Автореферат и диссертация по медицине (14.00.01) на тему:Лизосомальная активность экстраэмбриональных образований при нормальной и осложненной беременности

на правах рукописи

РП5 од

КИМ АНДРЕЙ

ЛИЗОСОМАЛЬНАЯ АКТИВНОСТЬ ЭКСТРАЭМБРИОНАЛЬНЫХ ОБРАЗОВАНИЙ ПРИ НОРМАЛЬНОЙ И ОСЛОЖНЕННОЙ БЕРЕМЕННОСТИ

14.00.01 Акушерство и гинекология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

МОСКВА 2002

Работа выполнена на кафедрах акушерства и гинекологии с курсом перинатологии и патологической физиологии Российского университета дружбы народов

Научные руководители:

доктор медицинских наук, профессор доктор медицинских наук, профессор

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор доктор медицинских наук, профессор

В.Б. Радзинский В.А. Фролов

Р.И. Шалина А.П. Кирющенков

Ведущая организация: Московский госудаственный медико -стоматологический университет

Защита диссертации состоится "_"_2002 года

в_часов на заседании диссертационного совета Д 212.203. 01 в

Российском университете дружбы народов по адресу: 117333, г.Москва, ул. Фотиевой, д. 6.

С диссертацией можно ознакомиться в Научной библиотеке Российского университета дружбы народов (117198, г.Москва, ул. Миклухо-Маклая, д. 6)

Автореферат разослан "_"_2002 года.

Ученый секретарь диссертационного совета

доктор медицинских наук, профессор И.М. Ордиянц

• КО

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

АКТУАЛЬНОСТЬ ПРОБЛЕМЫ. Тенденция снижения рождаемости последние десятилетия и увеличение частоты и тяжести осложнений ременности остро ставит необходимость научных изысканий путей для ждения здорового потомства. Известно, что наибольшая частота продуктивных потерь формируется в ранние сроки беременности (Lithell , 1999). Выкидыши, происшедшие в I триместре, составляют практически - 80% всех потерь беременности. Доказано, что в 85% случаев эмбрион ачала погибает, а затем происходит выкидыш (Сидельникова В.М., 1999). бель эмбриона обусловлена патологическим развитием зиготы, эмбриона, ода или плаценты и, несмотря на многочисленные исследования, выявить ; причины прерывания беременности невозможно, как и снизить частоту кидышей.

Органогенез и становление систем плода, течение периода ворожденности и состояние здоровья детей в последующем существенно шсят от условий внутриутробного существования. Известно, что большую ль в процессах имплантации, эмбриогенезе, течении родов играют зосомы (Joh К., Riede U.N., Zahradnik Н.Р., 1983; Fraser I.S., 1987), которые едставляют собой высокоспециализированные внутриклеточные ганеллы, окруженные белково - липидной мембраной и снабженные [роким набором гидролитических ферментов.

При имплантации в месте контакта трофобласта и маточного эпителия оисходит своеобразное "саморазрушение" слизистой оболочки матки, званное активацией протеолитической и глюкозидазной активности зосом. Первичный трофобласт активно выделяет протеолитические рменты. Полнота и глубина инвазии определяются, главным образом, гической способностью трофобласта.

Исследование лизосомальных энзимов при беременности находит свое вменение в пренатальной диагностике болезней накопления, связанных с достаточностью того или иного фермента у плода (Краснопольская К.Д., фенбург Т.В., Аронович Е.Л., 1992; Piraud M., Froissart R., Mandón G., ?б). В течение двух последних десятилетий для диагностики болезней шпления используются неинвазивные ферментные методы. Эта агностика используется как для выявления гетерозиготных носителей этих юлеваний, так и для идентификации пораженных плодов на ранних сроках эеменности (Izumi Т., 1995).

Изменение активности лизосомальных энзимов играет важную роль в гогенезе осложнений беременности. Потери беременности в I триместре □аны, по мнению патоморфологов, со снижением активности готрофобласта. Недостаточность I волны инвазии трофобласта приводит к

ранним спонтанным абортам, замершей беременности и другим осложнения*, беременности впоследствии (Милованов А.П., 1999).

Установлено, что воздействие на плод в период его внутриутробной существования веществами, блокирующими те или иные лизосомньк ферменты, приводит к нарушению процессов эмбриогенеза и возникновеник врожденных уродств (Бит С.А., 1983). Показана роль лизосомальногс катепсина С в развитии гестоза. Выявлено, что содержание катепсина в I плазме крови может служить диагностическим и прогностическим критериег. тяжести гестоза (Гребенкин Б.Е., Козин Г.А., Шипулин А.Н., 1997).

Несмотря на очевидную значимость лизосом и их ферментов I процессах оплодотворения и инвазии трофобласта, до сих пор нет четки? представлений о их роли в формировании фето-плацентарной системы I динамике беременности, неизвестно участие их в патогенезе прерыванш беременности в ранние сроки. Это обусловило актуальность исследование роли лизосом в обеспечении адаптационно-гомеостатических реакций фето плацентарной системы при нормальной и осложненной беременности.

ЦЕЛЬ РАБОТЫ: обосновать возможности диагностики осложненногс течения беременности на основании изучения лизосомальной активносп экстраэмбриональных образований.

ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ:

1. Изучить особенности изменения лизосомальной активности в плазм< крови, плаценте й плацентарном ложе матки при нормально! беременности.

2. Изучить и сопоставить изменения активности ферментов лизосом I плазме крови и экстраэмбриональных образованиях.

3. Выявить особенности изменения лизосомальной активности 1 плазме крови, хорионе и хориальном ложе матки при осложненно! беременности в I триместре.

4. Оценить возможность исследования лизосомальных ферментов I плазме крови для диагностики осложнений беременности.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА. Впервые изучена роль лизосомальноп аппарата клетки в динамике нормальной беременности. Показаны измененш ферментов лизосом в плазме крови, плаценте и плацентарном ложе матки в I II, III триместрах беременности. Установлена взаимосвязь между изменении* активности ферментов лизосом в тканях и плазме крови при неосложненно{ беременности. Выявлены основные изменения в лизосомальном аппарат! хориона, хориального ложа при осложнениях в I триместре беременности Сопоставлены активность ферментов в плазме крови и хорионе пр>

;ложненной беременности и выявлены диагностические возможности тределения активности ферментов в плазме крови при беременности в I шместре.

ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ. Разработана возможность ранней {агностики осложненной беременности в I триместре на основании феделения активности Т<!-ацетил-|3-В-глюкозаминидазы в плазме крови, казана возможная патогенетическая роль изменения коэффициента юницаемости лизосомных мембран и активности ферментов в хорионе и )риальном ложе матки в возникновении самопроизвольного аборта и ¡развивающейся беременности, что, возможно, найдет отражение в терапии их осложнений.

ВНЕДРЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ В ПРАКТИКУ.

