза, взаимоотношениях опухоли и организма, а также данные последних лет о механизмах действия МБР различной природы, позволяют утверждать, что в большинство указанных процессов вовлекаются иммунологические факторы. В этой связи одним из основных направлений биотерапии является применение агентов, модулирующих активность противоопухолевого иммунитета.

В рамках ревизии теории иммунологического надзора Ф.Бернета, в настоящее время постулируется наряду со специфическим иммунным ответом существование естественной противоопухолевой резистентности (ЕР), отличие которой заключается в иммунологически неспецифическом характере распознавания опухолей, проявлении немедленной реакции, способности к неспецифической активации [44, 178 202]. В реакцию ЕР на опухолевые клетки вовлекаются макрофаги, естественные киллерные клетки, Т-лимфоциты, весь спектр цитокинов, продуцируемых иммунокомпетентными клетками, при этом в зависимости от их взаимоотношений с опухолевыми клетками может иметь место либо деструкция опухоли, либо ее прогрессия [121, 157]. Многочисленные данные последних лет свидетельствуют о нарушении способности опухолеассоциированных иммупокомпетеитных клеток оказывать деструктивное действие на аутологичные опухолевые клетки [138,169, 243,331, 335]. Однако остается открытым вопрос о непосредственных механизмах неэффективности противоопухолевого действия эффекторных клеток in vivo, понимание которых может служить основой для разработки корригирущих подходов.

В арсенал МБР можно вполне обоснованно включить средства естественного происхождения, химической и физической природы. В литературе не существует единой классификации МБР, но практически все авторы включают в их число природные и синтетические иммуномодуляторы и адаптогены, цитокины, продуцируемые различными видами клеток, и их индукторы, цитостатические препараты.

Наиболее широко применяемыми в настоящее время МБР являются цитокины, в частности, интерферон, а также его индукторы. Препараты интерферонового ряда наряду с прямым цитостатическим действием на опухолевые клетки и модифицирующим действием на их мембраны, обладают способностью существенно повышать эффективность цитоста-тической терапии, стимулировать активность эффекторных клеток системы естественной резистентности организма [23, 29, 97,158,199, 220,248, 271, 321]. Однако парентеральное введение экзогенного интерферона в дозах, превышающих физиологические, часто сопровождается побочными эффектами, вынуждающими к прекращению лечения. В этом плане несомненную актуальность имеет изучение пробиотических препаратов нового поколения -суперпродуцентов цитокинов, к которым относится субалин - лечебно-профилактическое средство на основе штамма Bacillus subtilis, продуцирующего человеческий альфа-интерферон [8, 116], обладающего такими преимуществами, как способность к суперпродукции ИФН, безынъекционный путь введения, практическое отсутствие побочных реакций, возможность длительного постоянного или дробного курсового использования. Применение рекомбинантных пробиотиков, способных осуществлять синтез и доставку в организм биологически активных веществ человека дает возможность решить проблему стабильности белков-цитокинов в кровеносном русле и тесно связанную с ней проблему токсичности, обеспечивая длительное поддержание в организме повышенного уровня цитокинов, и, соответственно, пролонгированное действие на клетки иммунной системы, повышая устойчивость организма к патогенным воздействиям [81, 118]. В мировой литературе нам не встретилось данных по изучению влияния аналогичных препаратов на иммунную систему и эффективность цитостатической терапии.

Многочисленными исследованиями показана эффективность применения различных МБР нецитокиновой природы в комплексной терапии злокачественных новообразований как в экспериментальных условиях, так и у онкологических больных. Клинические схемы включают использование препаратов из класса нитротриазолов, в частности, левамизола, метрони-дазола, показана химиомодулирующая и иммунотропная активность этих препаратов [63, 104, 108]. В настоящее время за рубежом используется новый радиосенсибилизатор из этого ряда препаратов - саназол, обладающий существенно более низкой токсичностью по сравнению с имеющимися аналогами и показавший высокую эффективность не только при радиотерапии, но и при химиотерапии и в комплексном лечении онкологических больных [219, 228, 229, 230, 334]. Принимая во внимание сведения об иммуномодулирующих свойствах аналогов саназола, а также единичные указания на его иммунотропную активность, представляется целесообразным исследование влияния этого препарата на различные звенья системы иммунитета в онкологической ситуации и механизмов его химиомодулирующего и противоопухолевого действия.

В число МБР также с полным правом могут быть включены такие физические факторы, как низкоэнергетическое лазерное излучение, которое способно оказывать прямое повреждающее действие на опухоль и модулирующее воздействие на защитные механизмы организма, а также повышать чувствительность опухолевых клеток к специальным и вспомогательным методам лечения [5,16, 54, 56, 72, 114, 134 ]. Применение НЛИ в онкологической клинике в настоящее время в основном ограничивается лечением осложнений при различных видах противоопухолевой терапии, что далеко не исчерпывает его потенциальных возможностей. В экспериментальных исследованиях показано, что лазерное излучение различных длин волн способно усиливать терапевтическую эффективность цитоста-тиков [124], ионизирующего излучения [143], модулировать активность иммунокомпетентных клеток [1, 36, 58, 67, 125]. В НИИ онкологии Томского научного центра СО РАМН широко используется излучение лазера на парах меди для лечения осложнений лучевой терапии. Показан его антибластомный эффект в эксперименте [21, 123, 139] и способность повышать эффективность лучевой терапии больных опухолями головы и шеи [19], однако практически не исследованы механизмы его противоопухолевого и модулирующего действия, что послужило основанием для изучения этого вопроса в нашей работе.

Цель исследования. Изучить механизмы реализации противоопухолевого и иммуномодулирующего действия модификаторов биологических реакций различной природы.

Задачи :

1. Изучить влияние модификаторов биологических реакций различной природы на эффективность цитостатической терапии злокачественных опухолей в эксперименте.

2. Исследовать влияние модификаторов биологических реакций на активность эффекторных клеток системы иммунитета на фоне применения цитостатических препаратов у животных с перевиваемыми опухолями.

3. Оценить эффект исследуемых воздействий на функциональное состояние основных звеньев системы иммунитета и их противоопухолевую активность на различных моделях экспериментальных опухолей.

4. Оценить взаимосвязь иммуномодулирующей и противоопухолевой активности модификаторов биологических реакций различной природы.

5. Исследовать характер иммуномодулирующего действия саназола и субалина при их курсовом введении у здоровых лиц и у интактных животных.

6. Провести сравнительный анализ роли внутриопухолевых и системных факторов иммунитета в реализации действия МБР.