Результаты исследования и основные рекомендации, вытекающие из ¡х, используются в лекционном курсе для студентов и клинических щинаторов на кафедре акушерства и гинекологии с курсом перинатологии :дицинского факультета РУДН.

ПУБЛИКАЦИИ. По теме диссертации опубликовано 5 работ, ражающих основные положения диссертации.

АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ. Данная работа проведена в рамках новного направления научной деятельности кафедры акушерства и некологии с курсом перинатологии Российского университета дружбы родов «Репродуктивное здоровье населения Московского мегаполиса и ти его улучшения в современных экологических и социально-экономических повиях», № гос. регистрации 01.9.70 007346, шифр темы 317712.

Апробация диссертации состоялась на заседании кафедры акушерства и некологии с курсом перинатологии Российского университета дружбы родов 4 декабря 2001г. Основные положения диссертации доложены: на рвой международной конференции молодых ученых (Москва, 2000).

Зарегистрирована заявка на изобретение "Способ диагностики ложненной беременности", номер заявки 2000115239, приоритет от ,06.2000г.

СТРУКТУРА И ОБЪЕМ ДИССЕРТАЦИИ. Диссертация состоит из гдения, четырех глав, обсуждения результатов, выводов, практических комендаций и указателя литературы, содержащего 69 источников на сском и 36 - на других языках. Работа изложена на 117 страницах шинописного текста, содержит 11 таблиц и 21 рисунок.

ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ:

1. Развитие нормальной беременности происходит при участт лизосомальных гидролаз - основных регуляторов внутри - v внеклеточного метаболизма.

2. Выявленные корреляционные взаимосвязи активностей ферментов н плазме крови, тканях плаценты и ложа, а также взаимное влияние N-ацетил-Р-О-глюкозаминидазы и ß-D-глюкуронидазы друг на другг свидетельствует о том, что лизосомальный аппарат при беременности действует как единая четко саморегулируема* система.

3. Осложнения течения беременности в первом триместре характеризуются изменением активности лизосомальных ферментоь как в тканях хориона и ложа, так и в плазме крови. Уровень активности ферментов лизосом в тканях хориона и ложа способен регулировать степень фиксации фермента внутри органелл и проницаемость лизосомальных мембран.

4. Характерные изменения активности лизосомального фермента N-ацетил-р-О-глюкозаминидазы в плазме крови могут служить диагностическим тестом развития осложнений в первом триместре беременности.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Материалы и методы исследования

Для выполнения задач исследования было обследовано 10( беременных, в том числе 32 пациентки (30,2%) с неосложненно? беременностью (в I триместре беременности - 14 (13,2%), во II триместре - i (7,6%) и в III - 10 (9,4%) женщин), и 74 (69,8%) - с осложнениям! беременности в первом триместре. Из них 24 женщины (22,6%) находилис! на стационарном лечении по поводу угрожающего аборта, 27 пациенто! (25,5%) поступили в стационар с начавшимся самопроизвольным аборто.\ (беременность сохранить не удалось) и 23 женщины (21,7%) - < неразвивающейся беременностью.

Анамнез изучали по специально разработанной нами анкете опроснику. Особое внимание уделяли перенесенным зкстрагенитальны,\ заболеваниям, изучали характер менструальной и генеративной функций Учитывали семейное положение женщины. Проводили анализ используемы; методов контрацепции, продолжительность их применения и осложнения перенесенных гинекологических заболеваний и операций. Исследовал! состояние кожных покровов, органов грудной и брюшной полости, сердечно сосудистой системы. Оценивали индекс массы тела по формуле Brey - масс; тела в килограммах, деленная на рост в метрах, возведенный в квадрат.

Проводили общий осмотр наружных половых органов, определяли характер оволосения. Осмотр шейки матки и слизистой влагалища производили с помощью зеркал, оценивали характер выделений. При бимануальном влагалищном исследовании отмечали форму шейки матки, величину, форму, консистенцию и подвижность тела матки и придатков, состояние сводов.

Проводили клинический и биохимический анализ крови, общий анализ мочи. В клиническом анализе крови определяли содержание гемоглобина, эритроцитов и лейкоцитов.

Для бактериоскопического исследования материал брали из трех точек: цервикального канала, задне-бокового свода влагалища и уретры. Определяли :тепень чистоты влагалищного содержимого.

Эхографию органов малого таза осуществляли с помощью серии продольных и поперечных сечений аппаратом сложного сканирования :<Medison SonoAce 8800» (Южная Корея), использовали трансабдоминальный л трансвагинальный датчики с центральной частотой 3,5 и 5 МГц.

Производили морфологическое исследование тканей хориона, глаценты и ложа. Ткань хориона в I триместре беременности получали после эперации артифициального аборта либо выскабливания по поводу самопроизвольного выкидыша и неразвивающейся беременности. Кориальное ложе получали по разработанной нами методике путем соскоба аореткой со стенки матки, на которой находился хорион (место нахождение сориона определяли заранее при помощи сонографии). Ткань плаценты брали юсле срочных родов. Биоптат плацентарного ложа матки брали по рекомендации Robertson W.B. (1986), Волощук И.Н. (1991) в модификации Эразмурадова A.A. (1999) во время операции кесарева сечения при открытой эбзору плацентарной площадке. Ножницами с закругленными концами шрезали диск диаметром 1,5 см, а также соскоб, включающий decidua basalís i подлежащий миометрий из центра плаценты. Исследование начиналось с фиксации в 10% растворе нейтрального формалина в течение 24 часов. После )пределенной обработки кусочки тканей заключали в целлоидин и частично в трафин. Из целлоидиновых блоков приготовляли срезы толщиной 10 шкрон, из парафиновых - 6 микрон. Срезы окрашивали гематоксилин-юзином и по Ван-Гизону, после чего проводили микроскопию.

Активность лизосомальных ферментов N-auenm-ß-D-глюкозаминидазы (АСЕ) и ß-D-глюкуронидазы (GLU) определяли в плазме крови, а также в тканях хориона, плаценты и плацентарного ложа матки. Забор крови, выделение плазмы и определение активности АСЕ и GLU производили согласно общепринятой методике (Кочетов Г.А.,1980; Рубин В.И., 1980; Сяткин С.П., Фролов В.А., 1987). Полученную ткань хориона, плаценты и ложа матки тотчас помещали в ледяные буферные растворы. Затем ткани подвергали гомогенизации и фракционированию согласно методикам Дингла Дж. (1980) и Вилкинсона Д. (1981). Дифференциальное

центрифугирование производили на ультрацентрифуге L8 — М фирм1 "Вескшап" (США) (Ruth R.C., 1980). Активность ферментов выражали нмоль освобожденного за 1 минуту из субстрата 4-нитрофенола ил! фенолфталеина на 1 мг белка в исследуемом материале. Количество белка i пробе определяли по методу Lowry в модификации С.П. Сяткина.

О структурной целостности лизосом судили по величине активностг лизосомальных ферментов в различных фракциях (неседиментируемая доступная и общая активность). Исходя из полученных активностей ферментов расчитывали связанную активность и коэффициет проницаемости лизосомных мембран (КПЛМ) (Фролов В.А., 1996).

В качестве основного программного обеспечения использовали паке! модулей для статистической обработки данных STAT1STICA ® for Windows компании StatSoft ® Inc., США. За достоверную принимали разность средних при р<0,05 (Т>2). При проведении корреляционного анализа связь оценивалась как сильная при абсолютном значении коэффициента корреляции г>0,7, как имеющую среднюю силу при г=0,69-0,3 и как слабую -при г<0,29.

Результаты исследования и их обсуждение

Изучение состояния репродуктивного и соматического здоровья исследованных пациенток показало, что самую старшую возрастную группу составили женщины с неразвивающейся беременностью, их возраст достоверно (р<0,05) превосходил таковой остальных пациенток. Более трети пациенток с неразвивающейся беременностью были старше 30 лет. По-видимому, возрастной фактор, который имеет немаловажную роль е наступлении и исходе беременности (Сидельникова В.М., 1999), является значимым в генезе неразвивающейся беременности. Социальная занятость пациенток была такой, что практически половина женщин с неосложненной беременностью являлись домохозяйками, а больше всего пациенток, занятых физическим трудом, было в группе с самопроизвольным абортом. Характер и условия работы беременной женщины во многом определяют течение беременности (Савельева Г.М., 1992), с чем нельзя не согласиться. Интересным является факт достоверно большей частоты курящих женщин с неразвивающейся беременностью, причем эти пациентки курили до и продолжали курить во время беременности. Возможно, что какую-то роль ь гибели плодного яйца в ранние сроки беременности сыграла никотиновая интоксикация, как один из факторов, оказывающих губительное действие нг развитие беременности, особенно в ранние сроки.

Практически всеми исследователями, занимавшимися проблемами невынашивания беременности, отмечается высокая частоте экстрагенитальной заболеваемости этих пациенток (Рзакулиева Л.М., 1991; Демидова Е.М., 1993; Пак И.В., 1995; Салов И.А., 1998). Острые

инфекционные заболевания перенесли 100% пациенток с угрожающим и самопроизвольным абортом. Сопутствующие хронические экстрагенитальные заболевания больше всего выявлялись у пациенток с неразвивающейся беременностью - 86,7%. Наши данные аналогичны результатам, полученным Е.М. Демидовой (1993), которые показывают, что у пациенток с неразвивающейся беременностью частота экстрагенитальных заболеваний выше, чем у женщин с самопроизвольными абортами, что, вероятно, свидетельствует о выраженном снижении у них адаптационных возможностей организма. В структуре экстрагенитальной заболеваемости пациенток с неразвивающейся беременностью преобладали заболевания органов пищеварения, дыхания, мочевой и нервной систем. Болезнями мочевой системы страдала более половины из них. Исследования И.А. Салова (1998) показали, что структуру соматических заболеваний пациенток с неразвивающейся беременностью составляют сердечно-сосудистые заболевания, болезни органов дыхания и пищеварения. Болезни органов кровообращения выявлены нами только у 17,4% женщин с неразвивающейся беременностью, а наибольшая их частота выявлена у пациенток с самопроизвольным абортом - более чем у каждой пятой. Одним из наиболее частых сопутствующих заболеваний у пациенток с неразвивающейся беременностью являлись болезни щитовидной железы (Демидова Е.М., 1993), результаты нашего исследования также выявили, что наиболее часто данные заболевания были у женщин с неразвивающейся беременностью. Интересны данные о том, что у пациенток с угрожающим абортом в 16,7% диагностирована диффузная форма мастопатии, что соответствует результатам Е.М Демидовой (1993), показавшей, что частота мастопатии больше у пациенток с самопроизвольным абортом. Это подтверждено и исследованиями Морозовой H.A., Селютиной О.Б., Акишева A.M. (1997) показавшими, что женщины с патологическими изменениями молочных желез составляют группу риска развития первичной плацентарной недостаточности. Вероятно, у пациенток с невынашиванием беременности имеются нарушения функции яичников, послужившие причиной заболевания молочных желез и невынашиванию.

Таким образом, частота экстрагенитальной заболеваемости была выше у пациенток с неразвивающейся беременностью, а структуру определяли болезни органов мочевой и нервной систем, дыхания, пищеварения. У пациенток с самопроизвольным абортом преобладали болезни органов дыхания, кровообращения и мочевой системы, а у женщин с угрожающим абортом — болезни органов дыхания и мочевой системы.

Анализ особенностей менструальной функции выявил, что у пациенток с неразвивающейся беременностью возраст менархе был достоверно (р<0,05) старше, чем у женщин других групп, что подтверждает результаты исследования И.А. Салова (1998), JIM. Рзакулиевой (1991), которые также выявили позднее менархе у женщин с неразвивающейся беременностью. Однако, в отличие от работ перечисленных авторов, которые отмечали более

длительное становление менструального цикла и различные его нарушения нами значимых различий в особенностях менструального цикла между группами не выявлено, хотя в целом его нарушения несколько чаще отмечались у пациенток с осложненной беременностью. Интересен факт, что замужних женщин было значительно меньше в группах с осложненным течением беременности - от 66,7 до 75,0% в отличие от 81,3% с неосложненным. Эти данные, полученные спустя 5-10 лет после цитируемых авторов, свидетельствуют об ухудшении репродуктивного потенциала женщин фертильного возраста, что подтверждается и данными о репродуктивной функции обследованных женщин.

Выявлено, что факторами риска невынашивания беременности являются медицинские аборты, невынашивание в анамнезе: первобеременных среди пациенток с неразвивающейся беременностью было всего 26,1%, более половины пациенток с осложненным течением беременности, заканчивали предыдущие беременности медицинскими абортами, а в группе пациенток с неосложенной беременностью данный показатель был значительно ниже, это соответствует исследованиям Серова В.Н., Стрижакова А.Н., Маркина С.А., 1997; Киры Е.Ф., Цвелева Ю.В., Беженарь В.Ф., 1999. Демидовой Е.М. (1993) показано, что у 80,4% пациенток с неразвивающейся беременностью в анамнезе были самопроизвольные прерывания беременности в первом триместре, а для женщин с самопроизвольными выкидышами более характерно наличие в анамнезе выкидышей во втором триместре. Нами отмечено, что каждая четвертая женщина с угрожающим абортом перенесла в анамнезе самопроизвольный аборт в первом триместре беременности и две пациентки — неразвивающуюся беременность. Таким образом, у пациенток с неразвивающейся беременностью, угрожающим и свершившимся абортом отмечена высокая доля предшествующих абортов и осложнений беременности, что, вероятно, является важным фактором, определяющим развитие невынашивания.