Положения, выносимые на защиту:

- Модификаторы биологических реакций различной природы (саназол, субалин и низкоэнергетическое лазерное излучение) обладают противоопухолевым и антиметастатическим действием и повышают эффективность цитостатической терапии.

- Исследованные модификаторы биологических реакций проявляют выраженное иммуномодулирующее действие, повышают функциональную активность иммунокомпетентных клеток и нормализуют исходно сниженные иммунологические параметры при развитии опухолей и цитостатической терапии.

- Основные механизмы противоопухолевого и антиметастатического действия саназола, субалина и излучения лазера на парах меди и их способности повышать эффективность цитостатической терапии связаны с нормализацией либо стимуляцией ими функциональной активности эффекторных клеток системы иммунитета.

- Механизмы иммуномодулирующего действия изученных модификаторов биологических реакций обусловлены их способностью индуцировать продукцию регуляторных интерлейкинов и нормализовать параметры анти-оксидантной системы.

-Неэффективность противоопухолевого действия иммуноком-петентных клеток, инфильтрирующих опухоль, связана с их функциональными особенностями на уровне рецепторных взаимодействий и продукции цитотоксических и иммунорегуляторных факторов. Полученные в работе данные свидетельствуют о целесообразности системного применения модификаторов биологических реакций в комбинации с цитостатической терапией для ингибиции роста первичной опухоли и процесса метаста-зирования.

Научная новизна. Выявлены механизмы нарушения кислород-зависимой цитотоксичности опухолеассоциированных макрофагов, которые наряду с изменением их способности к продукции цитокинов и связывающей активности могут определять неэффективность противоопухолевых реакций.

Выявлена различная противоопухолевая активность лимфоцитов из опухолевого узла и иммунокомпетентных органов.

Показано, что естественные супрессорные клетки костного мозга опухоленосителей оказывают ингибирующее действие на активность ЕКК, связанное с нарушением взаимодействия эффекторов с клетками-мишенями.

Впервые установлено, что бактериальный препарат нового поколения субалин способен повышать эффективность цитостатической терапии злокачественных опухолей и проявлять самостоятельную противоопухолевую и антиметастатическую активность. Выявлено участие эффекторных клеток системы иммунитета в антибластомном действии субалина.

Впервые дана комплексная характеристика иммуномодулирующего действия препарата из группы нитротриазолов- саназола и показана роль эффекторов системы иммунитета в реализации его противоопухолевой активности и способности повышать терапевтическую эффективность цикло-фосфана.

Получены новые данные, указывающие на способность субалина и саназола индуцировать продукцию иммунорегуляторных цитокинов (ИЛ-1, ИЛ-2, ИЛ-4, ФНО-альфа и др.) иммунокомпетентными клетками и модулировать функциональную активность макрофагов и лимфоцитов.

На модели перевиваемой опухоли показано повышение эффективности цитостатической терапии при ее сочетанном применении с излучением лазера на парах меди, которое ассоциируется с активацией иммуно-компетентных клеток.

Научно-практическая ценность

Изучены механизмы противоопухолевого и иммуномодулирующего действия модификаторов биологических реакций различной природы, что дает теоретическую базу для их патогенетически обоснованного применения.

Выявлены новые свойства саназола, позволяющие рекомендовать его использование в качестве иммуномодулирующего и повышающего эффективность цитостатической терапии препарата при злокачественных новообразованиях. Полученные данные о иммунотропной активности саназола легли в основу программы клинических исследований этого препарата в Киотском университете (Япония) с целью иммунореабилитации онкологических больных, получающих комбинированную терапию.

Показана целесообразность применения субалина в комбинированном лечении онкологических больных для повышения его эффективности и нормализации функциональной активности эффекторов системы иммунитета.

Охарактеризовано модулирующее влияние излучения лазера на парах меди на активность иммунокомпетентных клеток и компонентов антиоксидантной системы в эксперименте. Показан его нормализующий эффект на функциональное состояние системы иммунитета у больных опухолями головы и шеи, получавших дистанционную лучевую терапию.

Апробация работы. Материалы диссертации докладывались и обсуждались на международной конференции "Local immune reactivity in the tumor and transplant microenviroments" (Poznan, Poland, 1991), 2-м международном Дальне-Восточном симпозиуме по мультимодальной терапии рака (Владивосток, 1994), международной конференции "Актуальные проблемы электронного приборостроения " (Новосибирск, 1994, 1996), научно-практической конференции "Клиническая иммунология и аллергология" (Томск, 1995), международной конференции, посвященной 100-летию Л. Зильбера "Современные тенденции в вирусологии и иммунологии опухолей" (Москва, 1995), японско-российском семинаре "Sensitization of cancer treatment" (Kyoto, Japan, 1995), международной конференции " Tumor microenviroment: progression, therapy and prevention" (Tiberias, Israel, 1995), международной конференции "2nd International Congress on Phagocytes" (Pavia, Italy, 1996), 1-й казахско-японской конференции по радиомодификаторам (Алма-Ата, 1996), 5-й международной конференции "Спид, рак и родственные проблемы" (Санкт-Петербург, 1997), международной конференции "Symposium on Hyperthemia and Radiomodifiers" (Puri, India, 1998).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 55 печатных работ, в том числе 1 монография и 1 патент.

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 288 страницах, состоит из введения, 7 глав, выводов, списка литературы. Диссертация иллюстрирована 44 таблицами и 34 рисунками. Библиографический указатель включает 341 источник, из них 146 отечественных и 195 иностранных .

ВЫВОДЫ

1. Модификаторы биологических реакций различной природы - микро-биотик субалин, саназол и излучение лазера на парах меди повышают эффективность цитостатической терапии экспериментальных злокачественных опухолей на 25-50%. Все исследованные модификаторы проявляют умеренную самостоятельную противоопухолевую и антиметастатическую активность.

2. Усиление противоопухолевого и антиметастатического эффекта цитостатической химиотерапии при ее сочетании с модификаторами биологических реакций связано с повышением цитотоксических и цито-статических свойств иммунокомпетентных клеток (макрофаги, естественные киллеры, цитостатические лимфоциты) и стимуляцией функциональной активности лимфоцитов в ответ на Т- и В- клеточные митогены.

3. У мышей-опухоленосителей субалин и саназол нормализовали функциональную активность эффекторных клеток и усиливали их цитотоксический и цитостатический эффект в отношении клеток-мишеней и сингенных опухолевых клеток. Стимуляция цитотоксической активности макрофагов и естественных киллеров субалином и саназолом ассоциировалась с их ингибирующим действием на рост первичной опухоли и метастазирование.

4. Субалин и саназол при системном курсовом введении стимулируют пролиферативный ответ лимфоцитов на Т- и В-клеточные митогены, функциональную активность макрофагов, ЕКК, цитостатических противоопухолевых эффекторов и нормализуют исходно сниженные иммунологические параметры. Иммуномодулирующее влияние препаратов обусловлено их способностью индуцировать продукцию основных регуляторных цитокинов (ИЛ-1, ИЛ-2, ИЛ-4, ФНО-альфа, ИФН-альфа) иммунокомпетентными клетками.

5. Применение НЛИ у больных опухолями головы и шеи, получавших дистанционную лучевую терапию, приводило к нормализации мембрано-токсической активности ЕКК, митогенстимулированной пролиферации лимфоцитов, повышению уровня и общей комплементарной активности крови. Облучение экспериментальной опухоли лазером на парах меди повышало цитотоксическую и пролиферативную активность сгшеноцитов и нормализовало активность супероксиддисмутазы в крови при одновременном ее снижении в ткани опухоли.

6. Снижение цитотоксического действия внутриопухолевых макрофагов на аутологичные опухолевые клетки связано с нарушением их способности секретировать ИЛ-1, взаимодействовать с клетками-мишенями, а также генерировать активные метаболиты кислорода, что выражается в снижении уровня продукции супероксидного анионрадикала при одновременном усилении генерации окиси азота.

7. Перигонеальные и селезеночные лимфоциты мышей-опухоленосителей проявляли более высокое цитостатическое действие, чем внутри-опухолевые лимфоциты, в то время как их киллерная активность была существенно ниже, чем у лимфоцитов, инфильтрирующих опухоль. Неспецифические клетки-супрессоры костного мозга опухоленосителей ингибировали функциональную активность естественных киллеров и их способность связываться с клетками-мишенями.

ГЛАВА 7 ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Одним из современных подходов к повышению эффективности лечения злокачественных новообразований является использование биотерапевтических воздействий в сочетании с классическими методами (химио-, лучевая терапия, операционное вмешательство). Преимущество такого комплексного подхода заключается в одновременном повреждающем воздействии на опухолевые клетки и активизации защитных механизмов организма, оказывающих в свою очередь, противоопухолевый эффект. В качестве наиболее перспективных биотерапевтических воздействий рассматриваются модификаторы биологических реакций - агенты различной природы, проявляющие свой противоопухолевый эффект через посредство модуляции ответа организма на опухоль. В число МБР входят природные и синтетические иммуно-модуляторы и адаптогены, цитокины , продуцируемые различными видами клеток, и их индукторы, цитостатические препараты. Реализация противоопухолевого эффекта МБР опосредована механизмами, воздействующими либо на опухолевые клетки, приводя к повышению их чувствительности к терапевтическим воздействиям и противоопухолевым эффекторам организма-хозяина, либо активирующими эффекторные реакции, направленные на деструкцию опухоли и устраняющими компоненты, способствующие опухолевой прогрессии. Современные представления о механизмах канцерогенеза, взаимоотношениях опухоли и организма, о роли системы иммунитета в противоопухолевой защите, которая осуществляется в тесном взаимодействии с факторами неиммунной природы, а также данные последних лет о механизмах действия МБР различной природы, позволяют утверждать, что иммунологические факторы принимают активное участие в реализации их модулирующего действия. Важнейшими медиаторами, опосредующими межклеточные и межсистемные взаимодействия, являются цитокины, важную роль в продукции которых играют иммунокомпетентные клетки. Экзогенные цитокины , а также их индукторы нашли широкое применение в качестве МБР, одним из перспективных в этом плане является ИФН, парентеральное применение которого в высоких дозах, однако, часто вызывает нежелательные побочные реакции. Устранение побочного действия может быть достигнуто за счет использования пробиотических препаратов, обладающих способностью продуцировать цитокины. Недавно сконструированный рекомбинантный препарат нового поколения субалин, представляющий из себя микробную культуру Bacillus subtilis, продуцирующих человеческий альфа-интерферон, является уникальным в своем роде цитокиновым препаратом, ряд преимуществ которого, связанных с пероральным путем введения и практическим отсутствием побочных реакций, делает актуальным исследование его способности модулировать эффективность цитостатической терапии и лежащих в основе этого механизмов.

Достаточно широкое использование в качестве иммуно-модулирующих агентов в настоящее время имеют препараты из группы нитротриазолов, наиболее известным из которых является левамизол. Показаны и химиомодулирующие свойства препаратов этого класса. В ряде стран широко используется радиосенсибилизатор саназол, являющийся химическим аналогом мисонидазола, но обладающий существенно меньшей токсичностью; экспериментальные и клинические результаты свидетельствуют о его способности повышать эффективность не только радиотерапии, но и цитостатической химиотерапии, а также комбинированных методов лечения. При этом практически не исследованы механизмы модулирующего действия саназола, что и послужило основанием для изучения этого препарата в нашей работе.

Использование в онкологической практике с целью снижения осложнений цитостатической терапии низкоэнергетического лазерного излучения далеко не исчерпывает его биомодулирующих возможностей и делает актуальным изучение влияния ИЛИ на эффективность противоопухолевой терапии. Немногочисленные недавно полученные результаты свидетельствуют о перспективности таких исследований и о необходимости характеристики механизмов, лежащих в основе модулирующего действия НЛИ. Исследователями Томского НИИ онкологии получены данные о противоопухолевом действии излучения лазера на парах меди и показана его способность повышать эффективность лучевой терапии; в этой связи одной из задач нашей работы было изучение способности излучения лазера на парах меди модулировать терапевтическую активность цитостатической терапии и механизмов, вовлекаемых в этот процесс.

Как уже отмечалось выше, одним из оснований для исследования саназола в нашей работе послужили данные о его способности повышать эффективность различных терапевтических воздействий - лучевой терапии, химиотерапии, сочетания радиотерапии с гипертермией - у больных с различными локализациями опухолей [219, 228]. Мы показали, что интраперитонеальное введение ультранизких доз саназола ( в 10-20 раз ниже, чем при его использовании в качестве радиосенсибилизатора) сочетанно с цитостатической терапией циклофосфаном в низкой дозе привело к двукратному усилению ингибиции роста первичной опухоли и практически полной отмене метастазирования у мышей с карциномой легких Льюис. Нами показано, что эффективность сочетанного применения циклофосфана существенно выше в отношении торможения метастазирования, чем первичного опухолевого узла; эти данные согласуются с результатами Н.П.Коноваловой и соавт. [230]. Подобная закономерность выявлена и при оценке воздействия саназола в моноварианте на рост и метастазирование экспериментальных опухолей. Принимая во внимание эти данные наряду с фактом отсутствия прямого цитотоксического действия саназола на опухолевые клетки исследуемых штаммов in vitro, можно полагать, что выраженный антиметастатический эффект его связан с модуляцией эндогенных механизмов канцерогенеза.