Различные гинекологические заболевания чаще выявлялись у пациенток с угрожающим абортом - 70,8%. Интересен факт, что у пациенток с неосложненной и неразвивающейся беременностью частота гинекологической заболеваемости была практически равнозначной, а меньшей - у женщин с самопроизвольным абортом. Основу структуры гинекологической заболеваемости составили воспалительные заболевания матки и придатков у пациенток с осложненной беременностью (от 41,7% до 47,8%) и болезни шейки матки у пациенток с неосложненной беременностью (43,8%).

Таким образом, факторами, вероятно, предрасполагающими к развитию невынашивания беременности в первом триместре являются:

- социально-бытовые условия (тяжелый физический труд на производстве и неустроенность семейных отношений, курение);

- соматические заболевания (высокий инфекционный индекс, заболевания мочевой системы, органов кровообращения, пищеварения и дыхания);

- позднее менархе, дисменорея и различные нарушения менструального цикла в анамнезе;

- предшествующие медицинские и самопроизвольные аборты;

- хронические воспалительные заболевания гениталий.

Общеклиническое обследование пациенток выявило, что у женщин с

угрожающим и самопроизвольным абортом содержание гемоглобина в крови, <отя и было в пределах нормы, но достоверно (р<0,05) ниже, чем у женщин с «развивающейся и неосложненной беременностью. Необходимо отметить, ito каждая десятая пациентка с самопроизвольным абортом страдала шемией. Вероятно, снижение гемоглобина в ранние сроки беременности, фиводящее к гипоксии, ведет к нарушению процессов инвазии дитотрофобласта, как показано A.A. Оразмурадовым (1999) на примере патогенеза плацентарной недостаточности при анемии.

Нами выявлено, что наиболее часто воспалительная реакция во злагалище была у пациенток с неразвивающейся беременностью - почти у саждой второй, а для женщин с самопроизвольным и угрожающим абортом зна была менее характерна. Наиболее часто причинами самопроизвольного 1борта и неразвивающейся беременности исследователями (Салов И.А., 1998; Лаклеин A.B., 1999) называется инфекция, причем ведущая роль отводится /словно-патогенной микрофлоре - до 84% (Илизарова H.A., 1999), которая в условиях дисбиоза приобретает патогенные свойства. Исследования Е.М. Демидовой (1993) показали, что у 70% пациенток с самопроизвольным Сортом выявлены дисбиотические процессы во влагалище, а при шразвивающейся беременности - до 33%.

Морфологическое исследование, проведенное нами, показывает, что фи самопроизвольных абортах, так же, как и при неразвивающейся »еременности, морфологическая картина в хорионе была многообразна, фичем практически всегда имелось сочетание различных изменений. При :амопроизвольном аборте чаще наблюдались дистрофические изменения, профические изменения хориального эпителия, отек стромы ворсин, гарушение васкуляризации, тромбоз сосудов. В хориальном ложе при :амопроизвольном аборте наблюдалась сниженная инвазия трофобласта, ^строфические изменения децидуоцитов, экссудативная реакция и очаги шфильтрации иммунокомпетентными клетками. При неразвивающейся ¡временности морфологические изменения были более выражены -феобладали некробиотические изменения в строме ворсин, отмечались агрессивные изменения хориального эпителия в виде нарушения щфференцировки клеточного и синцитиального трофобласта, десквамация, ютончение или полное исчезновение эпителиального покрова, выявлено ткопление фибриноида, который образовывал конгломераты. В хориальном юже при неразвивающейся беременности децидуальная ткань была с

дистрофическими изменениями, которые характеризовались отеком стромы i гипотрофией децидуоцитов, выявлялись очаги лейкоцитарной инфильтрации а также наблюдалась недостаточная инвазия трофобласта.

Многочисленные варианты преобладания тех или ины> морфологических изменений ворсин, по мнению Лушникова В.Х., 1989: Глуховец Б.И., Глуховец Н.Г., 1999, могут довольно точно говорить с причинах прерывания беременности. Однако, во-первых, до настоящего времени нет четкой морфологической классификации причт невынашивания, во вторых, различные изменения объясняются разными исследователями не одинаково. Клиницисты, в отличие от патоморфологов утверждают, что генез невынашивания беременности в 80% случаев являете* мультифакторным (Сидельникова В.М., 1999) и у 41,2% остается невыясненным, несмотря на попытки его диагностики (Серов В.Н. Стрижаков А.Н., Маркин С.А., 1997). Другими словами, только пс морфологической картине хориона и ложе вряд ли можно выяснить причин) невынашивания беременности. В связи с этим мы считаем, чте морфологическая картина изменений в хорионе и ложе прр самопроизвольном аборте и неразвивающейся беременности, как правило носит многосторонний характер в каждом случае и сводится в основном i дистрофическим, микроциркуляторным, некробиотическим изменения?, ворсин и децидуальной ткани и недостаточной инвазии трофобласта.

Изучение активности лизосомальных ферментов проведено в плазм« крови, тканях хориона и ложа при нормальной беременности самопроизвольном аборте и неразвивающейся беременности.

Динамика изменения активности АСЕ и GLU в плазме крови npi нормальной беременности показала, что, во-первых, активность АСЕ в кров! при беременности гораздо выше, чем активность GLU, во-вторых, есл! активность АСЕ увеличивается постепенно от первого триместра, достига) максимума к третьему триместру, то активность GLU им ее противоположную кривую (рис.1). Результаты исследования Т.В. Миренбур: с соавт. (1995) активности лизосомальных энзимов в плазме крови совпадаю' с нашими данными о достоверном (р<0,05) увеличении активности ACI параллельно увеличению срока беременности, причем показано, что наряду i изменением активности одних ферментов другие не изменяются. Изменена активности в плазме крови, подобные активности АСЕ, имеет лизосомальньп катепсин G (Гребенкин Б.Е., 1999), активность которого возрастает в третье? триместре беременности, то есть разные лизосомальные ферменты в плазм крови не имеют одинаковой динамики при беременности, а с чем это связанс пока не установлено.

(З-Б-глюкуронидаза Ы-ацетил-Р-В-глюкозаминидаза

Рис. 1. Активность лизосомальных ферментов в плазме крови в динамике нормальной беременности, нмоль/мг

Нами проведено сравнение активности АСЕ и GLU при беременности с данными Б.И. Лавера (1999), изучавшего активность этих же энзимов при гиперплазии эндометрия. Им показано, что в плазме крови у больных с гиперплазией эндометрия активность обоих ферментов была достоверно ниже, чем у группы контроля, а активность АСЕ и GLU в первом триместре беременности, по нашим данным, еще ниже, чем у женщин с гиперплазией эндометрия. Вероятно, процессы повышенной клеточной пролиферации в организме (гиперплазия эндометрия, развитие беременности, особенно в ранние сроки, при которых рост клеток цитотрофобласта приравнивается к "опухолевому росту") сопровождаются снижением активности лизосомальных энзимов в плазме крови. К такому же выводу приводит исследование М.А. Борискиной (1996), в котором показано, что при лейкозах активность лизосомальных энзимов (катепсина В, С, L) также значительно снижается.