Использование субалина per os в сочетании с химиотерапией экспериментальной опухоли привело к усилению ингибирующего действия 5-фторурацила на рост первичной опухоли и метастазирование LLC ; аналогичный эффект отмечен и у мышей, леченных циклофосфаном. Полученные результаты позволяют говорить о потенцирующем действии субалина на антибластомную активность циклофосфана. Как и в случае применения саназола, более выраженный ингибирующий эффект субалина и его сочетания с цитостатическими препаратами отмечен в отношении метастазов, но не первичного опухолевого узла. Обращает на себя внимание значительное торможение роста метастатических колоний в легких при применении субалина не только в сочетании с цитостатической терапией, но и в самостоятельном варианте. Мы также показали, что экзогенный интерферон, продуцирующийся субалином в кишечнике, является не единственным фактором, опосредующим его противоопухолевого и химиосенсибилизирующее действие. Наиболее существенную роль в противоопухолевом эффекте субалина играет, по-видимому, индуцируемый им ИФН, активирующий эффекторные механизмы резистентности организма. Известно, что кроме прямого антипро-лиферативного действия на опухолевые клетки ИФН может оказывать модулирующее влияние на их мембраны, приводя к снижению метастатического потенциала и повышению чувствительности к действию цитостатических препаратов и эндогенных противоопухолевых механизмов [7, 46, 59]. В связи с отмеченным антиметастатическим эффектом субалина представляется очевидным предположение о важной роли в его реализации эффекторных клеток иммунной системы - прежде всего ЕКК, макрофагов, цитотоксических Т-лимфоцитов, поскольку известно, что эти клетки наиболее эффективно реализуют свое противоопухолевое действие в отношении небольшого числа опухолевых клеток, что имеет место при формировании метастатических колоний [190].

Наши результаты об усилении терапевтической эффективности цитостатика с помощью излучения лазера на парах меди в ряде аспектов являются новыми, хотя в целом согласуются с данными других исследователей, которые использовали лазерные источники, генерирующие излучение других длин волн [124, 143]. При этом мы выявили, что самостоятельная противоопухолевая активность излучения лазера на парах меди, более высока по отношению к метастазам, чем к первичной опухоли. Усиление антиметастатического эффекта при сочетании 5-ФУ и лазерного излучения также более выражено, чем его ингибирующее влияние на рост первичного опухолевого узла. По-видимому, в реализацию противоопухолевого действия НЛИ вносят вклад различные механизмы, связанные как с возможностью прямого повреждающего эффекта на опухолевые клетки (термический эффект, фотодинамический эффект), так и, что более вероятно, с активацией эндогенных факторов, приводящих к стимуляции важнейших гомеостатических систем организма, обеспечивающих интегральный терапевтический эффект [35, 56, 128]. Общепринятая в настоящее время точка зрения о триггерном механизме действия НЛИ, независимо от длины волны, и, соответственно, первичной точки приложения (первичного фотоакцептора), вызывающем системный ответ на уровне целостного организма, дает основания считать очевидным вовлечение иммунологических механизмов в реализацию, его противоопухолевой активности.

Известно также, что клетки иммунной системы являются одной из непосредственных точек приложения действия НЛИ, которое способно изменять экспрессию их мембранных рецепторов, функциональную активность, пролиферативный потенциал, стимулировать продукцию цитокинов, а также действовать через модуляцию компонентов антиоксидантной системы организма [1, 36, 56, 58].

Анализ полученных результатов о способности субалина, саназола, излучения лазера на парах меди повышать эффективность цитостатической терапии злокачественных опухолей однозначно свидетельствует об участии иммунной системы в реализации модулирующего действия указанных МБР. Для исследования роли иммунологических механизмов в этих эффектах мы применили ряд подходов, включающих в себя:

1) сопоставление функциональной активности клеток-эффекторов с терапевтической эффективностью комбинированного лечения;

2) исследование противоопухолевой активности иммуно-компетентных клеток в зависимости от терапевтического эффекта при разных схемах использования препаратов;

3) применение ингибиторов активности эффекторных клеток;

4) использование линий мышей с генетически детерминированными нарушениями иммунной системы и моделей перевиваемых опухолей, отличающихся по чувствительности к повреждающему действию различных эффекторных клеток;

5) исследование модулирующего влияния применяемых МБР на различные звенья иммунной системы у интактных животных и здоровых добровольцев.

Оценка активности эффекторных звеньев иммунной системы у мышей с карциномой легких Льюис, получавших сочетанное лечение ЦФ и саназолом, показала существенное увеличение активности ЕК селезенки и цитостатических эффекторов-спленоцитов по сравнению с параметрами животных, получавших только циклофосфан. Максимальный терапевтический эффект саназола и циклофосфана ассоциировался с наиболее высокой способностью спленоцитов оказывать мембранотоксическое действие на опухолевые клетки-мишени, высокой интегральной токсической активностью селезенки и максимальным антипроли-феративным действием спленоцитов. В активации эффекторных клеток может принимать участие и сам циклофосфан , который в низких дозах подавляет активность супрессорных клеток. Несомненно, важную роль в повышении эффективности циклофосфана саназолом играют механизмы, ответственные за противоопухолевую и антиметастатическую активность последнего.

Было показано, что эффект низких доз саназола на рост и метастазирование экспериментальной опухоли зависит от схемы его применения. У мышей с меланомой В-16 как одной из адекватных моделей для оценки иммуномодулирующей активности различных агентов, мы показали связь между характером антибластомного действия саназола и особенностями функционирования эффекторных клеток иммунной системы при различных схемах его использования. Полученные данные свидетельствуют о преимущественном вовлечении макрофагов или ЕКК в реализацию эффектов саназола, который применяли в различные сроки по отношению к моменту трансплантации опухоли. Показано, что ЕКК принимают участие в ингибирующем влиянии саназола на рост первичного опухолевого узла при его введении до перевивки опухоли, тогда как макрофаги и ЕКК - в его антиметастатическом действии при других схемах введения . Обращает на себя внимание длительное сохранение высокой активности ЕК под действием саназола у мышей с меланомой В-16; подобный эффект был отмечен и у мышей с карциномой легких Льюис, леченных циклофосфаном. Известно, что активация ЕКК различными агентами связана с регулирующим влиянием индуцированного ими в организме ИФН [46, 142]; саназол, как показано нами, повышает уровень сывороточного ИФН. Активированные ЕКК накапливаются в области инокуляции опухолевых клеток, что ведет к торможению ее роста; другими исследователями показано повышение тропности ЕКК к опухолевой ткани под действием цитокин-индуцирующих агентов [190, 222].

Антиметастатическое действие саназола связано с высоким уровнем литической активности спленоцитов в период формирования метастазов; ЕКК могут оказывать цитотоксический эффект на микрометастазы, содержащие небольшое число опухолевых клеток. Способность активированных ЕК блокировать метастазирование меланомы В-16 и других опухолей была показана рядом авторов [204, 222].

Повышение активности макрофагов после 10 инъекций саназола сопровождает существенное торможение интенсивности метастазирования у мышей с меланомой. Напротив, саназол не проявляет антиметастатического эффекта при введении до инокуляции опухолевых клеток, когда активность макрофагов была низкой, сравнимой с таковой у нелеченных опухоленосителей. Выявлена корреляция между увеличением цитостатической активности макрофагов и торможением интенсивности и частоты метастазирования при различных схемах применения саназола. На модели LLC мы показали, что антиметастатическое действие саназола при его десятикратном введении после трансплантации опухоли ассоциируется с существенным усилением противоопухолевой активности макрофагов, но не ЕКК и цитостатических спленоцитов. Максимальное торможение роста опухоли и метастазирования меланомы В-16 при использовании саназола как до, так и после трансплантации опухолевых клеток, обусловлено синергическим действием макрофагов и естественных киллеров.

При сочетанной терапии мышей с LLC циклофосфаном и субалином мы отметили существенное уменьшение фидерной способности макрофагов по отношению к опухолевым клеткам по сравнению с их высокой рост-стимулирующей активностью в группе мышей, леченных только ЦФ. Выявлено также умеренное увеличение цитостатической активности спленоцитов при комбинированном лечении по сравнению с группой "Циклофосфан". Следует заметить, что представленные данные отражают состояние исследуемых клеток в период максимального роста опухоли и процесса метастазирования. Очевидно, что отмеченное в этот период более выраженное торможение роста опухоли и метастатических колоний в легких в группе "ЦФ+Субалин" является результатом активации эффекторных механизмов иммунной системы на более ранних этапах опухолевого роста.

Известно, что активация иммунокомпетентных клеток под действием различных агентов носит волнообразный характер и зависит от исходного уровня активности, а также факторов, определяющих сроки созревания, циркуляции в крови и миграции в иммунокомпетентные органы и опухоль. В этом плане наиболее изученными с точки зрения характера взаимоотношения с опухолевыми клетками считаются макрофаги, которые благодаря важной роли в процессах воспаления, регенерации, иммуногенеза осуществляют разнообразные, часто противоположные по своему результату, регуляторные и эффекторные функции, от чего и зависит их противоопухолевая эффективность in vivo. Показано, в частности, что при использовании различных активаторов макрофагов in vivo или in vitro (трансплантация опухолевых клеток также может рассматриваться в качестве активирующего воздействия) на 15-е сутки цитотоксическая фаза действия макрофагов сменяется фазой продукции цитокинов с преобладающей рост-стимулирующей активностью [49]. Эта ситуация как раз и выявлена нами - отсутствие цитотоксичности у макрофагов нелечен-ных опухоленосителей и появление выраженного фидерного эффекта при цитостатической терапии. Выявленное корригирующее влияние субалина обусловлено постоянным высоким уровнем ИФН в кишечнике и его активирующим действием, как непосредственным, так и опосредованным другими цитокинами, практически на все эффекторные звенья системы иммунитета (МФ, ЕКК, Т-лимфоциты, цитостатические эффекторы). Возможность пролонгированной стимуляции клеток-эффекторов субалином обуславливается отсутствием феномена гипореактивности в отношении продукции эндогенного ИФН, который отмечается обычно при применении интерфероногенов. Повышение эффективности цитостатической терапии субалином, таким образом, можно рассматривать как интегральный результат, обусловленный непосредственным действием интерферона на опухолевые клетки (цитостатическим и модулирующим их чувствительность к химиотерапии и иммунным механизмам) и активацией эффекторного иммунологического звена, посредством чего субалин оказывает самостоятельный противоопухолевый и антиметастатический эффект.

Введение субалина мышам с карциномой легких Льюис, не подвергавшимся дополнительным терапевтическим воздействиям, приводило к значительному увеличению мембранотоксической активности ЕКК и тотальной литической активности селезенки, а также существенно усиливало цитотоксическое и антипролиферативное действие макрофагов на клетки LLC . Применение каррагенана как обратимого ингибитора функциональной активности МФ снижало или отменяло их активацию под влиянием субалина, а у нелеченных мышей с LLC существенно уменьшало их противоопухолевую активность. Эти данные свидетельствуют о том, что макрофаги являются одной из первоочередных мишеней действия субалина. Здесь же следует отметить, что у мышей с LLC (получавших и не получавших субалин), обработанных каррагенаном, мы выявили повышение мембранотоксической активности спленоцитов по отношению к клеткам К-562, что можно трактовать как результат ослабления супрес-сорного действия макрофагов на ЕК активность .

Мы показали, что введение каррагенана мышам с LLC, леченных субалином, существенно снижало антиметастатическую активность последнего: отмечено повышение интенсивности метастазирования и более чем двукратное увеличение суммарной площади легочных метастазов по сравнению с мышами, получавшими только субалин. Это подтверждает существенную роль макрофагов в проявлении антиметастатического эффекта субалина. Выявленное при этом торможение роста первичного опухолевого узла у мышей, получавших субалин и каррагенан, по сравнению с группой "Субалин" на первый взгляд кажется парадоксальным, однако оно может быть обусловлено ингибицией рост-стимулирующей активности опухолеассоциированных МФ каррагенаном. Эти результаты указывают на то, что субалин при введении в желудочно-кишечный тракт вызывает активацию макрофагов на системном уровне и в слизистых оболочках других органов, в том числе и легких, которые являются органом-мишенью для метастазирования LLC, что в конечном счете приводит к торможению метастазирования. Цитотоксическое действие эффекторов на опухолевые клетки может осуществляться практически на всех стадиях метастазирования - при выходе клеток из первичной опухоли, их прикреплении к стенкам сосудов, выходе в кровяное русло и формировании вторичных узлов в легких. Представленные данные подтверждают ведущую роль МФ в реализации антиметастатического влияния субалина на модели LLC, так как клетки этой опухоли являются резистентными к цитотоксическому действию ЕКК, также активирующихся эти препаратом.