При анализе лизосомальной активности ферментов в тканях плаценты и ложа при нормальной беременности выявлено, что активность энзимов в тканях во много раз превосходит активность их в крови. Известно, что в крови ферменты появляются из клеток при повышении проницаемости лизосомных мембран в них, либо при разрушении клетки (Фролов В.А., 1986).

Активность АСЕ в тканях хориона в первом триместре была наивысшей и превосходила ее активность в ложе (рис.2).

3 -Г"

Плацента

Ложе

Плацента Ложе

□ I триместр

ß-D-глюкуронидаза ¡Ч-ацетил-Р-О-глюкозаминидаза

В III триместр

*

О

Рис. 2. Общая активность лизосомальных энзимов в плаценте и ложе в динамике неосложненной беременности, нмоль/мг * - значимые различия (р<0,05)

Это свидетельствует о том, что, вероятно, хорион в ранние сроки беременности обладает высокой ферментативной активностью, которая необходима для полноценной инвазии. Значит, полнота, и глубина инвазии определяются, главным образом литической способностью трофобласта, что совпадает с исследованиями Joh К., Riede U.N., Zahradnik Н.Р. (1983). Наши данные противоречат заключениям Цирельникова Н.И. (1980), о том, что основная роль при имплантации и инвазии принадлежит маточному эпителию. Степень проницаемости лизосомных мембран в хорионе и ложе в ранние сроки нормальной беременности показала, что большая проницаемость мембран была зарегистрирована в ложе (33%) по сравнению с хорионом (22%). Данный факт свидетельствует, по нашему мнению, о том, что наряду с высокой ферментативной активностью в хорионе степень фиксации фермента в клетке выше, а в ложе, наоборот, - ниже ферментативная активность и степень фиксации фермента. Такую же зависимость степени фиксации ферментов лизосом в клетке от общей активности наблюдали и другие исследователи, которые предполагают, что морфологической основой этой фиксации является ферритин клетки, до 75% которого содержится в лизосомах (Дрогова Г.М., 1987). Известно, что большая степень проницаемости лизосомных мембран свидетельствует о преобладании аутолитических процессов в клетке (Фролов В.А., 1986). Вероятно, за счет повышения проницаемости лизосомных мембран в клетках ложа происходит выход фермента, и разрушение клеток маточного эпителия в зоне инвазии в него трофобласта, то есть в месте контакта ткани матки с

трофобластом происходит в некотором роде саморазрушение слизистой оболочки матки, вызванной выходом ферментов из лизосом.

Активность GLU в тканях хориона и ложа была значительно меньше, чем активность АСЕ. При сравнении активности GLU выявлено, что в тканях хориона и ложа в ранние сроки беременности она практически одинакова и степень проницаемости мембран лизосом в этих тканях также идентична. Возможно, данный фермент не принимает активного участия в процессах инвазии трофобласта. Изучение GLU в тканях бластоцисты и маточного эпителия у мышей показало, что этот фермент повышается только в самые ранние сроки развития бластоцисты (до трех суток), а затем возвращается к исходному уровню, при этом его роль в данный непродолжительный период развития пока не находит объяснений (Цирельников Н.И., 1980).

Корреляционные взаимосвязи активностей АСЕ и GLU в первом триместре беременности свидетельствуют об отрицательной взаимосвязи активности АСЕ в ложе и плазме крови, и положительных — АСЕ и GLU в хорионе и ложе.

В конце беременности, а именно, после родов, активность АСЕ в тканях плаценты была гораздо ниже, чем в хорионе в первом триместре беременности, а в ткани ложа, наоборот, выше. Исследования Цирельникова Н.И. (1980) показывают, что в плацентарной ткани активность АСЕ прогрессивно снижается со сроком беременности, а при доношенной беременности цитотрофобласт практически лишен ферментативной активности и лизосомы при электронной микроскопии в нем не обнаруживаются. Это подтверждают и наши данные, то есть в конце беременности происходит снижение активности АСЕ в плаценте и перераспределение ферментативной активности, в результате чего ложе в энзимном отношении начинает обладать большей активностью, чем плацента. При этом в ложе по сравнению с плацентой выше не только общая активность фермента, но и свободная. Увеличение общей активности фермента в ложе свидетельствует об увеличении количества лизосом. Возможно, перераспределение ферментативной активности между плацентой и ложем необходимо для инициации родового акта, пусковым "импульсом" для которого служит начало отторжения плодного яйца, для чего нужна высокая активность фермента в ложе. Есть также мнение (Takenaka A., Soga H., Miyamoto К., 1991) о том, что повышение АСЕ в матке накануне родов необходимо для процессов "созревания" шейки, так как АСЕ участвует в гидролизе гликозаминогликанов соединительной ткани.

Изменения активности GLU в плаценте в конце беременности было аналогичным АСЕ. Однако в плацентарном ложе активность GLU, в отличие от АСЕ, снижалась в конце беременности, но все же к родам активность обоих изучаемых нами ферментов была выше в ткани ложа, по сравнению с плацентой.

Корреляционные связи активностей ферментов в конце беременности свидетельствуют о том, что чем выше свободная активность АСЕ в плаценте,

тем ниже данный вид активности GLU в ложе, а общие активности АСЕ и GLU в плаценте и ложе коррелируют положительно. То есть активность АСЕ в плаценте, по-видимому, контролирует общую и свободную активности GLU в хорионе, а доступная активность АСЕ в плаценте положительно взаимосвязана с КПЛМ GLU в плаценте. Интересна взаимосвязь КПЛМ по АСЕ в плаценте с уровнем активности данного фермента в ложе, так чем выше доступная активность и ниже общая - АСЕ в ложе, тем выше КПЛМ по данному ферменту в плаценте.

Итак, при нормальной беременности в плазме крови с увеличением срока последней активность АСЕ возрастает, a GLU - снижается. Ткани плаценты и ложа обладали гораздо большей ферментативной активностью, чем кровь. В ранние сроки беременности хорион обладает более высокой активностью, чем ложе, а в конце беременности, наоборот, выше активность энзимов в ложе. Результаты нашего исследования активности лизосомальных ферментов при нормальной беременности помогают предположить участие лизосомального аппарата клеток плаценты и ложа в процессах ранней инвазии цитотрофобласта и, возможно, роль лизосом плацентарного ложа в запуске родового акта.

Нами проводилось исследование активности лизосомальных ферментов АСЕ и GLU в плазме крови, тканях хориона и ложа при осложнениях в первом триместре беременности.