В активации МФ субалином важную роль играют Т-лимфоциты, что было выявлено нами на модели LLC, перевитой мышам nude , введение субалина которым не приводило к ингибиции метастазирования и роста опухоли. Таким образом, показана необходимость полноценного Т-клеточного звена для реализации действия субалина, при этом Т-лимфоциты могут осуществлять как непосредственный цитотоксический эффект на опухолевые клетки, так и регуляторное влияние на другие типы иммунокомпетентных клеток [121].

Полученные нами результаты, характеризующие функциональную активность иммунокомпетентных клеток при воздействии субалина и саназола у животных с опухолями свидетельствуют о их несомненных иммунотропных свойствах. Конечным результатом такого действия является активация эффекторных клеток - МФ, ЕКК, Т-лимфоцитов, цитостатических лимфоцитов, которая и была отмечена в наших исследованиях. Для выявления механизмов, лежащих в основе иммуномодулирующего эффекта этих препаратов, мы оценили их влияние на различные параметры иммунной системы, связанные с ее регуляторными и эффекторными функциями, у интактных животных, а также у практически здоровых людей.

Курсовое введение саназола в низкой дозе 1 мг/кг интактным мышам С57В1/6 приводило к увеличению функциональной активности ЕКК селезенки, цитостатических спленоцитов и перитонеальных макрофагов. Следует отметить, что десятикратное увеличение дозы препарата не вызывало более выраженного стимулирующего эффекта. У мышей линии ВАЬВ/с инъекции саназола привели к повышению цитостатической активности спленоцитов, однако достоверного повышения активности ЕКК и МФ не отмечалось. Это можно объяснить, принимая во внимание, что важным регулятором активности ЕК клеток и МФ является ИФН и что саназол обладает способностью индуцировать его выработку в организме, однако этот механизм не реализуется у мышей ВАЬВ/с в связи с их генетической дефектностью по способности продуцировать ИФН в ответ на различные индукторы [13]. Кроме того, у мышей этой линии отмечен низкий ответ МФ на примирующие и активирующие сигналы [275]. Полученные данные указывают на важную роль ИФН в опосредовании модулирующих эффектов саназола.

У мышей С57В1/6 мы показали способность саназола при его интраперитонеальном введении стимулировать спонтанную пролиферацию спленоцитов, что свидетельствует об их эндогенной активации и повышать их пролиферативиый ответ на Т- и В-клеточные митогены. Добавление саназола in vitro в реакционную смесь при постановке РБТЛ в концентрации, соответствующей таковой в организме после парентерального введения, также приводило к усилению спонтанной пролиферации спленоцитов. При курсовом введении саназола per os здоровым лицам было выявлено повышение пролиферативной активности лимфоцитов крови и их способности отвечать пролиферацией на митогенные стимулы. Все эти данные свидетельствуют о митогенном и адьювантном действии саназола и таким образом указывают на его способность регулировать пролиферативиый ответ лимфоцитов, как один из необходимых этапов активации иммунокомпетентных клеток при формировании иммунного ответа на антигенные раздражители.

Курсовое введение саназола здоровым людям per os не приводило к изменению субпопуляционного состава лимфоцитов крови. Однако у отдельных лиц саназол повышал исходно низкое количество лимфоцитов крови , и, напротив, снижал до нормального уровня содержание Т-супрессоров. Саназол не оказывал влияния на параметры, значения которых не отличались от нормы. При этом выявлен выраженный эффект саназола на функциональные характеристики иммунной системы - пролиферацию лимфоцитов и продукцию мононуклеарами крови различных цитокинов. Известно, что усиление пролиферативной активности лимфоцитов -спонтанной и митоген-индуцированной связано с продукцией ИЛ-2 Т-хелперами 1 типа, которая индуцируется под действием митогенного стимула и ИЛ-1 как необходимого костимулятора Т-клеточной активации . Действительно, как мы показали, саназол индуцирует высокий уровень продукции ИЛ-1 мононуклеарами крови. ИЛ-1, продуцируемый в основном макрофагальными клетками, необходим для активации Т-лимфоцитов, которая связана с продукцией регулятора Т-хелперов 1 типа ИЛ-2 или регулятора Т-хелперов 2 типа ИЛ-4. Согласно нашим данным, саназол активирует продукцию ИЛ-2, но не влияет на выработку ИЛ-4, что указывает на преимущественную активацию им Т-хелперов 2 типа, а, следовательно, возможность генерации цитотоксических лимфоцитов. Отмечается одновременная индукция фактора некроза опухоли, продуцентами которого, как известно, являются МФ, Т-лимфоциты, ЕКК. Повышение уровня сывороточного ИФН-альфа у волонтеров, получавших саназол, по сравнению с фоновым уровнем указывает на ИФН-индуцирующие свойства этого препарата.

Несколько иная динамика продукции цитокинов отмечена нами у здоровых лиц под влиянием субалина. В этом случае индукция синтеза ИЛ-1 субалином в организме была достаточно кратковременной, но его примирующее действие на клетки-продуценты сохранялось и через неделю после прекращения приема, о чем свидетельствует увеличение продукции ИЛ-1 мононуклеарами крови под действием стимуляторов in vitro. В то же время ФНО-альфа продуцировался в значительной концентрации вплоть до окончания исследований, при этом субалин активировал клетки-продуценты in vivo и оказывал примирующее действие, что подтверждалось более высоким уровнем ФНО в супернатанте клеток, обработанных in vitro ЛПС, чем в супернатанте нестимулированных мононуклеаров. Динамика увеличения сывороточного ИФН-альфа после приема субалина была достаточно рельефной, концентрация его достигала 100 и более пкг/мл. Отмечена достоверная по сравнению с фоновым уровнем умеренная стимуляция продукции ИЛ-4 мононуклеарами крови в организме, но .не под влиянием стимула in vitro. Выявленное наряду с этим увеличение продукции ИЛ-2 указывает на способность субалина активировать Т-хелперы 1 и 2 типа. Соответственно, субалин существенно влиял на ФГАиндуцированную пролиферацию лимфоцитов крови, увеличение которой наблюдалось нами на 7-е и 14-е сутки наблюдения. Поскольку хорошо известен феномен функционального антагонизма между ИЛ-2 и ИЛ-4 по их влиянию на Т-лимфоциты, отмеченное нами усиление ФГА-стимулированной (ИЛ-2-зависимой) пролиферации лимфоцитов указывает на преобладающую активацию субалином Т-хелперов 1 типа.

Нами показано стимулирующее влияние излучения лазера на парах меди на спонтанную и митоген-индуцированную пролиферацию сплено-цитов мышей и лимфоцитов крови больных. Полученные результаты подтверждают данные других исследователей о способности гелий-неонового лазера повышать ФГА-индуцированное включение метки в ДНК лимфоцитов крови [58]. В эксперименте, на модели мышей с карциномой легких Льюис, леченных 5-ФУ, излучение лазера на парах меди существенно стимулировало пролиферацию спленоцитов в присутствии ФГА и ЛПС. У больных с опухолями головы и шеи НЛИ на фоне дистанционной лучевой терапии приводило к преимущественному усилению ФГА-индуцированной пролиферации лимфоцитов крови. Все эти результаты свидетельствуют о влиянии излучения лазера на парах меди на продукцию ключевых интерлейкинов, запускающих процесс пролиферации лимфоцитов -ИЛ-1, ИЛ-2, ФНО-альфа. Активация ЕКК и цитостатических эффекторов лимфоидной природы под действием лазерного излучения указывает на его способность стимулировать продукцию ИФН.

Отмеченный нами феномен индукции выработки цитокинов клетками крови лиц, получавших саназол или субалин, позволяет раскрыть механизмы, опосредующие иммуномодулирующие и противоопухолевые свойства данных препаратов. Известно, что так называемый цитокиновый каскад обеспечивает последовательную или одновременную секрецию различных цитокинов в ответ на продукцию какого-либо цитокина. В частности, ИЛ-2 стимулирует лимфоциты к продукции ИФН-гамма, который, в свою очередь, является активирующим агентом для Т-лимфощггов. Индукторный механизм продукции различных типов интерферонов в организме включается при воздействии экзогенным ИФН или его индукторами (Иван). При этом необходимым условием действия любого цитокина является сопряжение процессов его индукции и экспрессии рецепторов к нему на клетках-мишенях. Таким образом клетки-продуценты, клетки-мишени и комбинация различных цитокинов становятся компонентами единого функционального комплекса, эффективность которого усиливается взаимными влияниями цитокинов на уровне их продукции и манифестации действия. Иерархические взаимодействия в системе цитокинов четко структурированы, что в норме обеспечивает развитие той или иной формы эффекторного ответа.

Цитокины как медиаторные молекулы во взаимодействии с онкогенами, экстрацеллюлярным матриксом, рецепторами и молекулами адгезии оказывают совместное регулирующее влияние на взаимоотношения иммуннологических факторов и опухоли как локально ( на уровне опухолевого микроокружения), так и системно. В этой связи, в свете полученных нами результатов, следует остановиться на характеристике механизмов, задействованных в реализации противоопухолевой активности (торможение роста первичной опухоли) и антиметастатического эффекта исследованных нами МБР. Усиление ингибиции роста опухоли субалином и саназолом на фоне цитостатической терапии может быть обусловлено, во-первых, опосредованной ИФН модификацией чувствительности опухолевых клеток к цитостатическим препаратам, а также к эндогенным эффекторным механизмам благодаря усилению экспрессии АГ ГКГ на мембранах опухолевых клеток. Одновременно происходит цитокин-индуцированная модуляция функциональной активности эффекторных клеток в иммунокомпетентных тканях. Активированные клетки иммунной системы способны мигрировать в опухолевую ткань из крови, поскольку подтверждено гематогенное происхождение опухоле-ассоциированных макрофагов и лимфоцитов и показано усиление тропности иммуноцитов к опухолевой ткани под действием цитокин-индуцирующих агентов [204, 331]. Важная роль при этом принадлежит ИЛ-1, который регулирует экссудацию воспалительных клеток в опухоль [121]. Интенсивная инфильтрация опухолей при проведении цитостатической терапии, по данным ряда исследователей, коррелирует с хорошим терапевтическим эффектом [12]. Наряду с цитотоксическим действием неспецифических эффекторных клеток - МФ, ЕКК, может иметь место и специфический иммунный ответ на опухолевые клетки в связи с повышением ангигенности опухоли в условиях повреждающего действия химиопрепарата и с уже упоминавшейся выше возможностью усиления экспрессии АГ ГКГ, необходимых для запуска специфической активации Т-лимфоцитов антиген-презентирующими клетками. Подобная индукция или стимуляция иммунного ответа на низкоантигенные опухоли показана рядом авторов при совместном использовании цитостатических препаратов и иммуномо-дулирующих агентов [12, 324].

Усиление эффективности цитостатической терапии при воздействии излучения лазера на парах меди может обеспечиваться фотодинамическим механизмом повреждения опухолевых клеток, благодаря индукции генерации синглетного кислорода без участия фотосенсибилизаторов при эпикутантном воздействии НЛИ [35]. Результатом фотодинамического эффекта может быть индукция апоптоза опухолевых клеток [56]. Проведенное нами морфологическое исследование ткани опухоли после курсового воздействия излучения лазера на парах меди показало структурные изменения опухолевой ткани, признаки очагового некроза и апоптоза и усиленную реакцию перифокальной ткани с выраженной миграцией макрофагальных и гранулоцитарных элементов. НЛИ нарушает морфогенез опухоли , снижая ее морфогенетические потенции, вследствие чего происходит гибель тканевых структур. Эти особенности сохраняются и при сочетанном применении 5-ФУ и НЛИ.

Таким образом, излучение лазера на парах меди при достаточно высокой мощности дозы (30 дж/см ) индуцирует некробиотические и дистрофические процессы в ткани опухоли на фоне своеобразной воспалительной реакции, что и опосредует его противоопухолевое действие. Одним из непосредственных механизмов может выступать способность излучения лазера на парах меди усиливать образование в тканях биогенных аминов - гистамина и серотонина, стимулирующих воспалительные процессы [73]. Серотонин при этом напрямую влияет на лимфоциты, повышая их пролиферативную активность и индуцируя синтез ИЛ-2 и ИФН-гамма [185].

Здесь следует отметить и возможность опосредованного, через факторы антиоксидантной системы, действия на иммунокомпетентные клетки и на условия реализации их токсического действия в опухолевом очаге. Нами было показано снижение активности СОД в опухолевой ткани, и, напротив, ее повышение в крови под действием излучения лазера на парах меди, ассоциированное с более выраженной ингибицией роста опухоли. СОД рассматривается в качестве одного из основных факторов, осуществляющих дезактивацию реакционных продуктов перекисного окисления липидов, который в комплексе с другими компонентами АОС обеспечивает регуляцию свободнорадикальных процессов, направленную на стабилизацию клеточных мембран [47]. Результатом снижения активности СОД в опухолевой ткани является уменьшение ее ингиби-рующего действия на АФК-опосредованную цитотоксичность фагоцитирующих клеток. Нормализация активности СОД в крови способствует восстановлению функциональной компетентности клеток иммунной системы, нарушенной в связи с интенсификацией процессов свободно-радикального окисления при опухолевом росте и цитостатической терапии.