При угрожающем аборте в плазме крови не выявлено достоверного изменения активности АСЕ, хотя она имела тенденцию к снижению, а активность GLU снижалась значительно. При самопроизвольном аборте активность АСЕ снижалась значительно и достоверно отличалась от активности АСЕ при нормальной беременности, а при неразвивающейся беременности снижение было еще более значительным (рис.3).

Активность GLU в плазме крови, хоть и была снижена, но не имела такой тенденции, как АСЕ. Таким образом, снижение ферментативной активности АСЕ в плазме крови может явиться диагностическим критерием нарушения развития беременности. Данных об исследовании лизосомальных ферментов в плазме крови при осложнениях в первом триместре беременности в доступной литературе нами не найдено. Мамедалиевой Н.М., Ищенко В.М., Фурсовой З.К. (1991) доказано, что у пациенток, страдающих привычным невынашиванием, в лейкоцитах крови снижена активность целого ряда ферментов, в том числе и ферментов лизосом.

0,006 0,005 0,004 0,003 0,002 0,001 О

GLU

0,03 0,025 0,02 0,015 0,01 0,005 0

ACE

□ неосложненная беременность □ угрожающий аборт ■ самопроизвольный аборт □ неразвивающаяся беременность

Рис. 3. Активность лизосомальных ферментов в плазме крови при осложненной беременности в первом триместре, нмоль/мг

Этот факт может оказаться важным для ранней диагностики неблагополучного течения беременности, и, возможно, прогноза развития плацентарной недостаточности у этих больных. Вероятно, снижение ферментативной активности в крови при осложнениях в ранние сроки беременности связано с угнетением энергетических процессов в клетке.

В тканях хориона и ложа при самопроизвольном аборте и при неразвивающейся беременности активность обоих ферментов снижалась (рис.4), причем менее выраженным данное снижение было при самопроизвольном аборте и более значимым - при неразвивающейся беременности.

Многочисленные исследования (Перетятко Л.П., 1987; Нефедова Н.Г., 1999), в которых изучалась активность различных ферментов в плаценте при самопроизвольных абортах, свидетельствуют о снижении активности этих энзимов, а при морфологическом изучении плацент (Калашникова Е.П., 1980) после выкидышей констатировано исчезновение в них лизосом, что подтверждают наши данные и опровергают утверждение Jones C.J.P., Fox Н. (1977) об увеличении количества лизосом и активности их ферментов при первичной плацентарной недостаточности.

Плацента

Ложе

12 •

О

* *

м5

Плацента

Ложе

Р-Б-глюкуронидаза п Неосложненная беременность Гч-ацетнл-р-О-глюкозаминид; В Самопроизвольный аборт □ Неразвивающаяся беременность

Рис. 4. Общая активность лизосомальных энзимов в плаценте и ложе при осложненной беременности, нмоль/мг * - значимые различия (р<0,05)

Считают (Тесйе в., Киуачуа М., 1978), что снижение ферментативной активности хориона при осложнениях в ранние сроки беременности свидетельствует о деструктивных изменениях в хорионе и показывает степень нарушения кровообращения в нем. Возможно, низкая ферментативная активность хориона при невынашивании беременности в первом триместре является первопричиной данного осложнения. Мы предполагаем, что ферментативная недостаточность имеет место с начала развития беременности, при этом бластоциста не обладает тем потенциалом литической активности, который необходим ей для полноценной нидации, что приводит, в свою очередь, к нарушению первой волны инвазии цитотрофобласта и развитию первичной плацентарной недостаточности. Степень ферментативных нарушений, возможно, определяет либо возможность сохранения данной беременности, либо ее прерывание.

Наряду с выраженным уменьшением в тканях общей активности ферментов свободная активность уменьшается в гораздо меньшей степени, что находит свое отражение в степени проницаемости мембран лизосом. Таким образом, активность ферментов в тканях снижается, а КПЛМ возрастает. Возможно, повышение КПЛМ в условиях снижения ферментативной активности тканей является компенсаторным механизмом, при котором снижение активности приводит к большему выходу энзимов из клетки. Повышение проницаемости лизосомных мембран свидетельствует о

повреждении клеток хориона и ложа, которое, по-видимому, происходит при самопроизвольном аборте и неразвивающейся беременности. С другой стороны, исследования Иванчук И.И. (1999) дают основание полагать, что при увеличении лабильности их мембран лизосомы клетки обладают высокой апоптотической активностью, то есть возрастание КПЛМ может свидетельствовать об усилении апоптоза клеток хориона и ложа. К возможности усиления апоптоза при самопроизвольном прерывании беременности приходит в своем исследовании Н.Г. Нефедова (1999), которая выявила снижение в плазме крови содержания марганца и марганец -зависимых ферментов, что приводит к нарушению энергетики клетки и ее гибели.

Повышение проницаемости клеточных мембран, в том числе и мембран лизосом, связано с процессами перекисного окисления липидов в клетке. Продукты свободнорадикального окисления приводят к повышению проницаемости мембран и их деструкции. JI.M. Рзакулиевой (1991) показано, что при увеличении первичных и вторичных продуктов пероксидации на 45% и более происходит поражение клеточных мембран. Рядом исследователей (Рзакулиева Л.М., 1991; Князева Т.П., Пестрикова Т.Ю., Березина Г.П., 1996; Нефедова Н.Г., 1999) выявлено увеличение продуктов перекисного окисления липидов в плазме крови у пациенток с невынашиванием беременности.

Анализ корреляционных взаимосвязей при осложнениях в первом триместре беременности показал, что при самопроизвольном аборте имеется прямая взаимозависимость активностей энзимов в хорионе и ложе, то есть чем ниже активность ферментов в ложе, тем ниже в хорионе и наоборот. При этом выявлена взаимообусловленность изменений активности двух энзимов, то есть, активности АСЕ и GLU зависят и друг от друга. При неразвивающейся беременности достоверно коррелирует с активностью ферментов в тканях только GLU в крови, при этом активность в крови GLU повышается при снижении общей и свободной активности АСЕ в тканях и при повышении общей GLU в хорионе. Свободная активность АСЕ в хорионе снижается параллельно снижению ее в ложе. Прямая зависимость изменения активности ферментов в тканях выявлена между АСЕ и GLU. КПЛМ в тканях зависит от уровня свободной и общей активности фермента и коррелирует с активностью GLU в плазме крови. Другими словами, выявлена зависимость активности ферментов в плазме крови, тканях и КПЛМ, а также взаимосвязь активности обоих энзимов между собой.

Таким образом, при осложнениях в первом триместре беременности происходит снижение активности ферментов лизосом в плазме крови, тканях хориона и ложа, а также повышение проницаемости мембран лизосом. Данное снижение ферментативной активности в тканях хориона, наряду с повышением проницаемости мембран лизосом, возможно, является одним из причин развития первичной плацентарной недостаточности и невынашивания беременности в ранние сроки. Однако не исключено, что этот механизм может носить защитно-приспособительный характер.