Наши данные о регулирующем влиянии излучения лазера на парах меди на факторы АОС согласуются в определенной степени с результатами других авторов, применявших НЛИ различных длин волн [50, 128].

Умеренное торможение первичных опухолей при использовании биомодуляторов без химиотерапии связано с регуляцией чувствительности опухолевых клеток к эндогенным повреждающим факторам с одной стороны, и с повышением эффекторного потенциала последних, с другой. Следует отметить, что, согласно нашим данным, применение этих воздействий в моноварианте с целью ингибиции первичной опухоли не является оправданным в условиях массивного опухолевого очага без базовой цитостатической терапии, так как при этом не достигается необходимый терапевтический эффект.

При анализе полученных результатов мы отметили различия в выраженности противоопухолевого ( в отношении первичного опухолевого узла) и антиметастатического эффекта используемых нами МБР как в условиях цитостатической терапии, так и при самостоятельном применении. Более четкий антиметастатический эффект не является неожиданным, подтверждая высокую способность перечисленных воздействий регулировать взаимодействие иммунной системы с опухолевыми клетками, которое более эффективно проявляется на этапах метастазирования, чем в первичном опухолевом очаге. Это происходит по ряду причин, основной из которых является мощное противостояние первичной опухоли иммунологическим механизмам в связи с большим количеством опухолевых клеток, способных оказывать ингибирующее влияние на иммунокомпетентные клетки, и модулирующих опухолевое микроокружение таким образом, что механизмы противоопухолевой защиты становятся неэффективными. В то же время применение биомодулирующих агентов создает благоприятные условия для воздействия на процесс метастазирования на всех его этапах, начиная от прикрепления опухолевых клеток к стенкам сосудов и контакта с эпителием в первичной опухоли и кончая взаимодействием с клетками опухоли в органе-мишени.

Охарактеризованные нами механизмы действия МБР, а именно -индукция и регуляция выработки цитокинов иммунокомпетентными клетками, модуляция рецепторного аппарата и функциональной активности лимфоцитов и макрофагов, - играют решающую роль в обеспечении антиметастатического эффекта этих агентов. Воспалительные цитокины -ФНО-альфа, ИЛ-1 и интерфероны влияют на экспрессию мембранных рецепторов адгезии опухолевых клеток и адгезивных молекул на эндотелиальных клетках и экстраклеточном матриксе, регулируя метастатический потенциал [157], усиливают иммуногенность опухолевых клеток за счет изменения антигенной композиции их мембран. Кроме того, эти медиаторы регулируют состав иммунокомпетентных клеток, инфильтрирующих опухоли, посредством изменения экспрессии их интегриновых и хоминговых рецепторов [182, 322]. Этот же механизм обеспечивает миграцию и адгезию клеток иммунной системы для эффективного взаимодействия с опухолевыми клетками в эндотелии сосудов и в условиях микроокружения органов-мишеней метастазирования.

Показано, что ИФН-гамма, ИЛ-1 и ИЛ-2 способны модулировать чувствительность метастатических клеток к химиотерапии, потенцируют апоптоз как непосредственно, так и через активацию щгготоксических Т-лимфоцитов, ЕК клеток, избирательное накопление которых в метастазах также регулируется цитокинами [ 145,190,204, 331]. Наряду с регуляцией чувствительности опухолевых клеток к цитостатическим препаратам иммунокомпетентные клетки играют важную роль в плане защиты нормальных клеток от токсического действия химиопрепаратов и ионизирующего излучения, так, например, хорошо известно цито-протекторное действие ИЛ-1 при терапии алкилирующими препаратами, его стимулирующее влияние на гемопоэз [94, 145].

Не исключено ингибирующее влияние цитокинов на активность естественных супрессорных клеток в опухоли, т.к. есть указания на способность ИФН-гамма и ФНО-альфа тормозить генерацию и активность неспецифических супрессоров с одновременным повышением функциональной активности противоопухолевых эффекторов [340]. Принимая во внимание наши данные о способности ECK угнетать мембранотоксическое действие естественных киллерных лимфоцитов на клетки-мишени, можно рассматривать неэффективность ЕКК в опухоли как результат ингибирующего влияния присутствующих там естественных супрессоров. Вероятно, повреждение происходит при непосредственном контакте ЕКК с супрессорными факторами, поскольку мембранотокси-ческая активность выделенных из опухоли и отмытых лимфоцитов в отношении стандартных тест клеток-мишеней in vitro была высокой, что свидетельствует о сохранении их токсического потенциала. Инактивация ECK или снижение их генерации в опухоли и иммунокомпетентных органах может приводить к восстановлению активности естественных клеток-киллеров, Т-лимфоцитов, макрофагов.

Анализ полученных нами результатов и литературных данных, посвященных механизмам действия МБР при различных способах их применения - системно или локально по отношению к опухоли- позволяет сделать определенные заключения. Во-первых, системное введение биомодуляторов приводит к активации иммунокомптентных эффекторов на уровне целого организма - в различных органах и тканях и в опухолевом очаге, что обеспечивает антиметастатическое и противоопухолевое действие [165, 204, 314]. Во-вторых, локальное (внутриопухолевое или на область опухоли в случае физического воздействия) использование МБР индуцирует прежде всего, активацию инфильтрирующих опухоль клеток, а также стимулирует функциональную активность иммуноцитов крови, селезенки, лимфоузлов [227, 235, 269]. По-видимому, конечный эффект

250 воздействия определяется его преимущественным влиянием на те или иные непосредственные эффекторные механизмы и особенностями исходного состояния последних.

Данные литературы и наши собственные результаты, свидетельствуют о том, что наилучшие терапевтические результаты биоиммунотерапии достигаются в случае комбинации МБР с традиционными методами моно- и комбинированной терапии. Перспективность такого комплексного воздействия определяется в основном выраженным антиметастатическим и противорецидивным эффектами [177, 211, 291, 297].

Важное значение в реализации модулирующего действия МБР имеет многокомпонентность ответной реакции и тесное взаимодействие иммунной системы с факторами неиммунной природы. В совокупности это обеспечивает, с одной стороны, изменения опухолевых клеток, приводящие к реверсии трансформированного фенотипа, индукции их диффе-ренцировки и созревания, снижению метастатического потенциала, устранению резистентности к цитостатическим воздействиям; с другой стороны, усиление или восстановление эффекторных противоопухолевых реакций хозяина и селективную супрессию или устранение компонентов, способствующих опухолевому росту.