Наше исследование, возможно, привнесет новое понимание довольно острой проблемы - механизмов репродуктивных потерь в ранние сроки беременности - и поможет в разработке методов прогнозирования, ранней диагностики и терапевтических методов их предотвращения.

ВЫВОДЫ

1. Развитие неосложненной беременности характеризуется повышением активности М-ацетил-Р-Б-глюкозаминидазы в 3 раза и снижением активности Р-Б-глюкуронидазы - в 4 раза в плазме крови.

2. Хорион в первом триместре беременности обладает максимальной ферментативной активностью по обоим ферментам, при этом активность М-ацетил-р-Б-глюкозаминидазы гораздо выше Р-Б-глюкуронидазы. Активность ферментов в ложе в первом триместре ниже активности хориона, однако, коэффициент проницаемости лизосомных мембран в ложе выше. В конце беременности активность ферментов в плаценте снижается, а в ложе при снижении активности Р-Б-глюкуронидазы происходит повышение 1Ч-ацетил-р-Б-глюкозаминидазы, активность которого в ложе выше, чем в плаценте.

3. При неосложненной беременности в первом триместре активность >1-ацетил-р-Б-глюкозаминидазы в плазме крови имеет отрицательную корреляционную связь с общей активностью данного энзима в хориальном ложе (г = -0,68). Уровни свободной активности М-ацетил-р-Б-глюкозаминидазы и Р-Б-глюкуронидазы в хорионе имеют достоверную положительную связь (г = +0,63).

4. В третьем триместре неосложненной беременности свободная активность Ы-ацетил-Р-Б-глюкозаминидазы в плаценте имеет сильную отрицательную корреляционную связь со свободной активностью Р-Б-глюкуронидазы в ложе (г = - 0,81), общие активности данных ферментов -положительную (г = +0,84). Взаимосвязь лизосомальной активности в тканях плаценты и ложа свидетельствует о зависимости ферментативных процессов в плаценте и ложе на протяжении всей беременности.

5. При осложнениях беременности в первом триместре происходит снижение активности лизосомальных ферментов в плазме крови. При угрожающем аборте в плазме крови выявлено достоверное снижение р-Б-глюкуронидазы и незначительное - М-ацетил-Р-Б-глюкозаминидазы. При самопроизвольном аборте и неразвивающейся беременности в плазме крови достоверно снижается активность К-ацетил-Р-Б-глюкозаминидазы.

6. В тканях хориона и ложа при самопроизвольном аборте и неразвивающейся беременности происходит одновременное снижение активностей обоих ферментов. В результате снижения общей активности

during the 1st trimester of pregnancy, were also studied and found out. Morphological structural changes in the chorion and area during miscarriages and underdeveloped pregnancies were also determined. The lysosomal enzyme changes in blood plasma, the chorion and placental bed in threatening abortions, miscarriages and undeveloped pregnancies were found out. A diagnostical criteria for the development of complications during the 3rd trimester is by the changes in activity of N-acetyl-p-D-glucosaminidase in blood plasma.

Тенденция снижения рождаемости в последние десятилетия, с одной стороны, увеличение частоты и тяжести осложнений беременности, с другой, * • ' остро ставит необходимость научных изысканий путей для р-ожДегния здорового потомства. Известно, что наибольшая частота репродуктивных потерь приходится на ранние сроки беременности, а именно I триместр (Lithell Н., 1999). Выкидыши, происшедшие в I триместре, составляют практически 75 - 80% всех потерь беременности. Многими исследователями доказано, что в I триместре беременности в 85% случаев эмбрион сначала погибает, а затем происходит выкидыш (Сидельникова В.М., 1999). По данным литературы, гибель эмбриона обусловлена патологическим развитием зиготы, эмбриона, плода или плаценты и, несмотря на многочисленные исследования, выявить все причины прерывания беременности невозможно,'как'и снйзшь частоту выкидышей.

Органогенез и становление систем плода, течение периода новорожденности и состояние здоровья детей в последующем существенно зависят от условий внутриутробного существования. Известно, что большую роль в процессах имплантации, эмбриогенезе, течении родов играют лизосомы (Fraser I.S., 1987, Joh К., Riede U.N., Zahradnik Н.Р., 1983), которые представляют собой высокоспециализированные внутриклеточные органеллы, окруженные белково - липидной мембраной и снабженные широким набором гидролитических ферментов.

При имплантации в месте контакта трофобласта и маточного эпителия происходит своеобразное "саморазрушение" слизистой оболочки матки, вызванное активацией протеолитической и глюкозидазной активности лизосом. Первичный трофобласт активно выделяет протеолитические ферменты. Полнота и глубина инвазии определяются, главным образом, литической способностью трофобласта.

Исследование лизосомальных энзимов при беременности находит свое применение в пренатальной диагностике болезней накопления, связанных с недостаточностью того или иного фермента у плода (Краснопольская К.Д., Миренбург Т.В., Аронович E.J1. и др., 1992; Piraud М., Froissart R., Mandon G. -*et all., 1996) В течение двух'последних'десятилетий для* диагностики болезней накопления используются неинвазивные ферментные методы. Эта диагностика используется как для выявления гетерозиготных носителей этих заболеваний, так и для идентификации пораженных плодов на ранних сроках беременности (Izumi Т., 1995).

Изменение активности лизосомальных энзимов играет важную роль в патогенезе осложнений беременности. Потери беременности в I триместре связаны, по мнению патоморфологов, со снижением активности цитотрофобласта. Недостаточность I волны инвазии трофобласта приводит к ранним спонтанным абортам, замершей беременности и другим * осложнениям беременности впоследствии (Милованов А.П., 1999).

Установлено, что воздействие на плод в период его внутриутробного существования веществами, блокирующими те или иные лизосомные ферменты, приводит к нарушению процессов эмбриогенеза и возникновению врожденных уродств (Finn С.А., 1983). Показана роль лизосомального катепсина G в развитии гестоза. Выявлено, что содержание катепсина G в плазме крови может служить диагностическим и прогностическим критерием тяжести гестотп (Гребенкик Б.Е., Козин Г.А., Шипулин А.Н., 1997).

Таким образом, благодаря лизосомам и их ферментам происходят процессы оплодотворения и инвазии трофобласта, однако пока нет четких представлений о роли лизосом в формировании фето-плацентарной системы в динамике беременности, неизвестно участие их в патогенезе прерывания беременности в ранние сроки. Это обусловило актуальность исследования роли лизосом в обеспечении адаптационно-гомеостатических реакций фето-плацентарной системы при нормальной и осложненной беременности.

ЦЕЛЬ РАБОТЫ:

Обосновать возможности диагностики осложненного течения беременнбсГи на основании' изучения лизосомальнои активности экстраэмбриональных образований.

ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ:

1. Изучить особенности изменения лизосомальной активности в плазме крови, плаценте и плацентарном ложе матки при нормальной беременности.

2. Изучить и сопоставить изменения активности ферментов лизосом в плазме крови и экстраэмбриональных образованиях.

3. Выявить особенности изменения лизосомальной активности в плазме крови, хорионе и хориальном ложе матки при осложненной беременности в I триместре.

4. Оценить возможность исследования лизосомальных ферментов в плазме крови для диагностики осложнений беременности.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА

Впервые изучена роль лизосомального аппарата клетки в динамике нормальной беременности. Показаны изменения ферментов лизосом в плазме крови, плаценте и плацентарном ложе матки в I, И, III триместрах беременности. Установлена, вз^и^осд^зь между изменением активности ферментов лизосом в тканях и плазме крови при неосложненной беременности. Выявлены основные изменения в лизосомальном аппарате хориона, хориального ложа при осложнениях в I триместре беременности. Сопоставлены активность ферментов в плазме крови и хорионе при осложненной беременности и выявлены диагностические возможности определения активности ферментов в плазме крови при беременности в I триместое. . » * • '

НАУЧНО - ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ

Разработана возможность ранней диагностики и прогнозирования осложненной беременности в I триместре на основании определения активности М-ацетил-(3-В-глюкозаминидазы в плазме крови. Указана возможная патогенетическая роль изменения коэффициента проницаемости лизосомных мембран и активности ферментов в хорионе и хориальном ложе матки в возникновении самопроизвольного аборта и замершей беременности, что, возможно, найдет отражение в терапии этих осложнений.

АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ, ВНЕДРЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ В ПРАКТИКУ И ЛИЧНЫЙ ВКЛАД АВТОРА

Данная работа проведена в рамках основного направления научной деятельности кафедры акушерства и гинекологии с курсом перинатологии Российского университета дружбы народов «Репродуктивное здоровье населения Московского мегаполиса и пути его улучшения в современных экологических и социально-экономических условиях», номер гос. регистрации 01.9.70 007346, шифр темы 317712.

Клинические исследования, анализ и интерпретация данных проведены автором самостоятельно, Все научные результаты, представленные в работе, автором получены лично. По теме диссертации опубликованы 5 печатных работ.

Зарегистрирована заявка на изобретение "Способ диагностики осложненной беременности", номер заявки 2000115239, приоритет от 15.06.2000г.

ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ: . . « > • « *

1. Развитие нормальной беременности происходит при участии лизосомальных гидролаз - основных регуляторов внутри - и внеклеточного метаболизма.

2. Выявленные корреляционные взаимосвязи активностей ферментов в плазме крови, тканях плаценты и ложа, а также взаимное влияние АСЕ и GLU друг на друга свидетельствует о том, что лизосомальный аппарат при беременности действует как единая четко саморегулируемая система.

3. Осложнения течения беременности в первом триместре характеризуются изменением активности лизосомальных ферментов как в тканях хориона и ложа, так и в плазме крови. Уровень активности ферментов лизосом в тканях хориона и ложа способен регулировать степень фиксации фермента внутри органелл и проницаемость лизосомальных мембран.

4. Характерные изменения активности лизосомального фермента АСЕ в плазме крови могут служить диагностическим тестом развития осложнений в первом триместре беременности.

СТРУКТУРА И ОБЪЕМ ДИССЕРТАЦИИ

Диссертация состоит из введения, четырех глав, заключения, выводов, практических рекомендаций и указателя литературы, содержащего 69 источников на русском и 36 - на других языках. Работа изложена на 117 страницах машинописного текста, содержит 11 таблиц и 21 рисунок.

ВЫВОДЫ

1. Развитие неосложненной беременности характеризуется повышением активности И-ацетил-Р-О-глюкозаминидазы в 3 раза и снижением активности P-D-глюкуронидазы - в 4 раза в плазме крови.

2. Хорион в первом триместре беременности обладает максимальной ферментативной активностью по обоим ферментам, при этом активность М-ацетил-Р-О-глюкозаминидазы гораздо выше P-D-глюкуронидазы. Активность ферментов в ложе в первом триместре ниже активности хориона, однако, коэффициент проницаемости лизосомных мембран в ложе выше. В конце беременности активность ферментов в плаценте снижается, а в ложе при снижении активности P-D-глюкуронидазы происходит повышение Ы-ацетил-Р-О-глюкозаминидазы, активность которого в ложе выше, чем в плаценте.

3. При неосложненной беременности в первом триместре активность N-ацетил-Р-О-глюкозаминидазы в плазме крови имеет отрицательную корреляционную связь с общей активностью данного энзима в хориальном ложе (г = -0,68). Уровни свободной активности Ы-ацетил-Р-Б-глюкозаминидазы и P-D-глюкуронидазы в хорионе имеют достоверную положительную связь (г = +0,63).

4. В третьем триместре неосложненной беременности свободная активность К-ацетил-Р-Э-глюкозаминидазы в плаценте имеет сильную отрицательную корреляционную связь со свободной активностью P-D-глюкуронидазы в ложе (г = - 0,81), общие активности данных ферментов - положительную (г = +0,84). Взаимосвязь лизосомальной активности в тканях плаценты и ложа свидетельствует о зависимости ферментативных процессов в плаценте и ложе на протяжении всей беременности.

5. При осложнениях беременности в первом триместре происходит снижение активности лизосомальных ферментов в плазме крови. При угрожающем аборте в плазме крови выявлено достоверное снижение (3-D-глюкуронидазы и незначительное - М-ацетил-р-Э-глюкозаминидазы. При самопроизвольном аборте и неразвивающейся беременности в плазме крови достоверно снижается активность N-ацетил-Р-В-глюкозаминидазы.

6. В тканях хориона и ложа при самопроизвольном аборте и неразвивающейся беременности происходит одновременное снижение активностей обоих ферментов. В результате снижения общей активности знзимов уменьшается степень фиксации фермента и возрастает коэффициент проницаемости лизосомных мембран, что приводит к деструкции тканей.

7. Степень снижения активности М-ацетил-Р-О-глюкозаминидазы в плазме крови соответствует характеру осложнений беременности в ранние сроки, вследствие чего снижение активности этого энзима ниже 0,018 нмоль/мг в плазме крови может явиться диагностическим маркером неблагополучия развития беременности в первом триместре.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

Определение активности М-ацетил-Р-Б-глюкозаминидазы в плазме крови может быть использовано для диагностики осложнений беременности в первом триместре и контроля за проводимой терапией. Снижение активности >1-ацетил-Р-1)-глюкозаминидазы в плазме крови ниже 0,018 нмоль/мг является признаком неблагоприятного развития беременности в первом триместре.